Biblioteca de Farmacia y Bioquímica

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA ESCUELA PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

TESIS II:

Características farmacognósticas de las hojas y capacidad antioxidante del extracto acuoso del Piper aduncum (Matico) a diferentes

concentraciones

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTORA:

JAICO CRUZ, Maricarmen Jackelyn

ASESOR:

Dr. VENEGAS CASANOVA, Edmundo Arturo

TRUJILLO – PERÚ 2020

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DEDICATORIA

A Dios Jehová por haberme dado la vida, y la fuerza en los momentos difíciles para llegar a concluir este trabajo de investigación, por darme sabiduría e inteligencia, por la oportunidad de aportar lo aprendido durante nuestra formación profesional y seguir avanzando.

Con mucho amor a mis padres Benito y María, que me dieron la vida y han dado todo el esfuerzo para que día a día sea mejor persona, inculcando en mí valores y apoyándome durante toda mi vida en momentos de tristeza y felicidad.

A mis hermanos Marly, Cristhian y Fabián por su amor, apoyo y paciencia en este largo camino de mi vida.

Y a mi hija Brenda que es mi gran motivo para ser una mejor persona cada día.

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AGRADECIMIENTO

A la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, a los profesores por su exigencia y elevado nivel académico brindado a lo largo de la carrera.

Muy en especial a mi asesor Edmundo Venegas Casanova por su ayuda desinteresada en la ejecución de esta investigación.

A mi familia por apoyarme siempre.

Porque sin su sacrificio y esfuerzos no hubiera tenido la oportunidad de estudiar, de formarme como profesional, por sus buenos deseos, sus sabios consejos, porque inculcaron en mí valores, que me han ayudado a lograr nuestras metas

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PRESENTACIÓN

Señores Miembros Del Jurado Dictaminador:

De conformidad con las disposiciones legales y vigentes del reglamento de grados y títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, someto a vuestro elevado criterio el presente informe de tesis II titulado:

“Características farmacognósticas de las hojas y capacidad antioxidante del extracto acuoso del Piper aduncum a diferentes concentraciones.”

Espero vuestra aprobación y dejo a su criterio la calificación del presente informe.

Trujillo, Setiembre del 2020.

JAICO CRUZ, Maricarmen Jackelyn

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JURADO DICTAMINADOR

Mg. Yuri F. Curo Vallejos Presidente

Dr. Edmundo A. Venegas Casanova Asesor

Dr. Segundo G. Ruiz Reyes Miembro

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RESUMEN

El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo determinar las características farmacognósticas y capacidad antioxidante del extracto acuoso del P. aduncum en diferentes concentraciones. Lo cual tuvo como resultado: materias extrañas 7,8%; humedad residual 8,92%; cenizas totales 11,62%; cenizas solubles en agua 5,14%; cenizas insolubles en ácido clorhídrico 3,4%; sustancias solubles con 70°GL 27,23%; sustancias solubles con agua 21.62% y sólidos totales 6.3mg/mL. Para el tamizaje fitoquímico se realizó usando reactivos de coloración y precipitación encontrando en el extracto acuoso como metabolitos secundarios alcaloides, fenoles, flavonoides, azúcares reductores, saponinas, taninos. Para la evaluación de la capacidad antioxidante se realizó por el método del 2, 2-Difenil-i- Picrilhidrazilo (DPPH^•) en diferentes concentraciones obteniéndose que a 1% fue 16,95±0,94 mg de Trolox/g de muestra seca, 3% fue 28,41±0,30 mg de Trolox/g de muestra seca y 5%

fue 31,67±0,60 mg de Trolox/g de muestra seca. A la cual llegamos a la conclusión que el P.

aduncum presenta características farmacognósticas y que en el extracto acuoso al 5%

presenta mayor capacidad antioxidante.

Palabras clave: Piper aduncum, marcha fitoquímico, capacidad antioxidante

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ABSTRACT

The present research work aimed to determine the pharmacognostic characteristics and antioxidant capacity of the aqueous extract of P. aduncum in different concentrations. Which resulted in: foreign matter 7.8%; residual humidity 8.92%; total ash 11.62%; water soluble ash 5.14%; ash insoluble in hydrochloric acid 3.4%; soluble substances with 70 ° GL 27.23%;

substances soluble with water 21.62% and total solids 6.3mg / mL. For the phytochemical screening, it was carried out using staining and precipitation reagents, finding alkaloids, phenols, flavonoids, reducing sugars, saponins, tannins as secondary metabolites. For the evaluation of the antioxidant capacity, the 2, 2-Diphenyl-i-Picrylhydrazyl (DPPH •) method was carried out in different concentrations, obtaining that at 1% it was 16.95 ± 0.94 mg of Trolox / g of dry sample, 3% was 28.41 ± 0.30 mg of Trolox / g of dry sample and 5% was 31.67 ± 0.60 mg of Trolox / g of dry sample. To which we reached the conclusion that P.

aduncum has pharmacognostic characteristics and that in the 5% aqueous extract it has a higher antioxidant capacity.

Keywords: Piper aduncum, phytochemical gait, antioxidant capacity

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ÍNDICE

Pág.

Dedicatoria…..…………...………..…………...………..…………...……..………..i

Agradecimiento…..…………...………..…………...………..…………...……..…………..ii

PRESENTACIÓN…..…………...………..…………...………..…………...……..………iii

JURADO DICTAMINADOR…..…………...………..…………...………..……….……...iv

RESUMEN…..…………...………..…………...………..………..…………...……….v

ABSTRACT…..…………...………..…………..…………...………..…………...………..vi

I. INTRODUCCIÓN…..…………...………..………...………..…………...…...1

II. MATERIAL Y MÉTODO…..………...………..…………...………..………...5

III. RESULTADOS……….………..…………...…………....…………....15

IV. DISCUSIÓN………..…………...………....……….19

V. CONCLUSIÓN……….………...………....……….23

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ………..……...………24 ANEXOS

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I. INTRODUCCIÓN

A lo largo de toda la evolución, el ser humano ha empleado plantas medicinales y preparaciones a base de ellas, adquiriendo conocimientos terapéuticos de las plantas mediante la observación, lo cual poco a poco fue transmitiendo y perfeccionándose durante diferentes generaciones haciéndose parte del legado de cada cultura, denominándose medicina tradicional¹.

La medicina tradicional es un elemento cultural con profundas raíces en todas las civilizaciones. Según la Organización Mundial de la Salud, entre 66 y 85% de la población del planeta recurre a las plantas medicinales para curar, aliviar y prevenir diversos dolores y enfermedades².

En la actualidad, el auge y diagnóstico de nuevas enfermedades, el limitado acceso a medicamentos, contribuye al retorno del uso de plantas medicinales y de productos fitoterapéuticos. El Perú por sus condiciones climáticas ha permitido el desarrollo de una flora megadiversa; hoy día las aplicaciones terapéuticas, nutritivas y ornamentales se aplican en la medicina tradicional cobrando importancia ecológica y respeto con el medio ambiente que nos brinda¹.

Así que existen muchas especies de plantas que poseen gran valor medicinal, entre las plantas medicinales que tiene el hombre en la naturaleza se encuentra el Piper aduncum o matico que pertenece a la familia Piperaceae. Las Piperaceaes son hierbas terrestres o epífitas; o arbustos, raramente bejucos o árboles pequeños. Hermafroditas, monoicos, polígamos o dioicos. Tallos con nudos abultados y flores en espigas flexibles. Las hojas contienen células secretoras, visibles como puntos glandulares, ricas en aceites esenciales. Flores diminutas, bracteadas, el ovario unicelular posee un único óvulo que al desarrollarse da un fruto en baya.

