ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA 1
1.. OOBBJJEETTIIVVOOSS
DemDemostostrar rar el el efeefecto cto de de difdifereerententes s conconcecentrntraciacionones es de de cricristastal l viovioletletaa sobre bacterias Gram positivas y Gram negativas.
sobre bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Demostrar como las concentraciones en que se diferencia cada crisolDemostrar como las concentraciones en que se diferencia cada crisol varia el crecimiento de microorganismos.
varia el crecimiento de microorganismos.
Hacer la tinción Gram para determinar si la bacteria es cocos o bacilosHacer la tinción Gram para determinar si la bacteria es cocos o bacilos según los pasos que hicimos con anterioridad.
según los pasos que hicimos con anterioridad.
Saber a qué tipo de Saber a qué tipo de agrupación pertenece dicha bacteria.agrupación pertenece dicha bacteria.
2.
2. FUFUNDANDAMEMENTNTO TO TEOEORICRICOO
Cristal violeta Cristal violeta Los colorante
Los colorantes s del del grupo trifenilmegrupo trifenilmetano presentatano presentan n una una marcmarcada ada accióacciónn bacteriosttica selectiva sobre las bacterias Gram positivas! en diluciones bacteriosttica selectiva sobre las bacterias Gram positivas! en diluciones que aparentemente no afectan a las Gram negativas. "sta propiedad se que aparentemente no afectan a las Gram negativas. "sta propiedad se apr
aproveovechcha a medmedianiante te la la incincorporporaoracióción n de de algalguno uno de de esesos os cocoloralorantentes s enen medios de cultivo con el fin de facilitar el aislamiento de bacterias Gram medios de cultivo con el fin de facilitar el aislamiento de bacterias Gram negativas.
negativas. "ntre los
"ntre los colocoloranterantes s usadusados os con estos con estos proppropósitos estn# cristal violeta!ósitos estn# cristal violeta! fucsina bsica! verde brillante y verde malaquita.
fucsina bsica! verde brillante y verde malaquita. Las
Las cocondindiciociones nes de de salsalud ud en en una una nacnación ión estestn n detdetermerminainadasdas! ! en en gragrann parte! por la capacidad de sus habitantes para controlar efica$mente los parte! por la capacidad de sus habitantes para controlar efica$mente los pr
proboblelemamas s mimicrcrobobiaianonos. s. La La cocoststumumbrbre e didiararia ia de de pupuririfificacar r el el agaguaua!! pasteuri$ar la leche o la conservación de alimentos! son métodos para pasteuri$ar la leche o la conservación de alimentos! son métodos para controlar las poblaciones microbianas. Los microorganismos son también controlar las poblaciones microbianas. Los microorganismos son también cap
capaceaces s de de desdestrutruir ir matmaterierialeales s valvaliosiosos os cocomo mo madmadera era y y fibfibras ras te%te%tiletiles!s! causando pérdidas que necesitan evitarse con medidas
causando pérdidas que necesitan evitarse con medidas eficaces.eficaces.
La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente empleada en el diagnostico microbiano! fue descubierta por Hans &hristian Gram en '((). diagnostico microbiano! fue descubierta por Hans &hristian Gram en '(().
La
La mayor pmayor parte darte de las e las muestras muestras sometidas sometidas a e%a e%amen amen cuando cuando se se sospechasospecha infec
infección bacción bacterianteriana deben ser e%tea deben ser e%tendidandidas en frotis sobre las en frotis sobre laminillaminillas s dede vidrio! te*idas e%aminadas en el
Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta +colorante Los reactivos empleados en la tinción de Gram son el cristal violeta +colorante bsico,! lugol+mordiente,! alcohol cetona+decolorante, y safranina+colorante de bsico,! lugol+mordiente,! alcohol cetona+decolorante, y safranina+colorante de contraste.
