Efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas de piper aduncum “matico” sobre el crecimiento de candida albicans in vitro, procedentes del distrito de otuzco la libertad 2014”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. BI O. Q UI. M IC A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. “EFECTO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LAS HOJAS DE Piper. Y. aduncum “MATICO” SOBRE EL CRECIMIENTO DE Candida albicans in -. IA. vitro, PROCEDENTES DEL DISTRITO DE OTUZCO -. AC. LA LIBERTAD-2014”. FA R. M. TESIS II. PARA OPTAR EL GRADO ACADEMICO DE BACHILLER EN. DE. FARMACIA Y BIOQUIMICA. BL IO. TE. CA. AUTORES: Valle Vargas, Brenda Jakeline. Mg. Rengifo Penadillos, Roger Antonio. BI. ASESOR:. Yanac Salcedo, Albino Rogger. COASESOR(A): Dra. Luján Velásquez, Manuela. Trujillo – Perú 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios.. M IC A. Gracias a Él estamos logrando nuestros objetivos propuestos. Él siempre está a nuestro lado en cada paso dado. Gracias por fortalecer nuestro corazón e iluminar nuestra mente y. por haber. puesto en nuestro camino a aquellas maravillosas. Y. A nuestros Padres.. BI O. Q UI. personas que han sido nuestro soporte y compañía durante todo el periodo de estudio.. IA. A quienes amamos demasiado. Gracias por habernos educado, gracias por sus. AC. consejos, su amor, cariño y comprensión bridada en cada momento de nuestras. DE. FA R. sacrificio constante.. M. vidas. Gracias por estar siempre junto a nosotros brindándonos un apoyo y. CA. A nuestros Maestros.. TE. Gracias por su tiempo dedicado, por su apoyo, así como por la sabiduría que nos. BL IO. transmitieron en el desarrollo de la Tesis II, en especial a nuestro asesor Roger Antonio Rengifo Penadillos, quien con sus conocimientos, experiencia, y motivación nos ha. BI. guiado siempre, permitiéndonos de esta manera llegar a la culminación del presente trabajo de investigación. Muchas gracias por su amistad sincera, por estar siempre presto a escucharnos, por sus consejos, por su apoyo permanente e incondicional a lo largo de nuestra formación universitaria, por el tiempo compartido y por impulsar el desarrollo de nuestra formación profesional en el área de la investigación científica.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores Miembros del Jurado: En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de. M IC A. Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a vuestro elevado criterio, el presente Informe de. Q UI. Tesis II intitulado:. “Efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum “matico”. BI O. sobre el crecimiento de Candida albicans in - vitro, procedentes del distrito de. Y. Otuzco - La Libertad-2014”. AC. IA. Sea propicia esta oportunidad para manifestarles el más profundo agradecimiento a. M. nuestra Alma Mater y toda su plana docente, por su meritoria labor de educadores. FA R. y por la formación profesional que nos han brindado a través de sus enseñanzas. De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboración de los señores. CA. DE. miembros del jurado.. Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva. BI. BL IO. TE. calificación del presente informe.. __________________________ Albino Rogger, Yanac Salcedo. Trujillo, Julio del 2014. __________________________ Valle Vargas, Brenda Jakeline. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. .……………….. PRESIDENTE. M IC A. MSc. Francisco Saavedra Suarez. Q UI. ………………… MIEMBRO. BI O. MSc. Edmundo Venegas Casanova. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. Mg. Roger Antonio Rengifo Penadillos ……………….. MIEMBRO. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. RESUMEN………………………………………………………………………..i. M IC A. ABSTRACT………………………………………………………………………ii. Q UI. INTRODUCCION……………………………………………………………….1. BI O. MATERIAL Y MÉTODO………………………………………………………8. AC. IA. Y. RESULTADOS …………………………………………………………………16. FA R. M. DISCUSIÓN……………………………………………………………………..18. DE. CONCLUSIONES………………………………………………………………22. TE. CA. RECOMENDACIONES……………………………………………………..…23. BL IO. REFERENCIAS…………………………………………………………………24. BI. ANEXOS…………………………………………………………………………27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El presente estudio tiene como objetivo Determinar el efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum “matico” sobre el crecimiento de. M IC A. Candida albicans in- vitro y comparar dicho efecto con el de los discos de. Q UI. sensibilidad de Fluconazol.. Se utilizó el método de difusión de Kirby Bauer, para lo cual los discos se. BI O. impregnaron con diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico: 13,6. Y. mg/dl (10 µl), 27,2 mg/dl (20 µl), 40,8 mg/dl (30 µl) y 54,4 mg/dl (40 µl); se. IA. colocaron en placas Petri conteniendo cultivos de Candida albicans y se. AC. incubaron a 37 0 C por 24 horas; el resultado se expresó como diámetro del halo. M. de inhibición del crecimiento bacteriano; cuyos promedios fueron 7 mm para. FA R. 13,6 mg/dl (10 µl); 8.4 mm para 27,2 mg/dl (20 µl); 10.2 mm para 40,8 mg/dl. DE. (30 µl) y 13.8 mm para 54,4 mg/dl (40 µl) respectivamente. Se concluyó que el extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum. CA. “matico” inhibe el crecimiento de Candida albicans in- vitro y que la magnitud. TE. de este efecto varía de forma directamente proporcional a la concentración del. BL IO. extracto.. BI. Palabras claves: Extracto hidroalcohólico, Piper aduncum, Candida albicans. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. This study aims to determine the effect of hydroalcoholic extract of Piper. compare this effect with that of fluconazole sensitivity discs.. M IC A. aduncum "matico" leaves on the growth of Candida albicans in vitro and to. Q UI. Diffusion method Kirby Bauer to which the discs are impregnated with different concentrations of the hydroalcoholic extract was used: 13.6 mg / dl. BI O. (10 µl), 27.2 mg / dl (20 µl), 40.8 mg / dl (30 µl) and 54.4 mg / dl (40 µl); were. Y. placed in Petri dishes containing cultures of Candida albicans and incubated at. IA. 37 0 C for 24 hours; the result was expressed as the diameter of the halo of. AC. inhibition of bacterial growth; whose averages were 7 mm to 13.6 mg / dl (10. FA R. M. µl); 8.4 mm to 27.2 mg / dl (20 µl); 10.2 mm to 40.8 mg / dl (30 µl) and 13.8 mm to 54.4 mg / dl (40 µl) respectively.. DE. It was concluded that the hydroalcoholic extract of Piper aduncum leaves. CA. "matico" It inhibits the growth of Candida albicans in vitro and that the. TE. magnitude of this effect varies in direct proportion to the concentration of the. BI. BL IO. extract.. Keywords: hydroalcoholic extract, Piper aduncum, Candida albicans. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCION:. Las plantas medicinales fueron durante mucho tiempo la principal fuente de productos terapéuticos. Con la aparición de la industria farmacéutica y los avances pasaron a ser fuente de principios activos de. M IC A. de la farmacología, las plantas. medicamentos de síntesis, y más tarde, han sido desplazadas por éstos. En la. Q UI. actualidad hay una “vuelta a la naturaleza” con el consiguiente aumento en el. BI O. consumo de productos elaborados a base de plantas medicinales 1,4,12. Desde los tiempos más remotos, todas las sociedades han recurrido a las. IA. Y. plantas como fuente de medicamentos. Actualmente, según la Organización. AC. Mundial de la Salud (OMS), el 80% de la población mundial recurre a la medicina. M. tradicional para atender sus necesidades primarias de asistencia médica. La. DE. activos de las plantas6,12.. FA R. terapéutica tradicional se basa sobre todo en el empleo de extractos o principios. Un gran porcentaje de los principios activos presentes en las plantas, deben. CA. su actividad terapéutica a compuestos químicos de gran importancia denominados. TE. metabolitos secundarios. El rol de éstos compuestos en los vegetales no es del todo. BL IO. bien conocido, se sabe que no son esenciales para su desarrollo; sin embargo. BI. cumplen funciones importantes como las relacionadas con los mecanismos de defensa o protección; actúan como biocidas, repelentes y/o inhibidores de la alimentación de patógenos, herbívoros y competidores, de manera que pueden garantizar su sobrevivencia13,23.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Entre los metabolitos secundarios que pueden encontrarse distribuidos en algunas partes anatómicas o por toda la planta y a los que se les atribuye propiedades terapéuticas están: Los aceites esenciales, alcaloides, flavonoides, gomas y vitaminas que pueden obtenerse mediante la extracción, aislamiento e. M IC A. identificación de los mismos6.. El Perú, considerado el tercer país más mega diverso del planeta, ha brindado. Q UI. para el mundo grandes aportes sobre sus distintas especies vegetales gracias a la. BI O. gran variedad de pisos ecológicos y microclimas que presenta. Es así como el uso de las plantas con fines terapéuticos es de gran utilidad, ya que de ellas son. Y. obtenidas innumerables sustancias químicas beneficiosas para el ser humano. La. AC. IA. investigación, brinda la oportunidad de encontrar nuevos principios activos a partir. FA R. M. de una materia más económica y natural7,20.. Dentro de las plantas medicinales, que forman parte de esa gran mega o también llamado. DE. diversidad, se encuentra la especie Piper aduncum. CA. popularmente “cordoncillo”, “matico” o “Hierba de soldado”10,17.. TE. El “matico” es un arbusto perenne de 4 m de alto, perteneciente a la familia. BL IO. Piperaceae, prefiere los sitios húmedos, las orillas de los riachuelos y fangos. Su tallo es leñoso, ramificado de color verde o gris pálido; presenta hojas alternas,. BI. pecioladas, simples con 5 nervaduras. Inflorescencia axilar o terminal en espigas de hasta 15 cm; flores pequeñas sésiles e imperceptibles a la vista; olor característico2,17.. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el Perú crece en la costa, selva alta y baja; en los valles interandinos de la sierra crece entre 2 600 – 2 700 msnm, se ha reportado ésta especie en los departamentos de la Libertad, Amazonas, Ayacucho, Cajamarca, Cusco, Huánuco, Junín, Lambayeque, Lima, Loreto, Madre de Dios, Pasco, Piura, San Martín,. M IC A. Ucayali17. En la actualidad, el uso medicinal del “matico” es múltiple, siendo empleado. dolencias. gastrointestinales. (diarreas. agudas. o. crónicas),. BI O. antitusígeno),. Q UI. para aliviar y curar enfermedades del tracto respiratorio (antiinflamatorio y. tópicamente en infusión de las hojas para hacer gárgaras y como vulnerario (para. Y. lavar, curar llagas y heridas externas). Igualmente la tisana de éstas hojas. AC. IA. juntamente con otras como la malva son muy útiles en infecciones del aparato. M. genital, mediante la aplicación de baños de asiento y lavados vaginales, siendo blanquecinos. FA R. indicado como tratamiento en el caso de descensos fluidos y. DE. causados por el parásito Trichomonas vaginalis15,18. Entre los compuestos