Nuevo reactivo para el diagnóstico rápido de la mastitis bovina

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(1)SECCION. DE. CIENCIAS. NUEVO. ANIMALES. REACTIVO RAPIDO. .JOSE. M•. .JIMENEZ. Y. .JORGE. PARA. EL. DIAGNOSTICO. DE LA MASTITIS SOVINA. BOTERO. ANGEL. *. * *. IN T ROD U C CION. Se han realIzado numerosas investigaclOnes con el obJeto de determinar pOl' medio de metodos sencillos, seguros y rapidos, el estado de los tejldos de Ia ubre, ya que de su funcionamiento normal depende en gran parte Ia pl·oduccion de Ieche. En el pais se conocen y practican algunos metodos, pero hasta ahora no se hn publicado nada relacionado con Ia preparaclon de reachvos para el diagnostico precoz de la mastitis bOVIna. En este trabajo se informa, pOI' primera vez en Colombw, Ia preparacion de un reactivo con materIa prima l1acional casi en Sll totalidad y los resultados obtenidos, comparados con el llamado HCalifornia l\lashtis Test" (GMT).. REVISION DE LITERA TURA Se ha escrito mucho sobre la mastItis. Esta cs una enfermec1ad mfecciosa producida pOl' agentes microbuHlos espccifICOS Y Sll ¥ ContnbuclOu del Luilorntorlf) de InvestlgnclOnes l\!eUll..l:' Yetcrmnrl!H. (LIl\lV) del In~tltuto Colombtnno AgTopcclIurlo. leA ("1' Re~pect1vamentc Patologo ASlstcnte del Luhol ntorlO de I nn:- . . tIg' 1 clones I\tedlcns VctCI mann~ GlUdau UnlVel ~lt:\Il:l. Hog-ota. ~. Jefe de Pluntn" Fom1111~dorns de In Sh{~l1 Colomblana S . A. -. 303-.

(2) prescncia cshl cstrechnmelltc rc]nclOnnda con los metoclos de 01'deno y con el mancJo general del hato (G). La lechc de am males afectados de maRtitis se altel'a en propordon directn a In intensidad del proceso illflamatorio. Estas alteraciones son detcctables con el uso de reactivos especiales. Los metodos mas usados para el diagnostico de la mastitis son: 1. EI exnmeri fisico de ]n ubre (9). 2. EI examen de Ins caracterlsticas de In leche y el Hamado "strip cup" introducido pOl' l\Ieak (4). La determinacion de] pH y la estimaci6n del porcentaje de CIOl'llrOS (G). 3. La determinacion del numero de celulas pOl' centimetro cubieo de leche, principalmente leucocitos ' polimorfonucleares, ya que su presencia en alto grado, indica condiciones anormales. Esta determinaci6n se puecle haeer pOl' recuento microscopico o pOl' pruebas modificadas, tales como ]a prueba de catalasa, In prueba de "Thiteside (10), ]a prueba de IVlastitis de California (7) y el metodo para comprobar ]a calidad de ]a leche Hamado H:Milk Quality Test" (lVI:QT). 4. Aislamiento de las bacterias patogenas. De los mHodos antes enumerados los mas empleados en el control de ]a mastitis en much os paises son la prueba de l\iastitis de California, llamada en Europa "Schalm :Mastitis Test", y ultimamente el metodo parn probal' la calidad de Ia leche (l\iQT). A las muestras de leche positivas a las reacciones anteriores se les practica cultivos bacteriales; de esta manera se puec1e exammar un mayor numel'o de vacas, a un costo relativamente econ6mico. En nuestro medio estos cOlltroles se hacen principalmente a base de culbvos bacteriologicos, 10 que hace mas caras las campanas contra la mastitis. De ahi Ia Importancia del uso de un reactivo econ6mico para el diagnostico riipido. En el desarrollo de Ia prueba de California para el diagnostico de mastitis (7), se concluye que Ia reacci6n se puede lIevar a cabo cuando Ia leche con alto conteniclo celular, se pone en contacto con las sales de soclio 0 de potasio de cualquiera de ]05 siguientes gl'upos en las concentraciones apropiadas: iicidos grasos de cadenas largas de carbono, sulfatos alcalinos, sulfonatos de alkalil, arisulfatos de alkalI 1 0 arisulfonatos de alki1.. 304 -.

