Efecto del aceite esencial de Citrus sinensis sobre el crecimiento de Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AC I. Ó. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. N. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. SI. Tesista:. ST. EM AS. DE. IN. Efecto del aceite esencial de Citrus sinensis sobre el crecimiento de Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi. N. DE. Br. Yuri Ricardo Liñan Gilio. Biólogo – Microbiólogo. DI. RE. CC. IO. Tesis para optar el Título Profesional de:. Trujillo – Perú 2012. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE. Ó. N. BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. AC I. RECTOR. M UN. IC. Dr. Orlando Velásquez Benites. ÁT. IC. A. Y. Dra. Vilma Méndez Gil. CO. VICERRECTOR ACADÉMICO. RM. SECRETARIO GENERAL. DE. IN. FO. Dr. Pedro Lavalle Dios. EM AS. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ST. Dr. Hermes Escalante Añorga. DE. SI. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS Dr. Cesar Jara Campos. PARASITOLOGÍA Ms.C. Pedro Alvarado Salinas. DI. RE. CC. IO. N. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. --------------------------------------------------------. AC I. Ó. N. MIEMBROS DEL JURADO. M UN. Ms.C. Pedro Alvarado Salinas. IC. A. Y. CO. PRESIDENTE. RM. ÁT. --------------------------------------------------------. FO. Ms.C. Luis Llenque Díaz. EM AS. DE. IN. SECRETARIO. ST. ---------------------------------------------------------. VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. Ms.C. María Nelly Vásquez Valles. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. ASESORA. AC I. Ó. La que suscribe, profesora asesora de la presente tesis, declara que esta ha sido. IC. ejecutada de conformidad con su correspondiente proyecto y con las debidas orientaciones. M UN. brindadas al tesista. En cuanto al informe, este ha sido revisado y acoge las observaciones y. A. Y. CO. sugerencias correspondientes.. ÁT. IC. Por lo tanto, autorizo al Br. YURI RICARDO LIÑAN GILIO, continuar con el trámite de. -----------------------------------------------------. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. reglamento correspondiente.. DE. Ms.C. María Nelly Vásquez Valles. DI. RE. CC. IO. N. ASESORA. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscribe, miembros del Jurado Examinador, declaran que el. AC I. Ó. N. presente informe de Tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. CO. M UN. IC. aprobado por UNANIMIDAD.. IN. FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. IC. A. Ms.C. Pedro Alvarado Salinas. Y. -----------------------------------------------------. DE. -----------------------------------------------------. EM AS. Ms.C. Luis Llenque Díaz. ----------------------------------------------------Ms.C. María Nelly Vásquez Valles VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. SECRETARIO. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. Ó. N. Mi tesis la dedico con todo mi amor y cariño.. AC I. A ti Dios que me diste la oportunidad de vivir y de regalarme una familia maravillosa.. IC. Con mucho cariño a mis padres RICARDO y GLORIA que me dieron la vida y han. M UN. estado conmigo en todo momento. Gracias por todo papá y mamá por darme una carrera para mi futuro y por creer en mí, aunque hemos pasado momentos difíciles. A. Y. agradezco de todo corazón el que estén conmigo a mi lado.. CO. siempre han estado apoyándome y brindándome todo su amor, por todo esto les. IC. A mis hermanos KEIKO y NICK gracias por estar conmigo y apoyarme siempre, los. RM. ÁT. quiero mucho.. A mis maestros, por su gran apoyo y motivación para la culminación de nuestros. IN. FO. estudios profesionales.. DE. A mis amigos, quisiera nombrarlos a cada uno de ustedes, pero son muchos, pero eso no quiere decir que me olvide de cada uno, muchas gracias por estar conmigo todo este. EM AS. tiempo donde he vivido momentos felices y tristes, que sin ustedes a mi lado no lo hubiera logrado, tantas desveladas sirvieron de algo y aquí está el fruto. Gracias por ser. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. mis amigos y recuerden que siempre les llevaré en mi corazón.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. Ó. N. A mi asesora Ms.C María Nelly Vásquez Valles, por su paciencia y por la dirección. AC I. de este trabajo, que admiro por su inteligencia y sus conocimientos, a quien le debo el. M UN. IC. hecho de que esta tesis tenga los menores errores posibles. Gracias por ser tan estricta.. Al profesor Ms.C. Pedro Alvarado Salinas, por sus consejos, el apoyo y el ánimo que. Y. CO. me brindó en todo momento.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. .. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. PRESENTACIÓN. AC I. Ó. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de Grados y Títulos de la. IC. Universidad Nacional de Trujillo, presento a vuestra consideración y criterio la presente. M UN. Tesis titulada: ¨Efecto del aceite esencial de Citrus sinensis sobre el crecimiento de. CO. Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi”. Con el objetivo de. A. Y. obtener el título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. Trujillo, 09 de Abril del 2 012. -------------------------------------------------------. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. Espero que este trabajo sea de vuestra aprobación.. DI. RE. CC. IO. N. Br. Yuri Ricardo Liñan Gilio. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO……………. Ó. N. ii. AC I. MIEMBROS DEL JURADO …………………………………………………………… iii. M UN. IC. ASESORA…………………………………………………………………………..…… iv APROBACIÓN………………………………………………………………………….. v. CO. DEDICATORIAS…………………………………………………….………………….. vi. A. Y. AGRADECIMIENTOS……………………………………………………………….…. vii. ÁT. IC. PRESENTACIÓN……………………………………………………………………….. viii. RM. CONTENIDO……………………………………………………………………………. ix. IN. FO. RESUMEN……………………………………………………………………………….. xi. DE. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………………... 1. EM AS. MATERIAL Y MÉTODOS…………………………………………………………..….. 11 1. Material biológico.………………………………………………………………….. 11. ST. 2. Método………………………………………………………………………….……. 11. SI. 2.1. Extracción del aceite esencial ………………………………………………. 11. DE. 2.2. Ensayo microbiológico……………………………………..……………….. 