Fruto pequeño, indehiscente; las semillas contienen abundante endospermo y perispermo³. Su distribución es pantropical y subtropical, con mayor concentración y centros de diversidad en el norte de América del Sur, América Central, y en el Viejo Mundo Malasia. Se compone de unos 10 géneros y unas 2.000 especies, incluidas fundamentalmente en los géneros Peperomia y Piper. En Cuba, están presentes 4 géneros, en los que se incluyen los mencionados³.

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Piper aduncum es una planta nativa del Perú que también crece en los valles interandinos de Bolivia, Chile, Ecuador, Colombia, México y en el Asia. Es un arbusto perenne de hasta 5 m de alto, que crece en forma silvestre o domesticada en la costa sierra y selva del Perú, hasta los 3000 msnm. En la medicina tradicional peruana, a esta planta se le conoce como "matico",

"hierba del soldado" o "cordoncillo"⁴.

Sus ramas de color verde amarillento ligeramente en zigzag con pelos finos y con articulaciones (nudos) anilladas, recrecidas, las hojas estrechas elípticas, de punta larga y de color verde amarillento, asimétricas en la base, algo ásperas encima, con venas largas laterales, ligeramente curvas, y aromáticas o con olor a especias trituradas, las flores y los frutos diminutos, apiñados en un eje semejante a cordones, curvos y laterales de 34 pulgadas largo y 1/8 pulgadas de diámetro, el sabor y olor a pimienta de las hojas, fruto y semilla³. Los análisis fitoquímicos realizados en esta especie vegetal han informado que sus hojas contienen aceites esenciales, ácido artánico, resinas, sustancias amargas (maticina), taninos, alcaloides, saponinas y flavonoides triterpenoides y, debido a estos componentes posee diversas propiedades que pueden favorecer la respuesta adaptativa en los signos vitales ante los cambios agudos de altura⁵.

Los antioxidantes son captadores de radicales libres y por ello retrasan o inhiben la etapa de iniciación del proceso de oxidación, lo que disminuye la consecuente formación de productos de descomposición volátiles (por ejemplo, aldehídos y cetonas). El potencial antioxidante de los compuestos fenólicos dependerá del número y disposición de los grupos hidroxilo en las moléculas de interés⁶.

Los compuestos fenólicos constituyen una de las principales clases de metabolitos secundarios de las plantas, donde desempeñan diversas funciones fisiológicas. Entre otras, intervienen en el crecimiento y reproducción de las plantas y en procesos defensivos frente a patógenos⁶.

La capacidad antioxidante de un producto alimenticio está determinada por interacciones entre diferentes compuestos con diferentes mecanismos de acción. Esta se evaluó in vitro y puede usarse como un indicador indirecto de la actividad in vivo. La mayoría de los métodos para determinar capacidad antioxidante consisten en acelerar la oxidación en un sistema biológico. Por esto mismo, la determinación de la capacidad antioxidante de extractos

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complejos se lleva a cabo usualmente por diferentes métodos complementarios, que evalúen diversos mecanismos de acción. Los métodos más aplicados son ácido 2,2´-azinobis (3- etilbenzotiazolin)-6-sulfónico (ABTS^•) y 2, 2-Difenil-i-Picrilhidrazilo (DPPH^•), debido a que ambos presentan una excelente estabilidad en ciertas condiciones, aunque también muestran diferencias⁷. Entre las que cabe mencionar, mientras el DPPH^• es un radical libre que puede obtenerse directamente sin una preparación previa, el ABTS^• tiene que ser generado tras una reacción que puede ser química (dióxido de manganeso, persulfato potasio, ABAP), enzimática (peroxidase, mioglobulina), o también electroquímica. Con el ABTS^• se puede medir la actividad de compuestos de naturaleza hidrofílica y lipofílica, el DPPH^• solo puede disolverse en medio orgánico, el DMPD solo en medio acuoso. El radical ABTS^• tiene además la ventaja de que su aspecto presenta máximos de absorbancia a 414, 654, 754 y 815nm en medio alcohólico; el DPPH^• presenta un pico de absorbancias a 515nm, y el DMPD a 505nm⁸.

Un extracto es una sustancia obtenida por extracción de una parte de una materia prima, a menudo usando un solvente como etanol o agua. Sus caracteres de un extracto bien preparadas deben tener un color gris o café; nunca deben ser negros. En general, los extractos son siempre" solubles en el vehículo que ha servido para prepararlos. Los extractos alcohólicos de hojas tienen la propiedad de comunicar al éter una coloración verde intensa, lo que no hacen los acuosos correspondientes. En cuanto a las reacciones químicas, varían con el extracto considerado. Algunos darán las reacciones de los alcaloides; otros la de los glucósidos, etc⁹.

Hay reportes que indican las características farmacognósticas y la capacidad antioxidante del Piper aduncum. En el año 2015 se publicó la tesis “Determinaciones Fisicoquímicas de las Hojas secas de Piper aduncum (Matico) procedente de la Provincia de San Marcos – Cajamarca 2013”, se encontró que las hojas de Piper aduncum presenta 11,35% ± 0,54 de cenizas totales, 6,24% ± 1,54 de cenizas solubles en agua y 4,95 % ± 0,04 de cenizas insolubles en ácido clorhídrico¹⁰. En otra tesis publicada en el año 2009 con el título

“Elaboración y control de calidad del gel Antimicótico de Manzanilla, Matico y Marco para Neo – Fármaco, se llegó a la conclusión que la planta de Piper aduncum presenta una humedad de 9,80%, cenizas totales de 8,98%, cenizas solubles en agua de 2,92% cenizas insolubles en ácido clorhídrico de 1,17% y un porcentaje de sustancias solubles de 5,92%¹¹. Y en el año 2019 se publica la tesis “Actividad antioxidante y determinación de fenoles de

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extractos de matico (Piper sp.) en diferentes altitudes del distrito de Levanto, Amazonas”, que tuvo como objetivo determinar la actividad antioxidante y fenoles de extractos de máticos (acuoso, etanólico y metanólico) en diferentes altitudes del distrito de Levanto, Amazonas¹². En la actualidad existe un interés creciente en la medicina alternativa para la cura de numerosos padecimientos y enfermedades que afectan a los seres humanos, por lo que las investigaciones que tengan como objetivo el cultivo, estudio y procesamiento de plantas medicinales con fines terapéuticos se consideran estratégicas e importantes. Son pocas las investigaciones en el uso y manejo de las plantas medicinales, y, por tanto, he aquí, la importancia de analizar sus características farmacognósticas y su capacidad antioxidante, puesto que de ser así podrían establecer sistemas en donde esta planta pueda ser cultivada por los pobladores, para una mejora en su utilidad, reconocer sus propiedades medicinales, aprovechar sus propiedades nutricionales y mejorar en el desarrollo económico del país^13,14. Por lo expuesto anteriormente, se planteó el siguiente problema:

¿Cuáles son las características farmacognósticas y capacidad antioxidante del extracto acuoso del P. aduncum?

Los objetivos fueron:

General:

Determinar las características farmacognósticas y capacidad antioxidante del extracto acuoso del P. aduncum a diferentes concentraciones.

