Efecto Inhibitorio In Vitro Del Vino Tinto Var Cabernet Sauvignon Sobre Streptococcus Mutans Atcc 25175

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(1)Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. FO R. MA TI. CA. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA. IN. “Efecto Inhibitorio In vitro del vino tinto var. Cabernet Sauvignon. MA S. E. sobre Streptococcus mutans ATCC 25175”.. TESIS. TE. PARA OPTAR EL GRADO DE:. DE. SI S. BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA. Autor:. OF. IC. IN. A. Juan Carlos Trelles Zegarra. Asesores: Mg. GUSTAVO GUARDIA MÉNDEZ Dra. ELVA MEJÍA DELGADO. Trujillo – Perú 2012. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. DEDICATORIA. CA. A Dios y a la Virgen del Socorro, porque día y noche cuidaron tanto de. MA TI. mi familia como de mí, gracias por todo lo que me dan y lo que no. Sé que siempre están a mi lado velando por mi progreso, protéjanme y. FO R. permítanme seguir creciendo como persona y como profesional.. ver concluir. IN. A mi amado padre Mario, porque a pesar de que partiste antes de mis estudios, hasta en los últimos momentos me. MA S. E. inculcaste esas ganas de salir adelante a través del estudio.. TE. Gracias por ser mi ángel guardián.. A mi adorada madre Lucy, porque eres el pilar del hogar y mi. SI S. amiga; gracias por tu infinita paciencia, tus sabios consejos y ese. DE. cariño que me brindas día a día.. IN. A. A mis queridos hermanos Fiorella, Mario y Ximena, porque juntos. IC. pasamos por alegrías, tristezas, derrotas y éxitos. Los quiero demasiado. OF. para expresarlo en palabras, gracias porque sin ustedes nada sería igual.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. AGRADECIMIENTOS. CA. A mi asesor, el Dr. Gustavo Guardia Méndez. MA TI. por sus sabios consejos y la amistad que me. FO R. brindó desde siempre .Muchas gracias.. A mi coasesora la Dra. Elva Mejía Delgado. IN. por su orientación, paciencia y apoyo en el. Muchas gracias. MA S. E. transcurso de la carrera y en este trabajo.. TE. A mi familia en general porque a pesar de la. SI S. distancia, muchos de ustedes siempre. OF. IC. IN. A. importantes.. DE. estuvieron en los momentos más. A los amigos que siempre estuvieron para escucharme, aconsejarme y brindarme su apoyo cuando lo necesité. Siempre estarán en mi corazón.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. INDICE. CA. RESUMEN ........................................................................................................................... .4 ABSTRACT........................................................................................................................... .5 INTRODUCCIÓN ...................................................................................................... .6. MA TI. I.. PROBLEMA: ...................................................................................................... .15. 1.2.. HIPÓTESIS:........................................................................................................ .15. 1.3.. OBJETIVOS: ....................................................................................................... .15. IN. FO R. 1.1.. MATERIAL Y MÉTODOS ........................................................................................ .16. E. II.. MATERIAL DE ESTUDIO: ................................................................................... .16. 2.2.. PROCESO DE CAPTACIÓN DE INFORMACIÓN: ................................................. .22. MA S. 2.1.. RESULTADOS ........................................................................................................ .32. IV.. DISCUSIÓN ........................................................................................................... .39. V.. CONCLUSIONES .................................................................................................... .44. VI.. RECOMENDACIONES ............................................................................................ .45. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: ........................................................................... .46. IN. A. DE. SI S. TE. III.. OF. IC. ANEXOS ............................................................................................................................ .53. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. RESUMEN. El presente estudio evaluó el efecto inhibitorio In vitro del vino tinto var.. CA. Cabernet Sauvignon sobre Streptococcus mutans ATCC 25175; para lo. MA TI. cual se determinó la concentración inhibitoria mínima y el efecto bactericida de esta bebida. Se evaluaron dos concentraciones de vino tinto (12.5% y 25%) y se comparó este efecto con los generados por el. FO R. vino blanco var. Chardonnay y el Alcohol Etílico al 14%; ambos a las. IN. mismas concentraciones antes señaladas y usando 06 repeticiones por. E. tratamiento.. MA S. Para determinar la concentración inhibitoria mínima a cada grupo experimental se le inoculó 0.2 mL de Streptococcus mutans ATCC 25175,. TE. incubándolos por 24 horas a 37°C en anerobiosis. Transcurrido ese. SI S. tiempo se inoculó 0.1 mL de cada muestra a placas Petri con Agar Soya. DE. Tripticasa, las cuales se incubaron durante 24 horas para determinar el número de unidades formadoras de colonias/mL. Así mismo se determinó. IN. A. el efecto bactericida por el método de difusión en discos con Agar Sangre.. OF. IC. Los resultados indicaron que el vino tinto var Cabernet Sauvignon ejercía un mayor efecto bactericida, sobre todo a la concentración de 25% y a una exposición de 48 horas. Palabras Claves: efecto inhibitorio, efecto bactericida, Streptococcus mutans, vino tinto.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ABSTRACT. The following research work has evaluated the in vitro inhibitory effect of. CA. var. Cabernet Sauvignon red wine about the Streptococcus mutans ATCC. MA TI. 25175, in which we determined the minimal inhibitory concentration and the bactericide effect of this drink we evaluated two red wine concentrations (12.5% and 25%) and we compared this effect with the. FO R. ones generated by the white wine var. Chardonnay and 14% ethyl alcohol;. E. 06 repetitions for each treatment.. IN. both exposed to the same concentration previously maintained and using. MA S. To determine the minimal inhibitory concentration, each experimental group was inoculated with 0.2 mL of Streptococcus mutans ATCC 25175,. TE. incubating for 24 hours at 37°C in anaerobic. After that time, we inoculated. SI S. 0.1 mL of each sample to Petri dishes with Trypticase Soy Agar, then it. DE. was incubated for 24 hours to determine the number of colony forming units/mL. Furthermore, the bactericide effect was determined by the disk. IN. A. diffusion method with Blood Agar.. OF. IC. The results indicated that the var. Cabernet Sauvignon red wine has the better bactericide effect, mainly in 25% concentrations and an exposure of 48 hours. Keywords: inhibitory effect, bactericide effect, Streptococcus mutans, red wine.