12 a) Reactivación de los cultivos puros de Salmonella enteritidis, Salmonella. IO. N. typhi y Salmonella paratyphi……………………………………………... 12. CC. b) Preparación del inóculo…………………………………………………... 12. DI. RE. c) Valores de CMI del aceite esencial de Citrus sinensis…………………… 12. RESULTADOS………………………………………………………………………….. 14 DISCUSIÓN……………………………………………………………………………... 16. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIÓN………………………………………………………………………….. 21 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………………... 22. Ó. N. ANEXOS………………………………………………………………………………... 28. AC I. Anexo 01. Equipo de destilación de arrastre por vapor de agua.. M UN. IC. Anexo 02. Caldo nutritivo. Anexo 03. Diagrama para concentración mínima inhibitoria.. CO. Anexo 04. Determinación de la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de. Y. Citrus sinensis frente a Salmonella enteritidis.. IC. A. Anexo 05. Determinación de la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de. RM. ÁT. Citrus sinensis frente a Salmonella typhi.. FO. Anexo 06. Determinación de la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. Citrus sinensis frente a Salmonella paratyphi.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Ó. N. El objetivo de la presente investigación fue demostrar el efecto inhibitorio del. AC I. aceite esencial de Citrus sinensis sobre Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y. IC. Salmonella paratyphi. Para evaluar el poder inhibitorio de este aceite esencial, se. M UN. desarrolló el método de macrodilución en caldo. Se usó un sistema de tubos con un. Citrus sinensis (naranja) a las. Y. solvente. Se trabajó con el aceite esencial de. CO. volumen final de 5 mL de caldo nutritivo para cada tubo y tween 80 al 0.1% como. IC. A. concentraciones de 13 - 20 uL/mL, en donde se obtuvieron las concentraciones. ÁT. mínimas inhibitorias de 16 uL/mL para Salmonella enteritidis, 17 uL/mL para. RM. Salmonella typhi y 19 uL/mL para Salmonella paratyphi. Se trabajó con una. IN. FO. suspensión equivalente al tubo Nº 1 del nefelómetro de Mac Farland (3x108 UFC/mL),. DE. posteriormente se incubo el sistema a 37ºC por 24 horas. Finalmente se realizó la. EM AS. lectura de los sistemas mediante la turbidimetria y así se obtuvo las concentraciones. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. mínimas inhibitorias del aceite esencial de Citrus sinensis (naranja).. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. N. I.. AC I. Ó. Bajo la denominación de aceites esenciales se agrupan las sustancias volátiles. IC. orgánicas obtenidas mediante procesos físicos a partir de especies vegetales. M UN. aromáticas, caracterizadas por una composición compleja, en la que predominan. CO. derivados terpénicos y fenilpropánicos. Debido a su aspecto oleoso y a la capacidad. Y. de evaporarse cuando se exponen al aire a temperatura ambiente, se denominan. IC. A. también aceites volátiles, siendo arrastrables en corriente de vapor de agua1, 2. Por lo. ÁT. general, reciben el nombre de la especie de la que proceden, como aceite esencial de. RM. orégano3, aceite esencial de menta1, aceite esencial de mandarina4, aceite esencial de. IN. FO. jengibre5, etc.. DE. Pese a las diferencias de composición entre los distintos aceites esenciales se. EM AS. puede afirmar que presentan una serie de propiedades físicas comunes: son líquidos a temperatura ambiente, volátiles y arrastrables en corriente de vapor de agua y. SI. ST. prácticamente inmiscibles con la misma. Son solubles en alcohol, éter, así como en. DE. la mayor parte de disolventes orgánicos. Presentan índices de refracción elevados y. N. muchos de ellos son ópticamente activos. La densidad de los aceites esenciales suele. CC. IO. ser inferior a la del agua, constituyendo una excepción los obtenidos a partir de la. RE. canela, el clavo y el sasafrás, cuya densidad es superior a la unidad. Todos ellos. DI. poseen olor característico, raramente son coloreados, salvo algunas excepciones, como el aceite esencial de manzanilla de intenso color azul, debido a su contenido de camazuleno1, 2.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Por. sus. clases. de. sustancias. activas. con. propiedades. antisépticas,. antiinflamatorias, cicatrizantes, revitalizantes, relajantes, afrodisíacas y otras, los. Ó. N. aceites esenciales se pueden agrupar en grandes familias, aunque un mismo aceite. AC I. puede ser polivalente y pertenecer a varias de ellas: aceites antibacterianos y. M UN. IC. antivirales; aceites del bienestar respiratorio; aceites relajantes y calmantes, aceites del bienestar muscular; aceites del bienestar circulatorio, aceites del bienestar. CO. digestivo; aceites tónicos; aceites detoxifiantes y anticelulíticos; aceites para el. Y. cuidado de la piel; aceites cicatrizantes y regenerantes; aceites insectífugos e. ÁT. IC. A. insecticidas6.. RM. Las propiedades antibacterianas de los aceites esenciales han sido validadas. FO. por la investigación científica. Los principales aceites esenciales antiinfecciosos. IN. bacterianos se clasifican en: a)Antiinfecciosos principales: aceite esencial de. DE. Tomillo, Ajedrea, Orégano, Clavo de olor, Corteza de Canela, Hoja de Canelero.. EM AS. Estos aceites esenciales son muy potentes, pero son dermocáusticos (contienen. ST. fenoles) con excepción del Árbol de Te. No se pueden aplicar sobre la piel y la toma. SI. por vía oral requiere el consejo del terapeuta profesional. b)Antiinfecciosos medios. DE. o de un grado menor: Hierba Luisa, Citronela, Geranio Borbón, Palmarosa, Cítricos,. IO. N. Piperita, Lavanda Fina, Palo de Rosa, Tomillo Linalol, Tomillo Tuyanol, Tomillo Por. CC. Citronelol, Hoja de Naranjo Amargo, Pino Silvestre, Eucalipto Globulus, etc.. DI. RE. ejemplo, se utilizan por vía cutánea (diluidos en un aceite vegetal) en caso de granos y picaduras, o por difusión atmosférica (solos o mezclados) para sanear el aire de la casa. La piperita es irritante para las mucosas oculares. Se aplica sobre una pequeña. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. superficie o se difunde muy diluida y en escaso porcentaje (máximo 5%) y está proscrita por debajo de los 7 años6,7.. AC I. Ó. N. Y por otra parte los aceites antivirales: ciertos aceites esenciales pueden llegar a detener el desarrollo viral, por su acción inmunoestimulante. En esta. M UN. IC. categoría, se incluye el Eucalipto Smithii, el Tomillo Borneol, y el Ravensara6,7.. CO. Las plantas pueden producir aceite esencial para muchos y diversos fines: por. Y. un lado protegen a la planta de plagas y enfermedades e inclusive de la invasión de. y. atracción,. se. ven. reflejadas. en. ÁT. protección. IC. A. otras plantas, para atraer insectos y aves (polinizantes). Estas cualidades de propiedades. antisépticas,. IN. FO. grado en la totalidad de los aceites8,9,10.. RM. antiinflamatorias, antidepresivas, afrodisiacas y otras, presentes en mayor o menor. DE. El hombre desde la antigüedad ha usado sustancias naturales extraídas de las. EM AS. plantas, como los aceites esenciales, para combatir enfermedades y preservar alimentos. Posteriormente, estas sustancias han perdido su uso debido a la aparición. SI. ST. de sustancias químicas, sin embargo en los últimos años, han surgido nuevas. DE. investigaciones en la obtención y uso de estos aceites que tienen la ventaja de que. IO. N. no representan un peligro para la vida y salud del hombre11.. CC. En este contexto podemos referimos a numerosos estudios sobre los aceites. DI. RE. esenciales, en los cuales se destaca su gran utilidad en diversas áreas tales como la fabricación de perfumes, productos cosméticos en la industria farmacéutica, saborizantes en la industria alimentaria, etc. varios estudios reportan sobre las diferentes actividades biológicas que presentan los aceites esenciales, tales como 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. insecticidas12, antioxidante13, 14, y efecto antibacteriano15. Esta actividad biológica se habla que puede variar desde la inhibición completa o parcial del crecimiento. AC I. Ó. N. microbiano hasta la acción bactericida o fungicida15.. IC. Según estudios realizados se ha encontrado que la actividad antimicrobiana. M UN. presentada por los aceites esenciales es debida, en gran medida a la presencia de un tipo de compuestos denominados “terpenoides”. Cuando los terpenos son. CO. modificados químicamente, ya sea por oxidación o por reorganización del esqueleto. A. Y. carbonado, los compuestos resultantes son referidos generalmente como. ÁT. IC. terpenoides, algunos autores usan el término terpeno para referirse a todos los. RM. terpenoides. Los terpenoides son una vasta y diversa clase de compuestos orgánicos. FO. derivados del isopreno, un hidrocarburo de 5 átomos de carbono. El nombre. IN. proviene de los primeros miembros de esta clase que fueron derivados del. EM AS. DE. aguarrás16.. El mecanismo de acción propuesto para los terpenoides consiste en la. ST. disrupción de la membrana bacteriana, destacan los derivados terpénicos oxidados,. SI. representados en primer lugar por los derivados fenólicos, timol y carvacrol, los. DE. cuales se unen a los grupos amino e hidroxilamino de las proteínas de la membrana. IO. N. bacteriana, lo que conduce a la modificación de su permeabilidad y origina la. CC. muerte de la bacteria. Los derivados alcohólicos y cetónicos, tales como linalol,. DI. RE. geraniol, citral, alcanfor, etc., poseen igualmente propiedades antibacterianas, si bien menos marcadas que las de timol y carvacrol16, 17.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Es de mencionar también que en la actualidad la resistencia de los microorganismos a los fármacos existentes tiende a incrementarse, razón por la cual. Ó. N. se mantiene el ímpetu en la búsqueda de nuevos agentes antimicrobianos para. M UN. IC. efectos secundarios de algunos agentes disponibles actualmente17, 18.. AC I. combatir las infecciones y superar los problemas de resistencia bacteriana y los. Por ello, en los últimos años se han realizado muchas investigaciones, que han. CO. demostrado el poder antimicrobiano de los aceites esenciales, especialmente los. A. Y. extraídos de frutas cítricas; en estos estudios se puede mencionar el de Dabbah y. ÁT. IC. col.(1970)19, quienes encontraron que los aceites esenciales de mandarina, naranja y. aureus,. Escherichia. coli,. Bacillus. subtilis,. Pseudomonas. FO. Staphylococcus. RM. toronja mostraron tener actividad antibacteriana contra cepas bacterianas de. IN. aeruginosa, entre otras20,21. Asimismo, el trabajo de Morales(1996)8que el aceite. DE. esencial de lima posee una actividad antibacteriana contra Vibrio cholerae, Yersinia. EM AS. enterocolítica y Streptococcus lactis8.. ST. Estos resultados hacen relevante el estudio de los aceites esenciales. SI. especialmente de cítricos debido a la gran importancia que tienen para la industria. DE. farmacéutica y de alimentos. Se sabe que los aceites esenciales, utilizados como. IO. N. aditivos en los alimentos tienen efecto antimicrobiano y actúan al mismo tiempo. DI. RE. CC. como saborizante8. Las preferencias del consumidor giran entorno a los productos más naturales.. Por esta razón, son cada vez más frecuentes las alternativas naturales frente a las químicas. No sólo las preferencias del consumidor juegan un papel importante a la. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hora de buscar nuevas alternativas, ya que las modificaciones legislativas o la resistencia de los patógenos a los antibióticos constituyen también factores de igual. Ó. N. importancia. Investigadores afirman que los aceites esenciales de cítricos se podrían. AC I. considerar una alternativa adecuada y natural como aditivos alimentarios. De esta. M UN. y la demanda de productos naturales de los consumidores22.. IC. manera, se atienden igualmente las necesidades de seguridad alimentaria requeridas. CO. En caso de los aditivos, son combinados con los alimentos para producir ciertas. A. Y. modificaciones que impliquen conservación, color, reforzamiento del sabor y. ÁT. IC. estabilización, los cuales van a ayudar a efectuar una mejora sorprendente en. RM. nuestros suministros alimenticios23,24.. IN. FO. Las esencias que proporcionan mejores sabores son los de productos naturales. DE. alterados, y/o reforzados cuando es necesario por los sintéticos. Muchos aceites. EM AS. esenciales tienen aplicaciones en la industria de los sabores siendo las más comunes los aceites de especias, menta, hierba buena, y los aceites cítricos como es el caso. SI. ST. del aceite esencial obtenido de la naranja23,24.. DE. La naranja es una fruta cítrica comestible obtenida del naranjo dulce (Citrus. N. sinensis), del naranjo amargo (Citrus aurantium) y de naranjos de otras especies o. CC. IO. híbridos, antiguos híbridos asiáticos originarios de India, Vietnam o el sureste de. RE. China. Es un hesperidio carnoso de cáscara más o menos gruesa y endurecida, y su. DI. pulpa está formada típicamente por once gajos u hollejos llenos de jugo, el cual contiene mucha vitamina C, flavonoides y aceites esenciales. La producción nacional de cítricos para el año 2007 fue de 723,022 toneladas (Ministerio de. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Agricultura) con una superficie de 53,172 hectareas, las cuales se distribuyeron de la siguiente manera: Naranjas (47%), mandarinas (16%) y limas y limones (37%)25.. AC I. Ó. N. Existen muchas clases de naranjas sin embargo las variedades comerciales están. IC. agrupadas en la especie (C. sinensis (L.) Osb). Para su descripción pueden ser. M UN. clasificadas en 3 grupos: el grupo Navel, que engloba a todas aquellas que muestran un ombligo manifiesto, el grupo Sanguina o de frutas pigmentadas y el grupo. CO. Blancas que abarca las que no están pigmentadas ni tienen ombligo. Las principales. A. Y. zonas productoras son Junín, Lima Puno, San Martín Cuzco, Ica, Huánuco, y. ÁT. IC. Pasco26.. RM. De la naranja, no solamente se aprovecha el zumo, sino que a partir de la. IN. FO. cáscara se puede obtener el aceite esencial que se utiliza como aromatizante en. DE. diferentes industrias. Su aceite esencial es uno de los ingredientes básicos en las. EM AS. industrias de perfumería alimentaria y farmacéutica26. El uso más importante del aceite esencial de naranja puede referirse en la industria de la panadería,. ST. especialmente en el área de pastelería, en la elaboración de aditivos y cremas, ya. SI. que muchas veces los tortas están expuestas al ambiente durante un tiempo, lo que. N. DE. puede ocasionar la invasión de organismos alteradores o patógenos23,24.. CC. IO. Salmonella es un representante de la familia Enterobacteriaceae2,25;el cual está. RE. integrado por gérmenes de forma bacilar, no esporulados, habitualmente móviles,. DI. gram-negativos, anaerobios facultativos, fermentan la glucosa con producción de gas, lactosa negativa, catalasa positiva, oxidasa negativa, reducen los nitratos a nitritos, su temperatura óptima de crecimiento es de 37 ºC y el pH 5-928,29,30.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Hasta el momento existen más de 2200 tipos serológicamente diferentes y continuamente se añaden a la lista serotipos nuevos. No obstante se observan de. Ó. N. manera regular unos 100 serotipos. La presencia de cualquiera de los serotipos de. AC I. salmonelas en un alimento deberá ser considerado como un peligro potencial.. M UN. IC. Pueden ser agrupados en dos grupos 1) las infecciones septicémicas que producen fiebres tifoideas y paratifoideas y 2) las infecciones entéricas no septicémicas. CO. producidas por las otras salmonelas31. Las especies más comunes son S. enteritidis,. A. Y. S. typhi, S. typhymurium, S. paratyphi28,29.. ÁT. IC. La salmonelosis en humanos es una de las enfermedades de transmisión. RM. alimentaria de gran importancia en salud pública; así, la gastroenteritis causada por. FO. Salmonella en el hombre ha sido usualmente asociada con la ingestión de alimentos,. IN. agua o fomites contaminados por las heces de un animal o personas infectadas y. EM AS. DE. constituye una pandemia de distribución mundial32,33. Los brotes de infección de salmonela se producen como consecuencia de la. ST. ingestión de una gran variedad de alimentos. Las diferentes clases de carne, aves y. SI. productos derivados especialmente si se han mantenido sin refrigeración durante. DE. bastante tiempo, son los alimentos implicados más frecuentemente. Las carnes. IO. N. frescas con salmonelas se contaminan bien a través de los operarios del matadero o. CC. como consecuencia de proceder de animales enfermos. Los productos cárnicos,. DI. RE. como empanadas de carne, picadillos, embutidos carnes curadas (jamón, bacon y lengua) sándwiches, etc; Se mantienen con frecuencia a temperatura ambiente, permitiendo así la multiplicación de las salmonelas. La carne de ave así como sus salsas y aderezos no deberían de dar lugar a ningún problema si se manipularan y 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cocinaran adecuadamente pero con frecuencia se descuida este tratamiento, como acontece también con el pescado, los mariscos y ciertos derivados. Algunos. Ó. N. productos lácteos como la leche fresca o fermentada, helados y quesos han dado. IC. AC I. lugar a infecciones34,35.. M UN. Puesto que los huevos pueden vehicular samonelas, los alimentos preparados con este producto y que han sido suficientemente cocinados o pasterizados, como. CO. los pasteles rellenos de crema o nata, las tortas con nata, las tartas de yema, etc,. IC. A. Y. pueden también llevarlas34,35.. ÁT. En los últimos años, la leche en polvo ha sido asociada con los brotes de. RM. salmonelosis en niños, habiendo demostrado la U.S. Food and Drug Administration. FO. que, en productos elaborados por diferentes industrias de la leche deshidratada,. DE. IN. existen salmonellas34,35.. EM AS. Este trabajo se justifica en uno de los principales problemas de los procesadores de alimentos a través de los años, ha sido la conservación de los mismos.. SI. ST. Actualmente los consumidores demandan productos naturales porque relacionan los. DE. compuestos químicos con alergias y enfermedades diversas. Con base en esto, ha. N. aumentado el interés en la búsqueda de nuevas formas para la conservación de los. CC. IO. alimentos en base a productos naturales en lugar de conservadores sintéticos.En tal. RE. sentido, lograr que la población disponga de alimentos rigurosamente libre de. DI. patógenos o contaminantes, es un propósito de muchos investigadores, y además hace un bien a la Salud Pública, por ello, en este trabajo se decidió probar la actividad antimicrobiana del aceite esencial de Citrus sinensis frente a especies de. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Salmonella. Debido a lo antes mencionado el presente trabajo tuvo los siguientes. N. objetivos:. AC I. Ó. Objetivo general:. IC.  