Efecto de la testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. ica ció. át ica. yC. om un. PROYECTO DE TESIS. n. ESCUELA DE MEDICINA. In. fo r. m. “EFECTO DE LA TESTOSTERONA EN LA GLICEMIA DE RATAS DIABETICAS TIPO 1”. de. AUTOR. ASESOR. st. em. as. DARWIN OLIVER DESPOSORIO ARMESTAR. Di re cc. ió. n. de. Si. DR. LUIS ARTEAGA TEMOCHE. TRUJILLO – PERÚ 2015 UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO Fundada por el Libertador Don Simón Bolívar el 10 de Mayo de 1824. FACULTAD DE MEDICINA. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ica ció. n. Dedicatoria. A mi padre Justo German, quién me enseño que el fruto del trabajo es la. om un. recompensa que se siembra desde niño;. yC. a mi madre Pola Isabel, por su ejemplo de coraje y liderazgo transmitido; a mis hermanos Cristina Isabel, Jancarlo German, Alan Jossey y Brisette. át ica. Antuanet porque tengo parte de su corazón en el mío;. m. a mis abuelos, a mi Tina… los amo familia.. fo r. A mis maestros, docentes, administrativos y amigos de mi Facultad de. perseverancia y dedicación.. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo que me vieron escalar con. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ÍNDICE. n. 1. RESUMEN ……………………………………………………pág.4. ica ció. 2. ABSTRACT……………………………………………………pág.5. 3. INTRODUCCIÓN …………………………………………….pág.6. om un. 4. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ………………….…pág.9. yC. 5. HIPÓTESIS ……………………………...………………...…pág.9 6. OBJETIVOS ……………………………...………………..…pág.9-10. át ica. 7. MATERIALES Y MÉTODO ……………..…………………..pág.10-20. m. 8. RESULTADOS ………………………………….…………....pág.20-26. fo r. 9. DISCUSIÓN …………………………………….………….....pág.27-28. In. 10. CONCLUSIÓN ………………………………………..……....pág.28. de. 11. RECOMENDACIONES …………………………….………..pág.28. em. as. 12. AGRADECIMIENTOS…………………………………….…..pág. 29. st. 13. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS …………………….....pág.30. Di re cc. ió. n. de. Si. 14. ANEXOS ………………………………………………………pag.35-41. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. EFECTO DE LA TESTOSTERONA EN LA GLICEMIA DE RATAS DIABÉTICAS TIPO 1 Effect of testosterone in glucose serum levels of type 1 diabetics rats. ica ció. n. RESUMEN:. Introducción: Diabetes Mellitus tipo 1 (DM1) experimental es inducido. om un. por aloxano ®, destruyendo directamente células β pancreáticas. La testosterona en ratas induce hiperinsulinemia, mientras que en el páncreas. los. andrógenos. pueden. funcionar. como. inductores. yC. angiogénicos del crecimiento celular. Objetivo: determinar si la testosterona intramuscular disminuye la glicemia en ayunas y post. át ica. prandial en rattus novergicus con DM1. Materiales y método: A 24 rattus novergicus entre 2.5 - 3 meses, 190-250 gramos, se les indujo. fo r. m. DM1 (glicemia mayor de 200 mg/dL) con aloxano® intraperitoneal. Se. In. formó 3 grupos, un control y 2 experimentales (con 1 y 2 dosis de T respectivamente) y se midieron las glicemias en ayunas y postprandial. de. (1 y 2 horas) en la mañana y tarde. Se elaboró láminas Histológicas de Resultados:. em. celular.. as. páncreas en Hematoxilina-Eosina para verificar daño y posterior conteo La. glicemia. de. las. mañanas. disminuyó. st. significativamente (sig.) comparando los grupos en ayuna: control, con 1. Si. dosis de T (α=0.002) y con 2 dosis de T (α=0.000); en post prandial (2. de. horas) grupo control, con 1 dosis de T (α=0.007) y con 2 dosis de T. n. (α=0.007) y la glicemia en la tarde disminuyó sig comparando los grupos. ió. en ayuna: grupo control, con 1 dosis de T (α=0.019) y con 2 dosis de T. Di re cc. (α=0.022); además el conteo de células de islote pancreático aumentó de forma no significativa en las ratas con T (α=0.271). Conclusión: La Testosterona desciende la glicemia significativamente en ayunas y postprandial (2 horas) predominantemente en la mañana. Palabras claves: diabetes, aloxano, testosterona, glicemia, ayunas, posprandial. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ica ció. n. ABSTRACT Introduction: Diabetes Mellitus type 1 (DM1) is induced experimental alloxan ®, directly destroying pancreatic β cells. Rat, testosterone (T). om un. induces hyperinsulinemia in the pancreas while androgens can function as inductors allowing angiogenic cell growth. Objective: To determine. yC. whether intramuscular testosterone decreases fasting glucose and postprandial in rattus norvegicus with DM1. Materials and Methods: A 24. át ica. rattus norvegicus between 2.5 - 3 months, 190-250 grams, were induced DM1 (high blood glucose 200 mg / dL) with intraperitoneal aloxano®. 3. m. groups, one control and two experimental (with 1 or 2 doses of T. fo r. respectively) was formed and blood glucose were measured in fasting and. In. postprandial (1 to 2 hours) in the morning and evening. Histological sheets. de. pancreas was developed in hematoxylin-eosin for subsequent cell count.. as. Results: The morning glycemia decreased significantly (sig.) Comparing. em. fasting groups: control, with 1 dose of T (α = 0.002) and with 2 doses of T (α = 0.000); in post prandial (2 hours) control group with 1 dose of T (α =. Si. st. 0.007) and with 2 doses of T (α = 0.007) and glucose in the afternoon. de. decreased sig comparing groups fasting: control group 1 doses of T (α = 0.019) and with two doses of T (α = 0.022); also counts increased. ió. n. pancreatic islet cells was not significant in rats with T (α = 0.271).. Di re cc. Conclusion: T decreases significantly glycemia fasting and postprandial (2 hours) predominantly in the morning. Keywords: Diabetes, alloxan, testosterone, glucose, fasting, postprandial. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. INTRODUCCIÓN La glucosa es el regulador esencial de la secreción de insulina por las células β pancreáticas, ejercen también su influencia aminoácidos, gastrointestinales. y. neurotransmisores.. La. n. péptidos. ica ció. cetonas,. concentración de glucosa que pasa de 70mg/100 ml estimula la síntesis 1. esta última es una hormona anabólica muy potente, con. om un. de insulina,. múltiples efectos sintéticos y promotores del crecimiento, su función. yC. metabólica celular principal es aumentar la velocidad de transporte de. át ica. glucosa para aumentar la provisión de energía. 2. La diabetes mellitus (DM) comprende un grupo de trastornos metabólicos. fo r. m. frecuentes que comparten el fenotipo de la hiperglucemia. Dependiendo. In. de la causa de la DM, los factores que contribuyen a la hiperglicemia. de. pueden ser la deficiencia de secreción de insulina, decremento del. as. consumo de glucosa o aumento de la producción de ésta. La DM se. em. clasifica con base en el proceso patógeno que culmina en hiperglicemia,. Si. st. uno de los tipos de DM, es la Diabetes Mellitus tipo 1 (DM1) cuyo. de. resultado es la deficiencia completa o casi total de insulina.. 3. El avance. ió. n. científico en relación con el conocimiento de la DM1 ha sido posible. Di re cc. mediante el uso de modelos animales como roedores, la drogas más utilizada para inducir DM1 ha sido el Aloxano ®. La DM1 se caracteriza por la destrucción de las células β de los islotes de Langerhans, conduciendo a una insuficiencia de carácter progresivo y casi total de insulina. Clínicamente, los animales afectados evidencian hipoinsulinemia e hiperglicemia persistente. La DM1 inducida mediante Aloxano® es muy. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. similar a la presentación natural de la enfermedad. El Aloxano® posee acción necrosante específica y selectiva sobre las células β de los islotes de Langerhans. Los animales tratados con Aloxano® presentan la. ica ció. n. mayoría de las complicaciones asociadas a la diabetes. 4 Por otro lado, en los años 80, se estableció que el síndrome de ovario. om un. poliquístico relacionaba la diabetes con el hirsutismo, la expresión clínica de un estado de insulinorresistencia (IR) e hiperinsulinismo secundario, se. yC. asociaba a un hiperandrogenismo de origen ovárico.. 5. Las ratas. át ica. hiperandrogenizadas, desarrollan una insulinorresistencia caracterizada. m. por hiperinsulinemia. 5. fo r. Resulta interesante que la capacidad de secreción de insulina de los. In. islotes de ratas hiperandrogenizadas esté aumentada a concentraciones. de. estimulatorias de glucosa cercanas al rango fisiológico, este sería uno de. em. as. los mecanismos de que se valen para mantener la hiperinsulinemia que 6. La Hiperandrogenización de ratas normales,. st. logra el control glucémico.. Si. mediante la aplicación de testosterona, disminuye los niveles de glucosa. de. postprandial mediante la secreción de insulina, demostrando una. ió. n. marcada hiperinsulinemia con disminución de los valores de glicemia,. Di re cc. fundamentalmente en la primera media hora de la prueba de tolerancia a la Glucosa.. 6. Los islotes del grupo de ratas hiperandrogenizadas se. evidencio que existe un marcado aumento de la secreción de insulina cuando se estimuló los islotes con concentraciones de glucosa sub umbral ([glucosa] = 1,65 mmol/L, p < 0,001) y ligeramente supra umbral. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ([glucosa]= 9,9 mmol/L, p < 0,01). 6, 7 Por otro lado, el comportamiento de las curvas de glucemia y de insulinemia durante la Prueba de Tolerancia Oral a la Glucosa de las. ica ció. n. ratas castradas muestra una disminución de los requerimientos de insulina para el control de la glucemia, lo cual indica un aumento de la. om un. sensibilidad a la insulina de los tejidos periféricos asociado al hipoandrogenismo, actualmente la testosterona aumenta la sensibilidad 6. La capacidad de secreción de insulina de los islotes de. yC. periférica.. át ica. Langerhans en este grupo de ratas es similar al de las ratas controles, lo cual refuerza la idea de que la disminución de los valores de la. fo r. m. insulinemia en este grupo de rattus hipoandrogénicos no se debe a una. desarrollan. una. as. contrario,. 6. Las ratas hiperandrogenizadas por el. de. sensibilidad de la insulina.. In. disminución de la capacidad secretora, sino a un aumento de la. insulinorresistencia. caracterizada. por. st. em. hiperinsulinemia (p < 0,001). 6. Si. Recientemente una de las investigaciones en Suiza ha revelado, cómo las. de. células beta pueden reaparecer a partir de una población de células. ió. n. pancreáticas maduras de un tipo diferente como son las células alfa.. Di re cc. Después de una pérdida importante de células beta como en la diabetes inducida por aloxano, el páncreas adulto de ratón tiene la capacidad de regenerar parcialmente células beta después de haberlas perdido casi por completo,. una. fracción. de. células. alfa. se. puede. convertir. espontáneamente en células productoras de insulina. 7. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. En otra investigación se demostró que los andrógenos funcionan como inductores angiogénicos para estimular el crecimiento celular, mientras que la privación de andrógenos conduce a la disminución del factor de. n. crecimiento endotelial vascular, la regresión vascular y apoptosis de. ica ció. células epiteliales. En ratas con deficiencia de Factor derivado del Epitelio. om un. Pigmentario (FDEP), los vasos estromales se incrementaron y asociado con hiperplasia de las células epiteliales. Los andrógenos inhibe la. cultivadas de páncreas.. 