Control microbiológico de productos farmaceuticos no estériles en la industria farmacéutica ”

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. BI. O. Q UI. M. IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. IA. Y. INFORME DE PRÁCTICAS PRE PROFESIONALES PARA OPTAR EL. FA R. M AC. TÍTULO DE QUÍMICO FARMACÉUTICO. DE. “CONTROL MICROBIOLÓGICO DE PRODUCTOS. FARMACÉUTICA.”. AUTOR:. BI. BL. IO. TE. CA. FARMACEUTICOS NO ESTÉRILES EN LA INDUSTRIA. Br. Pelaez Loyola Lizeth Margoth ASESOR: Mg. Q.F. Rengifo Penadillos Roger Antonio TRUJILLO – PERÚ. 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Agradezco a Dios por guiarme en su camino y siempre permanecer. Q UI. M. IC. A. conmigo en cada momento de mi vida.. BI. O. A mis padres: Lupe y Miguel, por. Y. brindarme su amor y apoyo en todo gracias a ustedes. Los amo. DE. FA R. M AC. IA. momento. Cada logro en mi vida es. TE. CA. Un cordial agradecimiento al personal. BL. IO. que labora en el Laboratorio Farmacéutico Markos por su. BI. apoyo incondicional para la realización de este Informe de prácticas pre profesionales. Lizeth. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN El objetivo del presente informe de prácticas pre-profesionales es realizar los controles. microbiológicos a. los productos. farmacéuticos. no. estériles. manufacturados en Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A. durante el año 2015. En la sección de control microbiológico se realizan diversas análisis como: preparación de medios de cultivo, esterilización por calor húmedo y seco,. A. controles positivos y negativos, control de cepa patrón, verificación y promoción. IC. de crecimiento de medios, análisis microbiológico de agua, control. Q UI. M. microbiológico de ambientes, superficies y personal, límite microbiano, determinación de patógenos, y potencia antibiótica; luego de obtener los. BI. O. resultados se concluye que estos están acorde con las especificaciones de la. Y. Farmacopea de los Estados Unidos-USP, de esta manera garantizando que los. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M AC. IA. productos tienen una óptima calidad microbiológica.. Palabras claves: control microbiológico, cepas, medios de cultivo, productos farmacéuticos no estériles, Farmacopea de los Estados Unidos.. i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The aim of this report pre-professional practice is to perform microbiological controls to non-sterile pharmaceutical products manufactured in Markos Pharmaceutical Laboratories S.A. culture media preparation, sterilization wet and dry heat, positive and negative controls, strain pattern control, verification and promotion of growth media, microbiological analysis: during 2015. Section. A. microbiological control various analysis as performed water, microbiological. IC. control of environments, surfaces and personnel, microbial limit, determination. Q UI. M. of pathogens and antibiotic potency; after obtaining the results it is concluded that these are consistent with the specifications of the United States ensuring. that. the. O. thus. products. have. optimal. BI. Pharmacopoeia-USP,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M AC. IA. Y. microbiological quality.. Keywords: microbiological control, strains, culture media, non-sterile pharmaceutical products, the United States Pharmacopeia.. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. Resumen………………………………………………………………………..……i. A. Abstract………………………………………………………………………….….ii. Introducción………………………………………………………………..1. II.. La Institución o Empresa………………………………………………......3. III.. Actividades desarrolladas…………………………………………………..8. IV.. Presentación de resultados de la prácticas pre profesionales………………47. V.. Conclusiones……………………………………………………………… 56. VI.. Recomendaciones………………………………………………………….56. VII.. Referencias bibliográficas…………………………………………………57. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M AC. IA. Y. BI. O. Q UI. M. IC. I.. Anexos…………………………………………………………………….58. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRÓLOGO. La presencia de ciertos microorganismos en preparaciones no estériles puede tener el potencial efecto de reducir y hasta inactivar la actividad terapéutica del producto y de afectar adversamente la salud del paciente. Los fabricantes deben asegurar por tanto una. IC. A. baja biocarga de formas farmacéuticas terminadas mediante la implementación de las. Q UI. M. guías de Buenas Prácticas de Manufactura vigentes durante la fabricación, el. O. almacenamiento y la distribución de preparaciones farmacéuticas.. BI. En la Industria Farmacéutica se ha establecido la necesidad de incluir como ensayo de. IA. Y. rutina la determinación del número y tipo de microorganismos para garantizar la. M AC. inocuidad en el consumo del medicamento así como para poder evitar variaciones en. FA R. cuanto al aspecto, olor, color, sabor, consistencia, descomposición, intolerancia,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. disminución de su actividad y otros.1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Los productos no estériles son susceptibles de contaminarse con microorganismos tales como bacterias, mohos y levaduras durante el proceso de manufactura: pesada, fabricación, llenado, almacenamiento, así como durante su uso. La contaminación de los productos farmacéuticos, puede tener el potencial de reducir o inactivar la actividad terapéutica del principio activo y por ende representar un riesgo para la salud del paciente; adicionalmente la presencia de estos microorganismos dependiendo de su patogenicidad puede ocasionar infecciones o enfermedades. IC. A. que afecten al paciente o consumidor.. M. Por otra parte, el deterioro microbiano podría conllevar a cambios en las. Q UI. características físicas y químicas que conducirían a que el producto deteriorado no. O. sea apto para ser usado, afectando con ello la imagen del laboratorio productor.. BI. Es por ello, que las materias primas y los productos farmacéuticos terminados, deben. IA. Y. ser sometidos a un análisis microbiológico que demuestre que cumplen con las. M AC. especificaciones establecidas por los organismos oficiales, para garantizar que los. FA R. productos son adecuados para el uso al que están destinados.2. DE. Las buenas prácticas en un laboratorio microbiológico consisten en actividades que dependen de varios principios: técnicas asépticas, control de medios, control de cepas. CA. de prueba, operación y control de equipos, registro detallado y evaluación de datos. TE. así como capacitación del personal de laboratorio.. BL. IO. Debido al riesgo inherente de variabilidad de los datos microbiológicos, la. BI. confiabilidad y la reproducibilidad dependen de la utilización de los métodos aceptados y reconocidos como métodos farmacopeicos validados. y del. cumplimiento de las buenas prácticas de laboratorio.3. Chávez A. Luis, 1987. Trabajo de investigación en el Control microbiológico de materia prima y producto terminado realizado en C.I.N.P.S.A determinó que la materia prima y el producto terminado cumplen con las especificaciones USP.. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Guevara V. Marlon, 1999. Informe de prácticas desarrollado en Control microbiológico y fisicoquímico de medicamentos genéricos en el laboratorio farmacéutico Roxfarma S.A. donde realizo el análisis microbiológico de cinco medicamentos genéricos, determinó que sus resultados son acorde con las especificaciones farmacopeicas establecidas. Sánchez E. Janeth. 2003. En su estudio sobre el Control microbiológico en la Industria farmacéutica, informa sobre los diversos análisis microbiológicos que se realizan al producto farmacéutico. Castro G. Omar, García C. Juan. 2012. Estudio desarrollado en la Evaluación. IC. A. microbiológica del recuento de bacterias, mohos y levaduras aislamiento e. M. identificación de E. coli. S. aureus, P. aeruginosa., Salmonella sp y Candida. Q UI. albicans en producto farmacéuticos expendidos en el Emporio Comercial Albarracín. O. de la ciudad de Trujillo evaluaron 12 marcas de productos expendidos, determinó. BI. que los análisis realizados solo 10 de ellas cumplen con los requisitos de calidad. IA. Y. adecuados para su comercialización.. Gentamicina. M AC. García C. Juan. 2012. Estudio desarrollado en la Determinación y Cuantificación de sulfato en Multiderm. crema. de. Laboratorios. Farmacéuticos. FA R. Farmindustria S.A por potencia antibiótica, mediante el método microbiológico. DE. cilindro-placa determino la potencia antibiótica de Gentamicina y demostró la efectividad y confiabilidad del método. CA. García S. Sheyla. 2013. Estudio en el Análisis microbiológico de productos no. TE. estériles y dietéticos elaborados por la Industria farmacéutica nacional. evaluó la. BL. IO. calidad microbiológica de 81 productos no estériles determinando que todos los. BI. productos cumplen con los criterios de aceptación.. Objetivo General 1. Ejecutar los controles microbiológicos a los productos farmacéuticos no estériles manufacturados en Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A.. Objetivos Específicos 1. Realizar el manejo adecuado de los medios de cultivo y cepas microbianas.. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. Realizar los análisis microbiológicos respectivos a los medios de cultivo y cepas microbianas. 3. Realizar los controles microbiológicos de ambiente, superficie y personal. 4. Desarrollar capacidades en el análisis microbiológico.. Descripción del Informe En el presente informe de prácticas sobre los controles microbiológicos se detalla las diversas actividades y análisis que se realizan en la sección de control microbiológico del área de control de calidad en la industria farmacéutica.. IC. A. El examen microbiológico de productos no estériles se realiza de acuerdo a los. M. métodos proporcionados en la Farmacopea de los Estados Unidos-USP, de Pruebas. Q UI. de Recuento Microbiano y Pruebas de Microorganismos Específicos.. O. Los criterios de aceptación para productos farmacéuticos no estériles basados en el. BI. recuento total de microorganismos aerobios (RTMA) y el recuento total combinado. IA. Y. de hongos filamentosos y levaduras (RTCHL) se presentan en las guías. . DE. FA R. II. LA INSTITUCIÓN O EMPRESA. M AC. farmacopeicas USP .4,5. Razón social. IO. Fundación e Historia. BL. . TE. CA. Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A.. BI. Laboratorios Farmacéuticos Markos S.A. es una empresa dedicada a la elaboración de productos farmacéuticos, que fue fundada en el año 1977, bajo la dirección del Sr. Marcelino Orihuela. En sus inicios impulsó la venta de productos galénicos, como Agua de Azahar, Agua Oxigenada, Agua del Carmen, Supositorios de Glicerina; llegando a ser su principal producto la Limonada Purgante Markos, dándole presencia en el mercado.. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Laboratorios farmacéuticos Markos S.A. inicia sus actividades como empresa dedicada al cuidado de la salud, a través de la fabricación y comercialización de sus productos farmacéuticos en el año de 1978. El flujo de producción obedece a una secuencia adecuada, desde el ingreso de la materia prima y material de empaque al almacén hasta la obtención del producto terminado. Actualmente Laboratorios farmacéuticos Markos S.A. cuenta con la certificación de Buenas Prácticas de Manufactura (BPM), otorgada por la Dirección General. A. de Medicamentos, Insumos y Drogas (DIGEMID), así como la certificación de. O. Misión. Y. BI. . Q UI. M. IC. Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL).. IA. Empresa farmacéutica nacional dedicada a la comercialización y producción de. M AC. medicamentos de calidad. Comprometidos con la plena satisfacción de nuestros. FA R. clientes, apoyados en la competencia de nuestro recurso humano, innovación, desarrollo de productos, tecnología actualizada, estrictos controles de calidad y. CA. DE. orientados a la preservación del medio ambiente.. TE. Influyendo positivamente en la calidad de vida de la comunidad y con el apoyo. Visión. BI. . BL. IO. constante de los accionistas a quienes se le garantiza el retorno de su inversión.. Seremos una empresa reconocida en el mercado farmacéutico Peruano, logrando la satisfacción de nuestros clientes y proveedores, en un mercado dinámico y exigente, con nuevos productos, a través de estrategias claras, innovación a todo nivel, plantas modernas, con personal capacitado que trabaja en equipo. Identificado y con altos niveles de motivación, disfrutando de una organización ágil y proactiva.. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Objetivos:. Comercialización y producción de medicamentos de calidad. Comprometidos. IC. Organigrama General. Q UI. M. . A. con la plena satisfacción de nuestros clientes.. BI. O. Gerencia General. IA. Y. Sub Gerencia General. FA R. M AC. Superintend ente de Planta Dirección Técnica. Jefe Aseguramiento de la Calidad. Jefe de Almacén. Jefe de Mantenimiento. Jefe de Producción. Jefe de Compras. BI. BL. IO. TE. CA. Jefe de Control de Calidad. DE. Asistente. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Organigrama del Área de Practica. Jefe de Control de Calidad. Responsable de Desarrollo Analítico. Responsable de Análisis Microbiológico. IC. A. Responsable de Análisis Fisico-Químico. Analista Responsable de Validaciones de Procesos de Fabricación. M. Q UI. Y. Analista Responsable de Validación de Limpieza. O. Analista Responsable de Material de Empaque. Analista Responsable de Microbiolgía. BI. Analista Responsable de Control de Procesos. Analista Responsable de Estabilidad de productos en comercialización. Analista Responsable de Equipos y Calibraciones de Material de Vidrio. Analista Responsable de Validación de Técnicas analíticas y Estándares. M AC. FA R DE CA. Analista Responsable de Desarrollo de Técnicas analíticas y estabilidad de productos nuevos. BI. BL. IO. TE. Analista Responsable de Producto Terminado. IA. Analista de Responsable de Materia Prima y Agua. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Funciones de área donde se desarrolla la práctica.  