contraste. "l
"l cricristastal l viovioletleta a sirsirve ve cocomo mo colcoloraorante nte bbsicsico o ununiéniéndosdose e a a la la parpared ed celcelulaular r bacteriana! con ayuda del mordiente +lugol, que refuer$a la unión del colorante. bacteriana! con ayuda del mordiente +lugol, que refuer$a la unión del colorante. Las bacterias Gram positivas! debido a la estructura y composición bioqu-mica Las bacterias Gram positivas! debido a la estructura y composición bioqu-mica de su pared celular retienen el compleo cristal violeta/lugol y aun después del de su pared celular retienen el compleo cristal violeta/lugol y aun después del tratamiento con el colorante bsico! por lo que se observa de color purpura o tratamiento con el colorante bsico! por lo que se observa de color purpura o violeta al microscopio.
violeta al microscopio.
Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsico cuando son tratados Las bacterias Gram negativas pierden el colorante bsico cuando son tratados con el
con el decodecolorantlorante e debidebido a do a que el que el alcoalcohol disuelve el hol disuelve el contecontenido lip-dicnido lip-dico o de lade la pared celular +lo que aumenta la permeabilidad celular,! dando como resultado pared celular +lo que aumenta la permeabilidad celular,! dando como resultado la pérdida del compleo cristal vileta/lugol. Las bacterias decoloradas captan la pérdida del compleo cristal vileta/lugol. Las bacterias decoloradas captan en
entotoncnces es el el cocololorarantnte e de de cocontntrarastste! e! rara$ó$ón n popor r la la cucual al esestatas s babactctereriaias s sese observan de color roo al microscopio.
observan de color roo al microscopio. "l cristal violeta es un
"l cristal violeta es un colorante que penetra la pared celular de bacterias Gramcolorante que penetra la pared celular de bacterias Gram positivas y negativa.
positivas y negativa.
0osteriormente se agrega el lugol que es mordiente y se forma un compleo 0osteriormente se agrega el lugol que es mordiente y se forma un compleo con el cristal violeta.
con el cristal violeta.
Durante el proceso de decoloración con alcohol/acetona! la gruesa pared de Durante el proceso de decoloración con alcohol/acetona! la gruesa pared de los Gram positivos impide la salida del colorante manteniendo la coloración los Gram positivos impide la salida del colorante manteniendo la coloración violeta.
violeta.
"n cambio! por el alto contenido lip-dico de la pared de los Gram negativos! el "n cambio! por el alto contenido lip-dico de la pared de los Gram negativos! el alc
alcohoohol/al/acetcetona ona gengenera era porporos! os! por por los los cuacualesles! ! escescapa apa el el cricristastal l viovioletleta! a! lala bacteria se decolora y ti*e de
bacteria se decolora y ti*e de color roo con el color roo con el colorante de contraste.colorante de contraste. ¿or !"# "$as %a&terias se ti'e$ (e violeta )
¿or !"# "$as %a&terias se ti'e$ (e violeta ) otras rosa(as*otras rosa(as* L
Laass (i+er(i+ere$&ie$&ias as %,si%,si&as&as que nos que nos perpermitmiten en ver las ver las bacbacterterias de ias de disdistintintostos colores residen en la
colores residen en la -are( %a&teria$a-are( %a&teria$a! las paredes celulares de bacterias de! las paredes celulares de bacterias de tipo gramnegativo poseen una capa lip-dica e%terna la cual se ti*e con cristal tipo gramnegativo poseen una capa lip-dica e%terna la cual se ti*e con cristal violeta al igual que la pared de las células de tipo Gram positivo pero con la violeta al igual que la pared de las células de tipo Gram positivo pero con la diferencia de que estas no tienen una esa capa lip-dica! que al ser tratada con diferencia de que estas no tienen una esa capa lip-dica! que al ser tratada con alc
alcohoohol l dedesapsaparearece ce +de+debidbido o a a quque e el el alcalcohoohol l es es un un disdisolvolventente e orgorgninico co yy disuelve la pared lip-dica, y por tanto la célula queda de nuevo sin te*ir y para disuelve la pared lip-dica, y por tanto la célula queda de nuevo sin te*ir y para poder observarla basta con a*adir safranina +colorante, que se quedar en la poder observarla basta con a*adir safranina +colorante, que se quedar en la capa de mureina que ha quedado ahora e%puesta.
