PO141 - Caracterización de compuestos activadores de
a
-secretasa mediante la técnica AlphaLISA®Pablo Garcia Fernández, Elena Delgado Hernández, Esther García Palomero, Juan Manuel Dominguez Correa
Noscira S.A. Tres Cantos (Madrid)
Uno de los marcadores histopatológicos característicos de la enfermedad de Alzheimer es la presencia de placas amiloides, acúmulos extracelulares de péptido beta amiloide (Aß). La formación de éstas se inicia con el procesamiento de la proteína APP por la enzima ß-secretasa. En condiciones no patológicas, la proteína APP es cortada mayoritariamente por la
a
-secretasa, dejando libre un fragmento soluble (sAPPa
) del que se ha descrito que muestra efectos neuroprotectores y neurotróficos.En Noscira, se ha desarrollando un programa de screening para la búsqueda y aislamiento de compuestos procedentes de organismos marinos que presenten actividad biológica para prevenir o tratar enfermedades neurodegenerativas. Como resultado de este programa, se ha identificado una familia de compuestos naturales que muestran una importante actividad neuroprotectora frente a estrés oxidativo. Estudios posteriores con estos compuestos revelaron que eran capaces de disminuir la formación de Aß en distintas líneas celulares transfectadas establemente con APP, efecto que se acompaña con un aumento de la secreción de sAPP
a
.La tecnología AlphaLISA®, se presenta como un sistema novedoso con el que analizar y cuantificar moléculas de interés, presentes en pequeñas cantidades en muestras biológicas (plasma, medios de cultivo, etc). Se trata de una técnica con gran sensibilidad, cuantitativa, reproducible y rápida, con la que se pueden analizar gran cantidad de muestras simultáneamente debido a su formato versátil y sencillo. Debido a estas características, se optó por esta técnica para desarrollar la caracterización de una familia de compuestos con efectos antiamiloidogénicos, en lugar de las técnicas más tradicionales.
PO143 - Proceso de renodelación sináptica inducida por despolimerización de actina en PSD como mecanismo epileptógeno en un modelo experimental de epilepsia en rata mediante microperfusión de Latrunculina A
Carmen Freire Cobo, Germán Sierra Paredes, Germán Sierra Marcuño, Manuel Freire Rama
Universidad de Santiago
La actividad sináptica excitatoria modula la distribución subcelular de los componentes de la densidad postsinaptica (PSD): receptores y proteínas estrucuturales, mecanismo mediante el cual la neurona regula la transmisión normal y la fuerza de la sinapsis. Y tiene lugar tanto en procesos fisiológicos como la plasticidad sináptica, como en procesos patológicos en el que se producen anormalidades en la transmisión como es la epileptogénesis. Teniendo en cuenta que en dicha remodelación sináptica uno de los elementos que juega un papel fundamental es el citoesqueleto de actina, se indujo artificialmente, mediante técnicas de microdiálisis, una disrupción del mismo mediante la perfusión, en hipocampo de ratas con libertad de movimiento,de un agente despolimerizante de actina: Latrunculina A. Tras la perfusión, se registró un aumento de la excitabilidad neuronal que a largo plazo (hasta seis meses tras la perfusión de Latrunculina) da lugar a la generación de una serie de crisis epilépticas espontáneas, validándose como modelo de estudio de los mecanismos epiléptogenicos.Es por ello que en el intento del estudio de los mecanismos moleculares implicados en esta inducción epiléptica se analizó la redistribución en los compartimentos subcelulares tanto de los elementos estructurales como de los principales receptores de la sinapsis. Para estos análisis, se extrajeron la Corteza e Hipocampo de las ratas microperfundidas con el despolimerizante de actina y se sometieron a fraccionamiento subcelular obteniendo los diferentes extractos (fracciones sináptica y extrasináptica) , en los que mediante técnicas de inmunoblotting se analizó la distribución y densidad de actina y PSD-95,como principales componentes estructureles , y por otra los principales receptores de neurotransmisores, inhibitorios de Gaba y excitatorios de glutamato,AMPARs y NMDARs. Como resultado de este estudio en se obtuvo una serie de variaciones respecto a animales control tanto en el número como en el patrón de distribución subcelular de los elementos sinápticos que sugieren cambios permanentes en la plasticidad a largo plazo, lo que supondría un desequilibrio en el delicado balance entre actividad sináptica y no sináptica , así como una reacomodación de las aferencias inhibitorias y gliales, convirtiendo el tejido sano en foco epileptógeno: más facilmente
