Efecto del aceite esencial de citrus sinensis contra listeria monocytogenes autora:

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. PARASITOLOGÍA. RM ÁT. EFECTO DEL ACEITE ESENCIAL DE Citrus sinensis CONTRA. IN FO. Listeria monocytogenes.. DE. TESIS. EM. AS. PARA OPTAR EL TÍTULO DE:. DE. SI. ST. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. RE CC IO. N. AUTORA:. DI. ASESOR:. Br. VARGAS RIVEROS DIANA CARLA Dr. PEDRO MERCADO MARTÍNEZ. TRUJILLO – PERÚ 2015. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AC IÓ. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. CO. M UN. IC. RECTOR. IC. A. Y. Dr. Rubén Vera Véliz. DE. IN FO. RM ÁT. VICERECTOR ACADÉMICO. EM. AS. Dr.Weyder Portocarrero Cárdenas. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. VICERECTOR DE INVESTIGACIÓN. Dr. Esteban Ilich Zerpa. SECRETARIO GENERAL. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. M UN. IC. Dr. José Mostacero León. RM ÁT. IC. A. Y. CO. DECANO. IN FO. Dr. William Zelada Estraver. Dra. Bertha Soriano Bernilla. DE. SI. ST. EM. AS. DE. SECRETARIO. PARASITOLOGÍA.. DI. RE CC IO. N. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. Señores miembros del jurado dictaminador:. IC. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. M UN. Títulos de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, es honroso presentar y someter a vuestra consideración y elevado criterio el presente. CO. informe titulado: “Efecto del aceite esencial de Citrus sinensis contra Listeria. Y. monocytogenes”, con el cual pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo –. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Microbiólogo.. DE. ----------------------------------------------------. DI. RE CC IO. N. Br. Diana Carla Vargas Riveros. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO. N. Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en. AC IÓ. concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. CO. M UN. IC. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. A. Y. ------------------------------------------------------. DE. IN FO. RM ÁT. PRESIDENTE. IC. Dra. Icela Rodríguez Haro. AS. ----------------------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. Dr. Pedro Mercado Martínez. ----------------------------------------------------Ms. C. Nelly Vásquez Valles VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. N. Los profesores que suscriben, miembros del jurado examinador, declaran que el presente. AC IÓ. informe de Tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo. Y. CO. M UN. IC. APROBADO por UNANIMIDAD.. IC. A. ------------------------------------------------------. RM ÁT. Dra. Icela Rodríguez Haro. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. EM. ----------------------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Dr. Pedro Mercado Martínez. ----------------------------------------------------Ms. C. Nelly Vásquez Valles VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. N. El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la presente tesis titulada: “Efecto del. AC IÓ. aceite esencial de Citrus sinensis contra Listeria monocytogenes”, CERTIFICA:. IC. Que ésta ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido por la Facultad de. M UN. Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con. CO. su correspondiente proyecto y con las orientaciones brindadas a la tesista. En cuanto al. RM ÁT. IC. A. Y. informe, este ha sido revisado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. IN FO. Por lo tanto, autorizo a la Bachiller DIANA CARLA VARGAS RIVEROS,. ---------------------------------------------------Dr. Pedro Mercado Martínez ASESOR. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. N. A DIOS, por nunca dejarme de guiar, por dame fuerzas y aliento para. M UN. IC. AC IÓ. seguir adelante, porque gracias a Él tengo todo lo que deseo.. A mis padres Bertha y Pablo, por su amor incondicional y su confianza. Y. CO. depositada en mí, por sus enseñanzas, su ejemplo, y por darme su apoyo. RM ÁT. IC. A. a cada momento.. IN FO. A mis adoradas hermanas Pilar y Carolina, por siempre contar con ellas,. DE. por darme fuerzas para seguir siempre superándome, sus consejos, sus. ST. EM. AS. buenas vibras y deseos de ser cada día mejor.. SI. A mis amados sobrinitos Milenkita Fernanda y Salvador, son el motor y. DE. motivo de mi felicidad, por ser ellos el pilar de mi fortaleza y la. RE CC IO. N. motivación de seguir adelante, por ser mi mayor gozo de tenerlos a mi lado y saber que puedo contar siempre con su amor puro,. sincero e. DI. incondicional.