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“Efecto de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride / Trichoderma pseudokoningii nativas del distrito de Huamachuco sobre Rhizoctonia solani”

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Y PARASITOLOGÍA. IN FO. “Efecto de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y. Trichoderma pseudokoningii nativas del distrito de. SI ST. EM. AS. DE. Huamachuco sobre Rhizoctonia solani”. TESIS. DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. DI. RE. CC. IO. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. AUTOR: Br. Raúl Ericson Castro Angulo TRUJILLO – PERU 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. N. Dr. Orlando Velásquez Benites. UN IC. AC IÓ. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. A. Y. CO. NACIONAL DE TRUJILLO. M. VICE-RECTORA ACADÉMICA DE LA UNIVERSIDAD. IC. Dr. Santiago Uceda Duclos. ÁT. PROFESOR SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD. IN FO. RM. NACIONAL DE TRUJILLO. DE. Dr. José Mostacero León. AS. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EM. Dr. William Zelada Straver. BIOLÓGICAS. IO. N. DE. SI ST. PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS. Dr. Bertha Soriano Bernilla. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. DI. RE. CC. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. AC IÓ. N. El que suscribe: Ms.C. Miguel Angel Muñoz Ríos, asesor de la presente tesis. titulada: “Efecto de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y Trichoderma. CO. M. UN IC. pseudokoningii nativas del distrito de Huamachuco sobre Rhizoctonia solani”.. A. Y. CERTIFICA:. ÁT. IC. Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. IN FO. RM. correspondiente proyecto y con las orientaciones pertinentes brindadas al tesista.. Que el presente informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, y acoge las. DE. sugerencias y observaciones pertinentes. Por ello, autorizó al Bachiller Raúl Ericson. ____________________________________ MS.C. Miguel Angel Muñoz Ríos. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Castro Angulo para continuar con los procedimientos según sus fines.. DI. ASESOR. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN IC. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. M. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados. CO. y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, ponemos a vuestra consideración y. A. Y. criterio el trabajo de investigación titulado: “Efecto de Trichoderma viride,. ÁT. IC. Trichoderma atroviride y Trichoderma pseudokoningii nativas del distrito de. RM. Huamachuco sobre Rhizoctonia solani”, con el propósito de obtener el Título. IN FO. Profesional de Biólogo – Microbiólogo.. DE. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones. SI ST. EM. AS. cometidos en la elaboración del presente trabajo, me someto a vuestro dictamen.. RE. CC. IO. N. DE. Trujillo, Abril del 2014. DI. ______________________________ Br. Raúl Ericson Castro Angulo. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. M. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. Ms. C. Juan Hector Wilson Krugg PRESIDENTE. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. Ms. C. Miguel Angel Muñoz Ríos VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. Dra. Manuela Natividad Luján Velásquez SECRETARIA. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del jurado, declaran que el presente. AC IÓ. N. informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. Y. CO. M. UN IC. aprobado por unanimidad.. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Ms. C. Juan Hector Wilson Krugg PRESIDENTE. Ms. C. Miguel Angel Muñoz Ríos VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Dra. Manuela Natividad Luján Velásquez SECRETARIA. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. DEDICATORIA. A Dios y a la Virgen de la Puerta por la salud, la fortaleza y el bienestar hacia mí; por. CO. M. UN IC. siempre bendecirme en cada momento de mi vida.. A. Y. A mis padres, Mery y Raúl, quienes con su amor e infinita confianza; con el trabajo,. ÁT. IC. esfuerzo y sacrificio lograron darme en todo momento el apoyo incondicional, que. DE. IN FO. RM. permitió la culminación de mis estudios.. AS. A mi esposa Suemie y nuestro hijito Ian, quienes me dan toda la fortaleza necesaria en. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. los momentos más difíciles, para poder seguir adelante en todos los aspectos de la vida. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. Al Ms. C. Miguel Muñoz Ríos, por brindarme su amistad, confianza,. AC IÓ. N. sugerencias, apoyo constante y asesoramiento para la realización y culminación de la. UN IC. presente tesis.. M. A toda mi familia, por el apoyo emocional y moral en todo momento, en. CO. especial a mis padres Mery y Raúl, que sin su ayuda, apoyo y comprensión no estuviera. RM. ÁT. IC. A. Y. culminando el presente trabajo.. IN FO. A mi esposa Suemie, por el apoyo que me dio durante la realización de la tesis;. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. culminación de la presente tesis.. DE. y a nuestro bebé Ian, por la tranquilidad y fortaleza que me ha brindado para la. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se determinó el efecto de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y. AC IÓ. N. Trichoderma pseudokoningii nativas del distrito de Huamachuco sobre Rhizoctonia solani. Para lo cual se recolectaron del distrito de Huamachuco, tubérculos de “papa”. UN IC. con signos de infección fungosa por Rhizoctonia y muestras de suelo de cultivo de. M. “papa”, tanto para el aislamiento de Rhizoctonia solani y de Trichoderma las muestras. CO. respectivas fueron sembradas en placas de Petri conteniendo Agar Sabouraud con. A. Y. estreptomicina, luego se incubó a 25°C por 3 a 5 días, posteriormente se realizaron. ÁT. IC. observaciones microscópicas con azul de lactofenol. La identificación de los hongos se. RM. realizó en base a las características macroscópicas y microscópicas comparándose con. IN FO. claves taxonómicas. Se obtuvieron aislamientos nativos de R. solani y T. viride, T. atroviride y T. pseudokoningii. Para la evaluación del efecto de los aislamientos nativos. DE. de Trichoderma sobre R. solani se empleó la técnica de cultivo dual; en placa y en. AS. lámina. Se encontró que T. viride, T. atroviride y T. pseudokoningii tienen efecto. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. antagónico de grado 1 según la escala de Bell sobre R. solani. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. ii. Asesor. iii. Presentación. iv. AC IÓ. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo. N. Página. Miembros del Jurado. v. UN IC. Aprobación Dedicatoria. CO. M. Agradecimientos Resumen. Y. Índice. IC. A. INTRODUCCIÓN. ÁT. MATERIAL Y MÉTODOS. RM. 1. Material de estudio. IN FO. 2. Procedimiento. 2.1. Aislamiento y determinación de Rhizoctonia solani. vii viii ix x 1 5 5 5 5 5 5. 2.1.3. Determinación de Rhizoctonia. 6. 2.1.4. Obtención de cultivo puro Rhizoctonia. 6. 2.2. Aislamiento y determinación de Trichoderma nativas. 6. SI ST. EM. 2.1.2. Aislamiento de Rhizoctonia. AS. DE. 2.1.1. Recolección de muestra. vi. 6. 2.2.2. Aislamiento de Trichoderma nativas. 7. DE. 2.2.1. Recolección de muestra. N. 2.2.3. Determinación de Trichoderma nativas. IO. 2.2.4. Obtención de cultivo puro de Trichoderma nativas. CC. 2.3. Crecimiento radial de Trichoderma nativas. 7 8 8. DI. RE. 2.4. Evaluación del efecto in vitro de tres especies nativas de Trichoderma spp. sobre el crecimiento Rhizoctonia solani. 8. 2.4.1. Evaluación macroscópica del efecto de Trichoderma spp. Sobre el crecimiento de R. solani. 8. 2.4.2. Evaluación microscópica del efecto de Trichoderma spp. sobre el crecimiento de R. solani. 9. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 11. DISCUSIÓN. 15. CONCLUSIONES. 18. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 19. ANEXOS. 28. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. RESULTADOS. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. La papa es uno de los cultivos más consumidos en el mundo; en el Perú, el. AC IÓ. N. departamento de La Libertad se encuentra como uno de los departamentos que tienen. mayor producción de papa 1. El cultivo de la papa es afectado por varios organismos,. UN IC. tales como las bacterias, hongos, nematodos, virus, entre otros; siendo uno de los. M. principales problemas el ataque por Rhizoctonia solani, que causa la enfermedad. CO. comúnmente llamada como cáncer del tallo y costra negra de los tubérculos, pero. A. Y. algunos autores consideran más apropiado identificarla como “rizoctoniosis” porque los tejidos. ÁT. IC. síntomas de cáncer del tallo y costra negra son afecciones ocurridas en. IN FO. son afectados comúnmente por este hongo 2.. RM. específicos y excluyen las producidas en las raíces y estolones, órganos que igualmente. DE. La rizoctoniosis en papa se encuentra en todas las zonas productoras del mundo, pero es. AS. más frecuente y severa en los sitios con climas fríos y suelos húmedos. Rhizoctonia es. EM. habitante natural del suelo, causa variados síntomas de enfermedad en una amplia 2, 3, 4. SI ST. diversidad de plantas. . Es un hongo que presenta una especie muy heterogénea del. DE. conformada por numerosas cepas, las cuales difieren en las características. CC. IO. N. crecimiento in vitro y en patogenicidad 2, 5.. RE. Para solucionar el problema del ataque por este hongo se utilizan diversos métodos de. DI. control siendo uno de ellos el uso de controladores biológicos que ofrecen un medio ambiente seguro y la opción económicamente viable para la protección de plantas 6, 7 ; este método consiste en la utilización de enemigos naturales (predadores, parasitoides, entomopatógenos y antagonistas) para controlar a la población de una plaga y/o. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. enfermedad que produce daño a las plantas 8,. 