Efecto antibacteriano in vitro del extracto de Tropaeolum majus en cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Q. UI. M IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. O. TESIS I. Y. Efecto antibacteriano in vitro del extracto de Tropaeolum majus en cepas de. FA. RM. AC I. A. Streptococcus mutans ATCC 25175.. CHIRINOS RODRÍGUEZ, Jessica Marisol.. TE CA. . DE. AUTORES:. CHOTA VIDAL, Liz Ruby.. . Dra. AYALA JARA, Carmen Isolina.. BI BL IO. . ASESORA:. TRUJILLO - PERÚ 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M IC. A. DEDICATORIA. UI. Dedico esta investigación con mucho amor a nuestro Padre creador…gracias por. BI. O. Q. bendecirme, escucharme y guiarme en este camino.. Y. A mis padres JAVIER y LUZ por ser mis apoyos en la vida y darme todo el ánimo,. A. amor y compresión que necesito para salir adelante no solo en los estudios sino en la vida. DE. FA. RM. AC I. como persona. Los quiero mucho y siempre los llevo en el corazón.. BI BL IO. TE CA. Jessica. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios por guiarme siempre por el buen camino, por haberme dado la fortaleza y su amor en todo momento. y. regalarme. tantas. O. Q. UI. M IC. A. bendiciones.. BI. A mi mamá ESMILDA, por tu amor. A. Y. infinito, tu comprensión por saber que. AC I. siempre podré contar contigo, por. RM. todos tus sacrificios y tus palabras de. TE CA. DE. FA. aliento.. BI BL IO. A mis familiares, quienes de una u otra forma hicieron posible la culminación de este trabajo.. Liz. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A Dios por habernos acompañado y guiado a lo lardo de nuestra carrera, por ser nuestra fortaleza en los momentos de debilidad y brindarnos una vida llena de. M IC. A. aprendizajes, experiencias y sobre. O. Q. UI. todo felicidad.. BI. A nuestra asesora, Dra. Carmen. Y. Ayala Jara, por creer en nosotras,. AC I. A. por todo el apoyo brindado a lo largo de la elaboración de este trabajo, por. RM. haber compartido sus conocimientos. crecer. profesionalmente. y. DE. de. FA. y amistad., por darnos la oportunidad. TE CA. aprender cosas nuevas.. BI BL IO. Al Dr. Ericson Castillo Saavedra por su permanente disposición e incondicional compartir. sus. apoyo,. y. por. conocimientos,. tiempo y dedicación a esta investigación.. Jessica y Liz. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores Miembros del Jurado Dictaminador. A. Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de grados y títulos de la Facultad. M IC. de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, nos es grato someter a. UI. vuestra consideración y elevado criterio profesional, el informe de Tesis I titulado “Efecto. Q. antibacteriano in vitro del extracto de Tropaeolum majus en cepas de Streptococcus. Y. BI. O. mutans ATCC 25175”.. AC I. A. Dejamos a vuestra consideración señores Miembros del Jurado, a respectiva. TE CA. DE. FA. RM. calificación del presente informe.. BI BL IO. Trujillo, abril del 2018. Chirinos Rodríguez, Jessica Marisol.. Chota Vidal, Liz Ruby.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI. Dr. QF. Abanto Zamora Francisco Moisés. M IC. A. JURADO DICTAMINADOR. FA. RM. AC I. A. Y. BI. O. Q. Presidente. Miembro. BI BL IO. TE CA. DE. Dr. QF. Campos Florián Julio Víctor. Dra. QF. Soto Vásquez Marilú Roxana Miembro. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente trabajo tuvo como objetivo determinar el efecto antibacteriano in vitro del extracto de Tropaeolum majus “mastuerzo”, en cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175. El extracto se obtuvo por maceración con etanol al 40º durante una semana. Se realizó la prueba de susceptibilidad, utilizando el método de difusión en discos. Las cepas fueron sembradas en placas con agar Mueller Hinton, se colocaron discos embebidos con. A. las concentraciones de 10%, 20%, 30% y 40% del extracto. Las placas se incubaron a 37ºC. M IC. por anaerobiosis, midiéndose los halos después de las 24 horas; todos los discos. UI. presentaron halos de inhibición, cuyo tamaño aumentó en relación directamente. O. Q. proporcional a las concentraciones utilizadas, evidenciándose un mayor diámetro de halo. BI. de inhibición al 40% del extracto de 16 mm. Para determinar la concentración mínima. Y. inhibitoria (CMI) se utilizó el método de macrodilución en tubos utilizando 10. AC I. A. concentraciones, a partir del extracto que presentó mayor halo de inhibición; donde se obtuvo el CMI de 8,75% (v/v) y la concentración mínima bactericida (CMB) se obtuvo por. RM. el método de siembra por superficie en agar nutritivo, obteniéndose un CMB de 17,5%. FA. (v/v). Se concluye que el extracto hidroalcohólico de Tropaeolum majus presenta efecto. TE CA. DE. antibacteriano in vitro sobre cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175.. Palabras clave: Tropaeolum majus, Streptoccocus mutans, Concentración Mínima. BI BL IO. Inhibitoria, Concentración Mínima Bactericida.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The objective of this work was to determine the in vitro antibacterial effect of Tropaeolum majus extract "mastuerzo" in strains of Streptococcus mutans ATCC 25175. The extract was obtained by maceration with ethanol at 40º for one week. The susceptibility test was performed, using the disk diffusion method. Strains were seeded on plates with Mueller Hinton agar, embedded discs with concentrations of 10%, 20%, 30% and 40% of the. A. extract. The plates were incubated at 37 ° C by anaerobiosis, the halos being measured. M IC. after 24 hours; All the discs presented inhibition halos, whose size increased in relation. UI. directly proportional to the concentrations used, evidencing a greater diameter of inhibition. Q. halo at 40% of the extract of 16 mm. To determine the minimum inhibitory concentration. BI. O. (MIC), the macrodilution method was used in tubes using 10 concentrations, from the. Y. extract that showed the highest halo of inhibition; where the CMI of 8.75%(v/v) was. A. obtained and the minimum bactericidal concentration (CMB) was obtained by the method. AC I. of planting by surface in nutritive agar, obtaining a CMB of 17.5%(v/v). It is concluded. RM. that the hydroalcoholic extract of Tropaeolum majus has an antibacterial effect in vitro on. words:. Tropaeolum. majus,. Streptoccocus. mutans,. Minimum. Inhibitory. TE CA. Key. DE. FA. strains of Streptococcus mutans ATCC 25175.. BI BL IO. Concentration, Minimum Bactericidal Concentration.