PO144 - Efecto del tratamiento crónico con R-PIA sobre los receptores A1 de adenosina en neuronas inmaduras María Ángeles Ruiz, David A. León, Inmaculada Iglesias, Carlos Alberto Castillo, Jose Luis Albasanz, Mairena Martin
Facultad de Ciencias Químicas. Universidad de Castilla-La Mancha
La adenosina ejerce una importante función neuroprotectora en el cerebro, mediada principalmente por los receptores A1 (A1R). La activación prolongada de un receptor suele producir la pérdida parcial de la respuesta de las rutas de transducción mediadas por él, proceso conocido como desensibilización. El objetivo de este trabajo es el estudio del efecto del tratamiento con R-PIA, agonista selectivo de A1R, durante 6, 12, 24 y 48 horas, sobre la ruta de transducción “A1R/adenilato ciclasa” en cultivos primarios de neuronas inmaduras (4 DIV) de corteza cerebral. La desensibilización de A1R ha sido estudiada en diferentes sistemas in vivo e in vitro, pero no en cultivos primarios de neuronas. Los resultados obtenidos indican que el tratamiento con R-PIA 100 nM, provoca una disminución en la inhibición de la actividad adenilato ciclasa mediada por CPA , agonista selectivo de A1R, en neuronas tratadas 12, 24 y 48 horas, lo que sugiere una desensibilización de la vía mediada por el A1R. Los ensayos de unión muestran que el número total de A1R disminuye en membrana plasmática, acompañado de un aumento en la fracción microsomal. Estas variaciones en el número de A1R están asociadas a una disminución a 12 y 24 horas seguidas de un aumento a 48 horas en los niveles del ARNm de A1R. Por otra parte, a 12 y 24 horas también se observa una disminución en los niveles de las proteínas alfa-Gi1,2. Este modelo de desensibilización es similar al descrito en cerebro de fetos a término y ratas adultas.
Ministerio de Ciencia e Innovacion; Junta de Comunidades de Castilla-La Mancha
PO142 - Efecto de la ingesta de Glutamato durante la gestación y lactancia en A1R y A2AR de cerebro materno y neonatal
Antonio López Zapata, Carlos Alberto Castillo, Jose Luis Albasanz, David agustin León, Mairena Martín
Universidad de Castilla-La Mancha
El consumo de glutamato es habitual en la dieta y se usa como aditivo potenciador del sabor. Aunque es imprescindible para el buen desarrollo del SN, a concentraciones elevadas actúa como excitotoxina produciendo degeneración y muerte neuronal. La adenosina regula los niveles de glutamato exhibiendo un efecto neuroprotector. En este trabajo analizamos las consecuencias que el consumo prolongado de glutamato (1 g/L) durante la gestación y/o la lactancia produce sobre los receptores A1 y A2A de adenosina en cerebro de madres y neonatos (machos y hembras de 15 días). Los receptores de adenosina fueron estudiados por ensayos de unión de radioligandos y RT-PCR.
Las madres que consumieron L-Glu durante la gestación y/o lactancia y ambos sexos de neonatos mostraron una disminución significativa del número total de receptores A1. No se observaron variaciones a nivel del ARNm en ninguno de los casos. En cuanto al receptor A2A de adenosina, los ensayos de unión revelaron que este receptor no se ve alterado en cerebro de madres en respuesta a la exposición crónica a L-Glu, mientras que se detectó un aumento significativo en los neonatos tanto machos como hembras. No se observaron variaciones a nivel del ARNm que codifica para estos receptores en ninguno de los casos estudiados. Estos datos sugieren que los receptores de adenosina presentes en cerebro de madres y neonatos de 15 días resultan modificados por la ingesta continuada de glutamato durante la gestación aún cuando dicho aminoácido deja de consumirse durante la lactancia.