Demostrar el efecto inhibitorio del aceite esencial de Citrus sinensis. M UN. determinando su concentración mínima inhibitoria sobre las especies. CO. de Salmonella.. A. Y. Objetivos específicos:. RM. arrastre por vapor de agua.. ÁT. IC.  Obtener el aceite esencial de Citrus sinensis mediante el método de. IN. FO.  Determinar las concentraciones mínimas inhibitorias del aceite. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. esencial en las tres especies de Salmonella.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS. N. II.. AC I. Ó. Material biológico: Cáscara de Citrus sinensis (Naranja) en estado de madurez.. . Cultivos de Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi. M UN. IC. . CO. proporcionados por el Laboratorio Referencial de Trujillo, Departamento de. RM. ÁT. IC. A. Y. La Libertad.. Métodos:. IN. FO. 1. EXTRACCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL1,2,3. DE. Se realizó un destilado por arrastre por vapor de agua; para lo cual se. EM AS. procedió a depositar 500g.. de cáscara de Citrus sinensis, previamente. ST. cortados en pequeños pedazos, en un balón de 1000 mL.. SI. Se conectó al equipo de destilación para proceder con la extracción. El balón. DE. con las cáscaras estuvo conectado a otro balón con una cantidad adecuada de. hasta el fondo del balón con las cáscaras. En el extremo superior el balón estuvo conectado un condensador.. DI. RE. CC. IO. N. agua (conteniendo piedras de ebullición) mediante un tubo conector, que fue. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se calentó el balón conteniendo agua por un tiempo de tres horas, de tal forma que el vapor pasó a través de la muestra y del condensador, y se. AC I. Ó. N. colectó en una pera de decantación.. IC. Se separó el agua contenido en la pera y se obtuvo el aceite esencial de. M UN. naranja.. CO. Se adicionó cloruro de calcio (0.05 g) para realizar una buena. A. Y. deshidratación.. RM. ÁT. IC. Luego se guardó en frasco ámbar estéril, hasta su utilización.. IN. FO. 2. ENSAYO MICROBIOLÓGICO. Determinación de la Concentración. DE. Mínima Inhibitoria (CMI):. EM AS. d) Reactivación de los cultivos puros de Salmonella enteritidis, Salmonella. ST. typhi y Salmonella paratyphi3.. SI. Se sembró en agar nutritivo y se incubó por 18 horas.. N. DE. e) Preparación del inóculo3. Fisiológica Estéril (SSFE) a una turbidez semejante al tubo Nº 1 del nefelómetro de Mac Farland (3 x 108 UFC/mL).. DI. RE. CC. IO. A partir del cultivo puro, se preparó una suspensión en solución Salina. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. f) Determinación de la CMI del aceite esencial de Citrus sinensis36,37,38 Se realizó el procedimiento de macrodilución en caldo36,37. Para esto se usó. AC I. Ó. N. tween 80 como solvente a una concentración de 0.1%. Se prepararon tubos. IC. con un volumen final de 5 mL de caldo nutritivo, a los que se les adicionó el. M UN. volumen necesario de aceite esencial de Citrus sinensis hasta alcanzar las concentraciones de 0.0 (control), 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 uL/mL.. CO. Luego se adicionó 20uL del inóculo, se homogenizó y posteriormente se. IC. A. Y. incubó el sistema a 37ºC por 24 horas36,37.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. Nota: el ensayo se realizó por triplicado. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Ó. N. III.. AC I. En la tabla Nº 01, se muestra los valores de las concentraciones mínimas. M UN. IC. inhibitorias (CMI) del aceite esencial de Citrus sinensis frente a Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi; y fueron 16uL/mL, 17ul/mL y 19uL/mL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. respectivamente.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla Nº 01: Valores de la Concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Citrus sinensis frente a Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y Salmonella. M UN. IC. AC I. Ó. N. paratyphi, en las condiciones ensayadas.. CO. Concentración mínima inhibitoria. Y. (uL/mL) Salmonella enteritidis. IC. A. 16. RM. ÁT. Salmonella typhi. 19. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. Salmonella paratyphi. 17. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. AC I. Ó. N. El género Salmonella comprende bacterias patógenas frecuentemente asociadas con. infecciones alimentarias. Las especies más conocidas son S. enteritidis, S. typhi y S.. M UN. IC. paratyphi.28,29 Estas bacterias, son los más frecuentes agentes causales de enfermedades transmitidas por alimentos (ETAs). En el período 1995-1998 fueron el segundo grupo. CO. bacteriano más importante causante de ETA en Latinoamérica y el Caribe. La carne de. A. Y. aves, huevos y productos derivados son alimentos que, muy frecuentemente, ocasionan. ÁT. IC. brotes de ETAs. En América Latina y el Caribe, la incidencia de las infecciones de origen. RM. alimentario produce una alta tasa de mortalidad por diarrea, principalmente en menores de. IN. FO. 5 años39.. DE. La infección por Salmonella está asociada con la ingestión de alimentos preparados. EM AS. inapropiadamente o previamente contaminados. Las carnes, los productos lácteos y los huevos crudos son las fuentes más probables de infección o de contaminación. Se reportan. ST. anualmente, aproximadamente 50.000 casos de infecciones por Salmonella en el mundo, lo. SI. cual representa el 10% de todas las infecciones humanas. La bacteria se propaga por la. DE. ingestión de alimentos o de aguas contaminadas o por personas infectadas que manipulan. CC. IO. N. el alimento33,34,35.. RE. Se requiere un inóculo de 106 a 108 bacterias de Salmonella spp. para el desarrollo. DI. de la enfermedad sintomática35, es por ello que se realizó una suspensión en solución salina fisiológica estéril a una turbidez semejante al tubo Nº 1 del nefelómetro de Mac Farland. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. que contiene 3x108 UFC/mL, en donde solo se usó 20 uL de la suspensión que equivalen a 6x106 UFC, la cual está dentro de los límites para producir la enfermedad sintomática35,40.. AC I. Ó. N. Actualmente los consumidores demandan productos naturales, esto ha aumentado el. IC. interés en buscar nuevas formas para la conservación de los alimentos en base a productos. M UN. naturales, es por ello, que han surgido investigaciones que utilizan los aceites esenciales como conservantes naturales17,18, es por ello que se desarrolló este trabajo con la finalidad. Y. CO. de conocer el poder antimicrobiano del aceite esencial obtenido de la naranja19,41.. IC. A. Generalmente los aceites son aislados de plantas que no poseen celulosa y lignina. ÁT. por métodos como prensado, extracción, fermentación o destilación. En esta oportunidad se. RM. usó el método por arrastre de vapor, ya que es la técnicas más usada en la extracción de los. IN. FO. aceites esenciales, además es sencilla y económica, ésta técnica se fundamente en el. DE. rompimiento del tejido vegetal por acción del vapor de agua, liberándose así el aceite. EM AS. esencial. En general los rendimientos de extracción varían desde 0.1 a 2%, existiendo algunas excepciones como por ejemplo el clavo de olor con más de 15% de aceite esencial;. ST. particularmente para la naranja oscila entre 0.5 y 0.8%, esto dependió de la variedad,. DE. SI. espesor de la cáscara y madurez de la fruta41,42.. N. Para evaluar la actividad antimicrobiana de distintos aceites esenciales se. CC. IO. desarrollan mediante dos métodos: a) difusión en placa41 y b) macrodilución en caldo36,42.. RE. Según la bibliografía el método más usado y efectivo es la de macrodilución en caldo,. DI. mediante la evaluación de la concentración mínima inhibitoria (CMI), ya que el método de difusión en placa, en la cual el agente es aplicado en un pocillo o en un disco de papel en el centro de una placa con agar con el microorganismo a evaluar, no son aptos para los aceites. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. esenciales porque los componentes del aceite son separados a través del agar de acuerdo a su afinidad con el agua. Por lo antes mencionado, se optó por usar el método de. Ó. N. macrodilución en caldo, determinando la concentración mínima inhibitoria que es la. AC I. concentración más baja de un antimicrobiano que inhibe el crecimiento visible de un. M UN. IC. microorganismo después de su incubación36,42.. En la tabla 1, se muestran los resultados de la CMI del aceite esencial de Citrus. CO. sinensis, frente a Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y Salmonella paratyphi, dichos. A. Y. valores fueron 16, 17 y 19 uL/mL respectivamente. Según la bibliografía, la concentración. ÁT. IC. mínima inhibitoria del aceite esencial de Citrus sinesis es superior a 15.5uL/mL, esto lo. RM. atribuyen que dicha actividad se debe al limoneno19,24. La inhibición es debido a dos. FO. diferentes mecanismos de acción: el primero es relacionado a su hidrofobicidad el cual. IN. permite insertarse (aceite esencial) en la bicapa fosfolipídica; y el segundo es relacionado a. DE. la inhibición de las enzimas y receptores bacterianos a través de uniones con sitios. EM AS. específicos16,17.. ST. En las figuras 2, 3 y 4 (ver anexo) se presenta el comportamiento de cada una de las. SI. cepas inhibidas por el aceite esencial de naranja, para este método de macrodilución en. CC. IO. N. turbidez36,42.. DE. caldo se empleó un indicador para determinar la viabilidad celular, en este caso mediante la. RE. A través de su estructura hidrofóbica, los aceites esenciales son capaces de afectar la. DI. membrana bacteriana y cambiar su permeabilidad; esto causa un flujo de salida desde el interior de la célula hacia el exterior. La salida de iones es usualmente acompañado con otros constituyentes citoplasmáticos, y hasta una cierta cantidad de pérdida puede ser. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tolerada por la célula bacteriana sin perder la viabilidad, pero si el flujo de salida es más prolongado, eso causaría el colapso de la célula. La importancia del grupo hidroxilo en. Ó. N. determinar el poder antimicrobiano ha sido confirmado, desde que se han encontrado. AC I. compuestos fenólicos, como el timol y carvacrol, que tienen una alta actividad. M UN. IC. antimicrobiana16,17.. Además ha sido establecido que los aceites esenciales pueden actuar sobre las. CO. proteínas unidas a la membrana citoplasmática; dos posibles mecanismos han sido. A. Y. propuestos para explicar las interacciones de los fenoles en las proteínas. La primera. ÁT. IC. implica que los hidrocarburos pueden acumularse en la membrana fosfolipídica e interferir. RM. con las interacciones lípidos-proteína; la otra es que los hidrocarburos lipofílicos pueden. IN. FO. interactuar directamente con las partes hidrofóbicas de las proteínas16,17.. DE. En otras investigaciones se demostró que los cítricos, poseen al limoneno como. EM AS. componente activo para la inhibición microbiana19,24. En estudios realizados con el aceite esencial de mandarina revelan resultados de concentraciones mínimas inhibitorias de 19. ST. uL/mL para Bacillus subtilis, 17 uL/mL para Listeria monocytogenes42. En otros trabajos. SI. muestran las concentraciones mínimas inhibitorias del aceite esencial de limón: >12.8. DE. uL/mL para S. aureus, >6.4 uL/mL para E. coli y 12.8 para B. subtilis43. Similarmente en. IO. N. el caso del aceite esencial de lima, cuyas concentraciones mínimas inhibitorias son: 12.8. CC. uL/mL para S. aureus, >6.4 uL/mL para E. coli y >6.4 uL/mL para B. subtilis43, en la cual. RE. se puede observar que los rangos de las concentraciones mínimas inhibitorias son similares. DI. en los cítricos, caso contrario, en los trabajos publicados con otros aceites esenciales, por ejemplo en el caso del aceite esencial de Minthostachys mollis Griseb (ruyaq muña) sobre Salmonella typhi fue de 4 uL/mL, S. dysenteriae 4 μL/mL y P. aeruginosa 9 μL/mL 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. siendo el compuesto activo el timol44. En el caso del aceite esencial de orégano presentan valores de concentración mínima inhibitoria de: V. cholerae 2.5 uL/mL, y V.. Ó. N. parahaemolyticus 2.5 uL/mL, siendo el compuesto activo en carvacrol45. Esto significa que. IC. AC I. cada aceite esencial tiene un diferente comportamiento al actuar sobre un microorganismo.. M UN. El uso más importante del aceite esencial de naranja puede referirse en la industria de la panadería, especialmente en el área de pastelería, en la elaboración de aditivos y. CO. cremas, ya que muchas veces los tortas y productos similares están expuestas al ambiente. A. Y. durante un tiempo, lo que puede ocasionar la invasión de organismos alteradores o. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. patógenos23,24.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIÓN. N. V.. AC I. Ó.  Considerando las condiciones en las que se ha trabajado se demostró que el aceite. IC. esencial de Citrus sinensis, a las concentraciones de 16, 17 y 19uL/mL tienen un. M UN. efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Salmonella enteritidis, Salmonella typhi y. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. Salmonella paratyphi respectivamente.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. N. VI.. AC I. Ó. 1. Guarniz O. Extracción y caracterización de los aceites esenciales de Mentha. IC. piperita por cromatografía de gases acoplado a espectrometría de masas y su. M UN. actividad antibacteriana in vitro de la provincia de Otuzco Departamento de La. CO. Libertad. Tesis. Universidad Nacional de Trujillo. Perú 2006.. Y. 2. Rubio S. Efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de Minthostachys mollis. ÁT. IC. A. Grisebach “Muña” sobre Escherichia coli, Shigella flexneri, Salmonella typhi y. RM. Vibrio cholerae. Tesis. Universidad Nacional de Trujillo. Perú 2007. FO. 3. Pajares M. efecto combinado del aceite esencial de Origanum vulgare “oregano” y. IN. ácido acético sobre el crecimiento de Salmonella enteritidis en carne de res molida.. EM AS. DE. Tesis. Universidad Nacional de Trujillo. Perú 2011. 4. Martínez J, Sulbarán B, Ojeda G, Ferrer A, Nava R. Antibacterial activity of. SI. ST. mandarin essential oil. Rev. Fac. Agron. 2003; 20: 502-512.. DE. 5. Vásquez O, Alva A, Marreros J. Extracción y caracterización del aceite esencial de. N. jengibre (Zingiber officinale).Rev Amazonica de Investigacion Alimentaria. 2001;. CC. IO. 1(1):38-42.. DI. RE. 6. Bruneton, J. Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas Medicinales. 2º Ed, editorial Acribia S.A. Zaragoza, España. 2001. 7. Essential. oils. Peru.. Ingresado. el. 13/03/12.. Disponible. en. http://www.aceitesesenciales-eop.com/es/ 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 8. Morales V. Extracción y caracterización del aceite esencial de Lima Thaití Citrus aurantiifolia. (Chritms) Swingle. Trabajo especial de grado. LUZ. Facultad. AC I. Ó. N. Experimental de Ciencias, Maracaibo, Venezuela. 1996; pp18-19.. IC. 9. Müeller G. Microbiología de los Alimentos Vegetales. Editorial Acribia S.A.. M UN. Zaragoza, España. 1981.. CO. 10. Smith P, Stewart J, Fyfe L. Antimicrobial properties of plant essential oils and. Y. essences against five important food-borne pathogens. Letters in applied,. ÁT. IC. A. microbiology. 1998; 26(2): 118-122.. RM. 11. Pacheco B, Ponce J, Rascón O, Gastelúm J. Conservas alimenticias. Dirección. FO. Académica. México 2008.. IN. 12. Karpouhtsis I, Pardali E, Feggou E, Kokkini S, Scouras G, Mavragani P.. DE. Insecticidal and genotoxic activities of oregano essential oils. J. Agric. Food. Chem.. EM AS. 1998; 46:1111-1115.. ST. 13. Demo A, Petrakis C, Kefalas P, Boskou D. Nutrient antioxidants in some herbs and. DE. SI. Mediterranean plant leaves. Food Res. 1998; 31: 351-354.. N. 14. Lagouri V, Blekas G, Tsimidou M, Kokkini S, Boskou D. Composition and. CC. IO. antioxidant activity of essential oils from oregano plants grown wild in Greece. Z.. RE. Untersuch Forsch.1993; 197: 20-23.. DI. 15. Vokou D, Vareltzidou S, Katinakis P. Effects of aromatic plants on potato storagesprout suppression and antimicrobial activity. Agric. Ecosyst. Environ. 1993; 47: 223-235. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 16. Grilli E. Development of non pharmaceutical strategies to imporve intestinal health in weaning piglets. Tesis doctorado. Facultad de Medicina veterinaria. Universidad. AC I. Ó. N. de Bologna. Italia 2007.. IC. 17. Helander I, Alakomi H, Latva-Kala K, Irene T, Leon E, Gorris et al.. M UN. Characterization of the action of selected essential oil components on gram-negative. CO. bacteria. J. Agric Food Chem. 1998; 46: 3590-3595.. Y. 18. Afriditi S, Eleni P, Constantita N, Stella K, Thomas L, Minas A. Antimicrobial and. IC. A. Cytotoxic activities of Origanum essential oils. J. Agric. Food Chem. 1996;. RM. ÁT. 44:1202-1205.. FO. 19. Dabbah R, Edwards V, Motas W. Antimicrobial activity of some citrus fruits oils on. IN. selected food-borne bacteria. Appl. Microbiology. 1970; 19(1): 27-31.. DE. 20. National Comittee for Clinical Laboratory Standards. Performance standards for. EM AS. antimicrobial disk susceptibility test. National Comitte for clinical Laboratory. ST. Standards. 1997; 17: 234-238.. SI. 21. Gupta C, Garg A, Uniyal R, Kumari A. Antomicrobial activity of some herbal oils. DE. against common food-borne pathogens. African Journal of Microbiology Research. CC. IO. N. 2008; 2: 258-261.. RE. 22. Cowan M. Plant Products as antimicrobial agents. Clinical Microbiological. DI. Reviews. 1999;12(4): 564 – 582.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 23. Dipeolu M, Eruubetine D, Oguntona E, Bankole O y Sowunni K. Comparison effects of antibiotics and enzyme inclusion in diets of laying birds. Arch. Zootec.. AC I. Ó. N. 2005; 54: 3-11.. IC. 24. Esquivel F, Vargas P. Uso de los aceites esenciales extraídos por medio de fluidos. M UN. supercítricos para la elaboración de alimentos funcionales. Tecnología en marcha.. CO. 2007; 20(4):41-50.. Y. 25. Producción de naranjas en el Perú. Ingresado el 07/09/11. Disponible en:. IC. A. http://www.monografias.com/trabajos58/produccion-naranjas-peru/produccion-. RM. ÁT. naranjas-peru.shtml. FO. 26. Díaz J. Análisis del mercado internacional de aceites esenciales y aceites vegetales.. IN. Instituto Alexander Von Humboldt-Biomercio Sostenible. Bogotá, Colombia. 2002. DE. 27. Uribe C, Suarez M. Salmonelosis no tifoidea y su transmisión a través de alimentos. EM AS. de origen aviar. Clomb Med. 2006; 37: 151-158.. ST. 28. ICMSF. Microbiología de los alimentos. Características de los patógenos. DE. SI. microbianos. Editorial Acribia. Zaragoza, España. 1998.. N. 29. Jay J. Microbiología moderna de los alimentos. 4º Ed, editorial Acribia. Zaragoza,. CC. IO. España. 2000.. DI. RE. 30. Del Rosario M, Anderson P, Calderón V. Microbiología alimentaria. Metodología analítica para alimentos y bebidas. 