Específicos:

Identificar los metabolitos secundarios por la marcha fitoquímico preliminar del extracto acuoso de las hojas P. aduncum.

Determinar la capacidad antioxidante por el método DPPH^• del extracto acuoso de las hojas P. aduncum.

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II. MATERIALES Y MÉTODOS 2.1. Material:

2.1.1. Material Biológico:

-

Se utilizó 5 Kg de P. aduncum procedente del Jardín Botánico “Bertha Rosa Elena de los Ríos Martínez” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.

2.1.2. Material de Laboratorio:

Material de vidrio:

De uso común en el laboratorio Material Químico:

-

Ácido Clorhídrico 10% Merck

-

Nitrato de plata

-

Reactivos de coloración y precipitación

-

Agua destilada

-

Alcohol etílico 96º Gay Lussac (GL). Merck

-

2, 2-Difenil-i-Picrilhidrazilo (DPPH^•) Otros.

-

^Algodón

-

Papel aluminio

-

Papel filtro libre de cenizas

-

Papel kraft

-

Papel Whatman

-

^Parafilm

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2.2. Método:

2.2.1. Estudio farmacognósticas de las hojas Piper aduncum¹⁵: 1. Recolección de la especie vegetal:

La recolección de la especie vegetal se realizó por el método convencional o clásico de herborización, seleccionando el material de campo y verificando que esté en buenas condiciones.

2. Identificación taxonómica:

Se recolectó la especie vegetal P. aduncum, la cual se llevó al Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación taxonómica.

3. Selección de la droga vegetal:

De la droga vegetal se seleccionó las hojas con el objetivo de realizar una separación de las partes para evitar la mezcla entre sí, y así también se eliminarán residuos orgánicos e inorgánicos.

4. Secado y molienda de la droga vegetal

La droga vegetal seleccionada de P. aduncum fue secada a temperatura ambiente bajo sombra, luego se colocó en bolsas de papel Kraft y se llevó a la estufa a 40 °C durante 48 horas.

La droga desecada se pulverizó y tamizó (hasta tamaño de partícula 2,0 mm) luego se almacenó adecuadamente en frascos ámbar en un lugar sin humedad y sin luz directa.

Determinación de los parámetros de calidad de la especie vegetal a) Características macromorfológicas de las hojas¹⁵:

Se describió las características macroscópicas (vista) que presentan las hojas; tales como: forma, peso, dimensiones (largo y ancho), condición (fresca, completa).

b) Características fisicoquímicas de las hojas de Piper aduncum:

-

Determinación de materias extrañas de la droga vegetal¹⁵:

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Se pesó 5 g de hojas en un vaso precipitado previamente tarado, se retirará manualmente las sustancias extrañas (orgánicas e inorgánicas). Se pesó el material separado y se determinó su porcentaje en base al peso de la muestra ensayo.

El porcentaje de materia extraña se calculó mediante la siguiente formula:

𝑀𝑒 =𝑚

𝑀 𝑥 100(%) Donde:

Me: Materias extrañas

M: masa inicial de la muestra (g) m: Masa de materia extraña (g) 100: Factor matemático

-

Determinación de la humedad residual por gravimetría¹⁵

Se pesó 5g de la droga triturada en una cápsula de porcelana previamente tarada, posteriormente se llevó la muestra a estufa a 105°C de temperatura durante 3 horas;

pasado el tiempo, la cápsula se colocó en el desecador (con silicagel) y se dejó enfriar durante 30 minutos. Se realizó los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por triplicado

%𝐻𝑟 =(𝑃2 − 𝑃1)

(𝑃2 − 𝑃0) 𝑥 100 Donde:

%Hr: Porcentaje de humedad residual P0: Peso de la cápsula vacía (g)

P1: Peso de la capsula + muestra seca (g) P2: Peso de la cápsula + muestra (g) 100: Factor matemático

-

Determinación de cenizas totales por gravimetría¹⁵

Se pesó 5 g de droga vegetal triturada, en un crisol de porcelana previamente tarado, se carbonizó en cocina y luego se incinera en horno mufla a 700°C durante 2 horas, pasado el tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por triplicado.

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𝐶𝑙 =^{(𝑃2−𝑃1)}

(𝑃2−𝑃0) 𝑥 100 𝐶𝑡 =^{𝐶𝑙 𝑥 100}

100−𝐻

Donde:

Ct: Cenizas totales

Cl: Cenizas totales en base hidratada P0: Peso del crisol vacío (g)

P1: Peso del crisol vacío + muestra (g) P2: Peso del crisol vacío + ceniza(g) H: % de humedad

-

Determinación de cenizas solubles en agua¹⁵:

En el crisol previamente tarado con las cenizas totales obtenidas, se añadió 10ml de agua destilada. El crisol se tapó y se hervió suavemente a la llama de una cocina durante 5 min. La solución se filtró a través de papel filtro libre de cenizas. El papel filtro con el residuo fue transferido al crisol inicial, se carbonizó en una cocina y luego se incineró en un horno mufla a 700º C durante 2 horas, pasado el tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por triplicado.

𝐶𝑙 =^{(𝑃2−𝑃1)}

(𝑃3−𝑃0) 𝑥 100 𝐶𝑆𝑎 =^{𝐶𝑙 𝑥 100}

100−𝐻

Donde:

CSa: Cenizas solubles en agua

Cl: Cenizas solubles en agua en base hidratada P0: Peso del crisol vacío (g)

P1: Peso del crisol vacío + cenizas insolubles en agua (g) P2: Peso del crisol vacío + ceniza totales (g)

P3: Peso de crisol con la muestra de ensayo (g) H: % de humedad

-

Determinación de cenizas insolubles en ácido clorhídrico por gravimetría¹⁵: En el crisol previamente tarado con las cenizas totales obtenidas, se añadió 10 ml de ácido clorhídrico al 10%. El crisol se tapó y se hirvió suavemente a la llama de

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una cocina durante 5 min. La solución se filtró a través de papel filtro libre de cenizas, se lavó el residuo con agua destilada caliente hasta eliminar la acidez. El papel filtro con el residuo fue transferido al crisol inicial, se carbonizó en una cocina y luego se incineró en un horno mufla a 700º C durante 2 horas, pasado el tiempo se colocó en el desecador (silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos.

Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizará por triplicado.

𝐶𝑙 =^{(𝑃2−𝑃0)}

(𝑃1−𝑃0) 𝑥 100 𝐶𝑙𝑎 =^{𝐶𝑙 𝑥 100}

100−𝐻

Donde:

Cla: Cenizas insolubles en ácido

Cl: Cenizas insolubles en ácido en base hidratada P0: Peso del crisol vacío (g)

P1: Peso del crisol vacío + muestra (g) P2: Peso del crisol vacío + ceniza (g) H: % de humedad

-

Determinación de sustancias solubles totales¹⁵:

Se realizó la extracción de las sustancias solubles en etanol de 70°GL y agua. Se pesaron 5g de la droga vegetal es un Erlenmeyer de 250 mL; se agregó 100 mL de etanol de 70°Gl y agua respectivamente, se tapó y se agitó durante un tiempo de 6h con agitador magnético, se dejó en reposos 24h. Posteriormente se agitó por 30 min, finalmente se filtró sobre papel Whatman N°1 con ayuda de bomba al vacío se obtuvo extractos traslucidos. Seguidamente se midió una alícuota de 20 mL del extracto, se transfirió a una cápsula de porcelana previamente tarada, se concentró hasta obtener extracto blando, luego se llevó a estufa a 105°C de temperatura durante 3h. Pasado el tiempo se colocó en desecador, donde se dejó enfriar a temperatura ambiente por 30 min, registrándose el peso, volviéndose a repetir el procedimiento anterior por 1h, finalmente se pesó hasta alcanzar masa constante y con dos pesadas sucesivas donde la variación de peso no fue mayor de 0,5 mg. Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por triplicado.