(3) l\fATERIALES Y METODOS En el comercio se encuentran varios productos que contienen las sustancias anionicas de tension aetiva, con las cuaIes se puede preparar el reactivo. Dos de sus formulas comerciales son =. Reactivo A: EI cual contiene alkil-aril-Slllfonato de trietanol-amina, en una eon centra cion del 40 pOl' dento aproximadamente. Este fue el reactivo usado en este trabajo.. Rea·ctivo B: EI cual eontiene alkil-aril-sulfonato de sodio, en una concentracion del 25 por ciento aproximadamente. Se prepararon reactivos a concentraciones entre el tres y el cinco pOl' ciento de Ia suhstancia aetiva, en solucion acuosa con bromocresol purpura como indicador a una concentracion final de uno pOl' 10.000. Se ajust6 el pH hasta un pun to cercano al neutro. Se compararon estos preparados con el reactivo original usado para el "California Mastitis Test", Con el deseo de apreciar mas nitida Ia reaC'cion, se cambio el indicador pOl' el cristal violeta a una concentracion de uno en 32.000. Se examinaron 580 muestras de cuartos mamarios usando el reactivo nacional y el de Ia prueba de California, en las bandejas especiales para estas pruebas.. P1'ocedhnicnto de la PnlCba. Se pueden usaI' los primeros chorros de Ieehe, los siguientes 0 los ultimos, dependiendo Ia positividad de Ia reacci6n del grado de inflamacion, asi: cuando Ia inflamacion de Ia glandula es limitada, las reacciones positivas tienden a ser mas intensas con los primeros chorros y se van debilitando hasta desaparecer completamente con los ultimos. Cuando Ia inflamacion es generalizada, los ultimos chOrl'OS dan reacciones mas intensas. Cada cuarto se ordefia depositando su conteniclo eri uno de los compartimientos de la bandeja. Se aconseja ordefiar aproximadamente de cuatro a ocho centimetr~s ct"lbicos; se homogeniza con dos 0 tres movimientos circulares; se bota el exceso haciendo gil-al' Ia bandeja a una posicion casi vertical; asi quedan tres cen~ timetros ct"lbicos que es la cantidad requerida para Ia prueba; se evita que se mezclen las leches de los diferentes compartimientos de Ia bandeja (Figura 1), La bandeja se coloca con una inclinacion de 45 gracIas, se Ie adiciona el reactivo en cantidac1 eqllivalente al \'olllmen de leche -. 305-.

(4) cviL'lndo In formaci6n de burbujas. Si se afiade muy poco reactivo se pueden producir reacciones positivas fnlsas, mientras que un exceso no interfiere significativamentc. El reactivo y In Ieche deben ser mezclados pOl' medio de movimientos circulares de In bandeja en un plnno horizontal (Figura 2). Al hacer Ia mezc1a ocurre In reaccion, Ia cual debe sel' leida inmediatamente. Las reacciones positivas a "trazas" y "d6bilmente positivas" tienden a desapnreeel' pOl' el movimiento continuo de Ia bnndeja. Una vez leida In renccion, se desecha el contenido de la bandeja y se enjuaga; los residuos de agua que quedan se eliminan pOl' medio de sacudidas de Ja handeja y asi queda lista para otra prueba. No es necesario sccar perfectc.'1mente Ia bandeja para usarla despues, ya que Ia humedad no afecta los resultados del examen siguiente. RESULTADOS Con el reactivo nacional preparado a concentraciones entre el tres y el cinco pOl' ciento con pH cercano al neutro, se obtuvo los siguientes resultados: Porcenta)cs. 580. 100. N° de muestras con resultados identicos. 524. 91. N° de muestras con resultados diferentes. 56. 9. N° de muestras examinadas . .. .... Las reacciones en donde se apreciaron las diferencias fueron en los grados denominados Trazas y uno. Las lecturas en los grados dos, tres y Negativo fueron exactamente iguales (Tabla 1). Se observa mayor contraste con eI ,uso de cristal vioIeL'l contra el fondo blanco del recipiente de plastico que se utiliza para Ia prueha, sin que las reacciones fuel'an diferentes companlndolas con el purpura de bromocresol (Figul'a 3).. 306 -.