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AGRADECIMIENTO. AC IÓ. A mi asesor, Dr. Pedro Mercado Martínez, por brindarme su apoyo,. CO. M UN. IC. orientación durante el desarrollo de la presente investigación.. A. Y. Al Ing. Químico David y al Ing. Químico Alejandro por su apoyo en la. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. extracción del aceite de Citrus sinensis contra Listeria monocytogenes.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN El presente trabajo tuvo por objetivo determinar el efecto antibacteriano del aceite esencial de Citrus sinensis contra Listeria monocytogenes. El aceite se obtuvo por el. AC IÓ. N. método de arrastre con vapor de agua, a partir del flavedo de la naranja y para determinar. el efecto antimicrobiano se empleó un cultivo de Listeria monocytogenes. El efecto. M UN. IC. antimicrobiano para este microorganismo se determinó por el método de Difusión en Agar utilizándose concentraciones de 20%,40%,60%,80% y 100% de aceite; utilizando a y. Sulfametoxazol. Trimetoprim. como. controles. CO. Gentamicina. para. Listeria. A. Y. monocytogenes. Se determinó que la concentración al 100% de aceite esencial de Citrus. RM ÁT. IC. sinensis, presentó mayor efecto antimicrobiano en relación a las demás concentraciones, contra Listeria monocytogenes, a demás presentó igual actividad antibacteriana que. IN FO. Gentamicina; pero mejor efecto antibacteriano que Sulfametoxazol Trimetoprim. Se concluye que el aceite esencial de Citrus sinensis si presenta efecto antimicrobiano contra. AS. DE. Listeria monocytogenes.. EM. Palabras clave: Efecto antimicrobiano, aceite esencial, Citrus sinensis, Listeria. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. monocytogenes, difusión en agar.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. N. This study aimed to determine the antibacterial effect of the essential oil of Citrus sinensis. AC IÓ. against Listeria monocytogenes. The oil was obtained by the method of stripping steam. IC. from the flavedo of oranges and to determine the antimicrobial effect a culture of Listeria. M UN. monocytogenes was used. The antimicrobial effect for this microorganism was. CO. determined by Agar Diffusion Method concentrations of 20%, 40%, 60%, 80% and 100%. Y. oil used; using Gentamicin and Sulfamethoxazole trimethoprim as controls for Listeria. IC. A. monocytogenes. It was determined that 100% concentration of essential oil of Citrus. RM ÁT. sinensis, had higher antimicrobial effect in relation to other levels, against Listeria monocytogenes, besides just presented Gentamicin antibacterial activity; but better. IN FO. antibacterial effect Sulfamethoxazole trimethoprim. It is concluded that the essential oil. AS. DE. of Citrus sinensis if you have antimicrobial effect against Listeria monocytogenes.. EM. Keywords: Effect antibcteriano, oil, Citrus sinensis, Listeria monocytogenes, agar. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. diffusion.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE Pag.. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO…………. ii. AC IÓ. PRESENTACIÓN……………………………………………………………………. iv. M UN. IC. MIEMBROS DEL JURADO………………………………………………………… v. CO. APROBACIÓN……………………………………………………………………..... vi. Y. DEL ASESOR………………………………………………………………………... vii. RM ÁT. IC. A. DEDICATORIA……………………………………………………………………… viii AGRADECIMIENTO………………………………………………………………... ix. IN FO. RESUMEN…………………………………………………………………………… x. DE. ABSTRACT………………………………………………………………………….. xi. EM. AS. ÍNDICE………………………………………………………………………………. xii. ST. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………… 1. DE. SI. MATERIALES Y MÉTODOS………………………………………………………. 7. RE CC IO. N. RESULTADOS….…………………………………………………………………… 11 DISCUSIÓN………………………………………………………………………….. 15. DI. CONCLUSIONES……………………………………………………………………. 19 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………………….. 20 ANEXOS……………………………………………………………………………… 25. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. N. El consumo de alimentos contaminados con microorganismos patógenos representa un gran. AC IÓ. riesgo para la salud humana y por tanto para cualquier tipo de comunidad. En países. industrializados cerca del 30% de la población sufre de Enfermedades Transmitidas a través. M UN. IC. de los Alimentos (ETA) y miles de personas mueren anualmente por esta causa1. Es importante tener en cuenta que la presencia de estos microorganismos tales como Listeria. CO. monocytogenes, E. coli, Bacillus cereus, Salmonella typhimurium, Pseudomonas aeruginosa. A. Y. y Staphylococus aureus, entre otros, 2 son una de las principales causas de enfermedades y. RM ÁT. IC. graves intoxicaciones alimentarias, generando un gran impacto sobre la salud pública. Adicionalmente una de los grandes problemas de la industria alimenticia es el deterioro de. DE. IN FO. los alimentos debido a la actividad microbiana.3. Diversos procesos han sido implementados con el fin de evitar la proliferación microbiana en. EM. AS. los alimentos y evitar la aparición de las ETA. Dentro de los procedimientos de control más. ST. utilizados están los tratamientos térmicos (pasteurización, esterilización), la irradiación. SI. (radiación UV), el almacenamiento a bajas temperaturas y el uso de conservantes químicos.. DE. El inconveniente que se presenta con estos métodos de tratamiento es que no todos son 100%. RE CC IO. N. eficientes contra todos los microorganismos ni se pueden utilizar sobre todos los productos.4 Los tratamientos térmicos son los más utilizados y tienen buena eficiencia, pero causan cambios en las características organolépticas de los alimentos comparados con el producto. DI. natural.5 La radiación solo actúa sobre las superficies expuestas y en el caso de sustancias nitrogenadas y otros conservantes se han presentado problemas de salud por su efecto carcinogénico.6,7. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Otro de los métodos que ha usado el hombre desde la antigüedad, es la extracción de los aceites esenciales a partir de plantas y especias para combatir patógenos y preservar alimentos. Los aceites tienen la ventaja de que no representan un peligro para la vida y. N. salud del hombre además pueden ofrecer sabores y olores característicos, muestran actividad. M UN. IC. AC IÓ. antioxidante así como actividad antimicrobiana.17, 18. Los aceites esenciales son las fracciones líquidas volátiles, generalmente destilables por. CO. arrastre con vapor de agua, 21que contienen las sustancias responsables del aroma de las. A. Y. plantas y cubren un amplio espectro de actividades tales como efectos farmacológicos,. RM ÁT. IC. antiinflamatorios, antioxidantes y anticancerígenos; otros tienen características biocidas contra una amplia gama de organismos como bacterias, hongos, virus, protozoos, insectos. IN FO. y plantas; por lo que son importantes en la industria de alimentos (condimentos y 22,23. AS. DE. saborizantes), cosmética (perfumes y aromatizantes) y farmacéutica.. EM. Dentro de los cítricos está Citrus sinensis que tiene mayor demanda a nivel mundial y es. ST. una de las más utilizadas en el Perú. Citrus sinensis variedad Tangelo es una planta cuyos. DE. SI. frutos son de tamaño mediano, corteza un tanto gruesa, dura y coriácea. 19 Se han características antifúngicas,. N. reportado estudios que demuestran que poseen. RE CC IO. antimicrobianas y fitoterapéuticas, las cuales le hacen una especie promisoria para su uso en actividades farmacéuticas, control de plagas en el sector agrícola y la preservación de. DI. los alimentos.20. Listeria spp., es un género formado por bacilos anaerobios facultativos, siendo aislado de suelos, agua, efluentes, alimentos, así como heces fecales de humanos y animales. El 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. género Listeria se incluye a especies: L. monocytogenes, L. innocua, L. welshimeri, L. seeligeri, L. ivanovii y L. grayi.8,9 Listeria monocytogenes es el agente causal de la Listeriosis 10 que es una infección alimentaria poco frecuente con poca morbilidad, pero. N. elevada mortalidad, 11,12 cuya dosis mínima requerida para causar infección clínica en. AC IÓ. humanos no ha sido determinada, pero se estima niveles de contaminación de 102 a 104. CO. M UN. IC. células por gramo de alimento.13. Y. Listeria monocytogenes es un bacilo Gram positivo, corto, regular, no ramificado, suelen. IC. A. observarse en disposición individual o formando cadenas cortas. 