RESULTADOS Y DISCUSIONES
116
Tabla 31. Estudios de fermentación de cladodios de Opuntia ficus-indica
RESULTADOS Y DISCUSIONES
117 La concentración final de harina de cladodios de Opuntia ficus-indica para la preparación del medio de fermentación es de 20% y se compone por harina de cladodios como única fuente de carbono y sales minerales.
Las condiciones de fermentación para la obtención de la máxima concentración de alcohol fueron: 40° C, pH 5.5 y 200 rpm por 8 h al término del cual se obtiene 13 g/L de alcohol con una población final de 100 x 106 cel/ml.
Posterior a este tiempo se procede con la etapa de destilación para la obtención del alcohol.
CONCLUSIONES
118 CONCLUSIONES
Se realizó el aislamiento de cuatro bacterias a partir de cladodios en descomposición, dos levaduras de líquido ruminal y dos levaduras de estómago de termita, los cuales tuvieron la capacidad de crecer y degradar CMC como fuente de carbono.
Las bacterias demostraron tener capacidad hidrolítica para la degradación del medio sólido con CMC, mientras que las levaduras demostraron tener principalmente capacidad fermentativa para producción de alcohol en medio sólido con YPD.
Solo las bacterias B400 y B401 aisladas de cladodios en descomposición, crecieron en medio sólido adicionado con harina de cladodios, lo que indicó que contaban con la capacidad de generar enzimas celulolíticas. Las cuatro levaduras, dos aisladas de líquido ruminal (LR2 y LR5) y dos aisladas de estómago de termita (T4 y T6), contaron también con actividad hidrolítica sobre harina de cladodios como medio específico. Lo anterior se confirmó cuando se llevó a cabo la determinación cualitativa empleando rojo Congo, en donde se logró observar halos de degradación.
La identificación de los microorganismos indicaron que las bacterias aisladas de cladodios en descomposición presentaron 100% de identidad con Acinetobacter pittii y Bacillus subtilis, mientras que las levaduras aisladas de líquido ruminal presentaron 100% de identidad con Candida glabrata y las levaduras aisladas de estómago de termita presentaron 100% de identidad con Kluyveromyces marxianus.
Las bacterias contaron con mayor actividad hidrolítica específica (UI) a las 12 horas de crecimiento en medio con harina de cladodios al 20%, siendo estos valores de actividad (UI):
0.072±0.01 y 0.058±0.001 para las bacteria Acinetobacter pittii y Bacillus subtilis, respectivamente.
La actividad celulolítica (U/ml) medida por turbidimetría de ambas bacterias fue de 0.19±0.01 y 0.16±0.06 para Acinetobacter pittii y Bacillus subtilis, respectivamente medida en harina de cladodios como sustrato; y de 0.23±0.09 y 0.23±0.03 en avicel como sustrato.
Los valores de actividad celulolítica de las bacterias Acinetobacter pittii y Bacillus subtilis son menores en comparación a la actividad celulolítica de la bacteria Clostridium thermocellum ATCC 27405 empleando harina de cladodio Opuntia ficus-indica variedad Atlixco, 0.25±0.05.
Las cuatro levaduras silvestres fueron capaces de crecer en medio adicionado con harina de cladodios en ambas concentraciones probadas, siendo en medio al 10% donde se registraron los
CONCLUSIONES
119 valores máximos. Además, la generación de biomasa de las levaduras Candida glabrata se dio en menor tiempo en comparación con las Kluyveromyces marxianus, siendo de 12 y 28 horas, respectivamente. Se registró un consumo de más del 80% del azúcar inicial cuantificado durante las primeras 4 horas para las levaduras C. glabrata y hasta las 24 horas para las K. marxianus.