1igura'
"n la figura ' se observa que las Gram+2, por tener varias capas superpuestas en paralelo de peptidoglucano se ti*en violeta y las Gram+3, por tener una sola capa de peptidoglucano y por su capa e%terna se ti*e roi$o.
Materiales E!"i-o '. 0ipetas
4. 5ubos de prueba 6. 0icetas con agua
destilada ). 7agueta 8. 9lgodón :. &anastilla ;. Gradilla (. 1rascos de vidrio <. 0lacas 0etri '. =alan$a 4. >echero bunsen 6. Gradilla y tr-pode ). 9utoclave
Me(ios (e &"ltivo a -re-arar0
1oto'
9gar nutritivo#
9gar # '8gr
0eptona# 8gr "%tracto de carne# 6gr 0reparación del agar nutritivo
46 ////// '???ml
@ /////// 6??ml / / / / / / / @ A :.<gr
echamos el agar en un vaso precipitado y agregamos
6??ml de agua! luego mover con una vagueta para disolver el agar nutritivo.
0ara disolver meor el agar nutritivo calentarlo con el mechero.
Luego colocar el agar nutritivo en 4? tubos de prueba! conteniendo cada uno '8ml! tapar los tubos con algodón.
Después colocar los tubos en una canastilla y colocarlo en el autoclave. 0ara la esterili$ación de agar.
"sterili$ar los materiales a usar en el horno.
Distri%"&i$ (e los e(ios (e &"ltivo0
• ) tubos con agar nutritivo estéril! conteniendo '8ml cada tuboB para cada
grupo.
• 6 tubos con < ml de agua destilada. • Solución cristal violeta de '#'???
• 6 pipetas de 'ml para repartir el cristal violeta luego de la dilución. • ) placas estéril para cada grupo
• ' inoculador para cada grupo
• &olonias 9 y = para la muestra de bacterias.
ro&e(iie$to
>antener ) tubos con agar nutritivo fundido en el ba*o >ar-a a )8C&.
"n 6 tubos de prueba y echar <ml de agua destilada.
5ransferir 'ml de la solución cristal violeta '#'???! con una pipeta! a un tubo de prueba# tuvo C '. "sto da una
dilución de '#'????.
&on la misma pipeta! transferir 'ml de la dilución de
'#'???? del tubo C' al tubo C 4. esto da una dilución de '#'?????.
5ransferir 'ml de la dilución de '#'????? del tubo C4 al tubo C6. esto da una dilución de '#'??????.
5omar 6 pipetas para cada tubo de prueba +C'! C4! C6, y transferir 'ml de cada dilución a tres placas 0etri
+identificando cada placa, quedando una placa sin colorante.
7erter el agar fundido en las tres placas 0etri y me$clar bien el colorante con el agar rotando suavemente la placa.
7erter el contenido del último tubo de agar en la placa 0etri sin colorante para que sirva de control.
&uando ha solidificado el agar! dividir las placas en dos partes iguales +identificarlos 9 y =,.
9yudndonos con el inoculador esterili$ado hacer estr-as con la muestra de la colonia 9! en la parte 9.
Hacemos lo mismo para el lado =! pero ahora con la colonia =.
0rocedemos de igual forma con las dems placas.
Envertir las placas e incubarlas a 6;C& por )( horas
1. RESULTADOS
Dilución Grupo ' Grupo 4 Grupo 6 Grupo ) Grupo 8
9 = 9 = 9 = 9 = 9 = '#'???? 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 '#'????? 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 '#'?????? 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 Sin colorante 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
+/,# significa que no hubo crecimiento. +2,# Significa que hubo crecimiento.
