Universidad Autónoma Metropolitana Unidad
Universidad Autónoma Metropolitana Unidad
Xochimilco
Xochimilco
Casiano Mulia Carlos Alberto Casiano Mulia Carlos Alberto Figueroa Padilla María Zamanta Figueroa Padilla María Zamanta
García Díaz Ana Rocío García Díaz Ana Rocío
García Ponce Karen García Ponce Karen Negrete Ramírez Mariana Negrete Ramírez Mariana Villa O’Dogherty Andrés Villa O’Dogherty Andrés
Modulo: Procesos Celulares Fundamentales
Modulo: Procesos Celulares Fundamentales
Trabajo de investigación: Virus del
Trabajo de investigación: Virus del
Herpes Simple Tipo I
Herpes Simple Tipo I
México, México, D.F, 6 de Abril del 2009 D.F, 6 de Abril del 2009
Índice
Índice
Introducción Introducción Marco teórico Marco teórico Conclusiones Conclusiones Glosario Glosario Bibliografías BibliografíasIntroducción
Introducción
El en el presente trabajo de investigación abordaremos los aspectos más relevantes El en el presente trabajo de investigación abordaremos los aspectos más relevantes sobre la enfermedad del herpes simple tipo 1 (VHS-1); enfocándonos particularmente a las sobre la enfermedad del herpes simple tipo 1 (VHS-1); enfocándonos particularmente a las complicaciones que dicha enfermedad puede ocasionar en el Sistema Nervioso Central, complicaciones que dicha enfermedad puede ocasionar en el Sistema Nervioso Central, tomando como ejemplo a
tomando como ejemplo a la encefalitis herpética.la encefalitis herpética.
Como una breve introducción cabe mencionar las características más sobresalientes de la Como una breve introducción cabe mencionar las características más sobresalientes de la enfermedad:
enfermedad: El VHS-1 es uno El VHS-1 es uno de los virus de los virus mejor conocidos, lo que se mejor conocidos, lo que se debe a la frecuenciadebe a la frecuencia con que produce infecciones y a su proclividad para originar ulceras recurrentes de piel y con que produce infecciones y a su proclividad para originar ulceras recurrentes de piel y mucosas. El herpes simple persiste en estado latente y reactiva para producir excreción mucosas. El herpes simple persiste en estado latente y reactiva para producir excreción viral, enfermedad o ambas cosas.
viral, enfermedad o ambas cosas.
El espectro clínico de las infecciones por los VHS es amplio, estando implicados en El espectro clínico de las infecciones por los VHS es amplio, estando implicados en les
lesioniones es mucmucocutocutáneaáneas s loclocaleales s o o genegeneralralidaidadesdes, , infinfeccección ión genigenitaltal, , infinfeccección ión ocuocularlar,, infección congénita y neonatal, afectación neurológica (encefalitis) e infección visceral. La infección congénita y neonatal, afectación neurológica (encefalitis) e infección visceral. La primoinfección herpética puede ser asintomática, pero también producir lesiones cutáneas primoinfección herpética puede ser asintomática, pero también producir lesiones cutáneas en forma de exantema veliculoso (infección perioral, perigenital, neonatal). Ocasionalmente en forma de exantema veliculoso (infección perioral, perigenital, neonatal). Ocasionalmente p
prrododucuce e cocommplpliicacacicionones es neneururolológógicicas as y y viviscscereralales es en en esespepecicial al en en papacicienentetess inmunocomprometidos.
Oraciones Tópicas
Oraciones Tópicas
•
• El propóEl propósitsito o de esta invesde esta investigtigaciación ón es conocees conocer r los tralos tratamtamienientos tos parpara a elel
control del
control del Herpes Herpes Simple tSimple tipo 1.ipo 1.
•
• El propósitEl propósito o de esta de esta invesinvestigactigación es ión es conocer la conocer la patolpatología del ogía del HerpeHerpes s VirusVirus
Simple tipo 1. Simple tipo 1.
•
• El propósito de esta investigación es conocer las afecciones que ocasiona elEl propósito de esta investigación es conocer las afecciones que ocasiona el
Herpes Virus Simple tipo 1, en el cuerpo
Herpes Virus Simple tipo 1, en el cuerpo humano.humano.
Hipótesis
Hipótesis
•
• El El HeHerprpes es SiSimpmple le titipo po 1 1 afafececta ta ininiciciaialmlmenente te a a cécélululalas s epepititelelialiales es yy
posteriormente a las células nerviosas. posteriormente a las células nerviosas.
•
• El Herpes Simple tipo 1 causa complicaciones en el Sistema NerviosoEl Herpes Simple tipo 1 causa complicaciones en el Sistema Nervioso
Central, ocasionando enfermedades mortales. Central, ocasionando enfermedades mortales.
Estructura y composición de los Herpes virus
Estructura y composición de los Herpes virus
Los herpes virus son virus grandes. Los distintos miembros del grupo comparten detalles Los herpes virus son virus grandes. Los distintos miembros del grupo comparten detalles estructurales y son indistinguibles mediante microscopio electrónico. Todos los herpes estructurales y son indistinguibles mediante microscopio electrónico. Todos los herpes virus ti
virus tienen un núcleo de DNA enen un núcleo de DNA de doble cadede doble cadena, en forma de torna, en forma de toroide, rodeoide, rodeado por unaado por una cub
cubieiertrta a prprototeíeíninica ca quque e exhexhibibe e sisimemetrtría ía icicososaeaedrdricica a y y titienene e 16163 3 capcapsosomemeroros. Els. El nucleocapside
nucleocapside está rodeado por está rodeado por una envoltura que suna envoltura que se deriva de le deriva de la membrana nuclear a membrana nuclear de lade la célula infectada y contiene picos de glucoproteina viral de unos 8 nm de largo. Los virus célula infectada y contiene picos de glucoproteina viral de unos 8 nm de largo. Los virus herpes codifican diversas gl
herpes codifican diversas glucoproteinas ucoproteinas implicadas en la adhesión y implicadas en la adhesión y la fusión víricasla fusión víricas, y la, y la elusi
elusión ón del control del control inmuninmunitariitario. o. Una Una estrestructuructura a amorfamorfa, a, algunas veces algunas veces asimasimétricétrica, a, entre laentre la capsid
capside e y la y la envoltenvoltura se ura se designdesigna a como el como el tegumtegumento, el ento, el cual contiene proteícual contiene proteínas y nas y enzimaenzimass víricas que ayudan a iniciar la replicación. La forma envuelta mide de 150 a 200 nm; el víricas que ayudan a iniciar la replicación. La forma envuelta mide de 150 a 200 nm; el virion “puro”, mide 100 nm.
virion “puro”, mide 100 nm. El genoma de DNA
El genoma de DNA de doble cadende doble cadena (124 a 235 kpb) es lineaa (124 a 235 kpb) es lineal, una caractl, una característerísticaica sorprendente del DNA del herpes virus es su disposición de secuencia. Los genomas del sorprendente del DNA del herpes virus es su disposición de secuencia. Los genomas del Herpes virus poseen secuencias repetidas terminales e internas. Algunos miembros, como Herpes virus poseen secuencias repetidas terminales e internas. Algunos miembros, como los
los virvirus us de de herherpes pes simsimple ple expeexperirimenmentan tan trtransansposiposiciociones nes genógenómicmicas as que que dan dan luglugar ar aa “isómeros” genómicos distintos. La composición base del DNA de herpes virus varia de 31 “isómeros” genómicos distintos. La composición base del DNA de herpes virus varia de 31 a 75% (G+C). Hay poca homolo
a 75% (G+C). Hay poca homología de DNA gía de DNA entre difentre diferenterentes herpes virus excees herpes virus excepto parapto para herpes
herpes simplsimples tipo 1 y 2, es tipo 1 y 2, que muesque muestran 50% tran 50% de homolde homología ogía de secuende secuencia, y lcia, y los herpeos herpess virus humanos 6 y 7, que presentan homología de secuencia limitada (30 a 50%). El virus humanos 6 y 7, que presentan homología de secuencia limitada (30 a 50%). El tratamiento con endonucleasas de restricción produce patrones de segumentacion con tratamiento con endonucleasas de restricción produce patrones de segumentacion con características distintas para herpes virus e incluso para cepas diferentes de cada tipo. Esta características distintas para herpes virus e incluso para cepas diferentes de cada tipo. Esta “huella” de las cepas permite el seguimiento epidemiológico de una determinada cepa. “huella” de las cepas permite el seguimiento epidemiológico de una determinada cepa.