9, 10, 11. , describiéndose a diversas bacterias,. nemátodos y hongos como organismos controladores biológicos de un amplio número de plagas y de organismos patógenos de vegetales. Entre los hongos utilizados. AC IÓ. N. mayormente en el control biológico tenemos a Trichoderma spp.12, 13, 14, 15, 16.. UN IC. El género Trichoderma es un hongo imperfecto que presenta conidióforos complejos y. M. altamente ramificados en forma piramidal o cónica que dan origen a fiálides con. CO. extremos ahusados, desde donde se desprenden esporas circulares hialinas, las colonias. Y. presentan un crecimiento rápido, al comienzo el micelio es blanco algodonoso para. IC. A. posteriormente tornarse de color verde oscuro o verde limón característico de este. RM. ÁT. hongo. Existen varias especies: T. viride, T. harzianum, T. virens, T. artroviride, T.. IN FO. hamatum, T. koningii; de las cuales la primera ha sido la más estudiada entre numerosos agentes de control biológico, por sus características de antagonismo en condiciones. DE. naturales17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 , además se comporta como hiperparásito frente a un amplio. AS. rango de hongos fitopatógenos entre los cuales están Rhizoctonia solani. 24. , Phytium. EM. spp.25, Alternaria solani 26,Phytophthora capsici 27, Sclerotinia minor 28, Sclerotium 29,. DE. SI ST. Fusarium oxysporum 30, y Sthepmphylium vesicarium 31.. N. Trichoderma en su rol de antagonista tiene diferentes mecanismos de acción, entre los. CC. IO. que se encuentran el micoparasitismo que se refiere al parasitismo de las hifas del. RE. patógeno por las hifas de Trichoderma, la competencia por el sustrato y nutrientes y, la. DI. actividad antibiótica producida por metabolitos que inhiben la actividad parasítica de los fitopatógenos 26, 29, 32, 33, 34, 35, 36.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Trichoderma sp, se encuentra ampliamente distribuido en todo el mundo, es un habitante de vida libre del suelo caracterizado por un comportamiento saprófito o parásito, propiedades que benefician su actividad antagónica, es un colonizador. AC IÓ. N. secundario pudiendo ser aislado de materia orgánica descompuesta, superficie de raíces de plantas, madera en descomposición, ambiente foliar y en esclerocios o propágulos de. UN IC. otros hongos 18, 19, 33, 38. Este microorganismo crece en un amplio rango de temperaturas, 39. ,. M. es relativamente tolerante a humedades bajas y tiende a crecer en suelos ácidos. CO. aunque su población decrece especialmente cuando la humedad del ambiente desciende. Y. por largos períodos de tiempo, hay presencia o ausencia de determinados. IC. A. microorganismos en el ambiente, y el pH, las sales, la concentración de CO2 y el HCO3,. IN FO. RM. ÁT. se tornan desfavorables 40.. En la naturaleza existen microorganismos antagónicos habitantes del suelo y que son. DE. llamados “nativos” cuando se encuentran desarrollándose en su hábitat natural, a pesar. AS. de las actividades humanas ejercen cierto grado de control biológico sobre organismos. EM. fitopatógenos que se desarrollan en su mismo hábitat. Las Trichoderma “nativas”. SI ST. pueden ser utilizadas como microorganismos eficientes biocontroladores de aquellos. DE. hongos fitopatógenos que se desarrollan en el área donde se encuentran estas. N. Trichoderma, ya que son capaces de mantener su viabilidad, patogenicidad, virulencia y. CC. IO. habilidad de reiniciar el crecimiento en el suelo, además de estar adaptadas a su hábitat. DI. RE. durante todo el año en rangos propios de temperatura, humedad relativa, pH, etc. 33, 41, 42.. Debido que el distrito de Huamachuco es uno principales productores de papa de la región La Libertad y siendo la rizoctoniasis uno de los principales problemas de este cultivo, los hongos biocontroladores como Trichoderma spp. ofrecen buenas. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. posibilidades como antagonista de hongos patógenos de plantas, además que se ha encontrado el uso de hongos biocontroladores como Trichoderma “nativas” presentan ventajas selectivas frente a Trichoderma exógenas, debido a la gran tolerancia a. AC IÓ. N. condiciones ambientales extremas de la región (temperatura, humedad relativa, radiación solar), adaptación a los cultivos contaminados con significativas cantidades de. UN IC. productos agroquímicos. Por lo que es necesario conocer el o los mecanismos de acción. M. que puedan estar involucrados en la interacción de Trichoderma “nativas” y el. CO. fitopatógeno para generar información básica para el control biológico de R. solani. Y. ofreciendo una alternativa ecológica a nuestro agro ecosistema. En este contexto la. IC. A. presente investigación tuvo como objetivo conocer el efecto de Trichoderma viride,. RM. ÁT. Trichoderma atroviride y Trichoderma pseudokoningii nativas del distrito de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. Huamachuco sobre Rhizoctonia solani.