activos del “matico” se informa la presencia de taninos,. CA. además de alcaloides y numerosos glucósidos, especialmente de tipo flavonoides;. TE. éstos últimos presentan actividad antibacteriana,. antifúngica, e incluso puede. BL IO. ejercer efectos inhibidores sobre algunas enzimas16.. BI. La actividad antimicrobiana de extractos de plantas utilizadas en medicina. popular contra diversas bacterias y hongos, los cuales causan infecciones frecuentes, ha sido ampliamente estudiada9.. Rengifo R. en su trabajo de investigación in titulado: Determinación de la actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. “matico” sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes concluye que los extractos de matico presentan actividad antibacteriana contra los microorganismos mencionados anteriormente; así mismo menciona que ésta especie contiene flavonoides, taninos y alcaloides21.. M IC A. Braga E. y Col. (2007) estudiaron 20 plantas usadas en la medicina tradicional brasileña por su actividad antifúngica contra Candida albicans y Cryptococcus. Q UI. neoformans. Entre los 20 extractos metanólicos ensayados, los extractos del. BI O. Schinus terebintifolius, Occicum gratissimum, Cajanus cajan, y Piper aduncum. Y. fueron los más activos contra Candida albicans (CMI de 1,25 mg/mL)5.. IA. Todas las especies del género Candida se desarrollan como levaduriformes. AC. ovaladas (3 a 5 µm) que forman yemas o blastoconidias. Con excepción de. M. Candida glabrata, las especies de Candida producen también seudohifas e hifas. FA R. verdaderas19,25.. DE. Las especies del género Candida colonizan al ser humano y a otros animales. CA. de sangre caliente, por lo que se encuentran tanto en personas como en los. TE. ambientes naturales. El lugar primario de colonización es el tubo digestivo desde la. BL IO. cavidad bucal hasta el recto. También se desarrollan como comensales en la vagina y la uretra, la piel, y bajo las uñas del pie y la mano. Se ha detectado la presencia de. BI. Candida albicans, el principal agente etiológico en el ser humano: En el aire, el agua y el suelo8,19.. Candida albicans puede producir infecciones superficiales que afectan a piel, uñas y mucosas. La piel húmeda y las mucosas oral y vaginal son lugares donde la infección candidiásica es frecuente. Sin embargo, las candidiasis más 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. graves (candidiasis diseminadas) se observan en personas inmunosuprimidas o con enfermedades subyacentes que predisponen a sufrir esta infección. Durante el embarazo, la vejez o la infancia son frecuentes las candidiasis superficiales y lo mismo sucede en personas portadoras de prótesis dentales y en diabéticos. En. M IC A. personas con inmunodeficiencias celulares, como las infectadas por el VIH, es frecuente observar un incremento de las candidiasis mucocutáneas por Candida. Q UI. (Muguet) 19,25.. BI O. El tratamiento correcto de candidiasis implica el empleo de antifúngicos apropiados. La nistatina y los azoles tópicos, como ketoconazol, miconazol,. Y. clotrimazol, econazol, en el tratamiento de las candidiasis superficiales o tópicas,. AC. IA. mientras que anfotericina B, fluconazol e itraconazol en el tratamiento de las. FA R. M. candidiasis sistémicas o invasoras19,22.. En el Perú, es importante señalar el incremento actual en el número de. DE. infecciones producidas por hongos y su gravedad. Esto se debe fundamentalmente: Al uso creciente de fármacos inmunodepresores como por ejemplo los utilizados en. CA. el tratamiento del cáncer y en la prevención del rechazo en los transplantes de. TE. órganos; la existencia de enfermedad asociada al déficit inmunitario(como el sida),. BL IO. y la utilización, muchas veces no justificada, de antibióticos de amplio espectro. BI. durante períodos prolongados de tiempo.. Los fármacos antimicóticos disponibles actualmente, tiene una toxicidad. importante o causan resistencia, razón por la cual se está procurando la creación de nuevos agentes antifúngicos más potentes pero sobre todo más seguros que los existentes actualmente. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Es de gran importancia la realización de estudios in-vitro, químicos, farmacológicos y toxicológicos para descubrir nuevos agentes antimicóticos que sean clínicamente útiles. Piper aduncum “matico”, es una especie vegetal con propiedades. M IC A. antimicóticas que ha sido poco estudiada y dado que es una planta que no necesita de muchos cuidados para su crecimiento y proliferación, podría significar una. Q UI. buena alternativa para el tratamiento de enfermedades fúngicas entre ellas la. BI O. causada por Candida albicans.. Y. El creciente auge de la medicina tradicional nos lleva al descubrimiento de. IA. nuevos agentes terapéuticos; y con ello, las plantas medicinales, están encontrando. AC. su camino a convertirse en productos farmacéuticos útiles a la sociedad. Estas son. FA R. DE. trabajo de investigación.. M. algunas de las razones por las cuales se tomó interés en la realización del presente. CA. En base a los antecedentes citados nos planteamos el siguiente problema: ¿Cuál. TE. es el efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum “matico”. BL IO. sobre el crecimiento de Candida albicans in- vitro, procedentes del distrito de. BI. Otuzco - La Libertad-2014?. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Constituyen los objetivos del presente Trabajo de Investigación:  Determinar el efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum “matico” sobre el crecimiento de Candida albicans in- vitro, procedentes del. M IC A. distrito de Otuzco - La Libertad-2014..  