Efecto de Beauveria bassiana sobre Podisus nigrispinus en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. CA. DE. CI EN. CI. Efecto de Beauveria bassiana sobre Podisus nigrispinus en condiciones de laboratorio TESIS 2018. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. BL. IO. TE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. BI. Autores: Br. TIRADO JIMENEZ, SARA. Asesor: Ms. C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG TRUJILLO – PERÚ 2017. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. G. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. BI. O. LO. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. Dr. Rubén César Vera Véliz. CI. VICE-RECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. TE. CA. DE. CI EN. TRUJILLO. Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa. BI. BL. IO. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. Dr. Freddy Mejía Coico. O. Dr. William Zelada Estraver. LO. G. IC. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. AS. BI. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI EN. Dra. Bertha Soledad Soriano Bernilla DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. Ms. Iván Angulo Castro DIRECTOR DE DEPARTAMENTO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. MICROBIOLOGÌA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DEL ASESOR. IC. El que suscribe: Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg asesor de la presente. tesis titulada: Efecto de Beauveria bassiana sobre Podisus nigrispinus en. LO. G. condiciones de laboratorio. BI. O. CERTIFICA:. Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. AS. correspondiente proyecto de tesis y teniendo en cuenta las orientaciones pertinentes.. CI. Que el informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las. CI EN. observaciones y sugerencias alcanzadas. Por ello, autorizo a la Bachiller Sara Tirado Jiménez para continuar con los procedimientos correspondientes. DE. según sus fines.. BI. BL. IO. TE. CA. Trujillo, 8 de enero del 2018. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. AS. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de. IC. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a su. consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada Efecto de Beauveria. G. bassiana sobre Podisus nigrispinus en condiciones de laboratorio, con el. O. LO. objetivo de obtener el título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. AS. BI. Espero que este trabajo sea de su aprobación.. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. Trujillo, 8 de enero del 2018. BI. BL. Br. Sara Tirado Jiménez. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. --------------------------------------------. LO. G. Dra. Manuela Luján Velásquez. CI. AS. BI. O. PRESIDENTA. CI EN. -------------------------------------------Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO. -----------------------------------------------Ms.C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del Jurado examinador, declaran que la presente Tesis titulado: Efecto de Beauveria bassiana sobre Podisus nigrispinus en condiciones de laboratorio, ha cumplido con los formales. y. fundamentales,. siendo. APROBADO. POR. AS. requerimientos. BI. O. LO. G. IC. UNANIMIDAD.. --------------------------------------------. AS. Dra. Manuela Luján Velásquez. DE. CI EN. CI. PRESIDENTA. --------------------------------------------. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. -----------------------------------------------Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AS. A ASHEM TODOPODEROSO. LO. G. IC. por encaminarme a realizar mis metas , por su infinito amor y porque a él le debo todo lo que tengo y lo que soy.. A MIS PADRES. CI EN. CI. AS. BI. O. Angélica, por su amistad cuidado, apoyo incondicional en cada meta de mi vida y por ser un ejemplo de persona a seguir para mí. Augusto. por nunca perder la confianza en mí y apoyarme siempre.. A PAÚL. CA. DE. por su perseverancia, cuidado y apoyo en la realización de mis proyectos profesionales y no profesionales. . .. TE. A MI FAMILIA. BI. BL. IO. por siempre estar cerca de mi cuando más los necesito, por alegrarme todos los días y estar conmigo siempre.. A MIS COLEGAS DE LA UNIVERSIDAD, por los momentos compartidos.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. AS. Al maestro y amigo Juan Wilson Krugg, profesor – Asociado del Departamento de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de. IC. Trujillo, por su apoyo incondicional, comprensión y orientaciones de mis. LO. G. errores y aciertos antes, durante y después de la ejecución del presente. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. trabajo de investigación.