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. AC IÓ. Tubérculos de Solanum tuberosum “papa” con signos característicos de. UN IC. . N. 1. Material de estudio. Suelo de cultivo de Solanum tuberosum “papa” proveniente del distrito de. CO. . M. Rhizoctonia solani.. RM. ÁT. IC. A. Y. Huamachuco, Provincia de Sánchez Carrión.. IN FO. 2. Procedimiento. AS. DE. 2.1.Aislamiento y determinación de Rhizoctonia. SI ST. EM. 2.1.1. Recolección de muestra43 Se recolectaron tubérculos de papa del distrito de Huamachuco,. DE. con signos de infección fungosa por Rhizoctonia, los que se colocaron en. ser trasladadas al Laboratorio de Micología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.. DI. RE. CC. IO. N. bolsas de papel de primer uso previamente rotuladas, para posteriormente. 2.1.2. Aislamiento de Rhizoctonia De cada muestra recolectada se tomaron porciones de tejido afectado y se colocaron en hipoclorito de sodio, luego se lavaron con. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. agua destilada estéril y posteriormente se sembraron en placas de Petri conteniendo Agar Sabouraud (ASb) más antibiótico, las placas sembradas se incubaron durante cinco días a temperatura ambiental (25 ±. AC IÓ. N. 2ºC). (Anexo 1). UN IC. 2.1.3. Determinación de Rhizoctonia. M. Transcurrido el tiempo de incubación, las colonias fúngicas que. CO. desarrollaron se observaron macro y microscópicamente para determinar. Y. si correspondían a Rhizoctonia, utilizando para esto se usaron las claves. RM. ÁT. IC. A. taxonómicas de Barnett 19 y Gilman 44. (Anexo 2). IN FO. 2.1.4. Obtención de cultivo puro de Rhizoctonia Las colonias que se identificaron como Rhizoctonia, se sembraron. DE. cada una en tubos de ensayo conteniendo ASb e incubadas a temperatura. SI ST. EM. AS. ambiental (25 ± 2ºC) por cinco días, a fin de obtener cultivos puros.. DE. 2.2.Aislamiento y determinación de Trichoderma nativas. Se seleccionaron cinco puntos al azar de un terreno de cultivo de. papa de los caseríos de Wiracochapampa y Sausacocha (Distrito de Huamachuco) y de cada punto a una profundidad de 15cm. se tomará. DI. RE. CC. IO. N. 2.2.1. Recolección de muestra43. 200g de suelo, los que se depositaron en una bolsa plástica de primer uso previamente rotulado, la que posteriormente se trasladó al Laboratorio de. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Micología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo para su procesamiento. (Anexo 3). AC IÓ. N. 2.2.2. Aislamiento de Trichoderma nativas45 Se pesó 10g de la muestra de suelo homogenizado y tamizado, los. UN IC. cuales se vertieron en 90mL de agua destilada estéril (dilución 10-1), posteriormente se tomó 1mL de la dilución mencionada y se mezcló en. CO. M. 9mL de agua destilada estéril (dilución 10-2); repitiéndose sucesivamente. Y. este procedimiento hasta la obtener una dilución de 10 -4. Terminado el. IC. A. protocolo anterior se sembró 0,1mL de cada una de las tres últimas. RM. ÁT. diluciones en placas de Petri conteniendo ASb más antibiótico, luego se. IN FO. homogenizó con una asa de Drigalsky y finalmente se incubaron a. DE. temperatura ambiental (25 ± 2ºC) durante cinco días. (Anexo 4). AS. 2.2.3. Determinación de Trichoderma nativas. EM. Transcurrido el tiempo de incubación, las colonias fúngicas que. SI ST. desarrollaron. se. observaron. macro. y. microscópicamente. con. DE. características de Trichoderma, utilizando para esto las claves 19. y Gilman 44; además para la determinación de. la especie, se observaron macro y microscópicamente las colonias de Trichoderma spp. utilizando las claves taxonómicas de Kubicek y Harman 46. (Anexo 5). DI. RE. CC. IO. N. taxonómicas de Barnett. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.4. Obtención de cultivo puro de Trichoderma nativas Las colonias identificadas como Trichoderma spp. se sembraron en tubos de ensayo conteniendo ASb, e incubaron a temperatura ambiental. AC IÓ. N. (25 ± 2ºC) por cinco días a fin de obtener cultivos puros. (Anexo 6, 7 y. UN IC. 8). M. 2.3.Crecimiento radial de Trichoderma nativas. CO. Se sembraron por puntura en placas de Petri conteniendo ASb, a cada una. Y. de las Trichoderma spp. nativas aisladas del suelo, se incubaron a temperatura. IC. A. ambiental (25 ± 2ºC); y se midió el crecimiento cada 12 horas hasta que cubriera. RM. ÁT. la placa de Petri, seleccionándose las Trichoderma nativas que presentaron. IN FO. mayor crecimiento. (Anexo 9). DE. 2.4.Evaluación del efecto in vitro de tres especies nativas de Trichoderma spp.. EM. AS. sobre el crecimiento Rhizoctonia solani. SI ST. 2.4.1. Evaluación macroscópica del efecto de Trichoderma spp. sobre el. DE. crecimiento de R. solani. opuestas y equidistantes a Rhizoctonia y a cada una de las especies nativas que se seleccionaron de Trichoderma, las cuales se incubaron a temperatura ambiental (25 ± 2ºC) durante siete días.. DI. RE. CC. IO. N. En placas de Petri conteniendo ASb se sembraron en posiciones. A los siete días de incubación se evaluó el grado de antagonismo según la escala de Bell y col.47, donde:. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Grado Antagónico 1: Trichoderma spp. crece completamente sobre la colonia del patógeno y cubre la superficie del medio de cultivo. Grado Antagónico 2: Trichoderma spp. crece al menos en las dos. AC IÓ. N. terceras partes de la superficie del medio de cultivo. Grado Antagónico 3: Trichoderma spp. y el patógeno cubren. UN IC. aproximadamente la mitad de la superficie del medio de cultivo.. M. Grado Antagónico 4: El patógeno crece al menos en las dos terceras. CO. partes del medio de cultivo limitando el crecimiento de Trichoderma. Y. spp.. IC. A. Grado Antagónico 5: El patógeno crece sobre la colonia de. IN FO. RM. ÁT. Trichoderma spp. ocupando toda la superficie del medio de cultivo.. 2.4.2. Evaluación microscópica del efecto de Trichoderma spp. sobre el. DE. crecimiento de R. solani. AS. En una cámara húmeda constituida por una placa de Petri estéril. EM. en cuyo interior se colocó una lámina portaobjeto ubicada sobre. SI ST. soportes de vidrio, se colocó en forma aséptica sobre el portaobjeto. DE. en posiciones opuestas y equidistantes dos bloques de ASb de 1cm2,. incubó durante 24 horas. Una vez transcurrido el tiempo se procedió a sembrar en el otro bloque a una de las especies nativas de Trichoderma, se procedió de la misma manera para las otras especies. DI. RE. CC. IO. N. luego en uno de los bloques de ASb se sembró Rhizoctonia y se. nativas. Luego se colocó una lámina cubreobjeto estéril encima de los bloques de ASb y se agregó al fondo de la placa, agua destilada. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. estéril; finalmente se incubó a temperatura ambiental (25 ± 2ºC). Después de cuatro días se retiró en forma cuidadosa el cubreobjeto. Se colocó sobre una lámina portaobjeto que contenga azul de. AC IÓ. N. lactofenol, e inmediatamente se selló por los bordes; para finalmente ser llevado al microscopio a fin de observar microscópicamente el. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. micoparasitismo.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. N. Al evaluar el efecto antagónico in vitro de Trichoderma viride, Trichoderma. AC IÓ. atroviride y Trichoderma pseudokoningii nativas sobre el crecimiento de Rhizoctonia. UN IC. solani mediante la técnica de cultivo dual en placa durante siete días de incubación; se encontró que los cultivos antagonistas fueron capaces de reducir el crecimiento del. CO. M. fitopatógeno presentando grado antagónico 1, según la escala de Bell y col. (Figura 1, 2. IC. A. Y. y 3).. ÁT. En la evaluación microscópica se observa el micoparasitismo de las especies. RM. nativas de Trichoderma spp. tales como adherencia de las hifas del antagonista,. IN FO. fragmentación de las hifas del patógeno y formación de clamidosporas por efecto del. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. antagonista (Figura 4).. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) R. AC IÓ. T. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. R. viride (T) frente a y. Y. Figura 1. Confrontación de especie de Trichoderma. CO. M. UN IC. T. IC. A. Rhizoctonia solani (R), mediante la técnica de cultivo dual en placa; a. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. siete días de incubación. Observándose un antagonismo de clase 1.. T. T. R. CC. IO. N. DE. SI ST. R. DI. RE. Figura 2. Confrontación de Trichoderma atroviride (T) frente a Rhizoctonia solani (R), mediante la técnica de cultivo dual en placa; a siete días de incubación. Observándose un antagonismo de clase 1.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) R. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. T R. DE. IN FO. RM. T. AS. Figura 3. Confrontación de Trichoderma pseudokoningii (T) frente a Rhizoctonia. EM. solani (R), mediante la técnica de cultivo dual en placa; a siete días de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. incubación. Observándose un antagonismo de clase 1.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) UN IC. CLAMIDOSPORAS. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ADHERENCIA T. viride. T. atroviride. CO. M. FRAGMENTACIÓN. FRAGMENTACIÓN. A. Y. R. solani. R. solani. B. RM. ÁT. IC. A. IN FO. R. solani. AS. DE. T. pseudokoningii. EM. ADHERENCIA. SI ST. C. Figura 4. Observación microscópica del efecto micoparasítico de las especies nativas. DE. de Trichoderma sobre el crecimiento de Rhizoctonia solani: A) Adherencia. hifas de R. solani por Trichoderma atroviride. C) Adherencia de hifas de. Trichoderma pseudokoningii sobre R. solani.. DI. RE. CC. IO. N. de hifas de Trichoderma viride y lisis sobre hifas de R. solani. B) Lisis de. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. Al evaluar los resultados de esta investigación demostraron que los aislamientos nativos. AC IÓ. N. de Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y Trichoderma pseudokoningii presentan un evidente efecto antagónico sobre el crecimiento del aislamiento nativo de. UN IC. Rhizoctonia solani en los ensayos realizados in vitro; lo cual confirma lo reportado por. M. diversos autores quienes obtuvieron alta eficiencia de la actividad biocontroladora de. sp.52,. Sclerotium. cepivorum53,. Y. Oidium. Sclerotinia. A. solani49-51,. Rhizoctonia. CO. cepas nativas de Trichoderma frente a patógenos como Fusarium oxysporum48,. RM. ÁT. IC. sclerotiorum54 y Alternaria dauci55.. IN FO. Transcurridas 72 horas de haber sembrado las tres especies de Trichoderma, todas las colonias que desarrollaron hicieron contacto con R. solani y el número de días. DE. al primer contacto entre las hifas fue el mismo para todas las cepas, al respecto Michel56. AS. menciona que cuando menor sean los días para que ocurra el contacto, mayor es la. SI ST. EM. agresividad que existe por parte del hongo antagónico y menor la resistencia del fitopatógeno. Ya a los siete días de incubación, se observó que todas las especies de. DE. Trichoderma crecieron sobre el micelio de R. solani, considerándose de clase 1 el grado. IO. N. de antagonismo según la escala de Bell et al.57, durante el enfrentamiento de los dos. CC. hongos en el cultivo dual en placa; considerándose a Trichoderma altamente. RE. antagonistas capaz de atacar al patógeno y cubrirlo totalmente58 (Figura 1, 2 y 3);. DI. permitiendo visualizar a Trichoderma con capacidad antagónica in vitro sobre el fitopatógeno que ocasiona la rizoctoniasis en la “papa”. Como se puede observar en la Figura 1, 2 y 3, con respecto a la capacidad antagónica de Trichoderma demuestra que R. solani había dejado de crecer mientras el. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. antagonista tenía un buen micoparasitismo. Según Chet et al.. 58. , en principio. Trichoderma tiene la capacidad de mantener una distancia de su hospedante, luego inicia la secreción de sustancias antifúngicas (enzimas y antibióticos) para competir. AC IÓ. N. eficientemente por espacio y nutrientes; y así continua creciendo hasta invadir totalmente la superficie de la colonia del hongo patógeno; siendo esta una manera de. UN IC. ejercer biocontrol al reducir o detener completamente el desarrollo del micelio del. CO. M. fitopatógeno59.. Y. El efecto del hiperparasitismo en placa, se observó al crecer las especies nativas. IC. A. de Trichoderma completamente sobre la colonia de R. solani y cubrir toda la superficie. RM. ÁT. del medio de cultivo (Figura 1, 2 y 3); actividad antagónica de micoparásitos atribuida. IN FO. según algunos autores a la producción de antibióticos, toxinas o enzimas hidrolíticas en. DE. cantidades que causan la muerte o destrucción de su hospedero60.. AS. La antibiosis del antagonista se debe a la producción metabólica de pequeñas. EM. moléculas tóxicas volátiles y de enzimas hidrolíticas61; las cuales se liberan durante la. SI ST. acción parasítica de las especies de Trichoderma sobre algunos hongos patógenos63, 64;. DE. donde las enzimas disuelven o dañan polímeros estructurales, como quitina y glucanos. N. de la pared celular de los hongos fitopatógenos, produciendo un efecto sobre su. CC. IO. desarrollo64.. RE. Por otra parte, el micoparasitismo de las especies nativas de Trichoderma sobre. DI. el hongo fitopatógeno R. solani se puede deber a la presencia de metabolitos difusibles de carácter enzimático acompañados también por compuestos antibióticos encargados de la inhibición del crecimiento y la actividad parasítica del patógeno tales como; viridin, trichodermin, gliotoxin, harzaniolide57, trichotoxina, gliovirina entre otros65.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Cuando el micoparásito llega al hospedero, las hifas se enrollan alrededor o son adheridas al hospedero y algunas veces penetran en el63, siendo la penetración del. N. antagonista al micelio del fitopatógeno aparentemente debida a la parcial degradación. AC IÓ. de la pared celular66. Mediante observaciones microscópicas de los puntos de. UN IC. interacción entre los micelios de las especies nativas de Trichoderma y R. solani (Figura. M. 4), se observa que el antagonista establece un contacto estrecho con el patógeno. CO. mediante la adherencia y el enrollamiento de las hifas; resultados que fueron reportados. Y. por Benhamou y Chet4 y Benhamou et al.67, quienes presentaron evidencias del. IC. A. enrollamiento de Trichoderma spp. en hifas de varios fitopatógenos, entre ellos R.. IN FO. RM. ÁT. solani y S. rolfsii. Los resultados de las pruebas de enfrentamiento demuestran la capacidad. DE. antagónica que tienen los aislamientos nativos de Trichoderma en condiciones de. AS. laboratorio; ya que además de inhibir el crecimiento vegetativo y la formación de. EM. estructuras de resistencia en el patógeno, parasitan sus hifas, destruyéndolo e. SI ST. impidiendo su desarrollo; así los tres aislamientos nativos reúnen características para ser. DE. catalogados como controladores biológicos de R. solani con buenas perspectivas para. N. ser utilizados en campo por ser aislamientos nativos con comportamientos que se. CC. IO. adecuan a las condiciones agroecológicas como son temperatura, humedad relativa,. RE. radiación solar, además de poseer tolerancia y adaptación a cantidades significativas de. DI. productos agroquímicos.