Realizar los análisis microbiológicos del agua purificada según los programas establecidos.  Realizar los análisis microbiológicos de ambientes según el programa establecido.  Realizar las pruebas de límite microbiano y determinación de patógenos a los productos terminados, materias primas, material de empaque.  Interpretar los resultados de las pruebas de límite microbiano, control microbiológico de aguas, control microbiológico de ambientes, control. IC. A. microbiológico de personal.. Q UI. M.  Realizar las valoraciones microbiológicas correspondientes cuando la técnica lo requiera.. BI. O.  Controlar y realizar los controles positivos y negativos de los medios de cultivo.. Y.  Realizar el mantenimiento y registro de las cepas patrón.. M AC. IA.  Preparar los materiales para valoraciones microbiológicas, medios de cultivo y otros necesarios para los análisis microbiológicos.. FA R.  Manejo de los estándares primarios y secundarios que requieran valoraciones. DE. microbiológicas..  Apoyo analítico en el área de análisis microbiológico durante las validaciones.. CA.  Manipular la autoclave y estufa para los procesos de esterilización.. IO. TE.  Coordinar y supervisar el mantenimiento de las condiciones del área de. BL. microbiología, así como, del funcionamiento continuo de las incubadoras a su. BI. cargo con los registros respectivos.  Elaborar los reportes correspondientes a los análisis microbiológicos realizados que constituyen la evidencia documentada de las actividades realizadas.  Elaborar procedimientos, instrucciones y toda la documentación necesaria para el mejor desempeño del puesto.  Custodiar y preservar la documentación técnica inherente al puesto como responsable de los análisis de producto microbiológico.. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Política de la Empresa Ofrecer productos y servicios competitivos, cumpliendo con las necesidades y expectativas de los clientes y los requisitos regulatorios, mejorando continuamente nuestro Sistema de Gestión Integral de Calidad a través del compromiso con la prevención de la contaminación ambiental y el control de los aspectos e impactos significativos reales y potenciales, asegurando resultados sociales, empresariales y económicos que garanticen la sostenibilidad de la empresa.. A. Servicios de la empresa. IC. . M. Empresa farmacéutica nacional dedicada a la comercialización y producción de. Q UI. medicamentos de calidad, al servicio de la medicina humana, Con altos. O. estándares de calidad – Buenas Prácticas de Manufactura (B.P.M.), satisfacemos. BI. las necesidades de nuestros clientes y generamos valor agregado.. IA. Y. Suministramos materias primas, materiales de Envase, Control de Calidad,. M AC. Validación de Metodologías Analíticas y Estudios de Estabilidad en tiempo. Localización. DE. . FA R. oportuno.. BI. BL. IO. TE. CA. Av. Separadora Industrial 531 / Urb. Los Alamos, Ate – Lima – Perú. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Infraestructura Administrativa y Productiva:. BI. BL. IO. TE. CA. DE. FA R. M AC. IA. Y. BI. O. Q UI. M. IC. A. . 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. ACTIVIDADES DESARROLLADAS. POE: CC-MAMB-017: PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO 6 Los medios de cultivo constituyen la base de la mayoría de las pruebas microbiológicas. Por tanto, es de suma importancia que se proteja la calidad de estos medios a fin de lograr resultados exitosos en el laboratorio de microbiología. La preparación de los medios, el almacenamiento apropiado y las pruebas de control de calidad pueden asegurar un suministro uniforme de medios de alta calidad.. M. IC. A. Describir las pautas necesarias para la correcta preparación de los medios de cultivo.. Q UI. El analista responsable de preparación de medios de cultivo verifica, previamente a la. Y. BI. apariencia grumosa o si presenta alteración del color.. O. pesada, el color y la apariencia del medio deshidratado. No utilizar el medio si tiene la. IA. Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado en un beacker, cubrir con aluminio y. M AC. registrar en el cuaderno de preparación de medios de cultivo. El medio pesado es. FA R. transferido a un balón, matraz y/o jarra limpia de acero inoxidable con capacidad adecuada para disolver siguiendo las instrucciones indicadas en la tabla 1. Se verifica el. DE. pH de todos los medios de cultivo.. CA. Se tapa los balones conteniendo los medios con torundas (algodón y gasa), un capuchón. TE. de papel Kraft y sobre el papel se pega una tira de cinta indicador de esterilidad de calor. BL. IO. húmedo (que permite confirmar la distribución del vapor en la autoclave). Luego se. preparación.. BI. rotula colocando el nombre del medio de cultivo, número de lote y la fecha de. Se colocan los balones con los medios preparados en bandejas para su Proceder a la esterilización considerando los parámetros indicados en la tabla 1. Los medios de cultivo preparados debidamente identificados son almacenados en refrigeración entre 2°C - 8°C y tienen vigencia de un mes.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Preparación de solución amortiguadora fosfato ph 7,2: Solución Amortiguadora Madre: Transferir 34g de fosfato monobásico de potasio a un matraz volumétrico de 1 000mL, disolver en 500mL de agua purificada, ajustar con hidróxido de sodio a un pH 7,2 ± 0,2, agregar agua purificada a volumen y mezclar. Dispensar en recipientes y esterilizar. Almacenar a una temperatura de 2°C a 8°C. Solución Amortiguadora Fosfato pH 7,2: Para usar medir 1 mL de la solución Amortiguadora madre y diluir hasta 800 mL, distribuir en balones y esterilizar en un. IC. A. autoclave a 121°C y aproximadamente a 15 psi, de presión durante 15 minutos.. Q UI. M. Distribuir las soluciones según indica: Solución amortiguadora de fosfato pH 7,2. : 9 mL. Y. BI. O. Solución amortiguadora de fosfato pH 7,2 en tubos de prueba. : 90 mL. Cantidad. medios de cultivo. requerida. Agar antibiótico. 30,5 g por. N°11. litro. Calidad de. pH (a. Recomendaciones de. Esterilizar. agua. 25°). preparación. Agua purificada. 8,3 ± 0,1. Disolver calentando. 121°C por. en baño maría. 15 minutos. TE. CA. DE. Nombre de. FA R. M AC. IA. Tabla 1: Fórmula de los medios de cultivo. IO. hirviendo o en. BI. BL. corriente de vapor. Agua purificada. Agar manitol. 108 g por. salado (MS). litro. Calentar en agua 7,4 ± 0,2. hirviente y agitar con. 121°C por. frecuencia hasta. 15 minutos. disolución completa Agar Cetrimide. 45,3 g por. (CM). litro. Agua purificada. 7,2 ± 0,2. Disolver calentando. 121°C por. en agua hirviente o en. 15 minutos. corriente de vapor y agregar 10mL de glicerina por litro de. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. medio. Agar MacConkey. 50,0 g por. (MC). litro. Agua purificada. 7,1 ± 0,2. Disolver calentando. 121°C por. en baño maría. 15 minutos. hirviendo o en corriente de vapor. 55,2 g Agar xilosa lisina. por litro. Agua purificada. 7,2 ± 0,2. Disolver calentando. estéril. No Autoclavar.. en baño maría. Desoxicolato. hirviendo o en. (XLD). corriente de vapor. Los precipitados ocasionales no. IC. A. perjudican la eficacia. 