14 En cultivos viejos. RM ÁT. pueden aparecer formando filamentos de 6-20 mm. de longitud, sus colonias son pequeñas (de 1-2 mm. tras uno ó dos días de incubación) y lisas, su temperatura óptima. IN FO. de crecimiento está entre 30 y 37°C, pero pueden sobrevivir y desarrollar a temperaturas. DE. de refrigeración (4°C) en pocos días, así mismo crece en un pH de 4.4 – 9.6, baja actividad. AS. de agua (0.92), altas concentraciones de sal y sobre todo su capacidad de sobrevivir a. SI. ST. EM. tratamiento inadecuados de pasteurización. 15,16. DE. Se ha estudiado la importancia de los aceites esenciales de los cítricos debido a su. RE CC IO. N. disponibilidad, a los pocos efectos secundarios, mejor biodegradabilidad comparado con antibióticos y preservantes disponibles24. Por todas estas propiedades, los aceites esenciales pueden ser utilizados como un método de eliminación de microorganismos. DI. patógenos. En un aceite esencial pueden encontrarse hidrocarburos alicíclicos,. aromáticos, derivados oxigenados, sustancias azufradas y nitrogenadas; los compuestos más frecuentes derivan biológicamente del ácido mevalónico y se les cataloga como terpenos, siendo los más abundantes los monoterpenos (C10) y los sesquiterpenos. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (C15).25,26 Yañez et al. 2007 demostraron que el aceite esencial de la naranja dulce Citrus sinensis estaba compuesto por un 90% de limoneno, y compuestos fenólicos, causando inhibición en los microorganismos, y su potencial aplicación y su uso agregado de la. AC IÓ. N. cáscara de naranja en el futuro, de no ser aprovechado únicamente como abono 41. M UN. IC. Los compuestos responsables de la actividad del aceite esencial son los compuestos fenólicos y terpenoides que presentan actividad antimicrobiana; 27 tienen gran aplicación. Los sitios de acción de los agentes antimicrobiano en la. Y. 28,29. A. métodos de preservación.. CO. para el control de crecimiento de patógenos en alimentos por lo que se utilizan como. RM ÁT. IC. célula microbiana, incluye a la membrana celular, pared celular, enzimas metabólicas, síntesis de proteínas y el sistema genético, todos ellos estratégicos para la supervivencia. IN FO. de los microorganismos y cualquier acción sobre ellos puede inactivar a la célula. AS. DE. microbiana.30, 31. EM. Los aceites esenciales del flavedo de los cítricos contienen de 85 a 99% de componentes. ST. volátiles y de 1 a 55% de componentes no volátiles; solubles en Tween 80 que sirve para. DE. SI. estabilizar las grasas o aceites en soluciones acuosas. 32 La actividad antimicrobiana del. N. aceite esencial de los cítricos depende de diversos factores, entre los que destacan la. RE CC IO. estructura química de los componentes del aceite y su concentración. Es extremadamente difícil correlacionar la actividad antimicrobiana a un único compuesto o clase de. DI. compuestos, ya que los diversos componentes de cualquier aceite pueden actuar sinérgicamente.33 Dentro de los cítricos, en el Perú se encuentra Citrus sinensis (Naranja Dulce), es consumido por la población sin generar problemas alimentarios. Por otro lado, el uso de. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. sustancias inocuas constituye un reto para las investigaciones a nivel industrial y clínico. En este sentido, se pretende investigar el efecto del aceite esencial del flavedo de la naranja contra Listeria monocytogenes , que atraviesa la mucosa intestinal, causando una. AC IÓ. N. infección local diseminada en el Sistema Nervioso Central y en la placenta, esto. M UN. IC. constituye un riesgo latente para la salud de los pobladores.. CO. Un resultado positivo, abriría una posibilidad de encontrar un valor agregado a dicho. Y. fruto que puede ser procesado e industrializado para la preparación de fármacos,. IC. A. antininflamatorios, antisépticos, antibióticos y jarabes de bajo costo pero de eficiente. RM ÁT. actividad contra Listeria monocytogenes; así también, ser utilizado como un conservante natural en los alimentos envasados que se