El genoma de herpes vir
El genoma de herpes virus us codifica por lo menos codifica por lo menos 100 proteínas disti100 proteínas distintas. De estas,ntas. De estas, más de 35 polipeptidos tienen relación con la estructura de la partícula de virus, algunos más de 35 polipeptidos tienen relación con la estructura de la partícula de virus, algunos son parte de la envoltura viral. Los herpes virus codifican una disposición de enzimas son parte de la envoltura viral. Los herpes virus codifican una disposición de enzimas especificas para el virus, que participan en el metabolismo de ácidos nucleicos, síntesis de especificas para el virus, que participan en el metabolismo de ácidos nucleicos, síntesis de DNA y regulación de proteínas (DNA polimerasa, cinasa de timidina, y proteína cinasa). DNA y regulación de proteínas (DNA polimerasa, cinasa de timidina, y proteína cinasa).
Clasificación
Clasificación
•
• Los Alphaherpesvirinae incluyen los virus del herpes simple 1 y 2, el virusLos Alphaherpesvirinae incluyen los virus del herpes simple 1 y 2, el virus
de varicela zoster y el virus del herpes B simiano. Estos microorganismos son virus de varicela zoster y el virus del herpes B simiano. Estos microorganismos son virus citoliticos que crecen con rapidez y dan lugar a infecciones latentes en las neuronas. citoliticos que crecen con rapidez y dan lugar a infecciones latentes en las neuronas.
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• Los Betaherpesvirinae comprenden el citLos Betaherpesvirinae comprenden el citomegalovirus y los viromegalovirus y los virus us del herpesdel herpes
humano 6 y 7. Estos microorganismos crecen con lentitud como virus no citoliticos y humano 6 y 7. Estos microorganismos crecen con lentitud como virus no citoliticos y ocasionan infecciones latentes en diversas células.
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• Los Gammaherpesvirinae incluyen el virus Epstain-Barr y el vLos Gammaherpesvirinae incluyen el virus Epstain-Barr y el virus del herpesirus del herpes
humano. El primero no solo causa infecciones activas en células del epitelio faríngeo humano. El primero no solo causa infecciones activas en células del epitelio faríngeo escamoso, sino también infecciones linfoproliferativas persistentes en las células B. El escamoso, sino también infecciones linfoproliferativas persistentes en las células B. El virus del herpes humano infecta las células del endotelio y se relaciona con sarcoma de virus del herpes humano infecta las células del endotelio y se relaciona con sarcoma de Kaposi y linfoma no-Hodking en sujetos con síndrome de inmunodeficiencia adquirida Kaposi y linfoma no-Hodking en sujetos con síndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA).
(SIDA).
SSuubbffaammiilliiaa VViirruuss PPrriinncciippaal l celula diana
celula diana Latencia LatenciaZZoonna a ddeeFFoorrmcontagiocontagiomaas s ddee Alfaherpesvirinae
Alfaherpesvirinae Virus herpes humano Virus herpes humano 11
He
Herprpes es sisimpmplele tipo 1.
tipo 1. CelulasCelulasmucoepitelialesmucoepiteliales NNeeuurroonnaa|||| directodirectoCCoonnttaaccttoo Virus herpes humano
Virus herpes humano
22 Herptipo 2tipo 2Herpes es sisimpmplele mucoepitelialesCélulasmucoepitelialesCélulas NNeeuurroonnaa directodirectoCCoonnttaaccttoo (enfermedad (enfermedad de transmisión de transmisión sexual) sexual) Vi
Virurus s vavariricecelala zoster
zoster CélulasCélulasmucoepitelialesmucoepiteliales NNeeuurroonnaa contactocontactoRReessppiirraattoorriia a yy directo
directo Gammaherpesvirina
Gammaherpesvirina
ee ViViruBarr Barr rus s EpEpststeiein-n- Linfoncitos B yLinfoncitos B ycélulascélulas epiteliales epiteliales L Liinnffoocciittoos s BB SSaalliivvaa (enfermedad (enfermedad del beso) del beso) Virus herpes humano
Virus herpes humano
88 VirusVirusrelacrelacionado ionado concon ssaarrccoomma a ddee Kaposi Kaposi L Liinnffoocciittoos s yy otras células
otras células LLiinnffoocciitto Bo B directodirectoCCoonnttaaccttoo (sexual), (sexual), saliva saliva Betaherpesvirinae Betaherpesvirinae Virus herpes humano Virus herpes humano 55 Citomegalovirus Monocitos, Citomegalovirus Monocitos, lliinnffoocciittoos s yy células células epiteliales epiteliales Monocitos y Monocitos y linfocitos
linfocitos ContactoContactodirecto,directo, transfusiones, transfusiones, tr
traspasplanlantes tes dede tteejjiiddoos s yy congénita congénita Virus herpes humano
Virus herpes humano 66
Virus herpes humano Virus herpes humano 77 V Viirruus s hheerrppeess linfotropo linfotropo V Viirruus s hheerrppeess humanos 7 humanos 7 Linfocito T Linfocito T Linfocitos T Linfocitos T Linfocito T Linfocito T Linfocito T Linfocito T Respi Respiratorratoria ia yy contacto contacto
Replicación del herpesvirus
Replicación del herpesvirus
El virus entra a la célula por fusión con la membrana celular después de unirse a receptores El virus entra a la célula por fusión con la membrana celular después de unirse a receptores celulares específicos por medio de glicoproteínas de envoltura. Varios herpes virus se unen celulares específicos por medio de glicoproteínas de envoltura. Varios herpes virus se unen a los glucosaminoglucanos de la superficie celular, sobre todo el sulfato de Heparan. La a los glucosaminoglucanos de la superficie celular, sobre todo el sulfato de Heparan. La adhesión del virus t
adhesión del virus también está relacionada con la ambién está relacionada con la unión a uno de variunión a uno de varios os correceptores (por correceptores (por ejemplo, miembros de la súper familia de inmunoglobinas). Después de la fusión, la ejemplo, miembros de la súper familia de inmunoglobinas). Después de la fusión, la capside es transportada por el citoplasma a un poro nuclear; se presenta la perdida de la capside es transportada por el citoplasma a un poro nuclear; se presenta la perdida de la cubierta y el DNA se integra al núcleo. El DNA viral forma de inmediato un círculo al cubierta y el DNA se integra al núcleo. El DNA viral forma de inmediato un círculo al liberarse de la capside. La expresión de genoma viral está regulada de forma estricta y liberarse de la capside. La expresión de genoma viral está regulada de forma estricta y ord
ordenadenada a de manerde manera a secsecuencuencial en una ial en una frefrecuecuencincia a de cascade cascada. VP 16, da. VP 16, una protuna proteíneína a dede tegumento, forma complejos con varias proteínas celulares y activa la expresión génica tegumento, forma complejos con varias proteínas celulares y activa la expresión génica viral inicial. Se expresan los genes inmediatos, produciendo proteínas alfa. Estas proteínas viral inicial. Se expresan los genes inmediatos, produciendo proteínas alfa. Estas proteínas permiten la expresión del conjunto inicial de genes, que se traducen en proteínas. Comienza permiten la expresión del conjunto inicial de genes, que se traducen en proteínas. Comienza la replicación de DNA viral, y se producen las transcripciones tardías que dan lugar a las la replicación de DNA viral, y se producen las transcripciones tardías que dan lugar a las proteínas. Se sintetizan más de 50 proteínas diferentes en las células infectadas con proteínas. Se sintetizan más de 50 proteínas diferentes en las células infectadas con
herpesvirus. Muchas
herpesvirus. Muchas proteínas proteínas son enzimas son enzimas de proteínas de proteínas de enlace a de enlace a DNA; la DNA; la mayor partmayor partee de las
El DNA viral se transcribe por el ciclo de replicación mediante polimerasa II del El DNA viral se transcribe por el ciclo de replicación mediante polimerasa II del RNA celular pero con participación de factores virales. El DNA viral se sintetiza mediante RNA celular pero con participación de factores virales. El DNA viral se sintetiza mediante un mecanismo de círculo girat
un mecanismo de círculo giratorio. Los herpesvirus orio. Los herpesvirus difieren de otros vidifieren de otros virus de DNA nuclear rus de DNA nuclear en que codifican una gran cantidad de enzimas que participan en la síntesis de DNA. ( Estas en que codifican una gran cantidad de enzimas que participan en la síntesis de DNA. ( Estas enzima
enzimas s son buenos blancos para son buenos blancos para fármfármacos antiviraacos antivirales) el les) el DNA viral recién sintetizDNA viral recién sintetizado seado se empaqueta en nucleocapsides
empaqueta en nucleocapsides vacios preformados en vacios preformados en el núcleo de la el núcleo de la célula.célula.
