Desarrollo de un enjuague bucal de extracto de flores de Tropaeolum majus L con actividad antibacteriana in vitro en cepas de Streptococcus mutans

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. O. TESIS II. Y. Desarrollo de un enjuague bucal de extracto de flores de Tropaeolum majus L. con. AC I. A. actividad antibacteriana in vitro en cepas de Streptococcus mutans.. FA. RM. PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:. TE CA. DE. BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI BL IO. AUTORES:. . CHIRINOS RODRÍGUEZ, Jessica Marisol.. . CHOTA VIDAL, Liz Ruby.. . Dr. CASTILLO SAAVEDRA, Ericson Félix.. ASESOR:. TRUJILLO - PERÚ 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. Dedico esta investigación con mucho amor a nuestro Padre creador…gracias por. BI. O. Q. UI. M IC. A. bendecirme, escucharme y guiarme en este camino.. Y. A mis padres JAVIER y LUZ por ser mis apoyos en la vida y darme todo el. AC I. A. ánimo, amor y compresión que necesito para salir adelante no solo en los estudios. DE. FA. RM. sino en la vida como persona. Los quiero mucho y siempre los llevo en el corazón.. creer siempre en mí.. BI BL IO. TE CA. A mis hermanos LUZ DEL CARMEN y VÍCTOR, por su apoyo incondicional y. Jessica.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A DIOS y a la VIRGENCITA DE LA PUERTA por guiarme siempre por el. M IC. A. buen camino, por haberme dado la fortaleza, salud y su amor en todo momento. Y. BI. O. Q. UI. para lograr mis objetivos, además de regalarme tantas bendiciones.. AC I. A. A mi mamá ESMILDA, por tu amor infinito, tu comprensión por saber que. TE CA. DE. FA. RM. siempre podré contar contigo, por todos tus sacrificios y tus palabras de aliento.. A JOSÉ por ser esa personita especial en mi vida. Gracias por tu apoyo constante. BI BL IO. e incondicional, por siempre creer en mí, por tu cariño, paciencia y comprensión.. Liz.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A Dios por habernos acompañado y guiado a lo lardo de nuestra carrera, por ser nuestra fortaleza en los momentos de debilidad y brindarnos una vida llena de. M IC. A. aprendizajes, experiencias y sobre todo felicidad.. UI. Al Dr. Ericson Castillo Saavedra por su asesoramiento y permanente disposición e. O. Q. incondicional apoyo, y por compartir sus conocimientos, tiempo y dedicación a. AC I. A. Y. BI. esta investigación.. RM. Al Dr. Edmundo Venegas Casanova, por su orientación y ayuda en la realización. FA. de esta investigación. Por su amistad y motivación constante durante todo el. TE CA. DE. proceso de trabajo.. A la Dra. Carmen Ayala Jara, por creer en nosotras, por todo el apoyo brindado,. BI BL IO. amistad y por haber contribuido con sus conocimientos para nuestra formación profesional.. Jessica y Liz. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. M IC. A. Señores Miembros del Jurado Dictaminador. Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de grados y títulos de la Facultad. UI. de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, nos es grato someter a. BI. O. Q. vuestra consideración y elevado criterio profesional, el informe de Tesis II titulado:. Y. “Desarrollo de un enjuague bucal de extracto de flores de Tropaeolum majus L. con. RM. AC I. A. actividad antibacteriana in vitro en cepas de Streptococcus mutans”.. FA. Dejamos a vuestra consideración señores Miembros del Jurado, la respectiva calificación. BI BL IO. TE CA. DE. del presente informe.. Trujillo, Setiembre del 2018. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI. M IC. A. JURADO DICTAMINADOR. BI. DE. FA. RM. AC I. A. Y. Presidente. O. Q. Dr. QF. Arbayza Fructuoso Juan Delfín. Miembro. BI BL IO. TE CA. Dr. QF. Castillo Saavedra Ericson Félix. Dr. QF. Venegas Casanova Edmundo Arturo Miembro. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El objetivo de esta investigación fue desarrollar un enjuague bucal de extracto de flores de Tropaeolum majus L. con actividad antibacteriana in vitro en cepas de Streptococcus mutans. La obtención del extracto se realizó por el método de percolación, empleando alcohol de 70º G.L, realizándose su marcha fitoquímica. A. correspondiente. Se diseñó la formulación del enjuague bucal, realizándose los. M IC. controles de calidad organolépticos, fisicoquímicos, microbiológicos y estabilidad;. UI. resultando aceptables con las condiciones de calidad establecidas para este. O. Q. producto. Para los controles fisicoquímicos se aplicó el análisis de varianza. BI. ANOVA (0,05%), siendo estos no significativos en función del tiempo. En la. Y. prueba de susceptibilidad, se utilizó el método de difusión en discos. La cepa de. AC I. A. Streptococcus mutans fue muy sensible a las concentraciones de 1,5mg/mL (15,6mm), 1% (14mm) y sensible para la concentración de 0,5mg/mL (13mm),. RM. hubo una mayor variación con el grupo control positivo clorhexidina 0,12% siendo. FA. 21,5mm de diámetro (sumamente sensible) a diferencia del grupo control negativo. DE. de 5mm. Considerándose estadísticamente significativos (p<0,05). Se concluye que el enjuague bucal a base de Tropaeolum majus L. tiene calidad farmacéutica y. TE CA. efecto antibacteriano in vitro sobre cepas de Streptococcus mutans.. BI BL IO. Palabras clave: Enjuague bucal, Tropaeolum majus L, Streptococcus mutans.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The objective of this research was to develop a mouthwash extract of flowers of Tropaeolum majus L. with in vitro antibacterial activity in strains of Streptococcus mutans. The extract was obtained by the percolation method, using alcohol of 70º G.L, performing its corresponding phytochemical march. The formulation of the. M IC. A. mouthwash was designed, performing the organoleptic, physicochemical, microbiological and stability controls; being acceptable with the quality conditions. Q. UI. established for this product. For the physicochemical controls, the ANOVA. O. analysis of variance (0,05%) was applied, these being not significant as a function. BI. of time. In the susceptibility test, the disk diffusion method was used. The strain of. Y. Streptococcus mutans was very sensitive to the concentrations of 1,5mg / mL. AC I. A. (15,6mm), 1% (14mm) and sensitive for the concentration of 0,5mg / mL (13mm),. RM. there was greater variation with the group positive control chlorhexidine 0,12% being 21,5mm in diameter (highly sensitive) unlike the negative control group of 5. FA. mm. Considering themselves statistically significant (p <0,05). It is concluded that. DE. the mouthwash based on Tropaeolum majus L. has pharmaceutical quality and. BI BL IO. TE CA. antibacterial effect in vitro on strains of Streptococcus mutans.. Key words: Mouthwash, Tropaeolum majus L., Streptococcus mutans.