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. AC IÓ. N. Trichoderma viride, Trichoderma atroviride y Trichoderma pseudokoningii nativas del distrito de Huamachuco tienen efecto antagónico de grado 1 sobre. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. Rhizoctonia solani.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1.. Oficina de Estudios Económicos y Estadísticos. La papa nuestra de cada. AC IÓ. 2.. N. día. Ministerio de agricultura. Lima-Perú. 2011.. Escalona Y, Rodríguez D, Hernández A. Rhizoctonia solani Kühn aislado. UN IC. de papa (Solanum tuberosum L.) en los Estados Táchira, Mérida, Trujillo. Castro C. Ecology of Rhizoctonia solani and diseases development in. CO. 3.. M. y Lara. Bioagro 2011; 23(3): 161-168.. Hyphal interactions between Trichoderma. IC. Benhamou N., Chet I.. ÁT. 4.. A. Y. relation to anastomosis groups. Held at CIP 1989; 181-190.. RM. harzianum and Rhizoctonia solani: ultrastructure and gold cytochemistry. 5.. IN FO. of the mycoparasitic process. Phytopathology 1993; 83: 1062-1071. García R, García A, Garnica C. Distribución, Incidencia y Alternativas. DE. de Control de Rhizoctonia solani en el Cultivo Papa en el Estado Mérida.. Brunner K, Zeilinger S, Ciliento R, Woo SL, Lorito M, Kubicek CP.. SI ST. 6.. EM. AS. Revista Latinoamericana de la Papa 2002;13:24 -40.. Improvement of the fungal biocontrol agent Trichoderma atroviride to. DE. enhance both antagonism and induction of plant systemic disease. Zeilinger S, Omann M. Trichoderma biocontrol: signal transduction. CC. 7.. IO. N. resistance. Appl Environ Microbiol 2005; 71(7): 3959 -3965.. RE. pathways involved in host sensing and mycoparasitism. Gene Regul Syst. DI. Bio 2007; 1: 227-34.. 8.. Rodríguez L, Arredondo H. Teoría y Aplicación del Control Biológico. Sociedad Mexicana de Control Biológico. México. 2007.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 9.. Baker K, Snyder W. Toward biological control of soil -born plant pathogens. Edit University. California-EE.UU. 1965.. 10. Baker R, Cook R. Biological control of plant pathogens. W.H. Freeman.. AC IÓ. N. San Francisco. USA. 1974. 11. Mendoza-Mendoza A, Pozo MJ, Grzegorski D, Martínez P, García JM,. UN IC. Olmedo-Monfil V. Enhanced biocontrol activity of Trichoderma through. M. inactivation of a mitogen activated protein kinase. Proc Natl Acad Sci. CO. 2003; 100(26): 15965-15970.. Y. 12. Bélanger R, Dufour N, Caron J, Benhamou N. Chronological events. IC. A. associated with the antagonistic properties of Trichoderma harzianum. RM. ÁT. against Botrytis cinerea: Indirect evidence for sequential role of. IN FO. antibiosis and parasitism. Rev Biocontrol Science and Technology 1995; 5: 41-53.. DE. 13. Benhamou N, Chet I. Cellular and molecu lar mechanisms involved in the. AS. interaction between Trichoderma harzianum and Pythium ultimun. Rev. EM. Applied and Environmental Microbiology 1997; 63: 2095 -2099.. SI ST. 14. Fravel D. Role of antibiosis in the biocontrol of plant disease. Rev. DE. Annual Review of Phytopathology 1988; 26: 75-91.. N. 15. Ordentlich A, Weisman Z, Gottlieb H, Cojocaru M, Chet I. Inhibitory. CC. IO. furanone produced by the biocontrol agent Trichoderma harzianum. Rev. RE. Phytochemistry 1992; 31(2): 485-486.. DI. 16. Papavizas G. Trichoderma and Gliocladium: Biology, ecology and potential for biocontrol. Rev Annual Review of Phytopathology 1985; 23: 23-54.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 17. Rey M, Delgado J, Rincón A, Limón M, Benítez T. Mejora de cepas de Trichoderma para su empleo como biofungicidas. Rev Iberoam Micol 2000; 17: 31-36.. AC IÓ. N. 18. Alexopoulos C. Introducción a la Micología. 3 ra . ed. Edit. Universitaria. Buenos Aires. Argentina. 1979.. UN IC. 19. Barnett L, Hunter B. Illustrated Genera of Imperfect Fungi. 4 ta . ed. The. M. American Phytopathological Society. Minnesota. U.S.A. 1998.. CO. 20. Lardizábal R. El uso de Trichoderma sp. Centro de Desarrollo de. Y. Agronegocios. Boletín Técnico de Producción Nº30. 2002.. IC. A. 21. Nevalainen H, Suominen P, Taimisto K. On the safety of Trichoderma. RM. ÁT. reesei. Rev Biotechnology 1994; 37: 193-200.. IN FO. 22. Howell C. Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases: The history and evolution of current. DE. concepts. Rev Plant Disease 2002; 87: 4 -10.. AS. 23. Harman GE, Howell CR, Viterbo A, Chet I, Lorito M. Trichoderma. SI ST. 2(1): 43-56.. EM. species opportunistic avirulent plant symbionts. Nat Rev Microbiol 2004;. DE. 24. Chet I, Baker R. Isolation and biocontrol potential of Trichoderma. N. hamatum from soil naturally suppressive to Rhizoctonia solani. Rev. CC. IO. American Phytopathology 1981; 71: 286-290.. RE. 25. Thrane Ch, Tronsmo A, Jensen D. Endo-1, 3-β-glucanase and cellulase. DI. from Trichoderma harzianum: purification and partial characterization,. induction of and biological activity against plant pathogenic Phytium spp. Rev Europan Journal of Plant Pathology 1997; 103: 331 -344.