En cuanto a la producción de alcohol, las dos levaduras K. marxianus produjeron en mayor concentración este metabolito aunque en un tiempo más largo en comparación con las C.
glabrata. La máxima productividad obtenida fue con la levadura Kluyveromyces marxianus (T6) en medio con harina de cladodios al 20% (0.5±0 g/Lh). Por otro lado, las actividades hidrolíticas específicas cuantificadas para las levaduras K. marxianus se obtuvieron en las primeras 4 horas de crecimiento y correspondieron a 0.59±0.02 y 0.34±0.0 UI en medio al 10%
y 0.35±0.01 y 0.31±0.01 UI en medio al 20% para T4 y T6 respectivamente.
El análisis por UPLC-MS indicó que los principales azúcares presentes en los medios de cultivo fueron fructosa, glucosa y sacarosa.
Durante el crecimiento de dos bacterias silvestres con actividad hidrolítica, todas las muestras del medio de cultivo a base de harina de cladodios presentaron comportamiento no newtoniano y las curvas ascendentes y descendentes de flujo estuvieron ajustadas (r2>0.90) a la ecuación de Herschel-Bulkley el cual fue el mejor modelo para este tipo de fluido. En el medio de cultivo la consistencia disminuyó (K) y existió una pérdida de la pseudoplaticidad (n) con la adición de los microorganismos y el tiempo de crecimiento de éstos, concluyendo que la materia prima fue degradada por efecto de las enzimas extracelulares. Estadísticamente se demostró que la interacción de ambos factores (tipo de cepa y tiempo) influyó significativamente.
Las máximas actividades hidrolíticas específicas a las 24 horas en el medio al 20% de harina fueron 0.21±0.05 y 0.22±0.01 UI para Acinetobacter pittii y Bacillus subtilis, respectivamente.
Se eligió una bacteria hidrolítica y una levadura fermentativa que además contó con actividad hidrolítica para evaluar condiciones de pH, temperatura y tipo de microorganismo. Los microorganismos elegidos fueron Acinetobacter pittii (B400) y Kluyveromyces marxianus (T4) ya que con la bacteria se obtuvo la mayor actividad y degradación del medio y con la levadura se obtuvo el máximo valor de alcohol y actividad hidrolítica específica en medio al 20%.
La bacteria Acinetobacter pittii contó con la mayor actividad de celulasas totales y de endoglucanasas como resultado de la inducción enzimática, debido a la celulosa presente en el medio de cultivo adicionado con harina de cladodios, considerado un inductor universal de
CONCLUSIONES
120 celulasas. Se presentó una hidrólisis de la fuente de carbono para la obtención de azúcares reductores libres que fueron empleados como sustrato tanto para el crecimiento del microorganismo como para la producción de enzimas.
La levadura Kluyveromyces marxianus también exhibió actividad de celulasas totales y de endoglucanasas además, la disminución de la concentración de glucosa a lo largo de la cinética fue asociada con una fermentación efectiva para la conversión a alcohol.
Los factores tipo de microorganismo, temperatura, pH así como su interacción triple tuvieron efecto significativo sobre las actividades hidrolíticas y producción de alcohol. Las mejores condiciones para las más altas actividades hidrolíticas fueron 37 ºC y pH 6.5 con la bacteria Acinetobacter pittii obteniéndose FPasa=0.67±0.02 U/ml y CMCasa=0.23±0.02 U/ml. Las mejores condiciones para la liberación de azúcares (glucosa+sacarosa) fueron con la bacteria A.
pittii a 37 °C y pH 5.5, obteniéndose 4 g/L a las 8 h de cinética. Las mejores condiciones para la producción de alcohol fueron con la levadura Kluyveromyces marxianus a 40 °C y pH 5.5, obteniéndose 13 g/L de alcohol a las 8 h.
Los tres esquemas de sacarificación y fermentación presentaron diferencia significativa en cuanto a actividad total y producción de alcohol.
Los mejores resultados se obtuvieron con el esquema por separado empleando para la hidrólisis a la bacteria Acinetobacter pittii y para la fermentación a la levadura Kluyveromyces marxianus Los valores más altos de actividad de celulasas totales (FPasa) fueron de 0.67±0.02 U/ml y el de alcohol fue de 12.95±0.03 g/L.