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE Pág. i. Agradecimiento………………..…………………………………….………….. iii. PRESENTACIÓN…………………………..……………………………….……. iv. A. Dedicatoria……………………...………………………………………………... v. RESÚMEN.……………………………………………………………………... vi. ABSTRACT………………………………………………………….……..….. vii. BI. O. Q. UI. M IC. JURADO DICTADOR..……………………………………….…….………….. INTRODUCCIÓN………………………………….....…………………. II.. MATERIAL Y MÉTODO………………………….……...……………. III.. RESULTADOS……………………………...…………………….……... 18. IV.. DISCUSIÓN……………………………………………………….……... V.. CONCLUSIÓNES…………………………………………….……….…. 27. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………... VII.. ANEXOS………………………………………………………….……… 32. 1 5. 23. 28. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. A. Y. I.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), 5 mil millones de personas padecen caries dental, lo que equivale aproximadamente a un 80 % de la población mundial; otros estudios plantean que la caries dental la padece aproximadamente el 99 % de la población de América Latina y un 96 % del mundo1. En el Perú, la caries dental también es una de las enfermedades de mayor. A. prevalencia, aumentando la gravedad según la edad de los individuos; por lo tanto,. IC. la necesidad de tratamiento tendrá un mayor costo con el paso de los años, siendo. Q UI. M. producto de una deficiente salud bucal en sus primeros años de vida, producto de la limitada accesibilidad a los servicios de salud y las inadecuadas prácticas en. BI O. prevención de enfermedades orales2.. Y. La etiopatogenia de la caries dental se debe a diversos microorganismos, entre ellos. AC I. A. están los Streptococcus mutans, Lactobacillus sp. y Actinomyces sp. Estos microorganismos se pueden aislar a partir de placa dental supra y subgingival, y en. FA RM. la saliva. Estudios indican que hay una fuerte asociación positiva entre el aumento de los niveles de Streptococcus mutans y un inicio de desmineralización3.. DE. El Streptococcus mutans es un coco gram positivo que pertenece al grupo de. CA. Streptococcus viridans, dispuesto en cadena, no móvil, catalasa negativa, productor. IO TE. rápido de ácido láctico con capacidad de cambiar un medio de pH 7 a pH 4,2 en aproximadamente 24 horas. Asimismo, se considera fermentador de glucosa,. BI. BL. lactosa, rafinosa, manitol, inulina y salicina con la producción de ácido3. En la cavidad oral, las colonias se adhieren muy cerca de la superficie del diente e igualmente se puede recuperar en lesiones cariosas. Son los encargados de la formación de la capa de glucano insoluble a través de la síntesis de la glucosiltransferasa. Esta capa de glucano insoluble es esencial para la adherencia de los microorganismos a las superficies de los dientes. Otra característica del Streptococcus mutans es su corto efecto post – pH, que puede definirse como el tiempo necesario para recuperar su actividad de crecimiento habitual, tras estar sometido a un bajo pH éste vuelve a la normalidad. Según lo expuesto, no es de extrañar que estas especies bacterianas sean las que consigan alcanzar más. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. rápidamente. el. pH crítico. 4,5. necesario. para. iniciar. el. proceso. de. desmineralización. A partir del metabolismo de la sacarosa estos microorganismos, en particular Streptococcus mutans, producen principalmente ácido láctico, el cual es fundamental ya que, aparentemente, es el ácido más potente que interviene en la desmineralización del diente, causando daño en presencia de hidratos de carbono fermentables tales como sacarosa, fructosa, y glucosa4, 5. En la actualidad, se promueve ampliamente los productos dentales tales como los enjuagues bucales, ya que es el modo más conveniente de mantener la higiene, el. IC. A. cual se administra por vía oral para mantener la higiene bucal, después del cepillado. M. de dientes, para eliminar las bacterias y microorganismos causantes de caries y. Q UI. eliminar el aliento desagradable6.. BI O. Los enjuagues bucales son considerados formas farmacéuticas liquidas no estériles,. Y. por lo que a estos productos se les realiza controles que garanticen su calidad, y. A. ante todo su seguridad y eficacia, y por considerarse no estériles tiene una mayor. AC I. tendencia a ser susceptibles de contaminación debido a varios factores, como son la. FA RM. exposición al medio ambiente, el uso y conservación que se le brinde durante su tiempo de vida útil. En este sentido, para proteger y garantizar su calidad se efectúan controles físicos, químicos y microbiológicos con el fin de mantener el. CA. DE. enjuague bucal a condiciones que no afecten la integridad del consumidor7. Numerosos estudios se han destinado a investigar sobre la prevención de. IO TE. enfermedades bucales, en especial caries dental, poniendo especial énfasis en las. BL. medidas que controlen la formación de placa bacteriana dental y así reducir la. BI. presencia del agente patógeno. Es así, paralelo al desarrollo tecnológico de la industria farmacéutica, existe un gran interés por parte de los investigadores en estudiar. sustancias. naturales. que. posean. propiedades. farmacológicas. antibacterianas. Entre ellas, se encuentra Tropaeolum majus L., que es una planta nativa de los andes de Sudamérica (Perú, Colombia y Brasil) que actualmente se encuentra distribuida en todo el mundo. Sus grandes flores de color naranja, amarillo o rojo; que florecen desde la primavera hasta el otoño, se utilizan en la alimentación y la medicina popular. Esta planta posee propiedades antibacterianas, antiinflamatoria,. antisépticas. y antifúngicas,. debido. a. varias. sustancias. fitoquímicas, como la presencia de isotiocianato de bencilo en sus flores y hojas 8, 9.