Sensibilidad de Pseudomona aeruginosa y Staphylococcus aureus frente a diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina” Autor

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AC IÓ. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. Escuela Académico-Profesional De Microbiología y Parasitología. RM. Sensibilidad de Pseudomona aeruginosa y Staphylococcus aureus frente a. IN FO. diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata variedad. AS. DE. Satsuma “mandarina”. EM. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. Autor : Br. María Victoria Trujillo Laguna.. Asesor : Dr. Pedro Estuardo Mercado Martínez.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. Trujillo – Perú 2012. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE. AC IÓ. N. OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO MICROBIÓLOGO.. UN IC. Dr. Orlando Velásquez Benitez.. CO. M. RECTOR. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DE. Dra. Vilma Méndez Gil.. EM. AS. VICERRECTORA ACADÉMICA. Dr. Regné Cortéz Lara. SECRETARIO GENERAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. Hermes Escalante Añorga. DECANO. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ÁT. IC. A. Dr. César Jara Campos.. IN FO. RM. SECRETARIO. Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas DIRECTOR. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. CO. M. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. PRESIDENTE. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Dr. Pedro Mercado Martínez. Ms. C. Anibal Quintana Díaz VOCAL. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. DEL ASESOR. AC IÓ. El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la presente tesis titulada: Sensibilidad. UN IC. antibacteriana de Pseudomona aeruginosa y de Staphylococcus aureus frente a diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina”, declara que. CO. M. ésta ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas,. Y. estando en conformidad con su correspondiente proyecto y con las orientaciones brindadas a. IC. A. la tesista. En cuanto al informe, este ha sido revisado acogiendo las observaciones y. IN FO. RM. ÁT. sugerencias alcanzadas.. DE. Por lo tanto, autorizo a la Bachiller MARÍA VICTORIA TRUJILLO LAGUNA,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. Dr. Pedro Mercado Martínez. ASESOR. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del jurado examinador, declaran que la. N. presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. CO. M. UN IC. AC IÓ. aprobada por UNANIMIDAD.. IC. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. A. Y. Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Dr. Pedro Mercado Martínez. Ms. C. Anibal Quintana Díaz VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. y. AC IÓ. N. A DÍOS, por darme las fuerzas. UN IC. sabiduría para seguir adelante día a día.. CO. M. A mis amados padres Enriqueta Laguna y Santiago Trujillo por todas sus enseñanzas, su dedicación, su. IC. A. Y. sacrificio, su confianza y por el amor que siempre me. IN FO. RM. ÁT. demuestran, son los que me impulsan a seguir adelante.. A mis hermanos Joseph y Leyla, porque a. en. los. buenos. y. malos. AS. apoyándome. DE. pesar de nuestras diferencias siempre están. A mis tías Faustiniana, Flor Andina y Dolly Laguna por ser como madres para mí, por sus cuidados, y por confiar siempre en mí.. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. momentos.. RE. A Carlos Quiroz por demostrarme su. DI. amor y comprensión e incentivarme a superarme cada día. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. N. Al Dr. Pedro Mercado Martínez, mi asesor, por brindarme su apoyo, dedicación, guía y. AC IÓ. orientación durante el desarrollo de la presente investigación.. UN IC. Al profesor Luis Llenque Díaz por su tiempo, sus observaciones y sugerencias brindadas. M. en la mejora del presente informe.. CO. Al Ing. Modesto Lorenzo Vega Pang por su apoyo en la extracción del aceite de Citrus. A. Y. reticulata var. Satsuma “mandarina”.. ÁT. IC. A mis amigos Sandra Vidal, Jhomeny Nureña, Liz Gómez y especialmente a Richar. RM. Morales, por ser como hermanos para mí y por la ayuda brindada durante la ejecución y. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. redacción de esta investigación.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN IC. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. M. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. CO. títulos de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, es. A. Y. honroso presentar y someter a vuestra consideración y elevado criterio el presente informe. ÁT. IC. de tesis titulada: “Sensibilidad antibacteriana de Pseudomona aeruginosa y de. RM. Staphylococcus aureus frente a diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata. EM. AS. DE. IN FO. variedad Satsuma”, con el cual pretendo obtener el título de Biólogo-Microbiólogo.. CC. IO. N. DE. SI ST. Trujillo, Noviembre del 2012.. DI. RE. Br. María Victoria Trujillo Laguna. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA DE CONTENIDO. AC IÓ. N. Pág.. UN IC. Autoridades De La Universidad Nacional De Trujillo. iv. CO. M. Miembros Del Jurado. ii. v. Y. Del Asesor. vi. ÁT. IC. A. Aprobación. vii. IN FO. RM. Dedicatoria Agradecimientos. ix. AS. DE. Presentación. x. EM. Tabla De Contenido. xii. SI ST. Resumen. xiii. N. DE. Abstract. viii. 1. Material Y Métodos. 11. Resultados. 16. Discusión. 20. DI. RE. CC. IO. Introducción. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 25. Referencias Bibliográficas. 26. Anexos. 33. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Conclusiones. RESUMEN. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El presente trabajo. tuvo por objetivo determinar la sensibilidad de. Staphylococcus aureus y Pseudomona aeruginosa frente a diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina”. El aceite se obtuvo por el. AC IÓ. N. método de destilación por arrastre con vapor de agua, a partir del flavedo de la mandarina y para determinar la sensibilidad antibacteriana se emplearon cultivos de Staphylococcus. UN IC. aureus y de Pseudomona aeruginosa. La sensibilidad de estos microorganismos se. M. determinó por el método de difusión en agar utilizándose concentraciones de 20, 40, 60, 80. CO. y 100% de aceite; utilizando a Vancomicina y Ciprofloxacina como controles para. A. Y. Staphylococcus aureus y Pseudomona aeruginosa respectivamente. Se determinó que S.. ÁT. IC. aureus y P. aeruginosa presentaron mayor sensibilidad a las concentraciones 60, 80 y. RM. 100% de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma “mandarina”, también se determinó que. IN FO. P. aeruginosa es más sensible a ciprofloxacina que a las concentraciones del aceite. DE. mientras que S. aureus presentó mayor sensibilidad a la concentración del 100% de aceite. AS. que al control positivo (vancomicina) ya que formó un halo de sensibilidad de mayor. EM. tamaño que al antibiótico. Se concluye que S. aureus y P. aeruginosa son sensibles al. SI ST. aceite de Citrus reticulata variedad satsuma “mandarina”.