Bacterias E. Coli

Para contar con colonias de bacterias E. Coli, necesarias para las pruebas, se aislaron a partir de cultivos previos que contaban con estas bacterias y a partir de cepas E. Coli comerciales que fueron posteriormente activadas para el uso.

a) Aislamiento a Partir de Cultivos Previos

Se aislaron bacterias E. Coli en condiciones estrictas de asepsia a partir de cultivos previos que contenían colonias representativas de ésta y con ayuda de una aza bacteriológica se inoculó en otra placa estéril conteniendo medio de cultivo Agar McConkey, aplicando el método en “estría” sobre la superficie. Luego se incubó la muestra aislada durante 48 horas a 37ºC. Repitiendo el proceso cada tres días para contar con colonias en su fase estacionaria. En la figura 22, se muestra el proceso de aislamiento de bacterias E. Coli a partir de cultivos previos. Se realizo este proceso en una cabina de desinfección y en presencia de un mechero Bunsen. La placa Petri muestra colonias de bacterias E. Coli en su fase estacionaria después del periodo de incubación sobre Agar McConkey, con el color rosado característico de esta bacteria, en este medio

46 de cultivo.

Figura 22

Aislamiento de bacterias E. Coli

Fuente: Propia.

b) Cultivo a Partir de Cepas Comerciales

Se adquirieron cepas comerciales de bacterias E. Coli ATCC 25922 y se realizó su activación bajo las condiciones describas por el proveedor, utilizando el medio de cultivo, temperatura y método de propagación recomendados, siendo activada con medio de cultivo Trypto-Casein Soy Agar (TSA), incubadas a 37º y posteriormente replicadas cada tres días. La figura 23 muestra, la activación de cepas bacterianas E.

Coli ATCC 25922 dentro de una cámara de aislamiento estéril, bajo la presentación de cepas liofilizadas sobre hisopos. Se activaron seis placas a partir del inóculo madre, de las cuales tres fueron destinadas para el uso en el ensayo y posterior replicación;

mientras que, las otras tres fueron llevadas a preservación en viales para un uso posterior.

47

Figura 23

Activación de bacterias E. Coli ATCC 25922

Fuente: Propia.

La figura 24 muestra, el empaque y el hisopo contenedor de cepas E. Coli ATCC 25922 comerciales. Estos estuvieron preservados en un contenedor hermético a una temperatura inferior a 9ºC y rodeados por gel de hielo, a fin de preservar sus características hasta el momento de los ensayos de laboratorio.

Figura 24

Cepas comerciales de E. Coli ATCC 25922

Fuente: Propia.

48

La figura 25 muestra, colonias E. Coli ATCC 25922 cultivadas a partir de cepas comerciales ATCC 25922 después del periodo de incubación de 48 horas. Con ayuda de un contador de colonias se observa el color marfil propio de estas bacterias para este medio de cultivo no selectivo “TCA”. De esta placa Petri, se tomaron colonias representativas y se inocularon en viales con caldo nutritivo “TCB” y se preservaron a -10ºC para un uso posterior.

Figura 25

Colonias Activas de Bacterias E. Coli ATCC 25922

Fuente: Propia.

2.4 EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO BACTERIANO SOBRE NPS - 𝑺𝒊𝑶_𝟐 Esta prueba se realizó a partir de dos componentes necesarios: agua sintética y colonias de bacterias E. Coli aisladas. El análisis del crecimiento se ha basado en comparar la diferencia de unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/mL) presentes entre una muestra tratada con NPs – SiO2 con respecto a otra sin tratamiento; este método necesita de una serie de procedimientos previos para NPs – SiO2, bacterias E. Coli y agua sintética municipal, los cuales se describen a continuación:

49 2.4.1 Preparación de Solución de NPs - SiO2

Las soluciones de NP - SiO2 fueron preparada a diferentes concentraciones en medio acuoso (agua ultrapura) y sehomogenizaron con ayuda de un agitador magnético y un baño ultrasónico. Se pesó en una balanza electrónica 0,1 g de NPs –SiO2 comercial de marca MKNano. Luego en un vaso de precipitación de 250 mL, conteniendo 100 mL de agua ultra pura, se adicionaron las NPs –SiO2. Se agitó la muestra sobre un agitar magnético a 800 rpm durante 10 minutos. En seguida se trasvasó a una fiola de 100 mL y se realizaron diluciones para obtener las concentraciones deseadas. Posteriormente se llevaron las soluciones a un baño ultrasónico durante 30 minutos a 24 kHz, para una mayor dispersión. En la figura 26, se muestra las soluciones de nanopartículas de Sílice a utilizar sobre un baño ultrasónico. Estas soluciones estaban contenidas en fiolas selladas con Parafilm a fin de evitar contaminación. El sonicador fue configurado en modo de pulsación continua para maximizar la dispersión.