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. I.. INTRODUCCIÓN. La caries dental es una de las enfermedades cuyos índices la ubican. CA. entre las de mayor prevalencia, al punto de haberse constituido en un. MA TI. problema para los programas de salud oral en el mundo. Actualmente su manejo se sustenta no solo en las destrezas restauradoras del. FO R. detrimento que ocasiona sino en el rigor diagnóstico y el estudio de su. IN. etiología. 1. E. El camino hacia el concepto actual de la caries dental ha sido largo y. MA S. tortuoso. La primera luz en la dirección apropiada la encontramos en la Teoría Quimioparasitaria de Miller en 1980, la cual finalmente fue. TE. aceptada por el consenso de la profesión a mediados del siglo XX pero, sólo después de arduas investigaciones que permitieron conocer. SI S. la naturaleza de los mecanismos de inicio y desarrollo de la caries. DE. dental2.. IN. A. La caries dental es única no sólo en términos del mecanismo. IC. patológico; otros aspectos, sociales y económicos son también. OF. merecedores de mención. La caries es una enfermedad biosocial enraizada en la tecnología y la economía de nuestra sociedad. A medida que las pautas de vida mejoran, la gravedad de la enfermedad habitualmente aumenta3, 4.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Esta evolución de conceptos permitió llegar al consenso de la caries dental es una enfermedad de carácter infeccioso, multifactorial y transmisible de los dientes, que se caracteriza por la desintegración. CA. progresiva de sus tejidos calcificados, debido a la acción de. MA TI. microorganismos sobre los carbohidratos fermentables provenientes de la dieta. Como resultado, se produce la desmineralización de la porción mineral y la disgregación de su parte orgánica, referentes 5, 6. . Etimológicamente se deriva del latín. FO R. inherentes a la dolencia. caries, que implica putrefacción7. Según la Clasificación Internacional. E. IN. de Enfermedades le corresponde el código K028.. MA S. En experiencias de laboratorio se consiguió producir in vitro caries dental en dientes humanos extraídos y asimismo, en animales de. TE. experimentación, alcanzándose importantes hallazgos. Se lograron. SI S. identificar los microorganismos consustanciales al origen de la caries dental: los Streptococcus mutans, aislándolos a partir de lesiones. A. DE. activas9, 10.. IN. Newman, por su parte concluye en sus estudios que aunque el. OF. IC. predominio de Streptococcus mutans en un sitio ocurre antes de la iniciación. de. la. lesión. cariosa,. un. alto. conteo. de. estos. microorganismos se puede obtener después de la ocurrencia de caries y más específicamente en las profundidades de la lesión cariosa 11. Esto nos demuestra que la formación de lesiones cariosas se. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. produzca por un ataque combinado de bacterias acidogénicas, entre las cuales Streptococcus. mutans viene a ser uno de los. microorganismos con mayor potencial acidogénico y virulencia de la. CA. placa dental, evidenciándose así su gran importancia en la aparición. MA TI. de las caries1- 11.. La ciencia médica ha estado siempre en la constante búsqueda de. FO R. insumos y productos con propiedades benefactoras para la salud, que pudieran ser incorporados para el consumo habitual de las personas,. E. IN. dentro de una dieta equilibrada y en cantidades moderadas 12.. MA S. El vino (del latín vinum) es una bebida obtenida de la uva (especie Vitis vinifera) mediante la fermentación alcohólica de su mosto o zumo.. TE. La fermentación se produce por la acción metabólica de levaduras que. SI S. transforman los azúcares del fruto en alcohol etílico y gas en forma de. DE. dióxido de carbono. El azúcar y los ácidos que posee la fruta Vitis vinifera hace que sean suficientes para el desarrollo de la. A. fermentación. Para comprender lo que es el vino desde el punto de. IN. vista de sus componentes hay que distinguir la composición de los. OF. IC. compuestos cuando es una uva, al ser mosto y posteriormente vino. El mosto antes de la fermentación se compone principalmente de agua y azúcares, así como ácidos (málico y tartárico), además otros componentes químicos en menor cantidad son responsables de la composición final del vino13 . La fermentación alcohólica transformará. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. gran parte de los azúcares del mosto en alcohol etílico, pero dejará otros compuestos interesantes como es el caso de la glicerina. Algunos de estos compuestos, que están presentes en menos medida,. CA. dan un cierto carácter a la cata de vino, tal y como es la presencia de. MA TI. taninos. Los taninos se encuentran en las pieles de las uvas y se pueden considerar como un conservante natural que permite a los vinos envejecer por más de cinco años14.. FO R. Otros elementos se añaden al vino de forma artificial y componen lo. IN. que se denomina aditivos del vino, estos aditivos tienen por objeto estabilizar algunos compuestos (proteínas, cristales de tartarato, etc),. E. reducir el nivel de ácidos, agentes antioxidantes (ácido ascórbico),. MA S. agentes antimicrobianos (dióxido de azufre, ácido sórbico, sorbatos, ácido benzoico, ácido fumárico)15.No obstante, también el vino es una. DE. SI S. horas de luz, etc16.. TE. suma de un conjunto de factores ambientales: clima, latitud, altitud,. El empleo del vino como medicina se remonta al antiguo Egipto, donde. A. se empleaba como infusión de diferentes hierbas medicinales.. IN. Hipócrates menciona su uso como desinfectante de las heridas o. OF. IC. como un vehículo de otras drogas. De la misma forma Galeno ilustra ejemplos de su uso en medicina como tonificante y estimulante de la digestión17.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Según Villegas, otro uso que se le dio al vino fue el de antiséptico en la desinfección de heridas. El poder antiséptico que se le reconoce se debe más que al alcohol etílico,. a los ácidos y,. a las. MA TI. CA. proantocianidinas, polímeros de un flavonoide llamado antocianina 18.. Las proantocianidinas son los flavonoides cuantitativamente más importantes en la uva y el vino, donde inciden de manera importante los. caracteres. organolépticos. y. otorgan. FO R. sobre. propiedades. IN. beneficiosas para la salud humana. La astringencia de los vinos tintos se debe principalmente a la presencia de proantocianidinas las. E. mismas que están presentes en la película y en la semilla de la baya. MA S. de uva19.. TE. Los taninos son sustancias del grupo de los flavonoles que, junto con. SI S. los flavonoides y otros compuestos forman los compuestos fenoles de la uva. Los flavonoles están formados a su vez por compuestos. A. DE. monómeros (catequinas) y polímeros (taninos) 19.. IN. Las catequinas son amargas y ligeramente astringentes, pero no se. OF. IC. clasifican como taninos pues no precipitan las proteínas y, a diferencia de los taninos, contienen un solo grupo carbonilo. Estos compuestos son sintetizados por las plantas en respuesta a la infección antimicrobiana, y su actividad sobre las bacterias probablemente se deba. a. su. capacidad. de. generar. complejos. con. proteínas. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. extracelulares y proteínas solubles, así como una actividad sobre la pared celular muy similar a la de las quinonas20. Fuertes y col., 1997 a su vez, refieren que los flavonoides lipofílicos pueden perturbar la. MA TI. CA. integridad estructural de la membrana celular21.. Según Cowan, 1999, las catequinas, generan actividad antimicrobiana in vitro, como las encontradas en el té verde y en el vino, sobre Vibrio. FO R. cholerae O1, Streptococcus mutans y Shigella, principalmente. Las. cholerae. IN. catequinas tienen una actividad inactivadora sobre la toxina de Vibrio e inhibe las glucosiltransferasas en S. mutans. Ratas de. E. laboratorio que recibieron en su dieta 0.1 % de catequinas del té,. MA S. redujeron en un 40% la presencia de caries inducida22.. TE. Los taninos conforman un grupo de sustancias fenólicas poliméricas. SI S. capaces de precipitar gelatina en solución, una propiedad conocida. DE. como astringente. Están divididas en dos grupos: hidrolizables y condensados. Los taninos hidrolizables están basados en el ácido. A. gálico, usualmente como ésteres múltiples con la D-glucosa, mientras. IN. que los taninos condensados más importantes (a veces llamadas. OF. IC. proantocianidinas) son derivados de monómeros flavonoides. Se ha considerado que los taninos, en muchas bebidas como el té verde y el vino, tienen actividades reforzadoras de la salud (estimulación de la actividad fagocitaria, actividad antitumoral mediada por el hospedero y un amplio rango de actividad antiinfecciosa). 19. . Se cree que la. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. actividad antimicrobiana de estos compuestos se debe a su interacción sobre las adhesinas, proteínas de la pared celular, y a su capacidad de unirse a polisacáridos22. Kontiokari y col., 2001 a su vez. CA. refieren que estas sustancias son compuestos fenólicos estables que. MA TI. pueden prevenir la expresión de las fimbrias P de E. coli dentro de sus actividades antibacterianas, y además tienen actividades antivirales,. FO R. antiadherentes o antioxidantes23.. IN. En lo que concierne a las enfermedades cardiovasculares, la mayoría de estudios demuestran un efecto benéfico superior del vino respecto. E. a otras bebidas. En 1992, un estudio de Klatsky demostró que el vino. MA S. entraña una protección superior a otras bebidas alcohólicas en materia de enfermedades cardiovasculares; esto mediado por la estimulación. SI S. TE. de prostaglandina E2 a través de un efecto vasodilatador24.. DE. En 1994, Criqui demuestra que los bajos niveles de mortalidad por enfermedades coronarias están relacionados de una manera mucho. A. mayor con el consumo de vino que con el de alcohol25. Recientemente. IN. en 1995, Gronbaek ha obtenido una reducción de un 50 % de las. OF. IC. enfermedades cardiovasculares por efecto de un consumo moderado de vino. Uno de los mecanismos implicados en este efecto protector consiste en elevar las lipoproteínas de alta densidad, inhibir la oxidación de las lipoproteínas de baja densidad, inhibir la agregación plaquetaria además, de su efecto antioxidante26.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Se ha estudiado, también, el efecto de un consumo moderado de vino sobre el cáncer más recientemente, como ha desarrollado. Pezutto y Beecher en su estudio sobre el resveratrol como factor de protección. MA TI. Según. CA. en la formación y progresión del cáncer27.. experimentos realizados por médicos. canadienses, se. demostró que el jugo de la uva, en el vino tinto, reprime la acción. FO R. en probetas de vidrio, a los virus de la poliomielitis y del herpes, lo. IN. que concluye que el vino, sería una especie de barrera contra los microorganismos patógenos y un suave antibiótico, gracias al cual, es. MA S. E. posible defenderse de algunas enfermedades18.. Es interesante el dato de que los humanos usualmente prefieren un. TE. cierto nivel de astringencia en las comidas que contienen taninos,. SI S. como ocurre con el vino tinto, en especial el derivado de uvas. DE. Cabernet Sauvignon 18.. A. Cabernet Sauvignon es considerada la reina de las cepas tintas y es. IN. de origen francés28.En términos de categoría y popularidad, el. OF. IC. Cabernet Sauvignon puede ser considerado como el equivalente en vino tinto al Chardonnay. Se trata de una uva de color intenso, bayas pequeñas y gruesos hollejos que produce vinos elegantes, ricos y sensuales, particularmente notorio por su carácter de grosella y cedro, tabaco o de mina de lápiz. El Cabernet Sauvignon se caracteriza por. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. sus taninos densos y aristocráticos, su color intenso, sus complejos aromas frutales y su estructura elegante. Es un vino robusto, que quiere dejar su impronta, quedar en la memoria. Es uno de los tintos. CA. con más potencial (en gran parte a causa de los taninos que provienen. MA TI. de las pieles) de envejecer durante mucho tiempo, y ganan en categoría si envejecen en roble. Sus poderosos taninos y viva acidez. FO R. proporcionan vinos duros en su juventud29, 30.. IN. Es así que con el presente estudio se propuso determinar el efecto inhibitorio in vitro y concentración mínima inhibitoria del vino tinto,. E. variedad Cabernet Sauvignon, sobre una cepa de Streptococcus. MA S. mutans; a su vez comparar este efecto con el producido por el vino blanco, variedad Chardonnay y Alcohol etílico a la concentración. TE. máxima que podría tener un vino, es decir 14%, sobre la misma cepa. SI S. bacteriana. Este estudio permitirá dar nuevos alcances sobre las. DE. propiedades de esta bebida y sus principios activos en mención, ya que es muy poca la información sobre la acción in vitro de este. A. producto y en nuestro medio no existen trabajos similares relacionados. IN. con los efectos que su consumo puede traer en el crecimiento de. OF. IC. bacterias propias de la cavidad oral.