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Palabras clave: Sensibilidad bacteriana, aceite, Citrus reticulata, difusión en agar.. ABSTRACT. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. This study aimed to determine the sensitivity of Staphylococcus aureus and Pseudomona aeruginosa against different concentrations of oil Citrus reticulata variety Satsuma "mandarin". The oil was obtained by the method of distillation by steam stripping. AC IÓ. N. of water from the flavedo of tangerine and to determine the antibacterial sensitivity cultures were used Staphylococcus aureus and Pseudomona aeruginosa. The sensitivity of. UN IC. these microorganisms were determined by the agar diffusion method used in. M. concentrations of 20, 40, 60, 80 and 100% oil; Vancomycin and ciprofloxacin using as. CO. controls for Pseudomona aeruginosa and Staphylococcus aureus respectively. It was. A. Y. determined that S. aureus and P. aeruginosa showed higher sensitivity levels 60, 80 and. ÁT. IC. 100% oil of Citrus reticulata var. Satsuma "mandarin" also found that P. aeruginosa is. RM. more sensitive to ciprofloxacin concentrations oil while S. aureus showed increased. IN FO. sensitivity to the concentration of oil 100% positive control (vancomycin) as halo formed a. DE. larger sensitivity to the antibiotic. We conclude that S. aureus and P. aeruginosa are. AS. sensitive to oil of Citrus reticulata variety satsuma "mandarin".. EM. Keywords: Bacterial sensitivity, oil, Citrus reticulata, agar diffusion, Staphylococcus. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. aureus, Pseudomona aeruginosa.. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN Actualmente en el mundo moderno la población crece aceleradamente y con ella. N. la transmisión de enfermedades infecciosas producidas por bacterias, virus, hongos, etc. La. AC IÓ. mayoría de enfermedades transmitidas por alimentos (ETA), son de origen bacteriano,. UN IC. siendo uno de los problemas con mayor impacto en el mundo, debido a que estas se adquieren por el consumo de alimentos y/o agua contaminados, representando un gran. CO. de reportes en los cuales se utilizan diferentes. Y. Existen una gran variedad. M. riesgo para la población en general1-3.. IC. A. vegetales como preservantes de alimentos4, pero son pocos los trabajos que relacionan su. RM. ÁT. acción contra microorganismos patógenos y menos contra patógenos intrahospitalarios,. IN FO. como Pseudomona aeruginosa y Staphylococcus aureus5. todo. el. mundo ya que produce una gran variedad de infecciones. AS. importante en. salud. DE. Las infecciones ocasionadas por cepas de S. aureus son un problema de. EM. incluyendo osteomielitis, endocarditis invasora, artritis séptica y septicemia; mientras que. SI ST. contaminación de alimentos está asociada con una forma de gastroenteritis que se manifiesta clínicamente por un cuadro caracterizado por vómitos (76% de casos) y diarrea. DE. (77% de casos). La incidencia es desconocida pero es probablemente una de las causas de. IO. N. enfermedad trasmitida por alimentos más frecuentes. Entre los alimentos implicados se. Pseudomona aeruginosa tiene una distribución mundial, es cosmopolita. Se aísla. DI. RE. CC. encuentran: ensaladas de papas y huevos, pastelería, jamón, pollo, cremas heladas7-9.. de suelos, agua, plantas, animales, incluyendo al hombre, algunas veces es patógeno para animales y vegetales., por lo que representa un importante problema de salud, especialmente en pacientes inmunocomprometidos, con cáncer, quemados o a los internos. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. en terapia intensiva; ya que puede producir complicaciones graves. Esta situación se ve agravada ya que esta bacteria presenta una muy alta resistencia natural a distintos. N. antibióticos o desinfectantes10.. AC IÓ. Pseudomona puede formar agregados bacterianos (biopeliculas) los que. UN IC. representan un problema en la salud pues contaminan dispositivos que se implantan dentro del cuerpo, como por ejemplo dispositivos intrauterinos, catéteres o válvulas cardiácas. Así. CO. M. mismo, representa un serio problema en la industria alimenticia ya que puede descomponer. Y. los alimentos que se mantienen en refrigeración. Los alimentos implicados son vegetales. ÁT. IC. A. crudos, agua, leche no pasteurizada10.11.. RM. Por lo anterior, la presencia de estos microorganismos en los alimentos así como. IN FO. en el ambiente intrahospitalario conduce a buscar alternativas de inhibición y eliminación. DE. con una mayor posibilidad de aplicación como pueden ser las sustancias naturales6.. AS. Algunas especies vegetales tales como Citrus reticulata se han reportado que. EM. poseen características antifúngicas, antimicrobianas y fitoterapéuticas, las cuales le hacen. SI ST. una especie promisoria para su uso en actividades farmacéuticas, control de plagas en el. DE. sector agrícola y la preservación de los alimentos para evitar la proliferación de. IO. N. microorganismos causantes de enfermedades12,13.. CC. El hombre desde la antigüedad ha usado sustancias naturales extraídas de las. RE. plantas, como los aceites, para combatir enfermedades y preservar alimentos. Hoy en día,. DI. estos preservantes naturales han perdido su uso debido a la aparición de sustancias químicas, sin embargo estas sustancias, tienen la ventaja de que no representan un peligro para la vida y salud del hombre14.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los aceites son las fracciones líquidas volátiles, generalmente destilables por arrastre con vapor de agua, que contienen las sustancias responsables del aroma de las plantas y cubren un amplio espectro de actividades tales como efectos farmacológicos,. AC IÓ. N. antiinflamatorios, antioxidantes y anticancerígenos; otros tienen características biocidas contra una amplia gama de organismos como bacterias, hongos, virus, protozoos, insectos. UN IC. y plantas; por lo que son importantes en la industria de alimentos (condimentos y. CO. M. saborizantes), cosmética (perfumes y aromatizantes) y farmacéutica14-17.. Y. Además; se ha estudiado la importancia de estos aceites debido a su. IC. A. disponibilidad, a los pocos efectos secundarios o a la toxicidad que pueden causar al. ÁT. hombre, así como la mejor biodegradabilidad comparado con antibióticos y preservantes. IN FO. RM. disponibles12.Por todas estas propiedades, se ha evaluado el control que pueden ejercer estos compuestos contra microorganismos patógenos en alimentos, y por tanto la. DE. posibilidad de ser utilizados como un método de eliminación de microorganismos. EM. AS. patógenos16.. SI ST. Muchas hierbas y especias han sido utilizadas durante siglos para proporcionar sabores diferentes a los alimentos y éstas pueden presentar también actividad. DE. antimicrobiana18, ya que producen una gran cantidad de compuestos secundarios como. IO. N. protección contra ataques microbianos e insectos. De hecho muchos de estos compuestos. CC. han sido usados en forma pura o extractos vegetales como alimento o aplicaciones médicas. DI. RE. en humanos25,26. Los compuestos responsables de esta actividad son a menudo fracciones del. aceite, las cuales consisten principalmente en compuestos fenólicos19,. que presentan. actividad antimicrobiana20,21, tienen gran aplicación para el control de crecimiento de. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. patógenos en alimentos por lo que se utilizan como métodos de preservación. Se ha reportado que la actividad antimicrobiana se deriva de terpenoides y compuestos fenólicos. N. en los aceites22-24.. AC IÓ. Las plantas producen una gran cantidad de compuestos secundarios como. UN IC. protección contra ataques microbianos e insectos. De hecho muchos de estos compuestos han sido usados en forma pura o extractos vegetales como alimento o aplicaciones médicas. CO. M. en humanos25,26.. A. Y. Los aceites esenciales son líquidos volátiles, casi inmiscibles en disolventes. ÁT. IC. polares asociados (agua, amoniaco), pero fácilmente solubles en los disolventes orgánicos. RM. comunes como alcohol, éter y aceites vegetales y minerales27-30, se concentran y se. IN FO. almacenan en tejidos secretores de los órganos vegetales aromáticos como hojas, corteza o frutos; y cuando esto ocurre en diferentes órganos en la misma planta, frecuentemente su. DE. composición es diferente30,31. En recientes estudios se ha demostrado la actividad. AS. antibacteriana de diversos aceites esenciales, los cuales pueden contener más de 150. SI ST. EM. componentes32,33.. DE. Poco se sabe acerca de los mecanismos de acción antimicrobiana, de los. N. compuestos mayoritarios de algunas especias, como la naranja, mandarina y otros cítricos,. CC. IO. ya sea de forma individual o como parte del aceite esencial completo34,35. Los sitios de. RE. acción de los agentes antimicrobiano en la célula microbiana, incluye a la membrana. DI. celular, pared celular, enzimas metabólicas, síntesis de proteínas y el sistema genético21, todos ellos estratégicos para la supervivencia de los microorganismos y cualquier acción sobre ellos puede inactivar a la célula microbiana.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Weber (1983) menciona que los compuestos utilizados como antimicrobianos tiene varios sitios de ataque dentro de las células microbianas y que dependiendo de las concentraciones utilizadas en los alimentos, pueden causar inhibición o inactivación de los. AC IÓ. N. microorganismos36. Conner (1993) sugirió que la actividad antimicrobiana de los aceites, se basa en el deterioro de varios sistemas enzimáticos, incluídos aquellos involucrados en. UN IC. la producción de energía y en la síntesis de componentes estructurales. Una vez que el. M. compuesto fenólico cruza la membrana celular, puede interactuar con las enzimas y con las. CO. proteínas causando un flujo contrario de protones a través de ella, afectando así a la. IC. A. Y. actividad celular19,37.. ÁT. Un método ampliamente utilizado para la evaluación de los antimicrobianos. IN FO. RM. naturales es el conocido como “zona de inhibición”38. Se trata de un método sencillo, sin embargo, el efecto inhibitorio del compuesto que se va a evaluar, dependerá de su. DE. habilidad para difundirse en el medio. Este método, cae en la clasificación de los llamados. AS. de punto final y se le conoce como “ensayo de disco”. Uno de los requisitos para obtener. SI ST. uniformemente39,40.. EM. resultados confiables y repetibles es que el microorganismo a evaluar se desarrolle rápida y. DE. La industria de los cítricos en Perú se encuentra en constante crecimiento debido. IO. N. principalmente a la demanda de naranja, mandarina y recientemente limón17. Lozano. CC. (2005) afirma que en el Perú se cultivan algunas variedades de mandarina, entre las cuales. RE. destacan las variedades, Satsuma, Clementinas, Tangerinas y Tangelos. Teniendo en. DI. cuenta que en general el flavedo de la mandarina se desecha, existe la posibilidad de viabilizar de manera comercial la extracción del aceite esencial del mismo mediante arrastre con vapor de agua41.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Toda la planta contiene aceite y principios amargos (flavonoides), las hojas maduras pueden contener alcaloides, taninos y monoterpenos, las flores contienen además glucósidos y cumarinas y la del flavedo (cáscara) del fruto contiene α-pineno, β-pineno,. AC IÓ. N. mirceno, limoneno, p-cimeno, γ-terpineno, linanol, acetato de linalilo, α-terpineol,. UN IC. citronelol, acetato de geranilo, N-metilantranilato de metilo, entre otros componentes42. En los últimos años se han realizado muchas investigaciones, que han demostrado. CO. M. el poder antimicrobiano de los aceites esenciales, especialmente los extraídos de frutas. Y. cítricas; en estos estudios se puede mencionar el de Dabbah et al43, quienes encontraron. IC. A. que los aceites esenciales de naranja y toronja mostraron tener actividad antibacteriana. RM. ÁT. contra cepas bacterianas de: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis,. IN FO. Pseudomona aeruginosa y Salmonella entre otras.. Durante las primeras tres décadas del siglo XX se establece una metodología. DE. completa para la clasificación de las variedades de mandarina que existían, esta. EM. AS. metodología estableció cuales eran los distintos patrones que se cultivaban a nivel mundial,. SI ST. dando esto lugar a la caracterización de las variedades de mandarina y a sus aceites. DE. esenciales a nivel mundial44.. N. En 1934, Nelson realizó un estudio de la composición química del aceite esencial. CC. IO. de distintas variedades de mandarina que se cultivaban en Florida, Estados Unidos. Nelson. RE. extrae los aceites esenciales al comprimir el flavedo (cáscara), su estudio determina que. DI. variedades similares de mandarina poseían aceites con diferencias en su composición química. Martínez et al. (2003) estudiaron la actividad antibacteriana y la concentración. mínima inhibitoria (CMI) del aceite esencial de mandarina (Citrus reticulata “Blanco”). 