8. yC. expresión del Factor Derivado del Epitelio Pigmentario (FDEP) en células El FDEP Exógeno, induce apoptosis epitelial in. át ica. vitro y limita el crecimiento in vivo provocando apoptosis endotelial.. 7. Por. m. lo tanto el FDEP podría regular el páncreas y los andrógenos pueden. In. fo r. contribuir de esta manera al crecimiento de células de islote pancreático. de. por angiogénesis. 8, 9. em. as. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA. st. ¿Cuál es el efecto de la testosterona en la glicemia de rattus. Si. norvegicus diabéticos tipo 1?. n. de. Hipótesis:. Di re cc. ió. H1: La Testosterona no disminuye significativamente la glicemia en rattus novergicus diabéticos tipo 1. Objetivo general: Determinar si la testosterona intramuscular desciende la glicemia significativamente en ayunas y post prandial de rattus novergicus diabéticos tipo 1.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. Objetivos específicos: . Determinar si la glicemia desciende significativamente en ayunas y post prandial después de la aplicación de una y dos dosis de. ica ció. n. testosterona intramuscular en rattus novergicus diabéticos tipo 1 medidos en la mañana y en la tarde.. Determinar si la testosterona intramuscular causa una variación. om un. . significativa del conteo de células totales de islotes pancreáticos. yC. de ratas diabéticas tipo 1 en láminas histológicas con coloración. át ica. de hematoxilina-Eosina.. fo r In. Obtención de la Muestra:. m. MATERIALES Y MÉTODO. de. Universo de estudio: rattus Norvegicus variedad albinus.. as. Tamaño muestral: para el tamaño muestral se utilizó la fórmula para la. st. em. determinación de medias de muestras independientes. 10. de. Si. Dónde: n: ratas necesarias en cada una de las muestras. Di re cc. ió. n. o Zα: para α= 0.05, el Valor Z correspondiente al riesgo deseado es igual a 1.96.. o Zβ: para β= 0.20, el Valor Z correspondiente al riesgo deseado es igual a 0,84. o σ 2: Varianza de la variable cuantitativa= 61.4 o d: Valor mínimo de la diferencia que se desea detectar (mínimo diferencial significativo)= 8.24 (9.9 - 1.65). Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. N= 7,08 ≈ 7 ratas. Fue necesario estimar las pérdidas, por lo que se incrementó el tamaño de la muestra respecto a dichas pérdidas. El tamaño muestral ajustado a. ica ció. n. las pérdidas se calculó de la siguiente forma: 12. om un. N= (Zα+Zβ)2*σ2/d2. Muestra ajustada a las perdidas = n (1/1-R) = 7(1/1 – 0.143) n= número de sujetos sin perdidas (n = 7). . R= proporción esperada de perdidas (se espera solo un R= 14.3%. át ica. yC. . de pérdidas, esto significa 1 rata de 7). 5. fo r. m. Así, realizando la sustitución 7 (1/ 1- 0.143)  da un total de 8 ratas. as. Criterios de selección. de. In. para cada grupo. Son 3 grupos = 24 ratas norvegicus.. st. em. Criterios de Inclusión:. Rattus norvegicus albinus hembras. . Edad de ratas entre 2.5 - 3 meses.. . Peso promedio de 190-250 gramos.. ió. n. de. Si. . Glicemia de ratas post aloxanizadas mayor de 200 mg/dL.. . Ratas desparasitadas.. Di re cc. . Criterios de Exclusión: . Ratas de otras especies diferentes a Novergicus.. . Ratas con presencia de comorbilidades.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. Criterios de Eliminación: . Ratas que presentan valores de glicemia normal después de la inyección de Aloxano.. n. Ratas con presencia de infección después de inducción de. ica ció. . diabetes mellitus tipo 1.. Ratas que presentan glicemias mayores de 600 después de la. om un. . aplicación de Aloxano.. yC. Diseño experimental:. át ica. Paso 1: Se utilizaron 24 rattus norvegicus hembras, proporcionados por. m. el Instituto Nacional de Salud (INS), que pesaron entre 190-250 gr. de. fo r. peso y entre 2.5 – 3 meses de edad (Fig. I, A). Los rattus norvegicus se. de. In. mantuvieron a temperatura ambiente en el laboratorio de microbiología. as. de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, a una. em. humedad relativa de 70 ± 5%, fotoperiodo de 12 horas luz/12 horas. st. oscuridad, con libre disponibilidad de alimento (Rodentina ®) y agua por. de. Si. un tiempo de 15 días para la estandarización. 11, 12. n. Paso 2: La muestra de 24 rattus novergicus, fueron divididos en 3. Di re cc. ió. grupos de manera aleatoria, (I grupo control, II y III grupos experimentales). A los 3 grupos de Rattus Norvegicus se han medido los valores de Glicemia basal y Post prandial (a la 1 hora y 2 horas). Paso 3: Luego se indujo diabetes tipo 1, con 200 mg Aloxano/kg peso (66 mg/ml en buffer citrato-fosfato 0,1 M, pH 4,5) por vía intraperitoneal. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. (Fig. I B, C); a los 3 grupos de Rattus Norvegicus albinus; se esperó 4 días para la recuperación y estabilización de la glicemia, luego se prosiguió a medir los valores de Glicemia basal y Post prandial (1 hora y. ica ció. n. 2 horas). 13, 14 Paso 4: Al Grupo II (experimental)- se les hiperandrogenizó aplicando a. om un. cada roedor 4mg/100g por peso de rata, de enantato de testosterona en 1 mL de aceite vegetal (Testoviron®) (Fig. I D,E) en la mañana, luego. yC. se midió los valores de Glicemia Basal y Post prandial (a la 1 hora y 2. át ica. horas) al siguiente día de aplicado la testosterona a las 9am y a las 5. m. pm. 15. fo r. Paso 5: finalmente al grupo III (grupo experimental 2) se les aplico 2. In. dosis (8mg/100g por peso de rata) de enantato de testosterona en la. de. mañana. Luego al siguiente día se prosiguió a medir los valores de. em. as. Glicemia basal y post prandial (a la 1 hora y 2 horas) a las 9am y a las. st. 5pm. 15. de. Si. Los Especímenes Rattus Norvegicus recibieron la dieta ordinaria. n. Rodentina ®, administrada en forma de galletas blandas, renovadas dos. Di re cc. ió. veces al día y, además, agua corriente en los frascos bebederos usuales, en cantidades limitadas, excepto durante las 48 horas siguientes a la administración del aloxano. 