Se establece que el mejor proceso para producción de alcohol a partir de harina de cladodios de Opuntia ficus-indica variedad Atlixco, empleando la levadura Kluyveromyces marxianus fue una hidrólisis y fermentación por separado, siendo 40° C, pH 5.5, 200 rpm y 8 h, las mejores condiciones de fermentación.
RECOMENDACIONES
121 RECOMENDACIONES
Se recomienda continuar con los estudios de la etapa de hidrólisis de los cladodios de Opuntia ficus-indica para aumentar el contenido inicial de carbohidratos fermentables.
Se recomienda realizar la purificación y caracterización de los extractos enzimáticos obtenidos a partir de los microorganismos silvestres, con miras a obtener enzimas con potencial industrial.
Se recomienda estudiar la etapa de destilación y deshidratación para la caracterización de la calidad del alcohol obtenido.
Se recomienda escalar los procesos de fermentación a escala planta piloto y nivel industrial tratando de reproducir los resultados obtenidos.
BIBLIOGRAFÍA
122 BIBLIOGRAFÍA
Abidi, A., Salem, H., Martín, A., y Molina, E. (2009). Ruminal fermentation of spiny (Opuntia amyclae) and spineless (Opuntia ficus indica f. inermis) cactus cladodes and diets incluiding cactus, Animal Feed Science and Technology, 149:333-340.
Akanni, G., Du Preez , J., Steyn, L., y Kilian, S. (2014). Protein enrichment of an Opuntia ficus- indica cladode hydrolysate by cultivation of Candida utilis and Kluyveromyces marxianus, Journal of the Science of Food and Agriculture, DOI 10.1002/jsfa.6985.
Alvira, P., Tomás, E., Ballesteros, M., y Negro, M. (2010). Pretreatment technologies for an efficient bioethanol production process based on enzymatic hydrolysis: a review, Bioresouce Technology, 101(13):4851-4861.
Anderson, E. (2001).The cactus family, Timber Press, Portland OR, 15-72.
AOAC. Official Methods of Analysis (1996).
Aro, N., Pakula, T., y Penttila, M. (2005). FEMS Microbiology Review, 29:719-739.
Atlas, R. (2004). Handbook of microbiological media. 3rd ed. CRC Press.
Ayadi, M., Abdelmaksoud, W., Ennouri, M., y Attia, H. (2009). Cladodes from Opuntia ficus- indica as a source of dietary fiber: effect on dough characteristics and cake making, Industrial Crops and Products, 30:40-47.
Banoub, J., Benjelloun, B., Ziarelli, F., Joly, N., y Delmas, M. (2007). Rapid Communications in Mass Spectrometry, 21(17):2867-2888.
Barbera, G., y Inglese, P. (1993). La coltura del ficondinia, Edagricole: Bologna, Italy.
Batista , A., Mustafa, A., McAllister, T., Wang, Y., Soita, H., y McKinnon, J. (2003). Effects of variety on chemical composition, in situ nutrients disappearance and in vitro gas production of spineless cacti, Journal of Science and Food Agriculture, 83:440-445.
Cacioppo, O. (1991). Fico d'india e pitaya, Ed. L'informatore Agrario, Verona.
BIBLIOGRAFÍA
123 Cardona, C., Quintero, J., Paz, I. (2010). Production of bioethanol from sugarcane bagasse:
Status and perspectives, Bioresource Technoogy, 101:4754-4766.
CONABIO. (2009). CONABIO. Biodiversidad mexicana, : [email protected].
Contreras, M., Pérez, E., Hernández, M., Hernández, G., Del Real, A., Rivera, E., Rodríguez, M. (2011). Evaluation of oxalates and calcium in nopal pads (Opuntia ficus-indica var redonda) at different maturity stages, 24:38-43.
Dashtban, M., Maki, M., Tin, K., Mao, C., Qin, W. (2010). Critical Reviews in Biotechnology, 1-8.