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. variedad Dancy, determinando que el aceite esencial presentó actividad antibacteriana del tipo bactericida contra B. subtilis, S. aureus y L. monocytogenes a todas la concentraciones excepto al 1%. La CMI del aceite esencial de mandarina variedad Dancy para B. subtilis. AC IÓ. N. fue de 9%, para S. aureus y L. monocytogenes fue de 7%45.. UN IC. Mazariegos (2008) investigó la composición química del aceite esencial extraído de las variedades de mandarina Citrus reshni (Mandarina Cleopatra), Citrus reticulata. CO. M. (Mandarina común) y Citrus reticulata Blanco o Citrus tangerina (Mandarina Dancy),. Y. variedades de mandarina que se producen en Guatemala. Para realizar la separación,. IC. A. identificación y cuantificación de los principales componentes de los aceites esenciales se. RM. ÁT. realizaron análisis mediante cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas,. IN FO. esta técnica instrumental permitió establecer que los aceites esenciales poseían al menos 28 componentes, 7 de los cuales se encontraban presentes en las tres variedades de mandarina. DE. investigadas. Las tres variedades de mandarina presentaron altas concentraciones relativas. AS. del hidrocarburo monoterpénico limoneno seguido del γ-terpinoleno y en menor. EM. concentración relativa, el α-terpineol y β-pineno. La cromatografía de gases acoplada a la. SI ST. espectrometría de masas permitió establecer también los tiempos de retención, así como la. DE. concentración relativa para cada uno de los componentes y más importante aún, esta. N. técnica instrumental permitió identificar a cada uno de los componentes principales. CC. IO. presentes en cada variedad, incluso los que se encontraban a niveles traza, tal es el caso del. RE. acetato 9-decenílico, el sabineno, el α-terpineno, el 1-octanol, el Z-citral y el (+)-2-. DI. careno.. Cáceres (1996) y Bergonzelli et al (2003) extrajeron aceite esencial del flavedo de la mandarina Citrus reticulata Blanco o Citrus tangerina (Mandarina Dancy) para efectuar pruebas fitofarmacéuticas, comprobando que este aceite esencial presentaba capacidad 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. inhibitoria hacia el crecimiento de bacterias tales como: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomona aeruginosa, Helycobacter pilori y. N. Salmonella sp. que resultan ser patógenas para el hombre42,46.. AC IÓ. Estos resultados hacen relevante el estudio de los aceites esenciales especialmente. UN IC. de cítricos debido a la gran importancia que tienen para la industria farmacéutica y de alimentos. Se sabe que los aceites esenciales, utilizados como aditivos en los alimentos. CO. M. tienen efecto antimicrobiano y actúan al mismo tiempo como saborizante27.. A. Y. La adquisición de enfermedades por el consumo de alimentos contaminados con. ÁT. IC. microorganismos como S. aureus o sobre infecciones por P. aeruginosa producto de. RM. infección intrahospitalaria, ha hecho que cada vez más países reconozcan la necesidad de. DE. sobre microorganismos patógenos.. IN FO. someter especies naturales a ciertas pruebas o estudios enfocados en evaluar su efecto. AS. Además; existe un gran número de trabajos donde se demuestra la acción. EM. antibacteriana que tienen los aceites de diferentes especies de vegetales como el orégano,. SI ST. el ajo, incluso algunos cítricos como la naranja, la toronja incluso de mandarina Citrus. DE. reticulata Blanco (Dancy), pero son pocos los estudios en relación al efecto que tiene el. N. aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina” contra microorganismos. CC. IO. patógenos.. RE. Debido a esto y teniendo en cuenta que en el Perú se cultivan principalmente. DI. mandarina Citrus reticulata variedad Satsuma, y que no se han reportado estudios sobre el efecto del aceite extraído de esta planta sobre diferentes microorganismos patógenos, y teniendo en cuenta que por lo general el flavedo de mandarina se desecha, se pretende llevar a cabo la obtención del aceite del flavedo a partir del cual se evaluará su actividad. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. antimicrobiana frente a microorganismos causantes de enfermedades transmitidas por alimentos como por infección intrahospitalaria como Staphylococcus aureus y. N. Pseudomona aeruginosa.. AC IÓ. Por lo anterior y debido a que el aceite de las diferentes especies vegetales es. UN IC. utilizada en Perú como en muchos países como saborizantes o también como preservante19, podría utilizarse el aceite extraído del flavedo de mandarina como antimicrobiano en la. CO. M. industria de los alimentos para este caso contra Staphylococcus aureus; además de. Y. determinar la sensibilidad de Pseudomona aeruginosa frente al aceite de mandarina. ÁT. IC. A. variedad Satsuma y así poder sugerir su uso como sanitizante o desinfectante natural.. RM. A partir de esta investigación se podrían realizar posteriores investigaciones. IN FO. acerca de la actividad antibacteriana de este aceite sobre otros microorganismos patógenos así como también estudiar la composición química del aceite y de esta manera se podría. AS. DE. determinar y aislar el componente responsable de la actividad antibacteriana.. -. SI ST. EM. El presente trabajo tiene como objetivos: Determinar la sensibilidad de. Staphylococcus aureus y Pseudomona. DE. aeruginosa frente a las diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata. Determinar que concentración del aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma. DI. RE. CC. -. IO. N. variedad Satsuma “Mandarina”.. es significativamente más eficaz y cuál es la mejor en relación al antibiótico (ciprofloxacina), comúnmente usado, contra Pseudomona aeruginosa.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. -. Determinar que concentración del aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma es significativamente más eficaz y cuál es la mejor en relación al antibiótico. Determinar cuál de las bacterias empleadas (Pseudomona aeruginosa y. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. Staphylococcus aureus) es significativamente más sensible.. AC IÓ. -. N. (vancomicina), comúnmente usado, contra Staphylococcus aureus.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS MATERIAL BIOLÓGICO Nueve cultivos de Pseudomona aeruginosa (FGB-001 a FGB-009), aislados de. AC IÓ. N. -. Genética Bacteriana de la Universidad Nacional de Trujillo.. Nueve cultivos de Staphylococcus aureus (ST-001 a ST-009), proporcionados por. CO. M. -. UN IC. ambientes intrahospitalarios, proporcionados por el Laboratorio de Fisiología y. A. Y. el Laboratorio Referencial del Ministerio de Salud de la ciudad de Trujillo.. IC. Citrus reticulata variedad Satsuma “Mandarina”, obtenidos en el mercado “La. -. RM. ÁT. Hermelinda” de Trujillo.. Obtención del extracto de aceite esencial de mandarina. DE. 1.. IN FO. PROCEDIMIENTO. EM. AS. 1.1. Obtención de frutos de Citrus reticulata variedad Satsuma.. SI ST. Se adquiririó 20 kg de los frutos de mandarina variedad Satsuma en el. DE. mercado “La Hermelinda” de Trujillo, y se trasladaron al laboratorio.. IO. N. 1.2. Extracción del aceite aceite esencial. DI. RE. CC. 1.2.1. Selección Sólo fueron utilizadas aquellas mandarinas que no presentaron magulladuras, cortes o demás lesiones en su flavedo que indicaban que no estaban aptas para entrar al proceso de extracción.