La maduración ocurre por
La maduración ocurre por gemación de los nucleocapsigemación de los nucleocapsides des a través de la través de la membranaa membrana nuclear interna modificada. Luego, el movimiento vesicular transporta las partículas de nuclear interna modificada. Luego, el movimiento vesicular transporta las partículas de virus envueltas a la superficie de la
virus envueltas a la superficie de la célula.célula.
La duración del ciclo de replicación varía desde unas 18 horas para el virus de La duración del ciclo de replicación varía desde unas 18 horas para el virus de herpes simple a más de 70 horas para el citomegalovirus. Las células infectadas con herpes herpes simple a más de 70 horas para el citomegalovirus. Las células infectadas con herpes virus variablemente viven. La síntesis macromolecular del huésped se desactiva al inicio de virus variablemente viven. La síntesis macromolecular del huésped se desactiva al inicio de la infección; la síntesis del DNA celular normal y proteínas prácticamente se detiene la infección; la síntesis del DNA celular normal y proteínas prácticamente se detiene cuando comienza l replicación viral.
Virus del herpes simple
Virus del herpes simple
El VHS fue
El VHS fue el primer virus herpes humano identel primer virus herpes humano identificaificado. El do. El nombre de herpes se nombre de herpes se derivderiva dea de una palabra griega que significa reptar. La denominación calenturas ya se citaba en la una palabra griega que significa reptar. La denominación calenturas ya se citaba en la antigüedad, estableciéndose
antigüedad, estableciéndose su etiologísu etiología vírica a vírica en en 1919.1919.
Los dos t
Los dos tipos de ipos de virus herpes virus herpes simple, VHS simple, VHS -1 y -1 y VHS-2, comparten VHS-2, comparten un gran un gran númeronúmero de características, como la inmunología de ADN, ciertos determinantes antigénicos, el de características, como la inmunología de ADN, ciertos determinantes antigénicos, el tropi
tropismo tisular y smo tisular y los síntomalos síntomas s de enfermedadde enfermedad. . De todos De todos modos, aun se modos, aun se pueden distinpueden distinguir guir algunas diferencias leves aunque significativas, en estos rasgos.
algunas diferencias leves aunque significativas, en estos rasgos.
Las especificidades de sustrato de estas enzimas y la polimerasa de ADN difieren Las especificidades de sustrato de estas enzimas y la polimerasa de ADN difieren sig
signifnificaicativtivameamente nte de de sus sus análanálogos ogos celcelulaulares res y, y, por por tantanto, to, conconstistituytuye e unounos s objobjetietivosvos potenciales adecuados
potenciales adecuados para la para la quimioterapia quimioterapia antivírica.antivírica.
El VHS codifica al menos 10 glucoproteínas que actúan como proteínas de adhesión El VHS codifica al menos 10 glucoproteínas que actúan como proteínas de adhesión víric
vírica (gB, gC, gDa (gB, gC, gD, gH), , gH), proteíproteínas de fusnas de fusión (gB) ión (gB) proteíproteínas estnas estructurructurales, prales, proteínoteínas deas de evasión inmunitaria (gC, gE, gI) y otras funciones.
evasión inmunitaria (gC, gE, gI) y otras funciones.
Replicación
Replicación
El VHS puede afectar a la mayoría de tipos de células humanas e incluso de otras especies. El VHS puede afectar a la mayoría de tipos de células humanas e incluso de otras especies. El virus
El virus provocprovoca a infecinfecciones líticaciones líticas s en los en los fibrfibroblastoblastos os de las de las célulcélulas epitelialas epiteliales, es, así comoasí como inf
infeccieccioneones s latlatententes en es en las neurlas neuronasonas, el , el VHSVHS-1 se -1 se une une de manerde manera a ráprápida y ida y efieficaz a caz a laslas células a través de la interacción inicial con heparan sulfato, un proteoglicano presente en el células a través de la interacción inicial con heparan sulfato, un proteoglicano presente en el exterior de diversos tipos celulares y posteriormente interrelaciona con mayor intensidad exterior de diversos tipos celulares y posteriormente interrelaciona con mayor intensidad con proteínas receptoras localizadas en la superficie celular. La penetración al interior de la con proteínas receptoras localizadas en la superficie celular. La penetración al interior de la célula precisa la interacción con nectina-1, una molécula de adhesión intercelular que célula precisa la interacción con nectina-1, una molécula de adhesión intercelular que pertenece a la familia de proteínas inmunoglobulinas y es semejante al receptor del polio pertenece a la familia de proteínas inmunoglobulinas y es semejante al receptor del polio virus. La nectina-1, se encuentra en la mayor parte de las células y neuronas. El VHS virus. La nectina-1, se encuentra en la mayor parte de las células y neuronas. El VHS penetra en la célula anfitriona mediante la fusión de su envoltura con la membrana celular. penetra en la célula anfitriona mediante la fusión de su envoltura con la membrana celular.
Tras la fusión el vir
Tras la fusión el virion libera su capside al citoplasion libera su capside al citoplasma junto ma junto a una proteína que favorece ela una proteína que favorece el comienzo de la transcripción genética vírica, una proteincinasa codificada por el virus, y comienzo de la transcripción genética vírica, una proteincinasa codificada por el virus, y proteínas citotóxicas. La capside se acopla a un poro nuclear y libera el genoma en el proteínas citotóxicas. La capside se acopla a un poro nuclear y libera el genoma en el
núcleo. núcleo.
Entre los productos genéticos precoces inmediatos figuran las proteínas de unión al Entre los productos genéticos precoces inmediatos figuran las proteínas de unión al ADN que estimulan la síntesis de esta molécula y la transcripción de los genes víricos ADN que estimulan la síntesis de esta molécula y la transcripción de los genes víricos precoces. Durante una infección latente de neuronas, la única región del genoma que se precoces. Durante una infección latente de neuronas, la única región del genoma que se debe transcribir generan los transcriptos asociados a la latencia (TAL), pero estos ARN no debe transcribir generan los transcriptos asociados a la latencia (TAL), pero estos ARN no se traducen en proteínas.
se traducen en proteínas.
Entre las proteínas precoces se encuentra una polimerasa de ADN dependiente y Entre las proteínas precoces se encuentra una polimerasa de ADN dependiente y una timidina cinasa. Como proteínas catalíticas se necesita un número relativamente bajo una timidina cinasa. Como proteínas catalíticas se necesita un número relativamente bajo de copias de estas enzimas p
de copias de estas enzimas para estimular la replicación. Otras proteínas precoces inhiben laara estimular la replicación. Otras proteínas precoces inhiben la producción e inician la degradación del ARNm y del ADN celulares. La expresión de los producción e inician la degradación del ARNm y del ADN celulares. La expresión de los
genes precoces y tardíos comporta la destrucción celular. genes precoces y tardíos comporta la destrucción celular.
El
El gegenonoma ma cocomimienenza za a a rereplplicicararse se en en cucuananto to sesea a sisintntetetizaizada da la la popolilimemerarasasa.. Inici
Inicialmentalmente e se elaboran se elaboran concatconcatameros genómicoameros genómicos s circulcirculares unidos ares unidos por sus por sus extreextremos. Enmos. En una base poste
una base posterior de la infeccrior de la infección el ADN se ión el ADN se replireplica mediantca mediante un mecanismo de círce un mecanismo de círculoulo rodante para producir una cadena lineal de genomas, los cuales se podrían comparar con un rodante para producir una cadena lineal de genomas, los cuales se podrían comparar con un rollo de papel higiénico. Los
rollo de papel higiénico. Los concatameros se separan para fconcatameros se separan para formar genomas individuales ormar genomas individuales aa medida que se i
medida que se introduce ntroduce el ADN en lel ADN en las procapsides.as procapsides.