PC1-08-0125-3894 Consejeria de Educación y Ciencia/BFU 2005-0582/BF1 Ministerio de Educación y Ciencia
PO145 - Los receptores de adenosina previenen parcialmente la muerte celular por excitotoxicidad en neuronas corticales Carlos Alberto Castillo Sarmiento, Sara Díaz Sánchez, David Agustín León Navarro, Inmaculada Ballesteros Yáñez, Jose Luis Albansanz Herrero, Mairena Martín López
Universidad de Castilla-La Mancha
La adenosina es un neuromodulador, el cual actúa a través de los receptores de adenosina (p.ej: inhibiendo la liberación de glutamato). La activación de los receptores de adenosina A1 y A2A suele mediar acciones opuestas, inhibiendo los receptores A1 la actividad de la adenilato ciclasa (AC) mientras que los A2A la estimulan. Cultivos primarios de neuronas corticales de cerebro de rata y la línea derivada de astrocitoma C6 fueron expuestos a 100 µM L-glutamato y se midieron la viabilidad celular y la vía de transducción de señal de los receptores A1 y A2A, a partir de ensayos de unión de radio-ligandos, RT-PCR y ensayos enzimáticos. En células C6 expuestas a L-Glu, no se observó pérdida de la viabilidad celular al tiempo que los receptores A1 se vieron aumentados y los A2A disminuidos, modulándose sus respectivas vías de transducción en el mismo sentido. En neuronas corticales, el tratamiento con L-Glu incrementa tanto los receptores A1 y como los A2A, al tiempo que induce muerte celular por excitotoxicidad. Además, en estas células las vías de transducción mediadas por estos receptores se encontraron potenciadas tras la exposición a L-Glu. Finalmente, la activación del receptor A1 o el bloqueo del receptor A2A durante la exposición a L-Glu en neuronas corticales, previene parcialmente la muerte celular inducida por éste. Los resultados demuestran que los receptores A1 y A2A están regulados por L-Glu dependiendo del tipo celular y sugieren que estos receptores podrían ser diana terapéutica en fenómenos relacionados con la excitotoxicidad.
PO148 - El polimorfismo Arg72Pro de Tp53 regula la susceptibilidad de las neuronas a estímulos excitotóxicos María Delgado-Esteban, José Carlos Gómez-Sánchez, Juan Pedro Bolaños, Angeles Almeida
Unidad de Investigación, Hospital Universitario de Salamanca e IECS de Castilla y León.
El factor de transcripción p53 regula el ciclo celular, la estabilidad génica y la apoptosis celular. La estabilización de p53 es una potente neurotoxina. Dentro de p53 se ha identificado un dominio rico en prolina, esencial para su función apoptótica, que contiene un sitio polimórfico (Arg72Pro, específico de humanos) que da lugar a la sustitución de una arginina (Arg) por una prolina (Pro).
Recientemente, se ha establecido que la variante p53-Arg tiene una capacidad apoptótica superior a la variante p53-Pro en células tumorales. Nuestro objetivo fue investigar la actividad apoptótica de las variantes polimórficas de p53, p53-Arg y p53- Pro, en neuronas corticales en cultivo primario. Las neuronas se transfectaron con vectores de expresión que codifican ambas variantes junto con la proteína verde fluorescente, para identificar las neuronas transfectadas. Nuestros resultados mostraron que la actividad apoptótica de p53-Arg fue sigificativamente superior a la de p53-Pro. Dicho efecto, no fue debido a cambios en la capacidad transcripcional de ambas variantes, sino a la interacción de p53-Arg con la mitocondria. De hecho, p53- Arg, pero no p53-Pro, indujo la disfunción mitocondrial en las neuronas y la subsecuente activación de las caspasas 9 y 3. Es más, la expresión de p53-Arg incrementó la susceptibilidad de las neuronas a la apoptosis causada por el glutamato y la isquemia in vitro.