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.2.2. Lavado y pelado Se realizó con el propósito de eliminar restos de partículas. N. extrañas, suciedad y restos de tierra y pesticidas que puedan estar. AC IÓ. adheridos a la materia prima y posteriormente se pelaron los frutos ya. UN IC. limpios.. CO. M. 1.2.3. Cortado. Y. En esta etapa se extrajo la parte blanca de la cáscara y se cortó en. IC. A. trozitos pequeños solo el flavedo de las mandarinas, para aumentar el. RM. ÁT. área de contacto con el vapor de agua.. IN FO. 1.2.4. Extracción. DE. Se realizó en los equipos de extracción por arrastre con vapor. AS. (Anexo 1) en donde se colocaron 150 g del flavedo en un balón de 1000. EM. mL el cual fue calentado en una cocina hasta alcanzar la temperatura de. SI ST. ebullición del agua lo cual generó la salida de los aceites esenciales. El aceite esencial que se obtiene fue arrastrado por el vapor de agua, que al. extraída se centrifugó a 6000 rpm durante 15 min, con el fin de separar la fase acuosa de la oleosa, la separación de la menor porción de aguase hizo con la ayuda de una jeringa.. DI. RE. CC. IO. N. DE. condensarse formó una mezcla de aceite más agua. La fracción de aceite. El tiempo de extracción fue de 80 min, contándose desde el instante en el que caerá la primera gota en la pera de decantación36.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.2.5. Envasado El aceite fue envasado en frascos ambar, debido a que son. AC IÓ. N. inestables fotoquímicamente.. UN IC. 1.2.6. Almacenamiento. M. Se conservó en refrigeración a 4 ºC para los análisis posteriores.. Y. CO. 2.- Preparación de los inóculos bacterianos. IC. A. 2.1. Reactivación de los Cultivos bacterianos. RM. ÁT. Cada cultivo bacteriano fue reactivado en caldo infusión cerebro corazón. IN FO. (BHI) por 18 horas a 37 °C y posteriormente sembrado en Agar BHI por 18. DE. horas a 37 °C.. AS. 2.2. Estandarización de los inóculos bacterianos. EM. Las colonias de Staphylococcus aureus y de Pseudomona aeruginosa. SI ST. fueron suspendidas en solución salina fisiológica estéril hasta alcanzar la. DE. turbidez equivalente al tubo N°1 del Nefelómetro de Mac Farland. N. (3x108ufc/mL), realizándose el recuento respectivo para comprobar dicha. DI. RE. CC. IO. concentración.. 3.- Preparación de las diferentes concentraciones de aceite esencial El aceite obtenido fue considerado como tratamiento al 100%, a partir del cual se realizaron diluciones para obtener las concentraciones de 20, 40, 60 y 80% de aceite 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de Citrus reticulata; utilizando como solvente etanol absoluto. Se tuvo en cuenta que las concentraciones de aceite preparadas no estuvieran en contacto con la luz, debido a. N. que es fotosensible.. AC IÓ. 4.- Prueba de Sensibilidad. UN IC. La actividad antibacteriana del aceite de mandarina se determinó utilizando los. M. cultivos bacterianos, siguiendo la técnica de difusión en agar en placas que contenían. Y. CO. de 22 a 25 ml de agar Mueller-Hinton12, por triplicado.. IC. A. Se sumergió un hisopo estéril en la suspensión bacteriana preparada a partir del. ÁT. cultivo joven bacteriano, previamente estandarizado, y sembró por estría en las placas. IN FO. RM. preparadas.. A cada placa se le hizo 3 orificios de 4 mm de diámetro y 4 mm de profundidad. DE. cada uno utilizando un sacabocado estéril, posteriormente a cada orificio se agregó. AS. 50uL de cada una de las concentraciones de aceite de Citrus reticulata y las placas se. SI ST. EM. incubarán a 37°C por 24 horas.. La actividad antibacteriana del aceite se determinó midiendo el halo de. DE. inhibición, el tamaño de esta zona de inhibición indicó si las bacterias objeto de. IO. N. análisis tienen una sensibilidad alta, intermedia o baja frente a las soluciones del. DI. RE. CC. aceite2,3,13,14. También se evaluaron tres placas control utilizando discos de los antibióticos. vancomicina y ciprofloxacina como controles positivos para Staphylococcus aureus y Pseudomona aeruginosa respectivamente y como control negativo se agregó 50 uL de etanol absoluto.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 5.- Análisis Estadístico Los halos de sensibilidad (mm) de Staphylococcus aureus y Pseudomona. N. aeruginosa fueron sometidos al test de Kolmogorov-Smirnov para determinar la. AC IÓ. distribución normal de los valores (Normal: p>0.05, y No Normales: p<0.05). Como. UN IC. los valores no siguieron una distribución normal fueron analizados con el test no paramétrico de Kruskal-Wallis para determinar diferencia significativa entre. CO. M. tratamientos, posteriormente se realizó la prueba de comparaciones múltiples no. Y. paramétrica de Dunn con un intervalo de confianza del 95%, y para determinar la. IC. A. diferencia significativa entre concentraciones de aceite y cultivo de bacteria se utilizó. para lo que se utilizaron los programas. IN FO. utilizaron los programas estadísticos. RM. ÁT. del test Z de kolmogorov-Smirnov para dos muestras independientes; para lo cual se. estadísticos SPSS Statistics 17.0 para Windows, G-Stat 2.0 y Microsoft Office Excel. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. 200747.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En la Fig. 1 se demuestra que Staphylococcus aureus es más sensible a la. N. concentración del 100% de aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma “Mandarina” que. AC IÓ. a las otras concentraciones empleadas y además que es significativamente más sensible en. UN IC. relación a la vancomicina (p<0.05).. M. En la Fig. 02 se demuestra que Pseudomona aeruginosa es más sensible a la. CO. concentración del 100% de aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma “Mandarina” que. A. Y. a las otras concentraciones empleadas y además que es significativamente menos sensible. ÁT. IC. en relación a la ciprofloxacina (p<0.05).. RM. En la Fig. 03. Se muestra la comparación entre los diámetros de los halos de. IN FO. sensibilidad de Pseudomona aeruginosa y los diámetros de los halos de sensibilidad de. DE. Staphylococcus aureus observándose que existe diferencia significativa entre ambas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. especies, con un p<0.05 a todas las concentraciones.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CC I. O. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos (p<0.05).. RE. Fig. 1 Halos de sensibilidad (mm) de Sthaphylooccus aureus por la acción de las diferentes concentraciones (20,. DI. 40, 60, 80 y 100%) de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma y del grupo control “vancomicina”.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. O. N. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos.. CC I. Fig. 2 Halos de sensibilidad (mm) de Pseudomona aeruginosa por la acción de las diferentes concentraciones (20,. DI. RE. 40, 60, 80 y 100%) de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma y del grupo control “ciprofloxacina” (p<0.05).. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. O. N. Letras diferentes presentan diferencia significativa entre grupos.. CC I. Fig. 3 Comparación de promedios de los halos de sensibilidad (mm) de Staphylococcus aureus y de Pseudomona. DI. RE. aeruginosa a concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100% de aceite de Citrus reticulata (p<0,05). 