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 26. Gonzáles C, Puertas A, Fonseca M, Suárez E, Blaya R. Actividad antagónica de Trichoderma sp. aislada de un suelo dela provincia Granma, Cuba frente a Alternaria solani Sor. Rev Fac Agron 1999, 16:. 27. Ezziyyani M, Sánchez C, Requena M, Candela M.. AC IÓ. N. 167-173 Trichoderma. UN IC. harzianum como biofungicida para el control de Phytophthora capsici en. M. plantas de pimiento (Capsicum annuum L.). Rev Anales de Biología. CO. 2004; 26: 35-45.. Y. 28. Naar Z, Kecskés M. A method for selecting Trichoderma strains. IC. A. antagonistic against Sclerotinia minor. Rev Microbiological Research. RM. ÁT. 1995; 150: 239-246.. effective. against. IN FO. 29. Elad I, Chet I, Katan J. Trichoderma harzianum: A biocontrol agent Sclerotium. rolfsii. and. Rhizoctonia. solani.. Rev. DE. American Phytopathology 1980; 70(2): 119 -121.. mutants. of. EM. tolerant. AS. 30. Abdel H, Mohamed L, Mohamed W. Biocontrol Potential of sa linity Trichoderma. harzianum. against. Fusarium. SI ST. oxysporum. Brazilian. Rev Journal of Microbiology 2006; 37: 181 -191.. DE. 31. Alberoni G, Collina M, Pancaldi D, Brunelli A. Resistance to. N. dicarboximide fungicides in Stemphylium vesicarium of Italian pear. CC. IO. orchards. Rev European Journal of Plant Pathology 2005; 113: 211 -219.. RE. 32. Çiğdem küçük, Merih kivanç. Isolation of Trichoderma spp. And. DI. Determination of Their Antifungal, Biochemical and Physiological Features. Turk J Biol 2003; 27: 247-253.. 33. Shaigan S, Seraji A, Moghaddam SA. Identification and investigation on antagonistic effect of Trichoderma spp. on tea seedlings white foot and. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. root rot (Sclerotium rolfsii Sacc.) in vitro condition. Pak J Biol Sci 2008;11(19):2346-50. 34. Vinale F, Sivasithamparam K, hisalberti E.L, Marra R, Woo SH, Lorito. Biochemistry 2008; 40: 1-10. K.. The. Nag1. N-acetylglucosaminidase. of. Trichoderma. UN IC. 35. Brunner. AC IÓ. N. M. Trichoderma –plant – pathogen interactions. Soil Biology &. M. atroviridae is essential for chitinase induction by chitin and of maj or. CO. relevance to biocontrol. Rev Curr Genet 2003; 43: 289 -295.. Y. 36. Benítes T, Rincón A, Limón M, Codón A. Biocontrol mechanism of. IC. A. Trichoderma strains. International Microbiology 2004; 7: 249 -260.. RM. ÁT. 37. Agrios G. Plant Pathology. 5 ta . ed. Edit. Elsevier Academic Press. San. IN FO. Diego. 2005.. 38. Schuster A, Schmoll M. Biology and biotechnology of Trichoderma.. DE. Appl Microbiol Biotechnol 2010; 87(3):787-99.. AS. 39. Harman G, Chet I, Baker R. Factors affecting Trichoderma hamatum. EM. applied to seed as a biocontrol agent. Rev Phytopathology 1981; 71: 569 -. SI ST. 572.. DE. 40. Harman G, Taylor A. Improved seedling performance by integration of. N. biological control agents at favorable pH levels with solid matrix. CC. IO. priming. Rev Phytopathology 1988; 78(5): 520 -526.. RE. 41. Elad I, Chet I, Katan J. Trichoderma harzianum: A biocontrol agent against. Sclerotium. rolfsii. and. Rhizoctonia. solani.. Rev. DI. effective. American Phytopathology 1980; 70(2): 119 -121. 42. Krupa y Dommergues. Ecology of root pathogens. 2 da . Edic. Elsevier Scientific Publishing Company. USA. 1981.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(41) IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. AS. DE. A. EM. Anexo 2. Observación microscópica y macroscópica de Rhizoctonia solani aislado a. SI ST. partir de tubérculos de papa. A) Observación microscópica a 10x B). DI. RE. CC. IO. N. DE. Observación macroscópica de Rhizoctonia Solani en agar Sabouraud.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. Anexo 3. Recolección de suelo de cultivo de “papa” del distrito de Huamachuco.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Anexo 4. Procesamiento para el aislamiento de Trichoderma spp. nativas a partir de. DI. RE. CC. IO. N. muestras de suelo de cultivo de “papa” del distrito de Huamachuco.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IO. N. Anexo 5. Selección de colonias fúngicas con características de Trichoderma para su. DI. RE. CC. posterior determinación taxonómica.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SI ST. Anexo 6. Cultivo puro y microfotografía de Trichoderma viride nativa aislada de suelo. DI. RE. CC. IO. N. DE. de cultivo de “papa” del distrito de Huamachuco.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. Anexo 7. Cultivo puro y microfotografía de Trichoderma atroviride nativa aislada de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. suelo de cultivo de “papa” del distrito de Huamachuco.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Anexo 8. Cultivo puro y microfotografía de Trichoderma pseudokoningii nativa aislada. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. de suelo de cultivo de “papa” del distrito de Huamachuco.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Anexo 9. Crecimiento radial de Trichoderma nativas.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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