Grupo &olonia 9 &olonia = C' =acilos G+/, =acilos G+/, C4 =acilos G+/, "streptobacilo G+/, C6 =acilos G+/, =acilos G+/, C) "streptobacilo G+/, =acilos G+2, C8 =acilos G+/, "streptobacilo G+/, &olorante &oncentración &recimiento "scherichia &oli =acillus Subtilis &ristal 7ioleta 'F'???? / / 'F'????? 2 / 'F'?????? 2 2
&ontrol Sin colorante 2 2
2. DISCUCIONES0
Los resultados de la coloración Gram no fueron los esperados! esto debido a muchos factores! por no hacer uso adecuado de los materiales durante el e%perimento.
otamos que en los 8 grupos dio 2! esto quiere decir que hubo crecimiento en los cinco grupos.
otamos que la mayor-a de colonias fueron bacilosB esto es porque la cloración Gram +/, est relacionada con este! por eso nos proporciona estos resultados.
na de nuestras conclusiones a la que pod-amos llegar es como varia la cantidad de microorganismos en las diluciones utili$adas
5ambién llegamos a la conclusión de algo que ya sab-amos por medio de la teor-a! por eemplo que en 'F'???? no -bamos a notar ninguna de las dos bacteria +"scherichia &oli y =acillus Subtilis,! en cambio que en 'F'????? -bamos a notar solo el crecimiento de la "scherichia &oli y que en 'F'?????? iba a ver crecimiento de ambos.
9 esa conclusión fuimos capaces de llegar! ya que utili$amos la tinción gram y combinado con el microscopio +obetivo <;, para determinar a la bacteria! no solo para saber si era cocos o bacilus! sino que también para poder afirmar que agrupación pertenece.
3. RECOMENDACIONES
9l e%traer el agar nutritivo de la autoclave debemos mantenerlo a una temperatura de )8 C& para evitar que se solidifique! ya que si este se solidifica perudicara en los resultados del e%perimento.
Se debe esterili$ar correctamente el inoculador antes de usarlo para e%traer el cultivo.
5ener cuidado cuando se utili$a el cido n-trico en la limpie$a de la moneda! evitar el contacto directo con este! haciendo uso de instrumentos adecuados como guantes! mascarillas para no respirara el gas del cido! ya que este puede causar quemaduras o irritaciones en los oos! etc.
La reali$ación del estriado en las $onas 9 y = de cada placa deben tratar de reali$arse en forma uniforme para poder notar las posibles diferencias entre las placas conteniendo diluciones del cristal violeta y la placa correspondiente al control +'F'???,. con la menor cantidad de microorganismo posible.
INFORME http#FFIII.forp.usp.brFrestauradoraFtemasJendoFtemasJcastFprinJbasJtr atJendod.html http#FFIII.monografias.comFtrabaos'8FfenolFfenol.shtml http#FFIII.geocities.comFlorigardeIegFpage''.html CUESTIONARIO http#FFcoli.usal.esFKebFeducativoFmicro4Ftema?(.htmlanchor'6:'<: http#FFcoli.usal.esFIebFeducativoFmJespecialF'8aprincipal.htm
ANE5OS
CUESTIONARIO
1. 6"# es "$ a7e$te %a&teriost,ti&o ) !"e !"iere (e&ir "$a a&&i$ %a&teriost,ti&a sele&tiva* .I$(i!"e al7"$as a-li&a&io$es -r,&ti&as (e este +e$e$o.
Se observa cuando se inhibe la proliferación pero no tiene lugar la muerte celular.
U$ a7e$te %a&teriost,ti&o#
Enhibe la s-ntesis de prote-nas. 9ctúa uniéndose a las ribosomas
0uede actuar el efecto dilución. "emplo#
Streptomicina! 5etraciclina! &loramfenicol 5etraciclinas y estreptomicinas +6?S, &loramfenicol +8?S,
La acción bacteriosttica se fundamenta en la inhibición del desarrollo microbiano mediante el bloqueo de diferentes factores de reproducción. o las mata directamente! pues una población de bacterias sin capacidad de reproducción o con capacidad disminuida para la misma es una población condenada a su desaparición. "n cambio un agente bactericida es aquel capa$ de matar a las bacterias.
