Efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium en el crecimiento de Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, in vitro

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. AC. IA. Y. TESIS I. BI. O. Q. UI M. IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. RM. “Efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium en el. FA. crecimiento de Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, in vitro.”. DE. Autores:. TE. CA. NEIRA CASANA, Carlos Ivan. BI BL. Asesor:. IO. PEREDA PEÑA, Enrique Adrian. Mg. RENGIFO PENADILLOS, Róger Antonio. Co-Asesora:. Dra. LUJÁN VELÁSQUEZ, Manuela. TRUJILLO – PERÚ. 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A ti, amado Dios, que siempre nos escuchas y nos guías en las circunstancias adversa, en nuestros laberintos y nuestros aciertos, te damos gracias por permitirnos ver realizado un. IC A. paso más de este sueño, perpetuado en éstas hojas hermosas, que han servido para. Q. UI M. exteriorizar nuestros conocimientos, pensamientos, emociones, y sentimientos.. BI. O. A mis padres, Dora y Adriano, por ser un. Y. gran ejemplo en mi vida, brindándome su. Con amor, su hijo Adrian. FA. RM. AC. IA. amor y apoyo siempre.. DE. A mis queridos padres, Rosa y Luis, mis hermanos. CA. Pablo, Ricardo y Noelia, por su sacrifico y apoyo. TE. incondicional, su amor, comprensión y ejemplo de. BI BL. IO. lucha, los amo. Carlos.. En memoria al señor Antonio Morillo Cholan.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. A nuestros maestros que, influyeron con sus lecciones, enseñanzas y experiencias en formarnos como personas de bien y prepararnos para los retos que pone la vida, a cada. IC A. uno de ellos les dedicamos estas páginas de nuestra tesis. UI M. Agradeciendo en especial a nuestro asesor Mg. Roger Rengifo Penadillos, por ser una. O. Q. persona íntegra, con valores, y respeto hacia los demás; por habernos brindado la. Y. BI. oportunidad de realizar esta tesis bajo su dirección y depositar en nosotros su confianza. FA. RM. AC. académicamente sino también personalmente.. IA. desde el primer día. Por guiarnos a lo largo de todo este periodo no solo. DE. A nuestra co-asesora Dra. Manuela Luján Velásquez por su asesoría en la tesis, por. CA. apoyarnos y brindarnos su tiempo incondicional y aconsejarnos en cada paso que damos. BI BL. IO. TE. académica y personalmente.. Los Autores. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores miembros del Jurado Dictaminador:. De conformidad con las Disposiciones Legales y vigentes del Reglamento de Grados y. IC A. Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad nacional de Trujillo,. Q. UI M. sometemos a vuestro elevado criterio el presente informe intitulado:. BI. O. “Efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium en el crecimiento de. RM. AC. IA. Y. Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, in vitro.”. FA. Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva. TE. CA. DE. calificación del presente informe.. BI BL. IO. ----------------------------Neira Casana Carlos Ivan. ---------------------------------Pereda Peña Enrique Adrian. Trujillo, Diciembre 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. Dra. González Siccha Anabel Doris. BI. O. Q. UI M. IC A. PRESIDENTE. MIEMBRO. Dra. Soto Vásquez Marilú Roxana. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. Mg. Rengifo Penadillos Roger Antonio. MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El objetivo de la presente investigación tiene como finalidad determinar el efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium (matico) en el crecimiento de cepas patógenas de Streptococcus pyogenes in vitro y comparar con los discos de sensibilidad de Ciprofloxacino 5 ug , Para ello utilizando el método de Soxhlet se. M IC. A. preparó el extracto de Piper acutifolium. La concentración del extracto etanólico de las. UI. hojas de Piper acutifolium (matico) fue de 22 mg de extracto seco/mL. El ensayo de. O. Q. actividad antimicrobiana se realizó por el método de difusión en agar de Kirby Bauer.. BI. Se empleó el medio de cultivo Agar Mueller-Hinton en donde se inoculó la cepa de. A. Y. trabajo e impregnaron en los discos las cantidades de 0,22mg, 0,44mg y 0,66mg del. AC I. extracto seco de las hojas de Piper acutifolium, obteniendo diámetros promedios de. RM. 8,79 mm, 12,43mm, 15,21 mm, respectivamente. El análisis estadístico realizado. FA. evidencia que existe diferencia significativa entre el efecto de cada cantidad de. DE. extracto seco con un p<0,05. El extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium. TE CA. (matico) posee un efecto de inhibición en el crecimiento bacteriano de Sreptococcus. BI BL IO. pyogenes y que la magnitud de este efecto varia de forma directamente proporcional a la cantidad del extracto seco colocado en los discos. Las cantidades de 0,44mg y 0,66mg de extracto seco producen halos de inhibición mayores que los de 5ug de Ciprofloxacino. Palabras claves: Piper acutifolium, flavonoides, Sreptococcus pyogenes, sensibilidad antimicrobiana, extracto etanólico. i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The objective of the present investigation is to determine the effect of the ethanolic extract of Piper acutifolium (matico) leaves on the growth of pathogenic strains of Streptococcus pyogenes in vitro and compare it with the sensitivity disks of Ciprofloxacin 5 ug. the soxhlet method was prepared the Piper acutifolium extract.. M IC. A. The concentration of the ethanolic extract of the leaves of Piper acutifolium (matico). UI. was 22 mg of dry extract / ml. The antimicrobial activity assay was performed by the. O. Q. agar diffusion method of Kirby Bauer. The Mueller-Hinton agar medium was used to. BI. inoculate the working strain and impregnated the disks with 0.22mg, 0.44mg and. A. Y. 0,66mg of the dry extract of the leaves of Piper acutifolium, obtaining average. AC I. diameters of 8.79 mm, 12.43 mm, 15.21 mm, respectively. The statistical analysis. RM. showed that there is a significant difference between the effect of each dry extract. FA. quantity with p <0.05. The ethanolic extract of Piper acutifolium (matico) leaves has. DE. an inhibitory effect on the bacterial growth of Sreptococcus pyogenes and that the. TE CA. magnitude of this effect varies directly proportional to the amount of dry extract. BI BL IO. placed on the discs. The amounts of 0.44mg and 0.66mg of dry extract produce inhibition halos greater than 5ug of Ciprofloxacin.. Key words: Piper acutifolium, flavonoids, Streptococcus pyogenes, antimicrobial sensitivity, ethanolic extract. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. Resumen……………………………………………………………………………i. IC A. Abstract…………………………………………………………………………….ii. Introducción…………………………………………………………………1. II.. Material y método…………………………………………………….…..... 7. III.. Resultados…………………………………………………………………..14. IV.. Discusión……………………………………………………………………17. V.. Conclusiones………………………………………………………...………22. VI.. Referencias Bibliográficas……………………………………………….....23. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. I.. Anexos…………………………………………………………………………….26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Las infecciones respiratorias agudas (IRAS) se definen como aquellas infecciones del aparato respiratorio, causadas tanto por virus como por bacterias, que tienen una evolución menor a 15 días y que se manifiestan con síntomas relacionados con el aparato respiratorio. IC A. tales como tos, rinorrea, obstrucción nasal, odinofagia, disfonía o dificultad respiratoria,. UI M. acompañados o no de fiebre; siendo la infección respiratoria aguda la primera causa de morbimortalidad en nuestro medio; como también de consulta a los servicios de salud y de. O. Q. internación en menores de cinco años. Dentro de éstas, la faringoamigdalitis aguda ocupa un. IA. Y. BI. lugar importante1.. AC. La faringoamigdalitis aguda (FA) se define como un proceso agudo febril, con inflamación. RM. de las mucosas del área faringoamigdalar, con presencia de eritema, edema, exudados y. FA. úlceras o vesículas. El principal agente bacteriano involucrado en la etiología de la FA es el. DE. Streptococcus pyogenes (estreptococo beta-hemolítico del grupo A de Lancefield o. TE. y constituye la principal causa de FA en la cual los antibióticos están. IO. en adultos,. CA. EBHGA), que es responsable de 15% a 30% de las FA en niños y de 5% a 15% de los casos. BI BL. definitivamente indicados1. El mecanismo de transmisión suele producirse por vía respiratoria a través de las pequeñas gotas de saliva que se expelen al toser, estornudar o simplemente hablar desde una persona infectada a un huésped susceptible. También en algunos casos se han descrito brotes transmitidos por contaminación de alimentos o el agua, como también es posible su propagación a través de las manos. Asimismo es posible contagiarse una faringoamigdalitis estreptocócica a través de tocar las llagas de las infecciones por EBHGA en la piel2.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Debido a que el EBHGA a generado resistencia a las penicilinas, los médicos hoy en día prescriben para esta patología Ciprofloxacino como medicamento para tratar la Faringoamigdalitis, ya que es un Antibiotico de amplio espectro que cubre Bacterias Gram positivas y Gram negativas. Las Quinolonas son agentes totalmente sintéticos bactericidas que inhiben la síntesis del DNA bacteriano. Entran a la célula a través de porinas (canales de agua de la membrana), e. IC A. interfieren con la acción de la DNA girasa bacteriana (topoisomerasa II) formando. UI M. complejos enzimáticos con la misma. Esto ocurre en general para gérmenes Gram negativos.. Q. Para gérmenes Gram-positivos la acción es mayoritariamente a nivel de los complejos de la. BI. O. topoisomerasa tipo IV3.. Y. Dentro de las complicaciones de la faringoalmigdalitis están las complicaciones supurativas. AC. IA. y no supurativas, las primeras ocurren por afectación de las estructuras contiguas a la. RM. infección, o por infección de las zonas de drenaje, en las que destacan el flemón y el absceso. FA. periamigdalino, el absceso retrofaríngeo, la otitis media aguda, la sinusitis, la mastoiditis y. DE. la adenitis cervical supurativa. Dentro de las complicaciones no supurativas destaca la fiebre. CA. reumática aguda y la glomerulonefritis post-estreptocócica, que ocurre tras un periodo de. IO. TE. latencia de unas semanas 4.. BI BL. Dentro del tratamiento farmacológico de la faringoamigdalitis bacteriana, el tratamiento antibiótico consigue una mejoría clínica más rápida;. previene las complicaciones. supurativas; reduce el tiempo de contagio, evitando la transmisión de EBHGA; y se evitan las secuelas no supurativas. La penicilina y la amoxicilina son los antibióticos de elección para el tratamiento de la faringoamigdalitis4. Durante miles de años, la gente en varios continentes han utilizado especies de Piper acutifolium “matico” para una gran variedad de trastornos. El hecho de que este nombre haya sido dado a una planta refleja el valor terapéutico atribuido a la misma. Las propiedades 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. curativas de las plantas se atribuyen a la presencia de un principio activo, el cual produce un efecto; asimismo constituyen un recurso valioso en los sistemas de salud de los países en desarrollo5. La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha estimado que más del 80% de la población mundial utiliza la medicina tradicional para satisfacer sus necesidades de atención primaria de salud y que gran parte de los tratamientos tradicionales implican el uso de extractos de. IC A. plantas o sus principios activos6,7.. UI M. En el trabajo realizado por Rengifo R, Roncal M. se evaluó el efecto de la actividad de los. O. Q. extractos acuoso y crudo de las hojas de Piper angustifolium L. in