Figura 26

Soluciones de nanopartículas de Silice en baño ultrasónico

Fuente: Propia.

50 2.4.2 Comparación por Recuento en Placa

Se inocularon bacterias E. Coli sobre viales con agua sintética municipal a concentraciones de carga orgánica de 20, 30 y 40 mg/L. Se agitaron las mezclas inoculada de agua sintética municipal en un agitador Vortex durante 10 minutos para su homogenización. Posteriormente, se tomó 1 mL de cada solución de NP-SiO2 con concentraciones de 5, 10, 20 ,30 y 40 mg/L y se adicionaron al grupo de viales a los que se les realizará el tratamiento; mientras que el grupo que no tuvo este estímulo, omitió la acción. Se homogenizó esta nueva mezcla y en seguida, se tomó 1mL de solución de cada grupo, tanto con tratamiento como sin él, y se incorporaron en placas Petri conteniendo medio de cultivo Agar MacConkey. Luego, se incubaron las placas a 37ºC y se realizó el recuento en placa a diferentes horas a lo largo del tiempo. Finalmente, se realizó el recuento en placa del grupo de control que no tuvo tratamiento de NPs- SiO2,

observando estos resultados en simultaneo con los de las muestras tratadas. (Ver Anexo 4). En la figura 27, se muestra las placas Petri que contienen las soluciones bacterianas tratadas con nanopartículas de Silice después del recuento realizado con el contador de colonias. Las 21 placas mostradas corresponden a las 5 concentraciones tratadas y sus dos replicas, y las 6 placas restantes como el grupo de control sin tratamiento.

51

Figura 27

Recuento en placa de bacterias E. Coli ATCC 25922 tratadas con NPs- SiO2

Fuente: Propia.

2.5 DISEÑO EXPERIMENTAL

Para el diseño experimental se aplicaron los criterios establecidos por (Campbell &

Stanley, 2013). Se utilizó un diseño verdadero de series cronológicas múltiples, que muestra el efecto después del tratamiento con NPs – SiO2 y asegura que los valores previos al experimento no varíen. Se midió el efecto del tratamiento cada 2 horas.

2.5.1 Variables Independientes

• Carga orgánica (mg/ L de Carbono Orgánico Total)

• Concentración de NPs – SiO2 (mg/L)

2.5.2 Variable Dependiente

• Crecimiento bacteriano (UFC/mL)

52

Tabla 5.

Diseño Experimental.

Experimento Grupo

Observación pre-estimulo

Estimulo Observación post-estimulo

2 h 4 h 6 h 8 h 10 h

1 RG1 O1 O2 O3 X1 O4 O5 O6 O7 O8

2 RG1 O9 O10 O11 X2 O12 O13 O14 O15 O16

3 RG1 O17 O18 O19 X3 O20 O21 O22 O23 O24

4 RG1 O25 O26 O27 X4 O28 O29 O30 O31 O32

5 RG1 O33 O34 O35 X5 O36 O37 O38 O39 O40

6 RG1 O41 O42 O43 ─ O44 O45 O46 O47 O48

7 RG2 O49 O50 O51 X1 O52 O53 O54 O55 O56

8 RG2 O57 O58 O59 X2 O60 O61 O62 O63 O64

9 RG2 O65 O66 O67 X3 O68 O69 O70 O71 O72

10 RG2 O73 O74 O75 X4 O76 O77 O78 O79 O80

11 RG2 O81 O82 O83 X5 O84 O85 O86 O87 O88

12 RG2 O89 O90 O91 ─ O92 O93 O94 O95 O96

13 RG3 O97 O98 O99 X1 O100 O101 O102 O103 O104

14 RG3 O105 O106 O107 X2 O108 O109 O110 O111 O112

15 RG3 O113 O114 O115 X3 O116 O117 O118 O119 O120

16 RG3 O121 O122 O123 X4 O124 O125 O126 O127 O128

17 RG3 O129 O130 O131 X5 O132 O133 O134 O135 O136

18 RG3 O137 O138 O139 ─ O140 O140 O142 O143 O144

Donde:

RG: Grupo de experimentación con asignación de aleatoriedad o azar (RG1 = grupo 1) O: Medición al grupo de experimentación (O1 = Medición 1)

53 X: Estímulo o tratamiento (X1 = tratamiento 1)

─: Ausencia de estímulo o tratamiento (Grupo de control)

RG1: Muestras de bacterias E. Coli en solución de agua sintética municipal (COT 20) RG2: Muestras de bacterias E. Coli en solución de agua sintética municipal (COT 30) RG3: Muestras de bacterias E. Coli en solución de agua sintética municipal (COT 40) X1: NPs – SiO2 en solución acuosa (5 mg/L)

X2: NPs – SiO2 en solución acuosa (10 mg/L) X3: NPs – SiO2 en solución acuosa (20 mg/L) X4: NPs – SiO2 en solución acuosa (30 mg/L) X5: NPs – SiO2 en solución acuosa (40 mg/L)

La tabla 5, presenta el plan de experimentación, mostrando la cantidad de experimentos, los grupos de experimentación que varían en su concentración de carga orgánica (RG1, RG2 y RG3), las observaciones antes del tratamiento con nanopartículas (Observaciones pre-estimulo), el estímulo que comprende las 5 concentraciones de nanopartículas que serán aplicadas y los recuentos de colonias a lo largo del tiempo (observaciones post- estimulo).

54 CAPITULO III TRATAMIENTO Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS

3.1 CUANTIFICACION DE LAS BACTERIAS E. Coli EN AGUA RESIDUAL MUNICIPAL Y CARACTERIZACIÓN DE NANOPARTICULAS.

3.1.1 Método de Número Más Probable (NMP).

La tabla 6, muestra los resultados de la caracterización de aguas residuales por el método de número más probable. En comparación con la cantidad promedio que una PTAR debe evacuar (<10³ NMP/mL, agua de clase III, Ley General de Aguas D.L. 17752), estos resultados se encuentran dentro del rango aceptable. Así también, en concordancia con los resultados obtenidos por (Chuchon & Aybar, 2008), la PTAR “Sicaya” - Huancayo, presenta menor concentración de bacterias coliformes fecales, en relación a la PTAR “La totora” – Puno que vierte 1,29 x 10⁵ NMP/mL. Esto nos permite establecer un intervalo de las concentraciones de los parámetros microbiológicos que una planta de tratamiento de agua residual municipal debe poseer, generando condiciones donde se puedan realizar experimentaciones con nuevos tratamientos sin que la excesiva carga biológica de la planta influya en los resultados.

Tabla 6

Cuantificación de Coliformes Totales por NMP de Agua Residual – PTAR Sicaya.

RESULTADO PROMEDIO

COLIFORMES TOTALES 400 NMP/mL

COLIFORMES FECALES 500 NMP/mL

Fuente: Propia.

55

La figura 28, muestra los resultados de la prueba confirmativa de coliformes fecales.

Los tubos de ensayo que contienen burbujas de gas al interior de las campanas Durham verifican la existencia de bacterias coliformes fecales. A mayor cantidad de tubos con presencia de gas, el valor de NMP/mL se incrementa. Para el caso, la formación de burbujas de gas en mas de un tubo de ensayo supone un nivel de contaminación bacteriana elevado.

Figura 28

Tubos de ensayo y campanas Durham con presencia de gas para resultados de Colimetria

Fuente: Propia.

3.1.2 Método de recuento en placa de bacterias E. Coli de agua residual municipal Posterior al análisis de coliformes totales y fecales, el recuento en placa para E. Coli muestra el nivel de contaminación del agua residual analizada para esta bacteria en particular. La figura 29, muestra una placa Petri conteniendo bacterias E. Coli provenientes de una muestra de agua residual de la PTAR Sicaya. Con la ayuda del contador de colonias se realiza el recuento de colonias representativas visibles.

56

Figura 29

Recuento en Placa de bacterias E. Coli provenientes de agua residual municipal.

Fuente: Propia.

La tabla 7. Muestra el resultado de la cuantificación de bacterias E. Coli presentes en agua residual municipal a través del método de recuento en placa. Al analizar los datos mostrados en el contador de colonias, se establece el valor para la población bacteriana de E. Coli presente en la muestra. Este valor representa un nivel de contaminación alto de este tipo de bacterias en comparación a los Estándares de Calidad Ambiental para agua de riego destinada a plantas de tallo alto (100 NMP/100 mL) y de acuerdo a la conversión establecida por (Kehr S. et al., 2014) para unidades formadoras de colonias.