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𝑆𝑆 =𝑅 𝑥 500𝑥 100 𝑀(100 − 𝐻)

Donde:

SS: Sustancias solubles R: Residuo de la muestra M: Masa de la muestra (g) H: Humedad de la muestra 500: Factor matemático 2.2.2. Obtención de extractos

a) Método de reflujo¹⁶:

Se pesó 20 g de droga vegetal y se colocó en un matraz Erlenmeyer de 500mL, se añadió 200 mL. de agua destilada y se llevó a reflujar durante 1h a temperatura de ebullición. Luego se procedió a filtrar con papel filtro y se obtuvo el extracto acuoso.

b) Determinación de la concentración del extracto (sólidos totales)¹⁶:

Del extracto obtenido, se tomó una alícuota de 1mL y se colocó sobre una cápsula previamente tarada, luego fue llevado a estufa a 40° C durante 24 horas. Pasado el tiempo se colocó en el desecador (con silicagel) para dejar enfriar durante 30 minutos. Se realizaron los cálculos por diferencia de pesos. Este procedimiento se realizó por triplicado. Se determinó la concentración en mg/mL.

c) Tamizaje Fitoquímico de las hojas de Piper aduncum¹⁵:

Se siguió el método descrito por Miranda & Cuellar donde cada muestra es sometida a la acción extractiva de solventes de polaridad creciente hexano, etanol y agua, modificando el pH del medio con el fin de obtener los metabolitos secundarios de acuerdo a su solubilidad.

-

Ensayo de Mayer (determinación de alcaloides):

Se midió 1 mL, se agregó 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado, se calentó y se dejó enfriar, se agregó III gotas del reactivo de Mayer. El ensayo se considera positivo cuando precipita en un color blanco a crema.

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-

Ensayo de Wagner (determinación de alcaloides):

Se midió 1 mL, se agregó 2 gotas de ácido clorhídrico concentrado, se calentó y se dejó enfriar, se agregó III gotas del reactivo de Wagner. El ensayo es positivo cuando hay presencia de opalescencia, turbidez definida o precipitada.

-

Ensayo del cloruro férrico (determinación de compuestos fenólicos y/o taninos)

Se tomó 1 ml del extracto fluido y se le añadió acetato de sodio para neutralizar y luego se agregó III gotas de una solución de cloruro férrico al 5%. El ensayo es considerado positivo de la siguiente forma: coloración rojo-vino (compuestos fenólicos), coloración verde intensa (taninos del tipo pirocatecólicos), coloración azul (taninos tipo pirogalotánicos).

-

Ensayo de Shinoda (determinación de flavonoides)

Se diluyó 0.5 mL de extracto fluido con 0.5 mL de ácido clorhídrico concentrado y granallas de magnesio metálico, se esperó 5 minutos se añadió 1mL de alcohol amílico para que ocurra la reacción. El ensayo es considerado positivo cuando se colorea amarilla, naranja, rojizo.

-

Ensayo de Dragendorff (determinación de alcaloides)

Se tomó 1 mL del extracto fluido, y se le agregó 2 gotas de ácido clorhídrico al 1 %, luego se colocó III gotas del reactivo de Dragendorff. El ensayo es positivo cuando precipitó en un color rojo ladrillo refractario o rojo marrón.

-

Ensayo de Ninhidrina (determinación de aminoácidos libres o de aminas) Se tomó 1 mL del extracto fluido, se agregó 2 ml de solución al 2% de ninhidrina;

la mezcla se calentó de 5 a 10 minutos en baño maría. Este ensayo es considerado positivo cuando cambió a un color azul violáceo.

-

Ensayo de Fehling (determinación de azúcares reductores)

En un tubo de ensayo se colocó V gotas del reactivo Fehling A (sulfato cúprico), sobre ella se dejó caer gota a gota el reactivo de Fehling B (contiene tartrato de

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sodio y potasio en solución alcalina) hasta aparecer un precipitado, luego se agregó II gotas más para que ese precipitado desaparezca dando una coloración azulada. El reactivo de Fehling preparado fue mezclado con 1 mL de extracto fluido. El ensayo es positivo si existe la presencia de un precipitado rojo.

-

Ensayo de espuma (determinación de saponinas del tipo esteroidal como triterpénica)

Se agitó el 10mL del extracto fluido fuertemente durante 10 minutos. El ensayo es considerado positivo apareció espuma en la superficie del líquido de más de 2 mm de altura y persiste por más de 2 minutos.

-

Ensayo de gelatina (determinación de taninos)

Se tomó 1 mL del extracto fluido, y se adicionaron III gotas de gelatina. El ensayo es considerado positivo si precipita a un color amarillo claro o ligeramente marrón.

-

Ensayo de Baljet: (determinación de lactonas)

Se tomó 1 mL del extracto y se le añadió 1 mL del reactivo. El ensayo es considerado positivo al observar un color verde-azul o rojizo, el cual nos indica la presencia de Lactonas sesquiterpénicas.

-

Ensayo de Liebermann-Burchard (Determinación de lípidos):

Se midió X gotas del extracto en una cápsula, llevó a sequedad y se agregó X gotas de Anhídrido acético, XX gotas de Ácido Acético y I gota de ácido sulfúrico concentrado.

La reacción es positiva si aparece coloración azul, verde o naranja.

2.2.3. Ensayo de actividad antioxidante¹⁷:

Determinación de actividad antioxidante por el método DPPH:

Fundamento:

El Fundamento del método desarrollado por Brand-Willams et al, DPPH^• adaptado, consiste en que este radical tiene un electrón desapareado y es de color

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azul-violeta, decolorándose hacia amarillo pálido por reacción con una sustancia antioxidante; la absorbancia es medida espectrofotométricamente a 517 nm. La diferencia de absorbancias, permite obtener el porcentaje de captación de radicales libres.

Procedimiento:

Determinación de la capacidad antioxidante del extracto de P. aduncum

Se seguirá el método descrito por Brand Williams et al. con algunas modificaciones, utilizando como radical libre 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH^•).

a) Preparación de la solución etanólica del extracto acuoso de las hojas P.

aduncum.

- Se pesaron 4.2 mg de los cristales equivalente a 1%, 6.7mg de cristales equivalente a 3% y 7.9mg de cristales equivalente a 5%, luego se aforó a 100 ml con etanol de 96° GL. De esta solución se tomaron volúmenes de 1; 2; 3;

4; 5; 6; 7; 8; 9 y 10 mL y aforar a 10 mL con etanol de 96°GL.

b) Preparación del Reactivo: Solución 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH^•).

- Se preparó una solución de DPPH^• con etanol de 96° GL a una concentración de DPPH^• 0,1 mM (39,43 mg/L)

c) Preparación de la curva de calibración de la solución DPPH^•17.