A&&i$ %a&teriost,ti&a sele&tiva0
"s aquel efecto que sólo inhibe el crecimiento o reproducción de cierto grupo de microorganismos! mientras que no afecta o afecta en menos proporción a otro grupo de microorganismos.
"s por ello que se agregan a medios de cultivos agentes bacteriostticos para que éstos tengan carcter selectivo.
A-li&a&io$es0
Son sustancias qu-micas que tienen la capacidad de inhibir o matar a los microorganismos.
Destr"&tores I$8i%i(ores
=acterias =actericidas Ba&terioest,ti&os
Hongos 1ungicida 1ungistaticos
7irus 7irucida 7irustaticos
"l aOH se utili$a en la industria del vino para limpiar las cubas de madera. "l o$ono es utili$ado desde antes para tratamiento de agua! ahora se ha e%tendido su utili$ación y se aplica para tratar ambientes e incluso podemos tratar directamente sobre el organismo con fines terapéuticos +concentraciones de ?.?' ppm a menos,.
Los antibióticos son usados para preservar los alimentos! as- tenemos las tetraciclinas.
9gentes bacteriostticos se utili$an en la industria te%til como protección de materiales. "n la industria del maquillae para las cremas! lociones para después de afeitar! en perfumes.
Sustancia o 9gente capa$ de actuar sobre los microorganismos! ya sea inhibiendo su crecimiento o causando su muerte.
N9MO"S 09N9 &O5NOL9N >E&NOONG9ES>OS
=enéficos que generan el control d microrganismos por estos agentes#
• 0revenir la transmisión de las infecciones y las enfermedades.
• 0revenir la contaminación o la proliferación de microorganismos
perudiciales.
• "vitar el deterioro o destrucción de materiales por los microorganismos.
1. OBJETIVOS
Demostrar la acción oleodinmica de algunos metales.
Denotar las diferencias de cada grupo para ver las diferencias y similitudes y as- poder saber en qué se equivocó cada grupo.
2. FUNDAMENTO TEORICO
Los iones de algunos metales pesados en altas diluciones son capaces de eercer una acción tó%ica sobre las bacterias y otros microorganismos. Si se coloca una moneda o un tro$o de cobre debao o sobre un medio de cultivo sólido recién inoculado con un microorganismo! luego de incubar se puede observar que no hay crecimiento en la $ona alrededor del metal. "sta es la $ona oligodinmicaB con frecuencia las colonias en el borde del halo de inhibición son de mayor tama*o que en el resto de la placa! debido a que tuvieron una mayor disponibilidad de nutrientes que no fueron utili$ados en la $ona sin crecimiento.
9cción oligodinmica! son activos en muy baas concentraciones +ppm,. Enactiva espec-ficamente en$imas claves al reaccionar con grupos SH. Son muy tó%icos y su actividad disminuye con la e%istencia de fluidos biológicos. METALES ESADOS 9 SUS COMUESTOS
La mayor-a de metales pesados! ya sean solos o en ciertos compuestos! causan da*o a los microorganismos. Los ms efectivos son el mercurio! plata cobre.
La acción oligodinmica es la propiedad que tienen ciertos metales en cantidades sumamente peque*as! en particular la plata! de eercer efectos letales sobre las bacteriasB el término proviene de dos palabras palabras griegas oligos! que significa peque*o! poco y dynamis! que significa! fuer$a! poder.
"ste fenómeno se demuestra fcilmente en el laboratorio poniendo un peda$o de metal limpio +plata o cobre, sobre una placa de cultivo. Después de la incubación! se ver una $ona de inhibición +sin desarrollo, rodeando al metal. La cantidad de metal involucrada en el efecto inhibidor se puede e%presar en partes por millón.