La replicación del genoma desencadena la transcripción de los genes tardíos que La replicación del genoma desencadena la transcripción de los genes tardíos que cod
codifificican an lalas s prprototeíeínanas s esestrtrucuctuturaraleles s y y de de ototro ro titipopo. . LaLas s prprototeíeínanas s de de la la cacapspsidide e sese transportan hacia el núcleo, en donde se introducen procapsides vacías y se rellenan con transportan hacia el núcleo, en donde se introducen procapsides vacías y se rellenan con ADN. Las capsides que contienen ADN se asocian a fragmentos de la membrana nuclear ADN. Las capsides que contienen ADN se asocian a fragmentos de la membrana nuclear alteradas por las proteínas víricas y posteriormente abandonan el retículo endoplasmico alteradas por las proteínas víricas y posteriormente abandonan el retículo endoplasmico para pasar el citoplasma. Las glucoproteinas víricas se sintetizan y procesan de manera para pasar el citoplasma. Las glucoproteinas víricas se sintetizan y procesan de manera semejante a las glucoproteinas celulares. Las proteínas del tegumento se asocian a la semejante a las glucoproteinas celulares. Las proteínas del tegumento se asocian a la capside vírica en el citoplasma y en una fase posterior la capside atraviesa por gemación el capside vírica en el citoplasma y en una fase posterior la capside atraviesa por gemación el aparato de Golgi con el fin de adquirir su envoltura dotada de glucoproteinas. El virus se aparato de Golgi con el fin de adquirir su envoltura dotada de glucoproteinas. El virus se libera por exocitosis o lisis celular. De igual modo, los virus se pueden seminar de una libera por exocitosis o lisis celular. De igual modo, los virus se pueden seminar de una célula a otra a través de los puentes intracelulares, los cuales permiten que eluda su célula a otra a través de los puentes intracelulares, los cuales permiten que eluda su detección por la respuesta humoral. La formación de sincitios inducida por el virus también detección por la respuesta humoral. La formación de sincitios inducida por el virus también participa en la diseminación de la infección.
participa en la diseminación de la infección.
La infección por el VHS puede dar lugar a la replicación del patógeno o bien al La infección por el VHS puede dar lugar a la replicación del patógeno o bien al establecimiento de una infección latente dependiendo de la identidad de los genes víricos establecimiento de una infección latente dependiendo de la identidad de los genes víricos transcritos por la neurona. La transcripción del los TAL, pero no de ningún otro gen vírico, transcritos por la neurona. La transcripción del los TAL, pero no de ningún otro gen vírico, da lugar a un estado de latencia. La replicación vírica se desarrolla cuando la célula es da lugar a un estado de latencia. La replicación vírica se desarrolla cuando la célula es capaz de transcri
capaz de transcribir los bir los genes precoces inmediatgenes precoces inmediatos del virus. os del virus. El VHS El VHS codifica una ticodifica una timidinamidina cin
cinasa asa que facique facilitlita a la replla replicaicacióción n en las en las célcélulaulas s que no que no se dividse dividen como en como las neurlas neuronasonas.. Igualmente, este virus codifica una proteína ICP 34.5, que facilita su proliferación en las Igualmente, este virus codifica una proteína ICP 34.5, que facilita su proliferación en las
neuronas al desactivar
neuronas al desactivar un mecanismo de inhibiun mecanismo de inhibición celular de la ción celular de la síntesis proteica síntesis proteica activadaactivada como respuesta a la infección.
como respuesta a la infección.
Patogenia e Inmunidad
Patogenia e Inmunidad
El virus herpes simpl
El virus herpes simple tipo 1 inicialmente e tipo 1 inicialmente infecta las células mucoepiteliinfecta las células mucoepiteliales y se replica enales y se replica en ellas, produce enfermedad en el lugar de la infección y posteriormente establece una ellas, produce enfermedad en el lugar de la infección y posteriormente establece una in
infefeccicción ón lalatetentnte e en en lalas s neneururononas as que que la la ininerervanvan. . El El VHVHS-S-1 1 acacosostutumbmbra ra a a prprovoovocacar r infecciones por encima de la cintura.
infecciones por encima de la cintura.
El VHS puede provocar infecciones líticas en la mayoría de las células, infecciones El VHS puede provocar infecciones líticas en la mayoría de las células, infecciones pe
persrsisistetentntes es en en lilinfnfococititos os y y mamacrcrófófagagos os e e ininfefecciccionones es lalatetentntes es en en lalas s neuneuroronanas.s. Generalmente, la inhibición de la síntesis macromolecular celular que induce el virus Generalmente, la inhibición de la síntesis macromolecular celular que induce el virus provoca citolisis, la degradación del ADN de la célula anfitriona, permeabilidad de la provoca citolisis, la degradación del ADN de la célula anfitriona, permeabilidad de la
membr
membrana, destrucciana, destrucción ón del citoesqueldel citoesqueleto y eto y senessenescencia de cencia de la célula. Además, se la célula. Además, se produceproducenn cambios en la estructura nuclear y marginación de la cromatina, y se forman cuerpos de cambios en la estructura nuclear y marginación de la cromatina, y se forman cuerpos de inclusión intranucleares acidofilos de Cowdry de tipo A. Muchas cepas de VHS también inclusión intranucleares acidofilos de Cowdry de tipo A. Muchas cepas de VHS también inician la formación de sincitios. En los cultivos tisulares, el VHS destruye rápidamente las inician la formación de sincitios. En los cultivos tisulares, el VHS destruye rápidamente las células.
células.
La infección por el virus VHS se inicia a través de las membranas mucosas o de La infección por el virus VHS se inicia a través de las membranas mucosas o de roturas de la piel. El virus se multiplica en las células de la base de la lesión, e infecta las roturas de la piel. El virus se multiplica en las células de la base de la lesión, e infecta las neuronas que las inerva, desplazándose por transporte retrogrado hasta el ganglio (los neuronas que las inerva, desplazándose por transporte retrogrado hasta el ganglio (los ganglios trigéminos en el caso del VHS bucal). Después el virus volverá al punto inicial de ganglios trigéminos en el caso del VHS bucal). Después el virus volverá al punto inicial de infección y puede ser inaparente o bien provocar lesiones vesiculares. El líquido vesicular infección y puede ser inaparente o bien provocar lesiones vesiculares. El líquido vesicular contie
contiene ne vironevirones infectantes infectantes. s. La lesión La lesión de los de los tejitejidos está dos está provocaprovocado do por una por una combincombinaciónación de patología vírica e inmunopatologia. Generalmente la lesión se cura sin producir ninguna de patología vírica e inmunopatologia. Generalmente la lesión se cura sin producir ninguna cicatriz.
Los mecanismos innatos de protección, como el interferon y los linfocitos naturales, Los mecanismos innatos de protección, como el interferon y los linfocitos naturales, pueden bastar para limitar la progresión de la infección. La respuesta asociada a linfocitos pueden bastar para limitar la progresión de la infección. La respuesta asociada a linfocitos T cooperadores de tipo 1 (TH1) y la respuesta citotóxica provocada por los linfocitos T T cooperadores de tipo 1 (TH1) y la respuesta citotóxica provocada por los linfocitos T citotóxicos son necesarias para destruir las células infectadas y curar una enfermedad en citotóxicos son necesarias para destruir las células infectadas y curar una enfermedad en curso. Los efectos inmunopatologicos de las respuestas celulares e inflamatorias también curso. Los efectos inmunopatologicos de las respuestas celulares e inflamatorias también son una de las causas principales de los síntomas. Los anticuerpos dirigidos frente a las son una de las causas principales de los síntomas. Los anticuerpos dirigidos frente a las glicoproteínas del virus neutralizan las partículas víricas extracelulares, lo que limita su glicoproteínas del virus neutralizan las partículas víricas extracelulares, lo que limita su diseminación pero es insuficiente para eliminar la infección. En ausencia de una inmunidad diseminación pero es insuficiente para eliminar la infección. En ausencia de una inmunidad funcional mediada por células, la infección por VHS es más grave y puede extenderse hasta funcional mediada por células, la infección por VHS es más grave y puede extenderse hasta órganos vitales y el cerebro.
órganos vitales y el cerebro.