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE Pág. i. Agradecimiento………………..…………………………………….………….. iii. PRESENTACIÓN…………………………..……………………………….……. iv. JURADO DICTADOR..……………………………………….…….………….. v. RESÚMEN.……………………………………………………………………... vi. ABSTRACT………………………………………………………….……..….. vii. M IC. A. Dedicatoria……………………...………………………………………………... INTRODUCCIÓN………………………………….....…………………. 1. II.. MATERIAL Y MÉTODO………………………….……...……………. 6. Q. UI. I.. 6. 2. Método……………………………………………………………….. 6. 3. Evaluación estadística………………………………………………. 11. A. Y. BI. O. 1. Materiales………………………………………………..…………... RESULTADOS……………………………...…………………….……... 12. IV.. DISCUSIÓN……………………………………………………….……... V.. CONCLUSIÓN……………………………………………….………….. 19. VI.. RECOMENDACIONES……………………………..………………….. 20. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………... 21. VIII.. ANEXOS………………………………………………………….……… 24. 15. BI BL IO. TE CA. DE. FA. RM. AC I. III.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN. La gran mayoría de los procesos infecciosos microbianos encontrados en la cavidad bucal, son debidos a los microorganismos habituales de la microbiota oral, por ello la caries dental es una de las enfermedades de etiología bacteriana más comunes entre los seres humanos, y todavía es considerada como un problema de salud pública en muchas partes del mundo, debido a que afecta la calidad de vida y personalidad de los individuos afectados. Se describe como un proceso dinámico de desmineralización y remineralización,. IC A. producto del metabolismo bacteriano sobre la superficie dentaria, que con el tiempo puede. UI M. producir una pérdida neta de minerales y posiblemente, aunque no siempre, resultará en la presencia de una cavidad. El concepto actual contempla que varios microorganismos se. O. Q. incluyen en la patogénesis de la caries dental (Streptococos mutans, Lactobacillus spp y. Y. BI. Actinomyces spp) 1,2, 3.. IA. Las especies más importantes en el humano son Streptococcus mutans y Streptococcus. AC. sobrinus. Estos se han caracterizado como colonizadores secundarios del biofilm que rodea. RM. a los dientes y su patogenicidad se ha demostrado en relación a la producción de caries del. FA. esmalte, debido a la capacidad que poseen de producir ácidos a partir de la sacarosa2,3.. DE. Streptococcus mutans, anaerobio facultativo, gram (+), produce ácido láctico, ácido. CA. propiónico, ácido acético y ácido fórmico cuando metaboliza carbohidratos fermentables como la sacarosa, glucosa y fructosa. Estos ácidos circulan a través de la placa dental hacia. TE. el esmalte poroso, disociándose y liberando hidrogeniones, los cuales disuelven. IO. rápidamente el mineral del esmalte, generando calcio y fosfato, los cuales, a su vez,. BI BL. difunden fuera del esmalte. Este proceso se conoce como desmineralización2, 4,5. Otra característica del S. mutans es su corto efecto post-pH, que puede definirse como el tiempo necesario para recuperar su actividad de crecimiento habitual, tras estar sometido a un bajo pH éste vuelve a la normalidad. Según lo expuesto, no es de extrañar que estas especies bacterianas sean las que consigan alcanzar más rápidamente el pH crítico 4,5 necesario para iniciar el proceso de desmineralización. S. mutans forma parte de la microbiota normal de la boca y aparece junto con la erupción de las piezas dentarias, pero se hace patógeno al aumentar su proporción relativa en la boca4, 5.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La utilización de productos naturales, principalmente con fines terapéuticos, es una práctica antigua transmitidas entre generaciones sucesivas. Tal como lo ilustran las farmacopeas desde el siglo XIX, los recursos terapéuticos consistían principalmente en extractos de plantas. Al mismo tiempo con el avance de la medicina, el aislamiento de constituyentes activos derivados de vegetales crudos, comenzaron alrededor de la vuelta del vigésimo siglo6. Numerosos estudios se han destinado a investigar sobre la prevención de enfermedades bucales, en especial caries dental, poniendo especial énfasis en las medidas que controlen. IC A. la formación de placa bacteriana dental y así reducir la presencia del agente patógeno. Es. UI M. así como, paralelo al desarrollo tecnológico de la industria farmacéutica, existe un gran interés por parte de los investigadores en estudiar sustancias naturales que posean. O. Q. propiedades farmacológicas antibacterianas. Entre ellas, se encuentra el Tropaeolum. BI. majus, es una planta de rápido crecimiento anual, pertenece a la familia Tropaeolaceae,. Y. coloquialmente conocida como “Mastuerzo”, originario de Perú. Es una planta ornamental. AC. IA. con grandes flores de color naranja, amarillo o rojo; de 3 a 4 cm de diámetro; cáliz amarillento, más corto que la corola, prolongado hacia atrás en un espolón de 2 a 3 cm de. RM. largo; pétalos enteros, funguicidas, los tres inferiores más angostos; sus hojas poseen. FA. propiedades bacterianas antifúngicas, antisépticas6.. DE. Se utiliza popularmente como antiséptico, diurético, purgante, tónico para el cabello,. CA. antiescorbútico, antiinflamatorio, antihipertensivos y antidepresivos. Además, es aplicado. TE. en la limpieza de la piel, ojos y tratamiento de trastornos de la piel, forunculosis, acné,. IO. trastornos pulmonares, esclerosis lateral amiotrófica, psoriasis, eccema y escrófula.. BI BL. Además, esta planta se cultiva ampliamente ornamentales y, además, tiene un aroma agradable y sabor picante7, 8. Esta planta tiene una finalidad específica que puede ser beneficioso en el tratamiento de decenas de problemas comunes. Es una hierba anti-microbiana que puede servir como un antibiótico natural. Tropaeolum majus está indicada para infecciones bacterianas internas y externas. Se puede utilizar para limpiar y proteger a los rasguños y cortes menores, para defender y fortalecer el cuerpo de las infecciones de las vías respiratorias, y para el tratamiento de infecciones del tracto urinario. Una buena fuente de estímulo inmunológico de vitamina C, así, mastuerzo puede ser un remedio natural ideal para ayudar al cuerpo a superar el resfriado común y la gripe8.