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Efecto antibacteriano "In vitro" del extracto etanólico de la hoja de Erythoxylum novogranatense (Coca) y la clorhexidina frente a Streptococcus mutans ATCC25175

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ESCUELA DE POSTGRADO. SG RA. DO. SECCIÓN DE CIENCIAS MÉDICAS. DE. PO. EFECTO ANTIBACTERIANO “IN VITRO”DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythoxylum novogranatense (COCA) y la clorhexidina frente a Streptococcus mutans ATCC25175. BL. IO. TE C. A. TESIS PARA OBTENER EL GRADO ACADÉMICO DE MAESTRA EN ESTOMATOLOGÍA. BI. Autora: Br. LESLY CASTAÑEDA LEÓN. Asesora: Dra. ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO TRUJILLO – PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DATOS PERSONALES. NOMBRE: Lesly Castañeda León. DO. DIRECCIÓN: Condominio Tierra Verde. Bloque A. Departamento 501. Urb Covicorti. SG RA. DNI: 44707233. PO. TELÉFONO: 945597981. BI. BL. IO. TE C. A. DE. CORREO ELECTRÓNICO: leslycast_04@hotmail.com. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DO. JURADO DICTAMINADOR. DE. PO. SG RA. ……………………………………………………… Dr. ANTONIO ARMANDO AGUIRRE AGUILAR PRESIDENTE. IO. TE C. A. ……………………………………………. Dra. TERESA ETELVINA RIOS CARO SECRETARIA. BI. BL. ….……………………………………….. Dra. ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO MIEMBRO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. A DIOS MI CREADOR. IO. TE C. A. DE. PO. SG RA. DO. Al creador de todas las cosas, el que me ha dado fortaleza para continuar, aún en los momentos difíciles; por ello, con toda la humildad que de mi corazón puede emanar, agradezco primeramente mi trabajo a Dios.. BL. Con mucho amor y gratitud a mis queridos padres:. BI. JORGE Y ANA Quiero dedicar esta tesis a mis padres Jorge y Ana porque ellos han dado razón a mi vida, por sus consejos, su apoyo incondicional y su paciencia, todo lo que hoy soy es gracia a ellos.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mis queridas hermanas: YENY Y KARIN. TE C. A. DE. PO. SG RA. DO. Con quienes desde pequeña compartí mis alegrías y tristezas; con su apoyo incondicional, comprensión y optimismo me ayudaron a superar momentos difíciles, además de ser mis fuerzas y motivación para superarme como persona y profesional.. A mi asesora: DRA. ELVA MEJÍA DELGADO. BI. BL. IO. Con mucho cariño, respeto y admiración hacia ella, le expreso un profundo agradecimiento por brindarme su apoyo incondicional y por dedicarme su valioso tiempo y preocupación para la elaboración de la presente investigación.. CD. LESLY. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. Pág. DATOS PERSONALES ........................................................................................ i JURADO DICTAMINADOR ................................................................................. ii AGRADECIMIENTOS ........................................................................................ iii. DO. INDICE ................................................................................................................ v RESUMEN ......................................................................................................... vi. SG RA. ABSTRAC ......................................................................................................... vii INTRODUCCIÓN ..................................................................................... 1. II.. MATERIAL Y MÉTODO......................................................................... 15. III.. RESULTADOS ...................................................................................... 28. IV.. DISCUSIÓN .......................................................................................... 33. V.. CONCLUSIONES .................................................................................. 38. VI.. RECOMENDACIONES ......................................................................... 39. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................... 40. TE C. A. DE. PO. I.. BI. BL. IO. ANEXOS .......................................................................................................... 47. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. Objetivo: Evaluar el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina al 2% frente a Streptococcus mutans ATCC25175. Material y métodos: El efecto antibacteriano se determinó mediante la prueba. DO. de susceptibilidad utilizando el método de Kirby-Bauer. Se realizó 23 repeticiones para cada tratamiento (extracto etanólico de la hoja de coca a. SG RA. diferentes concentraciones y para el grupo control clorhexidina al 2%). Las cepas de Streptococcus mutans fueron sembradas en placas que contenían medio de cultivo Mueller Hinton, se colocaron discos con las diferentes concentraciones de extracto etanólico de la hoja de coca, luego las placas se. DE. milimetrada después de 24 horas.. PO. incubaron a 37°C en micro anaerobiosis, midiéndose los halos con una regla. Resultados: Los promedios de halo de inhibición fueron 8.70; 9.96; 10.96;. A. 13.04; 24.70mm correspondientes a las concentraciones 10%,25%,50% y 75%. TE C. respectivamente. El análisis estadístico de los datos reveló diferencia estadística altamente significativa entre los diferentes grupos (ANOVA: P<0,01). El promedio de unidades formadoras de colonias para el grupo de la. IO. concentración del 10% fue 0.04x101 y para los grupos de las concentraciones. BI. BL. de 25%,50% y 75% fue 0 UFC. Conclusión: El extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina al 2% tienen efecto antibacteriano in vitro sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC25175. Palabras clave: Streptococcus mutans, Antibacteriano.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT Objective: To evaluate the in vitro antibacterial effect of the ethanolic extract of Erythroxylum. novogranatense. leaf. and. 2%. chlorhexidine. against. Streptococcus mutans ATCC25175. Material and methods: The antibacterial effect was determined by the. DO. susceptibility test using the Kirby-Bauer method. Twenty-three replicates were performed for each treatment (ethanolic extract of the coca leaf at. SG RA. different concentrations and for the 2% chlorhexidine control group). Strains of Streptococcus mutans were seeded on plates containing Mueller Hinton culture medium, discs were placed with the different concentrations of ethanolic extract of the coca leaf, then the plates were incubated at 37 ° C in. PO. micro anaerobiosis, the halos being measured with A millimeter rule after 24. DE. hours.. Results: The inhibition halo averages were 8.70; 9.96; 10.96; 13.04;. A. 24.70mm corresponding to the concentrations 10%, 25%, 50% and 75%. TE C. respectively. Statistical analysis of the data revealed a highly significant statistical difference between the different groups (ANOVA: P <0.01). The average colony-forming units for the 10% concentration group were 0.04x101. BL. IO. and for the 25%, 50% and 75% concentration groups it was 0 UFC Conclusion: The ethanol extract of Erythroxylum novogranatense sheet and. BI. 2% chlorhexidine have antibacterial effect in vitro on the growth of Streptococcus mutans ATCC21175.. Keywords: Streptococcus mutans, novogranatense Erythroxylum (coca leaf).. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. El uso de las plantas con fines terapéuticos es de gran utilidad, ya que de ellas son obtenidas innumerables sustancias químicas, que son las bases para la elaboración de muchos fármacos, así como el tratamiento de diversas enfermedades, entre ellas, la caries dental y por lo tanto la presencia de. DO. Streptococcus mutans. Una de estas plantas estudiada hace muchos años por la diversidad de efectos que posee, es la hoja de coca y actualmente existen. SG RA. trabajos científicos1-6 que demuestran el efecto antibacteriano de esa planta y de algunos de sus componentes sobre algunas especies bacterianas. Sin embargo. PO. no se han realizado estudios con cepas estandarizadas, siendo necesaria la realización de investigaciones sobre este tipo de microorganismos específicos. DE. de la cavidad oral, como el Streptococcus mutans.. A. La caries dental, según Bhaskar, es la enfermedad más común del ser. TE C. humano7, en nuestro país se ha reconocido a la caries dental como un problema prioritario de salud pública. En el Perú el Ministerio de Salud, notifica una. BL. IO. prevalencia de 95% de caries dental en la población total2.. BI. La caries dental ha sido definida como una enfermedad multifactorial, que. comprende la interacción de factores del huésped, la dieta y la placa dental en un determinado lapso de tiempo5.. Es considerada como un proceso patológico, infeccioso y transmisible de los dientes, que se caracteriza por la desintegración progresiva e irreversible de. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sus tejidos calcificados, debido a la acción metabólica de microorganismos sobre los carbohidratos fermentables provenientes de la dieta8-9.. Dentro de las especies identificadas que se relacionan con mayores capacidades de iniciar el proceso de formación de lesiones cariosas destacan propiedades. del. género. Streptococcus9.. Siendo. considerado. el. DO. las. Streptococcus mutans, el microorganismo más cariogénico de la placa dental,. SG RA. jugando un rol activo en el desarrollo de lesiones de caries, especialmente en las. PO. primeras etapas11.. El Streptococcus mutans es una bacteria Gram positiva, anaerobia. DE. facultativa que se encuentra normalmente en la cavidad bucal humana formando parte de la placa dental, asociada al inicio y desarrollo de la caries dental10. Es. A. acidofílica porque vive en pH bajo, siendo capaz de crecer a pH 5.2; acidogénica. TE C. porque metaboliza los azúcares en ácido y acidúrica porque puede mantenerse metabólicamente activa a pesar de un pH bajo3-4. Otra característica es su corto. IO. efecto post pH, que es la rápida capacidad para recuperar su fisiología normal. BI. BL. tras unas brusca caída del pH3.. Borrovic (2006), refiere que la participación del Streptococcus mutans en. la formación de placa bacteriana está relacionada con la producción de glucosiltransferasas, enzimas que tienen un rol principal en las interacciones adhesivas y expresión de virulencia de estos microorganismos, debido a que catalizan la síntesis de polisacáridos extracelulares (glucanos solubles e. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. insolubles en agua) que promueven la adhesión de estreptococos cariogénicos a la superficie del diente3-13. El poder cariogénico de los estreptococos del grupo mutans es, aunque con algunas diferencias, muy similar en todas la especies y está muy ligado a la sacarosa, ya que tienen la capacidad de metabolizarla mucho más rápido que cualquier otro microorganismo de la cavidad oral 3. A. DO. partir del metabolismo de la sacarosa estos microorganismos producen principalmente ácido láctico, el cual es fundamental en la virulencia debido a. SG RA. que, aparentemente, es el ácido más potente que interviene en la. PO. desmineralización del diente13.. El género Erythroxylum, corresponde a lo que comúnmente se conoce. DE. como coca, es un arbusto originario de los Andes que se encuentra principalmente en el Perú y Bolivia y en menor escala en Colombia, Ecuador, y. Brasil20-22.. Pertenece. A. Venezuela. a. la. Familia. Erythroxylaceae. y. nuestro. país. TE C. aproximadamente cuenta con 90 especies, siendo las más comercializadas en las. especies. Erythroxylum. coca. Lam.. y. Erythroxylum. IO. novogranatense (Morris) var. Truxillense, debido a su contenido relativamente. BL. alto en alcaloides20-23. Siendo ésta última especie la que se usará en la presente. BI. investigación.. Erythroxylum novogranatense var. truxillense, conocida como “Coca de Trujillo”, fue descrita como una especie distinta en el año 1900 por Rugby, se cultiva en la costa desértica del norte del Perú, cerca de la ciudad de Trujillo y es la variedad más resistente a la sequía24.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Es un arbusto de 1 a 3 metros de altura, con hojas membranosas de color verde claro, elípticas y de ápice agudo, las cuales miden de 1,8 a 4,8 cm de largo y 0.5 a 2.5 cm de ancho, las líneas laterales son prominentes en el envés. Las flores son pequeñas, con los pétalos de color blanco o crema y los frutos son drupas anaranjadas, ovaladas, de aproximadamente 6 a 10 mm de largo por 4 a 5 mm. DO. de ancho24-25.. SG RA. Además, Buchard (1978) y Horna (1980) refieren que los arbustos de coca se aprovechan mediante la cosecha de sus hojas maduras hasta la. PO. defoliación casi completa sin dañar ramas ni tallos, ni comprometer la supervivencia de la planta; la recolección se inicia a los dos años y puede. DE. repetirse de 3 a 4 veces al año25. Ha sido cultivada desde tiempos muy remotos por los habitantes de los pueblos andinos, donde el uso más conocido que se le. A. da es el “chacchado” o masticación de sus hojas. Esta práctica se emplea como. TE C. complemento de la dieta y para resistir la realización de trabajos físicos importantes y largas caminatas, debido a su efecto estimulante y nutriente,. BL. IO. quitando el cansancio, el hambre y la sed22-26.. BI. La composición química de la hoja de coca depende de factores tanto. intrínsecos como extrínsecos, entre los que están: la edad de la planta, la identidad de las variedades, el estado de las hojas y como factores extrínsecos las zonas geográficas, la forma de cultivo y el medio ambiente en el que se desarrolla la especie27. Dentro de sus principios químicos, la hoja de coca contiene abundante cantidad de minerales, especialmente calcio, además de. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. hierro, potasio, magnesio, zinc entre otros; asímismo posee un alto contenido en metabolitos primarios entre los cuales encontramos proteínas, carbohidratos, lípidos; y metabolitos secundarios como alcaloides, taninos, flavonoides, monoterpenos, glicósidos y aceites esenciales, a los cuales se les atribuyen. DO. muchas de sus diversas propiedades20-25.. Los componentes principales de la hoja de coca son los alcaloides, los. SG RA. cuales representan del 0.5% al 2% de los principios químicos totales. Hasta la fecha las investigaciones han revelado la presencia de hasta 14 alcaloides, y son. PO. precisamente estos los que le dan a la hoja de coca su diversidad de efectos y. DE. cualidades medicinales20-28 .. Por otro lado, Díaz (1971)refiere que entre los alcaloides de la hoja de. A. coca tenemos a la atropina y la conina, los cuales le dan sus propiedades. TE C. anestésicas; la benzoína que estimula la formación de células musculares, dándole a la coca propiedades terapéuticas para combatir la gastritis y las. IO. úlceras; la globulina que regula la carencia de oxígeno en el ambiente,. BL. mejorando la circulación sanguínea, contribuyendo a superar el mal de altura. BI. conocido como “soroche”; además de una larga lista de otros alcaloides como la egnomina, inulina, papaína, pectina, quinolina, y la cocaína 28. Es este último alcaloide, el más conocido de la hoja de coca y el que genera mayor controversia debido a sus efectos terapéuticos (analgésicos y anestésicos) como tóxicos sobre el organismo. Es muy relevante resaltar que la hoja de coca no es sinónimo de cocaína y que bajo la forma de hoja de coca, ésta no produce. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. toxicidad ni genera dependencia28-30. La concentración de cocaína en la hoja de coca es muy baja, teniendo Erythroxylum novogranatense var. Truxillense un contenido promedio de 0,56 % del alcaloide28.. De acuerdo a (Tripathi, 2008) la clorhexidina es un antiséptico catiónico. DO. poderoso cuya acción consiste en romper la membrana celular de las bacterias, produciendo además la desnaturalización de proteínas intracelulares. Es. SG RA. considerado un antiséptico muy eficaz contra placa dental31.. PO. (Candray, 2011) refiere que la clorhexidina se une a la membrana celular de las bacterias, provocando que en bajas concentraciones se produzca una. DE. permeabilidad y difusión del contenido intracelular (efecto bacteriostático), en altas concentraciones produce la precipitación del citoplasma de las bacterias. TE C. A. junto con la muerte celular (efecto bactericida)32.. Según (Morante, 2003) la clorhexidina es efectiva contra microorganismos. IO. Gram positivos, Gram negativos y hongos, de los cuales las bacterias Gram. BL. positivas tienen mayor sensibilidad a comparación de bacterias Gram negativas,. BI. así mismo, las bacterias del género Streptococcus son más sensibles que las del género Staphylococcus33.. (Serrano, 2006) mencionó que existen mecanismos antiplaca en los que interviene la clorhexidina, de manera que se une a la superficie del diente mediante un catión de su molécula, dejando otros cationes libres los cuales van. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. a interactuar con bacterias que intentan colonizar y adherirse a la superficie dental, así mismo se va a adherir a glicoproteínas salivales impidiendo la formación de película adquirida y consecuentemente la placa dental34.. La clorhexidina fue definida como un dímero de proguanil (biguanida), que. DO. presenta grupos hidrófilos e hidrófobos, estructurada por dos anillos simétricos (4-clorofenil y dos grupos biguanidas conectados por una cadena central de. SG RA. hexamentileno); su pH óptimo oscila entre 5.5 y 7 siendo activa para bacterias Gram positivas y Gram negativas con un pH entre 5.0 y 8.0. Se absorbe. PO. rápidamente en boca y ejerce su acción por más de doce horas, inclusive en superficies con película adquirida, y dependiendo la dosis puede tener efecto. DE. bacteriostático o bactericida32.. TE C. A. Según (Candray, 2011) la clorhexidina es utilizada en el campo odontológico como componente de colutorios a concentraciones de “0,1%, 0,2%. IO. y 0,12%”, dentífricos usan a concentraciones de “0,05%, 0,2% y 0,12%”, geles se usa a “0,2%, 0,12% y 1%”, spray es utilizado a concentraciones de “0,1% y. BL. 0,2%”, y barnices al “1%”. Puede causar tinción en dientes y lengua (mayor. BI. efecto en pacientes que beben vino, café, té y que sean fumadores), también se percibe sabor amargo o metalizado así como posibles descamaciones en la mucosa bucal, dependiendo de la concentración en que se utilice este antiséptico32. (Morante, 2003) mencionó que estudios han demostrado que transcurrido un periodo de seis meses utilizando este antiséptico, los microorganismos formadores de placa dental comienzan a demostrar una baja. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. sensibilidad al mismo, produciendo una nueva colonización bacteriana y formación de biofilm, sin embargo, no se evidencia una resistencia ya que descontinuar su uso las bacterias recobran la sensibilidad que presentaban en un inicio33.. DO. En el campo de la odontología, el crecimiento de la fitoterapia ha estimulado la investigación con el propósito de avalar la actividad antimicrobiana. SG RA. de distintos extractos de plantas, entre ellos la hoja de coca, con el fin de ayudar en el control de la placa bacteriana y por consiguiente en el control y prevención. PO. de la caries dental19.. DE. Las primeras investigaciones respecto a la hoja de coca y sus propiedades anticariogénicas, datan de 1954, con la investigación realizada por. A. Goicochea, quien estudió a 30 masticadores de la hoja de coca, en los cuales. TE C. observó que el número de piezas que faltaban y el porcentaje de caries eran relativamente bajos en relación al grupo control. Mientras que el grado de. BL. IO. abrasión dentaria fue alto en dicho grupo en comparación con el grupo control17.. BI. Ayala en 1963, realizó un estudio similar en 40 individuos (20. masticadores de hoja de coca y 20 controles), en el cual determinó que los chacchadores o masticadores de la hoja de coca presentaban lesiones cariosas en un mínimo porcentaje, mientras que la incidencia de abrasión dentaria fue elevada18.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Posteriormente Coronel A, en 1988,en Tarma, Perú, realizó estudios en comunidades de chacchadores de hoja de coca con un tiempo de hábito mayor de 10 años y edades comprendidas entre los 30 y 50 años (30chacchadores y 30 controles).Entre sus resultados encontró que los índices de abrasión y enfermedad periodontal se vieron incrementados en el grupo de los. DO. chacchadores, pero el índice de CPOD ( Índice para piezas dentarias permanentes - dientes cariados, perdidos y obturados) disminuyó en este. SG RA. grupo, ambos con respecto al grupo control, siendo así que los masticadores de la hoja de coca presentaban un menor número de piezas dentarias. PO. cariadas16 .. DE. Castro V y Chavez D en 1995 en Lima, realizaron un estudio similar pero sobre cepas de uropatógenos Gram negativos seleccionados por su carácter multiresistencia,. reportándose. A. de. que. las cepas de Escherichia. coli. TE C. presentaron inhibición del crecimiento a las concentraciones de 209,36ug/ml y. IO. 784,5ug/ml; casi todas las cepas de Enterobacter sp. no fueron inhibidas por las concentraciones usadas de “Mate de Coca”. Se reportaron además. BL. cambios morfológicos bacterianos de algunas cepas de Escherichia coli, así. BI. como de algunas cepas de Enterobacter sp., Proteus sp., Pseudomonas aeruginosa y Klebsiella sp14.. El poder cariogénico de los estreptococos del grupo mutans es, aunque con algunas diferencias, muy similar en todas las especies que producen caries y está muy ligado a la sacarosa, ya que tienen la capacidad de metabolizarla. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mucho más rápido que cualquier otro microorganismo de la cavidad oral, a partir del. metabolismo. de. la. sacarosa,. estos. microorganismos. producen. principalmente ácido láctico, el cual es fundamental en su virulencia debido a que, aparentemente, es el ácido más potente que interviene en la. DO. desmineralización del diente13.. Debido a estas razones, el S.mutans, actualmente es base de gran. SG RA. cantidad de estudios destinados a la investigación sobre prevención de caries dental; y paralelo a esto se están estudiando diferentes alternativas a los. PO. productos antimicrobianos convencionales, en base a sustancias naturales, que posean propiedades farmacológicas antibacterianas, entre ellas las plantas. DE. medicinales19.. A. Cam O y Villanueva V en 1996 en Lima, hicieron un estudio de actividad. TE C. inhibitoria de crecimiento, empleando cepas de bacterias Gram (-), Gram (+) y levaduras aisladas de casos clínicos, utilizando extractos acuosos y etanólicos. IO. de las hoja de coca de la especie Erythroxylum novogranatense var.. BL. Truxillense (Rugby) a diferentes concentraciones de 50, 100, 150, 200, 250,. BI. 300, 350, 400, 450 y 500 ug. Se obtuvo como resultados que las 25 cepas en estudio presentaron disminución de crecimiento frente a algunas cepas de bacterias Gram (-), Gram (+) y levaduras29.. Fueron estas investigaciones las que sirvieron como referente para la realización de estudios sobre patógenos propios de la cavidad oral, siendo así. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. que Solano D. en este mismo año, realizó un estudio utilizando estos mismos extractos acuoso y etanólico de principios activos totales de Erythroxylum novogranatense var. Truxillense, sobre Streptococcus de la cavidad bucal. La investigación utilizó 40 muestras; correspondientes a 16 muestras de placa bacteriana, 8 de caries dental, 5 de cálculo dental, 6 de absceso radicular y 4. DO. de gingivitis, de los cuales se aislaron Streptococcus viridans, tales como S. mutans, S.mitis y S. salivarius. Se emplearon dos extractos (acuoso y. SG RA. etanólico) de E. novogranatense var. Truxillense, a concentraciones de 400, 600,800 y 1000 ug; obteniendo como resultado la inhibición de crecimiento de. PO. S. mutans y S. mitis a 800 y 1000 ug de concentración de principios activos. DE. totales21.. Posteriormente, Borrovic R. en 2006 en Lima, buscó determinar si el. A. extracto alcohólico de la hoja de E. novogranatense var. Truxillense ejercía una. TE C. acción antibacteriana sobre la flora mixta salival, empleando concentraciones de 250, 500, 1000, 1500 ug. Sus resultados indicaron que este efecto. IO. antibacteriano existe, ya que hubo un efecto de inhibición del desarrollo. BL. bacteriano en las 4 concentraciones estudiadas, además se encontró. BI. diferencias significativas con respecto al tamaño de los halos de inhibición, el cual fue mayor a medida que aumentaba la concentración 15.. Castro L. en 2008 en Lima, realizó un estudio que evaluó la composición química del aceite esencial de la hojas de Erythroxylum novogranatense var. Truxillense, su actividad antioxidante y su actividad como sustancia. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. antibacteriana. frente. a. Streptococcus. mutans.. El. estudio. empleó. concentraciones de 10, 50 y 100% del aceite esencial aislado de las hojas de coca. Se determinó que el aceite esencial de E. novogranatense var. Truxillense. presenta. actividad. antibacteriana. significativa. frente. a. Streptococcus mutans, debido a la formación de halos de inhibición, los cuales. DO. fueron mayores a medida que aumentaban las concentraciones empleadas 35.. SG RA. Por todo esto, existiendo antecedentes científicos que demostrarían el efecto antibacteriano por parte de la hoja de coca, así como de algunos de sus. PO. componentes específicos, el demostrar un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de una cepa estandarizada de Streptococcus mutans, validaría los. DE. pocos trabajos similares realizados, además de transformarse en un conocimiento importante en la práctica de la odontología debido a que a partir. A. de dicha sustancia, se podrían elaborar diversos productos efectivos para el. TE C. control de la caries dental, beneficiando a la población por ser una materia. IO. prima económica y natural.. BL. Por lo tanto el presente estudio tiene como propósito determinar el. BI. efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina frente a Streptococcus mutans cepa ATCC25175, principal microorganismo en la etiología de la caries dental.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.1 ENUNCIADO DEL PROBLEMA ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina al 2% frente a Streptococcus mutans ATCC25175?. DO. 1.2 HIPÓTESIS El extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense y la tienen. efecto. antibacteriano. el. crecimiento. de. PO. Streptococcus mutans ATCC25175.. sobre. SG RA. clorhexidina. 1.3 OBJETIVOS. DE. 1.3.1Objetivo General:. Evaluar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de la. . A. hoja de Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina al 2% sobre. IO. TE C. el crecimiento de Streptococus mutans ATCC25175.. 1.3.2 Objetivos Específicos Determinar el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico. BL. . BI. de la hoja de Erythroxylum novogranatense a concentraciones de 10%, 25%, 50% y 75%, y la clorhexidina al 2% sobre el crecimiento de Streptococcus mutans ATCC25175.. . Determinar el efecto antibacteriano del extracto etanólico de la hoja de. Erythroxylum. novogranatense. sobre. el. crecimiento. de. Streptococcus mutans ATCC25175 según el número de unidades. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. formadoras de colonias. . Comparar el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina al 2% sobre el crecimiento de Streptococcus mutans. ATCC25175 mediante la. BI. BL. IO. TE C. A. DE. PO. SG RA. DO. técnica de Kirby y Bauer.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO 2.1 TIPO Y ÁREA DE ESTUDIO La presente investigación, de tipo Experimental, se desarrolló en los ambientes del laboratorio de la Sección de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN MUESTRAL. DO. 2.2. La población muestral fue creada de acuerdo a los parámetros. SG RA. microbiológicos experimentales revisados, quedando constituida 75 discos de difusión.. PO. 2.3 Criterios de Selección 2.3.1 Criterios de Inclusión. DE. Placas con siembra adecuada de Estreptococcus mutans a priori a enfrentamiento con el extracto etanólico de la. A. hoja de coca y clorhexidina al 2%.. TE C. Placas con el contenido de extracto etanólico de la hoja de coca y la clorhexidina al 2% y que presenten imhibición o. BI. BL. IO. no del crecimiento bacteriano. Placas que se utilicen. para la determinación de la. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), que no presenten crecimiento. bacteriano. ni. contaminación. por. otros. microbios. 