42,5 g por. vassiliadis para. litro.. Agua purificada. 5,2 ± 0,2. en tubos o matracitos.. 15 minutos. Disolver calentando. 121°C por. en baño maría. 15 minutos. BI 22,5g por. 7,0 ± 0,2. litro. 65,0 g por. sabouraud 4%. litro. corriente de vapor. 5,6 ± 0,2. TE. CA. (AS). Agua purificada. hirviendo o en. DE. Agar glucosa. FA R. M AC. (PC). Agua purificada. IA. Agar plate count. Y. salmonella (CRV). BL. IO. 35,0 g por. Disolver calentando. 121°C por. en agua hirviente y. 15 minutos. agitar con frecuencia. No. hasta disolución. sobrecalentar. completa. Agua purificada. 7,3 ± 0,2. litro. Disolver e Introducir. 121°C por. en tubos de ensayo. 15 minutos. dotados de tubitos de. BI. (CM). 115°C por. O. enriquecimiento de. Caldo Mac Conkey. Disolver e introducir. Q UI. Caldo Rappaport –. M. del medio de cultivo.. fermentación. Agar Digerido de. 40,0 g por. caseína y soja. litro. Agua purificada. 7,3 ± 0,2. (TSA). Disolver calentando. 121° por. en baño maría. 15 minutos. hirviendo o en corriente de vapor.. Caldo digerido de. 30,0 g por. Caseína y soja. litro. Agua purificada. (TSB). 7,3 ± 0,2. Agitar con frecuencia. 121°C por. hasta disolución. 15 minutos. completa.. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Agar antibiótico. 17,5 g por. N° 3. litro. Agua purificada. 7,0 ± 0,05. Disolver mezclando. 121° por. bien y calentar. 15 minutos. agitando frecuentemente y hierva durante 1 minuto para disolver completamente el polvo. Caldo Mossel para. 45 g por litro. Agua purificada. 7,2 ± 0,2. Disolver mezclando. 121° por. enriquecimiento de. bien. Introducir en. 5 minutos. Enterobacterias. tubos y Autoclavar o. IC. A. calentar durante 30. M. minutos a 100° en. Q UI. baño de agua hirviente. vapor enfriar. inmediatamente.. 39,5 g por. bilis Glucosa. litro. Agua purificada. M AC. Agar Violeta rojo. IA. Y. BI. O. o en corriente de. estéril. DE. FA R. (VRBD). 7,4 ± 0,2. Disolver y hervir en. No Autoclavar. un baño de agua. No. hirviente o en. Sobrecalentar. corriente de vapor bajo agitación regular por balanceo hasta que. CA. el medio de cultivo se. TE. haya disuelto. IO. completamente.. BL. Seguidamente. BI. continuar hirviendo no más de 2 minutos.. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. POE: CC-MB.012: ESTERILIZACIÓN POR CALOR HUMEDO 6 La Esterilización es un proceso por el cual se eliminan o destruyen todas las formas viables de microorganismos. El calor húmedo es un vapor saturado a presión. Establecer los pasos para la correcta esterilización por calor húmedo de los medios de cultivos y materiales; se aplica a todos los medios de cultivos recientemente preparados y/o materiales que sea necesario esterilizar por calor húmedo como hisopos, cucharas descartables, tips, guantes.. A. Para llevar a cabo la esterilización de medios de cultivo y materiales, se hace uso de la. M. IC. autoclave, la cual se utiliza cada vez que se requiera realizar este proceso.. Q UI. Se colocan los medios de cultivo o material a esterilizar en bandejas limpias y secas.. BI. proceso de esterilización se lleve de manera adecuada.. O. Colocar al material a esterilizar la cinta indicadora de esterilización para verificar que el. IA. Y. Introducir el material dentro de la autoclave, proceder a autoclavar.. M AC. Para la esterilización de materiales mediante calor húmedo se deberán tener en cuenta. FA R. las siguientes condiciones:. :. 15 psi. TEMPERATURA. :. 121C. TIEMPO. :. 15 minutos. TE. CA. DE. PRESION. BL. IO. Para la esterilización de medios de cultivo mediante calor húmedo considerar las. BI. condiciones indicadas en metodología analítica. Se deberá llevar un control del ciclo de esterilización, el cual será registrado en el formato F-CC.013 “CONTROL DE ESTERILIZACION”, realizar cinco registros, distribuidos como sigue: CONTROL No 1. :. Al inicio. CONTROL No 2. :. Después de 4 minutos. CONTROL No 3. :. Después de 4 minutos adicionales. CONTROL No 4. :. Después de 4 minutos adicionales. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CONTROL No 5. :. Después de 3 minutos adicionales. Asimismo en el ítem PRODUCTO de este formato, registrar el N° de lote de preparación de los medios a esterilizar. Concluido el proceso, retirar y trasladar el material esterilizado por la puerta Nº 1 de la autoclave, seguidamente cerrar la autoclave. Verificar cada 15 días la eficiencia del autoclavado mediante el uso del bioindicador.. A. POE: CC-MB.005: ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES POR CALOR SECO 6. IC. El correcto proceso de esterilización de los materiales por calor seco, nos asegura la. Q UI. M. eliminación de alguna forma viable de microorganismos presente en el material,. O. garantizando así la efectividad del análisis microbiológico.. BI. Se aplica a todos los materiales de vidrio y aquellos que resistan una temperatura de. IA. Y. 180º.. M AC. Los materiales a esterilizar por este método son los siguientes: pipetas gravimétricas y volumétricas, placas petri, fiolas, probetas, pinzas de acero inoxidable, espátulas de. Preparación de los materiales. DE. FA R. acero inoxidable, frascos para muestreo, tubos de prueba.. CA. Los materiales a esterilizar son preparados previamente antes de proceder a la esterilización.. IO BL. . Pipetas: en la parte superior de la pipeta colocar algodón y eliminar los residuos de algodón. BI. pasos:. TE. Previamente este material debe estar limpio y seco; para lo cual se tendrá en cuenta los siguientes. cortándolos con una tijera, envolver cada pipeta con papel kraft de tal forma que sea fácil sacarla por la parte superior sin necesidad de comprometer el resto de la pipeta. . Placas Petri: se agrupan en paquetes de cuatro placas y se envuelven en papel kraft.. . Fiolas y probetas: se envuelve la parte superior (la boca) con papel aluminio.. . Tubos de prueba: se les colocará un tapón de algodón, se envuelven en paquetes de cuatro con papel kraft.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Frascos: cubrir el tapón de algodón con papel kraft y atar con pabilo ésta cubierta sobre la rosca del frasco.. . Pinzas, sacabocados y espátulas de acero inoxidable: Envolverlos en papel aluminio.. Los materiales a esterilizar se colocan en la estufa de esterilización, se coloca la cinta indicadora de esterilización al material, para verificar que el proceso de esterilización se lleve de manera adecuada. Llevar a una temperatura aproximada de 180C, una vez que la estufa ha alcanzado la temperatura, anotar la hora y a partir de ahí contar dos horas para el término de la. A. esterilización.. IC. Controlar la temperatura del horno de esterilización cada 30 minutos y hacer las. Q UI. M. anotaciones pertinentes en el formato F-CC.013 “CONTROL DE ESTERILIZACIÓN”.. BI. encuentre dañado; de ser así descartar dicho material.. O. Retirar los materiales esterilizados, revisar que el papel que los envuelve no se. Y. Trasladar y guardar el material esterilizado en el lugar acondicionado para este fin.. M AC. IA. El material esterilizado es almacenado por un periodo no mayor a 30 días, después del. FA R. cual el material vuelve a ser preparado y sometido al proceso de esterilización.. CA. DE. POE: CC-MB.010: CONTROLES POSITIVOS Y NEGATIVOS 6. TE. Asegurar que los medios de cultivo preparados conserven las propiedades, garantizando. IO. una respuesta adecuada frente a los microorganismos.. BL. Cada lote de medios de cultivos preparados y esterilizados pasan por las pruebas de. BI. controles positivos y negativos. Controles negativos Todos los medios de cultivos preparados y esterilizados son colocados en la incubadora en condiciones descritas según la Tabla N°2, luego son revisados para descartar alguna posible contaminación, mala manipulación o esterilización deficiente. Se descarta aquellos medios donde haya evidencia de crecimiento de microorganismos.. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los medios de cultivo que pasen esta prueba son ubicados en la refrigeradora a una temperatura de 2°C - 8°C por espacio no mayor de 1 mes. Controles positivos. Se siembra la cepa especificada para cada medio a evaluar según Tabla Nº 2. Los medios son incubados en las condiciones establecidas para el crecimiento de cada cepa según tabla Nº2. Las pruebas se consideran satisfactorias si hay una clara evidencia de crecimiento en los medios inoculados. Los medios de cultivo se descartan si muestran una respuesta. M. IC. A. inadecuada de crecimiento.. Q UI. Los resultados de los controles respectivos se registran en el formato correspondiente F-. BI. O. CC.022 Controles Positivos Y Negativos.. IA. Y. Tabla N°2: Controles positivos y negativos. MEDIOS. M AC. CONTROL POSITIVO. Agar Cetrimide. Pseudomona. DE. aeruginosa.. caseína y soja. TIEMPO. (ºC). (horas). (ºC). (horas). 30 a 35. 24. 30 a 35. 24. 30 a 35. 24. 30 a 35. 24. TE. salado. Caldo Digerido de. Tº. ATCC 9027. Staphylococcus. IO. Agar Manitol. TIEMPO. CA. Agar Plate Count. Tº. FA R. CEPA. CONTROL NEGATIVO. BL. Aureus. BI. ATCC 6538. Agar Digerido de caseína y soja.. Agar MacConkey Caldo MacConkey. Escherichia coli ATCC 8739. 30 a 35 42 a 44. 24. 30 a 35 42 a 44. 24. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. CONTROL POSITIVO. MEDIOS. TIEMPO. Tº. CEPA. CONTROL NEGATIVO Tº. (Horas/Días. (ºC). (ºC). ). TIEMPO (Horas/Días ). Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Salmonella thyphi Caldo Rappaport. ATCC 14028. 30 a 35. 24. 30 a 35. 24. 30 a 35. 24. vassiliadis para. IC. A. enriquecimiento de. M. salmonella.. epidermidis. Nº 11. Q UI. Staphylococcus. Agar Antibiótico. BI. 20 a 25. Candida albicans. 5-7. 20 a 25. 5. -7. M AC. IA. Dextrosa. Y. Agar sabouraud. 24. O. ATCC 12228. 30 a 35. FA R. POE: CC-MB.020: MANEJO Y MANTENIMIENTO DE CEPAS PATRONES.7. DE. Garantizar la conservación y el mantenimiento de las cepas a utilizarse en los controles. CA. Microbiológicos a fin de garantizar los resultados obtenidos cuando se requiera su uso.. TE. Se aplica a toda la colección de cepas utilizadas en el área de microbiología del. Cepa: Cultivo puro de un microorganismo, clasificado y tipificado, con. BI. . BL. IO. departamento de control de calidad. características morfológicas y bioquímicas constantes con código ATCC. . ATCC: American Type Cultura Collection (Organización Estadounidense encargada principalmente del mantenimiento de cultivos puros, auténtico de bacterias y otros microorganismos: levaduras, mohos, protozoos, virus y ricketsias).. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Cepa stock: Representan el verdadero banco de cepas, serán mantenidos en un sistema cerrado de conservación minimizando su actividad genética y fisiológica. Lo constituyen las cepas originales.. . Cepas de trabajo diario: Los cultivos control para el trabajo diario, son una forma conveniente para realizar el control de calidad de pruebas de uso frecuente. Cepas utilizadas: ATCC 6538. Staphylococcus epidermidis. ATCC 12228. Pseudomona aeruginosa. ATCC 9027. IC. A. Staphylococcus aureus. ATCC 8739. Bacillus subtilis. ATCC 6633. Q UI. M. Escherichia coli. ATCC 14028. O. Salmonella typhimurium. ATCC 10231. BI. Candida albicans. ATCC 16404. M AC. IA. Y. Aspergillus brasiliensis. Las cepas utilizadas para los controles microbiológicos serán cepas certificadas tipo. FA R. ATCC, estas se encuentran ubicadas en condiciones ambientales controladas en el área de microbiología (Refrigeración de 2 a 8ºC).. DE. Se recepcionará cepas stocks pertenecientes a la 2da generación dependiendo de su. TE. 1.. IO. Reconstitución del cultivo de referencia: Retirar la cinta blanca de seguridad del tubo contenedor de los sachets. BL. . CA. disponibilidad.. BI. (Kwik-Stik). 2.. Abrir un sachet y retirar el dispositivo de color naranja donde se encuentra el hisopo de inoculación.. 3.. Retirar la etiqueta de seguridad del dispositivo. Presionar la parte superior del dispositivo hasta emerger el fluido hidratante. 4.. Abrir el dispositivo y retirar el hisopo de inoculación, cultivar por agotamiento en una placa de agar no selectivo Agar digerido de caseína y soja (TSA), excepto para las cepas Candida albicans, Aspergillus. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. brasiliensis en las que se empleará Agar Sabouraud (AS) y para la cepa de Staphylococcus epidermidis se utilizará Agar antibiótico N° 11. . Reconstituido el cultivo de referencia, se obtiene el cultivo operativo mensual (2do pasaje) “placa de granulación”.. . La placa de granulación será rotulada con el nombre de la cepa madre, N° ATCC, N° de lote de cepa, código de cultivo y la fecha de reconstitución. Incubar por 24 horas a una temperatura de 30 - 35 °C; excepto las cepas de hongos y levaduras que serán incubadas por un periodo  5 días a una temperatura de 20 a 25 °C, registrar en el formato F-CC.021 V2 “Control de. IC. Evidenciado el crecimiento en la placa de granulación, realizar subcultivo. M. . A. cepas patrón” .. Q UI. semanal a una placa de agar no selectivo (Agar digerido de caseína y soja -. O. TSA), excepto para las cepas Candida albicans, Aspergillus brasiliensis en las. Y. BI. que se empleará Agar Sabouraud (AS) y para la cepa de Staphylococcus. IA. epidermidis se utilizará Agar antibiótico N° 11. Obteniendo cultivo operativo. M AC. semanal (3er pasaje) de la semana 1 y día 1, cada día de la semana crear colonias. FA R. de subcultivo de esta placa a una placa nueva. De modo que para cada día de la semana se tenga una placa en uso (4to pasaje). Al finalizar cada semana realizar un nuevo subcultivo de la placa de. DE. . CA. granulación. Este procedimiento se continúa hasta culminar las cuatro semanas. TE. (esquema 1); registrar en el formato F-CC.151 “CONTROL DE USO DE. Las placas serán rotuladas con el nombre de la cepa madre, N° ATCC, N° de. BL. . IO. CEPAS”.. BI. lote de cepa, código de cultivo, fecha de repique, número de pasaje y número de placa correspondiente a cada semana en uso. Incubar por 24 horas a una temperatura de 30 - 35 °C; excepto las cepas de hongos y levaduras que serán incubadas por un periodo  5 días a una temperatura de 20 a 25 °C. . Las cepas serán conservada a una temperatura de refrigeración de 2 a 8 °C y a la vez eliminar las cepas pertenecientes al repique anterior, según POE: CCMB.003 “LIMPIEZA DE MATERIAL CONTAMINADO” por esterilización de calor húmedo a 121° por media hora.. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Realizar el subcultivo el día anterior al ensayo de tal forma que permita su. CA. DE. FA R. M AC. IA. Y. BI. O. Q UI. M. IC. A. disponibilidad al día siguiente.. MEDIOS65,8. IO. TE. POE: CC-MB.021: VERIFICACIÓN Y PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO DE LOS. BL. Establecer el procedimiento adecuado para verificar que los diferentes medios de. BI. cultivo utilizados en el área de microbiología cumplan con la promoción de crecimiento para investigación de bacterias, levaduras y hongos. Se aplica a todos los medios de cultivo. Promoción de crecimiento: Es la capacidad de los medios de cultivo de promover y evidenciar el crecimiento de los microorganismos sembrados en ellos. Todo lote de medio de cultivo debe cumplir el test de promoción de crecimiento.. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Medio líquido: Inocular una porción del medio apropiado con un número pequeño (no más de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura y tiempo especificado. Se produce un crecimiento claramente visible de microorganismos comparable al obtenido anteriormente con una partida de medio analizada y aprobada anteriormente.. . Medio sólido: Inocula cada una de las placas con un número pequeño (no más de 100 ufc) del microorganismo adecuado. Incubar a la temperatura y tiempo especificado. Se produce un crecimiento de microorganismos comparable al obtenido anteriormente con una partida de medio analizada y aprobada. IC. A. previamente.. Q UI. M. Preparación del inóculo:. BI. O. 1. Repicar la cepa en tubo inclinado de TSA de no más de 24 horas, preparar una. Y. suspensión con solución amortiguadora de cloruro de sodio – peptona de pH: 7.0. M AC. IA. solución amortiguadora de fosfato de pH: 7.2; para suspender esporas de Aspergillus brasiliensis se puede añadir 0.05% de polisorbato 80 al buffer. Usar. FA R. las suspensiones dentro de las 24 horas, si se almacenan a una temperatura de 2ºC a 8ºC.. DE. 2. A partir de esta solución madre de microorganismos, hacer diluciones.. CA. 3. Prever 10 tubos conteniendo 9.0 mL de solución amortiguada de fosfato de pH:. TE. 7.2.. IO. 4. Añadir 1.0 mL de la solución madre al primer tubo que corresponde la dilución. BL. 1: 10 (I)….10-1.. BI. 5. De (I) transferir 1mL al segundo tubo que contiene 9 mL solución amortiguada de fosfato de pH: 7.2. Dilución 1:100 (II)…..10-2. 6. De (II) transferir 1 mL a un tubo que contiene 9 mL solución amortiguada de fosfato de pH: 7.2. Dilución 1:1000 (III)…10 -3. 7. En forma continua realizar las diluciones hasta llegar a la dilución 10-10. 8. De las diluciones seriadas transferir por duplicado 1 mL a placas petri y adicionar entre 15 a 20 mL, aproximadamente, de Agar digerido caseína y soja e incubar a una temperatura de 30° a 35°C por un periodo de 18 – 24 horas.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 9. De las diluciones seriadas de la cepa Candida albicans, transferir por duplicado 1 mL a placas petri y adicionar entre 15 a 20 mL, aproximadamente, de Agar sabouraud dextrosa e incubar a una temperatura de 20° a 25°C por un periodo de 48 – 72 horas. 10. De las diluciones seriadas de la cepa Aspergillus brasiliensis, transferir por duplicado 1 mL a placas petri y adicionar entre 15 a 20 mL, aproximadamente, de Agar sabouraud dextrosa e incubar a una temperatura de 20° a 25°C por un periodo de 5 – 7 días, o hasta alcanzar una buena esporulación. 11. Usar la dilución en la que se obtengan un recuento entre 10 a 100 ufc/mL.. A. Guardar la batería de diluciones en la refrigeradora de 2º – 8ºC.. M. IC. Registrar la dilución y las ufc/mL en el formato F-CC.140 “Registro De. Q UI. Promoción De Crecimiento” .. BI. O.  Medio de cultivo Agar digerido de caseína y soja es de amplio. IA. Y. espectro:. M AC. Microorganismo. FA R. Bacillus subtilis. N° ATCC 6633 9027. Staphylococcus aureus. 6538. CA. DE. Pseudomonas aeruginosa. TE. - Transferir a placas 1 mL de la suspensión que se obtenga un recuentro entre 10. IO. a 100 ufc/mL.. BL. - Añadir de 15 a 20 mL de cultivo Agar digerido de caseína y soja. BI. - Homogeneizar la mezcla haciendo movimientos circulares. - Dejar solidificar los medios de cultivo inoculados a temperatura ambiente. - Incubar a una temperatura de 30º C a 35°C, durante un periodo  3 días. - Observar crecimiento de colonias.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Medio de cultivo Agar Saboraud Dextrosa al 4%:. Microorganismo. N° ATCC. Candida albicans. 10231. Aspergillus brasiliensis. 16404. - Transferir a placas 1 mL de la suspensión que se obtenga un recuentro entre 10 a 100 ufc/ml. - Añadir de 15 a 20 mL de agar saboraud dextrosa al 4%.. A. - Homogeneizar la mezcla haciendo movimientos circulares.. M. IC. - Dejar solidificar los medios de cultivo inoculados a temperatura ambiente.. Q UI. - Incubar a una temperatura de 20º C a 25ºC, durante un periodo  5 días.. BI. O. - Observar crecimiento de colonias.. M AC. IA. Y.  Medio de cultivo Agar Plate count:. FA R. Microorganismo Bacillus subtilis. DE. Escherichia coli. N° ATCC 6633 8739 6538. TE. CA. Staphylococcus aureus. IO. - Transferir a placas 1 mL de la suspensión que se obtenga un recuentro entre 10. BL. a 100 ufc/mL.. BI. - Añadir de 15 a 20 mL de agar plate count. - Homogeneizar la mezcla haciendo movimientos circulares. - Dejar solidificar los medios de cultivo inoculados a temperatura ambiente. - Incubar a una temperatura de 30º C a 35°C, durante un periodo  3 días. - Observar crecimiento de colonias.. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Medio de cultivo Caldo digerido de caseína y soja de Enriquecimiento:. Microorganismo. N° ATCC. Bacillus subtilis. 6633. Pseudomonas aeruginosa. 9027. Staphylococcus aureus. 6538. - Transferir 1mL de la de la suspensión que se obtenga un recuentro entre 10 a 100 ufc/mL a frascos que contengan 9mL Caldo digerido de caseína y soja.. IC. A. - Incubar a una temperatura de 30º C a 35ºC, durante un periodo  3 días.. Q UI. M. - Observar que todos los caldos de cultivo presenten turbidez.. Y. BI. O.  Medio de cultivo caldo Mc Conkey:. M AC. IA. Microorganismo Staphylococcus aureus. FA R. Escherichia coli. N° ATCC 6538 8739. DE. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100. CA. ufc/ml, a frascos que contengan 9mL caldo Mc Conkey.. TE. - Incubar de 42º C a 44º C durante un periodo de 24 a 48 horas.. IO. - Observar que los frascos inoculados con la cepa de E. coli presenten turbidez. BI. BL. y los frascos con inoculo de Staphylococcus aureus no presenten turbidez..  Medio de cultivo Caldo Rappaport – Vassiliadis y caldo tetrationato.. Microorganismo. N° ATCC. Salmonella typhimurium. 14028. Staphylococcus aureus. 6538. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml, a frascos que contengan 9mL Caldo Rappaport-Vassiliadis. - Incubar de 30° C a 35° C durante un periodo de 18 a 24 horas. - Observar que los frascos inoculados con la cepa de Salmonella typhimurium presenten turbidez y los frascos con inoculo de Staphylococcus aureus no presenten turbidez.. Escherichia coli. 8739. IC. N° ATCC. O. Q UI. M. Microorganismo. A.  Medio de cultivo Agar Mc Conkey.. BI. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100. IA. Y. ufc/ml, sembrar por extensión en placa con agar Mc Conkey. - Características de las colonias:. M AC. - Incubar la placa de 30º C a 35ºC durante un periodo de 18 a 72 horas.. FA R.  Escherichia coli: Colonias de color rojo a rosado y pueden tener una. DE. zona de bilis precipitada alrededor.. TE. CA.  Medio de cultivo Agar Xilosa Lisina Desoxicolato: N° ATCC. IO. Microorganismo. 14028. BI. BL. Salmonella typhimurium. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml, sembrar por extensión en placa con agar Xilosa Lisina Desoxicolato. - Incubar de 30º C a 35º C durante un periodo de 18 a 48 horas. - Característica de las colonias: . Salmonella typhimurium: Colonias de color rojo, con o sin centro negro. Bacilos gram negativo.. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Medio de Cultivo de Agar Manitol salado:. Microorganismo. N° ATCC. Staphylococcus aureus. 6538. Escherichia coli. 8739. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml, sembrar por extensión en placa con agar Manitol salado. - Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de 18 a 72 horas.. IC. A. - Características de las colonias:. Q UI. M.  Staphylococcus aureus: Colonias de color amarillo con zonas amarillas.. O.  Escherichia coli: No hay crecimiento de colonias, debido al potente efecto. Y. BI. inhibidor de este medio.. M AC. IA.  Medio de cultivo Agar Antibiótico N°11. FA R. Microorganismo. N° ATCC 12228. DE. Staphylococcus epidermidis. TE. CA. - Transferir a placas 1 mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml.. BL. IO. - Añadir de 15 a 20 mL de agar antibiótico N°11. BI. - Homogeneizar la mezcla haciendo movimientos circulares. - Dejar solidificar los medios de cultivo inoculados a temperatura ambiente. - Incubar a una temperatura de 30º C a 35° C, durante un periodo de 18 a 24 horas. - Observar crecimiento de colonias.. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Medio de cultivo Agar Cetrimide:. Microorganismo. N° ATCC. E. coli. 8739. Pseudomona aeruginosa. 9027. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml sembrar por extensión en placa con Agar Cetrimide. - Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de18 a 72 horas.. A. - Características de las colonias:. M. IC.  Pseudomonas aeruginosa: Generalmente son de color verde presencia de. Q UI. fluorescencia verdosa a la luz ultravioleta.. Y. BI. O.  Escherichia coli: Ausencia o presencia de escasas colonias.. M AC. IA.  Medio de cultivo Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa:. E. coli. 8739 9027. CA. DE. Pseudomona aeruginosa. N° ATCC. FA R. Microorganismo. TE. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml. IO. sembrar por extensión en placa con agar Violeta Rojo Bilis Glucosa.. BL. - Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de18 a 72 horas.. BI. - Características de las colonias:  Pseudomonas aeruginosa: Colonias incoloras.  Escherichia coli: Colonias de color rojo purpura con halo de precipitación rojizo.. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Medio. de. cultivo. Caldo. Mossel. para. Enriquecimiento. de. Enterobacterias: Microorganismo. N° ATCC. E. coli. 8739. Pseudomona aeruginosa. 9027. Staphylococcus aureus. 6538. - Transferir 1mL de la suspensión que se obtenga un recuento entre 10 a 100 ufc/ml, a frascos que contengan 9mL de Caldo Mossel para Enriquecimiento. A. de Enterobacterias.. M. IC. - Incubar las placas de 30° C a 35° C durante un periodo de 18 a 72 horas.. Q UI. - Observar que los frascos inoculados con la cepa de E. coli y Pseudomona. O. aeruginosa presenten turbidez y los frascos con inoculo de Staphylococcus. IA. Y. BI. aureus no presenten turbidez.. Para medios sólidos ensayados, el crecimiento obtenido no debe ser. FA R. . M AC. Resultados:. menor al 70% a partir del valor calculado para un inoculo. Para medios líquidos observa un crecimiento claramente visible de. CA. . DE. estandarizado.. IO. TE. microorganismos (turbidez).. BL. POE: CC-MB.001: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE AMBIENTES 3. BI. Es de suma importancia llevar un control periódico de los ambientes donde se lleva a cabo la manufactura de los productos farmacéuticos. El control de ambientes se realiza por el método de exposición de placas. El control se realizará en dos formas: . En área ocupada con personal y máquinas operativas.. . En área desocupada sin personal y con máquinas no operativas.. 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se procede a preparar y autoclavar los medios de cultivo TSA. Una vez autoclavados dejarlos enfriar hasta 45ºC. En condiciones asépticas y en el área de microbiología verter 15mL del agar en placas estériles previamente rotuladas con el nombre del agar. Dejar enfriar y proceder a realizar los controles negativos. Retirar las placas y revisar que no haya ningún tipo de crecimiento, de ser así descartar la placa. El responsable del muestreo ingresa a las áreas a controlar siguiendo estrictamente los flujos de ingreso y salida en cumplimiento de las instrucciones establecidas en cada. A. área.. M. IC. El responsable del muestreo hace uso del plano respectivo para ubicar los puntos en el. Q UI. área a controlar, seguidamente procede a rotular las placas indicando fecha de. O. exposición, área, ubicación de la placa en el plano, nombre del personal que se. BI. encuentra en el área laborando, si el área se encuentra vacía se rotula en las condiciones. IA. Y. que se encuentre.. M AC. Colocar las placas cerradas en cada punto de control. Levantar casi simultáneamente la. FA R. tapa de las placas y exponerlas por 60 minutos.. DE. Transcurrido el tiempo de exposición el responsable del muestreo tapa las placas, las invierte y ubica en las bandejas de muestreo para su transporte adecuado al área de. TE. CA. Microbiología.. IO. En el área de microbiología se incubara las placas invertidos por 48-72 horas de 30. BI. BL. 35 °C para recuento de microorganismos mesófilos viables. Incubar las placas a 20 - 25°C por 5-7 días para recuento de hongos y levaduras. Al cabo de este período de tiempo realizar el conteo de ufc por punto de control.. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. POE: CC-MB.008: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE SUPERFICIE. 