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN Se han reportado estudios donde se indica que las especie vegetales cítricas,. N. poseen características antifúngicas, antimicrobianas y fitoterapéuticas, las que las hacen. AC IÓ. una especie promisoria para evitar la proliferación de microorganismos causantes de. UN IC. enfermedades12,13; como el de Dabbah et al43, quienes encontraron que los aceites de naranja y toronja mostraron tener actividad antibacteriana contra cepas bacterianas de:. CO. M. Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomona aeruginosa y. A. Y. Salmonella entre otras.. ÁT. IC. En recientes estudios se ha demostrado la actividad antibacteriana de diversos. RM. aceites, aunque poco se sabe acerca de los mecanismos de acción antimicrobiana de los. IN FO. compuestos mayoritarios de algunas especias, como la naranja, mandarina y otros cítricos,. DE. ya sea de forma individual o como parte del aceite esencial completo32-35.. AS. En los resultados obtenidos se muestra que tanto Staphylococcus aureus como. EM. Pseudomona aeruginosa son sensibles al aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma,. DE. respectivamente.. SI ST. formando halos de inhibición con diámetros entre 21 y 28 mm y de 9 y 15 mm. IO. N. En la Fig. 1 se demuestra que Staphylococcus aureus muestra una menor. CC. sensibilidad frente a la acción del aceite de Citrus reticulata, para las concentraciones de. RE. 20 y 40%, por la formación de halos de 21 y 22 mm respectivamente, en comparación con. DI. el halo de sensibilidad formado por el antibiótico Vancomicina (Control) que fue de 26 mm, mayor a los antes mencionados, existiendo p<0.05, lo que demuestra que existe diferencia significativa entre los halos de sensibilidad formado entre cada una de estas. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. concentraciones de aceite con el formado por el control positivo (Vancomicina), el cual es significativamente mayor a los formados por las concentraciones de 20 y 40% .. N. Se observa también que los halos de sensibilidad formados a las concentración de. AC IÓ. 60 y 80% del aceite respecto al halo de sensibilidad formado por Vancomicina presentan. UN IC. p>0.05, lo que significa que no existe diferencia significativa entre la eficacia de estos tratamientos, indicando que tienen el mismo efecto sobre Staphylococcus aureus; mientras. CO. M. que el halo formado a la concentración del 100% de aceite supera al halo formado por el. Y. antibiótico Vancomicina, presentando un p<0.05, lo cual indica que el halo de sensibilidad. IC. A. formado por el aceite al 100% es significativamente mayor al formado por el control. RM. ÁT. positivo (vancomicina).. es. IN FO. Estos resultados nos permite asegurar que Staphylococcus aureus. significativamente más sensible al 100% de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma que al. DE. antibiótico utilizado, determinando que mientras mayor sea la concentración del aceite,. EM. AS. S.aureus presentará una mayor sensibilidad.. SI ST. En la Fig. 2 se muestra que el mayor halo de sensibilidad de Pseudomona. DE. aeruginosa es de 15,00 mm y el menor de 9,00 mm a las concentraciones de aceite del. N. 100% y 20% respectivamente; sin embargo, Pseudomona aeruginosa presentó un halo de. CC. IO. sensibilidad de 33,00 mm frente a ciprofloxacina, el cual es mucho mayor que el formado. RE. frente al 100 % de aceite, existiendo un p<0,05, lo cual indica que Pseudomona aeruginosa. DI. es menos sensible al aceite de Citrus reticulata var. Satsuma que al antibiótico (Ciprofloxacina). En la Fig. 3 se presentan la comparación de los promedios de los halos de inhibición de cada concentración de aceite presentado en la Fig. 1 y Fig. 2, observándose. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. que en todas sus concentraciones Staphylococcus aureus presenta mayor sensibilidad en comparación con la sensibilidad presentada por Pseudomona aeruginosa; siendo la. N. concentración de 100 % la que tiene mejor efecto sobre ambas bacterias.. AC IÓ. Pseudomona aeruginosa presentó menor sensibilidad al aceite esencial de Citrus. UN IC. reticulata var. Satsuma que Staphylococcus aureus, estos resultados son los mismos encontrados en trabajos anteriores (Demo et al., 2005 y Sartoratto et al. 2004), ésta. CO. M. diferencia se debería a la estructura de sus membranas ya que las Gram negativas (P.. Y. aeruginosa), poseen una pared celular más compleja compuesta por dos capas situadas por. IC. A. fuera de la membrana citoplasmática, la primera y más cercana a la membrana es similar. RM. ÁT. (más delgada) a la de las bacterias Gram positivas, está constituida por péptidoglicanos, la. IN FO. segunda denominada membrana externa está constituida por fosfolípidos con ácidos grasos saturados y entre las dos capas se halla un espacio periplasmico rico en enzimas, esta. DE. estructura les confiere un mayor grado de resistencia a los agentes antimicrobianos 51,. AS. además poseen mecanismos de defensa como: presencia de b-lactamasas, modificación. EM. enzimática del agente antimicrobiano, cambios en la permeabilidad de la membrana. SI ST. externa debida a la presencia de bombas de expulsión, etc, que generan dificultades para. DE. encontrar sustancias que sean efectivas contra ellas52.. IO. N. La actividad biológica demostrada en este estudio coincide con los resultados. CC. obtenidos por Martínez et al. (2003) quienes observaron actividad antibacteriana del aceite. RE. esencial de Citrus reticulata variedad Dancy contra S. aureus, E. faecalis, E. coli,. DI. Klebsiella sp. y Proteus mirabilis y menor actividad frente a P. aeruginosa; así como los hallazgos de Sartoratto et al. (2004) quienes determinan que las bacterias Gran negativas: Escherichia coli, Pseudomona aeruginosa, Salmonella tiphymurium, Salmonella cholerae suis y Vibrio cholerae y las bacterias Gram positivas: Staphylococcus aureus y Bacillus 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cereus, mostraron diferentes grados de sensibilidad, concluyendo en que el aceite de Citrus reticulata posee alta actividad microbiana contra todas las bacterias Gram positivas. N. evaluadas que contra las Gram negativas49,50.. AC IÓ. Bergonzelli et. al. en 2003, en su estudio sobre la caracterización de los. UN IC. componentes del aceite de algunos cítricos como la mandarina, la naranja, la lima y la Toronja han demostrado que poseen los siguientes compuestos como componentes. CO. M. mayoritarios: limoneno, α-pineno, β-pineno, mirceno, p-cimeno, γ-terpineno, linalol,. Y. acetato de linalilo, α-terpineol, citronelol, acetato de geranilo, N-metil antranilato de. IC. A. metilo, entre otros46. La identificación del componente principal de estos cítricos lo llevó a. RM. ÁT. cabo mediante cromatografía