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 1.1. ENUNCIADO DEL PROBLEMA ¿Existe un efecto inhibitorio in vitro del vino tinto var. Cabernet. CA. Sauvignon, sobre Streptococcus mutans ATCC 25175?.. MA TI. 1.2. HIPÓTESIS. El vino tinto var. Cabernet Sauvignon presenta efecto inhibitorio in. 1.3. OBJETIVOS Objetivo general. MA S. 1.3.1.. E. IN. FO R. vitro sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. Conocer el efecto inhibitorio in vitro del vino tinto var.. Objetivos específicos. DE. 1.3.2.. SI S. 25175.. TE. Cabernet Sauvignon, sobre Streptococcus mutans ATCC. Determinar cuantitativamente el efecto inhibitorio in vitro del. . IN. A. vino tinto var. Cabernet Sauvignon, sobre Streptococcus. IC. mutans ATCC 25175.. OF. . Determinar la concentración mínima inhibitoria del vino tinto var. Cabernet Sauvignon, sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Determinar cuantitativamente el efecto inhibitorio in vitro del. . vino blanco var. Chardonnay, sobre Streptococcus mutans ATCC 25175. Comparar el efecto inhibitorio in vitro del vino tinto var.. CA. . MA TI. Cabernet Sauvignon, con el del vino blanco var. Chardonnay y Alcohol etílico al 14%, sobre Streptococcus mutans ATCC. FO R. 25175.. MA S. 1. MATERIAL DE ESTUDIO. E. IN. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 1.1. Material Químico:. Vino tinto Tabernero®, variedad Cabernet Sauvignon, cosecha. TE. . 2009 y con 14% de alcohol etílico. Vino blanco Trivento®, variedad Chardonnay, cosecha 2008 y. SI S. . Alcohol etílico Dropaksa® al 70%.. IN. A. . DE. con 14% de alcohol etílico.. IC. 1.2. Material Biológico:. OF. Cepa de Streptococcus mutans ATCC 25175, procedente de los laboratorios de. Microbiología Médica de la Facultad de. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2. DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN MUESTRAL El universo muestral estuvo constituido por las cepas estandarizadas. CA. de Streptococcus mutans ATCC 25175 obtenidas en el laboratorio de. MA TI. la Sección de Microbiología de la Facultad de Medicina de la. FO R. Universidad Nacional de Trujillo.. 3. DISEÑO ESTADÍSTICO DEL MUESTREO. IN. 3.1 Unidad de muestreo. La muestra estará constituida por cepas de Streptococcus. E. mutans ATCC 25175, procedente de los laboratorios de. MA S. Microbiología Médica de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. La cepa se enfrentó a. 2. TE. concentraciones (12.5 y 25 %) de vino tinto var. Cabernet. SI S. Sauvignon, vino blanco var. Chardonnay y alcohol etílico al. DE. 14%, respectivamente. Tamaño muestral. IN. A. 3.2. IC. Para determinar el tamaño de la muestra se aplicó la fórmula que. OF. corresponde. a. grupos. comparativos. y. con. carencia. de. antecedentes.. N= (Z α/2 + Zβ)2 δ. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Donde: N: Tamaño de población. CA. Z α/2 = 1.96. Valor de la distribución normal para una seguridad del. MA TI. 95% (α= 5%).. Zβ= 0.84. Valor de distribución normal para un poder de prueba. FO R. del 80%(β= 20%). MA S. E. 3, asumimos su punto medio.. IN. δ= 2. Variación relativa de las diferencias (como δ varía entre 1 y. TE. Luego remplazando obtenemos:. N= 32 placas. A. DE. SI S. N= (1.96 + 0.84)2 22. IN. Para lograr mayor adecuación de la muestra asumimos N= 36. OF. IC. placas Petri. Para el experimento, las placas se distribuyeron en grupos de 6 por cada nivel de concentración de los tratamientos.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 3.3. Criterios de Inclusión: Placas Petri con el caldo de cultivo Agar Sangre que serán. . Criterios de exclusión:. MA TI. 3.4. CA. sometidas a un proceso de esterilización.. Placas Petri que presenten algún tipo de daño o rajadura en su. . FO R. estructura durante el proceso de esterilización.. Placas Petri que se hubiesen contaminado accidentalmente. . IN. luego del proceso de esterilización.. Aquellas Placas Petri cuyo resultado en el proceso de. . MA S. E. esterilización hubiese sido dudoso.. Diseño experimental:. TE. 3.5.. SI S. El diseño del presente proyecto de investigación es de tipo experimental. El experimento siguió un modelo de diseño. DE. completamente aleatorizado que se muestra en el siguiente. OF. IC. IN. A. esquema.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Esquema N°01 Esquema del Diseño Experimental. 24h. 18h. E11. E12. E13. MA TI. E1. 48h. 24h. 18h. E21. FO R. VTC2. 48h. E22. E23. IN. E2. CA. VTC1. 24h. 18h. E31. 18h. SI S. VBC2. 24h. E41. E33. 48h. E42. E43. A. DE. E4. 48h. E32. TE. E3. MA S. E. VBC1. IC. IN. OH. 24h. 18h. C11. 48h. C12. C13. OF. C1. OH. 24h. 18h. C2. C21. 48h. C22. C23. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Donde:. Grupo 1: Está representado por E1; constituye el área de las placas Petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los. CA. discos de la variable independiente vino tinto, a la concentración de. MA TI. 12.5% y, a la cual se efectuaron observaciones a las 18, 24 y 48 horas. Grupo 2: Está representado por E2; constituye el área de las placas Petri. FO R. con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los discos de la variable independiente vino tinto, a la concentración de 25%. IN. y, a la cual se efectuaron observaciones a las 18, 24 y 48 horas.. E. Grupo 3: Está representado por E3; constituye el área de las placas Petri. MA S. con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los discos de la variable independiente vino blanco, a la concentración de. TE. 12.5% y, a la cual se efectuaron observaciones a las 18, 24 y 48 horas.. SI S. Grupo 4: Está representado por E4; constituye el área de las placas Petri. DE. con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los discos de la variable independiente vino blanco, a la concentración de. IN. A. 25% y, a la cual se efectuaron observaciones a las 18, 24 y 48 horas.. IC. Grupo 5: Está representado por C1; constituye el área de las placas Petri. OF. con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los discos de la variable control, alcohol etílico al 14%, a la concentración de 12.5 % y, a la cual se efectuaron observaciones a las 18, 24 y 48 horas.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Grupo 6: Está representado por C2; constituye el área de las placas Petri con cultivo de Streptococcus mutans a la cual le fueron aplicados los discos de la variable control, alcohol etílico al 14%, a la concentración de. MA TI. CA. 25% y, a la cual se efectuaron observaciones a las 18, 24 y 48 horas.. 4. PROCESO DE CAPTACION DE INFORMACIÓN:. FO R. El procedimiento de este experimento se realizó teniendo como base la prueba de susceptibilidad de difusión en discos de. E. IN. Bauer- Kirby31.. Obtención de la cepa:. MA S. 4.1. Se emplearon cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175. TE. (ANEXO 03) proporcionadas por el laboratorio de la Sección de. SI S. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad. Preparación de la cepa:. A. 4.2. DE. Nacional de Trujillo.. IN. Una vez obtenida la cepa, ésta se cultivó en tubos de ensayo. OF. IC. con tapa rosca conteniendo el medio Tioglicolato, incubándose a 37°C con el fin de obtener colonias jóvenes (ANEXO 04). Luego de 24 horas de cultivadas se les agregó solución salina estéril, hasta obtener una turbidez semejante al tubo N°1 del nefelómetro de Mc Farland (suspensión experimental). Luego los tubos con la bacteria estudiada fueron girados entre las 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. manos durante 30 segundos antes de proceder a su sembrado con el fin de haber logrado una distribución adecuada de los. Sembrado:. MA TI. 4.3. CA. microorganismos (ANEXO 05).. Se utilizaron hisopos estériles, los cuales luego de ser embebidos con la cepa preparada (Streptococcus mutans. FO R. ATCC 25175) y a una distancia de 10 cm con respecto a la. placas. Petri,. IN. llama de un mechero se emplearon para su sembrado en conteniendo. Agar. Sangre,. hisopando. E. uniformemente sobre toda la superficie del Agar y girando cada. MA S. placa 30 grados por 10 veces aproximadamente. Las placas recién sembradas fueron colocadas dentro de una estufa a. SI S. TE. 37°C de temperatura durante 10 minutos.. DE. 4.4 Prueba de Sensibilidad: Para la prueba de susceptibilidad, se prepararon diluciones al. A. 12.5%. y. 25%. tomando. como. marco. referencial. las. IN. investigaciones previas para este proceso de investigación32, 33.. OF. IC. Las diluciones utilizaron como soluto: Vino Tinto var. Cabernet Sauvignon y vino blanco var. Chardonnay de cada una de las 2 concentraciones respectivamente (ANEXO 6). Utilizando agua destilada como diluyente y, a una temperatura de 45°C para. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. conseguir. una. fase. uniforme. sin. modificación. de. las. propiedades de cada soluto (ANEXO 07). Se utilizó el método de difusión en discos. Se prepararon discos. CA. de papel de filtro Whatman Nº 4 estériles, los cuales se. MA TI. sumergieron dentro de cada dilución de los subgrupos de estudio, para el grupo control los discos fueron sumergidos en Alcohol etílico al 12.5 y 25% de 14% (ANEXO 08).. FO R. Posteriormente con una aguja estéril, los discos fueron. IN. colocados sobre los cultivos de Streptococcus mutans en las placas Petri previamente preparadas con Agar Mueller Hinton. E. Sangre y utilizando la disposición de cuatro discos por placa. El. MA S. total de placas Petri empleadas fueron de 36, según el tamaño de muestra obtenido en el cálculo estadístico, siendo usadas 2. TE. placas para cada tiempo, haciendo un total de 6 por. SI S. tratamiento, en concentraciones de 12.5% y 25%, lo que arrojó. DE. un total de 36 placas Petri con 144 discos de inhibición (ANEXO 09).. A. A continuación las placas Petri se incubaron a 37°C en. IN. microanaerobiosis utilizando la Jarra Gaspak con el método de. OF. IC. la vela, mediante el cual se procuró obtener un ambiente aproximado de 5 a 10% de CO2 (ANEXO 10).. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm de la llama de un mechero.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 4.5 Lectura y Registro: Pasadas las 18, 24 y 48 horas se procedió a la observación de las placas Petri, examinando los grupos experimentales y. CA. control.. MA TI. Los discos que presentaron la generación de un halo alrededor de los mismos fueron considerados. con inhibición de. una hoja de registro de datos.. FO R. crecimiento bacteriano, contabilizados como tal y anotados en. IN. Los discos que presentaron crecimiento bacteriano sobre ellos serán considerados sin inhibición de crecimiento bacteriano,. E. contabilizados como tal y anotados en una hoja de registro de. MA S. datos.. Además se midió el diámetro del halo inhibitorio de cada disco. TE. de sensibilidad con un vernier (a mayor diámetro del halo,. SI S. mayor es la inhibición), incluyendo el área del disco de papel. DE. de filtro y los datos se registraron en una tabla para su. IN. A. evaluación e interpretación (ANEXO 11).. 4.6. Determinación de la Concentración Inhibitoria Mínima:. OF. IC. Para determinar la concentración inhibitoria se utilizó el método de conteo de unidades formadoras de colonias/ml. Esto se realizó de la siguiente manera:. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 4.6.1 Concentración Inhibitoria Mínima  Se colocó el inóculo en una cantidad de 0.2 mL en la suspensión experimental de vino tinto var. Cabernet. CA. Sauvignon, vino blanco var. Chardonnay y Alcohol. MA TI. etílico al 70%, todos estos en sus diferentes concentraciones (12.5 y 25%,) en cada tubo y luego se llevó a incubación a 37º C, en condiciones de. IN. FO R. anaerobiosis, por un lapso de 24 horas..  Posteriormente se sembró 0.1 mL de la muestra con. MA S. E. ayuda de un asa de Diglasky, en agar Soya Tripticasa que contenían las placas Petri (ANEXO. TE. 12), para luego volverse a incubar a 37º C en condiciones de anaerobiosis por un periodo de 24. SI S. horas, para posteriormente ser evaluado de acuerdo. DE. a las unidades formadoras de colonias que se. OF. IC. IN. A. encuentren en cada placa Petri (ANEXO 13)..  Se observaron los resultados presentes en las placas Petri de acuerdo a la cantidad de unidades formadoras de colonias (UFC/mL) (ANEXO 14). Cuando la carga de bacterias fue alta se empleó el conteo por cuadrantes, donde se aplicó la siguiente fórmula:. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. n: suma de los 4 cuadrantes. 4.7. MA TI. CA. A: Área de la placa Petri = πr2  64. Del Instrumento. FO R.  Se utilizó una ficha, elaborada especialmente para la recolección de las medidas de los halos de inhibición para. IN. determinar la Concentración Mínima Inhibitoria, tanto para el. MA S. E. Vino Tinto, Vino Blanco y el Alcohol. (ANEXO 01).  Se utilizó una ficha para el conteo de las unidades. TE. formadoras de colonias, para determinar la concentración. SI S. bactericida, tanto para el Vino Tinto, Vino Blanco y el. OF. IC. IN. A. DE. Alcohol. (ANEXO 02). 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 5. VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICIÓN CUADRO Nº 01: Variables y escala de medición INDICADOR. TIPO. Cabernet. var. Cabernet. Sauvignon, vino. Sauvignon, vino. blanco var.. blanco var.. Chardonnay. Chardonnay y. Alcohol etílico al. Alcohol etílico al. 14%. 14% a. FO R. de Vino tinto. MA TI. Concentración Vino tinto var.. ESCALA. CA. VARIABLE. Razón. Cuantitativa. Razón. MA S. E. IN. Cuantitativa. concentraciones de 12.5 y 25 %.. TE. Variable. Efecto inhibitorio. Diámetro de. DE. SI S. independiente.. halo inhibitorio.. In Vitro sobre. IN. A. Streptococcus. OF. IC. mutans ATCC 25175. Variable. Unidades. dependiente.. formadoras de colonias.