Tabla 7

Cuantificación de E. Coli por Recuento en Placa de Agua Residual – PTAR Sicaya.

RESULTADO PROMEDIO

E. Coli 8,0 × 10² UFC/mL

Fuente: Propia.

57

3.1.3 Método por membranas para el recuento de bacterias E. Coli en aguas residuales municipales.

Se cuantifico las bacterias E. Coli presentes en aguas residuales provenientes de PTAR Sicaya por el método de membranas a fin de analizar este valor microbiológico por diferentes técnicas. La figura 30, muestra una placa Petri conteniendo la membrana de 0,43 µm de diámetro de poro sobre la que quedaron retenidas bacterias E. Coli, las cuales formaron colonias visibles de color rosado propias del medio de cultivo Agar McConkey.

Figura 30

Recuento de Colonias E. Coli por el Método de Membranas.

Fuente: Propia.

La tabla 8, muestra los resultados de cuantificación de bacterias E. Coli presentes en aguas residuales municipales por método de filtración al vacío sobre membranas. De acuerdo a los límites recomendados por (OMS, 2006) de organismos patógenos en efluentes de planta de tratamiento de aguas residuales, para reúso en cultivos de consumo directo - tipo C, los resultados obtenidos están dentro del rango aceptable siendo menores a 10⁵ UFC/100mL. Esto permite realizar una comparación entre los datos obtenidos de crecimiento bacteriano sobre NPs-SiO2 y su interacción si fuesen

58 aplicados a plantas en funcionamiento.

Tabla 8

Cuantificación de E. Coli por Filtración al Vacío de Agua Residual – PTAR Sicaya.

RESULTADO PROMEDIO

E. Coli 6,4 × 10² UFC/mL

Fuente: Elaboración Propia.

3.1.4 Caracterización de nanopartículas de óxido de Silicio

La caracterización de nanopartículas de óxido de Silicio comprende un análisis hidrodinámico de su diámetro y de su Potencial Z que va relacionado a la capacidad de aglomeración entre sus partículas. Ambos análisis se realizan con ayuda de la técnica de Dispersión de Luz Dinámica.

Diámetro Hidrodinámico

La figura 14, muestra los resultados de la caracterización de nanopartículas de óxido de Silicio en el equipo DLS. Las tres distribuciones: 14 a) intensidad, 14 b) volumen y 14 c) número, presentan un diámetro hidrodinámico cercano a 15nm, siendo esto un indicativo de una correcta caracterización.

Los datos obtenidos de la caracterización de NP-SiO2 se muestra a continuación:

59

Figura 31

Resultados de Diámetro Hidrodinámico de Nanopartículas de Sílice

Nota. a) Distribución de Intensidad b) Distribución de Volumen c) Distribución de Número.

Fuente: Reporte, DLS NICOMP Z3000N.

La tabla 9 muestra los valores obtenidos de la caracterización de las nanopartículas de Silice. Esta caracterización utilizo diferentes concentraciones de NPs-SiO2 las cuales influyeron en el diámetro hidrodinámico de manera directa. El valor de pH para todas las concentraciones utilizadas se mantuvo en un rango de 7.3 -7,5 para evitar interferencia con el análisis de Potencial Z.

Tabla 9

Resultados de la Caracterización de NP-SiO2 por Dispersión Dinámica de Luz – Diámetro Hidrodinámico.

Fuente: Elaboración Propia.

Muestra Concentración (ppm)

Diámetro promedio (nm)

Desviación Estándar (nm)

Varianza

(P.I) pH

NPs-SiO2 0,1 16,8 1,59 0,018 7,3

NPs-SiO2 0,5 17,9 1,65 0,052 7,4

NPs-SiO2 1 19,0 1,71 0,005 7,3

NPs-SiO2 5 32,5 18,1 0,310 7,5

60

La figura 32, presenta los diámetro hidrodinámicos de la caracterización de nanopartículas de óxido de silicio en comparación con la concentración al momento del análisis. Los resultados muestran una relación directa entre el diámetro hidrodinámico promedio y la concentración de la muestra. De la misma manera, factores como el tiempo de sonicado, pH y adición de surfactantes tienen un efecto en el grado de dispersión de las nanopartículas. A mayor tiempo de sonicado se obtiene una mejor dispersión de las nanopartículas. Para el caso de las nanopartículas de sílice un pH ligeramente alcalino favorece en su dispersión. (Kaur et al., 2017) .