Comparar el efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum. Q UI. “matico” sobre el crecimiento de Candida albicans in- vitro, procedentes del. BI O. distrito de Otuzco - La Libertad-2014 con el de los discos de sensibilidad de. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. fluconazol.. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y MÉTODO:. 2.1. MATERIALES:. 2.1.1. Material Botánico:. distrito de Otuzco durante el mes de mayo-2014.. Q UI. 2.1.2. Material Biológico:. M IC A. 500 g de hojas de Piper aduncum “matico” que fueron recolectadas en el. Se utilizó cepas de Candida albicans, las mismas que fueron. BI O. proporcionadas por el Departamento Técnico de Microbiología y. Y. Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad. AC. IA. Nacional de Trujillo.. FA R.  Material de vidrio:. M. 2.1.3. Materiales y Equipos de Laboratorio:. Papel filtro. TE. -. CA.  Otros:. DE. - El de uso común en el laboratorio.. BI. BL IO. -. Asa bacteriológica.. -. Frascos de vidrio color ámbar.. -. Mechero de alcohol.. -. Micropipeta 100 µl.. -. Placas Petri.. -. Puntas estériles para micropipeta.. -. Regla milimetrada.. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. -. Sacabocado.. -. Tubos de ensayo..  Equipos de Laboratorio:. M IC A. - Balanza Analítica “Sartorius” - Serie: BP301S.. Q UI. - Baño María - Serie: DINI12877-KI.. BI O. - Bomba de vacío “General Electric” - Serie: 5KH33DM68.. Y. - Espectrofotómetro “HP” - Serie: 8450 con arreglo de diodos.. IA. - Estufa “Memmert”- Serie: UM-300.. M. AC. - Refrigeradora “Electrolux” - Serie 734498.. DE. FA R. - Autoclave AIRSHOFT “E10SP” - Serie: 0102998-01.. 2.1.4. Material Químico:. CA.  Reactivos y solventes:. BL IO. TE. -Ácido Sulfúrico q.p.. BI. - Agua destilada. -Etanol al 50 %. -Etanol 96º.. -Solución salina fisiológica.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Medios de cultivo: - Agar Mueller Hinton (Laboratorio Merck). - Agar Sabouraud (Laboratorio Merck).  Discos de sensibilidad:. BI O. Q UI. 2.2. MÉTODO:. M IC A. - Discos de sensibilidad de Fluconazol.. 2.2.1. RECOLECCIÓN Y SELECCIÓN DE LA MATERIA PRIMA:. Y. Se recolectaron 500 g de hojas de Piper aduncum “matico” en el distrito. IA. Otuzco, Departamento de La Libertad durante el mes de mayo -2014.. AC. En esta etapa se descartó toda parte de la muestra que no reunió las. FA R. M. condiciones necesarias para su utilización; se eliminó las hojas secas, marchitas, que estuvieron cubiertas por hongos, además de materias. DE. extrañas como tallos, raíces, tierra, etc.. CA. 2.2.2. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA:. TE. a. Lavado de la droga: Luego de la separación de las sustancias. BI. BL IO. extrañas, se procedió a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y después con agua destilada.. b. Secado de la muestra: Después de lavar las hojas maduras de Piper aduncum “matico”, se dejó secar bajo la sombra por espacio de dos días, y en seguida se continuó con el secado en estufa a una temperatura menor de 40°C durante 24 horas.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c. Pulverización y tamizaje: Se pulverizó las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizó el polvo de las hojas con un tamiz No 0,75 para clasificar el tamaño de partícula. El producto obtenido se guardó herméticamente en frascos de. M IC A. vidrio de boca ancha y aislada de la luz hasta el momento de la. 2.2.3. OBTENCIÒN DEL EXTRACTO14:. Q UI. extracción.. BI O. Para la extracción de los flavonoides se reflujó 5 g de polvo de las hojas. Y. de Piper aduncum “matico” durante 2 horas con 200 ml de ácido. IA. sulfúrico al 10 % y 200 ml de etanol al 50%, luego se enfrió y filtró al. AC. vacío, lavándose el residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de. FA R. M. etanol al 50 % para desecharlo finalmente; el filtrado obtenido se evaporó en baño maría hasta la mitad del volumen inicial,. DE. posteriormente se enfrió en baño de hielo durante 30 minutos.. CA. Se pesó un papel filtro y luego se filtró al vacío, lavando el precipitado o. C).. TE. formado con 4 porciones de 50 ml de agua destilada fría (10 -15. BL IO. Se eliminó el filtrado y los lavados, y el papel filtro se secó en una estufa a temperatura de 40 oC durante 12 horas. Luego el residuo más el. BI. papel filtro se pesaron y por diferencia se obtuvo la cantidad de extracto seco.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.4.. DOSIFICACIÓN DE LOS EXTRACTOS: - Con el extracto seco obtenido se preparó una solución que tuvo una concentración de 13,6 mg/ml.. M IC A. 2.2.5. PREPARACIÓN DE LOS DISCOS: - Se esterilizaron los discos de papel filtro (de 6 mm de diámetro), los. Q UI. cuales constituyeron los discos de sensibilidad.. - Luego se colocó con la ayuda de una micropipeta la solución. IA. Y. 10, 20, 30 y 40 µl respectivamente.. BI O. preparada anteriormente en los discos de sensibilidad a volúmenes de. AC. 2.2.6. ENSAYO DEL EFECTO DELEXTRACTO HIDROALCOHÓLICO. FA R. M. SOBRE EL CRECIMIENTO DE Candida albicans, IN-VITRO: Se realizó utilizando el método de Difusión en discos-Método de Kirby. DE. Bauer11.. a. Reactivación de los cultivos de Candida albicans:. CA. A partir de los cultivos puros de Candida albicans, se sembró al. mismos que se incubaron a 37 oC por un espacio de 24- 48 horas.. BI. BL IO. TE. hongo en tubos de ensayo conteniendo Agar Sabouraud, los. b. Preparación y estandarización de los inóculos de Candida albicans: A partir de los cultivos reactivados del hongo se prepararon suspensiones en solución salina fisiológica estéril hasta alcanzar la densidad similar a la turbidez del tubo No. 0,5 del Nefelómetro de McFarland (1,5 x 108 células/mL). 