Determinación del estro en ratas Lewis

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Determinación del estro por medio del lavado vaginal.

Se usó un modelo de recolección de la información, en el cual, de acuerdo con la predominancia celular se clasificó a la hembra en una etapa determinada del ciclo estral, en proestro P, en estro

E, en diestro D y cuando se confirmó el servicio se reportó como SPM, que quiere decir presencia de espermatozoides (Tabla 1 Anexo 2). En el registro de la información fácilmente se pudo determinar cuándo una hembra, tenía un ciclo normal, por ejemplo los individuos 2, 7, 12, 16, 17, 19 y 21 que son presentados en la tabla 1 del anexo 2; las hembras con estas características fueron cruzadas en la noche siguiente a la detección del proestro. También se obtuvieron las imágenes histológicas que caracterizan cada etapa (Figura 2.7 y 2.8), se presentan las de una hembra desde la etapa de proestro hasta que se confirmó su servicio por la presencia de espermatozoides.

Figura 2.7. Imágenes de microscopía de luz 10X, de la celularidad encontrada en los frotis vaginales. A. Estro se caracteriza por la gran cantidad de células cornificadas. B. Estro, núcleos extracelulares. C. Diestro, celularidad mixta, linfocitos, células nucleadas y cornificadas. D. Diestro, Pocas células linfocitos y núcleos. E. Proestro, la mayoría son células nucleadas. F. Fecundación, gran cantidad de espermatozoides en la muestra. Barras de escala 50µm.

62 Figura 2.8. Fotografía en microscopio de luz en 10X, de la evaluación de la detección del servicio por medio de la realización del frotis vaginal al día siguiente del cruce. A. Extendido de un ejemplar con las siguientes características; Impedancia 4,9, no había tapón visible, presencia de espermatozoides en cantidad moderada, número de embriones a la cosecha 0. B. Extendido de un ejemplar con las siguientes características; Impedancia 4,1, no había tapón visible, presencia de espermatozoides en cantidad muy baja, número de embriones a la cosecha 13. C. Extendido de un ejemplar con las siguientes características; Impedancia 4,6, si había tapón visible, presencia de espermatozoides en cantidad abundante, número de embriones a la cosecha 9. Barras de escala 50µm.

El total de muestras tomadas fue de 1200, sólo 50 hembras fueron clasificadas en proestro y cruzadas con machos, de éstos sólo se confirmó el servicio en el 14% de los casos y sólo el 6% resultaron portadoras de embriones. Con el sistema de tinción empleado, se encontró frecuentemente la presencia de núcleos extracelulares muy característicos del diestro, lo cual podría ser indicativo de que la mayoría de las hembras muestreadas de manera secuencial con la técnica de lavado vaginal se pseudopreñaron después de 2 o 3 ciclos. El estado de pseudopreñez indica la exclusión de la hembra por un período de dos semanas, del grupo de hembras disponibles para los experimentos.

Determinación del estro por medio de la técnica de impedanciometría.

Este método permitió mantener el número de hembras disponibles para los muestreos periódicos ya que la incidencia de pseudopreñeces se redujo de manera evidente, cada día de muestreo se encontraron aproximadamente el mismo número de ratas con lecturas positivas, en promedio 6,7 ratas. Se tomaron un total de 1200 lecturas de impedancia vaginal, de las cuales 187 fueron más altas que 3,5 KΩ (15,58%), estas hembras fueron cruzadas con machos la misma noche. En 84 casos (44,9%) se detectó el servicio por la presencia de espermatozoides y sólo 46 (24,6%) presentaron tapón vaginal, lo que sugiere que la detección del servicio por la evaluación de la presencia del tapón vaginal no es válida como único indicador del servicio. Sólo en uno de los casos (0,97%) en que se clasificó a la hembra como no servida por no tener ni espermatozoides ni tapón resultó ser un falso negativo. Para conocer la relación entre las lecturas de impedancia vaginal y los apareamientos confirmados, se dividieron por rangos de lectura de 3,5-4 KΩ, de 4- 5 KΩ y >5 KΩ, encontrándose que cuando las lecturas son mayores a 4 KΩ se encontraron el mayor número de embriones.

63 El 16,75% de las hembras muestreadas estaban en estro y de éstas el 45% resultaron servidas y el 27,7% resultaron portadoras de embriones. En la tabla 2.1 se muestra un resumen de la relación servicios/preñeces obtenidos en las hembras con impedancias positivas. La confirmación del servicio se hizo por microscopía, por la presencia de espermatozoides. En algunos casos, en los que todas las variables fueron consideradas positivas no ofrecieron los mejores resultados en cuanto a cosecha de embriones; es así, como una hembra con las siguientes características: lectura de impedancia 4,9, sin tapón visible pero con presencia de espermatozoides, al sacrificio estaba vacía; mientras que otra hembra con lectura de impedancia 4,1, sin tapón visible y con escasa presencia de espermatozoides produjo 13 embriones. Finalmente de un tercera hembra con lectura de impedancia de 4,6, tapón visible y abundante presencia de espermatozoides, se cosecharon 9 embriones.

Tabla 2.1. Resultados de los cruces realizados con las hembras con impedancias positivas, divididas por rangos.

3.5-3.9KΩ 4-5 KΩ >5KΩ TOTAL

Número de hembras cruzadas

39 (20.9%) 95(50.8%) 53(28.3%) 187 Número de hembras

con tapón vaginal después del apareamiento 4 (8.7%) 25 (54.3%) 17 (37%) 46 (24.6%) 95% IC= 18.4–30.8 Número de hembras con espermatozoides después del apareamiento 8 (20.5%) 47 (49.5%) 29 (54.7) 84 (44.9%) 95% IC= 37.8–52.0 Número de hembras con espermatozoides y con tapón vaginal

después del apareamiento 8 (20.5%) 52 (54.7%) 30 (56.6%) 90 (48.1%) 95% IC=41-52.3 Número de hembras

con embriones viables 7 (18%) 27 (28.4%) 21 (39.6%) 54(28.87%) 95% IC=22.9 -35.9 Total de embriones

recogidos

47 (11.8%) 208(52.4%) 142(35.8%) 397 Número de embriones

por cada hembra preñada

6.7 7.7 6.76 7.2

95% IC = 6.5 _– 8.2

Cuando los cruces se realizaron en jaulas en las que se colocaron más de un macho y un número similar de hembras se aumentaron los servicios. Era frecuente observar como luego de su

64 introducción en la jaula de cruce una misma hembra era servida por los dos machos presentes en la jaula. Sin embargo un aumento en el número de servicios por hembra no se tradujo en un aumento significativo de embriones recolectados.