3. Medir eficientemente mediante la prueba de hisopado, los niveles bacterianos, de hongos y levaduras en superficies lisas e irregulares. Se designa previamente el área y la superficie que va a ser controlada. Según los puntos establecidos en cada área de producción. De acuerdo a la zona, equipo a muestrear se escogerá la plantilla, que puede ser: de 10x10; 5 x 5; 2 x 2. Se coge la plantilla de acero inoxidable previamente esterilizada. Se coloca en la superficie. Con un hisopo estéril embebido en 10 mL de solución. IC. A. amortiguadora buffer fosfato PH 7,2.se hisopa toda la superficie delimitada teniendo. Q UI. M. cuidado de no dejar ningún espacio sin hisopar.. Se procede al hisopado en forma horizontal, luego vertical y finalmente diagonal,. BI. O. teniendo en cuenta de cubrir toda la superficie.. Y. Inmediatamente introducir el hisopo en el tubo de prueba que contiene los 10 mL de. M AC. cuidado de no tocar el tapón del tubo.. IA. solución amortiguadora buffer fosfato PH 7,2, tapar y agitar suavemente teniendo. FA R. En el área de microbiología se procede a sembrar por el método de incorporación 1 mL de la solución en una placa petri previamente rotulada con el nombre del medio, fecha. DE. y zona de control.. CA. Rápidamente se añade aproximadamente 15 mL de agar TSA licuado a 45ºC (para. TE. recuento de mesófilos aerobios viables).. IO. Se homogeniza la placa con 4 movimientos rotatorios en sentido horario, antihorario,. BL. de arriba a abajo y de abajo a arriba.. BI. Se espera que solidifique el agar y se incuba la placa invertida a 30 - 35 ºC por 48 – 72 horas. Se repite el mismo procedimiento con 1 mL de muestra y se añade Agar Sabouraud licuado a 45ºC (para recuento de hongos y levaduras) se incuba a 20 - 25º C por 5 – 7 días. Alternativamente se puede trabajar con TSA para recuento de mesófilos aerobios viables, hongos y levaduras, para lo cual, se debe rotular la placa como TSA/AS y se. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. deja incubar por 48 – 72 horas de 30 - 35ºC, tiempo después del cual se pasa a incubar a 20 – 25º C por 5 a 7 días. Transcurrido el tiempo de incubación, se procede a realizar el recuento de las ufc. Se realizan los cálculos y expresan los resultados en ufc/cm2. Los resultados son reportados en el formato correspondiente de cada área.. POE: CC-MB.013: CONTROL MICROBIOLÓGICO DE PERSONAL3 Establecer y desarrollar los lineamientos para un control adecuado y oportuno del. IC. A. personal en las distintas áreas y en cada uno de los procesos de la producción.. Q UI. M. Preparar y autoclavar tubos conteniendo 10 mL de solución amortiguadora buffer PH 7,2.. BI. O. Previo al control del personal y en condiciones asépticas introducir los hisopos en los. Y. tubos de modo que éstos se mantengan sumergidos en la solución.. M AC. donde realizar el control del personal.. IA. Definir el área sometida a control de acuerdo al programa para determinar las áreas. FA R. Definir al personal y las zonas a controlar de éstas dependiendo del trabajo que realizan en el área:. Manos: con o sin guantes. -. Cabellos: si se evidenciara cabellos sueltos.. -. Uniforme: puños, parte delantera.. TE. CA. DE. -. IO. Rotular los tubos con el nombre del personal y la zona controlada.. BL. Proceder a realizar el hisopado de la zona elegida e introducir dicho hisopo en el tubo. BI. que contiene solución amortiguadora buffer fosfato PH 7,2.; dejar reposar por 15 minutos. En el área de microbiología y en condiciones asépticas, tomar el hisopo y sembrar en medios selectivos: Agar Mac Conkey para determinación de Coliformes. Agar Manitol Salado para determinación de Staphylococcus aureus y proceder a incubar de 30 -35 ºC por 24 - 48 horas.. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Asimismo, se procede a sembrar por el método de incorporación 1 mL de la solución en una placa petri previamente rotulada con el nombre del medio, fecha y zona de control. Rápidamente se añade aproximadamente 15 mL de agar TSA y AS por separado. Se homogeniza la placa con 4 movimientos rotatorios en sentido horario, antihorario, de arriba hacia abajo y hacia los costados. Se espera que el agar solidifique y se incuba la placa invertida de la siguiente manera: Las placas con TSA de 30º - 35º C por 48 – 72 horas (Recuento de mesófilos aerobios viables). M. IC. A. Las placas con AS 20º -25º C por 5 – 7 días (Recuento de hongos y levaduras). Q UI. Alternativamente se puede trabajar sólo con TSA para recuento de mesófilos aerobios. O. viables, hongos y levaduras, para lo cual, se debe rotular la placa como TSA/AS,. BI. sembrar y dejar incubar por 48 – 72 horas de 30º - 35ºC, tiempo después del cual se. Y. pasa a incubar de 20º -25ºC por 5 a 7 días.. M AC. IA. Al cabo de este período de tiempo, realizar el conteo y expresar los resultados en ufc/zona en el que se realizó el control del personal (mano, uniforme, etc., según. DE. FA R. corresponda).. CA. CC-MAMB-001: ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUA PURIFICADA 9. TE. La presencia de bacterias en el agua destinada a usarse en la industria farmacéutica es. IO. un riesgo latente que de estar presente puede ser la causa de una serie de problemas de. BI. BL. contaminación en los productos elaborados, por lo que se ha visto la necesidad de realizar análisis microbiológicos de rutina a partir de diversas procedencias (agua potable, purificada, destilada). El método empleado es de filtración por membrana, este método se basa en hacer pasar la muestra de agua problema a través de un filtro de membrana microporoso en cuya superficie quedan retenidos los microorganismos. las membranas utilizadas tienen un tamaño de poro de 0,45 m (la mayoría de los microorganismos a analizar tienen un diámetro superior a 0,45 m).. 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego de esto se incuba la membrana en el medio de cultivo adecuado, a la temperatura y por el tiempo especificado, para posteriormente contar de forma directa las colonias sobre la superficie de la membrana. Análisis propiamente dicho: -Recuento de Mesófilos Aerobios Viables (Método de Filtración de Membrana) En condiciones asépticas, armar el equipo de filtración teniendo en cuenta que la membrana filtrante colocada sea de 0,45 m y cuadriculada para favorecer el recuento.. A. Filtrar 1 mL de agua purificada a ensayar, agitar suavemente el portafiltro mientras se. M. IC. filtra.. Q UI. Lavar las paredes del portafiltro con 30 mL de solución tamponada estéril, repetir el. O. lavado dos veces, en el caso de usar el Sistema Microfil no se necesita enjuagar con. Y. BI. agua tamponada estéril.. M AC. IA. Desconectar el vacío y retirar el embudo.. Con una pinza estéril retirar la membrana filtrante y colocarla de manera equidistante. FA R. en una placa que contenga Agar Plate Count, con la cuadrícula hacia arriba.. DE. Invertir la placa e incubar a 30 – 35 C en la incubadora adecuada por 48 – 72 horas.. CA. Cumplido el tiempo, con ayuda de una lupa se procede al recuento de colonias. TE. presentes y se expresa el resultado en ufc/mL o en ufc/100mL.El Límite es. BL. IO. ufc/mL. <100. BI. -Análisis de Patógenos: Coliformes y Pseudomona aeruginosa (Método de Filtración de Membrana) En condiciones asépticas, armar el equipo de filtración teniendo en cuenta que la membrana filtrante colocada sea de 0,45 m y con bordes hidrofóbicos. Se añade al embudo primero 50 mL de solución tamponada estéril y, encima de ella se vierte 1 mL de agua a filtrar. Agitar suavemente el portafiltro mientras se filtra.. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.