Pruebas biológicas en paredes

En ambiente de laboratorio se utilizan planchas de madera (playwood) como modelo y se calcula la superficie de las planchas y la cantidad de insecticida que será aplicado. Posteriormente con una bomba Hudson- X-Pert, previamente calibrada, se procede a rociar las superficies de las planchas de madera.

Cuando la prueba se hace en ambiente de campo (viviendas que han sido rociadas), la primera prueba para evaluar el insecticida se inicia a los siete (7) días de su aplicación pero estando seca la superficie rociada.

La temperatura durante la ejecución de la prueba no debe ser menor a20°C ni exceder de 30°C.

El procedimiento deberá realizarse utilizando los vectores del área o lo- calidad donde se realizará la intervención; sin embargo, ante dificultades para conseguir vectores locales podrían utilizarse mosquito de otras lo- calidades, siempre y cuando sean de reconocida susceptibilidad al insec- ticida utilizado.

Los ensayos de eficacia residual de insecticidas, por el método de eva- luación biológica de los depósitos de insecticidas en las paredes, inde- pendientemente de que sea en el laboratorio o en viviendas rociadas de localidades priorizadas, se realizan según el siguiente procedimiento:

• La prueba se realizará al menos en cuatro viviendas de cada localidad priorizada o centinela. El equipo necesario para el bioensayo consiste en kit de bioensayo que incluye conos plásticos, cinta adhesiva, tubo de succión curvo, tubo de succión recto, cartulina, clavos pequeños, martillo, copos de algodón, vasos desechables con tapa de tul, bandi- tas de goma (gomitas), marcadores, jaula de mosquitos, neveras de playa o cajas, toallas, cronómetro, termómetro e higrómetro.

• En cada tipo de superficie de las paredes o substratos (bloques, cemento, madera, tejamaní, etc.) se eligen como mínimo 10 puntos diferentes para llevar a cabo las pruebas en un mismo día. Estos puntos son determinados a razón de tres puntos en cada casa a las alturas de 0.5;

1.0 y 1.5 metros sobre el nivel del suelo. Es necesario evaluar por separado la actividad de los depósitos de insecticidas sobre cada uno

de los principales tipos de paredes existentes en la localidad. Por cada 10 puntos para pruebas biológicas deben existir por lo menos dos puntos de control.

• En cada punto se colocan los conos estandarizados según recomen- dación de OMS, revistiendo los bordes del cono plástico con la cinta adhesiva. Posteriormente usando clavos o cinta adhesiva, fije el cono a la superficie rociada (fije diferentes conos a tres alturas correspon- dientes a 0.5, 1.0 y 1.5 metros del suelo). Clave la cartulina libre de insecticida a la pared y fije los conos plásticos a la misma (para ser usados como controles).

• Usando mosquitos capturados en la localidad, transfiera de 10 a 15 mosquitos hembras recién alimentadas y con sangre en el estómago al interior de cada cono y ponga una pieza de algodón en la boca del cono (use tubos de aspiración diferentes para transferir los mosquitos a los conos control).

• Después de media hora de exposición, cuente el número de mosqui- tos muertos (o noqueados) al final del periodo de exposición (30 mi- nutos), pero no remueva los mosquitos que parecen muertos, ya que algunos de ellos pueden recuperase.

• Retire con cuidado los mosquitos de los conos usando tubos de aspi- ración y transfiéralos a vasos desechables independientes y cubiertos con tul debidamente marcados, coloque un algodón húmedo con so- lución de azúcar al 10% en la tapa del vaso, y ponga los vasos en la nevera de playa, cubriéndolos con toallas húmedas.

• Las condiciones de mantenimiento de los mosquitos después de ha- ber sido expuestos deben ser óptimas y estos deben reposar en un ambiente con una temperatura entre 20°C y 30°C.

• La lectura de la prueba se realiza a las 24 horas, haciendo un conteo de los insectos muertos y supervivientes tanto en los vasos donde se dejaron en reposo los mosquitos expuestos como en los vasos con los mosquitos no expuestos (controles).

• Se calcula el porcentaje de mortalidad y la mortalidad media a partir de los resultados obtenidos en los diferentes puntos (en un mismo tipo de substrato). Después de los valores reportados de la mortalidad media y entre paréntesis se registran los valores extremos obtenidos con el objetivo de dar a conocer el margen de variación de los resulta- dos. Por ejemplo: “Porcentaje de mortalidad = 68% (20% - 90%)”. Los resultados obtenidos se registran en el formulario “Pruebas biológicas en paredes” (ENT-PBP).

• Si la mortalidad de los controles es entre 5% y 20% se corrige la morta- lidad media mediante la Fórmula de Abbott, descrita anteriormente:

% de mortalidad en los mosquitos expuestos - % de mortalidad en los controles x 100 (100 - % de mortalidad en los controles).

• Si la mortalidad de los controles es superior al 20%, la prueba se con- sidera no válida y deberá realizarse nuevamente, previa la investiga- ción y corrección de las causas de la mortalidad en los controles.

Después de la evaluación del efecto residual inicial en viviendas de lo- calidades priorizadas o centinelas, las pruebas subsiguientes para su evaluación o valoración residual se realizan en diferentes puntos, con intervalos de 1, 2, 3 y 4 meses después de la intervención de rociado o hasta que se detecte una mortalidad menor al 80%, bajo las mismas con- diciones ambientales y horarias con el objetivo de conocer la actividad residual del producto.