(5) FIGURA. 1.. P.1! "" kcci ~ n. d<: III. kch<. t!n 1O'J (;U ltr;> ~(· mpar-ti · n elent"" ric h ban ·Jcin. dcnJe SP. rr e7c1 u .l con ig".lal c'lntid)j LTe lC'ltth,: .. :HGURA 1. .. I .1l It.che m';'., e1 reochvo experlm~nbdo . cc n In· dic'ldor de cri.. tal "ioleta . Ob~el "e--e que cada compartimientc. de 10 ban deja Queda con igu'll cantidad d(; m~zd'\ .. '. ,.. ,.. ,. .:.? . .. • ~. .. .'. r ' lGUn,A ~ .. L~~ th ,, ) C.,l:: U i:r. ..-. ... r .r··~'~l:.'1 J ~ (:"'_~::;tl·. £1. l: r :; n,o~tc~o l. rUlT:uln l'or d c:d ; t.l.1 vjC;),h . Sc cl.~;l! t"" ·...a m n or tCl~ tr :.l~tc c u~ r.l c~ Ll.ll y'i~ l t tn "d r c d f c r. ,)) lal : d~i ".. I:U' O. h~. r:. ~.: ~: ;: dir ::: rc :-:. t~~ ecr.~·. .r.~a{~'r~j,~ ll': !o!. ..,1. ..... '.,'. r\~ ·! :j~n~. :.?s' :<~ ! . ._-_ -.:~~ ;. ~ ~. ll:: r .c,: ,J>. 1.. . ~ ~.:~: .~:?<~~). .. .. ... >.::"A-:..... i~~. :'.. -; -~ - . -- ,. a ti l '. I!l. r; ':' .k'T~n·:ia.. 1. tOH', co:.. rc.-::o::l.. cL~i.

(6) TAnLA l. INTERPRETACION DE LAS REACCIONES SimbolG. Signlfi~ndo. Negativo T. Trazas. 1. Debilmente positiv~. Manificstn Positividad. 2. Fuertemente Positivo. 3. +. ac. Leche Alcalina. ~,,;,. '!<. ,~ ,:,. Leehc Acida. Descripcion de la ren<:cliin. La mczcla pel'manece liquida sin evidencia de formaci6n de precipitado. Se forma un ligero predpitado que se ve mejor rotundo 1a. bandeja e incIinandoIa de un Iudo a otro y observando si Ia mezcIa fluye en el fondo de Ia copa. Las trnzas tienden a desaparecer con el continuo movimiento de In mezcla. Se forma precipitado manifiesto pero sin tendencia a In formacion de gelatina. En alg-unas leches In reaccian es reversible; POl' el continuo movimiento de Ia bandeja el precipitado puede d~sa parecer. Inmediatamente In mezcla se espesa a coagula can formacion de gelatina. Como Ia mezcIa se produce POI' rotacion de In bnndeja, tiende a situnrse en el centro. Cuando se suspende el movimiento, In mczc1a cubre nuevamente todo el fondo de Ja bandeja 0 copu. Se forma gelatina y Ia superficie de mezcla toma forma convexa. Comunmente aparece un levantamiento central, el ellal se proyecta permanentemente sobre In masa ·principal, nun despues de suspender e1 movimiento. Por aumento de In viscosidad, In mnsa tiende a adhel'irse n1 fondo de In copn. Este resultado debe ser tenido en cuenta a1 efcctuar la prueba, siempre que In rcacci6n sea manifiestanll'nte positiva. Se aprecin cstu POl' un color purpura intens:::.. In. EI bromoc resol purpura \'ira. manifie s tumentc a amarillo (pH 5,2). Este stlllbolo dehe Sl'l' f1dicionndo al l"csult:.ndo, cuando In mezcla es amarilla.. Pl\IN = LClIcocitos polimorfonuc1C'arc!>. ac = Addo.. Interpr~tndon. 0-200.000. celulas por cubico. 0-25% Pl\IN. * 150.000 - 500.000 celulas pOl' centimetro cubico. centimetr~. 30-40% Pl\IN.. 400.000 - 1.500.000 celulas POl' centimetr~ cubieo. 40-GO % PMN.. 800.000 - 5.000.000 celulas por centimetro cubieo.. GO-70'lc. P1\IN.. Numero de cfIlllas gencralmente POl' encima de 5.000.000 pOl' cent!metro cubieo. 70-80~~'. Pl\IN.. Una l'caeClOn nlcalina reflej a una depresitm o disminuci6n de In nctividnd . st'Cretorn . Esto pllede ocurrir tanto pOI' efectos de la inflamaci6n como POl' secnmiento de In g-l:indula. Leches mnnifiE.·stumcnte itcidas en In ubre son rarns. Cunndo sc en cuentran indican fermentaeiun de Ia Incto s a pOl' ncci()n hndl'1'in1 d('ntro de In go!:lndnla ..