- Se preparó una solución madre de DPPH^• 0,1mM. De esta solución se transvasaron volúmenes de 1; 2; 4; 6; 8; 10; 12 mL a fiolas de 10 mL que fueron aforadas con etanol de 96° GL, para obtener así, los estándares de concentración 0,01; 0.02; 0.04; 0.06; 0,08 y 0.1; 1.2 mM a partir de la solución de DPPH^• 0,1mM, luego se llevó a leer en el espectrofotómetro PERKINELMER a 517nm.

- Primero se determinó la longitud de onda máxima y seguido las lecturas a la longitud de onda obtenida, utilizándose etanol 96° GL como blanco.

Posteriormente se graficó las concentraciones vs absorbancias y se obtuvo la recta de calibración.

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d) Determinación de captura del radical DPPH^•.

- Los resultados se expresaron como valores TEAC (trolox equivalent antioxidant capacity) mediante la construcción de una curva patrón usando como antioxidante TROLOX®.

Análisis estadístico.

Los datos fueron procesados en el programa de Microsoft Excel ® 2016 Caracterizados mediante parámetros estadísticos descriptivos: Media Aritmética (^X ) y Desviación Estándar (σ), ANOVA, así como a un ensayo Tukey con un nivel de significancia de 95%.¹⁷

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III. RESULTADOS:

TABLA 1: Características macromorfológicas de las hojas de P. aduncum:

CARACTERÍSTICAS OBSERVADO

FORMA Oblicuos

TEXTURA Áspera por el envés

COLOR Verde amarillento

DIMENSIONES 19,7cm de largo 8,1cm de ancho

PESO 2,3g

CONDICIÓN Fresca

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TABLA 2: Parámetros fisicoquímicos de las hojas de P. aduncum:

PRUEBAS RESULTADOS (%)

MATERIAS EXTRAÑAS 7,8

HUMEDAD RESIDUAL 8,92

CENIZAS TOTALES 11,62

CENIZAS SOLUBLES EN AGUA 5,14

CENIZAS INSOLUBLES EN ÁCIDO CLORHÍDRICO

3,4

SUSTANCIAS SOLUBLES EN ETANOL 70°GL:

27,23

SUSTANCIAS SOLUBLES EN AGUA 21,62

TABLA 3: Determinación de la concentración del extracto acuoso de las hojas P.

aduncum (Sólidos totales):

PRUEBA RESULTADO (mg/mL)

SÓLIDOS TOTALES 6,3

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TABLA 4: Tamizaje fitoquímico del extracto acuoso de las hojas P. aduncum:

ENSAYO INTENSIDAD RESULTADO

MAYER ++ Alcaloides

WAGNER ++ Alcaloides

CLORURO FÉRRICO ++ Fenólicos

SHINODA ++ Flavonoides

DRAGENDORFF + Alcaloides

NINHIDRINA - Aminoácidos

FEHLING +++ Azucares Reductores

ESPUMA ++ Saponinas

GELATINA ++ Taninos

BALJET - Lactonas

(coumarinas)

LIEBERMANN -

BURCHARD - Lípidos (esteroides)

(-) = Ausencia (+) = Poca cantidad

(++) = Regular cantidad (+++) = Bastante cantidad

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TABLA 5: Evaluación de la capacidad antioxidante en hojas de P. aduncum expresado en mg de Trolox eq/g de muestra seca.

EXTRACTO (%) X̄ σ σ/x̄

1 16,95 0,94 5,58

3 28,41 0,30 1,06

5 31,67 0,60 1,91

X̄: Promedio

σ: Desviación estándar

σ/x̄: Desviación estándar relativa

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IV. DISCUSIÓN

En la TABLA 1 se muestra las características macromorfológicas de las hojas de la especie P. aduncum en la cual se observó que su forma es oblicua, con una textura áspera por el envés, de color verde amarillento, con un peso promedio de 2,3g, estas características se corroboran con lo descrito por Mostacero J. y et al. Esta descripción macromorfológicas del material vegetal es imprescindible para lograr estandarizar la droga; y reconocer fehacientemente la especie vegetal que se trabajó³.

En la TABLA 2 se muestra los parámetros fisicoquímicos donde se obtuvo en materias extrañas 7,8%; lo cual es importante este análisis porque nos ayuda a retirar desechos orgánicos de posibles insectos o aves, así como también del polvo y tierra para así obtener una mejor muestra biológica y poder trabajar con ella como muestra en un estudio científico de Vidaurre M. y et al¹⁴. Respecto a la humedad es un método de secado que se basa en la pérdida de peso de la muestra por evaporación del agua, en este caso se obtuvo 8,92%

encontrándose en los límites establecidos por la Farmacopea (8 - 14%); que nos indica una disminución del agua en este vegetal ya que se sabe que si hay un exceso de agua en una droga este puede provocar ciertos crecimiento microbiano, la presencia de hongos o insectos y el deterioro del vegetal, y si fuera en el caso contrario de un exceso de desecación, éste puede provocar a que se inactive algunas enzimas y compuestos que llegarían afectar los principios activos¹⁸.

Las cenizas totales permiten determinar la cantidad de sustancias inorgánicas presentes en las drogas vegetales, como sales, arena, metales pesados, etc., en este caso se obtuvo 11,62%

si comparamos con la farmacopea (8-11%) observamos que está un poco elevado de los límites permitidos a que puede ser que se dejó más del tiempo indicado en la mufla y esto provocó a que haya una mayor pérdida de cloruros alcalinos o volátiles a altas temperaturas¹⁸. Para la determinación de cenizas solubles en agua, éste está asociado a la determinación de cenizas totales; y con respecto a las cenizas insolubles en ácido clorhídrico nos indica la calidad del vegetal, el porcentaje obtenido de cenizas hidrosolubles fue 5,14% que este se encuentra en el límite permitido por la Farmacopea que es máximo de 7%, que nos quiere decir que si hay una concentración de iones calcio, magnesio, hierro, potasio, etc. a que estos son solubles en agua. Y el porcentaje obtenido de las cenizas insolubles en ácido clorhídrico fue de 3,4% que también se encuentra en el límite permitido por la Farmacopea hasta máximo de 5% que nos muestra presencia sílica, especialmente de arena y tierra silícea¹⁹.

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El análisis de sustancias solubles en agua y alcohol sirve para dirigir el posterior análisis fitoquímico, puesto que, se observa que en las sustancias solubles en alcohol (70°GL) es de 27,23% a comparación del agua que es de 21,62% esto indica que, al encontrar un porcentaje mayor en las sustancias solubles en alcohol, indicará una mayor presencia de metabolitos de polaridad intermedia²⁰.

Con lo mencionado anteriormente se puede corroborar con otros trabajos realizados sobre las características farmacognósticas con esta especie. Abreu et al. (2012) demuestra la importancia que tiene en abordar con la taxonomía. Proaño J. (2013) obtuvo como resultado en humedad 9,85%, cenizas totales 8,95%; cenizas solubles en agua 2,93% y cenizas insolubles en ácido clorhídrico 2,36%. Y por el ultimo López P. (2018) realizó un estudio de las características fisicoquímicas encontrándose una similitud a los resultados obtenidos en este trabajo de investigación^{3, 20,21}.