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. c. Siembra en placas: Los cultivos estandarizados de Candida albicans se sembraron por superficie en las placas Petri conteniendo Agar Mueller Hinton. Una vez realizada la siembra de Candida albicans, se eliminó el. M IC A. excedente y se llevaron a secar las placas Petri en estufa por 5. Q UI. minutos aproximadamente.. BI O. d. Aplicación de los extractos:. En cada placa sembrada se colocaron los discos de sensibilidad. Y. antes preparados, correspondientes a los volúmenes de 10, 20, 30 y. AC. IA. 40 µl del extracto hidroalcohólico de Piper aduncum “matico”, así. M. como los discos de sensibilidad que contenían fluconazol.. FA R. Cada disco se enumeró del 1 al 4 según el volumen respectivo; se dejaron reposar por 10 minutos a temperatura ambiente y luego se. CA. DE. incubaron a 37 ºC por 24 horas.. TE. Se realizaron 5 ensayos.. BI. BL IO. e. Evaluación del efecto del extracto hidroalcohólico: La evaluación del efecto antimicótico se realizó midiendo con una regla milimetrada el halo de inhibición de crecimiento de Candida albicans; y los resultados se expresaron como diámetro (mm) de halo de inhibición.. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.7. EVALUACIÓN DEL EFECTO DEL ETANOL (SOLVENTE): La evaluación del efecto del etanol (solvente) sobre el crecimiento de Candida albicans se realizó colocando en los discos de papel filtro etanol al 50 %; luego se incubaron dichos discos a 37 ºC por 24 h.. HIDROALCOHÓLICO. EFECTO. CON. EL. SENSIBILIDAD DE FLUCONAZOL.. DEL. DE. EXTRACTO. M IC A. DEL. LOS. DISCOS. DE. Q UI. 2.2.8. COMPARACIÓN. BI O. Se realizó mediante el método de Kirby Bauer, para lo cual se utilizaron discos de sensibilidad de fluconazol.. IA. Y. La medida del diámetro de los halos de inhibición del crecimiento de. AC. Candida albicans, por el contraste se comparó con el diámetro de los. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. halos de inhibición de los discos de sensibilidad de fluconazol.. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3. ANÁLISIS DE RESULTADOS: El análisis estadístico se realizó aplicando la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA) para observar si hay diferencia significativa entre las. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. diferentes concentraciones3.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS:. Cuadro 1: Efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum “matico” sobre el crecimiento de Candida albicans. Cantidad de Extracto (µL). M 02. M 03. 10 µL. 7. 7. 7. 20 µL. 9. 9. 8. 30 µL. 12. 10. 10. 40 µL. 15. 14. M 04. 7. 8. 8.4. 10. 9. 10.2. 14. 13. 13.8. AC. IA. Y. 8. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. 13. Promedio. 7. BI O. 7. M 05. Q UI. M 01. M IC A. Diámetro de Inhibición del crecimiento (mm). 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cuadro 2: Comparación del Efecto del extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum “matico” con el de Fluconazol sobre el crecimiento de Candida albicans in – vitro.. Diámetro de inhibición (mm). Fluconazol. 7. Difusión. 20 µL. 8.4. Difusión. 30 µL. 10.2. 40 µL. 13.8. BI O. Q UI. 10 µL. M IC A. Cantidad de Extracto (µL). Difusión. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. Difusión. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN:. Las plantas son una fuente invaluable de nuevas moléculas biológicamente activas. Ellas producen diversos metabolitos secundarios, muchos de los cuales presentan actividad antifúngica. Entre los compuestos más conocidos se encuentran:. M IC A. flavonoides, fenoles, glicósidos de fenoles, saponinas, etc9.. Q UI. Los hongos están bien adaptados para utilizar una gran variedad de sustratos como fuente de carbono, nitrógeno y energía. De allí la dificultad que presenta su control. BI O. ya que estos organismos pueden causar enfermedades muy graves en los seres. Y. humanos9.. AC. IA. En el presente Trabajo de investigación se determinó el efecto del extracto. M. hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum “matico” sobre el crecimiento de. FA R. Candida albicans in – vitro mediante el método de disco difusión (Kirby- Bauer)11.. DE. La prueba de difusión en disco se basa fundamentalmente en la capacidad de muchos agentes antimicrobianos de difundir en el agar creando un gradiente. CA. continuo de concentración. Si el disco que contiene el agente antimicrobiano se. TE. deposita sobre una placa recién inoculada, se produce la inhibición del crecimiento. BL IO. del microorganismo analizado en un punto del gradiente y da como resultado un. BI. área concéntrica al disco de inhibición del crecimiento denominado también halo de inhibición. Esta área, al ser proporcional a la CMI permite la distinción de cepas sensibles, resistentes o intermedias.. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En el cuadro 1 se observa que las concentraciones del extracto hidroalcohólico de las hojas de Piper aduncum “matico” producen inhibición del crecimiento de Candida albicans mediante la formación de halos, y que el efecto aumenta a medida que se incrementa la concentración de dicho extracto.. M IC A. El disco impregnado con el extracto al entrar en contacto con la superficie húmeda del agar, absorbe agua a la vez que el extracto se difunde radialmente a través del. Q UI. agar por gradiente de concentración, lo que suprime el crecimiento de Candida. BI O. albicans en una zona circular alrededor del disco o halo de inhibición; el diámetro formado a las distintas concentraciones permite considerar con poder inhibidor al. Y. extracto de hojas de Piper aduncum “matico” contra el crecimiento de Candida. AC. IA. albicans.. FA R. M. Lo encontrado guarda relación con el trabajo de investigación de Flórez, E. y Col, quienes evaluaron las propiedades antifúngica y/o Leishmanicida de catorce. DE. especies del Género Piper (entre ellas Piper aduncum) frente a Candida albicans, N. crassa, L. braziliensis, L. amazonensis y L. donovani, encontrando que los. CA. extractos de las hojas presentan actividad frente a los microorganismos citados. TE. anteriormente y que la magnitud de dicha actividad aumenta de forma proporcional. BL IO. a las concentraciones de los extractos.. BI. Así mismo según el Anexo 1 se observa que al aplicar la prueba de análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA) se encontró que los halos de inhibición de. Candida albicans, producidos por las concentraciones ensayadas del extracto hidroalcohólico de las hojas de Piper aduncum “matico”, tienen una diferencia estadísticamente significativa debido a que P=0.009 que es ˂ 0.05 (F=3.84 ). 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Así tenemos que a 13,6 mg/dl (10 µl), 27,2 mg/dl (20 µl), 40,8 mg/dl (30 µl) y 54,4 mg/dl (40 µl) del extracto hidroalcohólico de las hojas de Piper aduncum “matico”, el efecto en la inhibición del crecimiento de Candida albicans aumenta al incrementar la concentración de dicho extracto.. M IC A. Esta inhibición del crecimiento de Candida albicans por acción del extracto hidroalcohólico de las hojas de Piper aduncum “matico”, puede darse debido a. Q UI. que es una mezcla compleja de metabolitos secundarios, los cuales se extrajeron. BI O. con el solvente, en este caso etanol; se trataría de moléculas de elevada polaridad,. Y. entre los cuales según estudios realizados se incluyen a los flavonoides.. IA. La información citada anteriormente se contrasta con el estudio de Wen Hui X. y. AC. Cong X. Li in titulado Antifungical compounds from Piper Species donde. M. realizaron una revisión basada en las estructuras químicas y actividades. FA R. antifúngicas de 68 compuestos aislados de 22 especies del género Piper de la. DE. familia de plantas Piperaceae. Estos compuestos incluyen amidas, flavonoides, derivados del ácido benzoico y fenilpropanoides. En la presente investigación se. CA. concluye que estos compuestos serían los responsables de la actividad contra. TE. importantes hongos clínicamente patógenos y algunos de estos compuestos podrían. BL IO. servir como pautas para la industria farmacéutica24.. BI. Así mismo Flórez, E. y Col. en su trabajo de investigación in titulado Estudio Fitoquímico de catorce especies del Género Piper con actividad antifúngica y/o Leishmanicida in vitro concluyen que los extractos de las hojas de dicho Género presentan actividad frente a Candida albicans, N. crassa, L. braziliensis, L.. amazonensis y L. donovani así mismo mediante estudios cromatográficos biodirigidos, se han aislado e identificado compuestos responsables de la 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. actividad antifúngica y Leishmanicida de Piper aduncum como 5,7dihidroxiflavonona, 5,7-dihidroxi-4 metoxi- flavonona.. En este sentido, la inhibición del crecimiento de Candida albicans atribuye a los flavonoides presentes en las hojas de Piper aduncum, sin embargo, los metabolitos. M IC A. activos varían incluso dentro de la misma especie según diferentes condiciones a las que se exponga; por lo que no podemos atribuir la actividad biológica a una. Q UI. molécula en especial, sino al extracto como tal, ya que es posible que ocurra efectos. BI O. sinérgicos entre sus componentes.. Y. En cuanto a la comparación del extracto hidroalcohólico con el medicamento. IA. antimicótico (Fluconazol) Según el cuadro 2: Se observa que los discos de. AC. sensibilidad que contenían el medicamento sólo presentaron difusión en las placas. FA R. M. más no se formó el halo de inhibición respectivo. Una de las razones fundamentales para explicar dichos resultados se debería a la manipulación errónea de dichos. BI. BL IO. TE. CA. DE. discos por lo que no se observó el resultado esperado.. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES:  El extracto hidroalcohólico de las hojas Piper aduncum. “matico” inhibe el. crecimiento de Candida albicans in- vitro. La magnitud del efecto de dicho extracto se incrementa a medida que aumenta la concentración del mismo desde. M IC A. 13,6 mg/dl (10 µl) hasta 54,4 mg/dl (40 µl).. Q UI.  Con respecto a los discos de sensibilidad de Fluconazol, presentaron difusión del. BI O. medicamento más no se observó la formación de halos de inhibición; esto pudo. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. deberse a la manipulación errónea en cuanto al traslado de dichos discos.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. RECOMENDACIONES. - Realizar estudios farmacológicos, toxicológicos y clínicos de la especie Piper aduncum. “matico” con la finalidad de recomendar su uso en la. M IC A. medicina alternativa como antimicótico para enfermedades causadas por. Q UI. Candida albicans.. -Realizar estudios por cromatografía, espectroscopia de masas y resonancia. BI O. magnética nuclear con la finalidad de identificar, aislar y purificar al. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. metabolito responsable de su actividad farmacológica.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Abreu O y Col. Farmacognosia, farmacobotánica, farmacogeografía y fármacoetimología del platanillo de Cuba (Piper aduncum subespecie ossanum). Revista Cubana de Plantas Medicinales. [en línea]. 2012 [consultado 03 de abril del 2014];. M IC A. 17(2) 181-193. Disponible en:. Q UI. http://www.imbiomed.com.mx/1/1/articulos_seccion=517_ejemplar_revista=77 2. Alfred E. Invasion of Piper aduncum in the shifting cultivation systems of Papua. BI O. New Guinea [en línea]. Holanda: Wageningen University; 2006 [consultado 06 de. Y. abril del 2014].Disponible en:. IA. http://www.alfredhartemink.nl/PDF/2006/Piperaduncum/book20Hartemink.pdf. AC. 3. Álvarez R. Estadística aplicada a las Ciencias de la Salud. España: Díaz de Santos;. M. 2007.p 43-50, 60-72.. FA R. 4. Avello M y Cisternas I. Fitoterapia, sus orígenes, características y situación en. DE. Chile. Revista Médica de Chile. [en línea]. 2010 [consultado 12 de abril del 2014]; 138(10) 1288-1293. Disponible en:. y Col. Antileishmanial and antifungal activity of plants used in. TE. 5. Braga E.. CA. http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034988720101100014. BL IO. traditional medicine in Brazil. Journal Ethnopharmacol. [en línea]. 2007. BI. [consultado 15 de abril del 2014] 53 (4). 1125-1129.Disponible en:. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17234373. 6. Brunenton J. Farmacognosia. Fitoquímica-Plantas medicinales.2°ed. España: Acribia; 2001.p.405-406,784-795.. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 7. Cañigueral S y Col. Plantas Medicinales y Fitoterapia. España. Revista Farmacéutica. [en línea]. 2003 [consultado 16 de abril del 2014]; 22(3) 265-278. Disponible en:. 8.. M IC A. http://www.latamjpharm.org/trabajos/22/3/LAJOP_22_3_6_1_S966JS548J.pdf. Carpenter P. Microbiología. 4 ed. México: Interamericana S.A; 2002. p.300-. Q UI. 306,320-322.. BI O. 9. Davicino R. y Col. Actividad antifúngica de extractos de plantas usadas en medicina popular en Argentina .Rev. Bióloga. Universidad Nacional Mayor de San. Y. Marcos [en línea] 2007 [consultado 18 de abril del 2014]; 14(2): 247-251.. AC. IA. Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/rpb/v14n2/a11v14n02.pdf. M. 10. Global Invasive Species Database. Piper aduncum. [en línea]. E.E.U.U:2003. FA R. [consultado 18 de abril del 2014]. Invasive Species Specialist Group. Disponible en: http://www.issg.org/database/species/ecology.asp?si=332&fr=1&sts=sss. DE. 11. Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos para la Prueba de. CA. sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión .Serie de Normas. TE. Técnicas No 30. Lima.2002.p. 9-14. BL IO. 12. Jiménez J. Plantas medicinales. Medicina naturista fitoterapia. [en línea]. España: Universidad de Lanzarote; 2007 [consultado 20 de abril del 2014]. Disponible en:. BI. http://www.medicinanaturista.net//medicina_naturista_fitoterapia.pdf. 13. Kuklinski C. Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de origen natural. Barcelona: Omega S.A.; 2000.p.53, 106, 234,296.. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 14. Miranda M. y Col. Validación de 2 métodos espectrofotométricos para la cuantificación de taninos y flavonoides (quercetina) en Psidium guajaba. Revista Cubana [en línea]. 2000 [consultado 22 de abril del 2014]; 34(1)70-74. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo. =S003475152000000100007&script=sci_arttext. M IC A. 15. Miranda M. Evaluación de la actividad antiinflamatorio de Piper elongatum (Matico) administrado por la vía oral, comparado con la Indometacina en Cobayos.. Q UI. Revista BVS .Universidad Nacional Mayor de San Marcos. [en línea]. 2001 [consultado 23 de abril del 2014]; 10(19) 50-54. Disponible en:. BI O. http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/situa/2001_n19/evalua_antiinfla.html. Y. 16. Miranda N. Mori I. Cuantificación por el método espectrofotométrico de. IA. flavonoides totales en el extracto de hojas de Piper aduncum. [Tesis para obtener. AC. el grado de Bachiller en Farmacia y Bioquímica].Perú: Universidad Nacional de. FA R. M. Trujillo, Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2009. 17. Mostacero J y Col. Taxonomía de las Fanerógamas Útiles del Perú .Vol. II. Perú:. DE. Normas legales S.A.C; 2002 .p.232-234-744. 18. Muñoz O. Plantas medicinales de uso en Chile. Química y Farmacología. [en. CA. línea] Santiago de Chile: Universidad de Chile; 1999 [consultado 25 de abril del. TE. 2014]. Disponible en:. BL IO. http://books.google.com.pe/books?id==el+matico+y+sus+usos+medicinales&hl. BI. 19. Murray P. Microbiología médica. 6°ed.España: Elsevier; 2009.p.751-757 20.. Organización de las Naciones Unidas para el desarrollo Industrial. (ONUDI).Informe final. El Futuro de los productos andinos en la región alta y los valles centrales de los andes/plantas medicinales. [en línea]. 2008 [consultado 26 de abril del 2014]. Disponible en: http://www.unido.org/fileadmin/user_media/Services/BEP/0853895_Ebook.PDF 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 21. Rengifo R. Determinación de la actividad antibacteriana in vitro de los extractos de hoja de Piper aduncum sobre Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes. [Tesis para obtener el grado de Maestro en Farmacia y Bioquímica con mención en Productos Naturales Terapéuticos.].Perú: Universidad Nacional de Trujillo,. M IC A. Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2009. 22. Romero R. Microbiología y Parasitología Humana. 3 ed. México: Médica. Q UI. Panamericana; 2007.p. 1199-1205.. 23. Thomson W. Guía práctica Ilustrada de las Plantas Medicinales. 3°ed. España:. BI O. Blume S.A.; 1996. p.10-21.. Y. 24. Wen-Hui X. and Cong X. Li . Antifungical compounds From Piper SpeciesJournal. AC. IA. list. [en línea]. 2011 [consultado 30 de abril del 2014] 7(4). 1172-1175. Disponible. M. en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3845523/. FA R. 25. Zarper C. Introducción a la Microbiología Médica. Los Hongos Patógenos y las. BI. BL IO. TE. CA. DE. micosis. Argentina: El Ateneo; 2001. p.22-28.. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Anexo 1. ANÁLISIS DE VARIANZA DE UN FACTOR. Promedio 25 10.75 10 9.5 6.25 9.75. Varianza 166.6666667 12.25 8.666666667 7 60.25 9.583333333. M IC A. Suma 100 43 40 38 25 39. Q UI. Cuenta 4 4 4 4 4 4. BI O. Grupos UL M1 M2 M3 M4 M5. Grados de libertad. 894.7142857. 5. 814.25. 21. Total. 1708.964286. Promedio de los cuadrados. IA. Suma de cuadrados. AC. Origen de las variaciones Entre grupos Dentro de los grupos. Y. ANÁLISIS DE VARIANZA. 3.8458. Probabilid ad. Valor crítico para F. 0.0095907. 2.572711641. FA R. M. 149.119. F. 38.7738. BI. BL IO. TE. CA. DE. 27. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 2 FOTOGRAFÍAS DE LA INVESTIGACIÓN REALIZADA. Recolección y Selección de la Materia Prima:. Se eliminó las hojas secas, marchitas, que estuvieron cubiertas por hongos, además de materias extrañas como tallos, raíces, tierra.. Lavado y Secado de las muestras:. BI. BL IO. TE. CA. DE. 2.. FA R. M. AC. . IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. 1.. Se procedió a lavar el material vegetal con agua potable a chorro y después con agua destilada. Luego se dejó bajo la sombra por espacio de 2 días, en seguida se continuó con el secado en estufa a una temperatura menor a 40°C durante 24 horas.. 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.. Pulverización y Tamizaje:. BI O. Q UI. M IC A. Se pulverizó las hojas secas con la ayuda de un mortero y luego se tamizó el polvo de las hojas con un tamiz No 0.75 para clasificar el tamaño de partícula.. El producto obtenido se guardó herméticamente en. Y. frascos de vidrio de boca ancha y aislada de la luz. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. hasta el momento de la extracción.. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Obtención del extracto:. Y. BI O. Q UI. M IC A. 4.. IA. Para la extracción de los flavonoides se reflujó 5 g de polvo de la hoja. AC. de Piper aduncum durante 2 horas con 200 ml de ácido sulfúrico al. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. 10 % y 200 ml de etanol al 50 %.. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AC. Luego se enfrió y posteriormente se filtró al vacío, lavándose el. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. desecharlo finalmente.. M. residuo contenido en el papel filtro con 30 ml de etanol al 50 % para. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Y. BI O. Q UI. M IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IA. El filtrado obtenido se evaporó en baño maría hasta la mitad. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. del volumen inicial.. 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Posteriormente se enfrió el filtrado en baño de. IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. hielo durante 30 minutos.. AC. Luego se filtró al vacío, lavando el precipitado formado con 4 porciones de 50 mL de agua destilada fría (10-15 ° C). Se. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. eliminó el filtrado y los lavados.. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) AC. IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El filtro se pesó. Luego se secó en una estufa a temperatura de. M. 40 oC durante 12 horas y por diferencia se halló el peso del. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. extracto seco.. 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. EFECTO DEL EXTRACTO HIDROALCOHÓLICO DE LAS HOJAS PIPER ADUNCUM “MATICO” SOBRE EL CRECIMIENTO DE CANDIDA ALBICANS IN - VITRO. BI. BL IO. TE. CA. DE. FORMACIÓN DE HALOS DE INHIBICIÓN EN PLACAS. 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. MEDICIÓN DE HALOS DE INHIBICIÓN CON REGLA MILIMETRADA. 37. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M. AC. IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. PLACA DEL BLANCO: ALCOHOL AL 50%. FA R. LECTURAS. DE. 10 UL 20 UL. NO SE FORMARON HALOS DE INHIBICIÓN. CA. 30 UL. BI. BL IO. TE. 40 UL. 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M IC A. PLACA I:. AC. IA. Y. BI O. Q UI. Placa I. Placa II. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. PLACA II:. 39. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PLACA III:. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q UI. M IC A. Placa III. Placa IV. BI. BL IO. TE. CA. DE. PLACA IV:. 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M IC A. PLACA V:. BI. BL IO. TE. CA. DE. FA R. M. AC. IA. Y. BI O. Q UI. Placa V. 41. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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