Crecimiento de Trichoderma harzianum utilizando como sustrato el Oxamyl en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. TESIS. ST. EM. AS. DE. IN FO. Crecimiento de Trichoderma harzianum utilizando como sustrato el Oxamyl en condiciones de laboratorio.. N. DE. SI. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. RE CC IO. BIÓLOGO Autora: Br. Linda Vania Altamirano Santa María. DI. Asesor: MsC. Juan Héctor Wilson Krugg TRUJILLO - PERÚ. 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. CO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. M UN. IC. AC IÓ. N. TRUJILLO. RM ÁT. IC. A. Y. RECTOR. IN FO. Dr. Rubén Vera Véliz. AS. DE. VICE-RECTOR ACADÉMICO. VICE-RECTOR ACADÉMICO. Dr. Esteban Ilich Zerpa PROFESOR SECRETARIO GENERAL. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. Dr. Weider Portocarrero Cardenas. II Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS. M UN. Dr. Marco Salazar Castillo. IC. AC IÓ. N. BIOLÓGICAS. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. Dr. Enrique Padilla Sagástegui. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dra. Eva Villanueva Tarazona. DI. DIRECTORA DE LA E.A.P. DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. III Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de. IC. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presento a su. M UN. consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada: Crecimiento de Trichoderma harzianum utilizando como sustrato el Oxamyl en condiciones de. CO. laboratorio, con el objetivo de obtener el título profesional de Biólogo-. DE. IN FO. RM ÁT. Espero que este trabajo sea de su aprobación.. IC. A. Y. Microbiólogo.. Br. LINDA VANIA ALTAMIRANO SANTA MARÍA. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. Trujillo,Marzo del 2016. IV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. M UN. ________________________________________. IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. DRA. MANUELA LUJAN VELÁSQUEZ. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. PRESIDENTA. ___________________________________________. DE. MS. C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG. _____________________________________________ Mg. EDUARDO MUÑOZ GANOZA VOCAL. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. SECRETARIO. V Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR El que suscribe: Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg asesor de la presente tesis. N. titulada: Crecimiento de Trichoderma harzianum utilizando como sustrato el. M UN. IC. AC IÓ. Oxamyl en condiciones de laboratorio.. CO. CERTIFICA:. Y. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. A. correspondiente proyecto de tesis y teniendo en cuenta las orientaciones. RM ÁT. IC. pertinentes.. Que, el informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las. IN FO. observaciones y sugerencias alcanzadas. Por ello, autorizo a la Bachiller Linda Vania Altamirano Santa María, para continuar con los procedimientos. ST. EM. AS. DE. correspondientes según sus fines.. MS. C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG. DI. RE CC IO. N. DE. SI. Trujillo, Marzo del 2016. ASESOR. VI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. N. Los profesores que suscriben, miembros del jurado, declaran que el presente. AC IÓ. informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. CO. M UN. IC. aprobado por unanimidad.. A. Y. Dra. MANUELA LUJAN VELÁSQUEZ. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. PRESIDENTE. SECRETARIO. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. Ms. C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG. Ms. C. EDUARDO MUÑOZ GANOZA VOCAL. VII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AC IÓ. N. A Dios, toda mi vida, por llenarme de bendiciones, brindarme fortaleza cada día. IC. porque he sentido su presencia en cada. M UN. dificultad y por permitir el haber llegado hasta este momento tan importante de mi. IC. A. Y. CO. formación profesional.. RM ÁT. A mis queridos padres Eduardo y Herlinda por su amor incondicional y confianza,. IN FO. aunque hemos pasado momentos difíciles siempre han estado apoyándome en todo. ST. EM. AS. DE. momento de mi vida.. SI. A mi hermano Eduardo Stephen, que en momentos. DE. estos. está. en. la. misión. N. religiosa, por su confianza puesta en mi,. RE CC IO. su ejemplo de madurez y su fe en Dios. Gracias. hermanito. por. los. muchos. DI. momentos compartidos, apoyándome en todas las circunstancias que se nos presentaron.. VIII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A mis abuelitas, Bertha e Isabel que han estado conmigo. mostrándome. su. amor,. apoyo. incondicional, confianza, sus ánimos y valiosos. AC IÓ. N. consejos durante todos los años de mi vida y formación profesional. Siempre les estaré. CO. M UN. IC. eternamente agradecida.. A. Y. A mi familia, en especial a mis tíos Rosa, Juan. George,. con. los. que. compartí. gratos. RM ÁT. queridos primos Christian, Kevin, Victor y. IC. Carlos, Ana, Víctor, Dora así como a mis. IN FO. momentos de infancia; gracias por su confianza, sus consejos de superación y. DE. demostraciones de cariño, preocupándose. AS. siempre por mi bienestar.. DI. RE CC IO. N. DE. Los quiero mucho.. SI. ST. EM. Los quiero mucho.. A los que ya no están conmigo en esta vida, pero que han dejado huella, su ejemplo, valores y gran amor hacia mi persona, a mi bisabuela Patrocinia de Altamirano y mi abuelo Eduardo Altamirano; que en vida esperaron mucho de mí y mis logros serán siempre dedicados a ellos. Que Dios los tenga en su Santa Gloria.. IX Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AGRADECIMIENTOS. A mi asesor Mg. Juan Héctor Wilson Krugg por su apoyo, tiempo y sus acertados. CO. M UN. IC. consejos sin los cuales no hubiera sido posible la realización de la presente tesis.. Mi más sincero agradecimiento a mi querida tía y futura colega Dra. Rosa Bertha. A. Y. Altamirano Díaz, por brindarme su apoyo incondicional, sus consejos, sus ánimos. IN FO. RM ÁT. IC. y muestras de cariño para la finalización de mi tesis.. A mis queridos amigos y colegas, con quien he pasado muchos momentos. DE. agradables en la vida universitaria, brindado su tiempo, apoyo para la ejecución de. AS. la presente tesis. Así como a mis amigos Juan, José, Kevin y Lindsay quienes me. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. han apoyado con su tiempo y ánimos para concluir esta tesis.. X Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN La presente investigación tuvo como objetivo determinar el crecimiento de Trichoderma. AC IÓ. N. harzianum utilizando como sustrato el Oxamyl a concentraciones de 120, 160 y 240 ppm en condiciones de laboratorio. El hongo fue reactivado en Agar Papa Sacarosa y se. M UN. IC. incubó por 7 días. Para la evaluación en medio sólido, se sembró en placas con Agar mínimo de sales conteniendo 120, 160 y 240 ppm de Oxamyl respectivamente, se incubó. CO. a T° ambiental durante 5 días; se realizaron mediciones de crecimiento radial durante 5. Y. días, en cada concentración empleada, tanto del control (Agar Sabouraud) como las del. RM ÁT. IC. A. ensayo. En medio líquido, se utilizó una suspensión de esporas de 107 y fueron inoculadas en frascos de vidrio conteniendo el caldo mínimo de sales más el nematicida. IN FO. con las concentraciones anteriormente mencionadas, incubadas a T° ambiente (25 °C aproximadamente) y conectados a un sistema aireado por 6 días, para la producción de. DE. biomasa micelial. Se determinó el peso seco de la biomasa; el micelio formado se filtró,. AS. se secó a 80°C °C durante 14 h y luego se pesó, se determinó el porcentaje de. ST. EM. crecimiento lineal así como el peso seco, obteniéndose un mayor porcentaje de. SI. crecimiento lineal de 73% en la concentración de 120 ppm de Oxamyl y un 17% de peso. DE. seco en la concentración de 160 ppm. Los datos obtenidos se analizaron con la prueba. RE CC IO. N. estadística ANOVA donde se determina que, no existe diferencia significativa, entre las concentraciones presentes tanto en el medio sólido como en el líquido. Se concluye que. DI. Trichoderma harzianum degrada al sustrato Oxamyl a concentraciones de 120, 160 y 240 ppm y utilizarlo para su crecimiento y desarrollo micelial.. Palabras clave: Trichoderma harzianum. Oxamyl. Producción de biomasa de T. harzianum.. XI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA DE CONTENIDOS Página. IV. M UN. IC. PRESENTACIÓN. III. AC IÓ. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. II. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. MIEMBROS DEL JURADO. CO. DEL ASESOR. A. Y. APROBACIÓN. RM ÁT. IC. DEDICATORIAS AGRADECIMIENTOS. IN FO. RESUMEN. DE. I. INTRODUCCION. EM. 1. . MATERIAL DE ESTUDIO 2. . PROCEDIMIENTO. VII VIII X XI 1. 09. ST. 09. Reactivación del cultivo de T. harzianum. 09. DE. SI. 2.1.. VI. 09. AS. II. MATERIAL Y MÉTODOS. V. DI. RE CC IO. N. 2.2. Evaluación en medio sólido del crecimiento de T. harzianum empleando como sustrato Oxamyl. 09. 2.2.1. Preparación del medio control Agar Dextrosa Sabouraud. 09. 2.2.2. Preparación del Agar mínimo de sales. 10. 2.2.3. Siembra e Incubación. 10. 2.2.4. Lectura. 11. 2.3. Evaluación en medio líquido del crecimiento de T. harzianum empleando como sustrato a Oxamyl.. 12. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.1. Preparación del medio control Caldo de extracto de Levadura enriquecida. 12. 2.3.2. Propagación de T. harzianum.. 12. AC IÓ. N. 2.3.3. Preparación de suspensión madre de conidias de T. harzianum. 12. IC. 2.3.4. Evaluación del crecimiento de T. harzianum en Caldo. M UN. medio mínimo de sales. CO. 2.4.3.1. Equipo para producción de biomasa. RM ÁT. IC. 2.3.5. Análisis de resultados. A. Y. 2.4.3.2. Producción de biomasa. III. RESULTADOS. 12 13 13 14 15. IN FO. Fig. 1. Porcentaje de crecimiento lineal de T. harzianum a las concentraciones de 0, 120, 160 y 240 ppm de Oxamyl en Agar minimo de sales, evaluados en medio 16. DE. sólido a T° ambiente durante 5 días de incubación.. AS. Fig 2. Crecimiento de T. harzianum en agar mínimo de sales con Oxamyl a las. EM. concentraciones de: A. 0 ppm; B. 120 ppm; C. 160 ppm; D. 240 ppm de Oxamyl.. ST. 17. SI. Fig. 3. Porcentaje de peso seco de T. harzianum obtenidos del crecimiento miscelial. DE. del control y la utilización de Oxamyl a concentraciones de 120, 160 y 240 ppm, 18. DI. RE CC IO. N. incubados a temperatura ambiente durante 6 dias con sistema de aireación IV. DISCUSIÓN. 20. V. CONCLUSIONES. 25. VI. RECOMENDACIONES. 26. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 27. ANEXOS. 33. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCIÓN. N. La gran mayoría de las enfermedades en los cultivos son provocadas por agentes. AC IÓ. bióticos que alteran las funciones fisiológicas de las plantas, afectando su normal. IC. funcionamiento, reduciendo generalmente los rendimientos y en casos extremos. M UN. provocándoles la muerte, así mismo, por factores no infecciosos o abióticos,. CO. como alteraciones edafoclimáticas y toxicidad por plaguicidas, entre otros. Los. Y. agentes bióticos causales de enfermedades son conocidos como patógenos. IC. A. (bacterias, hongos, virus, nematodos y fitoplasmas)1, 2. Estos patógenos son. RM ÁT. microscópicos o son difíciles de observar a simple vista, incluso algunas plantas. IN FO. pueden ser patogénicos, capaces de causar enfermedades3, 4.. DE. Uno de los agentes patógenos que afectan a la gran mayoría de cultivos son los. EM. AS. nematodos; éstos son organismos que para alimentarse, perforan las membranas. ST. celulares con su estilete y se pueden ubicar fuera (ectoparásitos) o al interior del. SI. tejido del vegetal (endoparásitos)5, 6. Los primeros cumplen todo o la mayor. DE. parte de su ciclo evolutivo, en el exterior de la planta hospedera, se encuentran. RE CC IO. N. los géneros Xiphinema, Criconemoide, Helicotylenchus7, 8. En cambio los endoparásitos como Meloidogyne suelen producir nódulos en raíces y raicillas,. DI. por sus hábitos polífagos son considerados como los más peligrosos para las plantas por tener un amplio rango de hospederos, parasitando prácticamente cualquier tipo de cultivo 9,. 