2.3.2 Criterios de Exclusión Placas que después del proceso de incubación, mostraron contaminación por otros microbios (sólo hongos).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4 Consideraciones éticas Al realizar la investigación se tuvo en cuenta principios de bioseguridad, prestando atención adecuada a los factores que pueden dañar el medio ambiente y se consideró los principios de la Declaración de Helsinki en investigaciones “in vitro”, adoptada por la. DO. 18º Asamblea Médica Mundial en Helsinki, Filandia, Junio 1964 y. SG RA. modificada por la Asamblea Médica Mundial en Fortaleza Brasil.. 2.5 DISEÑO ESTADÍSTICO DEL MUESTREO. PO. 2.5.1 Unidad de análisis. La unidad de análisis la constituyó cada uno de los discos de. DE. difusión observados. 2.5.2 Marco Muestral. A. El marco muestral lo conformó la relación de placas Petri,. TE C. establecidas estadísticamente. 2.5.3 Tamaño de muestra. IO. Para determinar el tamaño de la muestra se hizo uso de la. BI. BL. siguiente fórmula.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Donde: n= tamaño de la muestra 𝑍α⁄. 2 =1.96 Para un nivel de confianza del 95% (α=0.05). 𝑍𝛽 = 0.84 Para una potencia de prueba del 80%(β= 0.20). SG RA. Reemplazando n= 23 repeticiones.. REPETICIONES. PO. TRATAMIENTOS. de la hoja de 10% sobre. TE C. A. DE. Concentración del extracto etanólico Erythroxylum novogranatense al Streptococcus mutans Concentración del extracto etanólico Erythroxylum novogranatense al Streptococcus mutans Concentración del extracto etanólico Erythroxylum novogranatense al Streptococcus mutans. Concentración del extracto etanólico Erythroxylum novogranatense al Streptococcus mutans.. 23. de la hoja de 25% sobre. 23. de la hoja de 50% sobre. 23. de la hoja de 75% sobre. 23. Control con Clorhexidina sobre Streptococcus mutans.. 23. Total de repeticiones. 115. BI. BL. IO. DO. 𝑆 = 1.2 ( 𝑋̅1- 𝑋2)Valor asumido por no haber estudios previos. Luego la muestra estuvo conformada por 23 repeticiones para cada grupo.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6. DISEÑO DE CONTRASTACIÓN El presente estudio es un diseño experimental. El esquema puede representarse de la siguiente manera:. Efecto Antibacteriano. SG RA. Extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense.. DO. Procedimiento e Instrumento de Recolección de Datos:. PO. GRUPO 1. Clorhexidina. Efecto Antibacteriano. TE C. A. DE. GRUPO 2. BI. BL. IO. DIRECCIÓN DE LA INVESTIGACIÓN. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7. PROCEDIMIENTO Y CAPTACIÓN DE LA INFORMACIÓN 2.7.1 Preparación del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense. En este tipo de extracción, también llamado maceración alcohólica, se prepararon 4 diferentes concentraciones.. DO. En un envase estéril de vidrio ámbar, se colocó 500 g de polvo de hojas previamente pulverizadas y tamizadas. Luego,. SG RA. se añadió alcohol etílico rectificado al 70 % hasta que cubrió por completo el contenido de las hojas de coca. Se le agitó. PO. tres veces por día, en un tiempo de maceración de 7 días a. DE. 37ºC en estufa agitándose10 minutos, dos veces al día.. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró el líquido al. A. vacío, con papel de filtro Whatman N° 1. Al líquido filtrado se. TE C. le denominó extracto etanólico. A continuación, el extracto etanólico se concentró en un rota vapor (Heidolph WB 2000) a. IO. presión reducida y temperatura controlada, no mayor a 50°C.. BI. BL. Finalmente, el extracto se colocó en cápsulas de porcelana y se llevó a secar a la estufa a 40 ºC. Al producto resultante se le denominó extracto seco. A partir de este extracto seco se preparó. las concentraciones de 10%, 25%, 50%y 75%. disueltas en etanol al 70%.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego cada concentración del extracto fueron esterilizadas por filtración con membrana, usando filtros Millipore de 0.4 µm y 0.22 µm. Finalmente, las concentraciones preparadas, del extracto etanólico, se colocaron en viales ámbar de 10 ml y. DO. fueron almacenadas a 4°C para su posterior experimentación.. 2.7.2 Obtención de la cepa.. SG RA. Para este estudio se emplearon cepas de Streptococus mutans, que fueron proporcionadas por el laboratorio de la. PO. Sección de Microbiología de la facultad de Medicina de la. DE. Universidad Nacional de Trujillo.. 2.7.3 Preparación de la cepa. A. Una vez obtenida la cepa, ésta fue cultivada en tubos de. TE C. ensayo con tapa rosca conteniendo el medio de cultivo Mueller Hinton, incubandose a 37ºC y en micro anaerobiosis,. BI. BL. IO. utilizando la Jarra Gas-pack (con el método de la vela).. Luego de 24 horas de cultivados los microorganismos, se les agregó caldo de tioglicolato, hasta obtener una turbidez semejante al tubo número 0,5 de la escala de Mac Farland. Los tubos que contuvieron la bacteria estudiada, fueron girados entre las manos durante 30 segundos, antes de. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. proceder al sembrado, para distribuir los microorganismos adecuadamente.. 2.7.4 Sembrado. Con un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo de. DO. cultivo preparado y a una distancia de 10cm de la llama del mechero, se hizo el sembrado en placas petri, conteniendo. SG RA. Agar Mueller Hinton - Sangre, hisopando uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30. PO. grados por 10 veces aproximadamente.. DE. 2.7.5 Determinación del efecto antibacteriano (Prueba de Kirby Bauer).. A. Para la prueba de Kirby Bauer, se prepararon 4 diluciones a. TE C. las concentraciones del 10%, 25%, 50% y 75% de extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense .Dichas. IO. diluciones. se. conservaron. a. 4°C. para. el. estudio. BI. BL. microbiológico en frascos ámbar. Posteriormente se realizó el sembrado de Streptococcus mutans (ATCC25175) en placas Petri y se hizo la prueba de susceptibilidad, para lo cual se utilizó el método de Difusión en Discos.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se prepararon discos de papel filtro estériles, los cuales fueron sumergidos dentro de cada una de las concentraciones del extracto etanólico de hojas de coca por una hora. Luego con una aguja estéril, los discos fueron colocados sobre los cultivos de Streptococcus mutans (ATCC25175) en. DO. placas petri previamente preparados con medio Mueller Hinton-sangre. Se realizaron 23 repeticiones para cada. SG RA. concentración.. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de. PO. 10 cm de la llama de un mechero. Posteriormente las placas se incubaron a 37°C en micro anaerobiosis haciendo uso de. DE. la Jarra de Gas Pack.. Finalmente la lectura se llevó a cabo luego de 24 horas,. A. mediante la inspección visual. Se midieron los halos de. TE C. inhibición de cada una de las concentraciones, incluyendo el área del disco de papel de filtro, con un calibrador vernier o. IO. pie de rey.. BI. BL. Si fue mayor de 6mm se consideró como susceptible es decir tiene efecto antibacteriano. Al hacer la lectura, se clasificaron los diámetros de los halos de inhibición teniendo en cuenta la escala de Duraffourd. Escala de Duraffourd: Es utilizada para determinar cualitativamente el efecto antibacteriano in vitro, según diámetro de inhibición.