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 5.1. Definición de términos operacionales:. . Variables Dependientes:. Efecto In vitro sobre Streptococcus mutans:. CA. 5.1.1.. MA TI. El efecto In vitro del vino tinto se medirá mediante la concentración inhibitoria mínima (CIM) y el efecto bactericida. FO R. y este a su vez se comparará con el que ejerce el vino blanco y el alcohol etílico. La CIM es la concentración menor. IN. que tiene efecto de inhibir el crecimiento de Streptococcus. E. mutans por acción del vino tinto var Cabernet Sauvignon,. MA S. vino blanco var. Chardonnay y Alcohol Etílico al 70%; el cual es medido por el método de conteo de unidades formadoras. TE. de colonias por mililitro (UFC/mL).. SI S. El efecto bactericida, es el efecto de generar la muerte celular en Streptococcus mutans por acción del vino tinto var. DE. Cabernet Sauvignon, vino blanco var. Chardonnay y Alcohol Etílico al 14%; el cual es medido por el método de difusión. IN. A. de discos, sobre el que se miden el diámetro de los halos en. OF. IC. milímetros (mm).. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 5.1.2. . Variables Independientes:. Vino tinto var. Cabernet Sauvignon: Para este estudio se utilizó el vino tinto Tabernero®,. Vino blanco var. Chardonnay:. FO R. . MA TI. porcentaje de alcohol etílico del 14%.. CA. variedad Cabernet Sauvignon, cosecha 2009 y con un. Para este estudio se utilizó el vino blanco Tribento®,. . Alcohol Etílico:. MA S. E. alcohol etílico del 14%.. IN. variedad Chardonnay, cosecha 2009 y con un porcentaje de. TE. Para este estudio se utilizó alcohol etílico al 70% Dropaksa®, el cual fue diluido a la misma concentración que presentaban. OF. IC. IN. A. DE. SI S. los vinos en estudio.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 6.. ANÁLISIS. ESTADÍSTICO. E. INTERPRETACIÓN. DE. LA. INFORMACIÓN. CA. Los datos fueron recolectados en una hoja de registro elaborada por el autor, en base a los objetivos propuestos y fueron procesados empleando. MA TI. el programa SPSS V.20.. Los resultados fueron presentados en cuadros de doble entrada con. FO R. frecuencias absolutas y relativas porcentuales. Se acompañaron gráficos de líneas y barras para facilitar la interpretación de los resultados. Para variables cuantitativas se calculó el promedio y la varianza. IN. correspondiente.. E. Se aplicó un diseño de medidas repetidas con su posterior análisis de (ANOVA),. demostrando. que. MA S. varianza. si la. significancia de. los. tratamientos es menor a 0.05 (p <0.05) se concluye que existe diferencia. TE. significativa entre los diferentes tratamientos o niveles del factor. Para determinar si existe diferencia significativa entre diámetros de halos inhibición. en. cada. uno. SI S. de. de. los. tiempos. propuestos. y. las. DE. concentraciones, se efectuó la prueba de Duncan (ANEXO 13) Para determinar si existe diferencia significativa en el crecimiento de Formadoras de Colonias, con los diversos tratamientos, se. A. Unidades. OF. IC. IN. efectuó la prueba de Duncan.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. III. RESULTADOS. El presente estudio es de tipo experimental “In vitro”, cuyo propósito fue. CA. conocer el efecto inhibitorio in vitro del vino tinto var. Cabernet Sauvignon. MA TI. a concentraciones de 12.5 y 25%, sobre Streptococcus mutans ATCC 25175; los resultados obtenidos fueron:. FO R. TABLA N° 01: CONCENTRACIÓN BACTERICIDA DEL VINO TINTO VAR. CABERNET SAUVIGNON SOBRE Streptococcus mutans. IN. ATCC 25175 EN CONCENTRACIONES DE 12.5% Y 25%.. Concentración Promedio 25%. 18 horas. 7.75. 7.86. 24 horas. 8.25. 8.94. 48 horas. 9.50. 12.00. DE. TE. 12.50%. SI S. Tratamiento. MA S. E. Promedio del halo de inhibición utilizando Vino tinto var. Cabernet Sauvignon (en mm). A. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. IN. En la Tabla N° 01 se presenta los resultados del efecto bactericida. IC. generado por el vino tinto var. Cabernet Sauvignon, en concentraciones. OF. de 12.5% y 25%, para la determinación de la susceptibilidad mediante halos de inhibición sobre el crecimiento de Streptococcus mutans. Donde se presenta promedios a las 18 horas (7.75 y7.86 mm respectivamente), a las 24 horas (8.25, 8.94 mm respectivamente) y por último a las 48 horas (9.5 y 12 mm respectivamente).. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA N° 02: CONCENTRACIÓN BACTERICIDA DEL VINO BLANCO VAR. CHARDONNAY SOBRE Streptococcus mutans. MA TI. CA. ATCC 25175 EN CONCENTRACIONES DE 12.5% Y 25%.. Promedio del halo de inhibición utilizando Vino blanco var. Chardonnay (en mm). 12.50%. 25%. 7.35. 7.54. 8.13. 8.44. IN. 18 horas. FO R. Concentración Promedio. Tratamiento. E. 24 horas. 9.06. 9.75. MA S. 48 horas. TE. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. SI S. En las Tabla N° 02 se presenta los resultados del efecto bactericida. DE. generado por el vino blanco var. Chardonnay, en concentraciones de 12.5% y 25%, para la determinación de la susceptibilidad mediante halos. A. de inhibición sobre el crecimiento de Streptococcus mutans. Donde se. IC. IN. presentan promedios a las 18 horas (7.35 y 7.54 mm respectivamente), a. OF. las 24 horas (8.13, 8.44 mm respectivamente) y por último a las 48 horas (9.06 y 9.75 mm respectivamente).. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA N° 03: CONCENTRACIÓN BACTERICIDA DEL ALCOHOL ETÍLICO AL 14% SOBRE Streptococcus mutans ATCC 25175 EN. MA TI. CA. CONCENTRACIONES DE 12.5% Y 25%.. Promedio del halo de inhibición utilizando Alcohol Etílico (en mm). 5.00. 6.00. 7.20. 7.30. 8.06. 8.38. MA S. 48 horas. 25%. E. 24 horas. FO R. 18 horas. 12.50%. IN. Concentración Promedio. Tratamiento. SI S. TE. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. DE. En las Tabla N° 03 se presenta los resultados del efecto bactericida generado por el Alcohol etílico, en concentraciones de 12.5% y 25%, para. A. la determinación de la susceptibilidad mediante halos de inhibición sobre. IC. IN. el crecimiento de Streptococcus mutans. Donde se presenta promedios a. OF. las 18 horas (5 mm y 6 mm respectivamente), a las 24 horas (7.2 y 7.3 mm respectivamente) y por último a las 48 horas (8.06 y 8.38 mm respectivamente).. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 04: EFECTO BACTERICIDA DEL VINO TINTO, VINO BLANCO Y ALCOHOL ETILICO SOBRE Streptococcus mutans ATCC. Suma de Cuadrados. Gl. TRATAMIENTO_HALO. 43.233. 5. Error. 45.174. 42. Total. 88.407. Media cuadrática. F. Sig.. 8.647. 8.039. .000. FO R. Fuente de Variación. MA TI. CA. 25175 (12.5% Y 25%), SEGÚN DIÁMETRO DE HALO INHIBITORIO. IN. 1.076. E. 47.000. MA S. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. TE. Como podemos observar la Tabla Nº 4 se muestra el análisis de varianza. SI S. y podemos decir que si existe diferencia altamente significativa entre los diámetros de halo de inhibición obtenidos en los diferentes niveles del. DE. factor tratamiento (Vino tinto var. Cabernet Sauvignon, Vino blanco var.. A. Chardonnay y Alcohol Etílico en concentraciones de 12.5% y 25%. IN. respectivamente, tomando en cuenta el efecto del tiempo (18, 24 y 48. OF. IC. horas).. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 5: PRUEBA DE DUNCAN PARA EVALUAR LA. CA. CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA. N 8. 1 7.7958. Alcohol Etílico 25%. 8. 8.1208. Vino Blanco 12.5%. 8. 8.1792. Vino Tinto 12.5%. 8. Vino Blanco 25%. 8. Vino Tinto 25%. 8. MA S. .234. 3. 8.1208 8.1792 8.5000 8.5750. 9.5333 .174. 1.000. TE. Sig.. 2. E. IN. FO R. TRATAMIENTO Alcohol Etílico 12.5%. MA TI. Subconjunto. SI S. Como se observa el tratamiento que maximiza el diámetro del halo, es. DE. decir tiene un mayor efecto bactericida sobre Streptococcus mutans, es el tratamiento 2 que viene a ser el de vino tinto a una concentración del. OF. IC. IN. A. 25%.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 06: EFECTO INHIBITORIO IN VITRO DEL VINO TINTO, VINO BLANCO Y ALCOHOL ETILICO SOBRE Streptococcus mutans ATCC 25175 (12.5% Y 25%), SEGÚN CONTEO DE UNIDADES. MA TI. CA. FORMADORAS DE COLONIAS (UFC/ML). Suma de Cuadrados. Gl. Media cuadrática. TRATAMIENTO UFC. 2999987232056860000. 5. 599997446411372000.000. Error. 14330065. 6. 2388344.167. Total. 2999987232071200000. 11. F. Sig.. 251219005529.161 0.0000. MA S. E. IN. FO R. Fuente de Variación. SI S. TE. Fuente: Datos obtenidos por el investigador. Como podemos observar existe suficiente evidencia para decir que existe. DE. diferencia altamente significativa entre los tratamientos; es decir, se puede determinar el mejor tratamiento para reducir las Unidades. OF. IC. IN. A. Formadoras de Colonias.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 7: PRUEBA DE DUNCAN PARA EVALUAR LA CONCENTRACIÓN INHIBITORIA MÍNIMA CON RESPECTO A CONTEO. MA TI. CA. DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC/ML). Subconjunto. TRATAMIENTO_UFC/ml Vino Tinto 25%. N. 1 20.00. 2. Vino Tinto 12.5%. 2. 5918.50. 2 2. 1000000000.00. 2. 1000000000.00 .792. 1.000. 1.000. SI S. TE. Sig.. MA S. Alcohol Etílico 12.5% Alcohol Etílico 25%. 1000000000.00. E. Vino Blanco 12.5%. 3. 445.50. IN. Vino Blanco 25%. FO R. 2. 2. Como podemos observar se crean tres grupos, en el primero aparecen el. DE. vino tinto al 25% y el vino blanco al 25%; ambos de entre todos los. A. tratamientos tienen los menores promedios, es por eso que se les. IN. clasificar en un mismo grupo, sin embargo el que menor cantidad de. IC. unidades formadoras de colonias tiene es el vino tinto var. Cabernet. OF. Sauvignon al 25%, siendo este el mejor de los tratamientos para reducir la cantidad de Unidades Formadoras de Colonias.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IV. DISCUSIÓN. El presente estudio es de tipo experimental “In vitro”, cuyo propósito fue efecto inhibitorio in vitro del vino tinto var. Cabernet. CA. conocer el. MA TI. Sauvignon a concentraciones del 12.5% y 25%, sobre Streptococcus mutans ATCC 25175; a su vez comparar este efecto con el ejercido por el vino blanco var. Chardonnay y Alcohol Etílico a la concentración de 14%. FO R. que viene a ser la máxima que puede tener un vino, diluidos ambos. IN. igualmente al 12.5% y 25%.. E. El procedimiento se realizó de acuerdo con lo que se ha reportado en la. MA S. literatura y, para determinar el efecto inhibitorio se hizo uso del método de difusión en discos y placas, con procedimientos que se han realizado en. TE. el Laboratorio de la Sección de Microbiología de la Facultad de Medicina. DE. SI S. de la Universidad Nacional de Trujillo.. Según lo observado, los resultados del efecto bactericida, medida a través. A. del diámetro de los halos generados por el vino tinto var. Cabernet. IN. Sauvignon en concentraciones de 12.5% y 25%. Se determinó. que,. el. OF. IC. vino tinto a 48 horas en ambas concentraciones presentó mayor efecto bactericida que las otras concentraciones del mismo. Para el vino blanco var. Chardonnay en concentraciones de 12.5% y 25 se determinó que a 48 horas y en ambas concentraciones, presentó mayor efecto bactericida que las otras concentraciones del mismo y, para el Alcohol Etílico en. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. concentraciones de 12.5% y 25% se determinó que a 48 horas en ambas concentraciones presentó mayor efecto que las otras concentraciones del mismo (Tabla 1-3). Pero en especial se observa que siempre en las. CA. concentraciones del 25% a las 48 horas se genera un mayor efecto. MA TI. bactericida sobre Streptococcus mutans ATCC 25175. Estos resultados muestran un predominio en el efecto del vino tinto por sobre el blanco y el alcohol etílico con respecto al tiempo, pudiendo los flavonoides presentes. FO R. en éste generar un efecto antibiótico residual. Este efecto es el que prolongada de importantes mecanismos. IN. permitiría la inactivación. enzimáticos generados por la bacteria en estudio como por ejemplo la. E. inhibición de la enzima glucosiltransferasa de Streptococcus mutans;. MA S. enzima responsable de las interacciones adhesivas y expresión de virulencia34.A su vez en un estudio utilizando los taninos de Caesalpina. mayores. propiedades. SI S. con. TE. spinosa ( taya) coinciden en que los taninos serían los fitoconstituyentes antibacterianas. al. precipitar. proteínas. DE. (enzimas) ,implicadas en las diversas rutas microbianas35.. A. En la Tabla de análisis de varianza para los diámetros de halos de. IN. inhibición se presentan los resultados estadísticos, donde se determinó a de. OF. IC. través. los. datos. obtenidos. en. los. grupos. experimentales. (concentraciones al 12.5% y 25% de vino tinto, vino blanco y. alcohol. etílico respectivamente) son estadísticamente significativos, ya que se cumple que p<0.05, para el promedio del halo de difusión de los mismos; ya que el valor calculado de P en la tabla de ANOVA es (0,00), el cual es. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. menor que 0,05. Este resultado nos permitió poder evaluar cuál de los tratamientos usados ejercía un mayor efecto bactericida sobre la cepa en estudio (Tabla N°4). Este resultado es similar con la investigación de. CA. Valladares, en el cual se estudió el efecto inhibitorio “in vitro” sobre el. MA TI. crecimiento de Streptococcus mutans. La investigadora utilizando taninos a través una infusión de anís estrella a 5 diferentes concentraciones, encontró que existía una diferencia significativa entre las diversas. IN. crecimiento de Streptococcus mutans36.. FO R. concentraciones de la infusión de anís estrella (Illium verum) y el. E. A su vez, la Prueba de Duncan nos permitió determinar qué grupos son. diferentes. entre. MA S. experimentales. estadísticamente. Obteniendo que el. sí. y. tratamiento. cuales que. son. iguales. maximiza. el. TE. diámetro del halo; es decir, que tiene un mayor efecto bactericida sobre. SI S. Streptococcus mutans es el tratamiento 2 que viene a ser el de vino tinto a una concentración del 25% (Tabla N°5). Este efecto bactericida coincide. DE. con el estudio de Neira y col37.usando taninos de Psidium guineense Sw. A. (Choba),en el cual se concluye que debido a que la bacteria evaluada. IN. (Streptococcus mutans ATCC 25175 )posee dentro de su estructura una. OF. IC. membrana citoplasmática con fosfolípidos y proteínas; por fuera de ésta se encuentra la pared celular que está compuesta por una ancha capa de peptidoglicano y bajo contenido lipídico, esto hace que las catequinas y taninos abundantes en el vino tinto al ser compuestos polares catiónicos sean más permeables y susceptibles a la pared que permite el paso de. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. sustancias a su interior, alterando el balance electrolítico y por consiguiente generando la lisis bacteriana.. CA. En el análisis realizado para evaluar la cantidad de Unidades Formadoras. MA TI. de Colonias que lograban crecer en presencia de vino tinto var. Cabernet Sauvignon, vino blanco var. Chardonnay y Alcohol Etílico en sus diferentes concentraciones, se comprobó que existe diferencia altamente. FO R. significativa entre los tratamientos, pues la significancia obtenida cumple;. IN. p <0.05 (p= 0.000). Es decir, permitió determinar el mejor tratamiento a usar para reducir las Unidades Formadoras de Colonias (Tabla N°6),. mutans ATCC 25175.. MA S. E. logrando consigo una mayor inhibición en el crecimiento de Streptococcus. TE. Al realizar la Prueba de Duncan, para agrupar los tratamientos según su. SI S. grado de significancia, se obtuvieron tres grupos, donde en el primero. DE. aparecen el vino tinto al 25% y el vino blanco al 25%; ambos de entre todos los tratamientos tienen los menores promedios, es por eso que se. A. les clasifica en un mismo grupo (Tabla N°7). Sin embargo el que menor. IN. conteo de Unidades Formadoras de Colonias tiene es el vino tinto al 25%,. OF. IC. siendo este el mejor de los tratamientos para reducir la cantidad de Unidades Formadoras de Colonias. Esto nos podría demostrar que el agente causal del efecto inhibitorio en el crecimiento de Streptococcus mutans son los polifenoles (catequinas y taninos) debido a que la diferencia entre los vinos usados, tinto y blanco, es la cantidad de taninos. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. presentes en ellos; ya que el alcohol presente en estos fue evaluado y se determinó que por sí mismo no produce un efecto bactericida tan. CA. importante.. MA TI. De esta manera, el estudio por lo antes expuesto lleva a aceptar la hipótesis propuesta al inicio de la investigación, pudiendo afirmar que el vino tinto var. Cabernet Sauvignon tiene un efecto inhibitorio sobre el. IN. FO R. crecimiento de Streptococcus mutans ATCC 25175.. Los resultados obtenidos a partir de esta investigación apoyarían a las. E. conclusiones de otros investigadores, donde además de los beneficios. MA S. planteados por ellos se permitiría agregar una reducción de la prevalencia de caries como aporte adicional al consumo habitual y moderado de 27. . Entiéndase por consumo moderado y, apoyado en diversos. TE. vino17-. SI S. estudios, a una toma diaria máxima de 30 ml (una copa de vino. DE. aproximadamente), para una persona de 70 kg en promedio 17, 18.. A. Dentífricos como Parondontax® poseen taninos en su composición en. IN. una presentación de tintura como por ejemplo la tintura de Ratania, de. OF. IC. Equinácea, de Mirra, de Camomila y de Salvia38. Surge la pregunta entonces si es que estos son los más adecuados o es que podría evaluarse la posibilidad de sustituirlos por taninos encontrados en el vino. Esto con la finalidad de mejorar las propiedades organolépticas y beneficiosas de estas pastas dentales.. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. V. CONCLUSIONES. De acuerdo a los resultados obtenidos en la presente investigación se. MA TI. CA. llegó a las siguientes conclusiones:.  El vino tinto var. Cabernet Sauvignon, vino blanco var. Chardonnay y alcohol etílico presentan efecto inhibitorio in vitro sobre. IN. FO R. Streptococcus mutans ATCC 25175..  El vino tinto var. Cabernet Sauvignon presenta mayor efecto. E. inhibitorio in vitro sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 que el. MA S. ejercido por el vino blanco var. Chardonnay y el Alcohol Etílico.. TE.  La concentración mínima inhibitoria del vino tinto var. Cabernet. SI S. Sauvignon es la del 25% para este estudio, ya que es la que. DE. presenta menor crecimiento de Unidades Formadoras de Colonias. A. de Streptococcus mutans ATCC 25175.. IN.  Se podría inferir que las catequinas y taninos del vino son las. IC. responsables del efecto antibiótico en el vino tinto var. Cabernet. OF. Sauvignon, esto se demuestra a través de la comparación entre. éste con el vino blanco y. el alcohol, demostrando consigo un. poder antibiótico mucho mayor.. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VI. RECOMENDACIONES.  Realizar este estudio en cultivos de biofilm dental maduro, para evaluar. CA. el efecto antibacteriano que ejerce el vino tinto var. Cabernet. MA TI. Sauvignon en un medio que se asemeje a las condiciones normales. FO R. encontradas en boca..  Realizar estudios controlados para comprobar si es que el nivel ácido. IN. del vino podría llegar a llegar a producir un pH crítico o, si es que la. MA S. E. capacidad buffer de la saliva atenuaría este grado de acidez..  Realizar estudios usando taninos industrializados y evaluar la. TE. posibilidad de que estos reemplacen a las tinturas usadas en ciertos. SI S. dentífricos..  Realizar más estudios para determinar con exactitud la concentración. OF. IC. IN. A. DE. inhibitoria mínima, ampliando el número de concentraciones a evaluar.. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1.. Henostroza G, et all. Diagnóstico de caries dental.1a ed. Lima:. CA. Universidad Peruana Cayetano Heredia;. Av. Honorio Delgado. MA TI. 430 Lima- Perú; 2005; 40: 5-7.. 2.. Miller W.D. Microorganisms of the human mounth. The 1a ed.. FO R. Philadelphia: SS White Mfg. Company, 1890; 480:110. Newman. H. La placa dental. México. Editorial El manual. MA S. E. Moderno; 1982; 19-30.. IN. 3.. 4.. Fitzgerald R, Keyes P. Demonstration of the etiology role of. SI S. 61: 9-19.. TE. streptococci in experimental caries in the hamster. J ADA. 1960;. Hörsted P, Mjör I. Modern concepts in operative dentistry. 1a ed.. DE. 5.. Thylstrup A, Fejereskov O. Textbook of clinical cariology. 2a ed.. OF. IC. 6.. IN. A. Copenhaguen: Munksgaard; 1988; 3(23):343-62.. 7.. Copenhaguen: Munksgaard; 1994; 226:50-62.. Gomes G. Breve diccionario etimológico de la lengua española. 2a ed. México D.F.: Fondo de cultura económica; 1999; 281:48.. 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

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