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Como registra la literatura, estudios fitoquímicos han demostrado la presencia de ácidos grasos (ácido erúcico, ácido oleico y linoleico), isotiocianato de bencilo, glucosinolatos y flavonoides (isoquercitrin, quercetina y kaempferol) en las hojas de Tropaeolum majus L. Asimismo, posee en todas sus partes un glucósido sulfurado, la glicotropeolina, que por acción de la mirosina, una enzima contenida en la misma planta que se libera al partirla o triturarla, produce entre otras sustancias un aceite esencial azufrado con potente acción antibiótica 10. En el 2018 Chirinos J y Chota L. en su tesis titulada Efecto antibacteriano in vitro. evaluaron la concentración mínima inhibitoria (CMI) y concentración. M. 25175,. IC. A. del extracto de Tropaeolum majus L. en cepas de Streptococcus mutans ATCC. Q UI. mínima bactericida (CMB) siendo de 8,75% y 17,5% (v/v) respectivamente.. BI O. Concluyendo que presenta efecto antibacteriano in vitro sobre cepas de Streptococcus mutans11.. Y. La presente investigación nace de la problemática que se ha convertido la caries. AC I. A. dental, y según la Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que el 60% 90% de los escolares y casi el 100% de los adultos tienen caries dental en todo el. FA RM. mundo. El Perú es uno de los países en vías de desarrollo de Latinoamérica que tiene la más alta incidencia de caries una enfermedad dental que afecta, según el. DE. último estudio epidemiológico desarrollado por el ministerio de salud (MINSA), la. CA. prevalencia de caries dental a nivel nacional fue de 90,4%, por lo que es necesario. IO TE. un abordaje integral del problema, aplicando medidas no solo farmacológicas sino naturales, eficaces de promoción en la prevención de la salud bucal, como la. BL. aplicación de los extractos de plantas medicinales; razón del presente estudio que. BI. trata del desarrollo de un enjuague bucal de extracto de Tropaeolum majus L. con actividad antibacteriana in vitro en cepas de Streptococcus mutans, con la finalidad de contar con un enjuague bucal de extracto natural, que nos permita desarrollar una alternativa complementaria al tratamiento y prevención de la caries dental12.. PROBLEMA ¿Tendrá actividad antibacteriana in vitro el enjuague bucal desarrollado a base del extracto de flores de Tropaeolum majus L. en cepas de Streptococcus mutans?. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. HIPÓTESIS El enjuague bucal desarrollado a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L. presenta actividad antibacteriana in vitro en cepas de Streptococcus mutans.. OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL . Desarrollar un enjuague bucal a base del extracto de flores de Tropaeolum. IC. A. majus L. con actividad antibacteriana in vitro en cepas de Streptococcus. Q UI. M. mutans.. Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del enjuague bucal de flores de. Y. . BI O. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. Evaluar la calidad fisicoquímica, microbiológica y de estabilidad del enjuague. AC I. . A. Tropaeolum majus L. en cepas de Streptococcus mutans.. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA RM. bucal de flores de Tropaeolum majus L.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.- MATERIALES Y MÉTODO. 1. MATERIALES. 1.1 Material vegetal: Flores de Tropaeolum majus L. ‟mastuerzo” que se recolectaron de la provincia de Otuzco, región La Libertad a una altitud de 2 641 m.s.n.m.. A. 1.2 Material microbiológico:. BI O. Q UI. laboratorio microbiológico GenLab del Perú SAC.. M. IC. Cepas estandarizadas de Streptococcus mutans ATCC 25175, obtenida del. A. Equipos e instrumentos. Estufa MEMMERT TYP U-40. . Balanza analítica OHAUS GA200. . Balanza común OHAUS. . Percolador de vidrio PYREX. . Picnómetro ISOLAB. . Phmeter METROHM 691. . FA RM. DE. CA. Refrigeradora marca SAMSUNG Baño Maria MERMMERT W-270. BI. BL. . AC I. . IO TE. 1.3.1. Y. 1.3 Material de laboratorio, equipos e instrumentación. 1.3.2. Material químico. . Alcohol de 96º G.L. . Agua destilada. . Excipientes de uso generalizado para la forma cosmética.. 1.3.3. Medios de cultivo -. Agar Tripticasa Soya. -. Agar Saboraud. -. Agar Mac Conkey. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -. Agar Manitol salado. -. Caldo Tioglicolato. -. Caldo infusión cerebro corazón (BHI). -. Agar sangre. 2. MÉTODO15, 16, 17, 18, 19 2.1 Recolección de la muestra15. A. Se recolectarón flores de Tropaeolum majus L. “mastuerzo” de la provincia de. Q UI. M. IC. Otuzco, región La Libertad.. La recolección de la especie se realizó por el método convencional o clásico de. BI O. herborización, seleccionando el material vegetal13.. A. Y. 2.2 Identificación taxonómica15. AC I. Se llevó un ejemplar completo de la planta de Tropaeolum majus L. al. FA RM. Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para la identificación taxonómica según el sistema filogénico de la especie,. DE. asignándole el código de registro: 59236. (Ver anexo 6).. IO TE. CA. 2.3 Preparación de la muestra13,14. BI. BL. 2.3.1. 2.3.2. Selección de la muestra: Se seleccionaron las flores frescas en buen. estado, descartando toda parte de la droga que no reúna las condiciones necesarias para su utilización.. Lavado de la droga: Se procedió a lavar el material con agua a chorro y luego agua destilada.. 2.3.3. Desecación: Una vez lavadas las flores seleccionadas, se colocaron en bolsas de papel Kraft en un lugar fresco, seco y bajo sombra. Luego a estufa a 37 ºC por 24 horas.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.4. Molienda y tamizado: Una vez desecadas las flores, se procedió a su molienda y pulverizado, se tamizó hasta tamaño partícula 5mm, siendo almacenados adecuadamente en un lugar libre de humedad, sin exposición directa a la luz, hasta su posterior utilización.. 2.4 Preparación del extracto fluido de flores de Tropaeolum majus L. (mastuerzo) por el método de Miranda y Cuellar15.. A. Se pesaron 70g de droga seca y triturada (flores), siendo esto posteriormente. M. IC. humectado con cantidad suficiente de etanol 70° GL. Se colocó la droga. Q UI. humectada en el equipo de percolación con cantidad suficiente de etanol de 70° GL dejándose macerar por un periodo de 24 a 48 h.. BI O. Transcurrido el tiempo, se abrió la llave inferior permitiendo salir el. Y. menstruo a la velocidad de 15 gotas por minuto (velocidad intermedia),. AC I. A. restituyendo con menstruo el volumen de salida por la parte superior del lixiviador. Se recogió unos 50 mL de extracto fluido (75%), guardándose en. FA RM. frasco ámbar. Posteriormente se percoló hasta que el ensayo de tricloruro férrico realizado a unas alícuotas del percolado resulte negativo, se continúa. DE. el proceso pasando la cantidad de menstruo necesaria para agotar la droga. La segunda fracción del lixiviado se concentró usando el rotavapor hasta un. CA. volumen menor o igual a 20 mL (25%) de extracto fluido y que reunido con. IO TE. la primera fracción separada completaron los 70 mL; un volumen del extracto concentrado se llevó a sequedad para determinar los mg. de. BL. extracto seco/ml de extracto.. Midiéndose también su densidad con el. BI. picnómetro. El extracto fue dejado en reposo a temperatura ambiente para su posterior utilización.. 