2º Ed, editorial Días de Santos. Madrid, España. 2000.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 31. Saldaña W, Vásquez M, Alvarado P. Manual de Prácticas de Microbiología y Tecnología de Alimentos. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Ciencias. AC I. Ó. N. Biológicas. Departamento de Microbiología y Parasitología. 2011. IC. 32. Rodríguez D, Torres F, Gutierrez E, López M, Martínez M, Carrascal A.. M UN. Determinación de Salmonella typhimurium en compost inoculado artificialmente. CO. empleado en un cultivo de lechuga. Acta biol. Colomb. 2008; 13(3): 61-74.. Y. 33. Gil-Setas A, Mazón A, Martín C, Urtiaga M, Inza E. Salmonelosis no tifoidea en un. IC. A. área de salud de Navarra-España. Rev. Esp. Salud Pública. Madrid 2002; 76(1):49-. RM. ÁT. 56.. FO. 34. Bello L, Ortiz D, Pérez E, Castro V. Salmonella en carnes crudas: Un estudio en. IN. localidades del estado de Guerrero. Salud pública mex. 1990; 32(1):74-79.. DE. 35. Durango J, Arrieta G, Mattar S. Presencia de Salmonella sp. en un área del Caribe. EM AS. colombiano: un riesgo para la salud pública. Rev. Inst. Nac. de Salud. Bogotá,. ST. Colombia. 2004; 24(1): 89-96.. SI. 36. Mann C, Markham. A new method for determining the minimum inhibitory. N. DE. concentration of essential oils. Journal of Applied Microbiology. 1999; 84:538-544.. CC. IO. 37. Mercado P, Llenque L. Manual de Prácticas de Fisiología y Genética microbiana.. RE. Universidad Nacional de Trujillo. Facultad de Ciencias Biológicas. Departamento. DI. de Microbiología y Parasitología. 2011.. 38. Ota C, Muzetti P, Schimidit C, Tsunezi M. Actidade da própolis sobre bacterias isoladas da cavidade bucal. Lecta, Braganca Paulista. 1998; 16(1): 73-77. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 39. Carrera J, Caballero A, Lengomín M. Vigilancia de Staphylococcus y Salmonella en alimentos. Rev. Cubana Aliment Nutr. 1998; 12 (1): 16-19. AC I. Ó. N. 40. Friedrich C, Scott M, Karunaratne N, Yan H, Hancock R. Salt-resistant alpha-. IC. helical cationic antimicrobial peptides. Antimicrobial agents and chemotherapy.. M UN. 1999; 42 (8): 1542-1548.. CO. 41. Juárez J, Castro A, Jaúregui J, Lizano V, Carhuapoma M, Fritz F et al. Composición y. Y. química, actividad antibacteriana del aceite esencial de citrus sinensis L.. ÁT. IC. A. formulación de una forma farmacéutica. Ciencia e investigación. 2010; 13(1): 9-13.. RM. 42. Martínez J, Sulbarán B, Ojeda G, Ferrer A, Nava R. Actividad antibacteriana del. FO. aceite esencial de mandarina. Rev. Fac. Agron. 2003; 20: 502-512.. IN. 43. Prabuseenivasan S, Jayakumar M, Ignacimuthu S. In vitro antibacterial activity of. EM AS. DE. some plant essential oils. BMC Complement Altern Med. 2006; 6(1): 39-46. 44. Carhuapoma M, López S, Roque M, Velapatiño B, Bell C, Whu D. Actividad. ST. antibacteriana del aceite esencial de Minthostachys mollis Griseb “RUYAQ. DE. SI. MUÑA”. Ciencia e investigación. 2009; 12(2): 83-89.. N. 45. De la Cruz M, Gastélum M, Silva R. Efecto antimicrobiano del orégano mexicano. CC. IO. (Lippia berlandieri schauer) y su aceite esencial sobre cinco especies del género. DI. RE. vibrio. Revista Fitotecnia Mexicana. 2007; 30 (3):261-267.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ANEXOS. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 1. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. EQUIPO DE DESTILACIÓN DE ARRASTRE POR VAPOR DE AGUA. obtención del aceite esencial de Citrus sinensis.. DI. RE. CC. IO. N. Fig. 1: Vista del equipo de destilación de arrastre por vapor de agua, para la. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 2. AC I. Ó. N. CALDO NUTRITIVO. IC. Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el desarrollo de. M UN. microorganismos con escasos requerimientos nutricionales. Su uso está descrito en. CO. muchos procedimientos para el análisis de alimentos, aguas y otros materiales de. Y. importancia sanitaria.. 1,0. Cloruro de sodio. 5,0. ÁT. Extracto de carne. RM. 5,0. DE. IN. FO. Peptona. IC. A. Composición: (g/litro). EM AS. Se pesan los ingredientes y se calientan hasta que se disuelven. Una vez que se ha enfriado, se ajusta el pH a 7-6. Se autoclava a 121ºC durante 15 minutos para. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. precipitar los fosfatos.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 3. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. 13. IC. Concentración de aceite esencial (uL/mL). AC I. Ó. N. DIAGRAMA PARA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA (CMI). EM AS. DE. IN. FO. Aceite esencial. Adicionar de aceite esencial (uL). 75. 80. 85. 90. 95. 100. 105. Agregar 5 mL de Caldo nutritivo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. 70. Agregar 20 uL de la suspensión bacteriana a cada uno de los tubos. Incubar a 37ºC por 24 horas. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 4. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. ACEITE ESENCIAL DE Citrus sinensis FRENTE A Salmonella enteritidis.. N. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA DEL. DE. Fig. 02. Sistema de tubos para la determinación de la concentración mínima. IO. N. inhibitoria del aceite esencial de Citrus sinensis frente a Salmonella enteritidis. (Control,. DI. RE. CC. 13,14, 15, 16, 17, 18, 20 uL/mL). 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 5. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. ACEITE ESENCIAL DE Citrus sinensis FRENTE A Salmonella typhi.. N. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA DEL. DE. Fig. 03. Sistema de tubos para la determinación de la concentración mínima. N. inhibitoria del aceite esencial de Citrus sinensis frente a Salmonella typhi. (13,14, 15,. DI. RE. CC. IO. 16, 17, 18, 19, 20 uL/mL). 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 6. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. ACEITE ESENCIAL DE Citrus sinensis FRENTE A Salmonella paratyphi.. N. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA DEL. DE. Fig. 04. Sistema de tubos para la determinación de la concentración mínima. N. inhibitoria del aceite esencial de Citrus sinensis frente a Salmonella paratyphi (13,14,. DI. RE. CC. IO. 15, 16, 17, 18, 19, 20 uL/mL). 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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