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Nula (-): Para un diámetro inferior de 8 mm. Sensibilidad Límite sensible +: Para un diámetro comprendido entre 8 a 14mm. Medio (muy sensible ++): Para un diámetro entre 14 y 20 mm. Finalmente. para. un. diámetro. superior a. 20. mm. el. DO. microorganismo es sumamente sensible (+++). SG RA. 2.7.6 Determinación de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC):. PO. Para determinar las UFC (cuentas viables), se sembró 0.1 ml. de las soluciones de cada uno de los tubos con las diferentes. DE. concentraciones en placas petri con medio Mueller Hinton, más 10% de sangre, luego se utilizó el asa de Driglasky para. A. dispersar la muestra. Dichas placas fueron colocadas en. TE C. estufa por 24 h. a 37°C en un ambiente de micro anaerobiosis, luego de lo cual se procedió a la observación. IO. del crecimiento bacteriano mediante el conteo de las. BI. BL. Unidades Formadoras de Colonias (UFC), considerándose como la CMI a la menor concentración en la cual no se observaron UFC. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm. de la llama de un mechero.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Controles: Para determinar el efecto antibacteriano: Se utilizó como control positivo, discos de clorhexidina y como control negativo discos de suero fisiológico. Para la determinación de UFC: Se utilizó como control. DO. farmacológico, clorhexidina, y la cepa bacteriana sin ningún tratamiento(suspensión estándar de Streptococcus mutans. INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS. PO. 2.8. SG RA. 3x108 UFC/ mL).. El presente trabajo utilizó dos fichas de recolección de datos. DE. (Anexos 1 y 2) que fueron llenados por el investigador, los cuales tuvieron la función de registrar los datos sobre la medida individual. A. de los halos en mm, formados en cada uno de los discos de difusión. BI. BL. IO. TE C. presentes en las placas Petri.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.9. VARIABLES Y ESCALAS DE MEDICIÓN. Cuadro Nº 01: Operacionalización de las Variables VARIABLE. INDICE. INDICADORES. TIPO. ESCALA. 10%. Cuantitativa. Ordinal. 25%. Cuantitativa. Ordinal. 50%. Cuantitativa. Ordinal. 75%. Cuantitativa. Ordinal. Cuantitativa. Ordinal. Cuantitativa. Razón. Cuantitativa. Razón. DE. PO. 2%. SG RA. Extracto etanólico de la Hoja de coca y la clorhexidina. DO. Independiente. TE C. A. Dependiente. Escala de Duraffourd. IO. Efecto antibacteriano “in vitro” sobre Streptococcus mutans.. 8mm y 14mm Sensible. 14mm y 20mm muy sensible. BI. BL. >20mm Sumamente sensible. X UFC -. UFC,s. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.10 DEFINICIÓN DE VARIABLES 2.10.1 Variable Independiente Extracto etanólico de hoja de coca: . Definición Conceptual: Extracto que posee los principios. Definición Operacional: En el presente estudio se evaluaron. SG RA. . DO. activos de la hoja de coca, cuyo solvente es el etanol.. las concentraciones de 10%,25%,50% y 75%.. PO. 2.10.2 Variable Dependiente. Efecto antibacteriano "in vitro"sobre el crecimiento de. Definición Conceptual: Es la suceptibilidad que produce el. A. . DE. Streptococcus mutans:. TE C. extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense. IO. en sus diferentes concentraciones en la inhibición del. BL. crecimiento de Streptococcus mutans. Definición. Operacional:. El. efecto. antibacteriano. de. BI. . Streptococcus mutans se determinó por el método de Difusión en discos y correspondiente al diámetro del halo de inhibición en Placas Petri y por la disminución de las UFC.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.11 ANÁLISIS ESTADÍSTICO E INTERPRETACIÓN DE DATOS Para analizar la información se construyeron cuadros de distribución de frecuencia de una entrada con sus valores absolutos. Se calculó el promedio de la desviación estándar de la variable. Para determinar cual es la concentración mínima inhibitoria del extracto. DO. etanólico de la hoja de coca, se utilizó el ANOVA correspondiente a. SG RA. un diseño completamente aleatorizado y luego se aplicó la prueba de Duncan para comparaciones múltiples, ambos con un nivel de significancia al 5%. Para determinar el efecto inhibitorio del extracto. PO. etanólico de la hoja de coca, respecto a la clorhexidina al 2% se empleó la prueba de comparación de medias utilizando la. BI. BL. IO. TE C. A. DE. distribución T de student con un nivel de significancia del 5%.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS El presente trabajo de investigación de tipo experimental “in vitro”, tuvo como propósito evaluar el efecto antibacteriano del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina frente al Streptococcus mutans ATCC25175, dicho efecto se midió a través de los. DO. halos de inhibición obtenidos por el método de Kirby-Bauer.. SG RA. El tamaño promedio de los halos de inhibición evidencia que el extracto etanólico de la hoja de Erythoxylum novogranatense tienen efecto. PO. antibacteriano in vitro en sus diferentes concentraciones frente al Streptococcus mutans. Los halos de inhibición presentaron los siguientes. DE. promedios: 8.70mm, 9.96mm, 10.96mm, 13.04mm correspondientes a las concentraciones 10%,25%,50% y 75% de extracto etanólico de la hoja de. A. Erythroxylum novogranatense. El grupo control de la clorhexidina al 2%. TE C. presentó un promedio de 24.70mm.(Tabla 1).. IO. El número de unidades formadoras de colonias evidencia que el extracto. BL. etanólico de la hoja de Erythoxylum novogranatense tienen efecto. BI. antibacteriano in vitro frente al Streptococcus mutans.La media para el grupo del control bacteriano fue 2.72x10 5. UFC, para el grupo de la. concentración del 10% fue 0.4x101 UFC y para los grupos de las concentraciones de 25%, 50%, 75% y clorhexidina fue 0 UFC (Tabla 2). 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La prueba de Ducan evidencia que el extracto etanólico de la hoja de Erythoxylum novogranatense y la clorhexidina al 2% tienen efecto antibacteriano in vitro frente al Streptococcus mutans,comparó cada uno de los promedios de los halos de inhibición y se demostró que existe diferencia altamente significativa entre el promedio de los halos de. DO. inhibición de los diferentes grupos. De las concentraciones del extracto etanólico de la hoja de Erythroxylun novogranatense el mayor promedio fue. SG RA. del grupo del 75% con 13.04 mm, seguido del 50% con 10.96mm , 25%. BI. BL. IO. TE C. A. DE. PO. con 9.96mm y el menor promedio del 10% con 8.70mm (Tabla 3). 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°1. Concentraciones de la hoja de Erythoxylum novogranatense y clorhexidina 2%. n. 10%. 23. 25%. 23. DO. EFECTO ANTIBACTERIANO “IN VITRO” DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythroxylum novogranatense A LAS CONCENTRACIONES DE 10%,25%,50% y la clorhexidina al 2% SOBRE EL CRECIMIENTO DE Streptococcus mutans ATCC25175 MEDIANTE EL TAMAÑO PROMEDIO DE LOS HALOS DE INBICIÓN. Lab. de microbiología UNT – 2015.. Desv. Estándar. 8.70 (S). 1.49. 9.96 (S). 2.67. 23. 