2.5 Identificación fitoquímica preliminar16, 17. La identificación fitoquímica del extracto fluido, se realizó mediante reacciones de coloración y precipitación, destinados a determinar la presencia de metabolitos secundarios: Flavonoides (Shinoda), compuestos fenólicos. (cloruro. férrico),. alcaloides. (Dragendorff),. quinonas. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. (Borntranger), antocianinas (Rosemhein), taninos (gelatina), terpenos y esteroides (Lieberman - Burchard), aminoácidos (ninhidrina) y azúcares reductores (Fehling) presentes en el extracto.. 2.5.1. Identificación de alcaloides. Reacción de Dragendorf. Se evaporó una pequeña muestra del extracto en un baño de agua y el residuo se redisuelve en un 1 mL de ácido clorhídrico al 1%. Se añadió III gotas del reactivo de. IC. A. Dragendorff, si existe: opalescencia (+), turbidez definida (+++),. Identificación de flavonoides.. BI O. 2.5.2. Q UI. M. precipitado (+++).. Reacción de Shinoda. Se midieron X gotas del extracto, luego se. Y. llevó a sequedad, se redisolvió en 1 mL de metanol y se trasvasó a. 2.5.3. FA RM. gotas de HClcc.. AC I. A. un tubo de ensayo, se agregó limadura de magnesio metálico más II. Identificación de compuestos fenólicos.. DE. Reacción de tricloruro férrico. Se midieron X gotas del extracto. CA. en un tubo de ensayo, luego se llevó a sequedad, se redisolvió en 1. IO TE. mL de metanol y se añadió II gotas de tricloruro férrico al 5% en etanol. Dando ensayo positivo cuando: Desarrollo de una coloración. BL. rojo-vino: compuestos fenólicos en general.. BI. 2.5.4. Identificación de antocianidinas.. Reacción de Rosenhein. Se midieron XX gotas del extracto y se llevó a sequedad; se redisolvió en X gotas de solución de ácido clorhídrico 2N/1-propanol, se transvasó a un tubo de ensayo y se llevó a ebullición de 15-30 minutos en baño maría.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.5. Identificación de quinonas. Reacción de Bortranger. Se midieron V gotas del extracto y se llevó a sequedad. Se agregó 0,5 – 1 mL de cloroformo; luego se adicionó 1 mL de NaOH al 5%. Se agitó, mezclando las fases y se dejó en reposo hasta su ulterior separación. Si la fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosado o rojo, el ensayo será positivo.. 2.5.6. Identificación de aminoácidos.. A. Reacción de ninhidrina. Se midieron V gotas del extracto y se llevó. M. IC. a sequedad. Se agregó 2 mL de ninhidrina; Este ensayo se considera. Identificación de taninos.. BI O. 2.5.7. Q UI. positivo cuando desarrolla un color azul violáceo.. Y. Reacción con gelatina al 1%. Se midieron XX gotas del extracto. AC I. A. en un tubo de ensayo y luego se añadió I gota de solución reactiva de gelatina al 1%. De esta forma precipitan todos los taninos e incluso. FA RM. los pseudotaninosa altas concentraciones. Identificación de terpenos/esteroides.. DE. 2.5.8. Reacción de Lieberman - Burchard. Se midieron X gotas del. CA. extracto, se llevó a sequedad y se añadió X gotas de anhidrido. IO TE. acético, XX gotas de ácido acético y luego I – II gotas de ácido. BL. sulfúrico concentrado. Identificación de azúcares reductores. BI. 2.5.9. Ensayo de Fehling. Permite reconocer en el extracto etanólico la presencia de azucares reductores. Para ello, si la alícuota del extracto o se encontrase en agua, deberá evaporarse el solvente en baño de agua y el residuo redisolverse en 1 a 2 mL de agua. Se adicionaron 2 mL del reactivo y se calentó en baño de agua de 5 a 10 min. El ensayo se consideró positivo si la solución se colorea de rojo o aparecerse precipitado rojo.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6 Activación de la cepa bacteriana: Streptococcus mutans ATCC 25175.. El cultivo puro de Streptococcus mutans ATCC 25175, fue reactivado en 10 mL de caldo infusión cerebro corazón (BHI) se incubó a 37ºC por 24 - 48 horas en condiciones de anaerobiosis. Luego se sembró por estría en agar sangre de carnero al 5% en condiciones de anaerobiosis por 24 - 48 horas.. Preparación del inóculo. A. Con una asa bacteriológica se tomó de las colonias de Streptococcus mutans y. IC. se resuspendieron en un tubo de 5 mL de solución salina al 0,85% de NaCl. %.. M. Se agitó bien, posteriormente se ajustó a una escala de turbidez de 0,5 Mc. Q UI. Farland (108 UFC/mL). La suspensión se diluyó 1:100 con caldo o salino. Y. BI O. (106UFC/mL). El inoculo final fue de 5×105 UFC/ mL.. AC I. A. 2.7 Preparación del enjuague bucal a base del extracto de Tropaeolum majus L.. 2.7.1. Composición del enjuague bucal. Extracto de Tropaeolum majus L. a concentraciones de 0,5%; 1% y. DE. . FA RM. “mastuerzo”18.. Los excipientes utilizados de uso generalizado para esta forma. IO TE. . CA. 1,5%.. Estudio de compatibilidad. BI. 2.7.2. BL. cosmética.. Se enfrentó cada una de las materias primas con el extracto de Tropaeolum majus L. “mastuerzo” y se evaluó la compatibilidad de los mismos.. 2.7.3. Formulación del enjuague bucal a base de Tropaeolum majus (Mastuerzo)19.. Para la formulación del enjuague bucal se procedió de acuerdo a lo establecido por Muñoz (2000). Dentro de la formulación se consideró las materias primas más importantes: un tensioactivo o detergente (lauril éter. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sulfato de sodio), sustancias humectantes (sorbitol y glicerina), un saborizante (sabor menta), y el principio activo (extracto fluido de mastuerzo). Las concentraciones utilizadas de cada materia prima están dentro de los rangos sugeridos por la bibliografía (Muñoz, 2000). Cada fórmula unitaria se hizo a una presentación de 30 mL. (Ver Anexo 2). 2.7.4. Elaboración del enjuague bucal.. A. Se procedió a medir todos los ingredientes de la fórmula del enjuague bucal.. IC. Seguidamente se mezcló la glicerina junto con el alcohol, lauril éter sulfato. Q UI. M. de sodio y el sorbitol agitándose continuamente de forma moderada durante 10 minutos y, luego se agregó el extracto de Tropaeolum majus L y esencia. BI O. de menta; así se completó la formulación con el resto del disolvente agua. Y. hasta alcanzar el volumen total especificado en la fórmula. Se realizó. A. también un enjuague bucal control sin extracto de Tropaeolum majus L.. AC I. Posteriormente, se procedió al envasado y etiquetado del enjuague bucal en. FA RM. un frasco, dejándolo reposar por 24 horas, hasta que desaparezca la espuma formada durante el proceso de manufactura.. DE. 2.8 Determinación de los parámetros de calidad.. CA. Se determinaron los parámetros de control de calidad a las muestras por igual.. IO TE. Los parámetros de calidad que fueron evaluados son: organolépticos,. BL. fisicoquímicos, microbiológicos y de estabilidad. Análisis organoléptico20, 21.. BI. 2.8.1. Para ello se evaluaron los parámetros como: aspecto olor, color y sabor.. 