10. . Se conocen 4,105 especies de nematodos. fitoparásitos, las cuales causan pérdidas anuales entre 11 y 14%11, 12. El proceso de alimentación causa una reacción en la células de las plantas afectadas, 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. resultando en la muerte o debilitamiento de los extremos de las raíces y yemas, formación de lesiones como rompimiento de tejidos, abultamientos, agallas,. AC IÓ. N. arrugamiento y deformación en tallos y hojas13, 14.. IC. En la actualidad se ha desarrollado muchos nematicidas para ayudar en el control. M UN. de los nematodos fitoparásitos, los agentes de control biológico, y las enmiendas. CO. orgánicas entre otras15. El control químico ha sido la medida tradicionalmente. Y. utilizada para combatir los nematodos mediante el uso de fumigantes del suelo y. RM ÁT. mayoría de los países del mundo 16.. IC. A. nematicidas y todavía continúa siendo el principal método utilizado en la. IN FO. Sin embargo el uso de plaguicidas presenta varios inconvenientes que son necesarios tener en cuenta. Hay que considerar en primer lugar que los. DE. plaguicidas alteran el balance de la naturaleza desequilibrando los sistemas. AS. ecológicos. Este hecho tiene gran trascendencia, ya que, como es sabido, el suelo. EM. es un ecosistema francamente complejo, en el que coexisten multitud de. ST. poblaciones animales, vegetales y microbianas que mantienen entre sí un. RE CC IO. N. DE. SI. equilibrio dinámico muy preciso 17.. En el sector agrícola el uso de fertilizantes químicos afecta a estos ecosistemas. DI. naturales en un mayor o menor grado18. Los insectos y algunos otros parásitos pueden desarrollar razas resistentes a los plaguicidas lo que hace necesario utilizar dosis mayores o productos de mayor efectividad, así mismo pueden ocasionar fitotoxicidad en las plantas y seleccionar poblaciones de nematodos. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. resistentes, así como pueden contaminar el manto freático afectando a la salud. N. humana19,20.. AC IÓ. En lo que se refiere a los efectos a largo plazo en animales, se determinó. IC. correlaciones significativas y altamente significativas, entre los residuos de. M UN. ciertos organoclorados en huevos de aves, especialmente p,p'DDE (un. CO. metabolito del DDT), el grosor de las cáscaras y la presencia de fisuras en sus. Y. superficies. Esta situación podría estar causando problemas en la biología. IC. A. reproductiva de las aves17, 18. En efecto, la flora y la fauna también pueden ser. RM ÁT. afectadas por la aplicación de un plaguicida, en la zona donde se realiza el tratamiento o incluso en regiones más extensas. Los residuos de estos. IN FO. compuestos pueden llegar a zonas más lejanas del área de aplicación arrastrados. ST. EM. AS. cadenas biológicas21,22.. DE. por el viento, cursos de aguas continentales, corrientes marinas y a través de las. SI. Uno de los nematicidas más utilizados en el sector agrícola es el Oxamyl, un. DE. nematicida del grupo de los carbamatos, tiene una excelente acción sistémica y. RE CC IO. N. de contacto, penetra a través de la cutícula o por ingestión durante la alimentación. Es empleado contra una amplia gama de nematodos en diversos. DI. cultivos. Sus principales propiedades fisicoquímicas son que no es corrosivo ni explosivo, es estable por lo menos dos años en almacén bajo condiciones normales de temperatura y humedad relativa23.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Este nematicida interfiere en la transmisión de los impulsos nerviosos por inhibición de la acetilcolinesterasa. Los efectos se inician con un incremento en la actividad del nematodo al entrar en contacto o por ingestión del Oxamyl,. AC IÓ. N. seguido por una reducción en la actividad hasta alcanzar la parálisis. La actividad del cuerpo del nematodo es rápidamente inhibida y se estimula un. M UN. IC. movimiento anormal del estilete; la habilidad para penetrar las raíces se deteriora, se previene y reduce la eclosión de los huevos, se reduce la motilidad. IC. A. Y. CO. y se demora el proceso de muda24.. RM ÁT. El manejo de estos compuestos químicos lleva consigo unos riesgos de intoxicación para las personas que los manipulan y aplican. La toxicidad se. IN FO. establece mediante ensayos en animales de experimentación y su expresión. DE. cuantitativa se representa mediante la dosis letal media DL50, que corresponde a. AS. la cantidad de plaguicida necesario para causar la muerte al 50% de los. EM. individuos que componen el lote de ensayo. La DL50 se representa en. ST. miligramos de plaguicida por kilogramo de peso de animal tratado en el ensayo.. RE CC IO. N. DE. SI. Cuanto menor sea su valor, mayor será la toxicidad del compuesto25.. El género Trichoderma posee buenas cualidades para el control biológico de. DI. enfermedades en plantas causadas por patógenos fúngicos del suelo, principalmente de los géneros Phytophthora, Rhizoctonia, Sclerotium, Pythium y Fusarium entre otros26. Las especies de Trichoderma actúan como hiperparásitos competitivos que producen metabolitos antifúngicos y enzimas hidrolíticas a los que se les atribuyen los cambios estructurales a nivel celular, tales como 