El virus VHS posee diversos mecanismos para eludir las respuestas protectoras del El virus VHS posee diversos mecanismos para eludir las respuestas protectoras del organismo anfitrión. Bloquea la inhibición inducida por el interferon de la síntesis proteica organismo anfitrión. Bloquea la inhibición inducida por el interferon de la síntesis proteica vírica y codifica una proteína que
vírica y codifica una proteína que rellena el trasportador asociado al canal de rellena el trasportador asociado al canal de procesamientoprocesamiento (TAP), de modo que impide el paso de péptidos al retículo endoplasmatico (RE) para (TAP), de modo que impide el paso de péptidos al retículo endoplasmatico (RE) para inhibir su asociación a las moléculas del complejo principal de histocompatibilidad de tipo inhibir su asociación a las moléculas del complejo principal de histocompatibilidad de tipo 1 (CPH 1) y evita el reconocimiento de las células infectadas por los linfocitos T CD8. El 1 (CPH 1) y evita el reconocimiento de las células infectadas por los linfocitos T CD8. El virus puede eludir la neutralización y la eliminación humoral por medio de su diseminación virus puede eludir la neutralización y la eliminación humoral por medio de su diseminación directa de una célula a otra, así como al esconderse durante la infección latente en una directa de una célula a otra, así como al esconderse durante la infección latente en una neurona. Por otra parte, el virón y las células infectadas por el virus expresan receptores de neurona. Por otra parte, el virón y las células infectadas por el virus expresan receptores de anticuerpos (Fc)
En
En lalas s neuneuroronanas s se se prproduoduce ce una una ininfefeccccióión n lalatetentnte e quque e no no prprovovococa a lelesisiononeses detectables. Existen diversos estímulos capaces de activar una recurrencia. Estos estímulos detectables. Existen diversos estímulos capaces de activar una recurrencia. Estos estímulos desencadenan la replicación vírica en una célula nerviosa individual del interior del haz y desencadenan la replicación vírica en una célula nerviosa individual del interior del haz y permite el desplazamiento retrogrado del virus a lo largo del nervio para causar lesiones permite el desplazamiento retrogrado del virus a lo largo del nervio para causar lesiones que aparecen en el mismo dermatoma y localización en cada ocasión. El estrés desencadena que aparecen en el mismo dermatoma y localización en cada ocasión. El estrés desencadena la reactivación al estimular la replicación del virus en el nervio, deprimir temporalmente la la reactivación al estimular la replicación del virus en el nervio, deprimir temporalmente la inmunidad celular, o mediante ambos procesos a la vez. El virus se puede reactivar a pesar inmunidad celular, o mediante ambos procesos a la vez. El virus se puede reactivar a pesar de la presencia de anticuerpos.
de la presencia de anticuerpos.
Sin embargo, las infecciones recurrentes suelen ser menos graves, mas localizadas y Sin embargo, las infecciones recurrentes suelen ser menos graves, mas localizadas y de menor duración que los episodios primarios debido a la naturaleza de la diseminación la de menor duración que los episodios primarios debido a la naturaleza de la diseminación la existencia de las respuestas inmunitarias de memoria.
existencia de las respuestas inmunitarias de memoria.
Epidemiología
Epidemiología
Puesto que el VHS puede alcanzar un estado de latencia, con posibilidad de recurrencia Puesto que el VHS puede alcanzar un estado de latencia, con posibilidad de recurrencia asintomática, el individuo infectado es una fuente de contagio durante toda la vida.
asintomática, el individuo infectado es una fuente de contagio durante toda la vida.
Como cualquier otro virus encapsulado, el VHS se trasmite a través de secreciones Como cualquier otro virus encapsulado, el VHS se trasmite a través de secreciones y por contacto intimo. El virus es muy lábil
y por contacto intimo. El virus es muy lábil y se inactiva con facilidad con y se inactiva con facilidad con la desecación, dela desecación, de los detergentes y de las condiciones imperantes en el tubo digestivo. A pesar de que el VHS los detergentes y de las condiciones imperantes en el tubo digestivo. A pesar de que el VHS p
pueuede de ininfefectctar ar lalas s cécélululalas s ananimimalaleses, , la la ininfefeccccióión n popor r VHVHS S es es ununa a enenfefermrmededadad exclusivamente humana.
exclusivamente humana.
El VHS se trasmite a través del líquido de las vesículas, de la saliva y las El VHS se trasmite a través del líquido de las vesículas, de la saliva y las secreciones vaginales. El lugar de la infección y, por tanto, de la enfermedad se ve secreciones vaginales. El lugar de la infección y, por tanto, de la enfermedad se ve det
determerminainada da funfundamdamententalmalmentente e por el por el titipo po de de comcombinbinaciación ón de de memmembrabranas mucosnas mucosas.as. Ambos tipos de VHS pueden p
El VHS-1 acostumbra a contagiarse por contacto bucal (besos) o al compartir vasos, El VHS-1 acostumbra a contagiarse por contacto bucal (besos) o al compartir vasos, cepil
cepillos de los de dientdientes u es u otros objetootros objetos contaminados contaminados s con saliva. La con saliva. La infecinfección por ción por el VHS-1 deel VHS-1 de los dedos o el organismo puede ser el resultado del contacto de la boca con la piel, y el los dedos o el organismo puede ser el resultado del contacto de la boca con la piel, y el virus penetra atreves de una grieta en esta. La auto inoculación puede originar una virus penetra atreves de una grieta en esta. La auto inoculación puede originar una infección oculta.
infección oculta.
La infección por el VHS-1 es frecuente. Más del 90% de los individuos que viven La infección por el VHS-1 es frecuente. Más del 90% de los individuos que viven en regiones subdesarrolladas tienen anticuerpos frente al VHS-1 a la edad de 2 años. Este en regiones subdesarrolladas tienen anticuerpos frente al VHS-1 a la edad de 2 años. Este fenómeno puede ser consecuencia del asentamiento o de una higiene deficiente.
fenómeno puede ser consecuencia del asentamiento o de una higiene deficiente.
Síntomas del Herpes Labial
Síntomas del Herpes Labial
Los primeros síntomas de este tipo de herpes se manifiestan una o dos semanas (máximo Los primeros síntomas de este tipo de herpes se manifiestan una o dos semanas (máximo tres) luego del contacto con la persona infectada, comúnmente, las lesiones de herpes labial tres) luego del contacto con la persona infectada, comúnmente, las lesiones de herpes labial permanecen a lo largo de siete o diez días y luego comienzan a desaparecer. El virus puede permanecen a lo largo de siete o diez días y luego comienzan a desaparecer. El virus puede estar latente en las células nerviosas y luego recurrir en el sitio original o cerca del mismo. estar latente en las células nerviosas y luego recurrir en el sitio original o cerca del mismo. Est
Esta a recrecurrurrencencia ia es es nornormalmalmenmente te muy muy levleve e y y puepuede de ser ser desdesencencadeadenada nada por por perperíodíodosos menstruales, exposición al sol, enfermedades con
menstruales, exposición al sol, enfermedades con fiebre, estrés u otras causas.fiebre, estrés u otras causas. Cua
Cuando ndo se está se está afeafectactado do con herpes labicon herpes labial al es es fácfácil deil de darse cuenta debido a la cantidad inconfundible de síntomas darse cuenta debido a la cantidad inconfundible de síntomas que
que se se prpresesenentatan: n: sesensnsacacióión n de de ququememazazón, ón, auaumementnto o de de lala se
sensnsibibililididad ad en en el el árárea ea afafectectadada a u u hohormrmigigueueo, o, etetc. c. esestatass sensaciones se presentan unos dos días antes de la aparición de sensaciones se presentan unos dos días antes de la aparición de las lesiones físicas.
las lesiones físicas.
Cuando hablamos de cómo este herpes afecta al cuerpo, Cuando hablamos de cómo este herpes afecta al cuerpo, en especial a la zona bucal podemos decir que se podrán divisar en especial a la zona bucal podemos decir que se podrán divisar lesiones en la piel o erupciones alrededor de los labios, boca y lesiones en la piel o erupciones alrededor de los labios, boca y enc
encíaías, s, amampolpollalas s (v(vesesícícululasas) ) pepequequeñañas s quque e en en su su mamayoyoríríaa con
contitieneenen n un un lílíququidido o amamararilillelentonto, , amampopollllas as enenrorojejecicidasdas (levantadas y dolorosas en cierta área de la piel), cuando estas (levantadas y dolorosas en cierta área de la piel), cuando estas
Foto herpes simple Foto herpes simple
vesículas se forman se rompen y luego se drenan. vesículas se forman se rompen y luego se drenan.
También es factible que se formen costras amarillas que al caer se pueda ver el También es factible que se formen costras amarillas que al caer se pueda ver el aspecto rosado de la piel lo que indica que se está cicatrizando y como último síntoma se aspecto rosado de la piel lo que indica que se está cicatrizando y como último síntoma se puede presentar fiebre.
puede presentar fiebre.