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se evaluó el efecto de Beauveria bassiana sobre ninfas de Podisus. AS. nigrispinus en condiciones de laboratorio. Se realizó la recolección de. IC. especímenes de Podisus nigrispinus y su posterior crianza masiva para la. G. obtención de ninfas de estadio III, y para la reactivación del hongo B.. LO. bassiana, se le propagó en agar papa sacarosa (APS). Se realizaron dos. O. tratamientos con tres repeticiones cada uno con 15 ninfas de P. nigrispinus en. BI. cada tratamiento; al primer tratamiento se aplicó Tween 80 al 0.1% y al. AS. segundo se aplicó una suspensión de B. bassiana a la concentración de 107. CI. con/mL. Luego de la inoculación con B. bassiana, los especímenes de. CI EN. Podisus nigrispinus presentaron síntomas como lentitud en movimiento, alteración en el color del tegumento, falta de apetito, ecdisis incompleta, momificación y muerte, presentando las ninfas inoculadas una supervivencia. DE. de 28%, colocándose los especímenes muertos en cámara húmeda hasta la. CA. aparición de micelio, el cuál fue aislado en agar papa sacarosa (APS) con antibiótico para su posterior observación microscópica e identificación. Se. TE. concluye que Beauveria bassiana tiene efecto patógeno sobre las ninfas de. BI. BL. IO. Podisus nigrispinus.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ABSTRACT. The effect of Beauveria bassiana on nymphs of Podisus nigrispinus was. IC. evaluated under laboratory conditions. The collection of specimens of Podisus. LO. G. nigrispinus and its later mass rearing was performed to obtain stage III nymphs, and for the reactivation of the fungus B. bassiana, it was propagated. BI. O. in potato sucrose agar (APS). Two treatments were performed with three repetitions each with 15 nymphs of P. nigrispinus in each treatment; At the first. AS. treatment Tween 80 was applied at 0.1% and at the second a suspension of. CI. B. bassiana was applied at the concentration of 107 with / mL. After. CI EN. inoculation with B. bassiana, the specimens of Podisus nigrispinus presented symptoms such as slowness in movement, alteration in the color of the. DE. tegument, lack of appetite, incomplete ecdysis, mummification and death, presenting the inoculated nymphs with a survival of 28%, placing themselves. CA. the specimens were killed in a humid chamber until the appearance of. TE. mycelium, which was isolated on potato sucrose agar (APS) with antibiotic for. IO. its subsequent microscopic observation and identification. It is concluded that. BL. Beauveria bassiana has an pathogenic effect on the nymphs of Podisus. BI. nigrispinus.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ............... ……ii. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ....................... iii. IC. DEL ASESOR ........................................................................................................ iv. G. PRESENTACIÓN .................................................................................................... v. LO. MIEMBROS DEL JURADO .................................................................................... vi. O. APROBACIÓN ...................................................................................................... vii. BI. DEDICATORIA ..................................................................................................... viii. AS. AGRADECIMIENTOS ............................................................................................ ix. CI. RESUMEN .............................................................................................................. x. CI EN. ASTRACT............................................................................................................... xi ÍNDICE .................................................................................................................. xii INTRODUCCIÓN ........................................................................................01. II.. MATERIAL Y MÉTODOS ...........................................................................05. III.. RESULTADOS ...........................................................................................10. IV.. DISCUSIÓN ................................................................................................14. V.. CONCLUSIONES .......................................................................................18. CA. TE. IO. RECOMENDACIONES ...............................................................................19. BL. VI.. DE. I.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...........................................................20. BI. VIl.. VIll.. ANEXOS .....................................................................................................22. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCION. En el desarrollo del control biológico, de los insectos plaga mediante el uso de sus enemigos naturales1, los hongos entomopatógenos, son los primeros. AS. agentes biológicos en ser utilizados para el control de plagas2, porque, son capaces de producir enfermedad y muerte de los insectos3. Estos. IC. microorganismos infectan a los artrópodos directamente, a través de la. G. penetración de la cutícula y ejercen múltiples mecanismos de acción,. LO. confiriéndoles una alta capacidad para evitar que el hospedero desarrolle. O. resistencia4.. BI. Sin embargo, afirman que para su utilización como control biológico es necesario prácticas agrícolas en donde se manipule el ambiente para. AS. beneficiar las poblaciones de entomopatógenos, donde los conocimientos de. CI. los aspectos ecológicos del hongo son necesarios, tales como la humedad relativa, temperatura, patogenicidad, virulencia y hospederos a los que infecta. CI EN. activamente4. Entre los aspectos básicos se encuentran el aislamiento del hongo, cultivo, pruebas biológicas y predicción de los efectos sobre las poblaciones de plagas en el medio ambiente, así como un desempeño. DE. predecible sobre cambios de las condiciones medioambientales y una mayor eficiencia de producción5. La producción de hongos para el control de plagas. CA. implica una amplia investigación donde se involucran disciplinas como la patología, ecología, genética y fisiología, además de técnicas para la. IO. TE. producción masiva, formulación y estrategias de aplicación6. Dentro. de. este. grupo,. destacan. los. hongos. entomopatógenos,. BL. microorganismos capaces de infectar y provocar enfermedades en insectos,. BI. causándoles finalmente la muerte. Dentro de los hongos entomopatógenos destacan los géneros Beauveria, Metarhizium y Cordyceps, utilizados con gran éxito en el control de numerosas plagas en el mundo 12. Beauveria bassiana es un hongo que se produce comercialmente para ser utilizado en el control de plagas que afectan a los cultivos de interés de los 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. productores, posee la ventaja de ser un plaguicida biológico que no afecta a los organismos benéficos y no causa contaminación al ambiente. Existen experiencias de todas partes del mundo en el control exitoso de varios tipos de plagas, que causan daño y grandes pérdidas en el sector.7. AS. B. bassiana, al igual que otros hongos entomopatógenos, antes de matar a su. IC. hospedero le causa síntomas importantes como son: pérdida de sensibilidad,. falta de coordinación, letargo, inapetencia, melanización y parálisis. Con la. G. muerte del insecto, el beneficio se incrementa pues la esporulación y posterior 8. O. LO. dispersión del hongo, permite un control más allá de la aplicación.. BI. La utilización masiva de los entomopatógenos requiere aún de muchos esfuerzos. Si bien es cierto, que existen productos comerciales y la. AS. investigación ha avanzado con relación al conocimiento de la bioactividad controladora de estos microorganismos, se necesita de una mayor promoción. CI. de sus bondades para fomentar su empleo. Desde hace mucho tiempo,. CI EN. quienes fomentan los programas MIP, han creído en la utilidad de los entomopatógenos en una línea de control microbial.9,10. DE. El manejo Integrado de plagas (MIP) plantea el uso racional de métodos culturales, biológicos y químicos para el control de insectos, ácaros y otras. CA. plagas. En el MIP el control biológico es el primordial, pero se puede justificar o “integrar” el uso adecuado de productos químicos sólo cuando la densidad. TE. de la plaga es de tal magnitud que sobrepasa el umbral de daño económico y. IO. a la vez, la presencia de enemigos naturales es escasa. 11. BL. El control biológico de plagas consiste no solamente en la utilización de microorganismos naturales sino también en el empleo de insectos. BI. introducidos o manipulados para mantener la población de otro organismo plaga bajo el nivel de daño económico. Entre éstos es ampliamente conocida la utilización de parasitoides y depredadores como lo son Chrysoperla sp. Hippodamia convergens,Trichograma sp .Paratheresia , Podisus nigrispinus .. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En el caso de Podisus nigrispinus es un insecto depredador con aplicaciones potenciales en el control biológico debido a que las ninfas y adultos se aprovechan de otras plagas de insectos mediante la inyección de los contenidos de las glándulas salivales tóxicos. Este estudio identificó compuestos. no. proteínicos. con. actividad. insecticida. de. la. saliva. AS. de P. nigrispinus en Anticarsia gemmatalis . En particular, el extracto de éter a. IC. partir de P. nigrispinus saliva llevó a la mortalidad en A. gemmatalis larvas,. con una CL 50 = 2,04 l y CL 90 = 3,27 l. N, Nfracciones dimetilanilina y 1,2,5fueron. identificadas. como. componentes. del. extracto. G. trithiepane. no. que. sugiere. que. podría. ser. responsable. de. la. toxicidad. O. lo. LO. proteicos. N, N -dimetilanilina tenía una CL 50 = 136,1 nL y LC 90 = 413,8 nL,. BI. en P. nigrispinus saliva.3 Existen estudios en los que Podisus nigrispinus se muestra resistente ante la aplicación de pesticidas por lo que eso le daría un 22. AS. ventaja en la aplicación con el control químico.. CI. Las estrategias de control biológico y el control biológico en su esencia,. CI EN. surgieron a partir de la dinámica poblacional entre insectos depredadores e insectos presas que varían en el tiempo, además del hecho de que algunos. DE. depredadores son específicos en cuanto a su preferencia alimenticia.19 Aunque una de las características del control biológico es la seguridad que 20,. las. CA. ofrece en materia de protección al medio