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. vacuolización, granulación, desintegración del citoplasma y lisis celular, encontrados en los organismos con los que interactúa27, 28. Trichoderma sp. es fundamental en el control de nematodos. Sin embargo, se hablan de dos. AC IÓ. N. mecanismos, el primero es el parasitismo directo de huevos o larvas mediante el aumento de la actividad de quitinasas o proteasas, siendo este un indicativo de. M UN. IC. infectar huevos de nematodos; y el segundo es la inducción de los mecanismos. Y. CO. de defensa de la planta29.. IC. A. Las especies del género Trichoderma son los antagonistas más utilizados y. RM ÁT. fungicida biológico más estudiado, empleado como estimulador de crecimiento de plantas, para el control de enfermedades producidos por hongos, debido a su. IN FO. ubicuidad, a su facilidad para ser aisladas y cultivadas, no atacan a plantas. DE. superiores y de igual forma es utilizado como agente de biorremediación ya que. AS. degrada algunos grupos de pesticidas de alta persistencia en el ambiente30, 31. Los. EM. mecanismos por los que las cepas del género Trichoderma desplazan al. ST. fitopatógeno son fundamentalmente de tres tipos. Competición directa por el. DE. SI. espacio o por los nutrientes32. Así como producción de metabolitos antibióticos,. N. ya sean de naturaleza volátil o no volátil y parasitismo directo de determinadas. DI. RE CC IO. especies de Trichoderma sobre los hongos fitopatógenos 33, 34, 35.. Diversas especies de Trichoderma son responsables de la hidrólisis de biomasa. celulósica, en la degradación de residuos vegetales, varias especies producen un gran número de enzimas en importantes cantidades y las liberan al ambiente sinérgicamente, degradando la celulosa, lignina y un amplio número de 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. contaminantes persistentes como compuestos aromáticos clorados, hidrocarburos heterocíclicos. aromáticos,. algunos. colorantes. y. polímeros. sintéticos.. Trichoderma ressei produce enzimas celulolíticas extracelulares como celulasas. AC IÓ. N. y xilanasas además secretan una amplia variedad de hemicelulasas en altas concentraciones, la actividad celulolítica de T. ressei se ha mejorado mediante el. M UN. IC. uso de diferentes técnicas de mutagénesis36. Con base en esta capacidad enzimática, las especies de Trichoderma pueden potencialmente contribuir en la. CO. degradación de compuestos orgánicos contaminantes como hidrocarburos. A. Y. alifáticos y poliaromáticos y otros compuestos xenobióticos depositados en el. RM ÁT. IC. suelo37.. IN FO. Para disminuir los problemas de contaminación con plaguicidas, se han usado. DE. microorganismos tolerantes y capaces de degradar a estos compuestos. AS. xenobioticos38. La biorremediación es la tecnología basada en la utilización de. EM. éstos microorganismos y el uso de su potencial degradador para eliminar los. ST. contaminantes del medio, mediante su transformación en productos inocuos. DE. SI. como el CO2 y el H2O, mayormente este método emplea hongos porque su. N. metabolismo más evolucionado les permite degradar los hidrocarburos de mayor. RE CC IO. peso molecular39. Los microorganismos pueden crecer a expensas de la utilización de estos compuestos químicos y son capaces de alimentarse a. DI. expensas de compuestos tan extraños para el ser humano como el benceno, naftaleno o el pireno 40. Se ha demostrado la acción de bacterias Pseudomonas. oryzihabitans y Pseudomonas aeruginosa sobre los organoclorados, mediante el aislamiento de los micronichos creados en la estructura porosa de los granos de. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. café, han demostrado la capacidad de degradar pesticidas como el DDT (1,1,1Tricloro-2,2-bis (4-clorofenil)-etanol) a productos como 1,1-Dicloro- 2,2´-bis (4Clorofenil)etileno (DDE), 1-Cloro-2,2-bis (4-Clorofenil) etano (DDMU) y 2,2´-. IC. AC IÓ. N. Bis (p-Clorofenil) etanol (DDOH)41.. M UN. Hongos como Trichoderma son capaces de tolerar y degradar compuestos. CO. contaminantes como hidrocarburos y plaguicidas42. Esta capacidad de adaptación. Y. a diversas condiciones medioambientales y sustratos, confiere a Trichoderma la. IC. A. posibilidad de ser utilizado en la industria de la biotecnología43. T. atroviridae. RM ÁT. puede producir diversos metabolitos secundarios dentro de los que se encuentran algunas toxinas como la Glitoxina, así como metabolitos como Tricorzinianos,. IN FO. Trichodermin, Dermadina, Trichotecenosa, Alameticina, penicilina sintetizados. DE. por T. harzianum44. Esta capacidad bioquímica permite vislumbrar el potencial. AS. de aplicación de Trichoderma en la biorremediación de sitios contaminados. SI. ST. EM. teniendo con ello una relevancia ecológica42.. DE. Insecticidas como forato o carbofurano pueden estimular o inhibir el crecimiento. RE CC IO. N. de especies de Trichoderma45. Más aún, T. viride contribuye en la degradación. DI. del herbicida triflurina en más del 90 % en aproximadamente 10 días46.. Se ha documentado que Trichoderma es capaz de degradar la mayoría de los plaguicidas organoclorados como el DDT, el dieldrin y el endosulfán, que son persistentes en la naturaleza y presentan alta toxicidad. Algunas especies del. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. género Trichoderma pueden degradar pentacloronitrobenceno y pentaclorofenol. T. harzianum es capaz de utilizar el insecticida organofosforado clorpirifos como fuente de azufre y de fósforo y también es capaz de degradar glifosato y ácido. 2,4,6-triclorofenol,. AC IÓ. N. aminometil fosfórico. Así mismo T. harzianum tiene la capacidad de degradar 4,5-dicloroguaiacol,. 