Diagnostico de los virus Herpes Simplex
Diagnostico de los virus Herpes Simplex
El diagnóstic
El diagnóstico o virolvirológico se ógico se puede realizar de puede realizar de variavarias s formformas dependiendo en as dependiendo en cada ocasióncada ocasión de que haya o no vesículas, de las características del huésped (edad, inmunoprosucesión, de que haya o no vesículas, de las características del huésped (edad, inmunoprosucesión, etc.) y del momento en que se realice la toma de la muestra.
etc.) y del momento en que se realice la toma de la muestra.
Atendiendo a los criterios anteriores, la estrategia diagnóstica será: Atendiendo a los criterios anteriores, la estrategia diagnóstica será: 1.- En
1.- En lolos s cacasososs donde haya lesión vesiculosa la técnica de elección es el diagnósticodonde haya lesión vesiculosa la técnica de elección es el diagnóstico directo a partir de improntas tomadas de la lesión. Los portaobjetos con las improntas se directo a partir de improntas tomadas de la lesión. Los portaobjetos con las improntas se fijan en acetona fría durante 15 minutos y se tiñen después con anticuerpos monoclonales fijan en acetona fría durante 15 minutos y se tiñen después con anticuerpos monoclonales marcados, habitualmente con fluoresceína. La eficacia diagnóstica de esta técnica está en marcados, habitualmente con fluoresceína. La eficacia diagnóstica de esta técnica está en relac
relación con el ión con el estadestado de o de lesilesión, variando desde el 100% en el ón, variando desde el 100% en el caso de vesículacaso de vesículas a s a un 25%un 25% cuando las impronta
cuando las improntas se s se realirealizan a zan a partipartir de r de las costraslas costras. El . El diagnódiagnósticstico o puede obtenerspuede obtenerse e enen 30 minutos.
30 minutos.
Igualmente debe realizarse una toma de la lesión para cultivo de virus, utilizando Igualmente debe realizarse una toma de la lesión para cultivo de virus, utilizando para ello una torunda previamente humedecida en el medio de transporte de virus (solución para ello una torunda previamente humedecida en el medio de transporte de virus (solución tamponada con rojo fenol, antibióticos y una fuente proteica, como albúmina). Lo más tamponada con rojo fenol, antibióticos y una fuente proteica, como albúmina). Lo más conveniente es inocular la muestra inmediatamente, pero si no es posible, se puede conveniente es inocular la muestra inmediatamente, pero si no es posible, se puede almacenar a 4ºC no más de 48 horas.
almacenar a 4ºC no más de 48 horas. Los cultivos rápidos (
Los cultivos rápidos (Shell vial Shell vial ) están indicados también para el diagnóstico precoz) están indicados también para el diagnóstico precoz
de la infección por VHS-1 y 2. Se realizan inoculando 200-300 µl de la muestra de la de la infección por VHS-1 y 2. Se realizan inoculando 200-300 µl de la muestra de la vesícula por centrifugación (700 X g, 45 min) sobre una monocapa de células susceptibles vesícula por centrifugación (700 X g, 45 min) sobre una monocapa de células susceptibles
(MCR-5, VERO o BGM) previamente crecidas sobre un cubreobjetos circular. Después de (MCR-5, VERO o BGM) previamente crecidas sobre un cubreobjetos circular. Después de retirar la muestra y añadir 1 ml de medio de mantenimiento, se incuban a 37ºC durante retirar la muestra y añadir 1 ml de medio de mantenimiento, se incuban a 37ºC durante 24-48
48 horashoras. . PostPosterioreriormente se mente se tiñen los tiñen los cubreocubreobjetobjetos s con anticuerpocon anticuerpos s monoclmonoclonales frente aonales frente a VHS-1. Marcados con fluoresceína y se observan
VHS-1. Marcados con fluoresceína y se observan al microscopio.al microscopio.
Los cultivos convencionales son necesarios para aislar las cepas y realizar ensayos Los cultivos convencionales son necesarios para aislar las cepas y realizar ensayos de sensibilidad, que están indicados fundamentalmente en pacientes inmunodeprimidos. La de sensibilidad, que están indicados fundamentalmente en pacientes inmunodeprimidos. La inoculación de los cultivos convencionales se realiza por absorción de la muestra a la inoculación de los cultivos convencionales se realiza por absorción de la muestra a la monocapa celular durante una hora a 37ºC (también se puede realizar por centrifugación). monocapa celular durante una hora a 37ºC (también se puede realizar por centrifugación). Se retira la muestra y se añade medio de mantenimiento. Los tubos se incuban a 37ºC y Se retira la muestra y se añade medio de mantenimiento. Los tubos se incuban a 37ºC y atmósfera de 5% de CO
atmósfera de 5% de CO22 durante 14 días. Estos tubos se observan periódicamente paradurante 14 días. Estos tubos se observan periódicamente para
visualizar el efecto citopático característico de VHS. La identificación final se realiza con visualizar el efecto citopático característico de VHS. La identificación final se realiza con los anticuerpos monoclonales de tipaje por la técnica de IF directa anteriormente descrita, los anticuerpos monoclonales de tipaje por la técnica de IF directa anteriormente descrita, sobre las células de la monocapa desprendidas, lavadas y fijadas con acetona fría.
sobre las células de la monocapa desprendidas, lavadas y fijadas con acetona fría. 2.- Cuando
2.- Cuando no existen lesiones vesiculno existen lesiones vesiculosas externas hay que osas externas hay que distidistinguir, a nguir, a su vez, su vez, cuatrcuatroo circunstancias:
circunstancias:
2.a) Procesos clínicos donde se produce excreción viral: faringitis, uretritis, cervicitis y 2.a) Procesos clínicos donde se produce excreción viral: faringitis, uretritis, cervicitis y neumonías (inmunodeprimidos). La detección del virus debe realizarse mediante cultivo neumonías (inmunodeprimidos). La detección del virus debe realizarse mediante cultivo rápido o convencional, siendo este último el método más sensible. Las muestras de elección rápido o convencional, siendo este último el método más sensible. Las muestras de elección sson on llos os exexududadados os de de lla a zozona na afafececttadada a ((fafarriningege, , ururetetrra, a, enendodocecerrvivix x y y llavavadadosos broncoalveolares en las neumonías). En algunos casos, como por ejemplo en los exudados broncoalveolares en las neumonías). En algunos casos, como por ejemplo en los exudados
fa
faríríngngeoeos, s, el el aiaislslamamieientnto o ha ha dedescscririto to exexcrcrececióión n dedel l vivirurus s en en un un 2% 2% de de inindidivividuduosos asintomáticos. En los lavados broncoalveolares, su implicación como agente etiológico va asintomáticos. En los lavados broncoalveolares, su implicación como agente etiológico va ligada a la ausencia de otros patógenos.
ligada a la ausencia de otros patógenos.
2.b) Queratitis, esofagitis, proctitis. Las muestras de elección en estos casos son los 2.b) Queratitis, esofagitis, proctitis. Las muestras de elección en estos casos son los raspados cornéales o biopsias respectivas. En estos casos el
raspados cornéales o biopsias respectivas. En estos casos el diagnóstico se hace mediante IFdiagnóstico se hace mediante IF sobre las improntas de las biopsias, cultivo (rápido y convencional), cocultivo y PCR. La sobre las improntas de las biopsias, cultivo (rápido y convencional), cocultivo y PCR. La PCR está indicada sólo cuando los cultivos son raspados y es fundamentalmente útil en los PCR está indicada sólo cuando los cultivos son raspados y es fundamentalmente útil en los
raspados cornéales, donde el rendimiento del cultivo es menor. Además, se puede utilizar la raspados cornéales, donde el rendimiento del cultivo es menor. Además, se puede utilizar la secreción lagrimal del ojo afectado como muestra para el diagnóstico por PCR.
secreción lagrimal del ojo afectado como muestra para el diagnóstico por PCR. Para el cocultivo se ponen en contacto 15x10
Para el cocultivo se ponen en contacto 15x1044células con el triturado de la biopsiacélulas con el triturado de la biopsia
en 1,5 ml de medio de mantenimiento, suplementado con 5% de suero bovino fetal. A las en 1,5 ml de medio de mantenimiento, suplementado con 5% de suero bovino fetal. A las 24 horas y una vez formada la monocapa, se cambia el medio y se incuba a 37ºC y 24 horas y una vez formada la monocapa, se cambia el medio y se incuba a 37ºC y atmósfera de 5% de CO
atmósfera de 5% de CO22 durante 14 días observándolo periódicamente para visualizar eldurante 14 días observándolo periódicamente para visualizar el
efecto citopático. efecto citopático.