ambiente y a la salud humana. preocupaciones del impacto que este tipo de control pueda tener sobre la. TE. biodiversidad se están incrementando.21 El principal riesgo del control biológico está asociado al posible efecto que los enemigos naturales. BL. IO. introducidos tengan sobre las especies a las que no va dirigido. Como se ha expuesto anteriormente, tanto B. bassiana como P. nigrispinus. BI. son organismos que se emplean para el control de insectos plaga, siendo probable que ambos controladores se empleen en forma simultánea para controlar al mismo insecto plaga. Teniendo en cuenta que B. bassiana es un hongo entomopatógeno, antes de aplicarlo en forma conjunta con un insecto controlador biológico es necesario investigar primero si este hongo afecta a P. nigrispinus, ya que si esto ocurriera se estaría realizando un gasto innecesario 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en la aplicación del insecto ; por tal razón es que el presente trabajo se planteo como objetivo determinar el efecto de Beauveria bassiana sobre. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ninfas de Podisus nigrispinus, en condiciones de laboratorio.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y METODO. 1. MATERIAL BIOLOGICO 1.1. Cultivo puro de Beauveria bassiana proporcionado por la cátedra de Fitopatología del Departamento de Microbiología y. AS. Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo.. IC. 1.2. Especímenes en estadio ninfal III de Podisus nigrispinus provenientes de la crianza masiva en laboratorio proporcionado. G. por el laboratorio de entomología del proyecto especial. LO. Chavimochic.. O. 1.3. Especímenes en estadio larval de Spodoptera frugiperda. BI. proporcionado por el laboratorio de entomología del proyecto. AS. especial Chavimochic.. CI. 2. MÉTODO. 2.1Recolección, crianza de adultos y obtención de ninfas de nigrispinus.. CI EN. Podisus. Se obtuvo 80 especímenes en estadio ninfal III y IV proporcionados por el proyecto Chavimochic. Con los cuales se. DE. trabajó de la siguiente manera para la obtención en masa del. CA. estadio ninfal III:. Cosecha de huevos. TE. Se obtuvieron las posturas de huevos, que estuvieron dispuestas. a manera de masas perladas plateadas (maduros y fértiles) en. BI. BL. IO. las paredes de los tapers de plástico que contuvieron a las parejas de P. nigrispinus adultos, mediante el uso de un pincel N° 00 y fueron colocados en placas de plástico. Obtención de ninfas Se separaron estos huevos de Podisus nigrispinus en placas de plástico con papel toalla grueso en la base para que en un periodo de 3-5 días estos huevos eclosionen dependiendo mayormente de la temperatura ambiental, sirviendo como primer 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. alimento de las ninfas I los huevos que aún no han eclosionado y /o los huevos infértiles por lo que es necesario la realización de una cosecha por día o cada dos días dependiendo de la frecuencia de postura.. AS. Alimentación de ninfas. IC. En las placas se agregó algodones humedecidos con agua. azucarada para su succión por parte de las ninfas estadio I en. G. un periodo de 2 a 3 días aproximadamente. Para cuando se. LO. encontraron en ninfas estadio II y III ya son alimentados con las. O. larvas de Spodoptera sp. proporcionales al tamaño y cantidad. BI. de P. nigrispinus por placa en la cual el piso de papel absorbente fue cambiado según sea necesario. Al llegar a ninfa III se les. AS. traslado a tapers de plástico de ½ kg tapados con tela negra y fueron asegurados con liga hasta llegar a adultos, lo cual pasa. CI. en un tiempo aproximado de 29 a 32 días desde su eclosión, espacio. CI EN. luego se trasladaron a tapers de kilo para que tengan mayor para. copular,. ovipositar. y/o. desplazarse.. La. alimentación fue diaria con 3 a 4 larvas por taper en el cual. DE. habrá entre 8 a 12 Podisus nigrispinus adultos.. CA. 2.2. Reactivación de la actividad entomopatógena de Beauveria bassiana.. TE. A partir de un cultivo puro de Beauveria bassiana se hicieron suspensiones con Tween 80 al 0.1 %. Se seleccionaron 9 larvas. BI. BL. IO. de Spodoptera frugiperda para realizar la inoculación por. aspersión. Las larvas de Spodoptera frugiperda fueron sometidas a condiciones de cámara húmeda, que consistió en colocarlas en una lámina porta objeto ubicada dentro de una placa Petri estéril, la cual contenía agua destilada estéril. Las cámaras se incubaron a temperatura ambiente por 7 días hasta la aparición de micelio sobre la superficie de las larvas muertas. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En condiciones de esterilidad se transfirió el micelio que emergió sobre las larvas, en tubos con agar papa sacarosa (APS) y se llevaron a incubación durante 7 días a temperatura ambiente, para obtener cultivos puros activados. Se procedió a la confirmación del hongo basándose en las. IC. AS. características morfológicas macroscópicas, microscópicas. G. 2.3. Resiembra del cultivo de B. bassiana para obtención de cultivo joven.. LO. Para la resiembra de B. bassiana a partir de los cultivos puros. O. reactivados se procedió a sembrar por puntura en frascos con. BI. Agar Papa Dextrosa inclinado y luego se incubaron durante 7 a. AS. 10 días a temperatura de 25 ºC, y se obtuvo un cultivo joven. 