En la TABLA 3 se muestra la determinación de los Sólidos Totales en el extracto acuoso de las hojas P. aduncum obteniendo 6,3 mg/mL esto hace referencia a los residuos que quedan en la muestra después de su evaporación y su consecutivo secado en la estufa a temperatura definida. Al no encontrar algunas informaciones sobre los sólidos totales de las hojas de P.

aduncum, los resultados obtenidos en esta tabla quedan como referencia para otros trabajos²².

En la TABLA 4 se muestra los metabolitos secundarios presente en el tamizaje fitoquímico del extracto acuoso de las hojas P. aduncum en el cual se encontró alcaloides, fenólicos, flavonoides, azúcares reductores, saponinas, taninos que indica que estos tienen más polaridad con este extracto a diferencia del ensayo del Blajet, Ninhidrina y Liebermann- Burchard que no hubo presencia de las lactonas, aminoácidos y ni esteroides respectivamente ya que este tiene más afinidad en un extracto alcohólico y/o cloroformo.

La presencia de los alcaloides se pudo evidenciar cualitativamente (según su intensidad de la coloración), son solubles en agua, contienen al menos un átomo de nitrógeno en la molécula, y exhiben actividad biológica y posee un nitrógeno heterocíclico procedente del metabolismo de aminoácidos, por eso que, en las reacciones de Mayer, Wagner y Dragendorff dieron positivos^23,24.

La reacción del tricloruro férrico, es un tipo de reacción acido – base de Lewis, teniendo como donador de electrones a los hidroxilos del catecol del tanino, existiendo la formación

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de cargas parciales para la posterior eliminación de átomos de hidrógenos y cloruro hasta llegar a la formación de un complejo de color verde oscuro²⁵.

La reacción de Shinoda (magnesio en ácido clorhídrico) permite distinguir algunos tipos de flavonoides. En esta reacción, el magnesio metálico es oxido por el HCl concentrado, dando como productor al hidrógeno molecular, que es eliminado en forma de gas y el cloruro de magnesio, que es el que forma complejo con los flavonoides dando coloraciones características y en este caso dio como resultado una coloración que va desde el rojo al crimson²⁴.

La ninhidrina empleada para esta determinación, es un reactivo que sometido a la acción de α-aminoácidos y/o aminas primarias, sufre un proceso de desaminación oxidativa, facilitado por el calor, seguida de la formación de una base de Schiff, altamente deslocalizada y muy coloreada (azul – violeta) ²⁴.

El ensayo para azúcares reductores resultó positivo, esto se debe a que dichos azúcares se caracterizan por ser de naturaleza altamente polar, debido al marcado número de grupos funcionales hidroxilo (OH^-) que poseen. En el ensayo se utilizó reactivos diferentes, el llamado Fehling A, que es una solución acuosa de sulfato de cobre (II) y el Fehling B, que contiene hidróxido de sodio y tartrato de sodio y potasio; la función de este último es formar un quelato con el Cu²⁺ y evitar que este ion sea precipitado por los iones hidróxido²⁴. Las saponinas fueron identificadas mediante el ensayo de espuma, por ser un grupo de glicósidos que se disuelven en agua y disminuyen la tensión superficial de ésta, al agitar la solución se formó una espuma relativamente estable, por ser tensioactivo, evidenciándose que la reacción fue positiva²⁷.

El ensayo para taninos con el ensayo Gelatina resultó positivo en el extracto acuoso dando una coloración azulada negruzco indicando que son taninos hidrolizables y precipitan con la solución de la gelatina²⁶.

Para determinar la capacidad antioxidante se hicieron extractos secos en diferentes concentraciones 1%, 3% y 5% para así poder utilizar el método DPPH^•, este método consiste en cuando se pone en contacto con una sustancia que dona un átomo de Hidrogeno (antioxidante) se produce la forma reducida DPPH-H o DPPH-R en el que da una pérdida de color amarillo pálido. El radical DPPH^• es ampliamente usado y esto se debe a que se obtienen los resultados en un tiempo corto²⁷.

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Como se muestra en la TABLA 5 se obtuvo que al 1% fue de 16,95±0,94 mg de Trolox/ g de extracto seco, en el 3% fue de 28,41 ±0,30 mg de Trolox/g de extracto seco y al 5% fue de 31,67±0,60 mg de Trolox/ g de extracto seco; los valores de TEAC muestran diferencias estadísticamente significativas entre las diferentes concentraciones (ANEXO 9). Esto nos indica que en la concentración a 5% presentó la mayor capacidad antioxidante encontrando aquí mayor números de compuestos fenólicos y flavonoides, ya que se sabe que los flavonoides están ampliamente distribuidos en el género Piper, dentro los principales tipos que se aislaron se encuentran las flavonas, flavanonas, chalconas y dihidrochalconas, de variada actividad biológica como antibacteriana y antifúngica, destacándose también su actividad antioxidante debido a la presencia de grupos hidroxilo de tipo fenólico en la mayoría de sus estructuras químicas^27,28. Estudios con el mismo género reportaron la potencial capacidad antioxidante de los extractos de P. piedecuestanum TREL. & YUNCK y P. Subpedale TREL. & YUNCK por diferentes metodologías ABTS^•‐, DPPH^•, FRAP y ORAC (Mesa A et al.). Al igual en otro estudio demuestra una reducción de 50% la concentración inicial del DPPH^• del extracto etanólico de las hojas de P. aduncum. (Rengifo R. et al.)^29,30.

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V. CONCLUSIONES:

Después del análisis de los resultados se llegó a las conclusiones que:

- Se logró identificar las características fisicoquímicas de las hojas de P. aduncum.

- Se identificó los metabolitos secundarios en el extracto acuoso de las hojas de P.

aduncum siendo estas: alcaloides, fenoles, flavonoides y azúcares reductores.

- La capacidad antioxidante del extracto de las hojas de P. aduncum expresado en mg de Trolox Eq /g de muestra seca fue de 31,67 ± 0,60 mg de Trolox en el extracto al 5%.

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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Ocaña J, Tadeo M. (2018). Características farmacognósticas y cuantificación espectrofotométrica de antocianinas totales del fruto de Prunus serotina subsp.

Capulí (cav.) McVaugh (Rosaceae). “capulí”. [Artículo Científico]. Consultado el 8

de enero del 2020. Disponible en:

http://www.scielo.org.pe/pdf/afm/v73n4/a02v73n4.pdf

2. Orbegozo H, Rodriguez K. (2018). Características farmacognósticas y rendimiento del aceite esencial de las hojas de Minthostachys mollis “muña” [Tesis I].

Universidad Nacional de Trujillo. (Perú). Consultado el 8 de enero del 2020.

Disponible en:

http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/10698/Orbegozo%20Paredes

%20Haidy%20Maggli.pdf?sequence=1&isAllowed=y

3. Abreu O, Rodríguez A, Morgado M, Cao L. (2012). Farmacognosia, Farmacobotánica, Farmacogeografia y Farmacoetimologia del platanillo de Cuba (Piper aduncum subespecie ossanum). [Revista Científica]. Cuba. Consultado el 8 de enero del 2020. Disponible en: http://scielo.sld.cu/pdf/pla/v17n2/pla07212.pdf 4. Lock O, Rojas R. (2004). Química y Farmacología del Piper aduncum L. (Matico).

[Revista Científica]. Perú. Consultado el 8 de enero del 2020. Disponible en:

http://revistas.pucp.edu.pe/index.php/quimica/article/view/18713/18954

5. Rodriguez S, Rodriguez J, Villanueva D, y col. (2019). Efecto de un fitomedicamento en base a Piper aduncum “matico” en los signos vitales ante cambios agudos de altura en estudiantes de medicina. [Revista Científica de Medicina Naturista]. Perú.