2.c) Encefalitis: debido a la eficacia y ausencia de reacciones adversas del tratamiento con 2.c) Encefalitis: debido a la eficacia y ausencia de reacciones adversas del tratamiento con aciclovir, no suele practicarse biopsia cerebral para el diagnóstico etiológico. Hoy día, la aciclovir, no suele practicarse biopsia cerebral para el diagnóstico etiológico. Hoy día, la PCR realizad
PCR realizada a a a partipartir r del líquido cefalorrdel líquido cefalorraquídeo (LCR), técnica mucho aquídeo (LCR), técnica mucho menos agresivmenos agresiva,a, se ha convertido en la alternativa diagnóstica de elección. Suele utilizarse una técnica de se ha convertido en la alternativa diagnóstica de elección. Suele utilizarse una técnica de doble PCR (
doble PCR (nested nested ) o, alternativamente, una PCR simple seguida de hibridación con sonda) o, alternativamente, una PCR simple seguida de hibridación con sonda
específica radiactiva o biotinada. específica radiactiva o biotinada.
La PCR múltiple, en la que se utiliza una mezcla de iniciadores de los diferentes La PCR múltiple, en la que se utiliza una mezcla de iniciadores de los diferentes herpesvirus, que posteriormente se identifican con unos segundos cebadores específicos herpesvirus, que posteriormente se identifican con unos segundos cebadores específicos para cada uno de ellos. Es una técnica que ha sido desarrollada recientemente y con para cada uno de ellos. Es una técnica que ha sido desarrollada recientemente y con
resultados prometedores. resultados prometedores.
2.d) Procesos con clínicos que van acompañados de viremia (herpes neonatal, herpes 2.d) Procesos con clínicos que van acompañados de viremia (herpes neonatal, herpes generalizados y viscerales en inmunodeprimidos), en ausencia de lesiones cutáneas. En generalizados y viscerales en inmunodeprimidos), en ausencia de lesiones cutáneas. En estos casos se puede detectar antígeno viral por IF directa o aislar el virus mediante cultivos estos casos se puede detectar antígeno viral por IF directa o aislar el virus mediante cultivos a partir de leucocitos de sangre periférica. Para la IF directa, con objeto de evitar la a partir de leucocitos de sangre periférica. Para la IF directa, con objeto de evitar la contaminación con eritrocitos, la muestra se trata con NH
contaminación con eritrocitos, la muestra se trata con NH44CI frío (5 minutos a -20º), antesCI frío (5 minutos a -20º), antes
de ponerla en el portaobjetos. de ponerla en el portaobjetos. Diagnostico Serológico Diagnostico Serológico
Su
Su ututililididad ad se se cicircrcununscscriribe be al al didiagagnónóststicico o de de prprimimoioinfnfececcicionones es y y en en esestutudidiosos epidemiológicos. En las enfermedades del sistema nervioso central también se utilizan los epidemiológicos. En las enfermedades del sistema nervioso central también se utilizan los índices de anticuerpos IgG totales y específicos LCR/suero, junto con el índice de albúmina índices de anticuerpos IgG totales y específicos LCR/suero, junto con el índice de albúmina
(indicativo de barrera hematoencefálica intacta o alterada) para demostrar producción (indicativo de barrera hematoencefálica intacta o alterada) para demostrar producción intratecal de anticuerpos específicos.
intratecal de anticuerpos específicos.
La Respuesta Serológica en el Diagnostico de la infección por los VHS La Respuesta Serológica en el Diagnostico de la infección por los VHS
Ante la sospecha de infección por los VHS, es muy importante que el laboratorio Ante la sospecha de infección por los VHS, es muy importante que el laboratorio tenga claros los objetivos que persigue,
tenga claros los objetivos que persigue, adecuando las diferentes técnicas diagnósticasadecuando las diferentes técnicas diagnósticas disponibles a las diferentes situaciones clínicas con las que se enfrente. Esta claridad de disponibles a las diferentes situaciones clínicas con las que se enfrente. Esta claridad de objetivos es fundamental para luego interpretar correctamente
objetivos es fundamental para luego interpretar correctamente los resultados obtenidoslos resultados obtenidos según cada situación concreta. El diagnóstico indirecto serológico, basado en la
según cada situación concreta. El diagnóstico indirecto serológico, basado en la
determinación de los anticuerpos específicos frente a los VHS, no resulta en general de determinación de los anticuerpos específicos frente a los VHS, no resulta en general de tanta utilidad como el diagnóstico directo basado en el aislamiento del virus o en la tanta utilidad como el diagnóstico directo basado en el aislamiento del virus o en la
aplicación de metodología molecular. Aun partiendo de esta premisa, no debemos olvidar aplicación de metodología molecular. Aun partiendo de esta premisa, no debemos olvidar que, debido al amplio espectro de infecciones por los VHS, vamos a encontrarnos ante que, debido al amplio espectro de infecciones por los VHS, vamos a encontrarnos ante casos en los que resulte necesario
casos en los que resulte necesario recurrir a la detección de anticuerpos recurrir a la detección de anticuerpos específicos de cadaespecíficos de cada tipo de virus, principalmente en el suero
tipo de virus, principalmente en el suero o en el líquido cefalorraquídeo o en el líquido cefalorraquídeo (LCR) del paciente.(LCR) del paciente. Esto ocurre sobre todo cuando
Esto ocurre sobre todo cuando el aislamiento del virus no resulte posible, en situaciones deel aislamiento del virus no resulte posible, en situaciones de negatividad del diagnóstico directo o
negatividad del diagnóstico directo o en aquellos casos (v.g. encefalitis) en los qen aquellos casos (v.g. encefalitis) en los que la tomaue la toma de una muestra adecuada suponga un riesgo no justificable. En estos casos el diagnóstico de una muestra adecuada suponga un riesgo no justificable. En estos casos el diagnóstico serológico aparece como una alternativa a utilizar o, incluso en ocasiones, el único modo de serológico aparece como una alternativa a utilizar o, incluso en ocasiones, el único modo de establecer la infección.
establecer la infección.
La investigación de los anticuerpos an
La investigación de los anticuerpos anti-VHS se realiza básicamente a partir delti-VHS se realiza básicamente a partir del suero del paciente aunque, en ocasiones, se pueden detectar de diversos líquidos biológicos, suero del paciente aunque, en ocasiones, se pueden detectar de diversos líquidos biológicos, entre los que destaca el LCR en los casos de afectación neurológica. Es importante señalar, entre los que destaca el LCR en los casos de afectación neurológica. Es importante señalar, para poder detectar una hipotética seroconversión, la necesidad de obtener dos muestras de para poder detectar una hipotética seroconversión, la necesidad de obtener dos muestras de
suero, al inicio de los síntomas y a
suero, al inicio de los síntomas y a los 15-21 días siguientes.los 15-21 días siguientes.
