RESULTADOS Y DISCUSIÓN De un total de 9 muestras se aislaron y

purificaron 16 cepas de levaduras nativas de diferentes municipios de Norte de Santander (Tabla 1).

Tabla 1. Aislamientos de levaduras nativas de Norte de Santander.

A partir de la caracterización morfológica se observaron morfologías presuntivas del género Saccharomyces colonias circulares de color blanco crema, convexas, de borde entero, consistencia butírica-cremosa, brillantes con un tamaño de colonia que oscila entre 1-4 mm de diámetro (Figura 1), excepto las cepas LNS-03 y LNS-16 colonias de bordes irregulares, opacas, presentan superficie rugosa especie de filamentos (presencia de pseudohifas), con tamaño de colonia de 2-4 mm, por lo que se descartan morfológicamente como presuntivas Saccharomyces (Figura 2).

Figura 1. Caracteristicas morfológicas de las cepas de levaduras nativas

Saccharomyces.

a b c

Cepa LNS-08: a-Colonia en Medio YEPD (Estereoscopio Zoom 0,8x); b-Directo (Microscopio Objetivo40 x); c-Tinción de Gram (Microscopio Objetivo 100x).

Figura 2. Características morfológicas de las cepas de levaduras nativas no

Saccharomyces.

a b c

Cepa LNS-16: a-Colonia en Medio YEPD (Estereoscopio Zoom 0,8x); b-Directo (Microscopio Objetivo40 x); c-Tinción de Gram (Microscopio Objetivo 100x)

En cuanto a la prueba de crecimiento en medio Etanol, puede considerarse una prueba selectiva indicadora de microorganismos que eventualmente son capaces de crecer en presencia de etanol en el medio [6], siendo el género Saccharomyces tolerante a una concentración de entre el 8 al 12% de etanol en el medio, concentraciones muy próximas a las de etanol producido por cepas de este género.

En la Figura 3 se puede observar la lectura de cada uno de los 16 aislamientos levaduriformes y cepas referencia cultivados en medio sólido con etanol, a partir de lo cual se obtuvo que 5 cepas toleran un 8% de etanol y 2 de las 5 cepas también toleran un 10% de etanol en el medio, las cepas de referencia evaluadas Aislamiento Muestra

LNS-01

Pulpa de café procedente del proceso de beneficio (Ragonvalia) LNS-02

LNS-03 LNS-04

Guayaba – frutos caídos en el suelo (Pamplonita)

LNS-05 LNS-06

LNS-07 _{Zupia de Guarapo de panela}

(Pamplonita) LNS-08

LNS-09

Cáscara de piña (Teorama) LNS-10

LNS-11 LNS-12

Uva (Villa del Rosario) LNS-13

LNS-14

Guarapo de panela (Durania) LNS-15

LNS-16 Fermentación de jugo de piña

presentaron crecimiento en medio etanol al 8% y al 10%.

Figura 3. Tolerancia a etanol de cada uno de los aislamientos y cepas referencia.

En la caracterización bioquímica de los aislamientos de levaduras nativas obtenidos de la Prueba de asimilación de nutrientes se observó que las cepas de levaduras LNS-03 y LNS-16 confirman sus características macro y microscópicas no características del género Saccharomyces dado que en el perfil bioquímico arrojado en asimilación de compuestos carbonados y nitrogenados, asimilan arabinosa (pentosa), nitratos y L-Lisina, compuestos no asimilables por levaduras del género Saccharomyces [7].

En la Prueba de OF para Fuentes de Carbono Glucosa, Sacarosa, Maltosa, Lactosa, Rafinosa, todas las cepas evaluadas nativas y de referencia fermentaron Glucosa y fueron inactivas frente a lactosa excepto la cepa LNS-10 que presentó metabolismo oxidativo frente a Lactosa, las cepas LNS-01 y LNS-02 fueron inactivas frente a los demás azúcares evaluados, LNS-04 y LNS-05 fermentaron además Sacarosa y Maltosa siendo inactivas frente a Rafinosa, las cepas LNS-06 y LNS-13 presentaron metabolismo oxidativo con Sacarosa y Maltosa y fueron inactivos frente a Rafinosa, LNS-07, LNS-08, LNS-14, LNS- 15 y las cepas referencia fermentaron los

azúcares evaluados siendo inactivas a Lactosa.