2.4. Propagación del cultivo de B. bassiana. CI. A partir del cultivo joven de B. bassiana se sembró por. CI EN. suspensión de esporas con Tween 80 al 0.01% en frascos planos conteniendo Agar Papa Dextrosa inclinado los cuales se. DE. incubaron a 25ºC durante 7 a 10 días. 2.5. Preparación del inoculo de esporas. CA. El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de agua destilada estéril a los frascos planos con Agar Papa Dextrosa. TE. que contuvo a B. bassiana, luego se agitó moderadamente con. el asa bacteriológica en condiciones de esterilidad con el fin de. BI. BL. IO. liberar las esporas de las colonias y la suspensión resultante se colocó en un matraz estéril, donde se determinó la concentración de esporas mediante el recuento en Cámara de Neubauer. Luego, a partir de la suspensión madre, se realizaron suspensiones con Tween 80 al 0.1 % estéril hasta obtener una concentración final de 107 esporas/mL en 20 mL.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.6. Inoculación En una placa estéril se colocaron 10 ninfas III estadio de Podisus nigrispinus a las cuales se les inoculó por aspersión la suspensión estandarizada de 107 esporas/mL y, con un aspersor de 30 ml de capacidad de donde se trasladaron a un taper en. AS. donde se les siguió alimentando con Spodoptera sp. y. IC. monitoreando diariamente su evolución para observar si los. especímenes de P. nigrispinus presentaron sintomatología de. LO. G. ataque por Beauveria bassiana.. O. 2.7. Lectura. BI. Para determinar si los hongos entomopatógenos fueron los causantes de la muerte de las ninfas de Podisus nigrispinus , las. AS. ninfas muertas con síntomas de ataque fúngico fueron sometidos a condiciones de cámara húmeda. Para lograr esto se colocaron. CI. los insectos muertos en una lámina porta objeto ubicada en una. CI EN. placa de Petri estéril que contenía algodón humedecido en agua destilada estéril; las cámaras húmedas se incubaron a temperatura ambiente durante 7 días hasta la aparición de. DE. micelio sobre la superficie de los insectos muertos. Luego con el asa bacteriológica en completa esterilidad se tomó una muestra. CA. en una lámina portaobjetos con una gota de azul de lactofenol para la lectura con aumento de 10X en el microscopio, buscando. TE. estructuras correspondientes a B. bassiana.. BI. BL. IO. 2.8. Reaislamiento Se realizó la confirmación de la muestra del micelio obtenido de la cámara húmeda por observación al microscopio, se toma una nueva muestra de micelio para proceder al reaislamiento en tubos de ensayo con agar papa sacarosa(APS) inclinado estéril los. cuales. se. incubaron. a. temperatura. de. 25°C. aproximadamente durante 5 a 7 días y se obtuvo un micelio blanco algodonoso con pigmentación amarillenta en el envés.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.9. Evaluación de la actividad entomopatógena de Beauveria bassiana 2.9.1 Observación de síntomas y/o signos Después de la inoculación se evaluó diariamente la aparición de síntomas y/o signos de la infección. AS. micótica que presentaron las ninfas problema en. IC. comparación a los testigos.. Los síntomas evaluados fueron pigmentación de la carencia. de. coordinación,. movimientos. G. cutícula,. LO. erráticos y lentos, parálisis, pérdida de apetito, ecdisis. O. incompleta, muerte; para finalmente observar la. BI. aparición de micelio blanquecino sobre la exocutícula al ingresar los cadáveres en cámara húmeda y su observación. microscópica. AS. posterior. su. CI. identificación.. para. CI EN. 2.9.2 Determinación del porcentaje de supervivencia Para la determinación del porcentaje de supervivencia. DE. se empleó la siguiente fórmula.. Donde:. CA. SP = Porcentaje de Supervivencia problema NST = Número de Supervivencia de los individuos. testigo. BI. BL. IO. TE. NSP = Número de Supervivencia de los individuos. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En la tabla 1 y Fig 1. se observan los síntomas y/o signos que presentaron las ninfas III estadio de Podisus nigrispinus, siendo el síntoma más notorio el de. AS. momificación.. IC. El porcentaje de supervivencia de las ninfas III estadio de Podisus nigrispinus. frente a la concentración de 107 conidias/mL de Beauveria bassiana fue de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. 28% como se muestra en la Figura 2.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1. Síntomas y/o signos observados en ninfas III estadio de Podisus nigrispinus después de la aplicación de Beauveria bassiana en condiciones de laboratorio. Síntoma/signo. Control *. AS. Tratamientos. IC. Beauveria bassiana. Momificación. -. Alteración en el color del. -. G. -. +. LO. Pérdida de apetito. +. O. -. BI. Movimientos lentos. -. Muerte. -. Crecimiento. CI. Ecdisis incompleta micelial. -. + + + +. CI EN. sobre el insecto. AS. tegumento. ++. *:Tween 80 al 0.1%. DE. +: presencia de síntoma o signo. CA. ++: presencia más significativa del signo o síntoma. BI. BL. IO. TE. -: ausencia de síntoma o signo. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. DE. CI EN. C. D. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. A. CA. Fig. 1. Ninfa estadio III de Podisus nigrispinus: A. sin inocular (control); B. Ecdisis incompleta del estadio ninfal III de Podisus nigrispinus (nótese la. TE. coloración oscura de la momificación por parte del hongo hacia el insecto);. IO. C. Micelio de Beauveria bassiana cubriendo la superficie de Podisus. BL. nigrispinus; D. observación microscópica de Beauveria bassiana creciendo. BI. sobre tegumento de ninfas de Podisus nigrispinus. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI EN. CI. Fig. 2. Porcentaje de supervivencia de ninfas estadio III de Podisus nigrispinus inoculados con una suspensión de 107 con/ ml Beauveria. BI. BL. IO. TE. CA. DE. bassiana a los 7 días de inoculación. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN El desarrollo de la enfermedad en el insecto está dividido en tres fases: 1. Adhesión ante el tegumento, 2. Germinación del conidio, 3. Penetración por la cutícula, 4. Multiplicación del hemocele, 5. Producción de toxinas, 6. Muerte. AS. del insecto, 7. Colonización, 8. Emergencia del micelio fuera del insecto, 9.. IC. Esporulación del hongo, 10. Diseminación que generalmente resulta mucho después de la muerte del insecto se pudo evidenciar en la ejecución de los. G. diversos ensayos realizados corroborando el transcurso de la investigación. LO. realizada a nivel de laboratorio. Dentro de trabajos anteriores se ha. O. demostrado el efecto de hongos entomopatógenos frente a insectos. BI. pertenecientes a la familia de Podisus nigrispinus como lo son los chinches plaga, están dentro de los hongos con mayor eficacia se encuentran. AS. Metarhizium anisopliae y Beauveria bassiana23 ,lo cual evidenciamos en las. CI. figuras 1 y 2 y tabla 1.. CI EN. Comparando la acción entomopatógena de Beauveria bassiana sobre Podisus nigrispinus se vé que, si existe efectividad observándose un porcentaje de supervivencia del 28%, lo cual es corroborado por las diversas. DE. revisiones sobre los mecanismos de defensa de los insectos mecanismos de acción de los hongos entomopatógenos 26.. los. y las interacciones. B. bassiana inicia su proceso infectivo en los insectos. CA. entre ellos. 25. 24,. hospederos cuando las esporas viables son retenidas por contacto en la. TE. superficie del tegumento, mientras encuentran un espacio propicio para establecer la asociación patógeno-hospedero e iniciar la formación del tubo. BL. IO. germinativo.. Es entonces, cuando el hongo inicia la excreción de enzimas hidrolíticas que. BI. van degradando la cutícula y proporcionando a su vez nutrientes al hongo. 13. Estas enzimas además de degradar la cutícula del insecto, coadyuvan con el proceso de penetración por presión mecánica iniciado por el apresorio, el cual es una estructura especializada formada en el tubo germinativo. 14 El tubo germinativo rastrea y reconoce la superficie del insecto para la localización de sitios receptores, habilitando a la hifa para la penetración de la cutícula.15 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El apresorio además de servir de anclaje de la espora, ejerce una presión hacia el interior del insecto.16 Una vez dentro, el hongo desarrolla cuerpos hifales, los cuales se van diseminando a través del hemocele e invaden diversos tejidos musculares, cuerpos grasos, tubos de Malpighi y hemocitos,. AS. ocasionando la muerte del insecto, y una vez agotados muchos de los. IC. nutrientes, el hongo inicia un crecimiento micelial e invade todos los órganos. del hospedero. Finalmente, las hifas penetran la cutícula desde el interior del. G. insecto y emergen a la superficie, donde en condiciones ambientales. LO. apropiadas inician la formación de nuevas esporas.17,18 lo cual se evidenció. O. en Podisus nigrispinus ya que presentó los síntomas y son observados en las. BI. figuras 1 y 2, siendo su porcentaje de supervivencia de 28%.. AS. Actualmente se considera que la cutícula tiene una función más activa, dado que la epidermis secreta moléculas que actúan de manera específica. CI. inhibiendo los mecanismos de infección de los hongos entomopatógenos. Se. CI EN. ha reportado que en la cutícula se da la producción de proteasas, peptidasas antifúngicas e inhibidores de proteasas fúngicas que podrían tener un papel importante durante la infección, además de la presencia de ácidos grasos de. DE. cadena corta y lípidos de cutícula que inhiben la germinación de las esporas de los hongos, lo cual es superado dependiendo de la patogenicidad e. CA. invasibilidad que pueda tener el hongo entomopatógeno. En este caso Beauveria bassiana presenta una alta patogenicidad y nivel de invasión sobre. TE. Podisus nigrispinus lo cual se evidencia en un porcentaje de supervivencia muy por debajo del 50 % (28% de porcentaje de supervivencia) lo cual los 27. BL. IO. haría incompatibles para una aplicación conjunta en campo.. Por su parte celular, está compuesto por los hemocitos que circulan por el. BI. hemocele capaces de reconocer los elementos extraños mediante receptores tipo Toll que activan la producción de varios péptidos antimicrobianos. 