3,4,5-tricloroguaiacol,. Y. CO. diversos nutrientes en todas sus etapas de crecimiento 49.. M UN. IC. tetracloroguaiacol47,48. También degrada al insecticida endulzan ciclodieno, bajo. IC. A. En general, el empleo de agroquímicos como el Oxamyl ha permitido obtener. RM ÁT. buenos resultados de control del nematodo, este químico resulta ser fitotóxico, por sus efectos adversos así como por producir inhibición de la división celular. IN FO. vegetal, debido a un efecto genotóxico50. Además el uso de este químico puede. DE. generar un impacto a los vegetales, es extremadamente tóxico y peligroso para. AS. animales domésticos, organismos acuáticos, así como para flora y fauna. EM. silvestre51, 52. Se conoce en estudios de tipo básico con especies de Trichoderma,. ST. actúa como biocontrolador y biodegradador en diversos cultivos mediante la. DE. SI. biorremediación53. Es por esto que se busca en T. harzianum, actúe como un. N. degradador biológico, utilizando como fuente de nutrientes al Oxamyl, conforme. RE CC IO. el hongo crece las concentraciones del químico disminuirán en los suelos, reduciendo los efectos residuales en los campos de cultivo, protegiendo asi a la. DI. microbiota habitante del suelo y demás organismos vivos presente en los cultivos, por este motivo el presente trabajo está orientado a conocer si Trichoderma harzianum es capaz de crecer utilizando como sustrato el Oxamyl a concentraciones de 240, 160 y 120 ppm en condiciones de laboratorio.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.MATERIAL Y MÉTODOS 1. MATERIAL DE ESTUDIO. AC IÓ. N. Cultivo puro de Trichoderma harzianum, proporcionado por la cátedra de Fitopatología del Departamento de Microbiología y Parasitología, de. IC. la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de. M UN. Trujillo. (Anexo 1). A. Y. CO. Nematicida Neoxamyl 240 SL, cuyo principio activo es el Oxamyl.. RM ÁT. IC. 2. PROCEDIMIENTO. 2.1. Reactivación del cultivo de Trichoderma harzianum.. IN FO. A partir del cultivo puro de T. harzianum, proporcionado por el Laboratorio. de Fitopatología del Departamento Académico de. DE. Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas; se. AS. reactivó la cepa, el cual se sembró por puntura en tubos de ensayo de 13. ST. EM. x 100 mm en el medio Agar Papa Sacarosa (APS) con antibiótico. SI. Doxiciclina, se incubó a temperatura ambiente (25°C aproximadamente). DE. por 10 días. Se determinaron sus características macroscópicas y. RE CC IO. N. microscópicas de la cepa en estudio. (Anexo 2). DI. 2.2. Evaluación en medio sólido del crecimiento de T. harzianum empleando como sustrato Oxamyl. 2.2.1. Preparación del medio control positivo en Agar Dextrosa Sabouraud. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para la evaluación del control positivo se utilizó Agar Dextrosa Sabouraud, se preparó 50 mL en un matraz. El medio de cultivo se esterilizó en autoclave y se dejó enfriar (Anexo 4), no se le. IC. medio se sirvió en tres placas Petri estériles.. AC IÓ. N. agregó el Oxamyl, a fin de utilizarlo como control. Luego, el. M UN. 2.2.2. Preparación del medio control negativo en Agar mínimo de. CO. salea. Y. Para la evaluación del control negativo se utilizó Agar mínimo. IC. A. de sales, se preparó 50 mL en un matraz. El medio de cultivo se. RM ÁT. esterilizó en autoclave y se dejó enfriar (Anexo 5), no se le. IN FO. agregó el Oxamyl, a fin de utilizarlo como control negativo.. DE. Luego, el medio se sirvió en tres placas Petri estériles.. AS. 2.2.3. Preparación del Agar medio mínimo de sales con Oxamyl.. EM. Se preparó el Agar mínimo de sales en tres matraces conteniendo. ST. 50 ml del medio cada uno. El medio de cultivo fue esterilizado en. DI. RE CC IO. N. DE. SI. autoclave y se dejó enfriar hasta una temperatura aproximada de 45°C. (Anexo 5). Luego se agregó el volumen calculado de Oxamyl en cada matraz para obtener concentraciones de 120, 160 y 240 ppm, una concentración por matraz. El medio de cultivo de cada uno de los tres matraces se sirvió en placas Petri estériles (tres placas para las concentraciones de 120, 160 y 240 ppm respectivamente).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.4. Siembra e incubación A partir del cultivo puro de T. harzianum, se sembró por puntura. N. en la parte central de las placas Petri conteniendo Agar mínimo. AC IÓ. de sales que se preparó en el paso anterior (tres placas para las. IC. concentraciones de 120, 160 y 240 ppm respectivamente. M UN. incluidas las placas del control positivo y negativo); las cuales se. Y. superficie de la placa control positivo.. CO. incubaron a T° ambiente hasta que el Trichoderma cubra toda la. Se. realizaron. RM ÁT. IC. A. 2.2.5. Lectura mediciones. de. crecimiento. micelial. de. IN FO. Trichoderma a partir del momento que se observó crecimiento. DE. hasta el quinto día, las lecturas se hicieron mediante mediciones. AS. del radio de crecimiento micelial en centímetros (cm.), en. EM. diferentes direcciones, obteniendo un radio promedio de. ST. crecimiento por día por cada concentración del nematicida y del. de T. harzianum se expresaron en centímetros y en porcentaje de. crecimiento (%C), teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado por el control positivo (100%), de la siguiente manera: (Anexo 9). DI. RE CC IO. N. DE. SI. grupo control positivo y negativo. Los resultados de crecimiento. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2. Evaluación en medio líquido del crecimiento de T. harzianum empleando como sustrato a Oxamyl 2.3.1.. Preparación del medio control Caldo de extracto de Levadura. AC IÓ. N. enriquecida.. Para la evaluación del control se preparó 800 mL de Caldo de. M UN. IC. extracto de Levadura enriquecida en dos matraces de 500 mL; luego se trasvasó a dos frascos de vidrio transparente conteniendo 350 mL. CO. del caldo cada uno, éste fue esterilizado en autoclave y se dejó. 2.3.2.. RM ÁT. IC. A. Y. enfriar. (Anexo 7). Propagación de T. harzianum. IN FO. A partir del cultivo puro de T. harzianum, se realizó una siembra en. DE. frascos planos conteniendo Agar Papa Sacarosa (APS) con antibiótico. AS. (Doxiciclina). Se incubó a una temperatura de 25°C durante 10 días.. ST. Preparación de suspensión de conidias de T. harzianum. SI. 2.3.3.. EM. (Anexo 3). DI. RE CC IO. N. DE. Transcurrido el tiempo de incubación al cultivo en frasco plano se le agregó 50 ml agua destilada estéril y se agitó para obtener una suspensión de esporas que fueron utilizadas en la producción de biomasa. (Anexo 10, 11). 