Por tanto, hemos demostrado que la variante polimórfica p53-Arg posee una actividad neurotóxica superior a la variante p53-Pro, lo que condiciona la susceptibilidad de las neuronas a estímulos excitotóxicos, como es la isquemia.
Financiado por RENEVAS (RD06/0026) y FIS (PS09/00366).
PO147 - Sistema fácil para la obtención de registros electrofisiológicos de cultivos neuronales en el desarrollo de drug Discovery
Juan Diaz, Enric Claverol, Ramón Fernández, Jennifer Olmos, Antoni Llaverias
Aleria Biodevices. Barcelona
E2 Drive es un original sistema, que permite realizar de manera fácil, hasta seis registros continuos de actividad eléctrica neuronal in vitro de forma simultánea, sin recurrir al uso de complicados montajes electrofisiológicos. Consideramos que E2 Drive tiene aplicaciones relevantes por su baja complejidad, en el campo de la investigación básica para comparar el comportamiento eléctrico de neuronas wild type, con mutantes o con transgénicos, o bien, en el campo del drug discovery, donde el screening inicial de nuevos fármacos puede realizarse fácil y rápidamente gracias a la tecnología E2, sin necesidad de recurrir al uso animales vivos, que además de ser éticamente cuestionable son ensayos económicamente menos rentables que con nuestra tecnología.
Aquí mostramos los resultados obtenidos con E2 Drive en el campo del drug discovery, donde se ha determinado la actividad eléctrica de neuronas de hipocampo de embrión de rata, tratadas con: a) 4-aminopiridina (4AP), un bloqueador de los canales de K+ usado como tratamiento en el síndrome de Lambert-Eaton (LE) y en la Esclerosis Múltiple (EM), b) L-glutámico aminoácido neurotransmisor excitatorio y c) Serotonina (5-HT) otro compuesto, que actúa como neurotransmisor y cuyo déficit provoca estados depresivos. Los resultados muestran como el tratamiento de los cultivos con dichos compuestos afectan al comportamiento eléctrico de células en cultivo y como puede seguirse este comportamiento eléctrico de manera rápida y sencilla gracias a E2, lo que abre la puerta a que esta tecnología pueda ser adaptada por cada laboratorio como herramienta de gran utilidad para estudios neurofarmacológicos y electrofisiológicos.
PO149 - La E3 ubiquitina ligasa APC/C-CDH1 es esencial para la supervivencia neuronal
Verónica Bobo-Jiménez, Irene García-Higuera, Sergio Moreno, Ángeles Almeida
Unidad de Investigación, Hospital Universitario de Salamanca - Instituto de Ciencias de la Salud de Castilla y León, Salamanca.
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, INCyL, Universidad de Salamanca.
La E3 ubiquitina ligasa APC/C (Anaphase Promoting Complex/
Ciclosome) es un complejo multiproteíco que cataliza la poliubiquitinación de la ciclina B1, entre otros sustratos del ciclo celular, para su posterior degradación mediada por el proteosoma.
Ello permite la rápida inactivación del complejo Cdk1/ciclina B1 al final de la mitosis y mantiene a este complejo inactivo durante la fase G1 del ciclo celular. Recientemente, hemos demostrado que Cdh1 es el principal activador de APC/C en las neuronas corticales de rata. Es más, APC/C-Cdh1 es esencial para la supervivencia neuronal, ya que promueve la degradación constante de la ciclina B1, evitando así la acumulación nuclear de la ciclina y la subsecuente activación de la maquinaria del ciclo celular y la apoptosis neuronal. Actualmente se sabe que Cdh1 regula la supervivencia neuronal, el crecimiento axónico, la sinaptogénesis y el metabolismo glucídico en neuronas en cultivo primario. Sin embargo, se desconoce la trascendencia de estas funciones in vivo. En este trabajo nos propusimos investigar la función de Cdh1 en cerebro in vivo. Para ello, se utilizaron ratones knock-out para Cdh1 específico de neuronas de corteza encefálica. Nuestros resultados mostraron que la eliminación de Cdh1 induce el acortamiento de las capas II-III de la corteza cerebral de manera dependiente del tiempo, sugiriendo una pérdida selectiva de neuronas. Estos resultados corroboran in vivo la función esencial de Cdh1 en la supervivencia neuronal.