11, 12. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. Paso 6: Cortes histológicos de páncreas Mediante técnica quirúrgica laparotomía exploratoria se ha extraído los páncreas de todas las ratas diabéticas, luego el tejido pancreático se fijó. ica ció. n. en formaldehído (10%) durante 24 horas. Posteriormente se realizó procesos de deshidratación, aclaración e impregnación de las muestras. om un. para luego ser incluidas en parafina a 60 °C. Posteriormente se cortaron a 4 micras con micrótomo de rotación y fueron teñidos con hematoxilina. yC. y eosina. La coloración Hematoxilina –Eosina nos permitió evidenciar el. át ica. daño de islotes. De cada corte histológico de páncreas teñido con H/E se eligieron 5 campos al azar, se hizo el contero celular total y se. de. In. técnica al azar (Fig.III). 13. fo r. m. promediaron. Estas últimas fueron leídos por un patólogo utilizando. muestras. em. Las. as. Técnica histológica Hematoxilina-Eosina: de. páncreas. de. los. roedores. st. estuvieron en alcohol etílico 70%, lavados ya del fijador (se recomienda. de. Si. usar líquido de Bouin como fijador, ya que actúa como mordente; debe. n. lavarse muy bien, con alcohol 70% hasta eliminar todo resto de fijador).. Di re cc. ió. Hidratamos con agua destilada, alcohol 50%, 25% 15 minutos. Teñimos en Hematoxilina de Weigert y observamos al microscopio (Fig. III). 13, 14. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. B. om un. ica ció. n. A. In. fo r. m. át ica. yC. D. as. de. C. F. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. E. Figura I (A, B, C, D, E y F). Metodología de la experimentación. A. Muestra de ratas diabéticas tipo 1. B. Preparación del Aloxano, pesado en la microbalanza. C. Inyección intraperitoneal de la solución Aloxánica en buffer citrato. D. Muestra de testosterona en presentación Testoviron. E. Inyección intramuscular de testosterona. F. disección de ratas diabéticas tipo 1, para la extracción de páncreas. Lugar: Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. H. I. J. de. In. fo r. m. át ica. yC. om un. ica ció. n. G. L. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. K. Figura II (G, H, I, J, K y L). Metodología de la experimentación. G. Toma de glicemias en cola de ratas diabéticas tipo 1. H. Pesado de aloxano en microbalanza para su posterior preparación en buffer citrato. I. materiales para inyección de Aloxano preparado intraperitoneal de ratas normales. J, K, L. Glicemias de ratas diabéticas post aloxano. Lugar: Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. N. P. de. In. fo r. m. át ica. yC. O. om un. ica ció. n. M. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. Figura III (M, N, O y P). Laminas Histológicas de páncreas de ratas diabéticas tipo 1 inducidas con Aloxano. Coloración Hematoxilina Eosina. 20 x. Flechas señalan islotes pancreáticos. Se procedió a hacer el conteo de células totales de islotes, luego se analizó la variación. Fotografías tomadas por el investigador en el laboratorio de Histología Humana de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. Diabetes Tipo 1 Experimental: La diabetes tipo 1 experimental, se indujo mediante la aplicación de Aloxano ®, producto de la oxidación del ácido úrico.. 13. Dado que tiene la capacidad de destruir el 80% al 90% de. 13. Rattus Norvegicus se. ica ció. puede producir diabetes tipo 1 en una sola dosis.. n. células de los islotes pancreáticos secretoras de insulina, el Aloxano ®. om un. hicieron diabéticos experimentalmente con una dosis de Aloxano de 200 mg Aloxano/kg peso (66 mg/ml en buffer citrato-fosfato 0,1 M, pH 4,5). Éticas.. 10, 11. yC. (Figura I B,C). Los animales fueron tratados conforme a las normas Se consideraron diabéticos a los ratones cuyos niveles de. 13. Pasado este tiempo, se tomaron las muestras de sangre y se. m. Aloxano.. át ica. glucemia son mayores de 200mg/dL, 4 días después del tratamiento con. In. fo r. determinaron los niveles de glicemia en los animales.. de. Macroambiente y Microambiente.. em. as. Microambiente de los roedores: fue el ambiente físico inmediato que. st. rodeo al ratón, llamado confinamiento o encierro primario, estuvo limitado. Si. por el perímetro de la jaula, cama, alimento y agua de bebida. Jaula:. de. fueron especialmente diseñadas para facilitar su bienestar, de metal,. ió. n. provistas de tapas de acero inoxidable sin filtro. La altura de las paredes. Di re cc. de la jaula fue mayor de 12,7 cm. Densidad: fue mayor de 80 cm2 por animal. 10 Macroambiente de los Roedores: fue el espacio inmediato al microambiente, la sala de alojamiento en su ámbito general. La alteración de los factores del Macroambiente fueron controlados para no producir. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. cambios en el modelo animal y con ello, la modificación del tipo de respuesta, y aumento de la variabilidad de los resultados entre o dentro de los laboratorios de experimentación. Temperatura y Humedad. n. Relativa: Las exigencias de temperatura para ratones fueron entre de 20. ica ció. a 25 °C y la humedad relativa ambiental entre 40 y 70%. Intensidad de luz. om un. y tipo de Iluminación: La iluminación fue distribuido adecuadamente a través de la sala de alojamiento y fue lo suficiente para las prácticas de. yC. mantenimiento, inspección y bienestar de estos, sin causarles signos clínicos a los animales. También se proporcionó condiciones seguras de 11. Ruido: Los ratones son muy sensibles al ruido. át ica. trabajo para el personal.. m. y pueden percibir frecuencias de sonido que son inaudibles para el ser. In. fo r. humano, por lo que se trató de minimizar la generación de ruido. de. innecesario. Los radios, celulares, alarmas y otros generadores de. as. sonido, aun con auriculares o audífonos, no se usaron en los laboratorios. em. de experimentación. 