2.3.4. Evaluación del crecimiento de T. harzianum en Caldo mínimo de sales. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.4.1.. Equipo para producción de biomasa Consistió en un sistema de aireación conectados a ocho. N. recipientes de vidrio de 800 mL de capacidad cada uno. AC IÓ. (dos recipientes para las concentraciones de 240, 160 y. IC. 120 ppm respectivamente y dos para el control), Se. M UN. agregó a los frascos el caldo mínimo de sales (Anexo 6). Producción de biomasa.. A. Y. 2.3.4.2.. CO. más el nematicida con las concentraciones a evaluar.. RM ÁT. IC. Para la producción de biomasa, se colocó 20 mL de suspensión de. esporas. de. T.. harzianum. a. una. IN FO. concentración de 107 esporas/mL, en cada uno de los. DE. recipientes con los medios preparados anteriormente. Se. AS. pusieron en funcionamiento a temperatura ambiente (25. EM. °C aproximadamente) y aireación constante. El aire fue. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. suministrado por una bomba de pecera, que pasa por un proceso de esterilización con sulfato de cobre al 5% y posteriormente con NaCl al 20%, se distribuyó a los recipientes cilíndricos de vidrio. La cantidad de aire fue controlada mediante reguladores para evitar romper el micelio del hongo en su crecimiento (Anexo 12). La incubación se realizó por 6 días. Obtenida la biomasa micelial se procedió a filtrar para recuperar el micelio, utilizando papel de filtro (Anexo 13), el micelio es colocado en placas Petri y se llevó al horno a 80 °C por 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. espacio de 14 h para ser secado, después obtuvo el peso del micelio. Análisis de Resultados.. AC IÓ. N. 2.3.5.. Para determinar si existe diferencia estadística en el crecimiento de T.. IC. harzianum a diferentes concentraciones del Oxamyl; se analizó el. M UN. crecimiento lineal así como el peso seco de T. harzianum en las. CO. diferentes concentraciones del Oxamyl, procesándose los datos en base. Y. a la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA), según el. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. paquete estadístico SPSS v. 20 (Anexo 15, 16, 17, 18).. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. III. RESULTADOS. IC. El mayor porcentaje de crecimiento lineal de Trichoderma harzianum, fue de 73%. Y. CO. M UN. en la concentración de 120 ppm de Oxamyl. (Fig. 1). IC. A. Se muestra la curva de crecimiento de T. harzianum sobre las concentraciones de. IN FO. crecimiento en el control negativo.. RM ÁT. 120, 160 y 240 ppm de Oxamyl en relación con el control positivo y un escaso. AS. DE. (Fig. 2). EM. Se observa que el crecimiento macroscópico de las colonias de T. harzianum en las. ST. placas, tanto del control como las que tienen el sustrato de Oxamyl y donde se. RE CC IO. N. DE. SI. aprecia un mayor crecimiento en la concentración de 120 ppm. (Fig. 3). El mayor porcentaje de crecimiento de peso seco de T. harzianum fue de 17% en la. DI. concentración de 160 ppm de Oxamyl. (Fig. 4). 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. b b. DE. IN FO. RM ÁT. IC. b. A. Y. a. EM. AS. Fig. 1. Porcentaje de crecimiento lineal de T. harzianum a las. ST. concentraciones de 0, 0*, 120, 160 y 240 ppm de Oxamyl en Agar. SI. minimo de sales, evaluados en medio sólido a T° ambiente durante 5. b = p > 0.05, no existe diferencia significativa.. 0ppm: Agar Sabouraud dextrosa 0ppm*: Agar mínimo de sales. DI. RE CC IO. N. DE. días de incubación.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. CRECIMIENTO (cm). M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. AS. DÍA S. ST. Fig. 2. Curva de crecimiento de T. harzianum sobre las concentraciones de. SI. 120, 160 y 240 ppm de Oxamyl en medio minimo de sales, evaluados en. DI. RE CC IO. N. DE. medio sólido a T° ambiente durante 5 días de incubación. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. A. C. EM. AS. DE. B. E. SI. ST. D. DE. Fig 3. Crecimiento de T. harzianum en agar medio mínimo de sales. B. 0 ppm* (Control negativo) C. 120 ppm; D. 160 ppm; E. 240 ppm de Oxamyl.. DI. RE CC IO. N. con Oxamyl a las concentraciones de: A. 0 ppm (Control positivo);. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IN FO. a. b. b. ST. EM. AS. DE. b. SI. Fig. 4. Porcentaje de peso seco de T. harzianum a las concentraciones de. DE. 0, 120, 160 y 240 ppm de Oxamyl, evaluados en sistema aireado a T°. b = p > 0.05, no existe diferencia significativa.. DI. RE CC IO. N. ambiente durante 6 días de aireación.