Subvencionado por PS09/00366 y RENEVAS, ISCIII y BFU2008- 01808, Consolider CSD2007-00015 y Grupo de Excelencia GR 265 de la JCyL
Pósteres
PO145 - Los receptores de adenosina previenen parcialmente la muerte celular por excitotoxicidad en neuronas corticales Carlos Alberto Castillo Sarmiento, Sara Díaz Sánchez, David Agustín León Navarro, Inmaculada Ballesteros Yáñez, Jose Luis Albansanz Herrero, Mairena Martín López
Universidad de Castilla-La Mancha
La adenosina es un neuromodulador, el cual actúa a través de los receptores de adenosina (p.ej: inhibiendo la liberación de glutamato). La activación de los receptores de adenosina A1 y A2A suele mediar acciones opuestas, inhibiendo los receptores A1 la actividad de la adenilato ciclasa (AC) mientras que los A2A la estimulan. Cultivos primarios de neuronas corticales de cerebro de rata y la línea derivada de astrocitoma C6 fueron expuestos a 100 µM L-glutamato y se midieron la viabilidad celular y la vía de transducción de señal de los receptores A1 y A2A, a partir de ensayos de unión de radio-ligandos, RT-PCR y ensayos enzimáticos. En células C6 expuestas a L-Glu, no se observó pérdida de la viabilidad celular al tiempo que los receptores A1 se vieron aumentados y los A2A disminuidos, modulándose sus respectivas vías de transducción en el mismo sentido. En neuronas corticales, el tratamiento con L-Glu incrementa tanto los receptores A1 y como los A2A, al tiempo que induce muerte celular por excitotoxicidad. Además, en estas células las vías de transducción mediadas por estos receptores se encontraron potenciadas tras la exposición a L-Glu. Finalmente, la activación del receptor A1 o el bloqueo del receptor A2A durante la exposición a L-Glu en neuronas corticales, previene parcialmente la muerte celular inducida por éste. Los resultados demuestran que los receptores A1 y A2A están regulados por L-Glu dependiendo del tipo celular y sugieren que estos receptores podrían ser diana terapéutica en fenómenos relacionados con la excitotoxicidad.
PO148 - El polimorfismo Arg72Pro de Tp53 regula la susceptibilidad de las neuronas a estímulos excitotóxicos María Delgado-Esteban, José Carlos Gómez-Sánchez, Juan Pedro Bolaños, Angeles Almeida
Unidad de Investigación, Hospital Universitario de Salamanca e IECS de Castilla y León.
El factor de transcripción p53 regula el ciclo celular, la estabilidad génica y la apoptosis celular. La estabilización de p53 es una potente neurotoxina. Dentro de p53 se ha identificado un dominio rico en prolina, esencial para su función apoptótica, que contiene un sitio polimórfico (Arg72Pro, específico de humanos) que da lugar a la sustitución de una arginina (Arg) por una prolina (Pro).
Recientemente, se ha establecido que la variante p53-Arg tiene una capacidad apoptótica superior a la variante p53-Pro en células tumorales. Nuestro objetivo fue investigar la actividad apoptótica de las variantes polimórficas de p53, p53-Arg y p53- Pro, en neuronas corticales en cultivo primario. Las neuronas se transfectaron con vectores de expresión que codifican ambas variantes junto con la proteína verde fluorescente, para identificar las neuronas transfectadas. Nuestros resultados mostraron que la actividad apoptótica de p53-Arg fue sigificativamente superior a la de p53-Pro. Dicho efecto, no fue debido a cambios en la capacidad transcripcional de ambas variantes, sino a la interacción de p53-Arg con la mitocondria. De hecho, p53- Arg, pero no p53-Pro, indujo la disfunción mitocondrial en las neuronas y la subsecuente activación de las caspasas 9 y 3. Es más, la expresión de p53-Arg incrementó la susceptibilidad de las neuronas a la apoptosis causada por el glutamato y la isquemia in vitro.
