Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de caesalpinia spinosa (tara) sobre streptococcus mutans atcc 25175

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. -B IB. LI. O. TE CA. FACULTAD DE ESTOMATOLOGÍA. IA. “EFECTO ANTIBACTERIANO IN VITRO DEL EXTRACTO ETANÓLICO. G. DE Caesalpinia spinosa (TARA) SOBRE Streptococcus mutans. M AT O. LO. ATCC 25175.”. TESIS. FA CU. LT A. D. DE. ES. TO. PARA OPTAR EL GRADO DE BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA. AUTOR. MAGALY ABANTO VILCA. ASESOR DR. GUSTAVO GUARDIA MÉNDEZ CO-ASESOR: DRA. ELVA MEJÍA DELGADO. TRUJILLO – PERÚ 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. TE CA. A Dios Padre, por ser el amigo que nunca se irá, por haberme dado fortaleza y su amor en momento,. y. por. regalarme. tantas. O. todo. IA. -B IB. LI. bendiciones.. G. A mi mamá, Yolanda, gracias por tu amor. LO. infinito, tu comprensión por saber que. M AT O. siempre podré contar contigo, por todos tus. Gracias por ser el mejor regalo que Dios me ha dado y por ayudarme a lograr esta meta.. LT A. D. DE. ES. TO. sacrificios y tus palabras de aliento.. A mi prima, Gema, que más que una prima,. FA CU. es una hermana, amiga, siempre brindándome su ayuda incondicional, escuchando y aconsejando en todo momento.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TE CA. A mi familia, mis tíos y primos por su. G. A mis abuelitos, César y Bernabita. IA. -B IB. LI. la alegría brindados.. O. apoyo desinteresado y por todo el amor y. LO. (QEPD), como un padre siempre te he. M AT O. visto y como una madre también, gracias. por cuidarme, protegerme y orar por mí. A mi tía, Dora, (QEPD), quien a pesar que ahora no está físicamente conmigo sé que vela por mí con mucho amor desde el cielo.. FA CU. LT A. D. DE. ES. TO. desde el cielo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. TE CA. Al Dr. Gustavo Guardia Méndez, mi asesor, por su constante orientación,. -B IB. LI. de esta investigación.. O. tiempo y paciencia por haber hecho posible el desarrollo y la culminación. IA. A la Dra. Elva Mejía Delgado, mi Co-asesora, por brindarme sus valiosos. G. conocimientos, la oportunidad de contar con su cariño, y su detallado. M AT O. LO. trabajo realizado conmigo en la ejecución del proyecto.. TO. A los docentes de la Facultad de Estomatología de la Universidad. experiencias y valores.. LT A. D. DE. ES. Nacional de Trujillo por impulsar mi desarrollo con sus conocimientos,. Por último, pero no menos importante, quiero dar las gracias a todos mis. FA CU. compañeros. De una u otra forma han colaborado en el término de este trabajo. Especialmente y quien ha estado más cerca de mí, quien es Omar Chávez Galarreta.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El propósito del presente estudio de tipo experimental fue determinar el. TE CA. efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa (Tara) frente a cepas de Streptococcus mutans. Se realizó la prueba de. O. susceptibilidad, utilizando el método de difusión de discos; todas las. -B IB. LI. concentraciones presentaron halos de inhibición y los tamaños aumentaron directamente proporcional a las concentraciones utilizadas.. IA. Para hallar la Concentración Mínima Inhibitoria se empleó el Método de. G. dilución en tubos, ensayando concentraciones de 40%, 60% y 80% del. LO. extracto etanólico de C. spinosa; de cada cultivo se sembró en placas con. de Colonias (UFC).. M AT O. Agar Mueller Hinton – Sangre para determinar las Unidades Formadoras. TO. Los resultados mostraron que la concentración al 80% del extracto. ES. etanólico de Caesalpinia spinosa mostró el mayor halo de inhibición. DE. (14.80mm) y la concentración mínima inhibitoria fue la del 40%. Se concluye que el extracto etanólico de vainas de Caesalpinia spinosa. LT A. D. “tara” posee actividad antibacteriana in vitro sobre el crecimiento de cepas. FA CU. de Streptococcus mutans.. Palabras claves: Caesalpinia spinosa, Streptococcus mutans, efecto. antibacteriano.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The purpose of this experimental study was to determine the in vitro. TE CA. antibacterial effect of ethanol extract of Caesalpinia spinosa (Tara) against strains of Streptococcus mutans. Susceptibility testing was performed using. O. the disk diffusion method; all concentrations showed inhibition halos and the. -B IB. LI. sizes increased directly proportional to the concentrations used.. To find the minimum inhibitory concentration dilution method was used in. IA. pipes, testing concentrations of 40 %, 60 % and 80 % of the ethanol extract. G. of C. spinosa ; of each culture was plated in Mueller Hinton Agar - blood to. LO. determine the colony forming units (CFU ).. M AT O. The results showed that the concentration of 80% ethanol extract of Caesalpinia spinosa showed the greatest inhibition halo (14.80mm) and the. TO. minimum inhibitory concentration was 40%.. ES. It is concluded that the ethanol extract of Caesalpinia spinosa "Tara" has. DE. antibacterial activity in vitro on the growth of Streptococcus mutans.. FA CU. LT A. effect.. D. Key words: Caesalpinia spinosa, Streptococcus mutans, antibacterial. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. DEDICATORIA. TE CA. AGRADECIMIENTO RESUMEN. -B IB. LI. O. ABSTRACT. IA. I. INTRODUCCIÓN .................................................................................. 1. LO. G. II. MATERIAL Y MÉTODOS .................................................................... 16. M AT O. III. RESULTADOS ................................................................................... 31. ES. TO. IV. DISCUSIÓN........................................................................................ 37. DE. V. CONCLUSIONES ................................................................................ 45. LT A. D. VI. RECOMENDACIONES ...................................................................... 46. FA CU. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................. 47. VIII. ANEXOS .......................................................................................... 54. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. La caries dental ha sido definida, tradicionalmente como enfermedad. TE CA. multifactorial, que comprende la interacción de factores de huésped, la. dieta y la placa dental en un determinado tiempo1. Es considerada como un. O. proceso patológico, infeccioso y transmisible de los dientes, que se. -B IB. LI. caracteriza por la desintegración progresiva e irreversible de sus tejidos calcificados, debido a la acción metabólica de microorganismos sobre los 2 ,3, 4.. G. IA. carbohidratos fermentables provenientes de la dieta. LO. La caries dental, según Bhaskar, es la enfermedad más común del ser. M AT O. humano 5. En el Perú el Ministerio de Salud, notifica una prevalencia de 90% de Caries Dental en la población total 85% enfermedad periodontal y. TO. 80%, mal oclusión, constituyendo un problema de salud pública; el índice. ES. de dientes cariados, perdidos y obturados (CPOd), a los 12 años es de. DE. aproximadamente 6, ubicándose según la OPS en un País en estado de. LT A. D. emergencia 6.. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), la caries dental es la. FA CU. enfermedad bucodental más frecuente en algunos países asiáticos y latinoamericanos7, y la define como un proceso localizado de origen. multifactorial que se inicia después de la erupción dentaria, determinando el reblandecimiento del tejido duro del diente y evoluciona hasta la formación de una cavidad8.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se han planteado diferentes teorías del proceso carioso entre ellas se encuentra la Teoría Acidogénica. En la actualidad es la teoría que más se. TE CA. acerca a la etiología de la caries, fue propuesta por Miller en 1980, quien instituyó el papel esencial de los microorganismos en la etiología de la. -B IB. LI. O. caries1,9.. La placa dental ha sido definida como: una masa blanda, translúcida y muy. IA. adherente que se acumula sobre la superficie de los dientes, formada casi. G. exclusivamente por bacterias y sus subproductos10. La Organización. LO. Mundial de la Salud (O.M.S.) la define como “Una entidad organizada,. M AT O. proliferante y enzimáticamente activa que adhiere firmemente a la superficie de los dientes debido a su actividad bioquímica de tipo. ES. TO. metabólico”11.. DE. La cavidad bucal está colonizada por más de 400 especies de bacterias aerobias y anaerobias. Las bacterias anaerobias superan en número a las. LT A. D. aerobias en una proporción que varía entre 10:1 y 100:1 respectivamente. Estos microorganismos habitan en los dientes, surco gingival, las mucosas,. FA CU. el dorso de la lengua y la saliva; y también pueden actuar como patógenos involucrados en las principales infecciones de la cavidad bucal. 12.. Las infecciones dentarias más frecuentes son las caries dentales y la enfermedad periodontal, las cuales cuando no se tratan, pueden. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. propagarse y contribuir al desarrollo de infecciones polimicrobianas en otras localizaciones, como los senos paranasales, el espacio sublingual, el 12.. TE CA. paladar, el sistema nervioso central, el endocardio y los pulmones. Dentro de las especies identificadas que se relacionan con mayores. O. capacidades de iniciar el proceso de formación de lesiones cariosas. -B IB. LI. destaca la gran cantidad de estudios sobre las propiedades del género. IA. Streptococcus13,14.. G. Los Streptococos son cocos Gram positivos, generalmente acapsulados,. LO. no motiles, facultativos, que se dividen en un solo plano, y pueden. división. 15.. M AT O. presentarse como cocos aislados, diplococos y, típicamente después de su En la flora bacteriana de la placa se encontró que los cocos. TO. constituyen la mayor parte de la flora, y entre ellos especialmente los. ES. Streptococos16.Siendo considerado el Streptococcus mutans (S. mutans),. DE. el microorganismo más cariogénico de la placa dental, jugando un rol activo en el desarrollo de lesiones de caries, especialmente en las primeras. LT A. D. etapas 17.. FA CU. El S. mutans miembro del Grupo Viridans, es una bacteria Gram positiva,. anaerobia facultativa que se encuentra en la cavidad bucal humana formando parte de la placa dental, asociada al inicio y desarrollo de las caries dentales. 10.. Es acidofílica porque vive en pH bajo, siendo capaz de. crecer a pH 5.2; acidogénica porque metaboliza los azúcares en ácido y. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. acidúrica porque puede mantenerse metabólicamente activa a pesar de un pH bajo 18, 19. Otra característica es su corto efecto post pH, que es la rápida capacidad para recuperar su fisiología normal tras una brusca caída del pH. TE CA. 18.. O. Su relación en la formación de placa bacteriana, está relacionada con la. -B IB. LI. producción de glucosiltransferasas, enzimas que tienen un rol principal en las interacciones adhesivas y expresión de virulencia de estos. IA. microorganismos, debido a que catalizan la síntesis de polisacáridos. 16.. Dichas enzimas proporcionan a la célula un. LO. la superficie del diente. G. extracelulares que promueve la adhesión de estreptococos cariogénicos a. M AT O. sustrato de dónde obtener energía y mantener la producción de ácido 20.. TO. durante largos periodos de tiempo. ES. El poder cariogénico de los S.mutans es, aunque con algunas diferencias,. DE. muy similar en todas las especies y está muy ligada a la sacarosa, ya que tienen la capacidad de metabolizarla mucho más rápido que cualquier otro 18.A. partir del metabolismo de la. LT A. D. microorganismo de la cavidad oral. sacarosa estos microorganismos producen principalmente ácido láctico, el. FA CU. cual es fundamental en la virulencia debido a que, aparentemente, es el ácido más potente que interviene en la desmineralización del diente. 19.. Debido a estas razones, el S. mutans es base de numerosos estudios destinados a investigar sobre la prevención de caries dental, poniendo. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. especial énfasis en las medidas que controlen la formación de placa bacteriana dental y así reducir la presencia del patógeno. Es así como, paralelo al desarrollo tecnológico de la industria farmacéutica, existe un. TE CA. gran interés por parte de los investigadores en estudiar sustancias 21.. O. naturales que posean propiedades farmacológicas antibacterianas. -B IB. LI. El uso de plantas es de gran importancia en la medicina tradicional. El conocimiento científico de ciertas especies es desconocido y es necesario. IA. que aprendamos a investigar los recursos naturales. Este conocimiento. G. permitirá determinar los principios activos de las plantas medicinales y. LO. estudiar su actividad en el organismo para después aislarlos, obtenerlos y. M AT O. avalar los usos que la medicina popular le atribuye a diversas especies. TO. vegetales 21.. ES. De acuerdo a la Organización Mundial de la Salud (OMS) (1979) una planta. DE. medicinal es definida como cualquier especie vegetal que contenga sustancias que puedan ser empleadas con propósitos terapéuticos, o cuyos. LT A. D. principios activos puedan servir de precursores en la síntesis de nuevos. FA CU. fármacos 22.. Los estudios sobre la actividad antimicrobiana de extractos y aceites esenciales de plantas nativas han sido reportados en muchos países, como Brasil, Cuba, India, México y Jordania, que tienen una diversidad de flora y una rica tradición en el uso de plantas medicinales para su uso como. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. antibacteriano o antifúngicos. Ya que las plantas medicinales producen una variedad de sustancias con propiedades antimicrobianas, se espera que los compuestos se usen para el desarrollo de nuevos antibióticos. Sin. TE CA. embargo, las investigaciones científicas para determinar el potencial terapéutico de las plantas son limitadas y hay una falta de estudios. O. científicos que confirman la experimentación posibles propiedades. -B IB. LI. antibióticas de muchas de estas plantas 23.. IA. En nuestro medio algunas plantas medicinales en el área de salud dental. G. están siendo utilizadas en diversas formulaciones farmacéuticas, así. LO. tenemos: enjuagues bucales, colutorios, soluciones tópicas y pasta dental. M AT O. 21.. TO. La Caesalpinia spinosa (C. spinosa), Molina o Kuntze, nombre científico de. ES. la “Taya”, Caesalpinia, se debe a su descubridora Andrea Caesalpini (1524. espinas. DE. - 1603), botánica y filósofa italiana; Spinosa, del latín spinosus-a-um, con 24. .Es una planta originaria del Perú utilizada desde la época. LT A. D. prehispánica en la medicina popular y en años recientes, como materia 24.. FA CU. prima en el mercado mundial de hidrocoloides alimenticios. Otros nombres vulgares con los que se conoce a esta planta son: tara, taya, divi divi de tierra fría o dividi de los andes, guarango, vinillo, serrano, cuica24,25.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La C. spinosa, se localiza comúnmente en zonas costeras, serranías y bosques secos; siendo propia del Perú y se la puede encontrar en diversas zonas áridas, pedregosas o arenosas de países como Venezuela, Ecuador,. TE CA. Colombia, Bolivia y Chile en su parte norte 25.. O. En el Perú, se encuentra en los valles interandinos secos entre 1000 y 3100. -B IB. LI. msnm, los departamentos de mayor producción son Cajamarca (41%), Ayacucho (16%), La Libertad (13%), Huánuco (13%), también se reporta. IA. su presencia en Huancavelica, Apurímac y Ancash, habiendo nuevas. LO. G. iniciativas en Ica y Lambayeque25.. M AT O. Se lo ubica en suelos semiáridos y como linderos, árbol de sombra para 26.. TO. cultivos y animales y también como árbol ornamental. ES. De igual manera este árbol no es exigente en cuanto a suelo corresponde. DE. debido a que posee la capacidad de soportar suelos secos, con pH 6-7,5, sin embargo, no tolera suelos alcalinos ni temperaturas extremadamente. LT A. D. bajas26.. FA CU. Es un árbol pequeño, de dos a tres metros de altura, de fuste corto, cilíndrico y a veces tortuoso, y su tronco está provisto de una corteza gris espinosa, con ramillas densamente pobladas. En muchos casos las ramas se inician desde la base dando la impresión de varios tallos. La copa de la tara es irregular, aparasolada y poco densa, con ramas ascendentes 22.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el Perú, números estudios han reportado la presencia de taninos, flavonoides, gomas, alcaloides y proteínas en la Taya, que se pueden hallar. TE CA. tanto en la vaina como en la semilla 27.. O. Estos taninos son empleados en la industria textil para la elaboración de. -B IB. LI. productos plásticos, adhesivos o el curtido de cueros; como bactericida y fungicida, aclarador de vinos, sustituyente de la malta para dar cuerpo a la. IA. cerveza. Gracias a los taninos se obtiene el ácido gálico el cual es. G. empleado como antioxidante en la industria cervecera y de aceite al tener. LO. efecto decolorante y blanqueador. También se emplea en la fotografía. M AT O. como tintes, agentes curtiembres, productos farmacéuticos 24. A partir de las semillas se obtienen gomas, aceite, harina proteica que sirve. TO. para conseguir una consistencia en los helados, jabones, pinturas, barnices. ES. de uñas, tintes, mantecas y mantequillas comestibles debido a que. DE. contiende ácidos libres en 1,4% lo cual es aceptable para la. LT A. D. comercialización gracias a su acidez baja 24.. La madera obtenida de este árbol se emplea en la industria maderera y en. FA CU. construcción, además de usarla como leña y carbón. 24.. Debido a las propiedades y usos que los Taninos ofrecen son : de tener. una acción astringente gracias a la capacidad de precipitar las proteínas de la piel y de la saliva, creando una capa aislante y protectora que reduce la. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. irritación y el dolor, por tal motivo son usados externamente para detener hemorragias locales; e inflamaciones de la cavidad bucal, catarros, bronquitis, quemaduras, hemorroides, e internamente contra la diarrea,. TE CA. enfriamiento intestinal, afecciones vesiculares, y como contraveneno en. O. caso de intoxicación por alcaloides vegetales 28.. -B IB. LI. Los taninos tienen la propiedad de formar complejos con macromoléculas particularmente con las proteínas; así forman enlaces puentes hidrógeno,. IA. y una unión covalente, colocándose entre las fibras de colágeno de la piel,. G. empleándolos en medicina en tratamientos de excoriaciones y quemaduras. M AT O. la cual se regeneran los tejidos 28.. LO. de la piel donde las proteínas forman una capa protectora antiséptica bajo. TO. La presencia de taninos, flavonoides y gomas hacen que esta planta tenga. ES. uso medicinal. Los taninos y flavonoides son metabolitos secundarios de. DE. las plantas de efecto protector ante algún daño oxidativo 27.. LT A. D. Se hicieron estudios de la actividad antibacteriana in vitro de los extractos. de las vainas y semillas de C. spinosa, utilizando cepas Gram positivas. FA CU. (Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis) y Gram negativas (Escherichia. coli, Klebselia sp. Y Shigella flexneri) mediante técnica de difusión con disco. Los extractos fueron preparados usando como solvente alcoholacetona (1:1). Se observó actividad inhibitoria sobre Cepas Gram positivas para el extracto de la vaina más no para el de la semilla 25.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Así mismo, en varios trabajos de investigación realizados in vitro con extracto de C. spinosa se concluye que la cáscara (vaina) de C. spinosa. 29, 30, 31.. Streptococcus pyogenes. TE CA. tiene una actividad antibacteriana sobre Staphylococcus aureus29 y Y en otras realizadas “in vivo” han. -B IB. LI. O. demostrado su actividad antiinflamatoria, anestésica y cicatrizante 32, 33.. En cambio, las flores de C. spinosa, poseen una capacidad antimicrobiana. G. IA. nula en comparación con las vainas maduras de Caesalpinia 34.. LO. En otro estudio se hizo el ensayo antimicrobiano sobre extractos etanólicos. M AT O. al 80% de nueve plantas obtenidas por maceración durante 5 días, una de las muestras ensayadas fue la C.spinosa (vainas); se utilizaron cinco cepas. TO. Gram positivas y tres Gram negativas usando el método de microdilución. ES. de caldo de cultivo (broth microdilution). Los resultados mostraron que en el Enterococcus faecalis tuvo una CIM de 0,5 mg/mL, mientras que para. DE. Bacillus cereus fue 8 y de 16 mg/mL para las otras bacterias, lo cual. LT A. D. determina la especificidad y gran poder antimicrobiano de la C. spinosa, frente a Enterococcus faecalis, sin embargo no se menciona las diferentes. FA CU. concentraciones a las que fue comparada la acción del extracto etanólico de C. spinosa 35.. En el estudio realizado por De la Cruz, se evaluó el efecto del extracto hidroalcohólico de C. spinosa sobre la viabilidad de Streptococcus β hemolítico. Encontrándose que la actividad antibacteriana del extracto de 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. C. spinosa frente a Streptococcus β hemolítico aumenta a medida que se eleva (25% a 100%) la concentración del extracto. 