Determinación del estro

Durante 24 meses se realizaron muestreos periódicos utilizando ratas hembras de la colonia de producción con edades entre las 10-38 semanas, cuya población promedio de individuos permaneció en 50.

49 La determinación del estro en las hembras por medio de lavados se realizó de acuerdo con el siguiente procedimiento:

 Recolección de las muestras por medio del lavado vaginal al inicio del ciclo lumínico.

 Se usaron pipetas Pasteur de vidrio, a las que por medio de calor se les redondeó la punta inferior. En el extremo superior se les colocó una chupa que permitió la entrada de aproximadamente 0.02 ml de agua destilada estéril; de esta manera la punta redondeada de la pipeta es introducida en la vagina y con la ayuda de la chupa se hace el lavado vaginal.

 Se realizó un extendido sobre una lámina portaobjetos del agua del lavado vaginal, y por medio de la observación en un microscopio de luz se hizo la evaluación el momento del ciclo estral de acuerdo con la predominancia celular observada.

 Comprobación de la observación realizada en el paso anterior, una vez la lámina se secaba al ambiente, se hicieron tinciones con colorante de Wright y se confirmaba la predominancia celular por medio de microscopía de luz.

Otra forma de determinación del estro usada fue por medio de la técnica de la impedanciometría, se realizó utilizando un monitor de ciclo estral (EC-40 Estrus Cycle Monitor, Fine Science Tools) que permite medir la resistencia eléctrica en K de la pared vaginal mediante una sonda especial para rata de 4,8mm de diámetro en cuyo extremo se ubican dos electrodos (Figura 2.1). El procedimiento usado fue el siguiente:

 Los muestreos se realizaron durante las primeras horas del ciclo de oscuridad, período en el cual las ratas inician su ciclo de vigilia.

 Las hembras seleccionadas se inmovilizaron sosteniendo la cabeza del animal entre los dedos medio e índice, colocándolas en una posición decúbito supino y exponiendo los genitales externos. Con la mano derecha se introdujo suavemente la sonda del monitor en la vagina de la hembra cuidando que no se humedeciera con orina.

 Se registró la lectura de resistencia dada por el monitor del ciclo estral. Si dicha lectura estaba por encima de 3,5 K se consideró positiva, es decir, que la hembra estaba en estro. Sí la lectura es inferior a 3,5 K se consideraba negativa. Los valores de resistencia positivos se registraron en una tabla.

 Las hembras negativas se devolvieron a la colonia, para ser muestreadas en los días siguientes.

 Las hembras positivas se separaron y se cruzaron la misma noche en la que se hizo la lectura.

50 Figura 2.1. Fotografías de determinación del estro por medio de la lectura de la impedancia de la pared vaginal. A) Impedanciómetro. La unidad cuenta con una sonda de 4.8 mm de diámetro con dos electrodos en su extremo. B) Luego de inmovilizar la hembra se coloca en una posición decúbito dorsal, exponiendo los genitales externos. C) La sonda se introduce en la vagina teniendo cuidado de no contaminarla con orina en el proceso. D) La lectura de impedancia refleja la resistencia eléctrica de la pared de la vagina en la imagen se observa un valor de impedancia de

1KΩ. Sólo las hembras con valores superiores a 3.5 KΩ se seleccionaron para cruces.

Características del cruce

Determinada la etapa del ciclo estral de las hembras, tanto por el método de predominancia celular o por la lectura de impedancia mayor a 3,5, las hembras positivas, es decir, las que se encontraron en estro fueron cruzadas bajo las siguientes características.

 Los cruces se hicieron durante una sola noche, desde las primeras horas del ciclo de oscuridad hasta la primera hora del ciclo de luz.

 Se usaron machos entrenados y probados, es decir, que hubieran preñado previamente otras hembras.

 Los machos se mantuvieron en la jaula 1-2 días antes del cruce, y la hembra positiva se llevó a la jaula donde había permanecido el macho o los machos con los cuales se hicieron los cruces.

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 Los cruces se hicieron con diferentes relaciones de macho/hembra, de acuerdo con la disponibilidad de machos probados y de hembras en estro por cada día de muestreo.

 Se hicieron los registros del número de identificación de hembras y machos de cada cruce.

 Pasado el tiempo de cruce (10-12 horas), se retiraron las hembras de la jaula y se procedió a la detección del servicio (apareo) antes de devolverlas a sus jaulas.

Detección de servicio

A la mañana siguiente al cruce se retiraron las hembras de las jaulas de cruce y se pusieron juntas en una jaula para hacer la detección del servicio por medio de la aplicación de dos de las técnicas descritas en la literatura (86):

 Evaluación del tapón vaginal. La formación de un tapón mucoso en el canal vaginal al día siguiente del cruce, el cual se visualiza macroscópicamente, es indicativo de que la hembra fue servida. La presencia o ausencia de tapón se registró en la tabla correspondiente.

 Evaluación de la presencia de espermatozoides en el lavado vaginal realizado al inicio del ciclo de luz posterior al cruce. Con la observación a través de microscopio de luz se evaluó la presencia de espermatozoides en la lámina, en el caso de que hubiera presencia de espermatozoides, ésta se cuantificó como pocos, moderados y abundantes.

La presencia de cualquiera de los dos indicadores fue suficiente para considerar que la hembra fue servida y se registró como tal en la tabla correspondiente.