20.  Aspecto. Procedimiento Se procedió a observar visualmente las características de la muestra, verificando si existen algunas modificaciones macroscópicas, luego se anotaron los resultados.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las muestras se clasificaron según los siguientes criterios:  Normal, sin alteración.  Levemente homogéneo.  Heterogéneo..  Olor. 20. Procedimiento. IC. del olfato, luego se anotaron los resultados.. A. Se percibió el olor de cada una de las muestras directamente a través. M. Las muestras se clasificaron según los siguientes criterios:. Q UI.  Agradable. BI O.  Ligeramente agradable. 20. FA RM. Procedimiento. AC I.  Color. A. Y.  Desagradable. Se colocó la muestra del enjuague bucal en un tubo de ensayo y se comparó la coloración e intensidad de color, los tubos se colocaron. DE. sobre una base de color blanca y otra negra. La fuente de luz. IO TE. CA. empleada fue luz blanca y natural. Luego se anotaron los resultados.. Las muestras se clasificaron según los siguientes criterios:. BI. BL.  Normal, sin alteración  Levemente modificada  Modificada.  Sabor. 20. Procedimiento Se percibió el sabor de la muestra directamente a través del paladar. Luego se anotaron los resultados.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las muestras se clasificaron según los siguientes criterios:  Agradable  Ligeramente agradable  Desagradable. Análisis fisicoquímico21. 2.8.2. IC. A. Método: Potenciométrico. M. En este método la determinación de pH se realizó a 25 °C, medida. Q UI. por la diferencia de potencial entre dos electrodos inmersos en la. BI O. muestra en estudio, utilizando un potenciómetro digital.. Y. Procedimiento:. AC I. A. Para este ensayo se colocaron las muestras en un vaso de precipitación de 50 mL, agitando con una varilla de vidrio para. FA RM. homogenizar. Luego se introdujeron los electrodos limpios del pHmetro previamente calibrado con la solución buffer y se tomaron. DE. inmediatamente las lecturas a cada muestra se le tomaron 3. CA. determinaciones de pH, acompañando de una agitación moderada y. IO TE. constante. Luego se anotaron los resultados.. BI. BL. 2.8.3. Estudios de estabilidad preliminar28.. Esta prueba también es conocida como prueba de selección, estabilidad acelerada o de corto plazo, tiene como objetivo auxiliar y orientar en la elección de las formulaciones.. 2.8.3.1. Acelerada El enjuague bucal se distribuyó en 3 muestras a 4ºC en refrigeración con control de termómetro y 3 muestras a 40ºC en estufa con control de termómetro. Luego de 24 horas se procedió a realizar el primer control; para observar signos. de. inestabilidad. (precipitación,. decoloración,. turbidez y características organolépticas.) 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las determinaciones se realizaron a un tiempo de 0, 7 y 15 días.. 2.8.3.2. En Estantería Se colocaron 3 muestras en anaquel; para observar signos de inestabilidad (precipitación, decoloración, turbidez y características organolépticas.), las cuales fueron evaluadas. A. a partir de un tiempo de 0, 7 y 15 días.. Q UI. M. IC. Análisis microbiológico22, 23.. 2.8.4. BI O. El Bacteriological Analytical Manual (BAM), indica una serie de recomendaciones para la manipulación de las muestras de productos. Toma de muestra. AC I. . A. Y. cosméticos que van a ser sometidos a un análisis microbiológico.. FA RM. Se desinfectó la superficie y la boca de cada muestra con etanol al 70%, luego se procedió a secar el envase con una gasa estéril. Para esta determinación se utilizaron 10 mL de la muestra colocándola. Plan de muestreo. IO TE. . CA. DE. luego en un frasco estéril con tapa rosca.. Preparación de la muestra. BI. BL. Una vez que se procede a tomar la muestra esta se debe homogenizar, agitando el frasco estéril. Para la incorporación de la muestra, agregando 90 mL de la solución salina peptonada, homogenizando la dilución, agitando manualmente 25 veces en 7 segundos con movimientos ascendentes y descendentes formando un ángulo de abertura aproximado de 60º entre brazo y antebrazo, obteniendo así una dilución (1:10). El procedimiento se realizó por triplicado para las diferentes concentraciones del enjuague bucal.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.8.4.1. Detección. e. identificación. de. microorganismos. específicos22,24 Se determinaron los siguientes microorganismos según los Criterios de Aceptación para la Calidad Microbiológica de Formas Farmacéuticas no Estériles (USP, Farmacopea de los Estados Unidos (USP 35)). . Aerobios mesófilos viables (ufc /g o ml) medio de cultivo: Agar Tripticasa Soya (TSA).. A. Hongos y levaduras (ufc /g o ml) medio de cultivo: Agar. IC. . Q UI. M. Saboraud Microorganísmos específicos como:. Escherichia coli spp (ufc /g o ml) medio de cultivo: Agar. BI O. . A. Salmonella spp (ufc /g o ml) medio de cultivo: Agar Xilosa,. AC I. . Y. Mac CONKEY.. Lisina, Desoxicolato (XLD). Staphylococcus aureus (ufc /g o ml) medio de cultivo: Agar. FA RM. . Manitol salado.. Pseudomona auroginosa (ufc /g o ml) medio de cultivo:. DE. . CA. Agar Cetrimide.. IO TE. Procedimiento. BL. Se pipeteó 1 mL de la dilución y se sembró por triplicado en la placa. BI. petri previamente identificada; inmediatamente se mezcló la muestra diluida y el agar mediante agitación manual suave (movimientos circulares), durante un lapso igual o superior a un minuto, evitando mojar los bordes de la placa; se dejó enfriar sobre una superficie plana y horizontal. Se llevó a incubación y al cabo de 24 horas se leyeron las placas y posteriormente se anotaron los resultados.