De Cortázar, V., y Nobel, P. (1992). Biomass and fruit production for the prickly pear cactus, Opuntia ficus-indica, Journal of the American Society for Horticultural Science, 117:558-562.
De la Rosa, P, S. (1998). El nopal: usos, manejo agronómico costos de producción. Ed.
Universidad Autónoma de Chapingo, Chapingo, México, 129-145.
Demain , A. (2009). Biosolution to the energy problem, Journal of Industrial Microbiology, 36(3):319-332.
Díaz-Placencia, D., Rodríguez-Muela, C., Mancillas-Flores, P., Ruíz-Holguín, N., Mena- Mungía , S., Salvador-Torres, F., y Durán-Melendez, L. (2012). In vitro fermentation of forage prickly pear cactus with yeast inoculum of Kluyveromyces lactis from apple waste, REDVET, 13(1):1-11.
Díaz-Vela, J., Totosaus, A., Cruz-Guerrero, A., Pérez-Chabela, M. (2013). In vitro evaluation of the fermentation of added-value agroindustrial by-products: cactus pear (Opuntia ficus-indica L.) peel and pineapple (Ananas comosus) peel as functional ingredients, International Journal of Food Science and Technology, 48:1460-1467.
Estrada, R. (2013). Tesis de maestría: Estudio de la capacidad fermentativa de microroganismos silvestres en cultivos mixtos para la producción de alcohol a partir de residuos cítricos.
Centro de Investigación y Asistencia en Tegnología y Diseño del Estado de Jalisco, A.C.
(CIATEJ) Unidad Sureste, 2013.
BIBLIOGRAFÍA
124
FAO. (2014). FAO. ECOCROP, Opuntia ficus-indica,
http://ecocrop.fao.org/ecocrop/srv/en/dataSheet?id=8094 (Consultado Noviembre del 2014).
Ferreira, V., Fortes, L., Ferrara, M., Lima, A., Correa , H., y Bon , E. (2010). Biomass residues in Brazil: Availability and potential uses, Waste Biomass Valor, 1:65-67.
Florez-Ortiz, M., y Reveles-Hernández, M. (2010). Producción de nopal forrajero de diferentes variedades y densidades de plantación, VIII Simposium-Taller Nacional y 1er Internacional "Producción y Aprovechamiento del Nopal, RESPYN Revista Salud Pública y Nutrición, 5:198-210.
Florian, S., y Reinhold, C. (2005). Molecular Nutrition and Food Research, 49:175-194.
Fucikovski, L. (1992). En Review of the diseases of nopalitos and tunas and their control, In:
Proceedings of the third annual Texas prickly pear council (págs. 42-44). Kingsville, Texas: P. Felker and J.R. Moss.
Fucikovski, L., y Jaimes, J. (1981). Bacterial disease of agave and cactus in Mexico, In:
Proceedings of the fifth international conference on plant pathology, bacteria, (págs. 27- 34). Cali, Colombia.
Gelati, E., Monforte, M., Tripodo, M., d'Aquino , A., y Mondello, M. (2001). Antiulcer activity of Opuntia ficus-indica (L.) Mill. (Cactaceae): Ultrastructural study, Journal of Ethnopharmacology, 76:1-9.
González, L. (2011). Desarrollo y evaluación de una película comestible obtenida del mucílago nopal utilizada para reducir la tasa de respiración del nopal verdura, Investigación universitaria multidisciplinaria, 10.
Granados, D., y Castañeda, A. (1996). En El nopal: historia, fisiología, genética e importancia frutícola. México: Trillas.
Grohmann, K., Cameron, R., y Buslig, B. (1995). Bioresource Technology, 54:129-141.
BIBLIOGRAFÍA
125 Guevara, J., Yahia, E., Brito, E., y Biserka, S. (2003). Effects of elevated concentration of CO2
in modified atmosphere packaging on the quiality of prickly pear cactus stems (Opuntia spp.), Posthavest Biology Technology, 29:167-176.