Se cree que la eficacia de estas peque*as cantidades de metal se debe a la gran afinidad de que tienen ciertas prote-nas celulares por los ionesB se acumulan grandes cantidades en las células a partir de las soluciones diluidas. Los metales con actividad oligodinmica! particularmente la plata! se han usado en diferentes aplicaciones con el propósito de controlar las poblaciones microbianas como el tratamiento de los suministros de agua! preparación de art-culos antisépticos como vendaes y ungPentos! y la impregnación de diferentes teidos. La acción oligodinmica proporcionar un acercamiento notable para el control de los microorganismos y al parecer se han reali$ado muchos dise*os y art-culos tomando como base este fenómeno.
Co-"estos (e etales -esa(os
>uchos compuestos de metales pesados son útiles como germicidas o agentes antisépticos. Los compuestos de metales pesados que ms descuellan son los de mercurio! plata y cobre.
Los metales pesados y sus compuestos actúan contra los microbios al combinarse con las prote-nas celulares y desnaturali$arlas.
"n el caso del cloruro de mercurio la inhibición es directamente sobre las en$imas que contienen grupos sulfhidrilos. Las sales de los metales pesados también precipitan las prote-nas! y a grandes concentraciones estas sales causan la muerte de las células. Sin embargo! la dilución mayor a la cual algunos de estos compuestos muestran su acción bactericida o bacteriosttica sugiere interferencias ms sutiles con los mecanismos celulares normales. Me&a$iso (e (esi$+e&&i$ e(ia$te io$i<a&i$ &o%re= -lata
Los iones cargados positivamente +&u42, en el agua intentan buscar part-culas
con polaridad opuesta! como bacterias! virus y hongos. Los iones de cobre cargados positivamente forman compuestos electrostticos con células de microorganismos que estn cargados positivamente. "sto produce da*o o interrupción en la permeabilidad de la pared celular y por lo tanto evita la toma de nutrientes.
Los iones de cobre penetran en la pared celular creando la entrada de iones de plata +9g2,. "stos penetran en el núcleo de los microorganismos! uniéndose a
varias partes de la célula como el 9D y el 9N! prote-nas y encimas respiratorias impidiendo el funcionamiento normal de estos sistemas celulares. &omo resultado no hay ms crecimiento celular o división celular! impidiendo la multiplicación y desarrollo del microorganismo y provocando su muerte. Los iones se mantienen activos hasta que son absorbidos por un microorganismo. ro-ie(a(es a$tii&ro%ia$as (e la -lata
La plata es un antimicrobiano de amplio espectro capa$ de destruir bacterias! hongos! virus y proto$oos.
everas! peque*os electrodomésticos! mquinas de hielo! filtros de agua! envases alimentarios y papel para almacenamiento de alimentos! tablas de cortar! cuchillos e incluso una corte$a plstica de queso! productos de limpie$a! interruptores de lu$! teclados de ordenador y móviles! ropa futurista y $apatos! sistemas de aire acondicionado! vidrio y materiales de construcción! tuber-as y grifos! apósitos y material hospitalario. 5odos estos productos tienen en común la utili$ación de los iones de plata como sistema de tratamiento antimicrobiano.
1igura'
9unque pueda parecer un descubrimiento tecnológico de lo ms innovador! lo cierto es que la plata se ha venido usando con fines protectores contra las infecciones desde hace miles de a*os. Las civili$aciones ms
antiguas como los egipcios o los fenicios ya constru-an las cisternas de almacenamiento de agua con plata para reducir las enfermedades causadas por el consumo de aguas contaminadas o
para mantenerla en buenas condiciones durante
sus largas traves-as en barco. Los emperadores chinos utili$aban cubiertos de plata! igual que ms tarde lo hicieron las familias acomodadas europeas! como medida preventiva de las plagas. "n el a*o '??? el 7aticano decretó el uso de clices de plata para la comunión con el propósito de reducir las frecuentes QindisposicionesR entre sus sacerdotes y feligreses. Las referencias a la plata como protectora contra las infecciones son continuas a lo largo de la historia! aunque no fue hasta '(<6 cuando arl Kilhelm von ageli! botnico sui$o! hi$o pública la primera investigación demostrando las caracter-sticas antimicrobianas de la plata. "s el caso de la introducción de monedas de plata en los tanques de agua o leche para evitar su deterioro! as-como su temprana utili$ación en la medicina# limaduras de plata para curar heridas! ungPentos antibióticos y para quemaduras! gotitas en los oos de los recién nacidos! amalgama dental! incluso la 9S9 utili$ó iones de plata para proteger el agua durante los viaes espaciales.