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Lectura e interpretación de los resultados Transcurrido el tiempo de incubación, para realizar el contaje, se escogieron las placas que presentaron entre 30 y 300 colonias. El cálculo del valor promedio del número de unidades formadoras de colonias por gramo de muestra se efectuaron multiplicando el número de colonias contadas en cada dilución de las placas seleccionadas (valor C), por el factor de dilución correspondiente (valor D).. Determinación de. la sensibilidad o resistencia. BI O. 2.8.4.2. Q UI. M. IC. A. N=Cx D. Y. bacteriana20, 21. AC I. A. Difusión de discos antibacterianos. FA RM. Se prepararon las placas petri con medio Müller Hilton, sobre las cuales se sembró la bacteria Streptococcus mutans, con. DE. hisopo estéril embebido en el cultivo.. CA. Luego se prepararon los discos de papel de filtro estériles, los. BI. BL. IO TE. cuales fueron sumergidos por un periodo de una hora en las soluciones de 0,5%; 1% y 1,5% del enjuague bucal: Enjuague bucal a base de Tropaeolum majus L. (problema) y enjuague. bucal sin Tropaeolum majus L. Posteriormente, con una aguja estéril se colocaron sobre los cultivos de Streptococcus mutans en las placas petri previamente preparadas. Se llevaron a incubar en cámara de anaerobiosis a una temperatura de 37º C durante 24 horas. Después de las 24 horas se procedió a la lectura de los halos de inhibición de crecimiento de Streptococcus mutans.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Escala de Duraffourd Escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de inhibición. . Nula (-): para un diámetro inferior a 8 mm.. . Sensibilidad límite (sensible = +): para un diámetro comprendido entre 8 a 14 mm.. . Medio (muy sensible = ++): para un diámetro entre 14 y. Sumamente sensible (+++): para un diámetro superior a 20. IC. . A. 20 mm.. BI O. Q UI. M. mm.. A. Y. 3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO. AC I. Los resultados obtenidos fueron procesados empleando el programa SPSS, versión. FA RM. 22.0, se realizó el Análisis de Varianza (ANOVA) con un nivel de significancia del 0,05%; para evaluar el efecto antibacteriano in vitro de la formulación del enjuague. BI. BL. IO TE. CA. DE. bucal de extracto de flores de Tropaeolum majus L.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Tabla 1. Metabolitos secundarios del extracto fluido de flores de Tropaeolum majus. METABOLITO. ENSAYOS. Compuestos. Cloruro. fenólicos. férrico. Flavonoides. Shinoda. +++. Antocianidinas. Rosenheim. ++. Alcaloides. Dragendorff. +++. Quinonas. Borntranger. +. Triterpenos y/o. Lieberman. esteroides. Burchard. Taninos. Gelatina 1%. Aminoácidos. Ninhidrina. +. Azúcares. DE. L. procedente de la provincia de Otuzco - región La Libertad.. RESULTADOS. ++. Coloración verde. ++. petróleo.. Sudan. -. A. IC M Q UI. BI O. A AC I. FA RM. IO TE. Aceites y Grasas. Fehling. CA. Reductores. -. Coloración carmelita Coloración rojiza. Y. -. OBSERVACIONES. Precipitado Halo rojizo. No hay cambio de color No hay presencia de precipitado Coloración azul violáceo Presencia de precipitado. No hay cambio de color. BI. BL. Leyenda: +++ Alta ++ Moderado + Bajo - Ausencia. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Control de calidad organoléptico del enjuague bucal a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L.. ENJUAGUE BUCAL CARACTERISTICAS. 0,5 %. ORGANOLÉPTICAS. 1%. 1,5%. ATRIBUTOS. COLOR. Normal, sin. alteración. alteración. alteración. Agradable. Agradable. Normal, sin. Normal, sin. Normal, sin. alteración. alteración. alteración. IC. M. Agradable. Agradable. Agradable. Agradable. FA RM. AC I. A. Y. SABOR. A. Normal, sin. Q UI. OLOR. Normal, sin. BI O. ASPECTO. Tabla 3. Resultado del estudio de compatibilidad de los excipientes del enjuague. IO TE. CA. DE. bucal a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L.. Características. pH. Organolépticas. BL. Mezclas. 7 días. 15 días. 6, 50. 6,55. 6,50. No se aprecian cambios. Extracto + glicerina. 6,48. 6,51. 6,51. No se aprecian cambios. Extracto + sorbitol. 5,10. 5,10. 5,11. No se aprecian cambios. Extracto + alcohol 96º. 5,79. 5,66. 5,80. No se aprecian cambios. 6,50. 6,49. 5,53. No se aprecian cambios. BI. 0 días. Extracto + lauril éter sulfato de sodio. Extracto + esencia de menta. 0 días. 7 días. 15 días. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 4. Análisis de varianza del estudio de compatibilidad de los excipientes del enjuague bucal a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L.. Origen de las. Suma de. variaciones. cuadrados. Grados Promedio de. F. Probabilidad. para F. 0,0009038 0,0022281. 4,8680866. 12. 0,4056738. 4,869894. 14. 0,99777478. 3,88529383. IC. A. 2. A. Y. BI O. Q UI. Total. crítico. M. grupos. de los. libertad cuadrados. Entre grupos 0,0018077 Dentro de los. Valor. AC I. Tabla 5. Control fisicoquímico y características organolépticas del enjuague bucal a. CA. DE. FA RM. base de extracto de flores de Tropaeolum majus L.. Muestra. 7 días. 15 días. 6,55. 6,52. 6,50. No se aprecian cambios. 1,0%. 6,50. 6,48. 6,47. No se aprecian cambios. 1,5 %. 6,35. 6,36. 6,35. No se aprecian cambios. IO TE. BI. Bucal de. Organolépticas. 0 días. 0,5%. BL. Enjuague. Características. pH. 0 días. 7 días. 15 días. Tropaeolum majus L.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 6. Análisis de varianza del control fisicoquímico del enjuague bucal a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L.. Entre grupos. cuadrado. de. s. libertad. 0,0002333. 2. 0,000116. 0,02565. 3. 0,00855. 0,025883. 5. Dentro de los. Probabilida. F. cuadrado. d. s 0,013645. 0,98650831. Valor crítico para F 9,552094. AC I. A. Y. BI O. Q UI. M. grupos Total. de los. A. variaciones. Grados. IC. Origen de las. Promedio. Suma de. FA RM. Tabla 7. Ensayos de estabilidad del enjuague bucal a base de extracto de flores de. IO TE. CA. DE. Tropaeolum majus L. en relación a la temperatura.. BI. BL. Temperatura. Enjuague bucal Tropaeolum majus L.. Temperatura. Estufa. Refrigerador. 40ºC. 4ºC. (0 a 15 días). (0 a 15 días). No se aprecian. No se aprecian. No se aprecian. cambios*. cambios*. cambios*. ambiente 22± 2 ºC (0 a 15 días). * Precipitación, decoloración, turbidez y características organolépticas.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 8. Calidad microbiológica del enjuague bucal a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L. Especificación para formas Ensayo. farmacéuticas no estériles. Resultado. de uso gingival Aerobios mesófilos. <40x101 ufc/Ml. Hongos y Levaduras. <100 ufc/mL. Ausente /mL. Salmonella spp. Ausente /mL. Pseudomona aeruginosa. Ausente /mL. Escherichia coli. Ausente /mL. Staphylococcus aureus. Ausente /mL. IC M Q UI BI O. Ausente / mL Ausente / mL Ausente / mL Ausente / mL. FA RM. AC I. A. Y. viables. A. <1000 ufc/Ml. Tabla 9. Promedio del diámetro de halos de inhibición (mm) del enjuague bucal de. IO TE. CA. DE. extracto de flores de Tropaeolum majus L. y control negativo sobre S. mutans. Muestra. Diámetro (mm) de halo de inhibición Placa 2. Placa3. Promedio. 0,5%. 13. 12,5. 13,5. 13. Enjuague. 1,0%. 14. 13,8. 14,3. 14. Bucal de. 1,5%. 15.8. 15,3. 15,8. 15,6. Tropaeolum. Clorhexidina. majus L.. 0,12%. 22,5. 19,5. 22,4. 21,5. 5. 