EXAMEN DE LABORATORIO

Las pruebas de laboratorio que se realizan en el análisis de manchas sanguíneas son:

1. PRUEBAS DE ORIENTACIÓN

Esta prueba orienta sobre la posible existencia de la sangre en las manchas que tienen características compatibles con la misma en cuanto a su color, forma y aspecto etc.

Si el resultado de los ensayos preliminares es negativo, la mancha no contiene sangre en cantidades detectables como para permitir su posterior análisis. Si el resultado es positivo, se requiere continuar con los ensayos para confirmar su presencia.

Foto Nº 20.- Aplicación del reactivo de orientación a una mancha de sangre seca en prenda de vestir

Dentro de los ensayos preliminares, los más conocidos son: a) Investigación de la catalasa de Vandervelde o hemasa

de Senter (Agua Oxigenada).- Conocida también con el nombre de reacción de Schoenbein, se basa en el principio en que el agua oxigenada es descompuesta fácilmente por un fermento que se encuentra en la materia colorante de la sangre. El oxígeno puesto en libertad remonta a la

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291 superficie en forma de pequeñas burbujas formando una espuma blanquecina. Este fermento se llama catalasa o hemasa.

b) Reacción de Adler.- Reactivo: Solución saturada de agua destilada y unas gotas de agua oxigenada. Se altera pronto, siendo preferible prepararla en el momento de su uso. La coloración violeta o azul es al instante, puesta en contacto con la sangre.

c) Luminol.- Esta prueba es bastante sensible y sirve para identificar la presencia de sangre, incluso cuando se han hecho las tentativas de lavar y ser ocultadas. En esta prueba las manchas de sangre se pueden hacer brillar intensamente, observándose una luz azul intensa, debido a la reacción quimioluminescente del luminol con el hierro en la hemoglobina.

d) Reacción de Thevenon-Roland.- Color violeta, da esta reacción si es positiva. Su reactivo se compone de una solución alcohólica acuosa de piramidón a las que se agregan unas gotas de ácido acético, lo que facilita la reacción (alcohol, 50 gramos; piramidón 2,50 gramos). Las reacciones preliminares pueden dar falsos positivos; es decir, resultados positivos producidos por sustancias diferentes de la sangre, como por ejemplo:

- Oxidantes químicos. - Sales de cobre y níquel. - Peroxidasas vegetales.

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292 2. PRUEBAS DE CERTEZA

Son ensayos específicos que certifican la existencia de sangre en la mancha investigada.

a. Métodos microscópicos

Consiste en la observación de elementos figurados de la sangre. Tales como: Los glóbulos rojos, glóbulos blancos, etc.

Esta observación puede verse afectada por diferentes circunstancias:

 La naturaleza del sustrato sobre la cual se encuentra la mancha.

 La antigüedad de la misma.

 El daño originado por el manipuleo.

 La putrefacción que causará la destrucción de los elementos figurados.

b. Métodos cristalográficos

Consisten en la preparación y observación microscópica de cristales obtenidos por acción de ciertos reactivos sobre la hemoglobina de la sangre. Entre los más conocidos tenemos:

1) La prueba de Teichmann.- Consiste en la cristalización característica del Clorhidrato de hematina (hemina), bajo la forma de cristales romboédricos de color café, utilizando ácido acético glacial con vestigio de cloruro de sodio. Esta prueba da buenos resultados aún con manchas antiguas y con muy pequeña cantidad de sangre.

2) La prueba de Takayama.- Es específica y esta basada en la obtención de los cristales de piridina- hemocromógeno como consecuencia de la acción del reactivo sobre la hemoglobina de la sangre, presente en la muestra.

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Foto Nº 22.- Prueba microscópica de Certeza con el Método Cristalografico.

c) Métodos cromatográficos

Se basa en la obtención del mismo Rf característico para un extracto de la muestra y testigo de sangre, ambos sembrados sobre papel para uso cromatográfico o sobre placa delgada.

d) Métodos microespectroscópicos

Consiste en observar el espectro de absorción de la oxihemoglobina, con un microscopio provisto de un ocular microespectroscópico.

3. DETERMINACIÓN DE ESPECIE

Una vez realizadas las pruebas confirmatorias de la sangre, debe efectuarse la investigación del origen humano o de otra especie al cual pertenece la muestra.

Hay factores que pueden afectar la posibilidad de asegurar el origen de la sangre. Entre los más importantes son: antigüedad de la mancha, acción del sol, humedad, putrefacción, desarrollo de hongos, altas temperaturas, lavado y la naturaleza de la superficie en la que se encuentra la sangre. Existen dos formas de realizarlas:

a) Físicas o microscópicas.- La presencia de glóbulos rojos en una muestra ha sido de valor ya que el tamaño y la morfología de los mismos difieren entre ciertas especies. b) Biológicas o Inmunológicas.- Consiste en una reacción

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294 obtención de un precipitado, se conoce con el nombre de ensayo de las precipitinas. Desde principios del Siglo XX, se sabe que es posible distinguir la sangre de diferentes animales por medio de sueros precipitantes.

4. TIPIFICACIÓN DE MANCHAS DE SANGRE

El fenómeno más característico de la individualidad es la aglutinación de la sangre producida por antígenos presentes en ella que reaccionan con los anticuerpos presentes en los antisueros específicos.

En manchas de sangre seca los glóbulos rojos están generalmente destruidos y, por lo tanto, las técnicas de aplicación directa no son aplicables; sin embargo los antígenos no se desnaturalizan inmediatamente y retienen la capacidad de combinarse con anticuerpos específicos (métodos indirectos). Es muy probable que queden en la escena del crimen manchas de sangre; si se comprueban que las mismas no pertenecen a la víctima, su estudio es muy importante para localizar al criminal. Por otra parte, si en ropas u objetos pertenecientes a un sospechoso, se encontraran manchas de sangre diferente a la suya y coincidente con la de la víctima, sería una prueba más de culpabilidad.

Los sistemas o grupos sanguíneos más aprovechables son los siguientes:

a) Sistema ABO: En el cual se manifiestan cuatro grupos sanguíneos: "A", "B", "AB", y "O".

b) Sistema MN: En este grupo se consideran tres combinaciones posibles: "MN", "M" y "N".

c) Sistema Rh: Los antígenos presentes en este sistema son: D, C, E, c, e, que constituyen el factor Rh (que según la combinación de sus tres alelos, será positivo o negativo). F. FACTORES QUE PUEDEN AFECTAR LOS RESULTADOS DEL