28.. Cuando la concentración de microorganismos patógenos es baja, la fagocitosis es el principal mecanismo para eliminar a los invasores. A concentraciones mayores, se forman agregados denominados nódulos. Lo cual nos daría la respuesta a la resistencia del efecto entomopatógeno de 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Beauveria bassiana en Podisus nigrispinus del 28% de supervivencia que se obtuvo en los ensayos y son observados en la fig 2. Existen evidencias que indican que las proPO (pro–fenoloxidasas) juegan un papel muy importante en este sistema, las cuales son enzimas clave para la. AS. síntesis de melanina, polímero que suele depositarse sobre los patógenos,. IC. formando los encapsulados que en el caso de superar esta barrera es un. signo de infección la pigmentación obscura en el insecto 29 y es observado en. G. la tabla 1. En Drosophila, dicha reacción es regulada mediante una cascada. LO. de señales que involucra serin proteasas inducibles (MP1 y MP2) y su. O. inhibidor (serpin Spn27A), las primeras actúan como activadores de la. BI. fenoloxidasa y el segundo regula la actividad enzimática. MP1 activa la melanización en respuesta a infecciones provocadas, por hongos y bacterias,. AS. mientras que MP2 está principalmente involucrada en la respuesta a. CI. infecciones de origen fúngico 30.. CI EN. Como parte de la constante lucha por la supervivencia, algunos insectos son capaces de mejorar sus habilidades de defensa contra patógenos de acuerdo a la densidad de sus poblaciones. Bajo tales circunstancias, la selección. DE. natural favorece a aquellos individuos que usan señales asociadas a la densidad de población para desarrollar mecanismos de defensa óptimos.. CA. Como consecuencia, los individuos que crecen hacinados son más. TE. resistentes que aquellos que se desarrollan en condiciones de baja densidad. Este fenómeno denominado "profilaxis dependiente de la densidad". 31,. se da. IO. principalmente en insectos que presentan polifenismo, como la langosta del. BL. desierto Schistocerca gregaria. Se observó que cuando estos insectos se desarrollan en condiciones de hacinamiento son significativamente más. BI. resistentes al hongo Metarhizium anisopliae que langostas solitarias, debido a una actividad antimicrobiana potenciada en sus sistemas de defensa .corroborando esta condición de poco o nulo hacinamiento en el caso de Podisus nigrispinus porque este caso los hace propensos a canibalismo y por ende su crianza se da de manera conjunta en poca densidades poblacionales( 15 ninfas por taper)32. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los insectos también son capaces de modificar su comportamiento con el propósito de luchar contra los agentes patógenos, en el caso de Podisus nigrispinus, los hemocitos circulantes en la hemolinfa de ese importante agente de control biológico de orugas desolladoras son los granulocitos,. AS. plasmocitos y proteocitos. Los granulocitos presentan formato esférico u oval,. IC. citoplasma con gránulos basófilos pequeños, generalmente esféricos y núcleo irregular. Los plasmocitos se muestran polimórficos con núcleo voluminoso, heterocromático. y. algunos. mostraron. prolongaciones. G. poco. LO. citoplasmáticas. Los proetocitos presentan aspecto esférico con núcleo. O. bastante voluminoso, y citoplasma en una pequeña banda periférica. Los. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. hemocitos de los depredadores son similares a otros insectos 33.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIÓN Beauveria bassiana tiene efecto entomopatógeno sobre ninfas de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Podisus nigrispinus en condiciones de laboratorio.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. •. Tener al alcance y/o gestinado la obtención de alimento con alguna. Podisus nigrispinus puede sobrevivir con dieta de agua azucarada por. IC. •. AS. empresa agrícola (Spodoptera frugiperda).. uno o dos días, pero en el caso de adultos disminuye su producción de. LO. Dependiendo de la cantidad de alimento y la temperatura que se le. O. •. G. huevos y aumenta el canibalismo.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. proporcione a Podisus nigrispinus acortará o alargara el ciclo.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 3.. 10. 11. 12.. 13.. O. BI. AS. TE. 14.. CI. 9.. CI EN. 7. 