Consultado el 8 de enero del 2020. Disponible en:

https://www.researchgate.net/publication/330184925_Efecto_de_un_fitomedicamen to_en_base_a_Piper_aduncum_matico_en_los_signos_vitales_ante_cambios_agudo s_de_altura_en_estudiantes_de_medicina

6. Gallego M. (2016). Estudio de la actividad antioxidante de diversas plantas aromáticas y/o comestibles. [Tesis Doctoral]. Barcelona. Consultado el 8 de enero del

2020. Disponible en:

https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2117/105811/TMGGI1de1.pdf

7. Flores J, López B, Guzmán S. (2019). Caracterización fenólica y capacidad antioxidante de plantas de uso medicinal. [Revista Científica]. México. Consultado el

8 de enero del 2020. Disponible en:

http://www.fcb.uanl.mx/IDCyTA/files/volume4/4/9/117.pdf

Biblioteca de Farmacia y Bioquímica

8. Rivas K, Muñoz D, Pino N, Balcázar N. (2015). Actividad antioxidante, contenido fenólico total y citotoxicidad de extractos polares obtenidos de plantas antidiabéticas colombianas. [Revista Científica]. Colombia. Consultado el 8 de enero del 2020.

Disponible en: https://www.medigraphic.com/pdfs/revcubplamed/cpm- 2015/cpm153c.pdf

9. Viveros P. (1923). Extractos Medicinales de Plantas. [Tesis]. Chile. Consultado el 8

de enero del 2020. Disponible en:

http://www.memoriachilena.gob.cl/archivos2/pdfs/MC0059652.pdf

10. Polo M, Zapata, J. (2015). Determinación Fisicoquímicas de las Hojas secas de Piper aduncum (Matico) procedente de la Provincia de San Marcos – Cajamarca – 2013.

[Tesis I]. Universidad Nacional de Trujillo. (Perú). Consultado el 8 de enero del 2020.

Disponible en:

http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/3671/Polo%20Vidal%20Mila gros%20Elizabeth.pdf?sequence=1&isAllowed=y

11. Cruz P. (2009). Elaboración y control de calidad del gel Antimicotico de Manzanilla, Matico y Marco para Neo – Farmaco [Tesis] Ecuador. Consultado el 8 de enero del

2020. Disponible en:

http://dspace.espoch.edu.ec/bitstream/123456789/218/1/56T00192.pdf

12. Alvarado G. (2019). Actividad antioxidante y determinación de fenoles de extractos de matico (Piper sp.) en diferentes altitudes del distrito de Levanto, Amazonas.

[Tesis]. Universidad Nacional Toribio Rodríguez de Mendoza de Amazonas.

Consultado el 8 de enero del 2020. Disponible en:

http://181.176.222.66/bitstream/handle/UNTRM/1769/Alvarado%20Santillan%20G ingler.pdf?sequence=1&isAllowed=y

13. Villanueva G. (2014). Caracteristicas farmacognosticas y cuantificacion de flavonoides totales del fruto de Prunus serotia Ehrhart (capulí), proveniente del distrito de Agallpampa, Pprovincia de Otuzco. [Tesis]. Universidad Nacional de Trujillo (Perú). Consultado el 8 de enero del 2020. Disponible en:

http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/10612/Oca%c3%bVillanueva

%20Leon%20Jessica.pdf?sequence=1.

14. Vidaurre M, Querevalú L, De los Ríos E, Ruiz S. (2005). Características farmacognósticas de las hojas de Capparis avicennifolia. [Revista Científica]. Perú.

Consultado el 8 de enero del 2020. Disponible en:

Biblioteca de Farmacia y Bioquímica

http://revistas.ucv.edu.pe/index.php/REVISTAMEDICAVALLEJIANA/article/vie w/2235/1903

15. Miranda M, y col. Manual de Prácticas de Laboratorio. Farmacognosia y Productos Naturales. Cuidad de la Habana: UH. Instituto de Farmacia y Alimentos; 2002. Pp.:

01-68.

16. Azwanida N (2015) A review on the extraction methods use in medicinal plants, principle, strength and limitation. Medicinal & Aromatic Plants 4(196): 1-6; doi:

10.4172/2167- 0412.1000196

17. Medina L., Vásquez K. Poder Capturador de los Radicales Libres Invitro de los Flavonoides totales obtenidos de las Flores de Cordea Lutea (Flor de overo) proveniente de Cormot Distrito de Compin Provincia de Gran Chimú Región La Libertad. Universidad Nacional de Trujillo.Trujillo-Peru.2015. PP.:1,27,30.

https://revistas.uta.edu.ec/erevista/index.php/dide/article/cite/15/MlaCitationPlugin 18. Cabrera H, Morón F, Victoria M y col. (2012). Composición fitoquímica de partes

aéreas frescas de Phania matricarioides. [Revista Científica]. Consultado el 28 de setiembre del 2020. Disponible en:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_abstract&pid=S1028-

47962012000300007&lng=es&nrm=iso#:~:text=La%20determinaci%C3%B3n%20 de%20aceite%20esencial,esteroides%2C%20terpenos%20y%20%C3%A1cidos%20 org%C3%A1nicos.

19. Ruiz S. (2009). Contribución del Estudio Farmacognósticas y Farmacodinámico De las Hojas de Mangífera Indica L. al uso medicinal. [Tesis de doctorado]. Universidad Nacional de Trujillo. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

http://dspace.unitru.edu.pe/bitstream/handle/UNITRU/5516/Tesis%20Doctorado%2 0-%20Segundo%20Ruiz%20Reyes.pdf?sequence=1&isAllowed=y

20. López P. (2018). Estudio de las características fisicoquímicas y fitoquimicas de las de Piper acutifoliun Ruiz & Pav. (Matico). [Tesis]. Universidad Católica Los Angeles Chimbote. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

http://repositorio.uladech.edu.pe/handle/123456789/5104

21. Proaño J. (2013). Comprobacion del efecto cicatrizante de una crema a base de Romero (Rosmarinusofficinalis), Matico (Piperaduncum) y Cola de caballo (Equisetum arvense) en heridas inducidas en ratones (Mus musculus). [Tesis]. Escuela Superior Polité de Chimborazo. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

Biblioteca de Farmacia y Bioquímica

22. Amaguaña F, Churuchumbi E. (2018). Estandarización Fitoquímica del Extracto de Caléndula (Caléndula Officinalis). [Tesis]. Universidad Politécnica Salesiana Sede Quito. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

https://dspace.ups.edu.ec/bitstream/123456789/16149/1/UPS-QT13324.pdf

23. Avalos A. Urria E. (2009). Metabolismo secundario de plantas. [Revista Científica].

Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

https://eprints.ucm.es/9603/1/Metabolismo_secundario_de_plantas.pdf

24. Enríquez A, Prieto E. (2007). Estudio Farmacognósticas y Fitoquímico del Rizoma de Zingiber officinale Roscoe “Jengibre” de la ciudad de Chanchamayo – Región Junín – Perú. [Tesis]. Universidad Nacional de Trujillo. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

http://dspace.unitru.edu.pe/handle/UNITRU/4770

25. Alayo N, Guevara L. (2012). Identificación preliminar de Fitoconstituyentes en las inflorescencias de Bejaria Aestuans L. (purum – rosa). [ Tesis]. Universidad Nacional de Trujillo. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

http://dspace.unitru.edu.pe/handle/UNITRU/4063

26. Arroyo J, Bonilla P, Huamán J, col. (2011). Estudio Fitoquímico del extracto etánolico y de las fracciones de las hojas de Piper aduncum “Matico”. [Revista Científico]. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

https://revistasinvestigacion.unmsm.edu.pe/index.php/quim/article/view/4599 27. Gálvez J. (2018). Capacidad Antioxidante y Contenido de Polifenoles en las Hojas de

Ficus Carica (Higo). [Tesis]. Universidad Católica Los Ángeles Chimbote.