vitro, demostrándose. Y. BI. actividad antibacteriana sobre dichas bacterias8.. AC. IA. Rengifo R. determinación de la actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de. RM. Piper aduncum sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. El peso de los. FA. extractos clorofórmico, diclorometánico, metanólico y acuoso se determinaron con la. DE. finalidad de cuantificar las concentraciones aplicadas a cada perforación cilíndrica de cada. CA. uno de los cultivos de bacteria que fueron de 0,11878 mg/uL, 0,12842 mg/uL, 0,13694. TE. mg/uL y 0,15653 mg/uL respectivamente. Concluyéndose que el extracto acuoso de Piper. BI BL. IO. aduncum tiene mayor efecto antibacteriano sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes que los extractos metanólico, diclorometánico y clorofórmico de esta especie 12. En el trabajo realizado por Bernal J. Se evaluó el efecto del extracto etanólico de Piper acutifolium sobre la inhibición de Trichophyton rubrum y compararlo con el efecto del ketoconazol a través de un estudio in vitro. Para lo cual los discos se impregnaron con diferentes concentraciones del extracto etanólico (100%, 75%, 50%, 25%, 15%), y se colocaron en placas petri conteniendo cultivos de Trichophyton rubrum. Se concluyó que el extracto etanólico del Piper acutifolium tiene efecto anti fúngico a la concentración de 21 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mg/ml, su sensibilidad disminuye al realizar diluciones. El Ketoconazol a concentración de 60ug/ml tiene efecto antifúngico con una sensibilidad al 71,4%. El extracto etanólico del Piper acutifolium al 100% y el Ketoconazol tuvieron un efecto similar. La dosis mínima inhibitoria de extracto etanólico del Piper acutifolium para la inhibición de Trichophyton rubrum fue igual o mayor a 1,26 mg/dL18. El trabajo realizado por Pintado L, Sanchez M. Determinarón el efecto del extracto etanólico. IC A. de las hojas de Piper acutifolium procedentes de Coina, Distrito de Usquil, en la Oxidación. UI M. de LDL Humano, in vitro. Mediante el cual se prepararon las concentraciones de 0,025g. O. Q. e.s/100mL y 0,031g e.s/100mL, luego de aislar las LDL por el método enzimático Trinder y. BI. el porcentaje de inhibición por el método de TBAR, para lo cual se trabajó con 30 muestras. Y. conformándose un grupo control y dos grupos. IA. sanguíneas de pobladores de Otuzco. AC. problema a la concentración de 0,4% y 0,5% de extracto respectivamente concluyéndose que. RM. el extracto etanólico de hojas de Piper acutifolium “matico” inhibe la oxidación de LDL in. DE. FA. vitro 19.. CA. El trabajo realizado por Sharma K, Evaluaron el efecto antidermatofiticos del Piper sp.. TE. Realizaron estudios antifúngicos in vitro contra Trichophyton mentagrophytes,. BI BL. IO. Trichophyton rubrum, Trichophyton tonsurans y Microsporum gypseum in vitro. Utilizaron Conejillos de Indias en el caso de experimentos in vivo. Los extractos fueron encontrados entre 0,156-1,25 mg / mL. La eficacia de extracto de Piper sp, contra el Trichophyton rubrum tuvo una zona de inhibición promedio de 39,3±0,08 mm a una concentración de 10 mg/mL, una zona de inhibición promedio de 24,5±0,15 a una concentración de 2,5 mg/mL y una zona de inhibición promedio de 18,5±0,15 a una concentración de 1,25 mg/mL20. La especie Piper acutifolium “matico”, es una planta de 4 m de alto, tallos verdes, glabros, los nudos hinchados, hojas con corto peciolo, la superficie escabrosa, aovada, de 15 x 9 cm 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. oblicuamente redondeadas en la base, largamente atenuada en el ápice, glabra; nervadura secundaria mayor, levantada desde la mitad inferior de la vena medial, flores aclamídeas, inflorescencia en espiga apretados o amentos, erecta, hasta 4 mm de grosor y 18 cm de largo, curvada, blanca9. Las hojas, tallos, y raíces: tradicionalmente se utiliza en afecciones respiratorias, contusiones, luxaciones, conjuntivitis, trastornos digestivos, hemostáticos, como. IC A. carminativo, antidiabético, sedante, antihemorroidal; en insomnio, eczemas, malaria, como. UI M. antiinflamatorio ocular y bucal, piel y mucosas, cicatrizante, antiulceroso, también usado en. O. Q. descensos, hemorragias, presentan actividad antifúngica, antioxidante y leishmanicida. Los. BI. flavonoides son la categoría de mayor distribución biológica y estos son considerados como. AC. IA. Y. potentes agentes antioxidantes10,11.. RM. La medicina tradicional le atribuye propiedades variadas. Las hojas en decocción se usan. FA. como cicatrizante en el tratamiento de hemorragias, en lavados antisépticos sobre heridas y. DE. en infusión para evacuar cálculos biliares, para aliviar o curar enfermedades del tracto. CA. respiratorio (antiinflamatorio, expectorante y antitusígeno), en dolencias gastrointestinales. IO BI BL. gárgaras9.. TE. (“empacho”, diarreas agudas o crónicas) y tópicamente en infusión de las hojas para hacer. Debido a la prevalencia de las infecciones respiratorias agudas como la faringoamigdalitis, la cual se viene usando antibióticos que crean una gran resistencia bacteriana, se pretende investigar si el extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium afecta el crecimiento de cepas patógenas de Streptococcus pyogenes y de esta manera darle sustento científico en la sociedad que presenta esta enfermedad, como una alternativa natural. Asimismo educar a la comunidad de escasos recursos económicos con el uso apropiado de las plantas medicinales,. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ya que estas realizan un efecto terapéutico en el organismo y su costo es más accesible a la comunidad. Ante lo cual se plantea el siguiente problema: ¿Cuál es el efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium en el crecimiento de Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, in vitro?. IC A. La hipótesis propuesta:. UI M. El extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium, inhiben el crecimiento de. Q. Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, in vitro.. BI. O. El objetivo general es:. IA. Y.  Determinar el efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium en. RM. AC. el crecimiento de Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, in vitro.. FA. Objetivos específicos:. DE.  Determinar el efecto del extracto etanólico seco de las hojas de Piper acutifolium. TE. CA. a las cantidades de 0,22mg, 0,44mg y 0,66mg en el crecimiento de Streptococcus. IO. pyogenes, ATCC 19615, in vitro.. BI BL.  Comparar el efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium con el de Ciprofloxacino 5ug en el crecimiento de Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, in vitro.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. 2.1. MATERIALES. 2.1.1. Material biológico  Cepa de Streptococcus pyogenes, ATCC 19615, que serán obtenidos de la compañía Remel.. IC A.  1 kg de las hojas de Piper acutifolium obtenidos de la localidad de Coina, Distrito. O. Solvente:. BI. 2.1.2. Q. UI M. de Usquil, Provincia de Otuzco de la Región La Libertad.. Y.  Agua destilada. Medios de cultivo:. FA. 2.1.3. RM. AC. IA.  Etanol 96° GL. DE.  Agar Mueller – Hinton. CA.  Caldo Brain Heart Infusion – (BHI). Fármacos. BI BL. 2.1.4. IO. TE.  Agar Soja tripticasa – (TSA).  Suero fisiológico 0,9 %  Discos de sensibilidad de Ciprofloxacino 5ug.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.5. Material de laboratorio - Material de vidrio De uso común en el Laboratorio de Química-física de la facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo. De uso común en el Laboratorio de Microbiología de la Facultad de. Equipos. O. Q. -. UI M. IC A. Microbiología y Parasitología. Universidad Nacional de Trujillo. IA. Y.  Estufa. (Memmert). BI.  Incubadora. (Precisión-Scientificco). AC.  Equipo Soxlet.(Pyrex). FA. RM.  Autoclave. (Raypa). Otros:. CA. -. DE.  Refrigeradora. (Indurama). TE.  Micropipeta.(Brand). IO.  Balanza analítica.(Sartorious). BI BL.  Cocina. (Lizet)  Calculadora. (Casio)  Cámara digital. (Sony). 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2. MÉTODO . Diseño experimental. B. B. C1. C1. P1. UI M. P1. Q. 0,22mg e.s.. O. 0,44mg e.s. P2. IA. Y. BI. P2. IC A. Diseño clásico con grupo, Blanco, control y problemas, estímulo creciente. 0,66mg e.s.. P3. DE. FA. RM. AC. P3. CA. B: etanol 96% GL.. IO. TE. C1: Discos de Sensibilidad de Ciprofloxacino 5ug.. BI BL. P1: 0,22mg extracto etanólico seco de las hojas de Piper acutifolium “matico” P2: 0,44mg extracto etanólico seco de las hojas de Piper acutifolium “matico” P3: 0,66mg extracto etanólico seco de las hojas de Piper acutifolium “matico”. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3 Recolección de la muestra Las hojas de Piper acutifolium se recolectó en la localidad de Coina como distrito de Usquil, provincia de Otuzco, Región la Libertad. 7° 48' 55.6" Latitud Sur, 78° 25' 0.5" Longitud Oeste, Altitud 3 040 msnm, para su uso correspondiente. 2.4 Selección de la muestra El material adquirido fue transportado al laboratorio de Fisicoquímica de la Facultad de. IC A. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se eliminó las. UI M. sustancias extrañas presentes en el material vegetal.. BI. O. Q. 2.5 Identificación Taxómica de la especie. Y. Un ejemplar de la planta fue llevado al Herbarium Truxillense (HUT) para su identificación. AC. IA. taxonómica según el sistema filogenético de la especie y fue depositada en el herbario con. FA. RM. el código: 59208. (ANEXO 1).. DE. 2.6 Lavado de la droga12.. CA. Luego de la separación de las sustancias extrañas, se procedió a lavar el material vegetal con. IO. BI BL. 2.7 Secado. TE. agua potable a chorro y después con agua destilada.. Después de lavar la muestra se procedió a secar en un tiempo total comprendido entre 1 – 2 semanas, hasta que la humedad final de la muestra no varíe en más 5%- 10%.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.8 Molienda La muestra seca fue molida utilizando un mortero, posteriormente para obtener un tamaño uniforme de partículas se tamizó con un tamiz N0 0,75, el polvo obtenido fue almacenado en un frasco de vidrio de color ambar. 2.9 Obtención del extracto etanólico por el Método de Soxhlet. IC A. La extracción fue realizada por el método de Soxhlet, se colocó el cartucho de papel filtro. UI M. con 20 g de la especie desecada y cantidad suficiente de arena lavada en la cámara, en un. O. con una manta eléctrica; la extracción se realizó hasta. BI. Se controló la temperatura. Q. balón de 250 mL de capacidad, agregándose 250 mL de etanol de 96O GL como disolvente.. IA. Y. agotamiento de la muestra. El extracto etanólico se mantuvo a temperatura ambiente durante. AC. una hora aproximadamente, concentrándose posteriormente a un cuarto de su volumen en. RM. un baño maría a 50 °C, luego se colocó en una estufa a 50°C hasta que el peso no varía en. DE. FA. más de 0, 2g, obteniéndose 220 mg de extracto seco.. TE. CA. 2.10 Ensayo de actividad antimicrobiana por el método de difusión de Kirby Bauer13.. IO. Este método se fundamenta en la difusión de un antibiótico o extracto a través de una capa. BI BL. de agar sólido, en una extensión tal que, el crecimiento del microorganismo sensible es inhibido alrededor de la zona que contiene una concentración o dosis conocida, del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium. .. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.10.1. Reactivación de la Cepa ATCC 19615. Para este estudio se utilizó cultivo liofilizado de la cepa de Streptococcus pyogenes ATCC 19615. La reactivación se realizó sembrando el cultivo liofilizado en tubo con 5 mL de Caldo Brain Heart Infusion (BHI) o Cerebro Corazón Infusión, luego se incubó a 37°C por 24 – 48 horas en condiciones de microaerofilia. Posteriormente se eligió una colonia. IC A. compatible con Streptococcus pyogenes para realizar coloración Gram.A partir de una. UI M. colonia se sembró en caldo BHI y en Agar Tripticasa Soya (TSA), y se conservó hasta su. Preparación de los discos y aplicación de volúmenes con el extracto etanólico.. Y. 2.10.2. BI. O. Q. posterior utilización.. AC. IA. Con los 220 mg obtenidos de extracto seco de las hojas de Piper acutifolium, se preparó 10. RM. mL de solución de concentración 2,2% p/v usando como solvente etanol de 96% GL, de. FA. este sistema se midieron volúmenes de 10, 20 y 30 μL y se colocaron en discos de papel. TE. CA. DE. Watman No 12 que fueron previamente esterilizados.. BI BL. pyogenes.. IO. 2.11 Evaluacion del efecto del extracto etanólico sobre el crecimiento de Streptococcus. 2.11.1 Preparación del Inóculo Empleando 5 ml de solución salina estéril, se realizó suspensiones de la cepa hasta alcanzar la densidad bacteriana similar a una turbidez equivalente al tubo Nº 0,5 del Nefelómetro de Mc-Farland (1,5 x 10 8 bacterias por ml).. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.11.2 Siembra en las placas de Streptococcus pyogenes. Utilizando una pipeta estéril, se vertió 2 mL del inóculo sobre la superficie de las placas con agar Agar Mueller - Hinton, donde se dejó deslizar sobre la superficie y se retiro el exceso. Seguidamente se llevó a secar a la estufa por 15 minutos aproximadamente. 2.11.3 Colocación de los discos de sensibilidad en los cultivos de Streptococcus. IC A. pyogenes.. UI M. En la superficie de las mismas placas se colocó los discos de sensibilidad conteniendo las. Q. diferentes cantidades de extracto etanólico y de ciprofloxacino. Todos los cultivos se. Y. BI. O. incubaron a 37ºC por 24 horas mediante microaerofilia 5-10 % CO2.. RM. AC. IA. 2.11.4 Medición de los Diámetros de Inhibición del Crecimiento Bacteriano. FA. Pasado el tiempo de incubación de realizó la medición de los diámetros de los halos o. DE. “zonas” de inhibición de crecimiento de Streptococcus pyogenes, obtenidos para cada. CA. concentración del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium y para el disco del. IO. TE. antibiótico. Los resultados fueron expresados como diámetro (mm) del halo de inhibición.. BI BL. 2.12 Evaluación Estadística Se usó el programa de Statistical Package for the Social Sciences (SPSS) ver. 22.0; todos los datos obtenidos fueron expresados como la media, desviación estándar y sometida al análisis de varianza (ANOVA) para determinar si hay diferencia intra e inter grupos problema; se consideró un valor de p<0,05 para establecer significancia estadística.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESULTADOS. IC. A. III.. UI. M. Tabla 01: Efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium sobre el crecimiento de Sreptococcus pyogenes, in vitro.. BI. O. Q. Bacteria gram positiva Sreptococcus pyogenes. Diámetro de halo de Inhibición (mm). Promedio(mm)±DS. AC IA. Y. Volumen ( µL ). 9. 9. 8. 10. 9. 10. 9. 9. 8. 8. 8. 8. 9. 9. 8,79±0,699. 20. 12. 13. 12. 12. 12. 13. 12. 14. 13. 12. 12. 13. 12. 12. 12,43±0,646. 30. 14. 15. 17. 14. 15. 16. 15. 14. 16. 15. 16. 15. 15,21±0,893. TE CA. DE. FA RM. 10. 16. BI B. LI O. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IC. A. Tabla 02: Diámetro promedio de los halos de inhibición de crecimiento bacteriano de Sreptococcus pyogenes en el Blanco (Alcohol 96% GL) y. BI. O. Q. UI. M. grupo patrón (Disco de sensibilidad de Ciprofloxacino 5ug).. AC IA. Y. Diámetro promedio del Halo de Inhibición (mm) en el crecimiento de Sreptococcus pyogenes. DE. FA RM. ATCC 19615.. Blanco (Alcohol 96% GL). TE CA. Grupo 1. BI B. 3. LI O. 2. PROMEDIO. Ciprofloxacino 5ug. 0. 11. 0. 11. 0. 11. 0. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 03: Comparación del promedio de los halos de inhibición del crecimiento bacteriano de Sreptococcus pyogenes ATCC 19615, en el Blanco. IC. A. (Alcohol 96% GL); grupo patrón (Disco de sensibilidad de Ciprofloxacino 5ug), y grupo problema (extracto etanólico de Piper acutifolium).. Q. UI. M. Comparación del promedio del halo de Inhibición (mm) en el crecimiento de Sreptococcus. Ciprofloxacino 5ug. Grupo de placas. Extracto etanólico. n= 14. Promedio(mm). 11. P1. 8,79±0,699. 11. P2. 12,43±0,646. 11. P3. 15,21±0,893. Y. Blanco (Alcohol 96% GL). 2. 0. 3. 0. LI O. 0. 11. BI B. PROMEDIO. DE. 0. TE CA. 1. FA RM. AC IA. Grupo. BI. O. pyogenes ATCC 19615.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. 12,14±2,62.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. Piper acutifolium es una especie vegetal que pertenece a la familia de las Piperaceae. Es una familia de 2 000 o más especies, donde la mayoría se agrupa en los géneros Piper y Peperonia, En el Perú crece en las tres regiones Costa, Sierra y Selva, de 0 a 3000 m. de. IC A. altitud14.. UI M. La medicina tradicional le atribuye propiedades variadas. Las hojas en infusión, para aliviar. O. Q. o curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio, expectorante y antitusígeno)9.. Y. BI. El antibiograma disco-placa consiste en depositar, en la superficie de agar de una placa de. IA. petri previamente inoculada con el microorganismo, discos de papel secante impregnado con. RM. AC. el extracto y antibiótico. Tan pronto el disco impregnado de extracto y antibiótico se pone. FA. en contacto con la superficie húmeda del agar, el extracto y antibiótico difunde al agar. El. DE. extracto y antibiótico difunde radialmente a través del espesor del agar a partir del disco. CA. formándose un gradiente de concentración. Transcurridas 24-48 horas de incubación los. TE. discos aparecen rodeados por una zona de inhibición, el tamaño del cual se considera como. BI BL. IO. poder inhibidor del extracto y antibiótico contra el crecimiento bacteriano15. Se determinó la concentración del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium siendo esta de 22 mg/mL de extracto seco. Por lo que 10 uL de extracto etanólico equivalen a 0, 22 mg de extracto seco, 20 uL equivale a 0,44 mg de extracto seco y 30 uL equivale a 0,66 mg de extracto seco. En la tabla 1, se observa que el extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium presenta un efecto de inhibición del crecimiento bacteriano obteniéndose promedios de halos de inhibición de 8,79 mm; 12,43 mm; 15,21 mm, correspondientes a las cantidades de 0,22mg,. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 0,44mg y 0,66mg de extracto seco respectivamente. El efecto de inhibición del crecimiento bacteriano de Streptococcus pyogenes se incrementa a medida que se incrementa la cantidad del extracto seco. Contiene datos del análisis mediante la prueba de ANOVA(Anexo 03) en cuanto al efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium a 0,22mg, 0,44mg y 0,66mg de extracto seco; según el diámetro de halos de inhibición de crecimiento de Streptococcus. IC A. pyogenes, se observa un p< 0,05 (0,000) indicando que existe diferencia estadística. UI M. significativa en los efectos de los grupos problema de estudio, esto significa que todos los. BI. O. Q. grupos experimentales son estadísticamente comparables entre sí.. Y. Al realizar comparaciones múltiples POS HOC TESTS (Anexo 04) se encontró que existen. AC. IA. diferencias estadísticas que se generan entre los halos la inhibición del crecimiento. RM. bacteriano.. FA. En la tabla N° 2, sobre el diámetro promedio de los halos de inhibición de crecimiento. DE. bacteriano de Sreptococcus pyogenes en el grupo patrón: Disco de sensibilidad de. CA. Ciprofloxacino 5ug y Blanco: Alcohol 96% GL; se evidea que el grupo blanco (alcohol 96%. IO. TE. GL) no posee ningún efecto antibacteriano sobre el crecimiento de Sreptococcus pyogenes.. BI BL. En los discos de sensibilidad de Ciprofloxacino 5ug, se evidencio halo de inhibición del crecimiento bacteriano de Sreptococcus pyogenes dando un promedio de: 11mm lo que demuestra la resistencia de la bacteria frente a la acción del grupo de las Quinolonas, demostrándose que de esta manera Ciprofloxacino 5ug no poseería efecto microbiológico frente a infecciones respiratorias causadas por Sreptococcus pyogenes.(ANEXO 6) Tabla 3, al comparar los promedios de los halos de inhibición del crecimiento bacteriano de Sreptococcus pyogenes. ATCC 19615, en el grupo patrón (Disco de sensibilidad de. Ciprofloxacino 5ug), Blanco (Alcohol 96% GL) y grupo problema (extracto etanólico de 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Piper acutifolium), se puede observar que a cantidades mayores de 0,44mg de extracto seco presenta un mayor halo de inhibición del crecimiento bacteriano que el producido por ciprofloxacino de 5ug y blanco (etanol 96% GL). Por consiguiente decimos que las cantidades colocadas en los discos de 0,44mg y 0,66mg producen halo de inhibición mayores que los de 5ug de Ciprofloxacino. Quevedo E. evaluó el efecto del extracto de las hojas de la Piper sp, frente a las cepas. IC A. Staphylococcus aureus y Klebsiella pneumoniae in vitro, el cual utilizo las cantidades de. UI M. extracto etanòlico que fueron de 25 uL, 30 uL, 35 uL y 40 uL y de extracto hexànico y acuoso. Q. que fueron de 20 uL, 25 uL y 30 uL. Concluyéndose que el extracto etanólico mostro mayor. Klebsiella pneumoniae. Respectivamente a demás se demostró que a mayor. Y. para. BI. O. halo de inhibición que el extracto hexánico y acuoso para Staphylococcus aureus y negativo. siendo el. AC. IA. concentración de los extractos el efecto antibacteriano es mayor. aplicar. cantidades. de. mayor. concentración. del. extracto. acuoso. sobre. DE. Al. FA. RM. Staphylococcus aureus el más sensible16.. CA. Staphylococcus aureus y Klebsiella pneumoniae se observa según Quevedo que a mayor. TE. concentración ( 20 uL, 25 uL y 30 uL) es mayor el efecto antibacteriano por consiguiente. IO. decimos que al comparar con las cantidades trabajadas 0,44mg (20 uL) y 0,66mg (30 uL) en. BI BL. Streptococcus pyogenes y al aplicar el extracto etanólico se demuestra al igual que Quevedo que el efecto va aumentar según vaya aumentando la concentración por consiguiente el halo de inhibición va a ser mucho mayor. Valle B, Yanac R. evaluaron el efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas de Piper aduncun, frente a la cepa de Candida albicans in vitro. Concluyendo que el extracto hidroalcohólico de las hojas de la Piper aduncun inhibe el crecimiento de Candida albicans in vitro, y que la magnitud de este efecto varia de forma directamente proporcional a la concentración. de 13,6mg/dL, 27,2mg/dL, 40 mg/dL y 55,4mg/dL del extracto 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. hidroalcohólico el cual se expresó como diámetro del halo de inhibición del crecimiento bacteriano. cuyos. promedios. fueron. de. 7mm(13,6mg/dL),. 8,4mm(27,2mg/dL),10,2mm(40,8mg/dL), 13,8mm(54,4mg/dL) 17. Según Valle y Yanac demuestran que al aplicar concentraciones del extracto hidroalcohólico mayores a 13,6mg/dL (10 uL) la actividad frente a la cepa de Candida albicans in vitro va a generar mayor halo de inhibición por ello al agregar 0,44mg (10 uL) de extracto etanólico. IC A. en la cepa Streptococcus pyogenes demostraríamos al igual que Valle y Yanac que a partir. UI M. de esta concentración de extracto seco el efecto varia de forma directamente proporcional a. BI. O. Q. la concentración y su halo de inhibición por consiguiente será mayor.. Y. Rengifo R. evaluó la actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper. AC. IA. aduncum sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. El peso de los extractos. RM. clorofórmico, diclorometánico, metanólico y acuoso se determinaron con la finalidad de. FA. cuantificar las concentraciones aplicadas a cada perforación cilíndrica de cada uno de los. DE. cultivos de bacteria que fueron de 0,11878 mg/uL (10 uL), 0,12842 mg/uL (20 uL), 0,13694. CA. mg/uL (30 uL) y 0,15653 mg/uL (40 uL) respectivamente. Concluyéndose que el extracto. TE. acuoso de Piper aduncum tiene mayor efecto antibacteriano sobre Staphylococcus aureus y. esta especie12.. BI BL. IO. Streptococcus pyogenes que los extractos metanólico, diclorometánico y clorofórmico de. El estudio de Rengifo R, demuestra que al agregar en cada pocillo una cantidad de 0,11878 mg/uL(10uL) y conforme se va aumentando la concentración el efecto antibacteriano en el extracto acuoso es mayor sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes y que al comparar este solo con el extracto etanolico se asemeja el halo de inhibición es decir cuando utilizamos extracto etanolico o acuoso el halo generado va a ejercer el efecto antibacteriano. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. y por consiguiente van a depender de la concentración o cantidad adecuada utilizada por el autor adecuándola a su método de trabajo. El efecto de estas especies en estos organismos in vivo no se puede predecir a partir de estos estudios. Las pruebas de sensibilidad, utilizando el tamaño de la zona de inhibición para indicar la actividad antibacteriana es relativa. La zona se puede ver afectada por la solubilidad y la velocidad de difusión en un medio de agar o su volatilización; y por lo tanto. UI M. IC A. los resultados podrían verse afectados.. En este sentido existe una necesidad de estudios científicos detallados para las prácticas. BI. O. Q. médicas tradicionales para garantizar un efecto terapéutico adecuado de algunas plantas y. Y. que conserven sus propiedades y metabolitos activos de esta manera la inhibición del. AC. IA. crecimiento bacteriano se le ha tribuido a los flavonoides ya que estos se encuentran en. RM. mayor cantidad, sin embargo los metabolitos activos varían incluso dentro de la misma. FA. especie según diferentes condiciones a las que se exponga por lo que no podemos atribuir la. DE. actividad biológica a una molécula en especial, si no al extracto como tal, ya que es posible. BI BL. IO. TE. CA. que ocurran efectos sinérgicos entre sus componentes.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. 1. El extracto etanólico seco de las hojas de Piper acutifolium “matico” a las cantidades de 0,22mg, 0,44mg y 0,66mg producen inhibición del crecimiento bacteriano de Sreptococcus pyogenes ATCC19615 in vitro. 2. El efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium a las. IC A. cantidades de 0,44mg y 0,66mg de extracto seco; presenta mayor efecto de. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. Sreptococcus pyogenes ATCC19615 in vitro.. UI M. inhibición en comparación al ciprofloxaciono de 5µg; frente a la cepa. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI. 1.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. Ministerio de Salud de la Nación. Abordaje integral de las infeccione respiratorias agudas. Guias-med_abordaje ira_int_2da ed.2011. [fecha de acceso: 01 de agosto del 2017]. Disponible en: http://www.msal.gov.ar/images/stories/epidemiologia/pdf/enfresp-guia.pdf.. 2.. Alvez F, Sánchez J. Faringoamigdalitis Aguda. Protocolos diagnostico-terapéuticos de. IC A. la AEP: Infectología Pediátrica. 2002. [Fecha de acceso: 3 de agosto del 2017].. Q. Boswell F, Wise R. Advances in the macrolide and quinolones. Infectious. Disease. BI. O. 3.. UI M. Disponible en:http://www.aeped.es/sites/default/files/documentos/faringoamigdalitis.. IA. Cots J, Alós J, Bárcena M, Boleda X, Cañada J, Gómez N, et al. Guía clínica para el. AC. 4.. Y. Clinics of North America 12(3): 647-668.1998.. RM. manejo de la faringoamigdalitis aguda del adulto. Sociedad española de Farmacia. FA. Familiar y Comunitaria. 7(1): 21-26. 2015. [Fecha de acceso: 5 de agosto del 2017].. Cañigueral S, Vila R, Wicht M. Plantas medicinales y drogas vegetales para infusión y. CA. 5.. DE. Disponible en: doi:10.5672/FC.2173-9218.(2015/Vol1).001.04. IO. Kirtikar K, Basu B. Indian Medicinal Plants. Vol III; 1993. [fecha de acceso: 06 de. BI BL. 6.. TE. tisana. Milan. Ed.OEMF Internacional. p.467-72.1998.. agosto del 2017]. Disponible en: htt//riull.ull.s-xmlui/bitstream/juan%20carlos%20tic. 7.. Jacobson M, Crosby D. Naturally Ocurring Insecticides (Marcel Dekker). Pp: 144, 226.1971.[fecha. de. acceso:07. de. agosto. del. 2017].disponible. en:. htt//tesis.bbtk.ull.es/ccpp. 8.. Rengifo R, Roncal M. efecto de la actividad de los extractos acuoso y crudo de las hojas de Piper angustifolium L. in vitro.1991. [Tesis]. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 9.. Cruz P. Elaboración y control de calidad del gel antimicótico de Manzanilla (Matricaria Chamomilla), Matico (Aristiguietia Glutinosa) y Marco (Ambrosia Arborescens) Para NEO- Fàrmaco. [Tesis]. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Escuela Superior Politécnica del Chimborazo. Ecuador.2009. [Fecha de acces:08 de agosto del 2017]. Disponible en: http//dspace.espoch.edu.ec.bitstream/218/1/56t00192.. 10. Flores E, Jimenez A, Ravelo A, Bourdy G, Gimenez A, Estudio Fitoquimico de catorce. IC A. especiales del Genero Piper con actividad antifúngica y/o Leishmanicida in vitro.. UI M. Biofarbo. 8(8):9-16, dic. 2000. [Fecha de acceso: 9 de agosto del 2017]. Disponible en:. Q. http://.ops.org.bo/textocompleto/rnbiofa20000802.pdf.. BI. O. 11. Flores N, Jimenez I, Gimenez A, Ruiz G, Gutierrez D, Genevieve B, and Isabel L,. Y. Bazzocch. Benzoic Acid Derivatives from Piper Species and Their Antiparasitic Chemical. Society. IA. American. and. American. Society. of. AC. Activity.. RM. PharmacognosyPublished. 71(9): 1538-1543. 2008. [Fecha de acceso: 9 de agosto del. FA. 2017]. Disponible en: htt:// scihub.io/10.1021/np800104p.. DE. 12. Rengifo P. Determinación de la actividad antibacteriana, in vitro de los extractos de hoja. CA. de Piper aduncum sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. 2009.. IO. TE. [Tesis]. Universidad Nacional de Trujillo escuela de postgrado.seccion: Farmacia y. BI BL. Bioquimica. Mención productos naturales. [Fecha de acceso: 11 de agosto del 2017]. Disponible. en:. http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/7723/Tesis%20Maestr%C3%A DaX%20%20Roger%20A.