8.. DE. 6.. CA. 5.. LO. G. 4.. AS. 2.. Téllez J, Cruz R, Flores M, Asaff T, Arana C. Mecanismos de acción y respuesta en la relación de hongos entomopatógenos e insectos. Redalyc, 2009 (30): 73-80,. Samso R, Evans H, Latgé J. Atlas of entomopathogenic fungi. New york: springer-verlag, 1988:187. Asaff T, Reyes V, Lopez T. Guerra entre insectos y microorganismos: una estrategia natural para el control de plagas. Avance y perspectiva, 2002 (21)291-295. Meyling N, Eilenberg J. Ecology of the entomopathogenic fungi beauveria bassiana and metarhizium anisopliae in temperate agroecosystems: potential for conservation biological control. Biological control.2007 (43)( 2) 145-155. Lacey L, Frutos R, Kaya H, Vail P. Insect pathogens as biological control agents: do they have a future? Biol. Control 2001( 21): 230-248. Butt T, Jackson C, Magan N. Fungi as biological control agent: progress, problems and potencial. Fungi as biocontrol agents. Wallingford: cabi international, 2001: 1-8. Http://dx.doi.org/10.1079/9780851993560.0001 Hernán Ch,Graciela G,Karla G. Paraguay protocolos para formulación y aplicación del bio-insumo:beauveria bassiana, hongo entomopatógeno para el control biológico de hormigas cortadoras .ysaú. 2015 Estrada M, Romero M, Snowball M. Aplicación de beauveria bassiana en la lucha biológica contra diatraea saccharalis. Revista caña de azúcar.1997.(15)(1): 39-43 Elsevier. Bioquímica y biología molecular de insectos. 2016(68): 71-78. José V, Juan C. Introducción a la teoría del control biológico de plagas. Inta .2012. María T, Alejandro Bl. Potencial y algunos de los mecanismos de acción de los hongos entomopatógenos para el control de insectos plaga. Acta universitaria(19)(2) 2009: 40-49 Alatorre. Hongos entomopatógenos. IX curso nacional de control biológico (memorias). Río bravo, tamaulipas, méxico: sociedad mexicana de control biológico, 1998:104-112. Leger R,Charney A,Cooper R .Cuticle-degrading enzymes of entomopathogen fungi: mechanisms of interaction between pathogen enzymes and insect cuticle. J. Invertbr pathol .1986(47): 295-302. Luis L, Claugher D .appresoria of the nematophagous fungus v. Suchlasporium. Micron microsc acta 1990(21): 125-130. Riquelme M, Reynaga P, Gires G, Bartnicki G. What determines growth direction in fungal hyphae?. Fungal genet biol 1998(24): 101-109. Pucheta D, Macías Fl, Navarro S .Mecanismo de acción de los hongos entomopatógenos. Interciencia 2006(31): 856-860. Hajek A, Leger R .Interactions between fungal pathogens and insect host. Annu rev entomol . 1994(39): 293-322.. IC. 1.. IO. 15.. BL. 16.. BI. 17. 18.. 19. Guzmán R,mendoza R, Calzontzi M, Araiza S,Mateo M. La riqueza. biológica de los insectos: análisis de su importancia multidimensional. Acta zoológica mexicana 2016 (32)(3), 370-379.. 20. De Bach P. Biological control by natural enemies. Cambridge university. press. London 1974:323.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 21. Thomas M, James W. Biocontrol – risky but necessary? Trends in. ecology and evolution 1998(13)(8): 325-328.. 22. Cola Z , Abreu M , Luis M, Carlos Fr ,Ramalho S. Et al Los efectos. 27.. 28.. 32.. 33.. AS. IC. G. DE. 31.. CA. 30.. CI EN. CI. 29.. LO. 26.. O. 25.. BI. 24.. AS. 23.. tóxicos del aceite de neem en el hedor insecto depredador, Podisus nigrispinus(heteroptera: pentatomidae) 2016.doi: 10.1038 Marily G, Cristóbal N, Raúl R. Control de insectos-plaga en la agricultura utilizando hongos entomopatogenos: Retos y perspectivas. Revista científica de la universidad autónoma de coahuila.2012 (4) 8 Marmaras V, Charalambidis N, Zervas C. Immune response in insects: the role of phenoloxidase in defense reactions in relation to melanization and sclerotization. Archives of insect biochemistry and physiology .1996. (31):119–133. Shah P, Pell J. Entomopathogenic fungi as biological control agents. Applied microbiology and biotechnology. 2003 (61):413–423. Hajek A., Leger S.Interactions between fungal pathogens and insect hosts. Annual review of entomology , 1994(39):293-322. Dunn P. Insect antibacterial protein. In: warr, g.w., n. Cohen (eds.), phylogenesis of immune function. Plenum press. Boca raton, florida.1991:19–44. Levitin A, Whiteway M. Drosophila innate immunity and response to fungal infections. Cellular microbiology 2008(10):1021–1026. Marmaras V, Charalambidis N, Zervas C.Immune response in insects: the role of phenoloxidase in defense reactions in relation to melanization and sclerotization. Archives of insect biochemistry and physiology , 1996(31):129–143. Tang H, Kambris Z, Lemaitre B, Hashimoto C. Two proteases defining a melanization cascade in the immune system of drosophila. Journal of biological chemistry. 2006( 281):28097–28104. Wilson K., Reeson A. Density–dependent prophylaxis: evidence from lepidoptera– baculovirus interactions? Ecological entomology . 1998(23):100–101. Wilson K., Thomas M., Blanford M., Doggett, S., Simpson S. Density– dependent disease resistance in desert locusts. Proceedings of the national academy of sciences 2002(99):5471–5475. Anderson P, Julio C, Yenis del carmen G, José S, José C. Hemocitos el. TE. depredador bedbug Podisus (heteroptera: pentatomidae) -xxii congreso. BI. BL. IO. brasileño de entomología). 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. ANEXOS. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC. AS. Anexos. NINFAS I,II, III, IV, V. HUEVOS (4-5 días). ADULTOS (10 días). CI. AS. BI. O. LO. (27 días). CI EN. Fig 3: Ciclo de vida: pasando por cada uno de los estadios hasta llegar a. BI. BL. IO. TE. CA. DE. adulto con un aproximado de 42 días en total .. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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