Hahn-Hagerdal, B., Galbe, M., Gorwa-Grauslund, M., Liden, G., y Zacchi, G. (2006). Trends Biotechnology, 24:549-410.
Hernández, M., Pérez, E., y Rodríguez, M. (2011). Chemical analysis of nutritional content of prickly pads (Opuntia ficus-indica) at varied ages in an organic harvest, International journal of environmenta research and public health, 8:1287-1295.
Hernández, S., Villa, M., Riveera , K., Rivera, K., Gónzalez, R., Plascencia , M., y Trejo, S.
(2009). Comparative hydrolysis and fermentation of sugarcane and agave bagasse, Bioresource Technology, 100:1238-1245.
Howard, R., Abotsi, E., Rensburg, J., y Howard, S. (2003). Lignocellulose Biotechnology:
issues of bioconversion and enzyme production. African Journal of Biotechnology, 2:602-619.
Inglese, P., Basile, F., y Schirra, M. (2002). Cactus pear fruit production. In Cacti Biology and Uses (Editor P.S. Nobel), University of California Press, LTD, 280.
Jinfeng, N., y Gaku, T. (2013). Lignocellulose degrading enzymes from termites and their symbiotic microbiota, Biotechnology Advances, 31:838-850.
Kim, S., y Dale, B. (2004). Global potential bioethanol production from wasted crops and crop residues, Biomass and Bioenergy, 26:361-375.
Kuloyo , O., Du Preez, J., García, M., Kilian, S., Steyn, L., y Görgens, J. (2014). Opuntia ficus- indica cladodes as feedstock for ethanol production by Kluyveromyces marxianus and Saccharomyces cerevisiae, 30:3173-3183.
Le Houérou, H. (1996). The role cacti (Opuntia spp.) in erosion control, land reclamation, rehabilitation and agricultural development in the Mediterranean BasinJournal of Arid Environments, 33(2):135-159.
BIBLIOGRAFÍA
126 Lee, H., Hamid, B., y Zain, S. (2014). Conversion of lignocellulosic biomass to nanocellulose, structure and chemical process, The Scientific World Journal, doi.org/10.1155/2014/631013.
León, F., Rodríguez, J., Medina, L., y Bernard, M. (2011). Effects of drying conditions on the rheological properties of reconstituted mucilage solutions (Opuntia ficus-indica), Carbohydrate Polymers, 84:439-445.
Li, C., Knierim, B., Manisseri, C., Arora, R., Scheller, H., Auer, M., y Singh, S. (2010).
Comparison of dilute acid and ionic liquid pretreatment of switchgrass: biomass recalcitrance, delignification and enzymatic saccharification, Bioresource Technology, 101:4900-4906.
Lynd, T., Weimer, P., Van Zyl, W., y Pretorious, I. (2002). Microbial cellulose utilization:
fundamentals and biotechnology, Microbiol and Molecular Biology Reviews, 66:506- 577.
Malainine, M., Dufresne, A., Dupeyre, D., Vignon, M., y Mahrouz, M. (2003). First evidence of weddelite crystallites in Opuntia ficus-indica parenchyma, Zeitschrift für Naturforsch/Bioscience, 58c:812-815.
Martín, C., Klinke, H., y Thomsen, A. (2007). Wet oxidation as a pretreatment method for anhancing the enzymatic convertibility of sugarcane bagasse, Enzyme Microbiology Technology, 40:426-432.
Méndez, S., García, J., Rössel, D., Tarango, A., Talavera, D., y Figueroa, S. (2004). ISBN:968- 839-421-1.
Méndez-Gallegos, S., Rössel, D., Amante-Orozco, A., Gómez-González, A., y García-Herrera, J. (2010). RESPYN Revista Salud Pública y Nutrición, Edición especial (5):70-84.
Mood, S., Golfeshan, A., Tabatabaei, M., Jouzani, G., Najafi, G., Gholami, M., y Ardjmand, M.