24.. TE CA. Investigaciones realizadas demuestran que el extracto alcohólico del fruto de C. spinosa a diversas concentraciones posee actividad antibacteriana. LI. -B IB. dicha bacteria a una concentración del 100% 36.. O. sobre el Corynebacterium diphtheriae, obteniendo mayor inhibición de. IA. Otros trabajos de investigación demuestran acción antibacteriana in vitro. G. del extracto de C. spinosa contra diversas bacterias patógenas orales. LO. comunes; entre las cuales inhibió el crecimiento de: E. faecalis, S.. M AT O. salivarius, A. viscosus y S. sangui 37.. TO. Se analizó el efecto antibacteriano de C. spinosa en diferentes. ES. concentraciones sobre la flora salival mixta, concluyendo que la actividad. DE. antimicrobiana es directamente proporcional a la concentración del extracto; evidenciando así, que el extracto de tara en 75 mg/mL de. LT A. D. concentración presentó mayor capacidad inhibitoria durante las 24 h sobre. FA CU. la microbiota salival mixta 38.. En otro estudio in vitro se demostró el efecto inhibidor del extracto etanólico. de vainas de C. spinosa frente a cepas de E. faecalis utilizando concentraciones 60%, 40%, 20% y 10% del extracto etanólico de vainas de C. spinosa; a los cuales se le agregó el inóculo de E. faecalis y los tamaños. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de estos aumentaron en relación directamente proporcional a las concentraciones utilizadas. La concentración mínima inhibitoria hallada fue. TE CA. la del 40% 39.. Bornaz G. et al40. En el 2013, determinaron el efecto in vitro de la solución. O. de C. spinosa al 60% , e Hidróxido de Calcio y Gluconato de Clorhexidina. -B IB. LI. al 2% sobre el halo inhibitorio de la cepa de E. faecalis, los resultados obtenidos indicaron un promedio del halo inhibitorio formado por la C.. IA. spinosa al 60% (10.25 mm.), fue mayor que el halo inhibitorio formado por. G. el Hidróxido de calcio + clorhexidina al 2% (10 mm.), en conclusión, la. LO. C.spinosa demostró tener efecto antimicrobiano frente a la presencia de E.. M AT O. faecalis.. TO. Se investigó la actividad antibacteriana, del extracto alcohólico de C.. ES. spinosa en cinco concentraciones (6,25 mg/mL; 12,5 mg/mL; 25 mg/mL; 50. DE. mg/mL y 75 mg/mL) sobre la cepa de Porphyromonas gingivalis mediante el test de difusión en Agar, se encontró que el extracto alcohólico de la C.. LT A. D. spinosa posee actividad antibacteriana sobre Porphyromonas gingivalis,. FA CU. aunque entre las cinco concentraciones no existe diferencia significativa 41.. Haro Valencia A. 42,. en Ecuador. En 2015; analizó el efecto antibacteriano. del extracto alcohólico de Caesalpinia spinosa (Tara) 100% frente al. Enterococcus faecalis, demostrando que posee una gran capacidad de inhibición similar al Hipoclorito de sodio (NaOCl) 5,25%; evidenciando un. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. potencial antibacteriano de 12,8167mm durante las primeras 24 h, un mayor efecto a las 48 h dando una media inhibitoria de 12,9000mm y prevaleciendo su efecto hasta las 72 h con un promedio de 12,73mm; a. TE CA. diferencia del efecto obtenido por el NaOCl 5,25% que presentó una. capacidad inhibitoria considerable únicamente a las 24 h estableciendo una. O. media de 13,0833mm y conforme el transcurso del tiempo hasta las 72 h,. -B IB. LI. este efecto fue decreciendo de manera considerable mostrando una media de 12,3333mm y 11,8833mm respectivamente; por lo que se evidencia que. IA. la acción antibacteriana y el efecto de sustentabilidad del extracto de tara. LO. G. 100% es superior al NaOCl 5,25%.. M AT O. Debido a que la caries es la afección estomatológica más frecuente en la población se genera la necesidad de evitar su avance haciendo uso de. TO. métodos preventivos y restauradores. Teniendo en cuenta la amplia y. ES. variada cantidad de propiedades curativas que presenta la Tara en diversas. DE. enfermedades, motiva el interés de determinar la existencia de la propiedad. D. antimicrobiana frente al microorganismo causante de la caries.. LT A. Investigaciones demuestran el efecto antibacteriano por parte de la vaina. FA CU. de la C.spinosa, sería conveniente demostrar el efecto antibacteriano sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175, lo cual validaría los pocos trabajos similares realizados, además de transformarse en un conocimiento importante en la práctica odontológica debido a que a partir de dicha sustancia, se podrían elaborar diversos productos efectivos para. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. el control de caries dental, beneficiando a la población por ser una materia prima económica y natural.. TE CA. Por lo tanto, el propósito del presente estudio es evaluar el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa (Tara). O. sobre el crecimiento de Streptococcus mutans, microorganismo principal en. 1.1.. ES. TO. M AT O. LO. G. IA. -B IB. LI. la etiología de la caries dental.. PROBLEMA. DE. ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de. LT A. D. Caesalpinia spinosa sobre Streptococcus mutans ATCC 25175?. HIPÓTESIS. FA CU. 1.2.. El extracto etanólico de Caesalpinia spinosa inhibe significativamente el crecimiento bacteriano in vitro del Streptococcus mutans ATCC 25175 y el efecto varía de acuerdo a la concentración utilizada.. 1.3.. OBJETIVOS 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3.1. Objetivo General:.  Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de. TE CA. Caesalpinia spinosa sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. LI. Medir la concentración mínima inhibitoria (CMI) in vitro de las. -B IB. . O. 1.3.2. Objetivos Específicos:. concentraciones 40%, 60% y 80% del extracto etanólico. . LO. G. IA. Caesalpinia spinosa sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. Medir la susceptibilidad in vitro de las concentraciones 40%, 60%. M AT O. y 80% del extracto etanólico Caesalpinia spinosa sobre Streptococcus mutans ATCC 25175. MATERIAL Y MÉTODOS. ES. TO. II.. DE. 2.1 TIPO Y ÁREA DE ESTUDIO: La presente investigación es básica (de acuerdo a su orientación),. LT A. D. experimental “in vitro”. El cual se desarrolló en el Laboratorio del Departamento de Microbiología de la Facultad de Medicina de la. FA CU. Universidad Nacional de Trujillo. 2.2 DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN MUESTRAL: La población bajo estudio estuvo conformada por el conjunto de placas Petri que contenían cada una de las diferentes concentraciones del 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. extracto etanólico de la Caesalpinia spinosa con siembra adecuada de Streptococcus mutans (3x108 UFC), en el laboratorio de Microbiología de. TE CA. la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. 