La ausencia de anticuerpos indica que el individuo no ha sido infectado por los La ausencia de anticuerpos indica que el individuo no ha sido infectado por los VHS. Tras la infección primaria se produce un
seguido posteriormente de un incremento de los IgG. Los de clase IgM, aunque pueden seguido posteriormente de un incremento de los IgG. Los de clase IgM, aunque pueden desaparecer al cabo de 3-6 meses, presentan perfiles muy variados para cada individuo, desaparecer al cabo de 3-6 meses, presentan perfiles muy variados para cada individuo, pudiendo su persistencia indicar que la replicación viral continúa. En las infecciones pudiendo su persistencia indicar que la replicación viral continúa. En las infecciones
recurrentes pueden persistir o reaparecer los anticuerpos IgM, lo
recurrentes pueden persistir o reaparecer los anticuerpos IgM, lo que ocurre también tras lasque ocurre también tras las infecciones secundarias herpéticas graves como la encefalitis, aunque su negatividad no infecciones secundarias herpéticas graves como la encefalitis, aunque su negatividad no excluye el diagnóstico. Las IgG persistirán elevadas prácticamente
excluye el diagnóstico. Las IgG persistirán elevadas prácticamente de por vida, por lo qde por vida, por lo queue su detección no podrá utilizarse como signo de infección activa. Tan sólo implican que el su detección no podrá utilizarse como signo de infección activa. Tan sólo implican que el individuo ha sido infectado por el VHS-1, VHS-2 o ambos. También suponen que es individuo ha sido infectado por el VHS-1, VHS-2 o ambos. También suponen que es portador del VHS en los ganglios sensitivos y que
portador del VHS en los ganglios sensitivos y que el virus puede reactivarseel virus puede reactivarse
intermitentemente. Para documentar el estado inmunitario de un individuo frente a los VHS intermitentemente. Para documentar el estado inmunitario de un individuo frente a los VHS se han descrito numerosos métodos serológicos, entre los que los más eficaces y
se han descrito numerosos métodos serológicos, entre los que los más eficaces y disponibles comercialmente se basan en técnicas
disponibles comercialmente se basan en técnicas de EIA. Sin embargo, la elevadade EIA. Sin embargo, la elevada reactividad cruzada entre el VHS-1 y el
reactividad cruzada entre el VHS-1 y el VHS-2 cuando se utilizan antígenos crudos haVHS-2 cuando se utilizan antígenos crudos harárá imposible diferenciar entre una infección pasada por uno u otro virus. La necesidad de imposible diferenciar entre una infección pasada por uno u otro virus. La necesidad de solucionar este problema desde el punto
solucionar este problema desde el punto de vista del manejo práctico en de vista del manejo práctico en las diferenteslas diferentes situaciones clínicas ha hecho que,
situaciones clínicas ha hecho que, en los últimos años, se hayan desarrollado métodosen los últimos años, se hayan desarrollado métodos
basados en antígenos específicos de tipo. Ambos virus poseen aproximadamente un 83% de basados en antígenos específicos de tipo. Ambos virus poseen aproximadamente un 83% de
homología en su secuencia nucleotídica, lo que se traduce en una marcada reactividad homología en su secuencia nucleotídica, lo que se traduce en una marcada reactividad serológica cruzada. El descubrimiento en los años 80 de la glucoproteína G (gG), con serológica cruzada. El descubrimiento en los años 80 de la glucoproteína G (gG), con diferencias en la antigenicidad según
diferencias en la antigenicidad según el tipo de virus, permitió, en cierto modo, el tipo de virus, permitió, en cierto modo, lala resolución del problema, facilitando el desarrollo de p
resolución del problema, facilitando el desarrollo de pruebas específicas de tipo dirigidas aruebas específicas de tipo dirigidas a la detección de anticuerpos IgG e IgM.
la detección de anticuerpos IgG e IgM. Técnicas disponibles en
Técnicas disponibles en el el diagnostico serológico de los diagnostico serológico de los VHS.VHS. La necesidad de identificar los dos
La necesidad de identificar los dos tipos de VHS ha justificado el desarrollo detipos de VHS ha justificado el desarrollo de métodos serológicos, en particular de enzimoinmunoensayo, con el objetivo principal de métodos serológicos, en particular de enzimoinmunoensayo, con el objetivo principal de diferenciar los anticuerpos específicos de cada tipo.
diferenciar los anticuerpos específicos de cada tipo. Sin embargo, en la actualidad Sin embargo, en la actualidad existenexisten todavía pruebas disponibles comercialmente que utilizan
todavía pruebas disponibles comercialmente que utilizan antígenos comunes y cuyo interésantígenos comunes y cuyo interés diagnóstico es, lógicamente, muy limitado. Esto se traduce en la dificultad de interpretar los diagnóstico es, lógicamente, muy limitado. Esto se traduce en la dificultad de interpretar los resultados serológicos. La ineficacia de los métodos de
resultados serológicos. La ineficacia de los métodos de ELISA basados en un antígenoELISA basados en un antígeno crudo obtenido tras el lisado de las células infectadas es una consecuencia de la elevada crudo obtenido tras el lisado de las células infectadas es una consecuencia de la elevada
concentración de antígenos comunes de ambos VHS. Los ensayos para desarrollar pruebas concentración de antígenos comunes de ambos VHS. Los ensayos para desarrollar pruebas basadas en antígenos específicos de tipo se han centrado ante todo en las glucoproteínas de basadas en antígenos específicos de tipo se han centrado ante todo en las glucoproteínas de
la envoltura, como la gG, que se comportan como buenos inmunógenos, además de tener la envoltura, como la gG, que se comportan como buenos inmunógenos, además de tener importantes funciones biológicas.
importantes funciones biológicas.
Aunque se han utilizado numerosas técnicas en el estudio serológico de la infección Aunque se han utilizado numerosas técnicas en el estudio serológico de la infección por los VHS, la fijación de complemento,
por los VHS, la fijación de complemento, de utilidad hasta épocas recientes, la de utilidad hasta épocas recientes, la IFI yIFI y actualmente las técnicas de EIA, o de inmunotransferencia son las más comunes. La actualmente las técnicas de EIA, o de inmunotransferencia son las más comunes. La
fijación de complemento con un antígeno soluble de VHS ha ido perdiendo protagonismo, fijación de complemento con un antígeno soluble de VHS ha ido perdiendo protagonismo, debido a su moderada
debido a su moderada sensibilidad y a su incapacidad para sensibilidad y a su incapacidad para diferenciar entre los tipos dediferenciar entre los tipos de virus y de inmunoglobulinas. Las técnicas de
virus y de inmunoglobulinas. Las técnicas de ELISA son las más utilizadas actualmente, alELISA son las más utilizadas actualmente, al estar además disponibles comercialmente. Permiten la detección de
estar además disponibles comercialmente. Permiten la detección de anticuerpos IgG o IgManticuerpos IgG o IgM y la diferenciación, no sin problemas, entre
y la diferenciación, no sin problemas, entre los dos tipos. La comercialización de los dos tipos. La comercialización de este tipoeste tipo de pruebas ha ampliado su disponibilidad a muchos laboratorios. Actualmente deben de pruebas ha ampliado su disponibilidad a muchos laboratorios. Actualmente deben incluirse como las técnicas de elección
incluirse como las técnicas de elección para el estudio serológico de los VHS.para el estudio serológico de los VHS. La técnica de inmunotransferencia o
La técnica de inmunotransferencia owestern-blot western-blot (WB), aunque descrita hace más(WB), aunque descrita hace más
de diez años, se utiliza en la diferenciación de los dos tipos de VHS como método de de diez años, se utiliza en la diferenciación de los dos tipos de VHS como método de referencia, con los problemas ya conocidos
referencia, con los problemas ya conocidos de coste, tiempo y laboriosidad. Es una de coste, tiempo y laboriosidad. Es una técnicatécnica sensible y específica que permite detectar anticuerpos IgG
sensible y específica que permite detectar anticuerpos IgG en suero y LCR en donen suero y LCR en donde sede se estudia la reactividad frente a las proteínas específicas de
estudia la reactividad frente a las proteínas específicas del virus, por lo que resulta del virus, por lo que resulta de utilidad en el diagnóstico de
utilidad en el diagnóstico de la encefalitis y en los estudios de diferenciación entre ambosla encefalitis y en los estudios de diferenciación entre ambos tipos de virus. Aunque se considera en la actualidad como el patrón de referencia para el tipos de virus. Aunque se considera en la actualidad como el patrón de referencia para el diagnóstico diferencial de los dos VHS, su co
diagnóstico diferencial de los dos VHS, su complejidad técnica y la demora en mplejidad técnica y la demora en susu
realización la inhabilitan como prueba de cribado. Una alternativa comercial que podría realización la inhabilitan como prueba de cribado. Una alternativa comercial que podría aplicarse en algunos laboratorios es el
aplicarse en algunos laboratorios es el immunoblotting immunoblotting en tiras (RIBA), válido para casosen tiras (RIBA), válido para casos
concretos, aunque no u
concretos, aunque no utilizable para estudios amplios de seroprevalencia.tilizable para estudios amplios de seroprevalencia. En resumen, las pruebas basadas e
En resumen, las pruebas basadas en antígenos específicos de VHS-1 y VHS-2n antígenos específicos de VHS-1 y VHS-2 disponibles comercialmente en la actualidad se basan en:
disponibles comercialmente en la actualidad se basan en:
a) Pruebas de EIA que utilizan como antígeno la glucoproteína gG. Se han a) Pruebas de EIA que utilizan como antígeno la glucoproteína gG. Se han desarrollado diversos métodos comerciales para la determinación de