10.96 (S). 1.85. 23. 13.04 (S). 3.28. 24.70 (SS). 1.94. PO. SG RA. Promedio (mm). 50%. DE. 75%. 23. TE C. A. Clorhexidina 2%. BI. BL. IO. Fuente: Base de datos, Año 2015. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°2. EFECTO ANTIBACTERIANO IN VITRO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythroxylum novogranatense SOBRE EL CRECIMIENTO DE Streptococcus mutans ATCC25175 SEGÚN EL NÚMEDO DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC) Laboratorio de Microbiología de la Facultad de medicina de la UNT – 2015. Media. Concentración de extracto etanólico de la hoja de coca. 2.72 10%. 0.4. 25%. 0. 50%. 0. 75%. 0 0. 0.944 0 0 0 0. DE. PO. Clorhexidina al 2%. 0.668. SG RA. Control Bacteriano. Desv. Estándar. DO. Grupos. BI. BL. IO. TE C. A. Fuente: Base de datos, Año 2015. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N°3. DO. COMPARACIÓN DEL EFECTO ANTIBACTERIANO IN VITRO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE LA HOJA DE Erythroxylum novogranatense y la clorhexidina al 2% POR MEDIO DE LA PRUEBA DE SUSCEPTIBILIDAD KIRBY-BAUER SOBRE EL CRECIMIENTO DE Streptococcus mutans ATCC25175 MEDIANTE LA PRUEBA DE DUCAN. Concentraciones de la hoja de Erythoxylum novogranatense y clorhexidina 2%. N. 10%. 23. 8.6957. 25%. 23. 9.9565. 50%. 23. 75%. 23. SG RA. sub grupos para alfa = 0.05 2. Clorhexidina 2%. 3. 4. 9.9565. 10.9565. DE. PO. 1. 24.6957. A. 23. 13.0435. TE C. F= 176.5. p= 0.0000 ó p<0.001. BI. BL. IO. Fuente: Base de datos, Año 2015. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN La hoja de coca en la odontología representa un nuevo e importante uso de este producto típico de nuestra flora, demostrándose su efecto antibacteriano en el tratamiento de diversas enfermedades como la caries dental, inhibiendo la presencia de microorganismos específicos de la. DO. cavidad oral, como el Streptococcus mutans.. SG RA. En la presente investigación se buscó evaluar si el extracto de la hoja de Erythroxylum novogranatense tiene un efecto antibacteriano en el. PO. tratamiento de Streptococcus mutans de la flora oral en comparación con la clorhexidina al 2% normalmente utilizado como colutorio, quedando. DE. demostrada, la existencia de un efecto de inhibición de desarrollo bacteriano por el extracto estudiado, según los resultados obtenidos; sin. A. embargo no demuestra mayor efectividad que los resultados obtenidos. TE C. con la clorhexidina al 2%.. IO. Se encontró diferencia entre el tamaño de los halos de inhibición entre. BL. concentraciones del extracto etanólico de Erythroxylum novogranatense. BI. (coca de Collambay), sin embargo esta no fue estadísticamente significativa entre las concentraciones.. Los resultados indican que existe una acción antibacteriana del extracto de la hoja Erythroxylum novogranatense, lo cual da sustento a investigaciones realizadas en chacchadores de coca, como refieren los. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. trabajos de Goicochea17, Ayala18, Coronel16, Navarro36 y Pando37, quienes obtuvieron como resultados una disminución en la prevalencia e incidencia de caries en sus grupos poblacionales que tenían el hábito del chacchado ya que el principal. agente de caries es el Streptococcus. DO. mutans.. Sin embargo, Coronel (1988) concluía que posiblemente sus hallazgos se. SG RA. debían a la abrasión dentaria marcada, el elevado número de piezas dentarias extraídas e indicadas para la extracción o a la acción. por. PO. neutralizadora de las sustancias alcalinas sobre los ácidos producidos las bacterias, para la formación de lesiones cariosas16.Al igual que. DE. Navarro (1988), quien comentaba que sus resultados obtenidos, podrían deberse a la perdida de anatomía oclusal de las piezas dentarias por la. A. abrasión propia de los chacchadores de la hoja de coca36.. TE C. Ambos autores, no consideraron un posible efecto antimicrobiano de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. truxillense que ha quedado. BL. IO. demostrado en la presente investigación.. BI. Así mismo, se han encontrado resultados positivos del efecto antimicrobiano de la planta Erythroxylum novogranatense var. truxillense en diferentes investigaciones, como por ejemplo, la realizada por Mertz, M y Reyes, E (1996) quienes hallaron inhibición del crecimiento de cocos y. Bacilos38.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Can y Villanueva29, Solano21, Gálvez39 obtuvieron resultados positivos del efecto antibacteriano del Erythroxylum Novogranatense var. truxillense en distintos agentes microbianos como son respectivamente bacterias Gram (-) y Gram (+), Streptococcus de la cavidad bucal, bacterias Gram (-). DO. resistentes.. Aguilar y Encarnación40, Castro y Chávez14, Mertz y Reyes38 realizaron. SG RA. sus estudios del efecto antibacteriano del mate de coca de LambranErythroxylum novogranatense var. truxillense sobre diferentes agentes como. Mycobacterium. tuberculosis,. enterobacterias. PO. microbianos. uropatógenos, multiresistentes, obteniendo resultados positivos con. DE. respecto al efecto antibacteriano del mate de coca. Por lo tanto, en ambos estudios se obtiene un efecto antibacteriano del Erythroxylum, ya sea con. A. la extracción de los principios activos totales o por el método de la. TE C. extracción alcohólica (como en el presente estudio) o la extracción acuosa (mate de coca), en distintos agentes microbianos se obtuvieron resultados. IO. de un efecto antibacteriano del Erythroxylum (coca). Tal como en el. BI. BL. presente estudio.. En ninguna de las investigaciones mencionadas se han realizado comparaciones con agentes bactericidas tal como clorhexidina al 2% u otros. En esta investigación encontramos efecto mayor de la clorhexidina con respecto a las concentraciones de la hoja de Erythroxylum novogranatense.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por otro lado. Borrovic F. (2006). al realizar el estudio del “Efecto. antibacteriano del extracto alcohólico de. la hoja de Erythroxylum. novogranetense var. truxillense (coca) sobre flora mixta salival” encontró que tuvo efecto antibacteriano que se incrementaba a mayor concentración del extracto alcohólico de la hoja de coca, sobre cultivos. DO. de flora mixta salival, tal como en el presente estudio12.. SG RA. En la presente investigación se encontró mejor efecto antibacteriano en las concentraciones (50% y 75%), sin embargo todas las concentraciones. PO. inhibieron al Sptrectococcus mutans reflejado en las UFC (Tabla Nº 3), pero con la clorhexidina al 2%, se encontró mayor efecto según la técnica. DE. de Kirby y Bauer.. A. Cabe resaltar que mientras mayor sea la concentración utilizada del. producido. TE C. extracto de hoja de Erythroxylum (coca), mayor es el halo de inhibición sobre. el. Streptococcus. mutans,. mostrando. efecto. BL. IO. antibacteriano de dicha planta en todas las concentraciones utilizadas.. BI. Según estudios de Castro y Chávez (1995) sobre “Acción inhibitoria in vitro de Erythroxylum lam. var. coca y Erythroxylum novogranetense var. truxillense “mate de coca” frente a uropatógenos Gram negativos multirresistentes” No encontró un patrón específico de comportamiento inhibitorio frente a Gram negativos14.