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Una de las principales actividades de la hierba es su actividad antimicrobiana, que se explica por la presencia de isotiocianato de bencilo, (un producto de degradación de los glucosinolatos). La actividad antimicrobiana del isotiocianato de bencilo ha sido ampliamente documentada8. Los glucosinolatos son glucósidos que contienen azufre encontrados en varios plantas, incluyendo las cruciferas (brócoli, repollo, coliflor y berros) y la familia del mastuerzo, se liberan cuando se hidrolizan, como un mecanismo de defensa contra los microorganismos bacterianos. Los isotiocianatos (ITC) se consideran los compuestos más bactericidas. IC A. generados de glucosinolatos y se conocen como inhibidores efectivos del crecimiento de. UI M. bacterias patógenas gram-negativas y gram-positivas8.. Q. En el 2008, Araujo J. resaltó la importancia de las plantas como productoras de. BI. O. compuestos antimicrobianos, presentando los principales componentes químicos que se. Y. pueden aislar con esta actividad, así como la principal metodología para analizarlas. IA. experimentalmente. Demostró que la presencia de tioglicosidos en plantas del genero. AC. Tropaeolum brinda actividad antimicrobiana y antifungica. Para determinar la actividad. RM. antimicrobiana, se aplicó la técnica de dilución en placas de Agar, con diferentes. FA. concentraciones del extracto etanólico puro obtenido de hojas, flores y frutos de Tropaeolum majus (los extractos contienen el tioglicósido y sus productos de hidrólisis. DE. determinados mediante cromatografía y la formación de derivados). Las pruebas. TE. pneumonae9.. CA. antibacterianas se efectuaron con cepas de S. aureus, E. coli, Bacillus subtilis, Klebsiella. BI BL. IO. La actividad antibacteriana de la planta puede evaluarse con dos métodos básicos: la difusión del disco y la concentración inhibitoria mínima (CIM). El método por difusión del disco es cualitativo y permite observar el diámetro del halo de inhibición del crecimiento de las bacterias en estudio sembradas en el agar con diluciones seriadas. Las bacterias no crecen en la zona de inhibición del agar, donde difunde el antibiótico o extracto antibacterial aplicado en el disco de papel. Con el segundo método se puede evaluar el rango de concentración para inhibir el crecimiento microbiano que consiste en establecer la menor concentración de un antibiótico capaz de inhibir visiblemente el crecimiento de un microorganismo, esto se puede realizar mediante varias técnicas, una de ellas es la técnica de dilución en agar10.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En 1999, Al-Bagieh N. evaluó el compuesto de bencil isotiocianato (BIT) aislado de Salvadora persica L. que se utiliza por los musulmanes como un palo de cepillado para limpiar los dientes. Se encontró que este compuesto, inhibe el crecimiento y producción del ácido de Streptococcus mutans, el crecimiento y acción inhibitoria de bencil isotiocianato fue ligeramente neutralizado por el manganeso y parcialmente neutralizado por el hierro. A diferencia de la capacidad de BIT para inhibir la producción de ácido se mejoró por el hierro. Al parecer, bencil isotiocianato podría ejercer su acción a través de dos mecanismos de acción: uno mayor que implica la oxidación de proteínas: los grupos sulfhidrilo y un menor de quelación de esencial. Este estudio sugiere que bencil. UI M. IC A. isotiocianato (podría ser útil para disminuir la incidencia de la caries dental11. En el 2011, Butnariu M. evaluó la actividad antimicrobiana y antiinflamatoria de. O. Q. algunos compuestos químicos del aceite volátil extraído de Tropaeolum majus L. La. BI. prueba cuantitativa y la concentración mínima inhibitoria (MIC) se realizarón a través del. Y. método de dilución micro binario para entornos líquidos contra los siguientes tipos. AC. IA. microbianos y especies. De los métodos cualitativos utilizados para el control de la actividad antimicrobiana, el método de difusión en discos de papel de filtro resultó ser el. RM. más eficiente, los resultados se correlacionan bien con la MIC. La actividad antimicrobiana. FA. resultó ser selectiva, dependiendo del patógeno. Estos resultados están de acuerdo con los. DE. de otros estudios. Los resultados apoyan la selección y utilización de estos compuestos como agentes antimicrobianos en el tratamiento de infecciones con microorganismos. TE. CA. resistentes a los antibióticos existentes12.. IO. La presente investigación nace de la problemática que se ha convertido la caries dental,. BI BL. según la Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que el 60% - 90% de los escolares y casi el 100% de los adultos tienen caries dental en todo el mundo. El Perú es uno de los países en vías de desarrollo de Latinoamérica que tiene la más alta incidencia de caries una enfermedad dental que afecta, según el último estudio epidemiológico desarrollado por El Ministerio de Salud (MINSA), la prevalencia de caries dental a nivel nacional fue de 90,4%,. por lo que es necesario un abordaje integral del problema,. aplicando medidas no solo farmacológicas sino naturales eficaces de promoción y prevención de la salud bucal, como la aplicación de los extractos de plantas medicinales; razón del presente estudio que trata de determinar el efecto antibacteriano in vitro empleando el extracto hidroalcohólico de las hojas y flores de Tropaeolum majus en cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175 “mastuerzo” con la finalidad de contar con un 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. extracto natural, que nos permita en adelante desarrollar una alternativa de tratamiento para la caries dental12, 13.. PROBLEMA . ¿Tendrá efecto antibacteriano in vitro el extracto hidroalcohólico de Tropaeolum majus en cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175?. El extracto hidroalcohólico de Topaeolum majus, tiene efecto antibacteriano in. UI M. . IC A. HIPÓTESIS. O. Q. vitro en cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175.. Y. BI. OBJETIVOS. AC. . IA. OBJETIVO GENERAL. Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del extracto hidroalcohólico de. FA. RM. Tropaeolum majus en cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175.. Determinar. la concentración. CA. . DE. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. mínima inhibitoria (CMI) del. extracto. . BI BL. IO. 25175.. TE. hidroalcohólico Tropaeolum majus en cepa de Streptococcus mutans ATCC. Determinar la concentración mínima bactericida (CMB) del extracto hidroalcohólico Tropaeolum majus en cepa de Streptococcus mutans ATCC 25175.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.- MATERIALES Y MÉTODO. 