10, 11. Si. st. Inyección de Aloxano: Se eligió la vía intraperitoneal a nivel abdominal. de. con una aguja delgada de 2,5 cm de longitud que se introdujo. ió. n. completamente con el fin de impedir la salida de la solución inyectada a. Di re cc. través del orificio cutáneo. Además, para evitar la rápida oxidación que sufre el aloxano disuelta, se preparó cada vez tan sólo la cantidad de solución necesaria para 8 animales por grupo. 13 Técnica para la toma de la muestra de Glucosa: Para la toma de muestra se realizó la siguiente técnica: se frotó la cola de la rata de la. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. parte proximal a la parte distal mediante una torunda con alcohol de 96°. Se realizó una hincada en el extremo proximal de la cola de la rata con una lanceta y la gota de sangre obtenida de la herida (0,1 uL) se recolectó. n. directamente en una tira reactiva, previamente insertada en un. ica ció. glucómetro digital (Accu-Chek Softclix®, roche Diagnostics.SL.USA) (Fig.. om un. II G). Registro del Peso: Se llevó a cabo el registro del peso de cada una de las ratas de manera cuantitativa, por día, con la finalidad de ajustar la. yC. dosis de Testosterona que se administró. 10, 11, 12. át ica. RESULTADOS:. m. Se registró las glicemias en la fichas de recolección de datos (ver. fo r. Anexos Tabla N°1 y N°2). Los promedios de glicemia de ratas. In. diabéticas tipo 1 de las mañanas en ayunas fueron: 425, 284 y 251. de. mg/dL; post prandial (1 hora): 479, 380 y 412 mg/dL; y finalmente post. em. as. prandial (2 horas): 458, 362 y 326 mg/dL sin testosterona, con una y. st. dos dosis de testosterona respectivamente (ver figuras N°1, 2 y 3). La. Si. glicemia de ratas diabéticas tipo 1 medidas en las tardes en ayunas. de. fueron 425, 404 y 304 mg/dL; post prandial (1 hora): 479, 461 y 457. ió. n. mg/dL; post prandial (2 horas): 488, 434 y 388 mg/dL sin testosterona,. Di re cc. con una y dos dosis de testosterona respectivamente (ver figuras N°4, 5 y 6). Mediante cortes histológicos se realizó el conteo celular total con un promedio de 50, 55 y 75 en los grupos sin testosterona, con una y dosis de testosterona respectivamente (ver figuras N°7). En la prueba de homogenización de varianza con el estadístico de. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. Levene (Anexo Tabla N°3), todas las pruebas resultaron con un α > 0.005, luego se hallaron los resultados del Análisis de Varianza (ANOVA) (ver Anexos Tabla N°4).. El ANOVA de un factor. de las. n. glicemias en ayuna, post prandial (2 horas) de la mañana y glicemia en. ica ció. ayuna de la tarde resultó un α = 0.000, 0.007 y 0.019 respectivamente;. om un. mientras las glicemias post prandial (1 hora) de las mañana, de la tarde y postprandial (2 horas) de la tarde resultó con un α = 0.086, 0.873 y. yC. 0.271 respectivamente; mientras el ANOVA de un factor del recuento celular total de islotes pancreáticos resultó un α =0.185 (si α <0.005, es. át ica. significativo, prosigue prueba post hoc) (Anexos ANOVA Tabla N°4).. fo r. m. La prueba post hoc HSD de Tukey para comparaciones múltiples entre. In. grupos de glicemias en ayuna de la mañana sin testosterona cuando se. de. compara con el grupo de una dosis de testosterona resultó un α=0.002. as. y cuando se les compara con el grupo de dos dosis de testosterona. em. resultó un α=0.000. La comparación de glicemias en ayunas de la tarde. Si. st. en grupo de ratas sin testosterona al compararlo con el grupo de una. de. dosis de testosterona resultó un α=0.867 y al compararlo con el grupo. ió. n. de dos dosis de testosterona un α=0.022. Finalmente la comparación de. Di re cc. glicemias post prandial (2 horas) de las mañanas entre el grupo de ratas sin dosis de testosterona comparado con el grupo de una dosis resultó un α=0.051 y al compararlo con el grupo de dos dosis de testosterona presento un α=0.007 (ver Anexos, tabla N°5. Pruebas Post Hoc, es significativo si α < 0.005).. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. mg/dL. om un. ica ció. n. 425. yC. 284. de. In. fo r. m. át ica. 251. mg/dL. de. Si. st. em. as. 479. Di re cc. ió. n. 412. 380. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. mg/dL. ica ció. n. 458. om un. 362. In. fo r. m. át ica. yC. 326. de. mg/dL. 404. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. 425. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. 304. Página 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. mg/dL. om un. ica ció. n. 479. 461. de. In. fo r. m. át ica. yC. 457. mg/dL. 434. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. 458. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. 388. Página 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. yC. om un. ica ció. n. 75 cel.. át ica. 55 cel.. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. 50 cel.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. DISCUSIÓN: Bernardo et al. investigó los bajos niveles de testosterona prediciendo la resistencia a la insulina y diabetes tipo 2 en los adultos mayores (edad Tanto el Massachusetts Male Aging Study y el. n. 15. ica ció. entre 55-89 años).. estudio NHANES III han encontrado un mayor riesgo de síndrome. testosterona.. 