Materiales E!"i-o '?.0ipetas
''. 5ubos de prueba '4.0icetas con agua
destilada '6.7agueta ').9lgodón '8.&anastilla ':.Gradilla ';.1rascos de vidrio '(.0lacas 0etri 8. =alan$a :. >echero bunsen ;. Gradilla y tr-pode (. 9utoclave
Me(ios (e &"ltivo a -re-arar0
9gar nutritivo#
9gar # '8gr
0eptona# 8gr "%tracto de carne# 6gr
re-ara&i$ (el a7ar $"tritivo 46 ////// '???ml
@ /////// 6??ml / / / / / / / @ A :.<gr
0esamos :.<gr de agar
echamos el agar en un vaso precipitado y agregamos
6??ml de agua! luego mover con una vagueta para disolver el agar nutritivo.
0ara disolver meor el agar nutritivo calentarlo con el mechero.
Luego colocar el agar nutritivo en 4? tubos de prueba! conteniendo cada uno '8ml! tapar los tubos con algodón.
Después colocar los tubos en una canastilla y colocarlo en el autoclave. 0ara la esterili$ación de agar.
"sterili$ar los materiales a usar en el horno. Distri%"&i$ (e los e(ios (e &"ltivo0
Nepartir los siguientes materiales
• ' tuvo con '8 ml de agar nutritivo estéril. • ' placa 0etri estéril
• ' moneda limpia. • ' pin$a
• Solución de cido n-trico al '?T
ro&e(iie$to
Limpiar la moneda sumergiéndola dentro de una solución al '?T de cido n-trico.
Sacamos la moneda con una pin$a. Lavar bien la moneda con agua destilada para quitarle todo el cido.
&olocar la moneda en el centro una placa 0etri.
5omar un tubo con agar nutritivo fundido del ba*o >ar-a mantenido a )8C&.
"sterili$ar el inoculador. "%traer una muestra de bacterias de la colonia 9 de la placa 0etri de un laboratorio anterior y le introducimos en un tubo con agar nutritivo.
Notar el tubo entre las palmas de las manos para obtener una distribución uniforme de los organismos.
7erter el agar inoculado dentro de la placa de 0etri que contiene la moneda.
Dear que solidifique el agar.
Envertir la placa e incubarla a 6; C& por )( horas.
Mona de estimulación Mona oligodinamica
Mona de
desarrollo
). DISCUCIONES
"n las fotos se pude observar qué no presenciamos crecimiento cerca de la moneda! pero si alrededor de la moneada! con esto podemos concluir que mientras ms leos estemos de la moneda se notara ms crecimiento de colonias.
4. CONCLUSIONES
Se observa la acción oligodinmica de los metales pesados! ya que se nota que el crecimiento de microorganismos en un cultivo! es afectado por la presencia de metales pesados. 0or lo que se logra diferenciar tres $onas# la $ona oligodinmica! $ona de estimulación y de crecimiento normal.
Se pudo notar un crecimiento de bacterias pero aleados de la moneda de die$ céntimos en las $onas de estimulación y de crecimiento normal
Se diferencian tres $onas# la $ona oligodinmica +que es una $ona despeada donde no aparecen colonias,! $ona de estimulación +$ona angosta donde se presenta un crecimiento abundante, y la $ona de crecimiento normal +se presenta en todo el resto del agar,.debido a eso las cantidades diminutas de iones metlicos estimulan el crecimiento mientras que concentraciones mayores producen inhibición.