1. MATERIALES. 1.1 Material vegetal: Hojas y flores de Tropaeolum majus ‟Mastuerzo” recolectadas en el jardín del barrio Ramón Castilla en la provincia de Otuzco, Departamento de La Libertad. IC A. a una altitud de 2 641 m.s.n.m.. UI M. 1.2 Material microbiológico:. Cepas estandarizadas de Streptococcus mutans ATCC 25175, obtenida del. BI. O. Q. laboratorio microbiológico GenLab del Perú SAC.. Y. 1.3 Medios de cultivo: Agar tripticasa soya. -. Agar sangre. -. Agar nutritivo. -. Agar Müller - Hinton. -. Caldo infusión cerebro corazón (BHI). TE. 2. MÉTODO 14, 15, 16. CA. DE. FA. RM. AC. IA. -. IO. 2.1 RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA. BI BL. Se recolectó hojas y flores de Tropaeolum majus “Mastuerzo” de la provincia de Otuzco, departamento de La Libertad, en el mes de enero del 2018. La recolección de la especie se realizó por el método convencional o clásico de. herborización, seleccionando el material vegetal.. 2.2 IDENTIFICACIÓN TAXONÓMICA Se llevó un ejemplar completo de la planta de Tropaeolum majus al Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para la identificación taxonómica según el sistema filogénico de la especie, asignándole el código de registro: 59236. (Ver Anexo 3).. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 2.3.1. Selección de la Muestra: Se seleccionaron las hojas y flores frescas en buen estado, descartando toda parte de la droga que no reúna las condiciones necesarias para su utilización.. 2.3.2. Lavado de la droga: Se separaron las materias extrañas, y se procedió a lavar el material con agua a chorro y luego agua. IC A. destilada.. 2.3.3. Secado: Una vez lavado se procedió a adecuar las hojas de la droga. UI M. vegetal en bolsas de papel kraft con orificios, las que se colocaron. Q. en una estufa a una temperatura de 37°C, para la determinación de. BI. O. peso cada 24 horas hasta valores constantes, las flores fueron. AC. IA. Y. secadas por separado bajo sombra a temperatura ambiente.. RM. 2.4 EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE MASTUERZO (Tropaeolum. FA. majus)17, 18.. Preparación de la droga vegetal. DE. 2.4.1. CA. Se procedió a fragmentar, pulverizar y tamizar la droga vegetal seca. TE. a un tamaño de partículas homogéneo con el objetivo de que. IO. existiera mayor superficie de contacto con el solvente y de que las. BI BL. barreras celulares de la planta se encuentren parcialmente destruidas,. 2.4.2. por lo cual la extracción se facilitará al permitirse una mayor disolución de los componentes.. Proceso de extracción En un envase estéril de vidrio ámbar se colocaron 50 g de polvo de hojas y flores previamente pulverizadas y tamizadas. Luego, se añadió etanol al 40° cantidad suficiente hasta cubrir la muestra por sobre 2 cm de altura. Se mezcló bien, teniendo en cuenta que la mezcla debe ocupar como máximo las ¾ partes del recipiente. Se. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. tapó el recipiente y se maceró en ausencia de luz por 7 días, agitándose tres veces al día. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró el líquido al vacío, con papel de filtro Whatman N° 1 y se dejó en reposo durante 8 días a 4ºC. Luego se prepararon las concentraciones 10%, 20%, 30 % y 40 % de Tropaeolum majus (mastuerzo), con el mismo solvente.. IC A. Finalmente, las concentraciones del extracto vegetal fueron. UI M. guardados en frascos de vidrio ámbar y en refrigeración a (4 - 8 ºC). O. Q. para su posterior uso en los ensayos microbiológicos.. BI. 2.5 ACTIVACIÓN DE LA CEPA BACTERIANA: Streptococcus mutans. AC. IA. Y. ATCC 25175.. El cultivo puro de Streptococcus mutans ATCC 25175, fue reactivada en 10. RM. mL de caldo infusión cerebro corazón (BHI) se incubó a 37ºC por 24 - 48. FA. horas en condiciones de anaerobiosis. Luego se sembró por estría en agar. DE. sangre de carnero al 5% en condiciones de anaerobiosis por 24 - 48 horas.. CA. Preparación del Inóculo Con una asa bacteriológica se tomó de las colonias de Streptococcus mutans y. TE. se resuspendieron en un tubo de 5 mL de solución salina al 0,85% de NaCl. %.. IO. Se agitó bien, posteriormente se ajustó a una escala de turbidez de 0,5 Mc. BI BL. Farland (108 UFC/mL). La suspensión se diluyó 1:100 con caldo o salino (106UFC/mL). El inoculo final fue de 5×105 UFC/ mL.. 2.6 SEMBRADO. Se colocó en placas Petri 20 mL de agar Müller- Hinton, solidificado el agar, se sembró el microorganismo en la superficie de este, y se hisopó uniformemente. Las placas recién sembradas se colocaron en una estufa a 37°C de temperatura en condiciones de anaerobiosis durante 10 minutos.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7 APLICACIÓN DE LOS DISCOS. Sobre la placa sembrada, se colocó en la superficie del agar inoculado los discos de papel de filtro (5 mm de diámetro) previamente impregnados con 0,1 mL de las concentraciones del extracto de Tropaeolum majus 10%, 20%, 30%, 40% y del control negativo. También se colocó el disco estándar de antibiótico de referencia para este microorganismo en particular (clorhexidina 1,2%).. IC A. Posteriormente, los medios de cultivos inoculados se incubaron a 37°C en condiciones de anaerobiosis, realizándose las lecturas de los halos de. UI M. inhibición a las 24 horas. Toda la prueba se realizó por triplicado; dichos halos. O. Q. se midieron con ayuda de una regla milimetrada.. IA. Y. BI. 2.8 PREPARACION DE SOLUCIÓN MADRE19,20. AC. Se preparó una solución madre con caldo BHI (infusión cerebro corazón) al. RM. 70% siguiendo el procedimiento del Anexo 5, (Fig. 1).. FA. Al terminar las diluciones todos los tubos contienen 2 ml, excepto el tubo nº 11 (4 ml). De este último se desechará 2 ml. En los tubos nº 2 al nº 11 la. DE. concentración del antibacteriano es 10 veces superior a la concentración final. TE. CA. deseada.. IO. El NCCLS (National Committee for Clinical Laboratory Standards). BI BL. recomienda el método de estandarización para la determinación de la concentración mínima inhibitoria, que a partir de la solución madre se prepara una serie de diluciones a una concentración 10 veces superior a la. concentración final deseada.