2.2.1 Criterios de Inclusión. Placas con siembra adecuada de Streptococcus mutans (3x108. Placas que contenían el extracto etanólico de Caesalpinia spinosa y. IA. -. -B IB. LI. UFC/mL) a priori al enfrentamiento con el extracto.. O. -. G. que presentaron inhibición o no del crecimiento bacteriano (ausencia. Placas utilizadas para la determinación de la susceptibilidad, que no. M AT O. -. LO. o presencia de halos de inhibición de un diámetro mayor de 8mm).. ES. microbios.. TO. presenten crecimiento bacteriano ni contaminación por otros. -. DE. 2.2.2 Criterios de Exclusión Placas que después del proceso de incubación, mostraron. LT A. D. contaminación por otros microbios (otras bacterias u hongos).. FA CU. 2.3 CONSIDERACIONES ÉTICAS: Se tuvo en cuenta la manipulación y desecho de las muestras sobre todo. de la cepa ATCC 25175 de Streptococcus mutans de acuerdo al manual de Bioseguridad en Laboratorios de Microbiología y Medicina durante la ejecución del trabajo.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta investigación contó a su vez con la autorización del Comité Permanente de Investigación de la Facultad de Medicina de la Universidad. TE CA. Nacional de Trujillo y se seguió los principios de la Declaración de Helsinki. de la Asociación Médica Mundial, adoptada por la 64a Asamblea General,. 2.4 DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO:. IA. 2.4.1 Unidad de análisis. -B IB. LI. O. (Fortaleza – Brasil 2013).. G. La unidad de análisis para determinar la CMI la constituye cada una. LO. de las placas petri utilizadas. Las que contenían caldo de cultivo de. M AT O. tioglicolato, extracto etanólico de Caesalpinia spinosa a una determinada concentración, y el inóculo de Streptococcus mutans. TO. ATCC 25175.. ES. La unidad de análisis para determinar la susceptibilidad lo constituye cada una de las placas petri inoculadas con las suspensiones. LT A. D. DE. obtenidas a partir de la CMI.. FA CU. 2.4.2 Unidad de muestreo: Las unidades de muestreo estuvieron conformadas por las unidades. de análisis. Estas cumplieron con los criterios de selección.. 2.4.3 Marco de muestreo. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El marco muestral es el listado o registro de las unidades de muestreo, es decir de las placas petri.. TE CA. 2.4.4 Tamaño de muestra. El cálculo para el número de ensayos se determinó mediante la. -B IB. LI. O. fórmula:. n = 2(Zα/2 + Zβ)2 2S2 / d2. IA. Siendo:. : número de repeticiones a efectuar en cada investigación.. Zα/2. : 1.96 coeficiente de confiabilidad para α=0.05. Zβ. : 0.84 coeficiente de confiabilidad para β=0.20. M AT O. LO. G. n. : 0.8d valor asumido por no haber estudios previos.. D. : Diferencia entre promedios para rechazar la igualdad de. TO. S. DE. ES. medias.. n = (1.96 + 0.84)2 2(0.64) d2/ d2 = 10. LT A. D. Reemplazando:. FA CU. Con estos datos se determinó una muestra de 10 repeticiones para cada grupo.. 2.4.5 Diseño de contrastación: El presente estudio es un diseño experimental. El esquema puede representarse de la siguiente manera:. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Concentración Etanólica de Caesalpinia spinosa.. -B IB. LI. O. Volumen: 50gr. de polvo. TE CA. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Caesalpinia spinosa al 60%. Caesalpinia spinosa al 80%. LO. G. IA. Caesalpinia spinosa al 40%. M AT O. EFECTO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Caesalpinia spinosa SOBRE Streptococcus. FA CU. LT A. D. DE. ES. TO. mutans. Penicilina Procaína G 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 60 %. Penicilina Procaína G. 80 %. -B IB. LI. O. 40 %. TE CA. Extracto etanólico de Caesalpinia spinosa (Tara). Halo de inhibición (mm) Susceptibilidad. G. IA. CMI (UFC). M AT O. LO. Streptococcus mutans. TO. 2.5 MÉTODO DE SELECCIÓN DE LA MUESTRA:. ES. 2.5.1. Obtención de la cepa:. DE. Este estudio utilizó un cultivo liofilizado de la cepa de Streptococcus mutans ATCC 25175, el cual se obtendrá del Laboratorio de. LT A. D. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional. FA CU. de Trujillo.. 2.5.2. Preparación de la Cepa: Las cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175, se cultivaron en tubos de ensayo cerrados herméticamente conteniendo el medio Agar Soya Tripticasa.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se incubaron bajo condiciones de microanaerobiosis a 37ºC con el fin de obtener colonias jóvenes. Luego de 24 horas cada cepa. TE CA. Streptococcus mutans ATCC 25175, se diluyó en caldo tioglicolato hasta que se obtuvo una turbidez semejante al tubo número 05 de la. se. procedió. al. sembrado. para. distribuir. los. -B IB. segundos. LI. O. escala de Mac Farland. Una vez girados los tubos durante 30. G. 2.5.3. Prueba de Susceptibilidad:. IA. microorganismos adecuadamente.. M AT O. antibacteriano). LO. Determinación de la susceptibilidad o resistencia bacteriana (Efecto. TO. Un hisopo estéril fue embebido con la cepa preparada a una distancia. ES. de 10cm de la llama del mechero, se procedió al sembrado en camada en placas Petri conteniendo Agar Mueller Hinton - Sangre, se estrió el. DE. hisopo uniformemente sobre toda la superficie de agar, girando cada. D. placa 30 grados 10 veces aproximadamente. Las placas recién. FA CU. LT A. sembradas fueron incubadas en condiciones de microanaerobiosis a 37ºC en atmósfera con 5% de CO2 durante 24 horas. Para el efecto antibacteriano se utilizó la técnica de difusión de discos de Kirby y Bauer, la cual consiste en preparar los discos de papel de filtros estériles, los que fueron sumergidos dentro de cada concentración del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa, por el periodo no menor de 1 hora, luego con una aguja estéril, estos se colocaron sobre los 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. cultivos de Streptococcus mutans ATCC 25175 en las placas petri previamente cultivadas; las placas petri se mantuvieron en la misma posición por 5 minutos. Luego de este tiempo las placas se voltearon. TE CA. de posición y se incubaron por 24 horas en microanaerobiosis. utilizando la jarra GasPack, con el método de vela, mediante el cual. -B IB. LI. O. se obtuvo un ambiente aproximado de 5 a 10% de CO2, a 37°C.. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10cm. IA. de la llama al mechero. La lectura de los resultados se llevó a cabo. G. después de las 24 horas, mediante la inspección visual de cada placa.. LO. Se efectuó tomando el registro en milímetros de los halos de inhibición. M AT O. del crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175 mediante la. TO. técnica de Duraffourd.. ES. 2.5.4. Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) Para determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto. DE. etanólico de Caesalpinia spinosa se realizó lo siguiente: se colocó 0.8. D. ml del extracto etanólico (etanol al 70%) de la Caesalpinia spinosa al. LT A. 40%, 60% y 80% respectivamente, cada concentración en un tubo de. FA CU. ensayo, previamente etiquetado. Después del proceso de dilución se colocó un inóculo de 0.2 ml del cultivo preparado de Streptococcus mutans, en los tubos que contenían las diversas concentraciones del extracto; así como al control positivo (tubo con penicilina procaínica), y al control negativo (tubo con el cultivo de Streptococcus mutans sin ningún tratamiento) obteniéndose un volumen final de 1mL para cada 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. tubo y se llevó a incubación a 37° C por un periodo de 24 horas en condiciones de microanaerobiosis.. TE CA. Luego de 24 horas se realizó la determinación de la CIM mediante el. conteo de UFC, tomando 0,1mL de las suspensiones de cada tubo y. O. se dispersó en las placas con Agar Mueller Hinton - Sangre con el asa. -B IB. LI. de Driglasky para determinar las unidades formadoras de colonia (UFC). Después del sembrado, se llevó a incubación a 37°C por 24. IA. horas en jarra Gaspak en condiciones de microanaerobiosis 5 a 10%. LO. G. de CO2.. M AT O. Todo el procedimiento fue realizado bajo condiciones asépticas y se efectuaron 10 repeticiones por concentración. Luego de 24 horas se. TO. realizó el conteo de las colonias de cada una de las placas. La. ES. concentración inhibitoria fue aquella en la que se llegó a inhibir. DE. completamente el desarrollo de los gérmenes.. D. 2.5.5. Controles:. LT A. Para determinar el efecto antibacteriano: Se utilizó como control. FA CU. positivo, discos de penicilina, y como control negativo, discos de suero fisiológico. Para la concentración inhibitoria mínima: Se utilizará como control positivo, penicilina procaínica, y como control negativo, la suspensión estándar de Streptococcus mutans.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6 PROCEDIMIENTO E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS: 2.6.1. Recolección de la muestra:. TE CA. Se recolectaron un kilogramo de las vainas se Caesalpinia spinosa “Taya “o “Tara”, vainas secas, del distrito de Ñuñumabamba ,. -B IB. LI. O. Provincia de Cajabamba, departamento de Cajamarca.. La recolección de la especie se realizó por el método. LO. G. IA. o clásico de herborización.. convencional. 2.6.2. Preparación de la muestra:. M AT O. Selección y lavado de la muestra: El material vegetal recolectado fue transportado al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de. TO. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, donde. ES. se eliminó las sustancias extrañas presentes en el material vegetal.. DE. Luego se procedió a lavar el material vegetal con agua destilada, seguido de una desinfección, utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %.. LT A. D. Posteriormente se realizó un enjuague de la vaina con suficiente agua. FA CU. destilada estéril, esto es para retirar los residuos de hipoclorito.. Secado: Las vainas de Caesalpinia spinosa fueron colocadas sobre papel Kraft y sometidas a secado primero a temperatura ambiente por 24 horas, y luego en la estufa a 40 oC.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Pulverización y tamización: Se procedió a separar las semillas de las vainas, posteriormente se pulverizó las vainas con ayuda de un mortero hasta obtener polvo y luego se pasó a través de un set de. TE CA. tamices para homogenizar el tamaño de partículas.. O. Almacenamiento: El polvo obtenido, se guardó en un frasco de vidrio. -B IB. LI. de color ámbar de boca ancha43. 2.6.3. Preparación del extracto etanólico. las vainas de. LO. G. IA. Caesalpinia spinosa (Tara). de. Procedimiento de Maceración. M AT O. En un recipiente de vidrio de boca ancha y de color ámbar, fueron colocados 50 g de polvo. Luego se añadieron 200 ml de etanol a. TO. 70oGL (Gay-Lussac), dejándose macerar en ausencia de luz y a. ES. temperatura ambiente por 7 días, agitándose manualmente durante. DE. 10 minutos 2 veces al día. Al 4to día se agregó 100 ml más de alcohol de 70° y se siguió agitando hasta completar la semana. El macerado. LT A. D. se filtró con papel filtro Whatman No 1 y el filtrado se evaporó en un. FA CU. rotavapor (Heidolph WB 2000) a presión reducida y temperatura controlada, no mayor a 50°C. Finalmente, el extracto se colocó en cápsulas de porcelana y se llevó a secar a la estufa a 40 ºC. A partir de este extracto seco se preparó las concentraciones de 40%, 60%, 80% disueltas en etanol a 70oGL. Luego cada concentración del. extracto fue esterilizada por filtración con membrana, usando filtros. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Millipore de 0.4 µm y 0.22 µm. Finalmente, las concentraciones preparadas, del extracto etanólico, se colocó en viales ámbar de 10 38.. TE CA. mL y fueron almacenadas a 4°C hasta su posterior utilización. LI. O. 2.6.4. Instrumento:. -B IB. El instrumento de recolección de los datos fue estructurado para el registro de la Concentración inhibitoria y la susceptibilidad. (Anexo 01. G. IA. y 02). ES. TO. M AT O. LO. 2.7. VARIABLES DE ESTUDIO Y ESCALAS DE MEDICIÓN:. DE. 2.8. Definición de las variables: 2.8.1. Extracto Etanólico de vainas Caesalpinia spinosa (Tara):. LT A. D.  Definición Conceptual: Sustancia que se obtiene a partir de. FA CU. una vaina por diversos procedimientos. La Caesalpinia spinosa es un planta natural con propiedades beneficiosas para la salud. 38.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VARIABLES. INDICE. INDICADOR. TIPO. ESCALA. Concentración. Tiene efecto. de Caesalpinia o no tiene. Caesalpina. 40% , 60% y. spinosa. 80%. efecto.. O. spinosa al. Nominal. LI. etanólico de. Cualitativa. -B IB. Extracto. Independiente. TE CA. %. Escala de. G. Nula,. Inhibición. sensible, muy. Cuantitativ. mutans. según el. sensible y. a. diámetro(mm). sumamente. M AT O. Streptococcus. De Razón. sensible. Efectiva y no. Concentración. efectiva. Inhibitoria. mediante. Cuantitativ. (UFC/ml). a. De Razón. D. DE. ES. TO. Dependiente. LO. Halo de. IA. Durafford:. LT A.  Definición Operacional: En la presente investigación el. FA CU. extracto etanólico de Caesalpinia spinosa será. a diferentes. concentraciones de 40%, 60% y 80%.. 2.8.2. Streptococcus mutans ATCC 25175: . Definición Conceptual: Bacteria del género Streptococcus, Gram positiva, con capacidad cariogénica17. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Definición Operacional: Para efectos de la investigación la investigación coincidió con la conceptual, será valorada. TE CA. mediante el Halo de inhibición y el conteo UFC/ml.. O. 2.8.2.1. Halo de Inhibición:. LI.  Definición conceptual: Zona alrededor del disco donde una. -B IB. sustancia antibacteriana es capaz de impedir el crecimiento. Definición operacional: Se utilizará como medida los. LO. . G. IA. de la bacteria al cabo de 18 a 24 horas de incubación 44.. M AT O. diámetros de estas zonas en mm, según la escala de Duraffourd y manejar los siguientes indicadores:. TO. Escala de Duraffourd.. ES. Escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto. DE. inhibitorio in vitro, según diámetro de inhibición: Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.. D. . FA CU. LT A. . . Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro. comprendido entre 8 a 14 mm. Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.. . Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.8.2.2. Concentración Inhibitoria Definición Conceptual: Será interpretada como la mínima. . microorganismo después de su incubación 45.. O. Definición Operacional: La definición coincidirá con la. LI. . TE CA. concentración del extracto que inhibe el crecimiento del. -B IB. conceptual al ser valorada mediante el número obtenido en mg/ mL del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa donde. mutans. mediante. G. Streptococcus. IA. se pretende apreciar la inhibición total del crecimiento del el. conteo. UFC/mL.. LO. Considerándose solución no efectiva cuando la inspección. M AT O. visual se registre formación de colonias, y efectiva cuando no se observe formación de colonias del crecimiento del. ES. TO. Streptococcus mutans ATCC 25175.. DE. 2.9 Análisis estadístico e interpretación de datos:. D. Para analizar la información se construyeron cuadros de distribución de. LT A. frecuencias de una y doble entrada con sus valores absolutos, se calculó. FA CU. el promedio y Desviación estándar de las variables cuantitativas y gráfico.. Para determinar cuál es la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), se. empleó la prueba de Análisis de Varianza, y para determinar la susceptibilidad se aplicó la prueba de comparaciones múltiples utilizando la prueba de Duncan. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESULTADOS. M AT O. III.. LO. G. IA. -B IB. LI. O. TE CA. Ambas con un nivel de significancia del 5%(P <0.05). En el presente estudio de tipo experimental “in vitro”, se desarrolló en los. TO. ambientes de la sección de Microbiología Médica de la Facultad de. ES. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo; tuvo como propósito, determinar el efecto antibacteriano del extracto etanólico de Caesalpinia. DE. spinosa (Tara) sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, y para la cual se. LT A. D. utilizaron 3 concentraciones 40%, 60% y 80%, y un grupo control,. FA CU. encontrándose los siguientes resultados:. . Los promedios de halo de inhibición de crecimiento del Streptococcus mutans al 40% fue de 8.10mm, al 60% de 14.00mm, al 80% de 14.80mm y al grupo control de 16.90mm.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . El promedio de unidades formadoras de colonias obtenidas a las 3 diferentes diluciones fueron: al 40% -0.3 UFC promedio, al 60% -0.2. LO. G. IA. -B IB. LI. O. TE CA. UFC promedio y al 80%- 0.1 UFC promedio.. M AT O. Tabla N°1: Tamaño promedio de los halos de inhibición según concentración del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa. Lab. de. TO. microbiología UNT – 2015. n. Promedio. Desv. Estándar. 40.00%. 10. 8.10. 1.524. 10. 14.00. 2.539. 80.00%. 10. 14.80. 3.521. Control: Penicilina Procaína G. 10. 16.90. 2.998. 40. 13.45. 4.230. FA CU. DE. LT A. D. 60.00%. ES. Grupos de tratamiento. Total. Fuente: Datos recogidos por el investigador, año 2015. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la tabla N°2, se observa el promedio de los halos de inhibición del extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 40%,60%, 80% y el grupo control de Penicilina Procaína G. Observándose que el mayor. TE CA. diámetro de la concentración es del 80% (14.80mm) con una Desviación. M AT O. LO. G. IA. -B IB. LI. O. Estándar de 3.521 y del grupo control es de 16.90mm.. Tabla N°2: Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de. TO. vainas Caesalpinia spinosa al 40%, 60% y 80% sobre el crecimiento. Fuente de Variación. DE. ES. del S. mutans ATCC 25175, según diámetro de halo inhibitorio. Análisis de varianza. GL. CM. F. p. Tratamientos. 426.500. 3. 142.1667. 18.8578. 0.0000. Error. 271.400. 36. 7.5389. Total. 697.900. 39. FA CU. LT A. D. SC. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la tabla N°3, se muestra el análisis de varianza, y se obtuvo como resultado que existe una diferencia estadística altamente significativa (p<0.001) del diámetro de halo de inhibición del crecimiento del. TE CA. Streptococcus mutans de acuerdo a la concentración del extracto etanólico. M AT O. LO. G. IA. -B IB. LI. O. de Caesalpinia spinosa aplicada.. Tabla N°3: Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de vainas Caesalpinia spinosa al 40%, 60% ,80% y el grupo control sobre. ES. Prueba de Duncan. DE. inhibitorito.. TO. Streptococcus mutans ATCC 25175, según diámetro de halo. Subconjunto alfa = 0.05 n. G1. 40.00%. 10. 8.10. 60.00%. 10. 14.00. 80.00%. 10. 14.80. Control: Penicilina Procaína G. 10. FA CU. LT A. D. Concentración del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa. G2. G3. 14.80 16.90. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. En la tabla N°4, se aplicó la prueba de Duncan para determinar diferencias. TE CA. significativas entre los grupos experimentales se encontró 3 grupos. estadísticamente significativos, en el grupo N°01 (G1) formado por la. O. concentración al 40% del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa ; en el. -B IB. LI. grupo N°02 (G2) formado por el extracto etanólico de Caesalpinia spinosa al 60% y 80%: en el grupo N°03 (G3) formado por la concentración del. IA. extracto etanólico C. spinosa al 80% y el grupo control (penicilina); de los. G. 3 grupos formados encontrándose que el mayor halo de inhibición se da. LO. con la concentración al 80% y con el grupo control (penicilina) .. M AT O. Tabla N°4: Unidades Formadoras de colonias de Streptococcus mutans ATCC 25175 según concentraciones de Caesalpinia spinosa.. TO. Laboratorio de Microbiología de la Facultad de medicina de la UNT -. N. Media. Desv. Estándar. 10. 3.82 x 109. 1.6 x 108. 40%. 10. 0.3. 0.67495. 60%. 10. 0.2. 0.42164. 80%. 10. 0.1. 0.31623. Control: Penicilina Procaína G. 10. 0.0. 0.00000. Total. 40. LT A. D. Grupos. DE. ES. 2015. Control Bacteriano. FA CU. Concentración de extracto etanólico de semillas de Tara. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fuente: datos obtenidos por el investigador, año 2015. En la tabla N° 5, se observa el promedio de UFC del extracto etanólico de sobre. spinosa. Streptococcus. mutans,. según. las. TE CA. Caesalpinia. concentraciones donde se observa que el mayor promedio de UFC se da. LI. O. cuando al grupo bacteriano no se le da ninguna concentración y el. -B IB. promedio es nulo (ninguna UFC) cuando es tratado con Penicilina. Observándose que todas las concentraciones del extracto tuvieron efecto. M AT O. LO. G. IA. antibacteriano.. Tabla N°5: Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, según. TO. UFC.. DE. ES. Análisis de varianza. SC. GL. CM. F. p. Tratamientos. 0.5. 3. 0.166667. 0.90909. 0.44625. Error. 6.6. 36. 0.183333. Total. 7.1. 39. FA CU. LT A. D. Fuente de Variación. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la tabla N°6, se muestra el Análisis de Varianza, el cual determina que no hay diferencia significativa en el crecimiento de UFC de Streptococcus mutans de acuerdo a la concentración del extracto etanólico de Caesalpinia. LO. G. IA. -B IB. LI. O. TE CA. spinosa aplicada. (p>0.05).. M AT O. IV. DISCUSIÓN. TO. El presente estudio de tipo experimental, demostró el efecto antibacteriano. ES. in vitro del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa (Tara) sobre Streptococcus mutans ATCC25175, utilizando tres concentraciones. DE. diferentes al 40%, 60% y 80%, realizado en el laboratorio de Microbiología. LT A. D. de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. FA CU. La mayoría de estudios realizados hasta el momento sobre las plantas medicinales. buscan explicar. y dar a. conocer sus propiedades. antibacterianas frente a ciertos microorganismos, dando así diversas alternativas en tratamientos, surgiendo en la actualidad diversos estudios que confirma dichas propiedades21,22. En el ámbito odontológico es muy. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. utilizada las propiedades de diversas plantas medicinales como parte de tratamientos preventivos y curativos, obteniéndose en presentaciones. TE CA. como enjuagues, pastas dentales, cremas, etc.. El efecto antibacteriano se consideró en función al diámetro de los halos de. O. inhibición de crecimiento del microorganismo: nula (-) si fue inferior a 8mm;. -B IB. LI. sensibilidad límite (sensible= +) de 8 a14mm; medio (muy sensible= ++) para un diámetro entre 14 y 20mm; sumamente sensible (+++) para un. G. IA. diámetro superior a 20mm44.. LO. Se determinó el efecto antibacteriano del extracto etanólico de Caesalpinia. M AT O. spinosa (Tara) a concentraciones del 40%, 60% y 80% sobre el crecimiento de Streptococcus mutans. Con los resultados que se observan en la tabla. TO. N°1 y gráfico N°1 se ha demostrado que si hay susceptibilidad del extracto. ES. etanólico de Caesalpinia spinosa (Tara) para todas sus concentraciones. DE. (40%, 60% y 80%) sobre el crecimiento del Streptococcus mutans según. LT A. D. las repeticiones que se hicieron para cada tratamiento.. Al comparar los promedios de los halos de inhibición de los diferentes. FA CU. tratamientos con extracto etanólico de Tara (Tabla N°2), se determinó que la concentración del 40% presenta un promedio de 8.10mm,. a la. concentración del 60% un promedio de 14.00mm, a la concentración del 80% un promedio 14.80mm y al grupo control un promedio de 16.90mm; es decir a mayor concentración del extracto etanólico, mayor es la medida del. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. halo de inhibición, y por consiguiente, mayor es la susceptibilidad bacteriana sobre el crecimiento del Streptococcus mutans. Es así que esta susceptibilidad. bacteriana. varía. de. acuerdo. a. las. TE CA. concentraciones del extracto etanólico utilizadas.. diferentes. O. La acción antibacteriana del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa. -B IB. LI. (Tara) sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, se evaluó mediante el test de ANOVA, lo que nos muestra la existencia de una diferencia. IA. significativa entre las soluciones inhibitorias de S. mutans, dado que el valor. G. de p de la prueba estadística es menor que 0.05 (Tabla N°3), así mismo. LO. para determinar cuál de las concentraciones usadas fue la que presentó un. comparaciones. del. M AT O. mayor efecto antibacteriano se aplicó la Prueba de Duncan, mediante diámetro. de. inhibición. entre. las. diferentes. TO. concentraciones del extracto etanólico (40%, 60%,80) y el grupo control por de 3 grupos estadísticamente. ES. Penicilina; se comprobó la existencia. DE. significativos. El primer grupo incluye a la concentración de 40%, con halo de inhibición de 8.10mm. El segundo grupo corresponde a las. LT A. D. concentraciones de 60% y 80% con halo de inhibición de 14mm. y 14.80mm. respectivamente. El tercer grupo incluye a la concentración de. FA CU. 80% y al grupo control con halo de inhibición de 14.80mm. y 16.90mm. El segundo y tercer grupo resultan ser significativamente más altos, es decir tienen su efecto mayor sobre S. mutans. (Tabla N°4).. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La concentración mínima inhibitoria obtenida fue la de 40%, ya que el número de UFC a partir de esta concentración fue menor a 30. Sin embargo, todas las concentraciones tuvieron efecto inhibitorio comparado UFC de. TE CA. con el control donde se observó un crecimiento de. O. aproximadamente 3.82 x 109 (Tabla N° 6).. -B IB. LI. Se muestra el Análisis de Varianza, el cual determina que no hay diferencia significativa en el crecimiento de UFC de Streptococcus mutans de acuerdo. IA. a la concentración del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa aplicada p. G. = 0.44. (p>0.05) (Tabla N°7).. LO. En la literatura se ha reportado que el efecto antibacteriano del extracto de. M AT O. C. Spinosa (tara) se debe a que las vainas contienen taninos hidrolizables en un rango de 40% a 60%, las cuales puede variar según las condiciones. TO. ecológicas en las que vegeta. Las vainas de C. spinosa contiene hasta el. ES. 25% de ácido gálico, que es uno de los mejores constituyentes de los. DE. taninos31.. LT A. D. En otras investigaciones realizadas se encontró que los taninos son metabolitos que se encuentran en diferentes partes de la planta. Estos son. FA CU. solubles en agua, etanol, acetona; otorga resistencia a la planta contra parásitos y para el hombre es útil por su actividad farmacológica como antihemorrágico local, antidiarreico y antibacteriano, ya que al combinarse con las proteínas de la membrana celular de las bacterias las desnaturalizan. Los flavonoides son otros principios activos encontrados en. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. el estudio fitoquímico del extracto de C. spinosa. Estos son pigmentos que derivan de un núcleo básico denominado flacona, es uno de los grupos más numerosos y ampliamente distribuidos dentro de los constituyentes. TE CA. naturales de las plantas conocidos también como antoxantinas, solubles en agua, etanol y otros disolventes orgánicos. Los flavonoides tienen acción. O. farmacológica como: dilatadores coronarios, espasmolítica, antihepatóxica,. -B IB. LI. diurética y antibacteriana38 . Los taninos de este vegetal son utilizados en la curtiembre; debido a que sus extractos evitan la putrefacción gracias a. IA. que los taninos constituyen un grupo de sustancias fenólicas poliméricas. G. en su forma hidrolizable, y condensados con propiedades antimicóticas y. M AT O. LO. bactericidas27.. En un estudio Pulipati et al34 (2012), valoraron la actividad antibacteriana. TO. de varios extractos de Caesalpinia sobre el E. faecalis; indicando que el. ES. extracto con cloroformo de Caesalpinia tiene un mínimo efecto. DE. antibacteriano sobre el E. faecalis a diferencia de los extractos con hexano, agua, etílico, metanol y acetona usados en ese análisis, los cuales no. LT A. D. presentaron acción inhibitoria alguna. A diferencia del presente estudio, en el cual el extracto etanólico de tara al 40% presenta la mínima. FA CU. concentración inhibitoria sobre la bacteria de Streptococcus mutans demostrando eficacia antibacteriana. Esta diferencia de resultados podría deberse a que el estudio realizado por Pulipati et al, empleo flores de Caesalpinia las cuales poseen una capacidad antimicrobiana nula en. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.