Estudios previos del grupo investigador han demostrado que las dietas ricas en PUFA n-6, como el aceite de maíz, ejercen un efecto estimulador de la carcinogénesis mamaria experimental, mientras que las dietas ricas en aceite de oliva virgen extra, con alto contenido en ácido oleico y compuestos bioactivos, podrían ejercer un efecto potencialmente protector. Los mecanismos a través de los cuales los lípidos de la dieta ejercen sus efectos moduladores no son completamente conocidos. Se han obtenido resultados que apoyan una acción compleja y pleiotrópica, como la influencia sobre la composición de la membrana celular, la expresión génica, las vías de señalización intracelular y el metabolismo de xenobióticos, entre otros.
La hipótesis en la que se basa el presente trabajo es la siguiente:
Las dietas ricas en aceite de maíz y aceite de oliva virgen extra ejercen sus efectos moduladores diferenciales de la carcinogénesis mamaria experimental, en parte, mediante cambios en el estado de estrés oxidativo en el organismo. Estos cambios implican diferencias en la defensa antioxidante enzimática y no-enzimática, los niveles de peroxidación lipídica, el daño sobre el ADN y su reparación.
Para poder demostrar esta hipótesis, se han establecido los objetivos siguientes: 1. Estudiar los efectos de los lípidos de la dieta sobre la evolución ponderal y
el estrés oxidativo en animales sanos.
1.1. Analizar la evolución ponderal y la masa corporal de los animales.
1.2. Caracterizar el perfil de expresión de las enzimas antioxidantes CAT, SOD1, SOD2, GPX1, GPX4 y GR en hígado y en glándula mamaria.
1.3. Analizar la defensa antioxidante enzimática en hígado.
1.3.1. Determinar la expresión de las enzimas antioxidantes CAT, SOD1, SOD2, GPX1, GPX4 y GR, y la actividad CAT, SOD y GPX a lo largo del tiempo.
81 1.3.2. Determinar los niveles totales del factor de transcripción NRF2 así
como su retención citoplasmática.
1.4. Analizar la defensa antioxidante enzimática en la glándula mamaria, mediante el análisis de la expresión de las enzimas CAT, SOD1, SOD2, GPX1, GPX4 y GR a lo largo del tiempo.
1.5. Analizar la defensa antioxidante no-enzimática, mediante la determinación de los parámetros del glutatión en plasma: glutatión total, su forma reducida (GSH), su forma oxidada (GSSG), así como las ratios GSH/ GSHtotal y GSH/GSSG.
1.6. Determinar el grado de peroxidación lipídica en plasma, mediante el análisis de los niveles de MDA.
2. Estudiar los efectos de los lípidos de la dieta sobre el estrés oxidativo en la iniciación de la carcinogénesis mamaria experimental.
2.1. Analizar la defensa antioxidante enzimática en hígado.
2.1.1. Determinar la expresión de las enzimas antioxidantes CAT, SOD1, SOD2, GPX1, GPX4 y GR, y la actividad CAT, SOD y GPX.
2.1.2. Determinar los niveles totales del factor de transcripción NRF2 así como su retención citoplasmática.
2.2. Analizar la defensa antioxidante enzimática en la glándula mamaria, mediante el análisis de la expresión de las enzimas CAT, SOD1, SOD2, GPX1, GPX4 y GR.
2.3. Analizar la defensa antioxidante no-enzimática, mediante la determinación de los parámetros del glutatión en plasma: glutatión total, GSH, GSSG, y las ratios GSH/ GSHtotal y GSH/GSSG.
2.4. Analizar la expresión de la glutatión sintetasa (GSS), así como de la actividad GR en hígado.
2.5. Determinar el daño oxidativo en macromoléculas.
2.5.1. Analizar el grado de peroxidación lipídica en plasma, mediante los niveles de MDA.
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2.5.3. Analizar el daño oxidativo y total en el ADN en la glándula mamaria, mediante los niveles de 8-OHdG y el ensayo Comet, respectivamente. 2.5.4. Analizar la expresión de las enzimas de reparación del ADN, OGG y
PARP, en la glándula mamaria.
3. Estudiar los efectos de los lípidos de la dieta sobre la evolución ponderal, la carcinogénesis mamaria y el estrés oxidativo en animales adultos inducidos con el carcinógeno.
3.1. Analizar la evolución ponderal y la masa corporal de los animales. 3.2. Evaluar los diferentes parámetros de estrés oxidativo.
3.2.1. Analizar la defensa antioxidante enzimática en hígado.
3.2.1.1. Determinar la expresión de las enzimas antioxidantes CAT, SOD1, SOD2, GPX1, GPX4 y GR, y la actividad CAT, SOD y GPX.
3.2.1.2. Determinar los niveles totales del factor de transcripción NRF2 así como su retención citoplasmática.
3.2.2. Analizar la defensa antioxidante enzimática en la glándula mamaria, mediante el análisis de la expresión de las enzimas CAT, SOD1, SOD2, GPX1, GPX4 y GR.
3.2.3. Analizar la defensa antioxidante no-enzimática, mediante el estudio de los parámetros del glutatión en plasma: glutatión total, GSH, GSSG, así como las ratios GSH/ GSHtotal y GSH/GSSG.
3.2.4. Determinar el daño oxidativo en macromoléculas.
3.2.4.1. Analizar el grado de peroxidación lipídica en plasma, mediante los niveles de MDA.
3.2.4.2. Analizar el daño oxidativo y total en el ADN en la glándula mamaria, mediante los niveles de 8-OHdG y el ensayo Comet, respectivamente.
3.2.4.3. Analizar la expresión de las enzimas de reparación del ADN, OGG y PARP en la glándula mamaria.
3.3. Estudiar la carcinogénesis mamaria experimental.
3.3.1. Analizar y cuantificar las estructuras proliferativas epiteliales de la glándula mamaria y evaluar su grado de densidad.
83 3.3.2. Analizar los parámetros clínicos de la carcinogénesis: tiempo de latencia, incidencia, contenido tumoral (contenido tumoral total y contenido tumoral medio) y volumen tumoral (volumen tumoral total, volumen medio por animal y volumen tumoral medio por tumor). El objetivo último de estos estudios es el de proporcionar evidencias experimentales sobre las acciones moduladoras de los lípidos de la dieta en el cáncer de mama. Aunque se debe ser prudente a la hora de extrapolar los resultados obtenidos en modelos experimentales al cáncer humano, tales evidencias permitirían formular argumentos científicos acerca de la importancia que los hábitos dietéticos y el estilo de vida pueden tener en la salud o el riesgo de enfermedad de la población. Asimismo, estos estudios ayudarían a definir factores de riesgo y/o protectores a los que puede estar sometida la población por sus hábitos alimentarios. En consecuencia, este trabajo en su conjunto podría enmarcarse en el campo de la prevención, primaria y secundaria, del cáncer de mama.
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