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.9 DETERMINACIÓN. DE. LA. CONCENTRACIÓN. MÍNIMA. INHIBITORIA (CMI). POR TURBIDIMETRIA: Se utilizaron tubos de ensayo, en los cuales se colocaron 0,4 mL del caldo BHI, luego se añadió 0,5 mL de cada una de las concentraciones de las diluciones de la solución madre, preparadas anteriormente, posterior a esto en cada tubo de ensayo se colocó 0,1 mL de la suspensión de la bacteria y se incubó a 37°C por. IC A. 24 a 48 horas en jarra de anaerobiosis. Se empleó como control positivo clorhexidina, 10 uL a una concentración de. UI M. 1,2% y para el control negativo agua bidestilada.. Q. Después de 24 a 48 horas de incubación, los tubos de ensayo se examinaron. en el cual comienza a inhibirse el desarrollo por. Y. de Tropaeolum majus. BI. O. visualmente y se consideran como CMI a la concentración menor de extracto. IA. completo, es decir donde no se presentó turbidez.. DE. CONCENTRACIÓN. MÍNIMA. FA. 2.10 DETERMINACIÓN. RM. AC. Los ensayos se realizaron por triplicado.. BACTERICIDA (CMB). DE. La CMB se define como la concentración más baja que redujo el crecimiento. TE. CA. bacteriano ≥ 99% con respecto al inoculo inicial.. IO. EN PLACA:. BI BL. Se sembró en placas con agar nutritivo una muestra de 100 ul de los tubos donde no se observó crecimiento bacteriano, llevándose a una dilución de 10-3, y se incubó a 35ºC en condiciones de anaerobiosis durante 24 horas. Transcurrido este tiempo se determinó la presencia o ausencia de las unidades formadoras de colonia (UFC) en las placas donde se evidencio crecimiento bacteriano (Anexo 11); considerándose como efecto bactericida cuando no se encontraron colonias. El ensayo se realizó por triplicado.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3. EVALUACIÓN ESTADÍSTICA. Los resultados obtenidos fueron procesados empleando el programa SPSS, versión 22.0, se realizó el Análisis de Varianza (ANOVA) con un nivel de significancia del 95% (p<0.05). Para hallar la diferencia significativa a diferentes concentraciones del. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. extracto de Tropaeolum majus.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Tabla 1. Análisis de varianza (ANOVA) de diámetros de halos de inhibición, de extractos de Tropaeolum majus en cepa de Streptococcus mutans ATCC 25175. (p<0,05). Valor crítico para F 4,0662. UI M. IC A. Origen de Grados Suma de Promedio de las de F Probabilidad cuadrados cuadrados variaciones libertad Entre 176,667 3 58,8889 78,5185 0,00003 grupos Dentro de 6 8 0,75 los grupos. AC RM. 30.00. FA. 25.00 15.00. DE. 20.00. 16. 11.33. 8.33. 10.00. CA. 5.67. 0. TE. 5.00 0.00. 30. BI BL. IO. Diametro de inhibicion (mm). IA. Y. BI. O. Q. 182,667 11 Total Fuente: Los investigadores, 2018. Concentraciones del Extracto de T. majus. Gráfico 1. Promedio de diámetros de halos de inhibición de extractos de Tropoeolum majus sobre Streptococcus mutans ATCC 25175. Fuente: Datos recogidos por las investigadores, 2018 (Ver Anexo 1). 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Evaluación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de Tropaeolum majus, Clorhexidina 1,2% y Agua bidestilada frente a Streptococcus mutans ATCC 25175.. Extracto. Serie. Tropaeolum Serie 2. Serie 3. 35% (v/v). 0. 0. 0. 17.5% (v/v). 0. 0. 0. 8.75% (v/v). 0. 0. 4.375%(v/v). +. +. 2.1875%(v/v). ++. ++. 1.094 %(v/v). +++. 0.547%(v/v). +++. 0.273%(v/v). +++. 0.137 %(v/v) 0.068%(v/v). 0. + ++ +++. +++. +++. +++. +++. +++. +++. +++. +++. +++. +++. TE. CA. FA. RM. AC. IA. +++. DE. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Serie 1. majus. (Clorhexidina. IO. 0. BI BL. 1,2%) Agua. +++. bidestilada Fuente: Los investigadores, 2018 Leyenda 0: Sin turbidez +: Menor turbidez ++: Media turbidez +++: Mayor turbidez Concentración mínima inhibitoria (CMI): ≥8.75% (v/v). 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Evaluación de la Concentración Mínima Bactericida (CMB) de Tropaeolum majus, Clorhexidina 1,2% y Agua bidestilada frente a Streptococcus mutans ATCC 25175.. CC (% de Tropaeolum. Serie. 35%(v/v) 17.5%(v/v) 8.75%(v/v). Clorhexidina. Agua. 1,2%). bidestilada. Crecimiento Serie 2 Serie. +. 0. 0. +. 0. 0. +. 0. +++. O. 3. 0. BI. de colonias. 0. UI M. 1. Q. Serie. IC A. majus). IA. Y. Fuente: Los investigadores. AC. Leyenda. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. 0: Sin crecimiento +: Menor crecimiento ++: Mediano crecimiento +++: Mayor crecimiento Concentración mínima bactericida: (CMB): 17,5% (v/v). 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. En esta investigación de tipo experimental se determinó el efecto antibacteriano in vitro del extracto de Tropaeolum majus (mastuerzo) en cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175, utilizando diferentes concentraciones del extracto que fueron: 10%, 20%, 30% y 40%. Para determinar el efecto antimicrobiano in vitro de la especie en estudio, se utilizaron métodos de dilución, el cual es uno de los métodos estandarizados por el Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio (CLSI) recomendado para el estudio de sensibilidad. UI M. IC A. antimicrobiana21, 22.. Se comprobó que a mayor concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus hay. O. Q. un mayor efecto antibacteriano, tanto para el método de susceptibilidad bacteriana como. Y. BI. para el método en Macrodilución.. IA. En la tabla 1 se muestra el análisis estadístico ANOVA de las mediciones de los halos de. AC. inhibición del extracto de Tropaeolum majus sobre Streptococcus mutans en el que se. RM. determinó un valor critico de 4,0662 y una variación entre los cuatro grupos de 78,519 lo. FA. que nos permite analizar que en el resultado de nuestra prueba existe una diferencia significativa, es decir, que las diferentes concentraciones del extracto han generado. CA. DE. diferentes halos de inhibición promedio (p<0,05). En el Gráfico 1 se observa un aumento creciente de los promedios de halos de inhibición. TE. del crecimiento bacteriano de Streptoccocus mutans a medida que la concentración de. BI BL. IO. extracto de Tropaoelum majus aumentaba, demostrando que existe inhibición bacteriana a las concentraciones de 20%, 30% y 40%, observando una mayor susceptibilidad bacteriana en la concentración de 40% del extracto, obteniéndose un halo de inhibición de 16 mm. Para determinar el CMI del extracto de Tropaeolum majus, se utilizó la técnica de Macrodilución en caldo debido a la polaridad del compuesto natural. La concentración mínima inhibitoria (CMI), se define como la concentración en la que se evita el crecimiento visible de bacterias bajo las condiciones de crecimiento definidas23. En la Tabla 2. Se puede observar que la concentración mínima inhibitoria resultante del estudio fue de ≥ 8,75% (v/v), ya que a partir de dicha concentración empieza a observarse. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. la ausencia de turbidez, considerando así al extracto que a una concentración de 40% posee sensibilidad intermedia in vitro frente a Streptococcus mutans por lo tanto tiene mayor efecto inhibitorio conforme aumenta la concentración24. Sin embargo, dado que la inhibición del crecimiento bacteriano no significa la muerte bacteriana, este método no puede distinguir los efectos bactericidas y bacteriostáticos. Es por ello que posteriormente se realizó mediante el método de siembra en superficie en agar nutritivo la determinación de la concentración mínima bactericida (CMB) (Tabla 3), dando como resultado un 17,5% (v/v), lo cual indica que a partir de esta concentración se. IC A. empieza a evidenciar una acción bactericida del extracto.. también se define como la. Q. baja, en la que se elimina el 99,9% del inóculo final;. UI M. El punto final bactericida (CMB) se ha definido subjetivamente como la concentración más. BI. O. concentración más baja del fármaco que produce un 98% - 99,9% de efecto asesino en. Y. comparación con el inóculo inicial.. AC. IA. En general según los resultados próximos obtenidos de CMI y CMB se puede decir que el. RM. extracto de Tropaeolum majus, posee poder bactericida ya que esta difiere en una dilución. En ocasiones esto no ocurre y se estará ante los siguientes fenómenos: paradójico, de. FA. tolerancia y de persistencia como ocurrieron con las concentraciones menores. La. DE. tolerancia se define cuando la CMI y la CMB están separadas por al menos 5 diluciones. CA. dobles22.. TE. Los resultados obtenidos en el control positivo donde se usó clorhexidina muestra que este. IO. antibiótico es efectivo contra Streptococcus mutans, por ello es uno de los productos más. BI BL. utilizados, en forma de enjuagatorios y geles, pero con el inconveniente de producir efectos tóxicos locales como: tinción de dientes, pigmentación del dorso de la lengua y con menor frecuencia, descamación de la mucosa bucal, gusto amargo o modificación gustativa, sensación de quemadura, sequedad e inflamación ocasional, su uso clínico no es muy factible debido a los diversos efectos adversos en especial por generar resistencia bacteriana; estos inconvenientes generan a la investigación la búsqueda de nuevas alternativas,25,26,27,28. En la literatura se ha reportado que el efecto antibacteriano del extracto de Tropaeolum majus, se debe a los tioglicolatos producto de la hidrólisis de los glucosinolatos presentes en la planta. Los mecanismos de acción antimicrobianos de los isotiocianatos. y. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. bencilisotiocianatos no están bien establecidos, sin embargo se proponen varios modos de acción tales como: efectos sobre membranas, como los efectos directos sobre la adhesión de las bacterias, causando alteración de la adhesión de la superficie de la membrana y, por tanto, la pérdida de fragmentos de biofilm; inhibición de sistemas regulatorios (detección de quórum), inhibición de enzimas respiratorias, inducción de respuesta al choque térmico, estrés oxidativo y respuesta estricta 29, 31. No se han reportado estudios relacionados de Tropaeolum majus (mastuerzo), en la cepa de Streptococcus mutans; sin embargo existe evidencia donde se reporta que. IC A. Tropaeolum majus posee efecto antibacteriano. En la investigación de Zanetti y col. se estudió el efecto antibacteriano de hojas y tallo de T. majus, obteniendo actividad. UI M. antimicrobiana contra cepas de Staphylococcus Epidermidis, Staphylococcus aureus,. O. Q. Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Salmonella setubal 31.. BI. La actividad antibacteriana de nuestro extracto se debe probablemente a los compuestos. Y. fenólicos presentes en las flores. La acción antibacteriana de estos se debe a que. AC. IA. sensibilizan a membrana celular y al saturarse los sitios de acción la célula sufre graves daños, provocando que la célula colapse. Así mismo posee en todas sus partes un. RM. glucósido sulfurado, la glicotropeolina, que por acción de la mirosina, una enzima. FA. contenida en la planta, que se libera al partirla o triturarla29, 31.. DE. Hay alguna evidencia sobre productos de reacción de isotiocianato en medio acuoso,. TE. menor26.. CA. incluida la formación de azufre elemental un inhibidor de crecimiento bacteriano. BI BL. IO. En el 2017 Stefan J. determinó que las propiedades antimicrobianas de isotiocianatos naturales (ITC), que se encuentran en plantas como el mastuerzo (Tropaeolum majus) y rábano picante (Armoracia rusticana) expresan actividad antimicrobiana frente a biofilms en desarrollo y maduros. Existen diferentes estrategias para controlar o prevenir la formación de biofilm. Sin embargo, es favorable el uso de compuestos anti-biofilm que sean capaces de actuar en ambas situaciones de prevención de la formación de biofilm así como buena eficacia en biofilms establecidos30.. En estos estudios, los autores citados utilizaron varias partes de la planta: flores, hojas; en la presente también se mesclaron flores y hoja. Es probable que la actividad antibacteriana encontrada tanto por los autores mencionados como en el presente estudio se deben a los. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. compuestos fenólicos, y aceites fijos presentes en la planta, como la literatura lo registra estudios fitoquímicos han demostrado la presencia de ácidos grasos (ácido erucido, ácido oleico y linoleico), isotiocianato de bencilo, glucosinolatos y flavonoides en las hojas de T. majus. Así mismo posee en todas sus partes un glucósido sulfurado, la glicotropeolina, que por acción de la mirosina, una enzima contenida en la misma planta que se libera al partirla o triturarla, produce entre otras sustancias un aceite esencial azufrado con potente acción antibiótica. Por el método de extracción usado en nuestra investigación, debemos haber liberado tal enzima que actuó con la glicoproteína contribuyendo a la acción. IC A. antimicrobiana32.. UI M. Si bien los métodos pueden diferir en los compuestos químicos de la planta que se extraen, ya que las sustancias más polares como el agua (en el caso de extracto acuoso) extraerá. O. Q. componentes más polares, los de polaridad intermedia como etanol 70% extraerá. BI. compuestos similares en la polaridad, el efecto antimicrobiano encontrado fue similar al de. IA. Y. otros estudios.. Tropaeolum majus presenta efecto antibacterianos frente a Streptococcus mutans. RM. de. AC. Finalmente, por los resultados obtenidos, podemos afirmar que el extracto de hojas y flores. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. ATCC 25175, el cual es el principal microorganismo de la caries dental.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. . CONCLUSIONES. El extracto hidroalcohólico de Tropaeolum majus presenta efecto antibacteriano in vitro sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 a las concentraciones de 20%, 30 % y 40 %.. . La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) in vitro del extracto de Tropaeolum majus sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, fue de 8,75%. La Concentración Mínima Bactericida (CMB) in vitro del extracto de. UI M. . IC A. (v/v).. Q. Tropaeolum majus sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, fue de 17,5%. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. (v/v).. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. . RECOMENDACIONES. Ejecutar estudios experimentales in vitro con Tropaeolum majus frente a otros patógenos de la cavidad oral, como: Lactobacillus, Streptococcus. sanguis,. Fusobacterium, Haemophilus, entre otros, para ampliar el espectro de la actividad microbiana. . Realizar estudios in vitro en animales de experimentación y posteriormente en. IC A. personas para probar la eficacia, tolerancia y seguridad de su uso, mediante la. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. preparación de dendríficos y enjuagues con Tropaeolum majus.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Liébana J. Microbiología oral. 2a. Ed. España: McGraw-Hill. 1995. 2. Ojeda C. Streptococcus mutans y caries dental. CES odontol. [Internet], 2013 [Citado el 19 de Agosto.2017]; Scielo: vol.26 no.1 Medellìn. Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120971X2013000100005 3. Linossier A, Valenzuela C. Colonización de la cavidad oral por Streptococcus. IC A. grupo mutans, según edad, evaluado en saliva por un método semi-cuantitativo. Revista Chilena Infect. 2011; 28(3):230-7.. UI M. 4. Henostroza G. Diagnóstico de caries dental. 2 ed. Lima: UPCH; 2005.. Q. 5. Figueroa G, Alonso G. Microorganismos presentes en las diversas etapas de la. BI. O. progresión de caries dental. Acta odontológica venezolana. 2009. Vol. 47 Nº 1.. Y. 6. Brondani J. Usos tradicionales, botánica, fitoquímica, actividad biológica y. IA. toxicología de Tropaeolum majus. Boletín Latinoamericano y del Caribe de Plantas. AC. Medicinales y Aromáticas. vol. 15, núm. 2016. pp. 264-273. RM. 7. Stone B. Beneficios de la hierba de la capuchina. [Internet], 2011 [Citado el 19 de Disponible. medicine/p95793/. http://www.healthguideinfo.com/herbal-. A, Sebastian G, Bazylko A, Granica S, Filipek A, Piwowarski J,. DE. 8. Bazylko. en:. FA. Agosto.2017].. CA. Stefańska J, Osinska E. Comparación de la actividad antioxidante, antiinflamatoria,. TE. antimicrobiana y química de extractos acuosos e hidroetanólicos de la hierba. IO. de Tropaeolum majus L. Elsevier. Vol. 50. 2013.. BI BL. 9. Araujo J, Salas R. Actividad antibacteriana de plantas. [Internet], 2012 [Citado 22 de Agosto 2017]; 1(12). Disponible en: http://www.seq.es/seq/0214-3429 10. Castro A. Inhibición del crecimiento in vitro de Streptococcus mutans por papaína y Sanitrend. Trabajo de investigación. Facultad de odontología Universidad de Chile. 2005. 11. Al-Bagieh N. Bencilisotiocianato: Un posible agente para el control de la caries dental. La Facultad de Prensa. Cartas Microbios. 1999. 12. Butnariu M. Bostan C. Actividad antimicrobiana y antiinflamatoria de los compuestos de aceites volátiles de Tropaeolum majus L. (Nasturtium). African Journal of Biotechnology. vol. 10, núm. 31, 2011, Disponible en: https://www.ajol.info/index.php/ajb/article/view/94467 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 13. Ibargüen S. Actualidad Odontologia y Salud. Revista de odontología. [Internet], 2015. [Citado. el. 22. de. Agosto. 2017].. 2015.. Disponible. en:. http://www.upch.edu.pe/faest/images/stories/egresados/pdf/ACTUALIDAD_ODO NTOLOGICA_31-FINAL.pdf 14. Ruiz L. Efecto in vitro del extracto hidroalcoholico de las inflorescencias de Bejaria aestuans L. “Purum rosa” frente a Staphylococcus aureus, Echerichia coli y Candida albicans. [Tesis para optar el grado de Bachiller en Farmacia Bioquímica]. Perú: Universidad Nacional de Trujillo; 2012.. IC A. 15. Mercado P. Fisiología Genética Bacteriana. Guía de prácticas 5ª edición. Facultad de Ciencias Biológicas. Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo; 2006.. UI M. 16. Pasco G. Efecto antibacteriano in vitro de miel de abejas (Apis mellifera) en cepa. Q. de Streptococcus mutans. En Trabajo de Investigación Facultad de Farmacia. BI. O. Bioquímica. Perú: Universidad Nacional de Trujillo; 2010.. Y. 17. Cabezas G. Evaluación del efecto cicatrizante de extractos a base de mastuerzo. IA. (Tropaeolum majus) en ratones (mus musculus). [Tesis de grado previa obtención. AC. de título de Bioquímico Farmacéutico]. Ecuador: Escuela Superior Politécnica de. RM. Chimborazo. Facultad De Ciencias; 2014.. FA. 18. Centurión K.. Efecto antibacteriano in vitro de diferentes concentraciones del extracto etanólico de Caesalpinia spinosa (tara) frente a Streptococcus mutans. DE. ATCC 35668”. [Tesis para obtener el grado de maestro en estomatología]. Perú:. CA. Universidad Privada Antenor Orrego; 2015.. TE. 19. Cantón E, Martín E, Espinel A. Métodos estandarizados por el CLSI para el estudio. IO. de la sensibilidad a los antifúngicos (documentos M27-A3, M38-A y M44-A).. BI BL. Asociación. Española. de. Micología.. 2007.. Disponible. en:. http://www.guia.reviberoammicol.com/Capitulo15.pdf 20. Picazo J. Procedimiento de Microbiología Clínica: Métodos básicos para el estudio de. la. sensibilidad. a. los. antimicrobianos.. 2000.. Disponible. en:. https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiol ogia/seimc-procedimientomicrobiologia11.pdf 21. Instituto de Normas Clínicas y de Laboratorio. Métodos para diluir la prueba de susceptibilidad antimicrobiana para bacterias que crecen aeróbicamente, novena edición. 2012.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 22. Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria that Grow Aerobically Approved Standard-Ninth Edition Wayne, PA: CLSI, 2012. 