(7) Cuando se cfecti'la In prueba con los primeros chorros de leche, los rcsultnclos se deben interpretal' de ]n siguiente manera: 1. Dcbilmcnte positiYo; puede sel" considel'udo como sospechoso pnra mastitis; 2. l\Ianifiegta positividad, y 3. Fuertemente positivo.. RESUMEN En el presente trabajo se informa pOl' primera vez en el pais la preparacion de un reacth'o similar al CMT y se dan a conocer varios productos comerciales, con los cuales se puede preparar reactivos similares. Se justifica Ia genel'alizaci6n de su uso, entre otrns razones pOl' In faciliclml para efectuar e intel'pretar ]a prueba, Ia economin de los materiales y seguridad de sus resultados, a la \'ez que puede sel' efeduada en el momento del ordeno.. BIBLIOGRAFIA 1.. BAKER, J. C. and R. S. BREED. 1920. The Reaction of Milk in Relation to the Presence of Blood Cells and of Specific Bacterial Infectious of the Udder. N. Y. State Agr. Exp. Sta. Tech. Bull. 80.. 2.. BAKER, J. C. and L. L. VAN SLlI{E. 1919. A Method for the Preliminary Detection of Abnormal Milk Based on the Hidt'ogen Ion Concentration. J. BioI. Chern. 40: 357.. 3.. GRAY, D. 1\1. and O. W. SCHALl\I, 1960. Interpretation of the California Mastitis Test Results of Milk from Individual Mammary Quarters. Bucket Milk and Bulk Herd Milk. J. A. V. 1\1. A., 136: 235.. 4.. l\IEAK, H. UnG. Control and Radication. of Infectious Mastitis in. Dair~... Herds. Cornell. Vet. (]: 36.. 5.. RUI'T., O. J. 1959. Diagn6stico Precoz de la Mastitis. Ganaderia Colombiana 12: 15.. E'.. SCHAL~I,. 7.. SCHAL!\Y, O. and D. O. NOORLANDER. 1957. Experiments and Obser~ vations Leading to Development of the California Mastitis Test. J. A. V.l\1. A., 130: 199. .. 8.. U. S. PUBLIC HEALTH SERVICE. 1965. Screening Test for the Detection of Abnonnal Milk. Pub. Health Servo NQ 1306.. 9.. UDALL, D. H. and S. D. JOHNSOr-.. 1931. The Diagnosis and Control of Mastitis, Cornell Vet., 21: 190.. 10.. ·WHITESIDE, \V. H. 1939. Observations on a New Test for Presence of Mastitis in Milk, Canadian Pub. Health Servo 30: 44.. O. 'V. 1962. A Syllabus on the Bovine Mammary Glands in Health and Disease. University of California, Davis.. "T.. -. 308-.

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