de gases, su estudio determinó que más del 90% del aceite de. IN FO. Citrus reticulata lo compone el limoneno el cual presenta una gran capacidad inhibitoria de crecimiento bacteriano en los alimentos, principalmente sobre las bacterias Gram. DE. positivas53. Aunque es importante mencionar que la información publicada acerca de la. AS. composición química del aceite esencial extraído del flavedo de la mandarina es limitada a. SI ST. EM. nivel nacional e internacional54.. Aunque no se conoce con exactitud el mecanismo de acción de los componentes. DE. del aceite de Citrus reticulata, se sabe que posiblemente los sitios de acción en la célula. IO. N. bacteriana incluya a la membrana celular, pared celular, enzimas metabólicas, síntesis de. CC. proteínas y el sistema genético, todos ellos estratégicos para la supervivencia de los. DI. RE. microorganismos y cualquier acción sobre ellos puede inactivar a la célula microbiana21. La acción de estos compuestos se basa principalmente en el deterioro de varios. sistemas enzimáticos, incluídos aquellos involucrados en la producción de energía y en la síntesis de componentes estructurales. Una vez que el compuesto fenólico cruza la. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. membrana celular, puede interactuar con las enzimas y con las proteínas causando un flujo contrario de protones a través de ella, afectando así a la actividad celular19,37. Mencionándose que los sitios de ataque dentro de las células microbianas dependen de las. AC IÓ. N. concentraciones utilizadas en los alimentos, pudiendo causar inhibición o inactivación de. UN IC. los microorganismos36.. De acuerdo a los resultados obtenidos y basándose en trabajos anteriores49, 50, se. CO. M. puede afirmar que Staphylococcus aureus presentó mayor sensibilidad al aceite de Citrus. Y. reticulata que P. aeruginosa y que este efecto inhibitorio contra las cepas Gram positivas. P. aeruginosa. y Staphylococcus aureus no son. IN FO. También se evidenció que. RM. ÁT. constitución de las membranas de las bacterías55-58.. IC. A. es debido a los componentes propios del aceite así como también a la estructura y. sensibles al control negativo, etanol absoluto (Anexo 6 y 7), ya que no se observó la. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. formación de halos, mostrando la resistencia de estos microorganismos al disolvente.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. AC IÓ. N. 1. Staphylococcus aureus y Pseudomona aeruginosa son sensibles a las diferentes concentraciones (20, 40, 60, 80 y 100%) de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma. UN IC. “mandarina”.. CO. M. 2. La concentración del 100% de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma “mandarina” es. Y. significativamente más eficaz contra Staphylococcus aureus que las otras. IC. A. concentraciones y que vancomicina.. RM. ÁT. 3. La concentración del 100% de aceite de Citrus reticulata var. Satsuma “mandarina” es. IN FO. significativamente más eficaz contra Pseudomona aeruginosa que las otras. DE. concentraciones empleadas, pero menos eficaz que Ciprofloxacina.. AS. 4. El aceite de Citrus reticulata var. Satsuma es significativamente más eficaz contra. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Staphylococcus aureus que contra Pseudomona aeruginosa.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Brack A, Heinz P. Perú Maravilloso. Edit. Epenza., 2002.. 2.. García R. Microorganismos de los alimentos. Su significado, métodos de. AC IÓ. N. 1.. 3.. UN IC. enumeración. Ed. 2. Edit. Acribia S.A. 2000. 48.. Müller G. Microbiología de los Alimentos Vegetales. Editorial Acribia S.A.. CO. M. Zaragoza. España. 1981. 152,153.. Oussalah M, Caillet S, Lacroix M. Mechanism of Action of Spanish Oregano,. A. Y. 4.. ÁT. IC. Chinese Cinnamon, and Savory Essential Oils against Cell Membranes and Walls of. RM. Escherichia coli O157:H7 and Listeria monocytogenes. J Food Prot. 2006. 69 (5):. IN FO. 1046-1055. Lambert R, Skandamis P, Coote P, Nychas G. A study of the minimum inhibitory. DE. 5.. AS. concentration and mode of action of oregano essential oil, thymol and carvacrol. J. EM. ApplMicrobiol, 2001. (91): 453-462 Soberón, G. Pseudomona aeruginosa, Instituto de Biotecnología, Universidad. SI ST. 6.. DE. Nacional Autónoma de México. 2007. Jensen A., Wachmann C., Poulsen K., Esperse F., Scheibel J., Skinhoj P. et al. Risk. IO. N. 7.. CC. factor for hospital-acquired Staphylococcus aureus bacteremia. Arch Intern. DI. RE. Med.1999. 159: 1437-1444.. 8.. Dinges M., Orwin P., Schlievert P. Exotoxins of Staphylococcus aureus. Clinical Microbiology Reviews. 2000. 13: 16-34. 9.. Lowy F. Staphylococcus aureus infections. N Engl J Med 1998. 339: 520-532. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10.. Huang C, Lin T, Wang Ch. Community acquired Pseudomonas aeruginosa sepsis in previously healthy infants and children: analysis of forty-three episodes. Pediatr. N. Infect Dis J. 2002; 21: 1049-52. Mull C., Scarfone R., Conway D. Case report. Ecthymagangrenosum as a. AC IÓ. 11.. UN IC. manifestation of Pseudomonas sepsis in a previously healthy child. Ann Emerg Med.. M. 2000. 36: 383-7. Kalemba D., Kunicka A. Antibacterial and Antifungical Properties of Essential Oils.. CO. 12.. IC. A. Y. Current Medicinal Cheministry. Poland. 2003. 10: 813-829. Carrillo I. Efecto de la actividad de agua, pH y temperatura de incubación en la. ÁT. 13.. 14.. IN FO. RM. capacidad antimicótica de mezclas de benzoato de sodio-vainilla. UDLAP. 1999 Hersom A, Hulland E. Conservas Alimenticias. Editorial Acribia S.A. Zaragoza.. AS. DE. España. 1974. 61-62.. Morales V. Extracción y Caracterización del aceite esencial de Lima ThaitíCitrus. EM. 15.. SI ST. aurantifolia (Chritms) Swingle. Trabajo especial de Grado. LUZ. Facultad. DE. Experimental de Ciencias, Maracaibo, Venezuela. 1996. 18-19. Conner D, Beuchat L. Effects of essential oils form plants on growth of food. N. 16.. Smith P, Stewart J, Fyfe L. Antimicrobial properties of plant essential oils and. DI. RE. 17.. CC. IO. spoilage yeasts. J. food Sci. 1984. 49: 429-434.. essences against five important food-borne pathogens. Letters in Applied. Microbiology. 1998. 26 (2): 118-122.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 18.. Ultee A., Bennik M., Moezelaar R. The Phenolic Hydroxyl Group of Carvacrol Is Essential for Action against The Food Bome Pathogen Bacillus cereus. Applied and. N. environmental microbiology. 2002. 1561-1568. Conner D. Naturally occurring compounds, Antimicrobials in foods. New York.. AC IÓ. 19.. UN IC. 1993. 441-468.. Akgul A., Kivanc M. Inhibitory effect of six Turkish thyme-like spices on some. M. 20.. Y. CO. emmon food-borne bacteria. Die Nahrung. 1988. 32 (2): 201-203.. Albado P., Saez E., Ataucusi G. Composición química y actividad antibacteriana del. IC. A. 21.. ÁT. aceite esencial del Origanumvulgare (orégano).RevMedHered, ene./mar. 2001, 12. IN FO. RM. (1):16-19. 