candidiasis invasora (CI) se ha
incrementado drásticamente. Debido a que
Candida es un componente habitual de la
microbiota, resulta difícil diferenciar una infección de una colonización.
Nuestro grupo de investigación desarrolló una técnica de inmunofluorescencia indirecta que detecta la presencia de aquellos anticuerpos que reaccionan específicamente con la pared de los tubos germinales de C. albicans en pacientes con una CI. Estos anticuerpos aparecen durante un proceso invasivo y se les ha denominado CAGTA. La tasa de mortalidad de aquellos pacientes con una CI en la UCI era significativamente inferior en aquellos que presentaban títulos altos de CAGTA en suero. Basándonos en estas premisas, el primer objetivo de este trabajo fue el de caracterizar la actividad antifúngica de los
In the last decades, the incidence of invasive candidiasis (IC) has dramatically increased. Since Candida is a common component of human microbiota, it is difficult to differentiate invasion from colonization.
Our group of research developed an immunofluorescence indirect assay to detect the presence of those antibodies reacting specifically against the surface of the germ tubes of Candida albicans in patients with IC. These antibodies appear during the invasive process and they are referred to as CAGTA. The mortality rate of patients with IC at the ICU was significantly lower in those with high CAGTA-titer in serum. Based on this premise, the first goal of this study was to characterize the antifungal activity of anti-Candida
albicans germ tube antibodies (CAGTA).
anticuerpos anti-micelio de C. albicans (CAGTA).
Recientemente el grupo de investigación del Dr. Naglik descubrió la Candidalisina, la primera toxina citolítica peptídica
identificada en hongos patógenos
humanos. Este péptido presenta un papel fundamental en el proceso infeccioso de las mucosas por parte de C. albicans gracias a
la activación de una respuesta
inmunológica a nivel epitelial. La Candidalisina deriva de una preproteína (Ece1p) formada por 271 aa, incluyendo siete motivos dibásicos lisina-arginina (KR). Estos motivos KR son reconocidos in
vitro por la endoproteasa Kex2p del
aparato de Golgi. La maduración de la Candidalisina requiere dos eventos enzimáticos: el primero implica el procesamiento de Ece1p por parte de Kex2p que posteriormente es procesada por Kex1p. En esta sección del estudio nos propusimos determinar si la actividad proteolítica requerida para la producción del péptido Candidalisina madura es dependiente de la actividad Kex1p; y por otro lado determinar la independencia de la carga-positiva del extremo C-terminal del péptido Candidalisina para promover daño a nivel epitelial.
A continuación, se detallan los objetivos de este trabajo:
1. Caracterizar la evolución de los CAGTA durante el proceso infeccioso e identificar los antígenos reconocidos
Recently, Dr Naglik’s research group discovered the Candidalysin, the first cytolytic peptide toxin identified in any human fungal pathogen. This cytolytic peptide has a vital role in mucosal infection by C. albicans due to the activation of the epithelial immunity. This peptide is derived from a larger parental preprotein (Ece1p) which consist of 271 aa, including seven dibasic lysine-arginine (KR) motifs that are recognized in vitro by the Golgi
complex-associated endoproteinase
Kex2p. Candidalysin maturation requires two individual enzymatic events. The first involves processing of Ece1p by Kex2p, yielding immature Candidalysin, which is then further processed by Kex1p. In this section of the study we decided to determine if the proteolytic processing event required for the production of mature Candidalysin is dependent upon Kex1p; and on the other hand to determine
the reliance of positively-charged
C-terminal K motif of wild-type C. albicans
Candidalysin for epithelial damage
induction.
Details of the objectives of this work are listed below:
1. Characterizing the evolution of CAGTA along the candidiasis process and identifying antigens recognized by
por los CAGTA desarrollados a partir de un modelo de CI en conejo causado por
C. albicans.
2. Evaluar la actividad antifúngica de los CAGTA a partir de un modelo de CI en conejo determinando el efecto sobre la viabilidad, actividad metabólica y morfología de C. albicans.
3. Caracterizar la actividad antifúngica de los anticuerpos contra C. albicans desarrollados por pacientes con CI. 4. Caracterización de la actividad
antifúngica de anticuerpos obtenidos a partir de un modelo de CI en conejo contra biopelículas de C. albicans. 5. Investigar la función de la actividad de
la enzima Kex1p en la formación del péptido maduro Candidalisina.
6. Evaluación de la actividad sobre células epiteliales de diferentes variantes de Candidalisina con carga positiva, negativa o neutra debido al cambio del aminoácido en el extremo C-terminal del péptido y comparación con la Candidalisina natural.
CAGTA developed in a rabbit model of invasive infection by C. albicans.
2. Evaluating the antifungal activity of CAGTA obtained in a rabbit model of IC by assessing their effect on viability, metabolic activity and morphology of Candida albicans.
3. Characterizing the antifungal activity of antibodies developed by patients with IC against C. albicans.
4. Characterizing the antifungal activity of antibodies raised in a rabbit model of IC infection against C. albicans biofilm. 5. Investigating the function of Kex1p
activity in the generation of mature Candidalysin.
6. Evaluating the activity on epithelial
cells of different variants of
Candidalysin peptides with negative, positive or neutral charge amino acid substitutions at the C-terminal position of the protein and comparision to the wild-type Candidalysins.