Figura 32

Diámetro Hidrodinámico de NP-SiO2 a Diferentes Concentraciones

Fuente: Reporte, DLS NICOMP Z3000N.

La figura 33, muestra la comparación entre el diámetro hidrodinámico por la técnica DLS y el diámetro a través de la técnica Aerodynamic Particle Sizing (APS). Al comparar los resultados obtenidos y los reportados por el fabricante MKNano, ambos presentan cercanía. La empresa analizó el diámetro de las nanopartículas de sílice mediante la técnica APS, obteniendo un resultado de 15nm. En ese sentido (Touriniemi

0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33

0.1 0.5 1 5

16.8 17.9 19

32.5

Diametro Hidrodinamico (nm)

Concentración (mg/L)

Caracterizacion NP-SiO2

61

et al, 2014) compararon los diámetros de las nanopartículas de sílice obtenidos a partir de DLS, SEM y TEM, mostrando una diámetro hidrodinámico promedio de 34,9 nm, el cual es cercano al obtenido en este estudio. Los diámetros distarían debido a las diferentes técnicas de síntesis empleadas por los fabricantes, modificando ligeramente su forma estructural.

Figura 33

Comparación de Diámetro NP-SiO2.

Fuente: Reporte DLS NICOMP Z3000N, Ficha Descriptiva MK Nano.

Potencial Z

La figura 34, muestra los resultados obtenido de la caracterización de potencia Z de las nanopartículas de óxido de silicio, mostrando un pico en -35.37 mV. Esta distribución se traduce en un alto grado de aglomeración entre las partículas de la muestra, que puede ser alterado por sonicación o la adición de surfactantes.

0 4 8 12 16 20

15 16.8

Diametro Hidrodinamico (nm)

Análisis APS (Fabricante) Análisis DLS

Comparación - caracterización NP-SiO2

62

Figura 34

Resultado Potencia Z de Nanopartículas de Sílice.

Fuente: Reporte, DLS NICOMP Z3000N.

La figura 35, muestra los resultados de potencial Z de las nanopartículas de Sílice en comparación con las concentraciones a las que fueron analizadas. Mostrando variación del potencial Z al aumentar la concentración de la muestra analizada.

Figura 35

Potencia Z de Nanopartículas de Sílice a Diferentes Concentraciones de NP-SiO2.

Fuente: Reporte, DLS NICOMP Z3000N.

-23.65 -26.39

-35.37

-40 -35 -30 -25 -20 -15 -10 -5 0

0.1 0.5 1

Po ten ci al Z (m V )

Concentración de NP-SiO

₂

(mg/L)

Potencial Z - NPSiO2

63

(Kaasalainen et al, 2017). Al analizar nanopartículas de sílice a través de varios métodos entre ellos, el DLS, mostró resultados de Potencial Z cercanos a -47mV para estas nanopartículas, los cuales mencionan, pueden variar de acuerdo al método de fabricación de las mismas. Esto concuerda con los datos reportados en esta investigación. La figura 19, muestra una comparación entre la caracterización del potencial Z de las nanopartículas de sílice utilizadas en este estudio y los resultados reportados por la literatura.

Figura 36

Comparación del Potencia Z de Nanopartículas de Sílice.

Fuente: Reporte DLS NICOMP Z3000N, (Kaasalainen et al., 2017) .

3.2 EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO DE LAS BACTERIAS E. Coli

La evaluación del crecimiento de las bacterias E. Coli comprende dos secciones, la primera donde se varia la concentración de carga orgánica, y la segunda donde se varia la concentración de nanopartículas de Silice que representan el tratamiento.

-35.37

-47

-50 -40 -30 -20 -10 0

Po ten ci al Z (m V )

Analisis DLS - Z potencial (Kaasalainen et al, 2017)

Comparación - Potencial Z - NPSiO

₂

64

3.2.1 Evaluación del crecimiento de bacterias E. Coli variando la concentración de materia orgánica

a) Método de Comparación por Recuento en Placa

Los datos obtenidos por el método se muestran a continuación:

a.1) Crecimiento de las Bacterias E. Coli con 20 mg/L de Carbono Orgánico Total El grupo de experimentación “RG1” comprende una solución bacteriana de E. Coli con agua sintética municipal de carga orgánica igual a 20 COT la cual ha sido tratado con 5 concentraciones de nanopartículas de sílice y un control (sin tratamiento). La figura 37, muestra una inhibición en el crecimiento bacteriano a medida que aumenta la concentración de NPs- SiO2.