%20Rengifo%20Penadillos.pdf?sequence=1&isAllowed=y 13. Collins, C. Métodos Microbiológico. España, ED. Acribia S.A; p. 203, 374-376. 1989. 14. Rocío Córdova M. Centro nacional de salud intercultural (censi). Bol - Inst Nac Salud 12 (9-10): 279. 2006. [Fecha de acceso: 9 de agosto del 2017]. Disponible en:. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. http://repositorio.ins.gob.pe/bitstream/handle/INS/685/Boletin-2006-set-oct-279280.pdf?sequence=1&isAllowed=y 15. Garcia Rodriguez. J. Procedimientos en Microbiología Clínica. Metodos básicos para el estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos. 2000. [Fecha de acceso: 10 de agostodel2017].disponible. en. :https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiolog. IC A. ia/seimc-procedimientomicrobiologia11.pdf. UI M. 16. Quevedo E. Efecto antibacteriano de los extractos de hojas de Piper sp. Frente a las. Q. cepas de staphylococcus aureus y Klebsiella pneumoniae in vitro. 2011. [Tesis].. BI. O. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo.. Y. 17. Valle B, Yanac R. Efecto del extracto hidroalcoholico de las hojas de Piper aduncun. AC. IA. “matico” sobre el crecimiento de Candida albicans in vitro procedentes del distrito de. RM. Otuzco la Libertad. 2014. [Tesis]. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad. FA. Nacional de Trujillo.. DE. 18. Bernal J. Efecto del extracto etanólico de Piper acutifolium sobre la inhibición de. CA. trichophyton rubrum comparado con ketoconazol, estudio in vitro. 2016. [Tesis].. IO. TE. Facultad de Ciencias Médicas. Universidad Cesar Vallejo.. BI BL. 19. Pintado l, Sanchez M. Efecto del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium procedentes de Coina, Distrito de Usquil, en la Oxidación de LDL Humano, in vitro. 2016. [Tesis]. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo. 20. Sharma K, Saikia R, Kotoky L, Kalita J, Das J Evaluation of Antidermatophytic activity of Piper betle, Allamanda cathertica and their combination: an in vitro and in vivo study. International Journal of PharmTech Research. 3(2):644- 651. 2011. [Fecha de acceso: 10. de. agosto. del. 2017].. Disponible. en:. http://sphinxsai.com/vol3.no2/pharm/pharmpdf/PT=06%28644-651%29AJ11.pdf 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ANEXO N°1. Fig 1: Identificación taxonómica según el sistema filogenético de la especie Piper acutifolium. En el Herbarium Truxillense (HUT).. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°2. Tabla 1: Concentración del Extracto Etanólico de las hojas de Piper acutifolium “matico” en mg de Extracto seco /ml 10 ml. Vaso vacío:. 34,677g. Peso del vaso luego del secado:. 34,897g. Cantidad de extracto seco obtenida:. 0,22 g de Extracto seco.. UI M. IC A. Volumen agregado de extracto a la placa:. 0,022 g de extracto seco/ml de Extracto. AC. IA. Y. BI. O. Q. Concentración del extracto etanólico;. RM. Tabla 2: Cantidad de extracto seco de las hojas de Piper acutifolium colocadas en los. DE. FA. discos de sensibilidad.. Extracto etanolico seco. CA. Volumen. 0,22 mg. BI BL. IO. TE. 10 µL. 20 µL. 0,44 mg. 30 µL. 0,66 mg. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 03 Tabla 1: Prueba de ANOVA para los grupos problema 1(10µL), 2(20µL) y 3(30µL) del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium ; según el promedio de los diámetro de halos de inhibición sobre el crecimiento de Sreptococcus pyogenes ATCC 19615.. DESCRIPTIVES: HALO Std.. Std.. 95% Confidence Interval for. Deviation. Error. Mean. Bound. 14. 8,79. ,699. ,187. 8,38. 8. 10. 2. 14. 12,43. ,646. ,173. 12,06. 12,80. 12. 14. 3. 14. 15,21. ,893. ,239. 15,73. 14. 17. Total. 42. 12,14. 13,00. 8. 17. BI. O. 9,19. Y. 1. IA. 14,70 11,28. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. ,426. m. Upper. Bound. 2,764. m. Maximu. UI M. Lower. Minimu. IC A. Mean. Q. N. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AXEXO 04 Tabla 1: Prueba de Pos Hoc para grupos problema del extracto etanólico de las hojas de Piper acutifolium ; según el tratamiento entre grupos problemas sobre el crecimiento. IC A. de Sreptococcus pyogenes ATCC 19615.. Tratami. Difference (I-. Error. iento. ento. 1. 2. -3,643*. ,285. 3. -6,429*. ,285. 1. Y. Bound. ,000. -7,00. -5,85. ,285. ,000. 3,07. 4,22. ,285. ,000. -3,36. -2,21. 6,429*. ,285. ,000. 5,85. 7,00. 2,786*. ,285. ,000. 2,21. 3,36. IA. -3,07. AC. DE CA. Bound. IO BI BL. LEYENDA:. Upper. TE. 2. Lower. -4,22. -2,786*. 1. 95% Confidence Interval. ,000. 3,643*. 3 3. BI. J). Sig.. UI M. Std.. Q. Tratam. 2. Mean. O. (J). FA. LSD. (I). RM. MULTIPLE COMPARISONS- DEPENDENT VARIABLE: HALO. *. The mean difference is significant at the 0.05 level.. 1: 8, 79 mm 2: 12, 43 mm 3: 15, 21 mm. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 05. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. CERTIFICADO DE CALIDAD DE LA CEPA Streptococcus pyogenes ATCC 19615. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 06 Tabla 1: Manual de procedimientos para la prueba de sensibilidad Antimicrobiana por el método de disco difusión. Ministerio de Salud del Perú- Instituto Nacional De. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Salud.2002.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. ANEXO 07. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Fig 1: Dilución de la cepa Streptococcus pyogenes ATCC 19615.. Fig 2: Cultivo de la Cepa en agar Mueller Hinton- Sangre: verificación del crecimiento de la cepa. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Q. Fig 3: Medición del diámetro de los halos de inhibición del grupo blanco y. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. grupo patrón. Fig 4: Medición del diámetro de los halos de inhibición del extracto a volúmenes de 10 uL, 20 uL y 30 uL de extracto seco.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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