>. RECOMENDACIONES
5ener cuidado cuando desinfectamos la moneda! ya que la placa esta al aire libre y se pude contaminar por agentes e%ternos.
desinfectar nuestras manos! en este caso no estaban desinfectadas y as- agarramos la moneda de die$ céntimos.
?. BIBLIO/RAFIA I$+ore
>E&NO=EOLOGE9. 9utor# >ichael U 0elc$ar. 4da "dición '<(4. http#FFIII.elergonomista.comFmicrobiologiaFesteri.htm
C"estio$ario
http#FFbc.inter.eduFfacultadFyserranoFfactoresfisicosqui.htm
@. ANE5OS
CUESTIONARIO
1. E-li&ar a !"# se (e%e la a&&i$ oli7o(i$ai&a ) !"e a-li&a&i$ -r,&ti&a tie$e.
&iertos metales pesados o sus combinaciones qu-micas eercen efecto antimicrobiano a concentraciones muy baas +' parte en 4? millones,! esta acción recibe el nombre de acción oligodinmicaB los ms activos son el mercurio! la plata y el cobre. Los mercuriales poseen propiedad antiséptica y desinfectante. Su actividad antibacteriana se reduce fuertemente en presencia
de suero y de prote-nas tisulares. Los organomercuriales son menos tó%icos y custicos que las sales inorgnicas.
A-li&a&io$es0
"n las aplicaciones y productos ms propensos al desarrollo microbiano! la incorporación de agentes antimicrobianos como los iones de plata en el material matri$ del producto o en el recubrimiento del mismo para inhibir la proliferación de microbios supone una efica$ medida de precaución complementaria a la limpie$a periódica con desinfectantes qu-micos.
"n el mbito alimentario! el tratamiento por iones de plata se est aplicando actualmente a neveras domésticas! mquinas de hielo! papeles y envases alimentarios! tablas y cuchillos! superficies! cintas tr ansportadoras y maquinaria de la industria agroalimentaria! abones l-quidos para el lavado de manos a base de ó%ido de plata! productos de limpie$a profesional unto con el agua o%igenada.
5odas estas aplicaciones estn relacionadas con los alimentos! e impiden que los microorganismos cre$can y se desarrollen! por lo que son un factor ms para tener en cuenta en el cada d-a ms e%igente campo de la seguridad alimentaria.
Se estn haciendo estudios sobre un cepillo de dientes con una parte del cepillo que presenta un portacerdas y unas cerdas es el mismo! con la particularidad de que la parte del cepillo est provista de componentes a base de un material de acción olidobinmica +capa plateada,.
Los ms efectivos son mercurio! plata cobre y $inc.
9ctúan por la combinación ion metlico con prote-nas y en$imas del microorganismo! da*ando as- su sistema.
La capacidad que tienen los metales pesados para eercer actividad antimicrobiana se denomina acción oligodinmica.
5odos los compuestos de mercurio se usan como antisépticos y son pincipalmente microbiostticos.
Los compuestos de er&"rio ms comunes son el mercurocromo! el metafen y el mertiolato.
Los fungicidas mercuriales para hongos fitopatógenos estn prohibidos por sus efectos da*inos en el ambiente! el hombre y los animales.
"ntre los compuestos de -lata utili$ados como antisépticos est el $itrato (e -lata +9gO6, que en solución al 'T se ha utili$ado para -reve$ir i$+e&&io$es 7o$o&&i&as en los oos de los recién nacidos aunque actualmente se est reempla$ando por antibióticos como la penicilina.
n pocillo de plata puede desinfectar el agua y una medalla inhibir el crecimiento bacteriano en el laboratorio.
"ntre los compuestos de &o%re se encuentra el sulfato de cobre +&uSO), que se utili$a como algicida en los recipientes abiertos que contienen agua. 5ambién es fungicida por lo que se utili$a para controlar las infecciones fúngicas de plantas +>e$cla =ordelesa,.
Los compuestos de $inc también son fungicidas por lo que se utili$an para tratar el pie de atleta.