Figura 37

Curvas de Crecimiento E. Coli a Diferentes Concentraciones de NPs-SiO2 y COT 20.

Fuente: Propia.

0 100 200 300 400 500 600 700 800

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24

UFC / mL

Tiempo (h) Control

5ppm 10ppm 20ppm 30ppm 40ppm

65

Al graficar los resultados, se aprecia una ligera promoción en el crecimiento bacteriano en comparación al grupo de control en concentraciones menores a 10 ppm de tratamiento. Mientras que a una concentración de 30 ppm se evidencia inhibición en el crecimiento. Esto muestra la existencia de dos fenómenos muy marcados, la inhibición y la promoción bacteriana.

a.2) Crecimiento de las Bacterias E. Coli con 30 mg/L de Carbono Orgánico Total El resultado obtenido del grupo de experimentación “RG2” que comprende una solución bacteriana de E. Coli y agua sintética de COT 30 fue tratado con 5 concentraciones de NP-SiO2 y un grupo de control. En la figura 38, se presenta un ligero incremento en la cantidad de bacterias (UFC/mL) en la fase de estabilización, en comparación con el grupo “RG1”.

Figura 38

Curvas de Crecimiento E. Coli a Diferente Concentraciones de NPs-SiO2 – COT 30

. .

Fuente: Propia.

0 100 200 300 400 500 600 700 800

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24

UFC / mL

Tiempo (h) Control

5ppm 10ppm 20ppm 30ppm 40ppm

66

De la figura 37 se destaca que, las curvas de crecimiento del grupo de control RG2 presentan mayor actividad de crecimiento bacteriano en comparación a las curvas de RG1, esto podría ser ocasionado por una mayor cantidad de micronutrientes presente en el agua sintética municipal, teniendo una concentración de COT superior a la del grupo RG1.

a.3) Crecimiento de las Bacterias E. Coli con 40 mg/L de Carbono Orgánico Total En la figura 39, se muestra el resultado obtenido del grupo de experimentación “RG3”

que comprende una solución bacteriana de E. Coli ATCC 25922 y agua sintética de COT 40 la que fue tratada con 5 concentraciones de NP-SiO2 y un grupo de control.

Figura 39

Curvas de Crecimiento E. Coli a Diferente Concentraciones de NPs-SiO2 – COT 40.

Fuente: Elaboración Propia.

0 100 200 300 400 500 600 700 800 900

2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24

UFC / mL

Tiempo (h) Control

5ppm 10ppm 20ppm 30ppm 40ppm

67

Así también, se aprecia que los datos del grupo de experimentación “RG3” muestran mayor crecimiento bacteriano en comparación a “RG1” y “RG2”. Esto podría deberse a que contiene mayor carga orgánica en comparación a los otros grupos favoreciendo el crecimiento. Sin embargo, la concentración de NPs – SiO2 a la cual inicia la inhibición (CMI = 30 ppm) es la misma para los tres grupos.

Los resultados obtenidos reflejan un crecimiento de bacterias E. Coli sobre NPs-SiO2

en concentraciones menores e iguales a 30 ppm; mientras que a concentraciones mayores se acentúa la inhibición, obteniendo así, una CMI (Concentración mínima inhibitoria) de 30 ppm. Los resultados provenientes de los tres grupos de experimentación tienen una similitud con los datos reportados por (Li et al., 2010) quienes estudiaron la actividad microbiana de E.Coli sobre nanopartículas de plata a diferentes concentraciones. Dichos resultados muestran el crecimiento de bacterias E.

Coli a una concentración menor e igual a 10 ppm de nanopartículas de plata, la cual es próxima a los 30 ppm obtenidos con las NPs- SiO2 en esta investigación. De acuerdo a (Briceño et al, 2018) que compararon las curvas de crecimiento bacteriano de E. Coli mediante Densidad Óptica (DO) a 600nm y recuento en placa (UFC/mL), aportan que el método espectrofotométrico es una medida indirecta poco confiable de medir la cantidad de cuerpos bacterianos. Sin embargo, en casos que por su complejidad necesiten de su utilización, la relación DO y UFC/mL solo permiten recuentos de cantidades grandes de bacterias superiores a 1,0 x 10⁶ UFC/mL.

3.2.2 Evaluación del Crecimiento de las Bacterias E. Coli con nanopartículas de Oxido de Silicio

A partir de los datos de crecimiento bacteriano se calculó los porcentajes de promoción

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