Consultado el 2 de setiembre del 2020. Disponible en:

http://repositorio.uladech.edu.pe/bitstream/handle/123456789/7937/FICUS_CARIC A_CAPACIDAD_ANTIOXIDANTE_GALVEZ_FUSTAMANTE_JOSE_VLADI MIR.pdf?sequence=1&isAllowed=y#:~:text=Los%20resultados%20encontrados%2 0fueron%20que,eq%20%2Fg%20de%20muestra%20seca.

28. Soto M. (2015). Estudio Fitoquímico y cuantificación de flavonoides totales de las hojas de piper Peltatum l. y piper aduncum l. Procedentes de la región amazonas.

[Revista Científica]. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

https://revistas.uladech.edu.pe/index.php/increscendo/article/view/824/438.

Biblioteca de Farmacia y Bioquímica

29. Mesa A, Rincón D, et al. (2011). Actividad antioxidante de P. Piedecuestanum Tres.

& Yunck. y Piper Subpedale Trel. & Yunck. [Revista Científica]. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en:

http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0370- 59432011000200001

30. Rengifo R, Alva S, et al. (2014). Efecto del extracto etanólico de hojas de P. aduncum en la oxidación de LDL humana y concentración efectiva media para la estabilización de la especie radicalaria in vitro. [Revista científica]. Consultado el 28 de agosto del 2020. Disponible en: file:///D:/Maricarmen/Tesis%20II/798-1934-1-PB.pdf

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ANEXOS

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ANEXO 1: Recolección de la especie vegetal

Fig. 1: Planta Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y Farmacognosia de la Universidad Nacional de Trujillo.

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ANEXO 2: Identificación taxonómica dada por el Herbarium Truxillense:

Fig. 2: Constancia de la determinación taxonómica de la especie vegetal Piper aduncum L. en el Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo.

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ANEXO 3: Cálculos para promedio del largo y ancho de las hojas de P. aduncum L.

LARGO (cm) ANCHO (cm)

1° 19,7 1° 8,1

2° 18,1 2° 7,6

3° 21,3 3° 8,6

X̄ 19,7 X̄ 8,1

σ 1,6 σ 0,5

ANEXO 4: Cálculos para promedio del peso (g) de las hojas de P. aduncum L.

1° 2,39

2° 2,04

3° 2,47

X̄ 2,3

σ 0,229

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ANEXO 5: Determinación de pérdida de peso por desecación.

Fig. 7: Las hojas de Piper aduncum L. en la estufa del laboratorio de Botánica y Farmacognosia de la Universidad Nacional de Trujillo.

Fig. 5: Hojas secas de Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y Farmacognosia de la Universidad Nacional de Trujillo

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ANEXO 6: Características fisicoquímicas de las hojas de Piper aduncum L.

MUESTRAS MATERIAS

EXTRAÑAS HUMEDAD RESIDUAL CENIZAS TOTALES CENIZAS SOLUBLES EN AGUA

CENIZAS INSOLUBLES EN HCl

SUSTANCIAS SOLUBLES EN:

70°GL H2O

1° 6,98 9,36 12,63 3,42 3,66 27,68 22,25

2° 8,52 8,56 10,93 6,43 3,23 27,12 20,77

3° 7,98 8,84 11,31 5,58 3,4 26,88 21,84

X̄ 7,83 8,92 11,62 5,14 3,43 27,23 21,62

σ 0,78 0,41 0,89 1,55 0,22 0,41 0,76

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ANEXO 7: Obtención de extracto.

Fig. 8: Método de reflujo de las hojas de Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y Farmacognosia de la Universidad Nacional de Trujillo.

Fig. 9: Solidos totales del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum L. en el laboratorio de Botánica y Farmacognosia de la Universidad Nacional de Trujillo.

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ANEXO 8: Determinación de la actividad antioxidante por el método DPPH.

Decocto (%) Solidos totales (mg/mL) ABS X̄

1 4,2 0,590 0,593 0,605 0,596

3 6,7 0,354 0,362 0,357 0,358

5 7,9 0,228 0,239 0,247 0,238

Cuadro 2: Lecturas de absorbancia (ABS) del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum en diferentes concentraciones.

Cuadro 3: Estándares de concentración del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum en diferentes concentraciones.

CC ABS (trolox) X̄

0,1 0,950 0,936 0,919 0,935

0,2 0,844 0,859 0,871 0,858

0,4 0,710 0,761 0,73 0,734

0,6 0,564 0,611 0,551 0,588

0,8 0,504 0,428 0,448 0,460

1,0 0,352 0,327 0,310 0,330

1,2 0,183 0,189 0,169 0,180

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Fig. 10: Curva de calibración entre las Concentraciones vs Promedios de las absorbancias.

EXTRACTO (%)

ABS mM Trolox en la ecuación mg Trolox/mL mg Trolox/g de extracto seco

n1 n2 n3 E1 E2 E3 t1 t2 t3 1 2 3 X̄ σ σ/x̄

1 0,59 0,593 0,605 0,296 0,290 0,266 0,074 0,073 0,067 17,662 17,305 15,877 16,95 0,94 5,58 3 0,354 0,362 0,357 0,768 0,752 0,762 0,192 0,188 0,191 28,684 28,087 28,460 28,41 0,30 1,06 5 0,228 0,239 0,247 1,020 0,998 0,982 0,255 0,250 0,246 32,301 31,605 31,099 31,67 0,60 1,91

Cuadro 4: Promedio (mg Trolox/g de extracto seco), Desviación estándar (σ) y desviación estándar relativa (σ/x̄ ) de las absorbancias de las diferentes concentraciones del extracto acuoso de las hojas de Piper aduncum.

y = -0.6779x + 0.9999 R² = 0.9996

0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 0.700 0.800 0.900 1.000

0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4

Promedio de las absorbancias

Concentraciones

Biblioteca de Farmacia y Bioquímica

ANEXO 9: Análisis estadísticos.

Origen de las variaciones

Suma de cuadrados

Grados de libertad

Promedio de los

cuadrados F Probabilidad Valor crítico para F

Entre grupos 358,6710253 2 179,3355 399,0267 4,155E-07 5,14325285

Dentro de los

grupos 2,696594484 6 0,449432

Total 361,3676198 8

Cuadro 5: Ensayo de Análisis de Varianza (ANOVA)

Tukey HSD results

treatments Tukey HSD Tukey HSD Tukey HSD

pair Q statistic p-value inference

A vs B 29,613 0,0010053 ** p<0.01

A vs C 38,0311 0,0010053 ** p<0.01

B vs C 8,4181 0,0024223 ** p<0.01

Cuadro 6: Ensayo de Tukey