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cam O. y Villanueva (1996) al estudiar “Acción inhibitoria in vitro del extracto acuoso y extracto metanólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense (Morris) var. truxillense (Rugby) frente a bacterias Gram negativos y Gram positivos” El autor halló inhibición progresiva frente a concentraciones variables que iban desde 50 – 100- 150- 200- 250 – 300. DO. – 350 – 400 – 450 hasta 500 µg/ml29.. SG RA. Cabe resaltar que mientras mayor sea la concentración utilizada del extracto de hoja de Erythroxylum (coca), mayor es el efecto producido. PO. sobre las bacterias del presente estudio.. DE. La mayoría de investigaciones hechas en personas con el hábito de la masticación de la hoja de coca en el área de la Odontoestomatología ha. A. dado como evidencia una baja incidencia de lesiones cariosas, habiendo. TE C. unos trabajos de investigación que no encuentran relación entre el hábito de la masticación de la hoja de coca y la caries dental.. IO. Siendo la hoja de coca un producto natural de fácil acceso y de bajo. BL. costo, podría ser utilizada como ingrediente de las cremas dentales y así. BI. poder disminuir la incidencia de caries dental.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. La hoja de Erythoxylum novogranatense y la clorhexidina al 2%, tienen efecto antibacteriano in vitro sobre el crecimiento de Sptreptococcus. DO. mutans.. Todas la concentraciones de la hoja de Erythoxylum novogranatense y la. SG RA. clorhexidina tuvieron efecto antibacteriano sobre el Streptococcus mutans.. PO. El extracto etanólico de la hoja de Erythoxylum novogranatense tuvo efecto inhibitorio sobre las UFC del Streptococcus mutans en todas sus. DE. concentraciones.. A. La clorhexidina tuvo mayor efecto que la hoja de Erythoxylum. TE C. novogranatense, sin embargo todas las concentraciones de la hoja de coca, tuvieron efecto antibacteriano in vitro sobre el Streptococcus. BI. BL. IO. mutans, mediante la técnica de Kirby y Bauer y las UFC.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. RECOMENDACIONES. 1. Se. recomienda efectuar otras investigaciones. utilizando. otros. microorganismos patógenos.. DO. 2. Comprobar clínicamente el efecto antibacteriano de las hojas de coca sobre el crecimiento de microorganismos cariogénicos.. SG RA. 3. Realizar estudios utilizando componentes específicos de las diferentes variedades de hoja de coca con el fin de determinar exactamente los. PO. compuestos químicos que causen el efecto antimicrobiano. 4. Continuar realizando estudios con plantas medicinales para encontrar. BI. BL. IO. TE C. A. DE. nuevas y mejores alternativas de prevención de enfermedades orales.. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Aguilar E, Montalvo J. Comportamiento in vitro de Erythroxylum cocaErythroxylum novogranatense “Mate de coca” sobre Mycobacterium tuberculosis y otras especies de Mycobacterium. Tesis de bachiller para. DO. Químico farmacéutico UNMSM. Lima; 1995. [acceso 25 de setiembre del 2016]. Disponible en:. SG RA. http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/odontologia/2010n2/pdf/a05v13n2 .pdf. PO. 2. Ministerio de Salud del Perú: Plan de Salud Bucal. Lima; 2005. [acceso 28 de setiembre del 2016]. Disponible en http: //www.minsa.. DE. gob.pe/portal/campanas/S Bucal/ Archivos/RM538 3. Liébana U.J. Microbiología Oral. 2a. ed. España: McGraw-Hill.. A. Interamericana; 2002.. TE C. 4. Mounton C, Robert J.C. Bacteriología Bucodental. Barcelona: Masson; 1995.. IO. 5. Hinostroza G, Arana A. Diagnóstico de Caries Dental. Lima: Editorial. BL. Universidad Peruano Cayetano Heredia; 2005.. BI. 6. Ventura G., Castro A., Roque M., Ruiz J. Composición Química del Aceite Esencial de Erythroxylum coca Lam var. Coca y evaluación de sus actividad antibacteriana. Ciencia e Investigación; 12(1): 24-28. Lima; 2009. 7. Bhaskar S.N. Patología Bucal. 3a. ed. Buenos Aires: El ateneo; 1977.. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 8. Studervant C, Roberson T, Heymann H. Operatoria Dental, Arte y Ciencia. 3a. ed. Mexico: MC Graw-Hill Interamerica; 2011. 9. Moncada C, Urzua A. Cariología Clínica, Bases preventivas y restauradoras. Chile; 2008. 10. Newbrun E. Cariología. 4a. ed. Mexico: Nueva Editorial. DO. Interamericana; 1985. 11. Brambilla E, García F, Paediatr Strohmenger L. Principles of diagnosis. SG RA. and treatment of high-caries-risksubjects. Dent clin: North Am; 2000. 12. Borrovic Ramos F. Efecto antibacteriano del extracto alcohólico de la. PO. hoja de Erythroxylum novogranatense var. Truxillense (coca) sobre flora mixta salival. Tesis de bachiller para Cirujano Dentista. Lima: UNMSM;. DE. 2006. [acceso 25 de octubre del 2016].Disponible en http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/odontologia/2010_n2/pdf/a05v13n. A. 2.pdf. TE C. 13. Street C.M, Goldner M, Le Riche W.H. Epidemiology of Dental Caries in Relation to Streptococcus Mutanson Tooth Surfaces in 5-Year-Old. IO. Children. Archs. Oral Biol; 1976.. BL. 14. Castro V, Chavez D. Acción inhibitoria in vitro de Erythroxylum Lam.. BI. Var. Coca y Erythroxylum novogranatensevar. Truxillense “Mate de coca” frente a uropatógenos Gram negativos multiresistentes. Tesis de Bachiller para Químico farmacéutico UNMSM. Lima; 1995. [acceso 28 de octubre del 2016]. Disponible en http://www.cop.org.pe/bib/tesis/RICARDOALBERTOROJASSARCO.pdf. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 15. Borrovic Ramos F. Efecto antibacteriano del extracto alcohólico de la hoja de Erythroxylum novogranatense var. Truxillense (coca) sobre flora mixta salival. Tesis de bachiller para Cirujano Dentista. Lima: UNMSM; 2006. [acceso 10 de noviembre del 2016].Disponible en http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/odontologia/2010_n2/pdf/a05v13n. DO. 2.pdf 16. Coronel A. M. Estudio comparativo de la prevalencia de caries,. SG RA. enfermedad periodontal y abrasión entre un grupo de sujetos con el hábito de masticación de hojas de coca y un grupo control en la comunidad de. PO. Apaycauchilla, provincia de Tarma. Tesis de Bachiller en estomatología. UPCH. Lima; 1988. [acceso 28 de noviembre del 2016]. Disponible en. DE. https://es.scribd.com/document/278138833/RICARDOALBERTOROJASS ARCO-pdf. A. 17. Goicochea I. Estudio de la cavidad bucal en los sujetos habituados a. TE C. la masticación de hojas de coca en la hacienda Collambay – Trujillo. Tesis de Bachiller en Odontología. UNMSM. Lima; 1954. [acceso 28 de. IO. diciembre del 2016]. Disponible en. BL. http://www.cop.org.pe/bib/tesis/EDITHANAMELVARAMOSLAVADO.pdf. BI. 18. Ayala M.C. Acción de la coca y la llipta frente al ácido láctico y Ph de la saliva y la dentadura del aborigen del altiplano. Tesis de bachiller en Odontología. Lima; 1963. [acceso 23 de diciembre del 2016]. Disponible en https://www.scribd.com/document/231700793/Antimicrobiano-Coca 19. Alvarado V, Moromi N. Plantas medicinales: Efecto antibacteriano in vitro de Plantago major L, Erythroxylum novogranatense var. Truxillense y. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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