Mediante el kit API 20 C AUX®, el perfil bioquímico para cada cepa, pudo ser identificado a partir de la base de datos del programa informático de identificación Apiweb V.4.0, obteniendo unos % de identificación (%ID) de acuerdo a las reacciones positivas después de 72 horas de incubación (Tabla 2). Destacándose de los aislamientos nativos obtenidos en el presente estudio 4 cepas correspondientes a Saccharomyces cerevisiae (LNS-07, LNS-08, LNS-14 y LNS-15).

Tabla 2. Identificación bioquímica de las

levaduras nativas basada en el Kit API 20 C AUX®.

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Como resultados del trabajo de investigación, se obtuvieron cepas de levaduras a partir de fuentes vegetales y fermentaciones naturales obtenidas de fincas o parcelas muestreadas en diferentes municipios de Norte de Santander.

Aislamiento Identificación %ID

LNS-01 Kloeckera spp. 99,3 LNS-02 Kloeckera spp. 99,3 LNS-04 Cryptococcus albidus 89,3 LNS-05 Candida dubliniensis 88,4 LNS-06 Candida guillermondii 71 LNS-07 Saccharomyces cerevisiae 1 98,7 LNS-08 Saccharomyces cerevisiae 1 98,7 LNS-09 Candida parapsilosis 72,1 LSN-10 Cryptococcus neoformans 94,3 LNS-11 Candida parapsilosis 76 LNS-12 Candida peliculosa 71,7 LNS-13 Candida lusitaniae 82,5 LNS-14 Saccharomyces cerevisiae 1 97,9 LNS-15 Saccharomyces cerevisiae 1 90,2

La caracterización bioquímica permitió la confirmación de cuatro cepas de levadura nativas como Saccharomyces cerevisiae mediante el kit API 20 C AUX®, las cuales proceden de muestras de fermentaciones naturales guarapos de panela, lo que indica que estas son las muestras más acertivas para aislamiento de cepas del género Saccharomyces, cepas que serán evaluadas en términos de producción de etanol.

REFERENCIAS

1 Ingledew, W. M. Alcohol production by Saccharomyces cerevisiae: a yeast primer. Nottingham university press. Nottingham, UK. 2001. 3:49- 87.

2 Capece, Angela Romaniello, Rossana Siesto, Gabriella Pietrafesa, Rocchina Massari, Carmela Poeta, Cinzia Romano, Patrizia. Selection of indigenous Saccharomyces cerevisiae strains for Nero d'Avola wine and evaluation of selected starter implantation in pilot fermentation. 2010. International Journal of Food Microbiology, 144: 187-192.

3 Mercado L. Sturm M. Rojo MC. Ciklic I. Biodiversity of Saccharomyces cerevisiae populations in Malbec vineyards from the “Zona Alta del Río Mendoza” region in Argentina. 2011. International Journal of Food Microbiology 151: 319-326.

4 Pallmann, Christina L., Brown, James A., Olineka, Tammi L., Luca Cocolin, Mills, David A., Bisson Linda F. Use of WL Medium to Profile Native Flora Fermentations. 2001. Am. J. Enol. Vitic. 52, 198-203.

5 Linares Sicilia, María José; Solís Cuesta, Francisco. Identificación de levaduras. 2007. Revista Iberoamericana de Micología, ISBN: 978-84-611-8776-8.

6 Laguado Sanguino, Jenny A. Aislamiento y caracterización de microorganismos a partir de fuentes

de biomasa lignocelulósica con capacidad de metabolizar pentosas para la producción de etanol. 2010. San José de Cúcuta: Universidad Francisco de Paula Santander, Facultad de Ciencias Agrarias y del Ambiente, Ingeniería Biotecnológica; CENICAÑA.

7 Kurtzman, C. P. Fell J. W. Boeckhout

T. Summary of Species

Characteristics. p. 262-263. The Yeasts: A Taxonomic Study, Volumen 1. Fifth edition 2011. ELSEVIER. ISBN: 978-0-12384708-9.

CUANTIFICACIÓN DE BACTERIAS DIAZÓTROFAS ASOCIADAS AL CULTIVO DE