(2013). Lignocellulosic biomass to bioethanol, a comprehensive review with a focus on pretreatment, Renewable and Sustainable Energy Reviews, 27:77-93.
Müller, L. (2000). Costa Rica: Manual de laboratorio de morfología vegetal, CATIE.
BIBLIOGRAFÍA
127 Muñoz de Chávez, M., Chávez, A., Valles, V., y Roldán, J. (1995). The nopal: a plant of
manifold qualities , World Review of Nutrition and Dietetics, 77:109-134.
Nobel, P. (1999). Biología ambiental. En: Barbera G., Inglese P. y Pimienta, eds. Agroecología, cultivo y usos del nopal. Estudio FAO Producción y Protección Vegetal, 132. Roma., 37-50.
Nobel, P., Cavelier, J., y Andrade, J. (1992). Mucilage in cacti: its apoplastic capacitance, associated solutes and influence on tissue water relation. Journal of Experimental Botany, 43(250):641-648.
Palmqvist, E., y Hahn-Hagerdal, B. (2000). Fermentation of lignocellulosic hydrolysates, inhibition and detoxification, Bioresource Technology, 74:17-24.
Pan, X., Gilkes, N., y Saddler, J. (2006). Effect of acetyl groups on enzymatic hydrolysis of cellulosic substrates, Holzforschung, 60:398-401.
Pasquini, D., Pimenta, M., Ferreira, L., y Curvelo , A. (2005). Sugar cane bagasse pulping using supercritical CO2 associated with co-solvent 1-butanol/water, Journal of Supercritics Fluids, 34:125-131.
Peng, F., Ren, J., Xu, F., Brian, J., Peng, P., y Sun, R. (2009). Comparative study of hemicelluloses obtained by graded ethanol precipitation from sugarcane bagasse, Journal of Agricultral Food and Chemistry, 57(14):6305-6317.
Pimienta-Barrios, E., y Muñoz-Urias, A. (1995). Domestication of Opuntia and cultivated varieties. In: Agro-ecology, cultivation and uses of cactus pear, FAO Plant Production and Protection Paper, 132:58-63.
Retamal, N., Durán, J., y Fernández. (1987). Ethanol production by fermentation of fruit and cladodes of prickly pear cactus (Opuntia ficus-indica (L.) Miller), Journal of the Science of Food and Agriculture, 40:213-218.
Rodríguez, A. (2002). Postharvest physiology and technology of cactus pear fruits and cactus leaves. Acta Horticulturae, 581:191-199.
BIBLIOGRAFÍA
128 Rodríguez-Félix, A., y Cantwell, M. (1988). Developmental chages in composition and quality of prickly pear cactus cladodes (nopalitos), Plant Foods for Human Nutrition, 38:83-93.
Rural, F. (2011). Monografía del nopal y la tuna, Dirección General Ajunta de Planeación Estratégica y Análisis Sectorial, Dirección Ejecutiva de Análisis Sectorial, 1-15.
Sáenz, C. (2006). Los nopales como recurso natural, Rosell C. ed. Utilización agroindustrial del nopal. Boletín de servicios agrícolas de la FAO, 162. Roma. 165 p., 1-6.
Sáenz, C., Berger, H., Corralea-García, J., Galletti, L., García de Cortázar, V., Higuera , I., Varnero, M. (2006). Utilización agroindustrial del nopal, Boletín de Servicios Agrícolas de la FAO, 1-3.
Sáenz, C., Sepúlveda, E., y Matsuhiro, B. (2004). Opuntia spp mucilage´s: a functional component with industrial perspectives, Journal of arid Environments, 57:275-290.
Scharf, M., y Boucias, D. (2010). Potential of termite based biomass pretreatment strategies for use in bioethanol production, Insect Science, 17:166-174.
Scharf, M., y Boucias, D. (2010). Potential of termite based biomass pre treatment strategies for uses in bioethanol production, Insect science, 17:166-174.