16. om un. metabólico y la diabetes tipo 2 en los hombres con bajos niveles de Laaksonen et al analizaron la relación de testosterona y. yC. SHBG (Globulina fijadora de hormonas sexuales) con el desarrollo del. át ica. síndrome metabólico y DM2 en los hombres y después de 11 años de seguimiento, los hombres con testosterona total, testosterona libre y. fo r. m. SHBG en el cuartil inferior tenían un mayor riesgo de desarrollar el. 15. de. 1.7 y 4.3, respectivamente).. In. síndrome metabólico (OR 2.3, 1.7, 2.8, respectivamente) y DM2 (OR 2.3, Los bajos niveles de testosterona son. as. también un factor de riesgo independiente y un biomarcador para el futuro. em. aparición de Diabetes Mellitus tipo 2.. 16. Estos hechos establecidos. Si. st. apoyan un mecanismo bidireccional entre los niveles de testosterona y los. de. niveles de glicemia como lo demuestra nuestro estudio, la comparación. ió. n. de glicemias en ayunas del grupo sin testosterona versus las glicemias en. Di re cc. ayunas de los grupos de ratas con una y dos dosis de testosterona respectivamente medidos a las 9:00 am presentan un descenso significativo (α=0.002 y 0.000 respectivamente), el pico de la testosterona, según su ritmo circadiano es sobre todo en las mañanas, podría ser una de las explicaciones del mayor descenso de la glicemia en las mañanas. La glicemia en ayunas de la tarde del grupo de ratas sin testosterona. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. comparado con el grupo de 2 dosis de testosterona presentó un descenso significativo (α=0.022). Finalmente la Glicemia post prandial (2 horas) de la tarde del grupo sin testosterona comparado con el grupo de ratas con. ica ció. n. dos dosis de testosterona presentó un descenso significativo (α=0.007). La Testosterona actúa como un potente regulador del sistema de. om un. adiponectina, los niveles de adiponectina elevados puede servir como un importante hormona sensibilizadora a la insulina, preservando el 17, 18. esta podría ser una de las explicaciones. yC. metabolismo de la glucosa,. át ica. de nuestro descenso en ayuna de la glicemia, debido al aumento de adiponectina tanto en ayuna como con la dosis de testosterona (Figura. fo r. m. N°1 y 4). Por otro lado, en otros estudios la testosterona (dosis de 100. puede ser uno de los mecanismos que explicaría. 19. de. horas (P <0.00l),. In. nM) aumenta la absorción de glucosa en los cardiomiocitos después de 2. as. porque la testosterona ha descendido la glicemia post prandial (2 horas). st. em. significativamente (α=0.007) mayor (ver Figura N°3).. Si. Otras investigaciones, mencionan que la citocalasina, cual es un. de. bloqueador no específico de la captación de glucosa y actúa a través de. ió. n. transportadores de glucosa, bloqueó la incorporación de glucosa tanto en. Di re cc. las células tratadas con testosterona como en las células tratadas con insulina (P <0,001).. 19. Estos resultados sugieren que la absorción de la. glucosa inducidos por incrementos de testosterona en los cardiomiocitos son facilitados por transportadores de glucosa (específicamente GLUT 4), esto implicaría que la testosterona induce el aumento de receptores. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. GLUT-4 a nivel periférico, podría ser una explicación del descenso de la glicemia en nuestro trabajo y no de un efecto central en el páncreas.. 19. También otros estudios previos han reportado que la testosterona induce. 18,. esta absorción está mediada por. ica ció. esquelético (Muthusamy et al, 2009). n. la translocación de GLUT4 a la membrana plasmática en musculo. om un. activación de la Proteína Kinasa II dependiente de Ca2+/modulina (CaMKII) y Proteína Kinasa activada por AMP Activado (AMPK). 18. yC. La testosterona activa una proteína receptora de membrana plasmática-. át ica. G, como resultado la hidrólisis de fosfatidilinositol 4,5-bifosfato por la fosfolipasa C, que genera diacilglicerol e inositol 1,4,5- trifosfato (IP3). IP3. fo r. m. media la apertura de los receptores IP3 en el retículo sarcoplásmico, que. In. a su vez causa una rápida (en 1- 5 min) liberación (Vicencio et al., 2006). de. de Calcio+2. Este hallazgo podría proporcionar una vínculo entre Ca 2 + la. as. activación de señalización y CaMKII, lo cual permitirán la activación. st. em. CaMKII , AMPK y la posterior translocación de GLUT-4. 18, 19. Si. CONCLUSIONES:. de. La inyección de testosterona intramuscular desciende la glicemia. n. significativamente en ayunas y postprandial (después de 2 horas) de ratas. Di re cc. ió. diabéticas tipo 1 predominantemente en las mañanas. Dos dosis de testosterona (8mg/ 100 gr de rata) intramuscular disminuyen la glicemia significativamente mejor que una sola dosis de testosterona (4mg/ 100 gr de rata) en ratas diabéticas tipo 1.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. RECOMENDACIONES: Gestionar la implementación de un Bioterio en la facultad de Medicina, la adquisición de materiales de experimentación. Realizar trabajos de medición de testosterona sérica en humanos. ica ció. n. diabéticos. AGRADECIMIENTOS: A mi asesor, Dr. Luis Arteaga Temoche, Docente. om un. de Fisiología Humana, A mi co asesor Dr. Wilmar Gutiérrez Portilla, Médico Internista del Hospital Belén de Trujillo, Docente del departamento. yC. de Medicina Interna, de la facultad de Medicina de la Universidad. át ica. Nacional de Trujillo; a mis amigos de la Facultad de Medicina Rosa Isabel Silva Ocas, Orlando Cruzado Franco, Cristian Marxcen Aburto Moreno. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. as. de. In. fo r. m. por su constante ayuda en la elaboración de este proyecto.