Por tanto, hemos demostrado que la variante polimórfica p53-Arg posee una actividad neurotóxica superior a la variante p53-Pro, lo que condiciona la susceptibilidad de las neuronas a estímulos excitotóxicos, como es la isquemia.
Financiado por RENEVAS (RD06/0026) y FIS (PS09/00366).
PO147 - Sistema fácil para la obtención de registros electrofisiológicos de cultivos neuronales en el desarrollo de drug Discovery
Juan Diaz, Enric Claverol, Ramón Fernández, Jennifer Olmos, Antoni Llaverias
Aleria Biodevices. Barcelona
E2 Drive es un original sistema, que permite realizar de manera fácil, hasta seis registros continuos de actividad eléctrica neuronal in vitro de forma simultánea, sin recurrir al uso de complicados montajes electrofisiológicos. Consideramos que E2 Drive tiene aplicaciones relevantes por su baja complejidad, en el campo de la investigación básica para comparar el comportamiento eléctrico de neuronas wild type, con mutantes o con transgénicos, o bien, en el campo del drug discovery, donde el screening inicial de nuevos fármacos puede realizarse fácil y rápidamente gracias a la tecnología E2, sin necesidad de recurrir al uso animales vivos, que además de ser éticamente cuestionable son ensayos económicamente menos rentables que con nuestra tecnología.
Aquí mostramos los resultados obtenidos con E2 Drive en el campo del drug discovery, donde se ha determinado la actividad eléctrica de neuronas de hipocampo de embrión de rata, tratadas con: a) 4-aminopiridina (4AP), un bloqueador de los canales de K+ usado como tratamiento en el síndrome de Lambert-Eaton (LE) y en la Esclerosis Múltiple (EM), b) L-glutámico aminoácido neurotransmisor excitatorio y c) Serotonina (5-HT) otro compuesto, que actúa como neurotransmisor y cuyo déficit provoca estados depresivos. Los resultados muestran como el tratamiento de los cultivos con dichos compuestos afectan al comportamiento eléctrico de células en cultivo y como puede seguirse este comportamiento eléctrico de manera rápida y sencilla gracias a E2, lo que abre la puerta a que esta tecnología pueda ser adaptada por cada laboratorio como herramienta de gran utilidad para estudios neurofarmacológicos y electrofisiológicos.
PO149 - La E3 ubiquitina ligasa APC/C-CDH1 es esencial para la supervivencia neuronal
Verónica Bobo-Jiménez, Irene García-Higuera, Sergio Moreno, Ángeles Almeida
Unidad de Investigación, Hospital Universitario de Salamanca - Instituto de Ciencias de la Salud de Castilla y León, Salamanca.
Departamento de Bioquímica y Biología Molecular, INCyL, Universidad de Salamanca.
La E3 ubiquitina ligasa APC/C (Anaphase Promoting Complex/
Ciclosome) es un complejo multiproteíco que cataliza la poliubiquitinación de la ciclina B1, entre otros sustratos del ciclo celular, para su posterior degradación mediada por el proteosoma.
Ello permite la rápida inactivación del complejo Cdk1/ciclina B1 al final de la mitosis y mantiene a este complejo inactivo durante la fase G1 del ciclo celular. Recientemente, hemos demostrado que Cdh1 es el principal activador de APC/C en las neuronas corticales de rata. Es más, APC/C-Cdh1 es esencial para la supervivencia neuronal, ya que promueve la degradación constante de la ciclina B1, evitando así la acumulación nuclear de la ciclina y la subsecuente activación de la maquinaria del ciclo celular y la apoptosis neuronal. Actualmente se sabe que Cdh1 regula la supervivencia neuronal, el crecimiento axónico, la sinaptogénesis y el metabolismo glucídico en neuronas en cultivo primario. Sin embargo, se desconoce la trascendencia de estas funciones in vivo. En este trabajo nos propusimos investigar la función de Cdh1 en cerebro in vivo. Para ello, se utilizaron ratones knock-out para Cdh1 específico de neuronas de corteza encefálica. Nuestros resultados mostraron que la eliminación de Cdh1 induce el acortamiento de las capas II-III de la corteza cerebral de manera dependiente del tiempo, sugiriendo una pérdida selectiva de neuronas. Estos resultados corroboran in vivo la función esencial de Cdh1 en la supervivencia neuronal.