3. 7. 5. BI. BL. Placa 1. Control negativo. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. DISCUSIÓN. El Perú es un país con gran riqueza en especies vegetales, dentro de las cuales algunas han sido estudiadas, sin embargo otras aún permanecen desconocidas en el ámbito terapéutico, como es el caso de Tropaeolum majus L. Por ello se desarrolló un enjuague bucal a base de Tropaeolum majus L. como posible tratamiento antibacteriano sobre la caries dental, exclusivamente sobre Streptococcus mutans25. En esta investigación de tipo experimental se desarrolló un enjuague bucal de extracto de. A. flores de Tropaeolum majus L. (mastuerzo) con efecto antibacteriano in vitro sobre cepas. IC. de Streptococcus mutans, utilizando diferentes concentraciones de enjuague bucal a. Q UI. M. concentraciones de 0,5%; 1%; 1,5%. al análisis de los datos se encontraron los siguientes. BI O. resultados:. En la marcha fitoquímica del extracto fluido de flores de Tropaeolum majus L. (tabla 1),. Y. mostró la presencia de compuestos fenólicos, flavonoides, alcaloides, antocianidinas,. AC I. A. aminoácidos, quinonas y azúcares reductores; estos resultados coinciden con los estudios realizados por Aspauza T. que en su estudio encontró la presencia de compuestos fenólicos. FA RM. (flavonoides, taninos), antocianidinas (parte de antocianinas, un tipo de flavonoides y responsable del color rojizo de las flores), quinonas, azúcares reductores. Las quinonas. DE. pueden tener propiedades catárticas, citostáticas o bacteriostáticas. La presencia de. CA. azúcares reductores probablemente se deba a la degradación de compuestos más complejos, como los glucósidos, entre ellos el principal a destacar en Tropaeolum majus. IO TE. L. es la glicotropeolina, con efecto antibacteriano26, 27.. BL. La actividad antibacteriana de nuestro extracto se debe probablemente a la presencia de. BI. flavonoides como la quercetina, además del bencilisotiocianato. La acción antibacteriana de éstos se debe a la inhibición de la síntesis de los ácidos nucleicos, se dice que el anillo B de los flavonoides jugaría un papel en la intercalación o enlace de hidrógeno con el apilamiento de las bases de los ácidos nucleicos, lo cual inhibiría la síntesis de ADN y ARN. La actividad de la quercetina (un tipo de flavonoide) ha sido al menos parcialmente atribuido a la inhibición de la ADN girasa28, 29. Los glucosinolatos son glucósidos que contienen azufre encontrados en varias plantas, incluyendo las crucíferas (brócoli, repollo, coliflor y berros) y la familia del mastuerzo, se liberan cuando se hidrolizan, como un mecanismo de defensa contra los microorganismos. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. bacterianos. Los isotiocianatos (ITC) se consideran los compuestos más bactericidas generados de glucosinolatos y se conocen como inhibidores efectivos del crecimiento de bacterias patógenas gram-negativas y gram-positivas30. La estabilidad es parte del componente de calidad en el proceso de diseño del producto que nos permite asegurar que en un intervalo de tiempo definido y frente a condiciones ambientales a las que puede ser sometido el producto conserva sus características, propiedades organolépticas, fisicoquímicas y microbiológicas así como su funcionalidad27, 31. A. .. IC. El estudio de estabilidad de productos cosméticos proporciona información que indica el. Q UI. M. grado de estabilidad relativa de un producto en las variadas condiciones a las que pueda estar sujeto desde su fabricación hasta su expiración. Esta estabilidad es relativa, pues varía. BI O. con el tiempo y en función de factores que aceleran o retardan alteraciones en los. Y. parámetros del producto32.. AC I. A. En la tabla 2 se aprecia el control de calidad organoléptico en las muestras de enjuague bucal a las diferentes concentraciones, presentan buen aspecto, color, olor y sabor;. FA RM. cumpliendo así con las especificaciones establecidas en la guía de estabilidad de productos cosméticos33.. DE. En el estudio de preformulación se evaluó la compatibilidad de excipientes y la posibilidad. CA. de interacción entre el extracto y los componentes de la formulación del ensayo, observándose que no ocurrieron cambios en los análisis de los parámetros como pH y. IO TE. características organoléptica a los 0, 7 y 15 días (tabla 3).. BL. En la tabla 4 se muestra el análisis de varianza del estudio de compatibilidad de los. BI. excipientes del enjuague bucal a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L. se determinó un valor critico de 3,885 y una variación F de 0,002 lo que nos permite analizar que en el resultado de nuestra prueba, no existe una diferencia significativa, es decir, que los pH del extracto más los excipientes no han generado diferencias significativas en relación con el tiempo (p>0,05). Por lo tanto se concluye que hay compatibilidad entre los excipientes. En la tabla 5 se presentan los resultados de la evaluación del control fisicoquímico, valores promedios de pH, los cuales son satisfactorios debido a que se encuentran dentro de las especificaciones establecidas del producto cosmético. En este caso para las tres. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. concentraciones de enjuagues bucales se encuentran dentro de las especificaciones de pH 5,5-10,5 establecida por la Norma técnica sanitaria para cremas y enjuagues dentales cosméticas. Los enjuagues bucales pueden contener excipientes para ajustar el pH que, en la medida de lo posible, es neutro, y representaría que el pH ácido dañaría el esmalte y pH alcalino dañaría las encías33. En el análisis de varianza del control de calidad fisicoquímico (tabla 6), se determinó un valor crítico de 9,552 y una variación F de 0,014 lo que nos permite analizar que en el resultado de nuestra prueba, no existe una diferencia significativa, es decir, que los pH del. IC. A. enjuague bucal de extracto de flores de Tropaeolum majus L. a diferentes concentraciones. M. no han generado diferencias significativas en relación con el tiempo (p>0,05). Por lo. Q UI. tanto se concluye que los excipientes utilizados en el desarrollo de esta formulación,. BI O. proporcionan al producto la máxima estabilidad de acuerdo a los resultados de los ensayos. Y. realizados.. A. El estudio de estabilidad preliminar consiste en la realización de la prueba en la fase inicial. AC I. del desarrollo del producto, utilizándose diferentes formulaciones de laboratorio y con. FA RM. duración reducida. En la tabla 7 se presenta el ensayo de estabilidad a condiciones extremas de temperatura