Seyed, A. H., y Nilay , S. (2011). Modelling enzymatic hydrolysis of cellulose part I: population balance modelling of hydrolysis by endoglucanase, Biomass and bioenergy, 35: 3841- 3848.
Shin, H., Hwang, H., Kang, K., y Lee, B. (2006 ). An antioxidative and anti-inflammatory agent for potencial treatment of osteoarthritis from Eklonia cava. Archives of Pharmacal Research, 29:165-171.
SIAP. (2018). Estacionalidad de nopalitos. Servicio de Información Agroalimentaria y Pequera.
SAGARPA, http://www.siap.gob.mx/.
SIAP-SAGARPA. (s.f.).
BIBLIOGRAFÍA
129 Sorek, N., Yeats, T., Szemenyei, H., Youngs, H., y Somerville, C. (2014). The implications of lignocellulosic biomass chemical composition for the production of advanced biofuels, BioScience, doi:10.1093/biosci/bit037.
Stintzing, F., y Carle, R. (2005). Cactus stems (Opuntia spp): A review on their chemistry, technology and uses. Molecular Nutrition and Food Research., 49(2):175-194.
Sudzuki y col. (1993).
Sun, Y., y Cheng, J. (2002). Hydrolysis of lignocellulosic materials for ethanol production: a review, Bioresource Technology, 83:1-11.
Tuckwell, D., Nicholson, M., McSweeney, C., Theodorou, M., y Brookman, J. (2005).
Microbiology, 151.1557-1567.
U.S. Department of energy and Department of agriculture, 2015. (s.f.). Biomass feefstock composition and propertu database, Consultado Julio 2015.
Valdez-Cepeda, R., Blanco-Macías, F., Vázquez-Alvarado, R., y Magallanes-Quintanar, R.
(2002). Freezing tolerance of Opuntia spp, Journal of the Professional Association for Cactus, 4:111-115.
Vavaro , L., y Gargata, G. (1990). Identification of bacterium causing spots on the prickly pear, In: Proceedings of the eighth congress medit. phitol union, (pág. 469). Agadir, Marruecos.
Volynets, B., y Dahman, Y. (2011). Assessment of pretreatments and enzymatic hydrolysis of wheat straw as a sugar source for bioprocess industry. International Journal of Energy and Environment, 2(3):427-446.
Weinsburg, W., Barns, S., Pelletier, D., y Lane, D. (1991). Journal of Bacteriology, 173(2):697- 703.
White, T., Bruns, T., Lee, S., y Tylor, J. (1990). PCR Protocols: A guide to methods and applications, 315-322.
BIBLIOGRAFÍA
130 Wyman, C., Dale, B., Elander, R., Holtzapple, M., Ladisch, M., y Lee, Y. (2005). Comparative sugar recovery data from laboratory scale application of leading pretreatment techologies to corn stover, Bioresource technology, 96:2026-2032.
Yang, B., y Wyman, C. (2008). Pretreatment: the key to unlocking low cost cellulosic ethanol, Biofuels Bioproducts Biorefining, 2:26-40.
ANEXO 1
131 PUBLICACIONES
ANEXO 1
132
ANEXO 1
133
ANEXO 1
134
ANEXO 1
135
ANEXO 1
136
ANEXO 1
137
ANEXO 1
138
ANEXO 1
139
ANEXO 1
140
ANEXO 1
141
ANEXO 1
142
ANEXO 1
143
ANEXO 1
144
ANEXO 2
145 PRESENTACIÓN EN CONGRESOS
XIV International Congress of Yeasts, 2016, Japón
ANEXO 2
146
ANEXO 2
147 Food and Biotechnology International Congress, 2016, México
ANEXO 2
148
ANEXO 2
149 IX Congreso de Biotecnología y Bioingeniería del Sureste, 2018, México
ANEXO 2
150 IV Congreso Internacional de Biotecnología y Biodiversidad, 2018, Ecuador.
ANEXO 2
151