Subvencionado por PS09/00366 y RENEVAS, ISCIII y BFU2008- 01808, Consolider CSD2007-00015 y Grupo de Excelencia GR 265 de la JCyL
Pósteres
PO1410 - The parkinson’s disease-associated GPR37 receptor oligomerize with the adenosine A2A receptor
Jorge Gandía, Víctor Fernández Dueñas, Victoria Wong, Igor Stagljar, Francisco Ciruela
IDIBELL-Universitat de Barcelona
The substrate of parkin, the orphan G protein-coupled receptor 37 (GPR37), form insoluble aggregates that accumulate in brain tissue of Parkinson’s disease patients (e.g. Lewy bodies and neurites). By means of membrane yeast two-hybrid (MYTH) screen, GPR37, was identified as a binding partner for the adenosine A2A receptor (A2AR). Co-expression and co- immunoprecipitation experiments showed a close and specific interaction between GPR37 and A2AR in transfected HEK- 293. Furthermore, bioluminescence resonance energy transfer (BRET) experiments showed that GPR37 and A2AR are in close proximity, thus allowing us the detection the GPR37-A2AR oligomers in living cells. Interestingly, the interaction of GPR37 with A2AR modulated the cell surface expression of A2AR. Also, the functionality of the A2AR was affected by the coexpression of the GPR37. Overall, these results show that A2AR interacts with GPR37 in living cells and that the interaction is relevant for A2AR cell surface expression and function.
This work was supported by grants SAF2008-01462 and Consolider-Ingenio CSD2008-00005.
Ministerio de Ciencia e Innovación.
Pósteres
PoR141 - La conexina43 regula la actividad oncogénica de c-Src en células de glioma C6
Ester Gangoso Rodríguez, Sandra Herrero González, Christian Giaume, Christian Naus, José María Medina, Arantxa Tabernero Universidad de Salamanca
Una de las características de los gliomas es la pérdida de la conexina43, la proteína que forma las uniones comunicantes o
“gap junction”. La restauración de la expresión de la conexina43 en las células de glioma reduce su exacerbada tasa de proliferación, aunque se desconoce cómo la conexina modifica la expresión de los genes involucrados en la proliferación celular. En este trabajo, mostramos como la restauración de los niveles de conexina43 en las células de glioma C6, retrasa la progresión de la fase G0/G1 a la fase S del ciclo celular. Estos cambios son debidos al aumento en la expresión de p21 y p27 que reducen la fosforilación del retinoblastoma y la expresión de la ciclina E. El hecho más interesante es que, la conexina43 disminuye la actividad oncogénica de c-Src en las células de glioma. Mediante el estudio de la mutación de los residuos de conexina Tyr247 y Tyr265, hemos comprobado que estos residuos son necesarios para que la conexina43 inhiba la actividad de c-Src y la proliferación. En conclusión, al ser un sustrato de c-Src, la conexina43 reduce su actividad oncogénica y por tanto la velocidad de proliferación, siendo esto probablemente uno de los eventos iniciales en el efecto antiproliferativo de la conexina43. Aunque es bien conocido que c-Src fosforila a la conexina43, este estudio muestra que la conexina43 también regula la actividad de c-Src.
PoR143 - Los receptores de adenosina son modulados de forma diferente en la Demencia con Cuerpos de Lewy José Luis Albasanz, Sandra P. Buira, David Agustín León, Carlos Alberto Castillo, Isidre Ferrer, Marta Barrachina, Mairena Martín 1Departamento de Química Inorgánica, Orgánica y Bioquímica, Facultad de Químicas, Centro Regional de Investigaciones Biomédicas, Universidad de Castilla-La Mancha, Ciudad Real La demencia con cuerpos de Lewy (DLB) es una enfermedad neurodegenerativa caracterizada por la presencia de cuerpos de Lewy, depósitos intraneuronales de