23. Stella L. Metodologías para evaluar in vitro La Actividad Antibacteriana de Compuestos de Origen Vegetales. Scientia et Technica Año XV, No 42, 2009. pp: 264 - 265. 24. WiegandI H. Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (CMI) of antimicrobial substances. Nat protoc, 2008. pp: 167 – 75.. IC A. 25. Escobar F. Odontología Pediátrica. Caracas: Amolca; 2004. 26. Albertos J, Junquera L. Albertos M, Olay S, Lopez-Arranz E. La clorhexidina.. UI M. Perspectiva actual. An Odontoestomatol. 1999; 5: 217-24.. Q. 27. Van Rijkom H, Truen G, Van´t Hof M. A meta-analysis of clinical studies on the. BI. O. caries-inhibiting effect of chlorhexidina treatment. J Dent Res. 1999; 75: 790-5.. Y. 28. La Administración de Alimentos y Medicamentos de Estados Unidos. (Febrero de. IA. 2017). La FDA advierte acerca de reacciones alérgicas poco comunes pero graves. AC. del antiséptico tópico con gluconato de Clorhexidina.. RM. 29. Dufour V, Alazzam B, Ermel G, Thepaut M, Rossero A, Tresse O, Baysse C.. FA. Antimicrobial activities of isothiocyanates against Campylobacter jejuni isolates. Front Cell Infect Microbiol 2: 53. 2015.. DE. 30. Stefan J. Natural isothiocyanates express antimicrobial activity against developing. TE. 63.. CA. and mature biofilms of Pseudomonas aeruginosa. Fitoterapia, 2017. pp: 119, 57-. IO. 31. Zanetti G, Manfron M, Hoelzel S, Pagliarin V, Morel A. Toxicidade Aguda e. BI BL. Atividade Antibacteriana dos Extratos de Tropaeolum majus L. Acta Farm. Bonaerense, 2003. pp: 159-62. 32. Gomes C. Evaluation of subchronic toxicity of the hydroethanolic extract of Tropaeolum majus in Wistar rats. Journal of Ethnopharmacology Vol 142. 2012. pp:. 481-487.. Disponible. en:. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0378874112003339?via%3Dihu b. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. ANEXOS. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 1. Análisis de varianza de solo un factor.. Grupos. Cuenta. Suma. Promedio. Varianza. 10%. 3. 17. 5,667. 0,333. 20%. 3. 25. 8,333. 1,333. 30%. 3. 34. 11,333. 0,333. 40%. 3. 48. 16. 1. UI M. IC A. Fuente: los investigadores. 20%. 30%. 40%. BI. 10%. 5.0. 9.0. Placa Nº 3. 6.0. 7.0. Promedio. 5,667. IA. Placa Nº 2. 17.0. 12.0. 15.0. 11.0. 16.0. 11,333. 16. Clorhexidina. Agua. (1,2 %). Bidestilada. 30.0. 0. 30.0. 0. CA. 8,333. 11.0. AC. 9.0. RM. 6.0. FA. Placa Nº 1. DE. Y. Placa. O. Q. ANEXO 2. Promedio de los diámetros de halos de inhibición. BI BL. IO. TE. Fuente: los investigadores. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 3. Identificación Taxonómica de Tropaeolum majus L. en el Hembarium. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo.. ANEXO 3. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ANEXO 4. Control de calidad de la cepa Streptoccocus mutans ATCC 25175.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ANEXO 5. Esquema y preparación de las diluciones para la solución madre.. Fig. 2 Preparación de la solución madre.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Q. UI M. IC A. ANEXO 6. Preparación del extracto de hojas y flores de Tropaeolum majus.. Selección y lavado de la muestra.. Secado de las hojas en horno a 37ºC .. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Tropaeolum majus ‟Mastuerzo”. TE. Fragmentado de la droga vegetal seca a un tamaño de partículas homogéneo.. BI BL. IO. Pesado de la muestra.. Filtración al vacío del extracto de Tropaeolum majus. Macerado durante 7 días. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. O. Q. UI M. IC A. ANEXO 7. Activación de la cepa bacteriana: Streptococcus mutans ATCC 25175.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. Cepa liofilizada de Streptococcus mutans ATCC 25175.. Reactivación de la cepa en 10 mL agar sangre.. Se incuba a 37ºC por 24 - 48 horas en condiciones de anaerobiosis.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. ANEXO 8. Preparación del inóculo.. Cepa de Streptococcus mutans ATCC 25175.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. Colonias de Streptococcus mutans ATCC 25175.. Turbidez en la escala de Mc Farland 0.5 108. Homogenización del inoculo.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 9. Técnica de difusión en disco de los extractos de Tropaeolum majus de 10%,. UI M. IC A. 20%, 30%, 40% y control positivo Clohexidina 1,2%.. 10%. 20%. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. Control positivo: Clorhexidina (1,2 %). 40%. 30%. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 10. Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) por el método de. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Turbidimetria.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Fig. 3 Preparación de la serie de tubos de ensayo para la Concentración mínima inhibitoria.. Fig. 4. Observación de. los tubos de ensayo después de 24 horas de incubación en. anaerobiosis.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 11. Determinación de la Concentración Mínima Bactericida (CMB) por el método de dilución en agar utilizando la técnica de siembra por superficie en agar Nutritivo.. CONTROL NEGATIVO. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. CONTROL POSITIVO. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. TUBO 1. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Q. UI M. IC A. TUBO 2. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. TUBO 3. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 12. Conteo de la Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de las placas con crecimiento bacteriano.. Concentración. UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC). del extracto de. Streptococcus mutans. Tropaeolum. Numero de Repeticiones. majus. Placa 2. Placa 3. 8,5% (v/v). 40. 55. 48. 17,5% (v/v). 0. 0. 0. 35% (v/v). 0. 0. 0. 0. Promedio. UI M. IC A. Placa 1. 0 UFC 0 UFC. 0. 0 UFC. Y. 1,2%. BI. Clorhexidina. O. Q. 0. 48. 6680. 6680 UFC. RM. AC. bidestilada. IA. Agua. FA. ANEXO 13. Resúmen del conteo de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de las. TE. CA. DE. placas con crecimiento bacteriano.. IO. Efecto Bactericida de Tropaeolum majus (UFC). Petri. BI BL. Placa. 01-03. Control. Clorhexidina. Agua. 1,2%. bidestilada. -. 8.5%. 17.5%. 35%. (v/v). (v/v). (v/v). -. -. 11x 10 4. 1x 10 4. UFC. UFC. Ausencia (-) Presencia (+). 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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