y a estantería, observando que no se aprecian alteraciones en cuanto al aspecto, color, olor, sabor,. precipitación, decoloración y turbidez de los. DE. diferentes enjuagues bucales, evitando acelerar posibles reacciones entre sus componentes. CA. y el surgimiento de señales que fueron observadas y analizadas conforme a las. IO TE. características específicas de cada tipo de producto31, 33. Los enjuagues bucales son considerados formas farmacéuticas líquidas no estériles, por. BL. ende a estos productos se le realiza controles que garanticen su calidad, y ante todo su. BI. seguridad y eficacia, estos por considerarse no estériles tiene una mayor tendencia a ser susceptibles de contaminación debido a varios factores como son la exposición al medio ambiente, el uso y conservación que se le brinde durante su tiempo de vida útil, entre otros34. En el análisis de calidad microbiológica reportado en la tabla 8, para la determinación de aerobios mesófilos viables, pertenecientes a las tres concentraciones bucales, presentan cargas bacterianas menores a 40x101 ufc//mL, estando dentro de los límites permitidos para este tipo de productos cosméticos (Especificación: <1000 ufc/mL), mostrando que los enjugues bucales cumplen con los parámetros microbiológicos establecidos por la USP,. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. observando que no hay presencia de hongos y levaduras, tampoco se detectó la presencia de los patógenos de mayor riesgo potencial: Staphylococcus aureus, pseudomona aureginosa, Salmonella, Escherichia coli 21. En la tabla 9 se evidenció los promedios de los diámetros de los halos de inhibición (mm) de acuerdo a la escala de Duraffourd para las tres concentraciones de enjuague bucal empleadas, con una tendencia a aumentar el efecto antibacteriano, en relación a la concentración del extracto. Si bien hubo un diámetro promedio mayor con la concentración de 1,5mg/mL (15,6mm) y 1% (14mm) siendo evaluados como muy sensibles en. IC. A. comparación con la de 0,5mg/mL (13mm) como sensible, las diferencias fue pequeña y. no tenía extracto de 5 mm. Considerándose estadísticamente. Q UI. grupo problema que. M. hubo más variación de diámetros con el grupo control clorhexidina de 21,5 mm que con. BI O. significativos (p<0,05). Esto comprueba que el extracto fluido de flores de Tropaeolum majus L. empleado en la formulación para el desarrollo del enjuague bucal posee actividad. Y. antibacteriana, no los otros elementos presentes en la formula; sin embargo, la formulación. AC I. A. no exhibe mejor actividad que el medicamento de referencia clorhexidina, es por ello que es uno de los productos más utilizados, en forma de enjuagatorios y geles, pero con el. FA RM. inconveniente de producir efectos tóxicos locales como: tinción de dientes, pigmentación del dorso de la lengua y con menor frecuencia, descamación de la mucosa bucal, gusto. DE. amargo o modificación gustativa, sensación de quemadura, sequedad e inflamación. CA. ocasional, su uso clínico no es muy factible debido a los diversos efectos adversos en especial por generar resistencia bacteriana; estos inconvenientes generan a la investigación. IO TE. la búsqueda de nuevas alternativas35, 36.. BL. Finalmente por los resultados obtenidos podemos afirmar que el enjuague bucal de flores. BI. de Tropaeolum majus L. desarrollado a diferentes concentraciones presenta efecto antibacteriano in vitro frente a cepas de Streptococcus mutans y podría ser una alternativa de uso para el control de la caries dental.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. CONCLUSIONES. 1. El enjuague bucal desarrollado a base de Tropaeolum majus L. tiene efecto antibacteriano in vitro sobre cepas de Streptococcus mutans.. 2. El enjuague bucal desarrollado a base de extracto de flores de Tropaeolum majus L. tiene calidad farmacéutica.. IC. A. 3. El enjuague bucal a base de Tropaeolum majus L. tiene efecto antibacteriano in. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA RM. AC I. A. Y. BI O. Q UI. M. vitro sobre Streptococcus mutans en sus tres concentraciones 0,5%; 1%; 1,5%.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. http://www.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_rticulo=15465&pident _usuario=0&pident_revista=4&fichero=04v19n03a03008pdf001.pdf&ty=75&accio n=L&origen=doymafar ma &web=www.doymafarma.com&lan=es›.2000 20. Delgado E. Efecto antibacteriano in vitro del colutorio a base de Matricaria chamomilla (Manzanilla) sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. [Tesis maestría]. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo, 2015. 21. United State Pharmacopeia 41. Farmacopea de los Estados Unidos de América. Rockville; The United States Pharmacopeial Convention. 2017; Pruebas. A. microbiológicas: 2718-2733.. IC. 22. Cruz D. Control de calidad de desodorantes bucales fabricados en un laboratorio de. Q UI. M. productos cosméticos. [Tesis bachiller]. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo, 2012.. BI O. 23. Castañeda M. Microbiología Aplicada: Manual de Laboratorio. Universidad. Y. Autónoma Metropolitana. Unidad Azcapotzal.com. España. 2003.. A. 24. Andina. Resolución 1482: Modificación de la Resolución 1418: Límites de. 2017];. Disponible. en:. https://www.controlsanitario.gob.ec/wp-. FA RM. Agosto. AC I. contenido microbiológico de productos cosméticos. [Internet]. 2012 [Citado 22 de. content/uploads/downloads/2016/12/RESOLUCION_1482.pdf 25. Araujo J, Salas R. Actividad antibacteriana de plantas. [Internet]. 2012 [Citado 22. DE. de Agosto 2017]; 1(12). Disponible en: http://www.seq.es/seq/0214-3429. CA. 26. Aspauza T. Efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus. IO TE. “Mastuerzo” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente ATCC 25923. [Tesis bachiller]. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo, 2015.. BL. 27. Aguilera M et al. Propiedades funcionales de las antocianinas. Rev BIOtecnia. BI. [Internet]. 2011 [Citado 22 de Agosto 2017]; XIII (2): 16-22 .Disponible en: https://www.researchgate.net/publication/283361581_Propiedades_funcionales_de _las_antocianinas 28. Bezada S. Evaluación del extracto hidroalcohólico de mastuerzo (Tropaeolum majus) en formulación crema para el tratamiento de la dermatomicosis causada por Trichophyton mentagrophytes en el cuy (Cavia porcellus). Rev. Per.Quim. [Internet]. 2016 [Citado: 12 setiembre 2018]; Vol 19. Disponible en: http://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/quim/article/view/12584. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.