22.. Takarada K., Kimizuka R., Takahashi N., Honma K., Okuda K., Kato T. A. DE. comparison of the antibacterial efficacies of essential oils against oral pathogens.. EM. AS. Oral MicrobiolImmunol. 2004; 19(1):61-4. Acosta M., González M., Araque M., Velazco E., Khourl N., Rojas L., Usubillaga. SI ST. 23.. A.. Composición química de los aceites esenciales de Ocimumbasilicum L.. DE. varbasilicum, O. basilicum L. varpurpurenscens, O. gratissimum L., y O. tenuiflorum. IO. N. L., y su efecto antimicrobiano sobre bacterias multiresistentes de origen nosocomial.. RE. CC. Universidad de Los Andes, Mérida, Venezuela. Revista de la Facultad de Farmacia.. DI. 2003. 45 (1): 19-24.. 24.. Dellacasa A., Duschatzhy C., Bailac P., Carrascull A., Ponzi M. Propiedades antimicrobianas del aceite esencial de Heterotheca latifolia Buck (Compositae). J. Essent. Oil Res. 1999. 11: 262-263.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Wallace J. Symposium on “Plants as animal foods: a case of catch 22. Antimicrobial. 25.. propeties of plant secondary metabolites. 2004. Kim J., Marshall M., Wei Ch. Antibacterial Activity of Some Essential Oil. N. 26.. AC IÓ. Components against Five Food-borne Pathogens. J. Agric. Food Chem. 1995. 43:. UN IC. 2839-2845.. Cabra E. Los aceites esenciales, Panorama Internacional y del Mercado Colombiano.. M. 27.. Y. CO. Tecnología. 1988. 175 (5): 55-60.. Balchin L., Buchbauer G., Hirtenlehner T., Resch M. Antimicrobial activity of. IC. A. 28.. ÁT. Pelargonium essential oils added to a quiche filling as a model food system. Letters. IN FO. RM. in Applied Microbiology. 1998. 27: 207-210. 29.. Muñoz F. Plantas medicinales y aromáticas: Estudio, cultivo y procesado.. Ediciones. AS. DE. Mundi-Prensa. 4ª Reimpresión. Madrid-España, 2002. Norman W. Elementos de Tecnología de alimentos. Ed. 13. Edit. Continental S.A. de. EM. 30.. SI ST. C.V. México. 1998.. Oussalah M., Caillet E., Saucier E., Lacroix L. Inhibitory effects of selected plant. DE. 31.. N. essential oils on the growth of four pathogenic bacteria: E. coli O157:H7. Salmonella. CC. IO. typhimutium, Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes.Canadá. 2005. 414-. DI. RE. 420.. 32.. Pérez T. Efectividad de los vapores de aceites de tomillo y orégano como agentes antibacterianos. Tesis de maestría. Universidad de las Américas. Puebla, México. 2006.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 33.. Smid E., Gorris L. Natural antmicrobials for food preservation. In Handbook of Food Preservation; Rahman M, Ed, Marcel Dekker: New York. 1999. 285-308. Rhayour K., Bouchikhi T., Tantaoui E., Sendide K., Remmal A. The mechanism of. N. 34.. AC IÓ. bactericidal action of oregano and clove essential oils and of their phenolic major. UN IC. components on Escherichia coli and Bacillus subtilis. JEOR. 2003. 15 (5): 356-362. López J., Gagnon H., Collin G., Pichette A. Essent Oil Res. 2005. 17: 1-7.. 36.. Webber, Barchelor. Citrus Industry. Univ. Calif. Press. 1983. 1: 999.. 37.. Stashenko E. “Comparación de la composición y de la actividad antioxidante in vitro. IC. A. Y. CO. M. 35.. RM. ÁT. de los metabolitos secundarios volátiles de plantas de la familia Verbenaceae” revista. IN FO. de la academia Colombiana de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales. 27 (105): 579-. DE. 596.. Zaika L. Spices and herbs: Their antimicrobial activity and its determination. J. Food. AS. 38.. EM. Safety. 1988. 9:97-118.. Davidson P., Parish M. Methods for testing the efficacy of food antimicrobials.. SI ST. 39.. DE. FoodTechnol. 1989. 43: 148-155. Martínez M. Aceites Esenciales. Facultad de Química Farmacéutica. Medellín.. IO. N. 40.. RE. CC. Universidad de Antioquía. 2001. 1-12.. DI. 41.. Lozano A., Loarca G., Lecona S., Mejía E. El orégano: Propiedades, Composición Y Actividad Biológica De Sus Componentes. Archivos Latinoamericanos de Nutrición (ALAN). 2005. 4.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 42.. Cáceres A. Plantas de Uso Medicinal en Guatemala. Primera Edición. Editorial Universitario. Universidad de San Carlos de Guatemala. 1996. 150-155, 228-230,. N. 283-286. .Dabbah R., Edwards A., Motas W. Antimicrobial Activity of Some Citrus Fruits. AC IÓ. 43.. UN IC. Oils on Selected Food- Borne Bacteria. Appl. Microbiology. 1970. 19 (1): 27-31.. Tanaka C. Principal Citrus Fruit of the World. Kyushu Imp. Univ. Dep. Arg. Mull.. M. 44.. Y. CO. 1924. 20.. Martinez J., Sulbaran B., Ojeda G. et al. Actividad antibacteriana del aceite esencial. IC. A. 45.. RM. ÁT. de mandarina.Rev. Fac. Agron. 2003. 20 (4): 502-512.. Bergonzelle E., Donnicola D., Porta N., Cortéis E. Essential oils as components of a. IN FO. 46.. diet-based approach to management of Helicobacter infection. Journal Antimicrob. AS. DE. Agents Chemother 2003; 47(10): 3240-3246. Magallanes C., Córdova C., Orozco R. Actividad antibacteriana de extractos. EM. 47.. SI ST. etanólicos de macroalgas marinas de la costa central del Perú. Rev. Peru Biol. Lima.. DE. 2003. 10 (2): 125-132.. Sacsaquispe R., Velasquez J. Manual de procedimientos para la prueba de. N. 48.. CC. IO. sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión. Instituto Nacional de. DI. RE. Salud. Laboratorio de bacteriología Especial. Lima. 2002.. 49.. Demo M., Olivia D., López L., Zunino P., Zygadla J. Antimicrobial activity of essential oils obtained from aromatic plants of Argentina. Pharmaceut Biol. Argentina. 2005; 43 (2): 129-134.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 50.. Sartoratto A., Machado A., Delarmelino C., Figueroa G., Duarte M., Rehder L., composition and antimicrobial activity of essential oils from aromatic plants used in. N. Brazil. Braz I Microbiol. Brasil. 2004; 35 (4): 275-280. Martínez M. Morfología y estructura bacteriana. Bogotá. 2009.. 52.. Leal A. Mecanismos de resistencia en Pseudomona aeruginosa: entendiendo a un. UN IC. AC IÓ. 51.. M. peligroso enemigo. Departamento de Microbiología, Facultad de Medicina. Y. CO. Universidad Nacional de Colombia. Bogotá. 1997.. Kimball D. Procesado de cítricos. Edit. Acribia S.A. España. 2002; 234.. 54.. Giacomo A., Retamar J. Aceites esenciales de species vegetale: Biodiversidad de sus. RM. ÁT. IC. A. 53.. IN FO. productos químicos. IPNAVS. Argentina. 1987. 1: 149-162. Cronquist A. An integrated system of classification of flowering plants. Columbia. DE. 55.. AS. University Press. N.Y. USA. 1981. 602-603.. 1973. 229.. Frazier W., Westhoff D. Microbiología de los Alimentos. Ed. 3. Editorial Acribia. DE. 57.. EM. Domínguez, X. Métodos de Investigación Fitoquímica. Ediciones Limusa. México.. SI ST. 56.. Kim J., Marshall M., Wei Ch. Antibacterial Activity of Some Essential Oil. RE. 58.. CC. IO. N. S.A. Zaragoza. España. 1978. 316.. DI. Components against Five Food-borne Pathogens. J. Agric. Food Chem. 1995. 43: 2839-2845.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. ANEXOS. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..