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: 1. Alvin C. Diabetes Mellitus. En: Fauci A, Braunwald E, Kasper D, Hauser S, Longo D, Jameson J, Loscalzo J, editores. Harrison. ica ció. n. principios de medicina interna. Vol 2. 17a ed. México: McGraw‐Hill; 2009. p. 2278.. om un. 2. Maitra A. Sistema endocrino, Páncreas Endocrino. En: Robbins S, Kumar V, Abbas A, Fausto N, Aster J, editores. Patología. yC. Estructural y Funcional. 8a ed. Madrid: McGraw-Hill Interamericana. át ica. de España, 2010. p.1133.. 3. Alvin C. Diabetes Mellitus. En: Fauci A, Braunwald E, Kasper D,. fo r. m. Hauser S, Longo D, Jameson J, Loscalzo J, editores. Harrison. de. 2009. p. 2275.. In. principios de medicina interna. Vol 2. 17a ed. México: McGraw‐Hill;. as. 4. Cubillos V, López C, Alberdi A. Estudio histopatológico e. em. inmunohistoquímico de páncreas en perros diabéticos inducidos. de. de. 05. Si. st. con aloxano. Arch Med Vet [serie en internet]. 2008; [accesado el Nov. 2013]. 40:. 169-177.. Disponible. en:. ió. n. http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-. Di re cc. 732X2008000200009.. 5. Álvarez A, Díaz E, González M. Glucemia, insulinemia y secreción de insulina en ratas hipoandrogenizadas e Hiperandrogénicas. Instituto Nacional de Endocrinología. Rev Cubana Endocrinol [serie en internet]. 1999; [accesado el 12 de Nov 2013] 10(2):133-9. Disponible. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. en:. Página 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. Metabolism in Men With Type 2 Diabetes: A Randomized Controlled Trial. Diabetes Care [serie en internet]. 2013; [accesado el. 13. de. Nov. 2014]. 37:. 2098–2107.. Disponible. en:. n. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24804695.. ica ció. 16. Rao M, Kelly M, Hugh T. Testosterone and insulin resistance in the. om un. metabolic syndrome and T2DM in men. Nat. Rev. Endocrinol [serie en internet]. 2013; [accesado el 13 de Nov 2014] p 1-15. Disponible. yC. en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23797822. 17. Høst C et al. Acute and Short-term Chronic Testosterone. Adiponectin:. A. Randomized,. m. and. át ica. Fluctuation Effects on Glucose Homeostasis, Insulin Sensitivity, Double-. Blind,. Placebo-. In. fo r. Controlled, Crossover Study. J Clin Endocrinol Metab [serie en. de. internet]. 2014; [accesado el 13 de Nov 2014] 99: E1088–E1096.. as. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24606070.. em. 18. Haren M et al.Testosterone modulates gene expression pathways. st. regulating nutrient accumulation, glucose metabolism and protein. de. Si. turnover in mouse skeletal muscle. International Journal of. n. Andrology, Rev. Europea Academy of Andrology [serie en internet].. Di re cc. ió. 2010; [accesado el 04 de Oct 2014] 34: 55–68. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20403060.. 19. Wilson C et al. Testosterone Increases GLUT4 Dependent Glucose Uptake in Cardiomyocytes. J. Cell. Physiol. [serie en internet]. 2013; [accesado el 06 de Oct 2014] 228: 2399–2407. Disponible en: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23757167.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ANEXO N°1 Tabla N°1. Glicemias de ratas diabéticas tipo 1 medidas en la mañana*. 1 Hr. 2 Hrs. A. 1 Hr. 1. 271. 313. 286.5. 271. 331. 5. 2. 457.5. 556. 517. 216. 373. 3. 428.5. 523. 482.5. 259. 4. 388.5. 435. 417.5. 198. 5. 545.5. 575. 573.5. 6. 368. 410. 7. 478. 521. 5. 8. 462.5. 2 Hrs. n. A. 1 Hr. 2 Hrs. 332 288 .5. 359. 5. 204. 307 240 .5. 387. 5. 386. 229. 385 308 .5. 271. 5. 276. 5. 182. 295 227. 398.5. 365. 348. 361.5. 521 430 .5. 254. 398. 378. 5. 240. 455 319. 500. 387.5. 487. 444. 315. 580 461. 500. 484. 287.5. 426. 397. 242. 421 338. st. yC. át ica. m. fo r. In. de. Si. 399.5. om un. 238. em. 307. as. A. Promedios de Glicemia con dos‡ dosis de Testosterona. ica ció. Promedios de Glicemia con una † dosis de Testosterona. de. Promedios de Glicemia sin dosis de Rattus testosterona norveg icus. ió. n. *La toma de la glicemia en la mañana fue aproximadamente a las 9 de la mañana, debido al pico máximo en la cual actúa la testosterona.. Di re cc. † una dosis de testosterona = 4mg/100 gr por peso de rata ‡ dos dosis de testosterona = 8 mg/100 gr por peso de rata A: ayuna 8 horas antes de toma de glicemia. Hrs: horas Fuente: datos recolectados por investigador.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ANEXO N°2. Tabla N°2. Glicemias de ratas diabéticas tipo 1 medidas en la tarde* Promedios de. n. Glicemia sin dosis. dosis de. de testosterona. Testosterona. A. 1 Hr. 2 Hrs. 271. 313. 286.5. 556. 517. 523. 482.5. 435. 417.5. 575. de. s. 5. 3. 388. 5. 4. 545.. 410. st. 6. em. 368. Si. 478 521.5. de. 7. n. 462.. ió. 8. 573.5. as. 5. 5. 5. 500. 5. 399.5 500 484. 502.5 426.5. 517 562.5. 539. át ica. 428.. 399.. 2 Hrs. 304 354.5 339.5. m. 5. 2. 1 Hr. fo r. 457.. A. 316. 5. In. 1. dosis de. 376.5 361.5. 453 509.5 488.5 539. 5 432. 5 268. Testosterona. om un. norvegicu. Glicemia con una † Glicemia con dos‡. yC. Rattus. Promedios de. ica ció. Promedios de. 588.5 567.5 487.5. 456. 308. 291. A. 321. 240. 5 263. 5 248. 5 398. 5 369 342. 5 252. 5. 1 Hr. 2 Hrs. 522.5. 434. 449. 393. 429. 366. 385. 340.5. 567. 514. 501. 389. 465. 376. 343. 290.5. Di re cc. *La toma de la glicemia en la mañana fue aproximadamente a las 9 de la mañana, debido al pico máximo en la cual actúa la testosterona. † una dosis de testosterona = 4mg/100 gr de peso de rata ‡ dos dosis de testosterona = 8 mg/100 gr de peso de rata A: ayuna 8 horas antes de toma de glicemia. Hrs: horas Fuente: datos recolectados por investigador.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ANEXO N°3 Tabla N° 3. Prueba de homogeneidad de varianza. grupos. de Levene. Glicemia Post prandial (2 hrs) de la mañana Glicemias en ayuna de la tarde Glicemia Post prandial. 