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI. DISCUSIÓN. En esta investigación se empleó el Oxamyl como sustrato, siendo un agroquímico de. AC IÓ. N. amplio espectro, que pertenece al grupo de los carbamatos y es uno de los nematicidas más utilizados para el control de una gran variedad de cultivos 54, 55. Sin. M UN. IC. embargo su uso continuo contamina los suelos, por su efecto residual23. Por lo que estudios microbianos son útiles en el desarrollo de estrategias de biodegradación de. CO. este compuesto xenobiótico por microorganismos 56,57. Trichoderma, es un potente. IC. A. Y. controlador biólogico de muchas enfermedades en vegetales, causadas por. RM ÁT. fitopatógenos, este simbionte de plantas puede colonizar distintos ambientes, debido a su alta capacidad reproductiva, por lo que su crecimiento y desarrollo es. IN FO. favorecido por la materia orgánica rica en compuestos carbonados y nitrogenados de. AS. DE. los cuales obtiene sus nutrientes26, 27, 30.. EM. Se ha demostrado que T. harzianum puede degradar al Oxamyl en compuestos que. SI. ST. son fuente de carbono y nitrógeno, que son utilizados para su crecimiento y. DE. desarrollo, como se muestran en las Fig. 1, 2 y 3. El crecimiento lineal de T.. N. harzianum en las placas que contienen el sustrato muestra su degradación y. RE CC IO. utilización, como se observa en la Fig 3., la velocidad de degradación va a depender de la composición y estructura química del sustrato, de la complejidad y estabilidad. DI. de la molécula del plaguicida, tal como lo expresa Mitra y Raghu 57. Se debe resaltar que el escaso crecimiento del control negativo en la Fig. 3B. se debe a que Trichoderma harzianum, tomó los nutrientes que quedaron gracias a la autólisis del. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. micelio sembrado, y al no encontrar más nutrientes en el agar mínimo de sales, dejó. N. de crecer y desarrollarse.. AC IÓ. En los medios solidos empleados para determinar la utilización del Oxamyl, se. IC. observó un porcentaje de crecimiento lineal de 73% en la concentración de 120 ppm. M UN. con respecto al control, y en las concentraciones de 160 y 240 ppm, se observó. CO. porcentajes de 45% y 31% respectivamente, tal como se muestra en Fig. 1. Según la. Y. evaluación estadística no existe diferencia significativa (p >0.05) entre las. IC. A. concentraciones de 120, 160 y 240 ppm que T. harzianum utilizó como sustrato, por. RM ÁT. lo que el hongo tiene la capacidad de degradar a Oxamyl y generar productos que son fuente de carbono y nitrógeno, que son elementos esenciales para su crecimiento. IN FO. y desarrollo, tal como los toma del medio control Agar Dextrosa Sabouraud, que le. DE. brinda las mismas fuentes para su crecimiento micelial; el porcentaje de crecimiento. AS. de las concentraciones es menor al control dado que el hongo tiene que degradar y. EM. después realizar su crecimiento lo que no se observa con el medio control que. ST. directamente utiliza los nutrientes y el crecimiento será en sus condiciones. DE. SI. normales; además el sustrato empleado es un nematicida que afecta en forma. RE CC IO. N. indirecta a su crecimiento. (Anexo 16).. DI. Investigaciones demuestran que T. harzianum y T. viride pueden degradar Oxamyl con la estimulación de dosis bajas de radiaciones gammna en medio mínimo de sales con concentraciones de 0, 20, 50, 100, 200, 250 y 300 ppm de Oxamyl, la degradación de Oxamyl fue 72,5% dentro de los 10 días de incubación por la cepa T. harzianum. Mientras la degradación de Oxamyl era 82.05% dentro de los 10 días de. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. incubación por T. viride, esto indicó que las cepas de Trichoderma son capaces de biodegradar a Oxamyl 58. A su vez, estos resultados coinciden con los de Rajagopal et al, que aislaron Bacillus sp., Micrococcus sp., Arthrobacter sp. y Azospirillum sp.. AC IÓ. N. y que son capaces de utilizar pesticidas como fuente de carbono y nitrógeno 59. Se tiene reportes de Afify y Shosha que considera a T. harzianum como degradador de. M UN. IC. carbofurano; un carbamato como Oxamyl, obteniendo porcentajes de crecimiento lineal de 75% y 81.5% dentro de los 14 días de incubación en el suelo no estéril y. IC. A. Y. CO. estéril60.. RM ÁT. El Centro de investigaciones en Palma Aceitera (CIPAL), realizaron un trabajo con. IN FO. Trichoderma, para determinar el efecto de 6 moléculas de pesticidas en el crecimiento de este hongo, los pesticidas utilizados fueron Terbufos, Benfuracarb,. DE. Endosulfán, Glifosato, Paraquat y Oxamyl, en concentraciones de 172, 20, 25, 12,. AS. 12 y 17 ppm, respectivamente. El crecimiento de cepas de Trichoderma en agar. EM. papa dextrosa con las dosis utilizadas no fue afectado por los insecticidas Terbufos,. ST. Oxamil y Benfuracarb; ni los herbicidas Glifosato y Paraquat. Sin embargo, al. DE. SI. segundo día de evaluación, en el insecticida Endosulfán existió una inhibición de. N. crecimiento de la cepa Trichoderma asperellum de 39%, lo que el establecimiento. DI. RE CC IO. de Trichoderma en el suelo puede verse afectado por este insecticida 61.. Sánchez y col., determinaron que T. harzianum es capaz de utilizar el insecticida organofosforado clorpirifos como fuente de azufre y de fósforo, así mismo degrada bajo diversos nutrientes al insecticida endosulfán. Las dosis probadas para endosulfán fueron 1000, 2000 y 3000 ppm, para clorpirifós 100, 250, 500, 1000 y. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2000 ppm y se aplicaron de acuerdo con sus dosis, como única fuente de carbono sobre medio mínimo sólido 62.. N. Los resultados de porcentajes de peso seco, obtenidos con la utilización del sustrato. AC IÓ. Oxamyl a concentraciones de 120, 160 y 240 ppm en el medio líquido, son 13%,. a partir de las. M UN. que los resultados de los porcentajes del peso seco obtenidos. IC. 17% y 13% respectivamente, Fig. 4. De acuerdo al estudio estadístico se demuestra. CO. diferentes concentraciones de Oxamyl no existe diferencia significativa (p > 0.05),. Y. que el hongo puede degradar y utilizar al Oxamyl en cualquiera de las. IC. A. concentraciones mencionadas. Se evidencia un descenso en los porcentajes de peso. RM ÁT. comparándolo con los obtenidos por el control (Caldo de extracto de levadura enriquecido), esta disminución de la velocidad de crecimiento puede ser que el. IN FO. hongo tenga más contacto con el Oxamyl y merma su degradación y crecimiento, en. DE. comparación con medios sólidos que se obtuvo hasta un 73% de crecimiento. AS. comparado a su control. (Anexos 17 y 18). Los resultados se confirma con las. EM. investigaciones de Afify, donde se evalúo el peso seco de Trichoderma en medio. ST. mínimo de sales con concentraciones de 0,20, 50, 100, 200, 250 y 300 ppm de. DE. SI. Oxamyl, donde en las concentraciones de 20, 50, 100, 200, 250 ppm los datos fueron directamente proporcionales, sólo la concentración de 300 ppm fue. RE CC IO. N. directamente proporcional con relación al control58. Así también Carbofurano fue inoculado en medio líquido con agitación, dando porcentajes de biomasa de. DI. Trichoderma.63. En ambos crecimientos ya sea lineal o en peso seco, Trichoderma harzianum degradó a Oxamyl, utilizándolo como fuente de carbono y nitrógeno. Se debe. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. resaltar que la degradación en ambas evaluaciones no es igual ya que en medio sólido T. harzianum pudo degradar a Oxamyl hasta una concentración de 120 ppm, pero en medio líquido hasta una mayor concentración como lo es en 160 ppm, se. AC IÓ. N. presentó crecimiento. Dicho crecimiento se debe a la presencia de determinadas enzimas que presenta el hongo. Según Silva et al64, estudios determinaron que T.. M UN. IC. harzianum degradan a ciertos fungicidas específicamente a Benomyl, que es un carbamato, éstos al ser ésteres de los ácidos N-metil o N,N-dimetilcarbámico. CO. permite a las enzimas de T. harzianum actuar sobre amida y enlace éster65 por. A. Y. lipasas y actividades estereásicas66, a la vez el hongo libera proteasas,. IN FO. como T. harzianum degrada a Oxamyl.. RM ÁT. IC. betaglucanasas y mediante sistemas enzimáticos oxidativos e hidroxilaciones 67 es. DE. Los resultados obtenidos son de ayuda para el desarrollo de una estrategia de. AS. biorremediación de suelos contaminados con Oxamyl. La utilización de los sistemas. EM. microbianos para degradar pesticidas y así la eliminación de estos compuestos de los. SI. ST. cultivos contaminados requieren de un conocimiento certero. Por lo que hay la. DE. necesidad de una mayor investigación sobre los aspectos bioquímicos y genéticos de. RE CC IO. N. la degradación de Oxamyl por los hongos. Por lo tanto, este punto necesita más investigación para estudiar la actividad de las enzimas necesarias para degradar. DI. Oxamyl a su metabolito principal y otros productos biodegradables, para que en un futuro, incluso Trichoderma se pueda aplicar directamente bajo condiciones especiales o sintetizar estos enzimas y aplicar en el campo para la biodegradación de Oxamyl para así biorremeadiar los ambientes y suelos contaminados.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. V. CONCLUSIONES. AC IÓ. Trichoderma harzianum degrada al sustrato Oxamyl a concentraciones de. CO. M UN. IC. 120, 160 y 240 ppm y utilizarlo para su crecimiento y desarrollo micelial.. Y.  No hay diferencia significativa en el crecimiento de Trichoderma harzianum. IC. A. a las concentraciones de 120, 160 y 240 ppm de Oxamyl en condiciones de. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. laboratorio.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. VI. RECOMENDACIONES. IC. Realizar evaluaciones de crecimiento lineal por un mayor tiempo para. CO. M UN. determinar el tiempo que se necesita para la degradación del nematicida.. Dar un mayor tiempo de aireación para la evaluación del crecimiento. IC. A. Y. de peso seco de T. harzianum, para así encontrar un mayor porcentaje de. RM ÁT. crecimiento en las concentraciones evaluadas.. IN FO. Incrementar las concentraciones del sustrato para definir la mínima. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. concentración en la que T. harzianum degrade a Oxamyl.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 24. Ficha técnica de Neoxamyl 240SL. Nematicida concentrado soluble Marca Registrada por SENASA. Distribuido por Neoagrum S.A.C. Disponible en: http://www.universidadperu.com/empresas/marca/20504793746-. N. Neoxamyl+240+Sl.. AC IÓ. 25. Fait A et. al. Prevención de los riesgos para la salud derivados del uso de plaguicidas en la agricultura. Organización mundial de la Salud. Italia. 2004.. IC. 26. Sánchez M, Sánchez C. Los plaguicidas. Adsorción y evolución en el suelo.. M UN. Instituto de recursos Naturales y agrobiología. Primera Edición. 1984. Trichoderma. CO. 27. Ezziyyani M, Pérez C, Sid A, Requena M, Candela M.. harzianum como biofungicida para el biocontrol de Phytophthora capsici en. A. Y. plantas de pimiento (Capsicum annuum L.). Rev Anales de Biología. 2004;. IC. 26: 35-45.. RM ÁT. 28. Agamez E, Barrero J, Zumaque L. Evaluación del antagonismo y multiplicación de Trichoderma sp. en sustrato de plátano en medio líquido. IN FO. estático. 2009; 14 (3):61-70.. 29. Esposito E, Da Silva M. Systematical and environmental application of the. DE. genus Trichoderma. Critical Review in Microbiology. 1998; 24: 89-98.. AS. 30. Sharon E et. al. Biological control of the root-knot nematode Meloidogyne. 687- 693.. EM. javanica by Trichoderma harzianum. Rev. Biological Control. 2001; 91 (7):. ST. 31. Chávez M, Montaña J. Efecto del sustrato y la exposición a la luz en la. SI. producción de una cepa de Trichoderma sp. 2008; 13 (3): 1-10.. DE. 32. Chirinos J, Leal Á, Montilla J. Uso de Insumos Biológicos como Alternativa. N. para la Agricultura Sostenible en la Zona Sur del Estado Anzoátegui. 2006;. RE CC IO. 1-11. 33. lad Y, Baker R. The role of competition for iron and carbon in suppression. DI. of chlamidospore germination of Fusarium spp. by Pseudomonas spp. Phytopathology. 1985; 75: 1053. 34. Elad Y, Chet I, Possible role of competition for nutrients in biocontrol of Pythium damping-off by bacteria. Phytopathology. 1987; 77: 190-195. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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