2. om un. 0,894. 21. 0,291. 21. 0,424. 2. 21. 0,407. 2. 21. 0,409. 1,039. 2. 21. 0,371. 0,041. 2. 21. 0,960. 0,940 0,932. as. st. em. Recuento celular. 2. de. Glicemia Post prandial (2 hrs) de la tarde. 1,311. 0,694. In. (1 hr) de la tarde. 21. yC. (1 hr) de la mañana. 2. át ica. Glicemia Post prandial. 0,372. Sig.*. m. la mañana. gl2. fo r. Glicemias en ayuna de. gl1. n. Estadístico. ica ció. Comparación de los 3. Si. *la prueba de homogeneidad es significativo si sig. es > de 0.05. n. de. gl: grados libertad.. Di re cc. ió. Todas las pruebas de homogeneidad fueron significativas. Fuente: datos analizados por investigador en SPSS 19.0.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ANEXO N°4 Tabla N° 4. ANOVA de un factor Comparación de los 3 grupos. Sig.*. Prueba hoc†. 13,018. 0,000. Si es posible. 2,765. 0,086. Glicemia Post prandial (2 hrs) de la mañana. 6,342. 0,007. Si es posible. Glicemias en ayuna de la tarde. 4,792. 0.019. Si es posible. 0,873. No es posible. 1,389. 0,271. No es posible. 1,831. 0,185. No es posible. as. st. Si. Recuento celular. ica ció. om un. yC. át ica m In. de. 0,136. em. Glicemia Post prandial (1 hr) de la tarde Glicemia Post prandial (2 hrs) de la tarde. No es posible. fo r. Glicemias en ayuna de la mañana Glicemia Post prandial (1 hr) de la mañana. post. n. F. de. *Si sig. es < de 0.05.ANOVA es significativo. n. † Prueba post hoc se aplica para comparaciones múltiples entre grupos.. Di re cc. ió. Fuente: datos analizados por investigador en SPSS 19.0.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 37. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ANEXO N°5 Tabla N°5. Pruebas Post Hoc: HSD de Tukey Intervalo de. entre Grupos. Glicemia. 1 dosis de testosterona. testosterona. 2 dosis de testosterona. ayuna de la. Sin testosterona. 1 dosis de. át ica. mañana*. 2 dosis de. testosterona. Límite. inferior. superior. 0,002. 49.879. 232.12. 0,000. 82.379. 264.62. 0,002. -232.12. -49.88. 0,647. -58.621. 123.62. 0,051. -0.507. 191.51. 0,007. 35.181. 227.19. 0,867. -83.516. 125.89. 0,022. 15.734. 225.14. 0,867. -125.89. 83.516. 0,065. -5.4535. 203.95. m. testosterona. confianza al 95% Límite. yC. Glicemias en. Sin. Sig.. n. Comparaciones múltiples. ica ció. dependiente:. om un. Variable. In. testosterona. em. as. de la mañana*. 1 dosis de 2 dosis de. st. testosterona. de. n ió Di re cc. testosterona testosterona. ayuna de la tarde**. 2 dosis de. Sin. Si. Glicemias en. testosterona. de. prandial (2 hrs). Sin. fo r. 1 dosis de. Glicemia Post. testosterona Sin testosterona. 1 dosis de testosterona. 2 dosis de testosterona. *glicemia de la mañana: se obtuvo a las 9.00 am aproximadamente. **glicemia de la tarde: se obtuvo a las 5.00 pm aproximadamente. Fuente: datos analizados por investigador en SPSS 19.0.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. ANEXO N°6. ica ció. n. Tabla N°6: Conteo celular de islotes pancreáticos de ratas diabéticas. Promedios de células de islotes pancreáticos de. om un. Rattus. células diabéticas tipo 1 norvegicus. post 1era dosis†. yC. A. de testosterona. de testosterona. 57. 59. 41. 67. 45. 68. 105. 121. 33. 2. 42. 3. 38. 4. 98. 5. 45. 37. 51. 6. 53. 49. 73. 61. 74. 81. 32. 38. 49. m fo r In. de. em. de. Si. st. 7 8. át ica. 1. as. N°. post 2da dosis‡. n. † una dosis de testosterona = 4mg/100 gr de peso de rata. Di re cc. ió. ‡ dos dosis de testosterona = 8 mg/100 gr de peso de rata A: ayuna 8 horas antes de toma de glicemia. Fuente: datos recolectados por investigador.. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 39. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. CONSTANCIA DE REVISIÒN FINAL DE TESIS. Yo, DR. LUIS ALBERTO ARTEAGA TEMOCHE, médico fisiólogo y profesor. ica ció. n. principal tiempo completo del Departamento de Fisiología Humana de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. om un. HAGO CONSTAR:. “EFECTO. DE LA. yC. Haber revisado el informe final de tesis titulada. TESTOSTERONA EN LA GLICEMIA DE RATAS DIABÈTICAS TIPO 1”, cuyo. át ica. autor es DARWIN OLIVER DESPOSORIO ARMESTAR, identificado con DNI. m. 45255659 y con Carnet universitario 051800709, alumno de 6to año de Medicina. fo r. de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, por lo cual el. In. informe está listo para ser presentado para su sustentación.. as. de. Se expide la presente para los fines correspondientes.. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. Trujillo, 08 de Diciembre de 2014.. ____________________________ DR. LUIS ALBERTO ARTEAGA TEMOCHE Código docente: 3128 ASESOR. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Medicina. CONSTANCIA DE CO ASESORIA. Yo, Willy Felipe Plasencia Angulo, Medico patólogo del Hospital Regional Docente de Trujillo, identificado con carné del Colegio Médico N°019499, investigación titulado:. “EFECTO. ica ció. n. hago constar que estoy co asesorando el informe de tesis en DE LA TESTOSTERONA EN LA. om un. GLICEMIA DE RATAS DIABÉTICAS TIPO 1, en el conteo de células totales de islotes. pancreáticos de ratas diabéticas tipo 1 de láminas. histológicas Hematoxilina-Eosina, llevado a cabo por el alumno de sexto. yC. año de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo: Desposorio. de. In. fo r. m. át ica. Armestar Darwin, con carnet universitario N°051800709.. as. ---------------------------------------------------. N° Colegio Médico: 019499. Di re cc. ió. n. de. Si. st. em. Willy Felipe Plasencia Angulo. Efecto de la Testosterona en la glicemia de ratas diabéticas tipo 1. Página 41. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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