comercializan en los grandes supermercados a. IN FO. nivel local, regional y nacional; sin cambiar sus características organolépticas del. AS. DE. alimento y sin generar efectos carcinogénicos para la salud humana.. ST. EM. En los últimos años se han realizado muchas investigaciones, que han demostrado el. SI. poder antimicrobiano de los aceites esenciales, pero muy pocos de los extraídos de frutas. DE. cítricas; donde se puede mencionar a Dabbah et al.1970 quienes demostraron que los. RE CC IO. N. aceites esenciales de Citrus sinensis presentan actividad antibacteriana contra cepas de: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomona aeruginosa y. DI. Salmonella spp.34. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Este trabajo tiene como objetivos:. Determinar el efecto del aceite esencial de Citrus sinensis contra Listeria. AC IÓ. -. N. OBJETIVO GENERAL:. M UN. IC. monocytogenes.. Y. Determinar la significancia entre la mejor concentración del aceite esencial de. A. -. CO. OBJETIVOS ESPECÍFICOS:. Determinar la significancia entre la mejor concentración del aceite esencial de. IN FO. -. RM ÁT. IC. Citrus sinensis en relación al antibiòtico Gentamicina. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. Citrus sinensis en relación al antibiòtico de Sulfametoxazol Trimetoprim.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIALES Y MÉTODOS 1.1.MATERIALES . Cultivo de Listeria monocytogenes (FGM-Lm 001) proporcionados por el. AC IÓ. Flavedo de Citrus sinensis variedad Tangelo.. M UN. IC. . N. Laboratorio de Fisiología y Genética Microbiana.. 1.2.METODOLOGÍA. A. Y. CO. 1.2.1. OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE Citrus siensis.. RM ÁT. IC. A. OBTENCIÓN DE FRUTOS DE Citrus sinensis. Se obtuvo frutos de naranjas maduras, tamaño mediano, corteza gruesa y. IN FO. dura, procedentes de Virú - La Libertad, luego se trasladaron al. DE. laboratorio.. ST. EM. AS. B. OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL SEGÚN WEBBER H. 35. SI. Se seleccionó aquellas naranjas que no presentaron magulladuras ni. DE. lesiones en su flavedo. Se lavaron, pelaron los frutos y se cortó el flavedo. DI. RE CC IO. N. de las naranjas en trozos pequeños. La extracción del aceite esencial se realizó en equipos de extracción por arrastre con vapor. Se colocó 250gr. del flavedo (ANEXO 1) en un balón de 500 ml. el cual fue calentado en una cocina hasta alcanzar la temperatura de ebullición del agua. El aceite esencial que se obtiene fue arrastrado por el vapor de agua, que al condensarse formó una mezcla de aceite más agua. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El tiempo de extracción fue de 120 minutos, contándose desde el primer instante en el que cayó la primera gota del condensado en la pera de. AC IÓ. N. decantación.. C. CONSERVACIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE Citrus sinensis.. IC. El aceite esencial obtenido fue envasado en frascos ámbar, conservándose. Y. CO. M UN. en refrigeración a 4°C para su uso posterior.. RM ÁT. IC. A. 1.2.2. PREPARACIÓN DEL INÓCULO BACTERIANO. REACTIVACIÓN DE Listeria monocytogenes.. IN FO. A.. DE. o El cultivo de Listeria monocytogenes se sembró en Caldo Fraser y se. AS. incubó durante 18 horas a 37°C; posteriormente se sembró en Agar Oxford. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. durante 24 horas a 37°C.43. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. ESTANDARIZACIÓN DE Listeria monocytogenes. Se realizó una suspensión en Solución Salina Fisiológica Estéril (SSFE) hasta. AC IÓ. N. alcanzar la turbidez equivalente al tubo N° 0.5 del Nefelómetro de Mac. M UN. IC. Farland (1.5 x 108 ufc/mL). 36. C. PREPARACIÓN DE LAS DIFRENTES CONCENTRACIONES DE. A. Y. CO. ACEITE ESENCIAL.. RM ÁT. IC. A partir del aceite esencial se prepararon concentraciones de 20, 40, 60, 80 y. IN FO. 100% en Tween 80.. DE. 1.2.3. ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA SEGÚN MOREIRA37. EM. AS. La actividad antimicrobiana del aceite esencial de Citrus sinensis se realizó. ST. siguiendo la técnica de difusión en Agar en placas, por triplicado. En placas. SI. conteniendo 25 ml. de Agar Mueller –Hinton, se realizó una siembra por. DE. superficie de la suspensión del cultivo bacteriano a la concentración de 1.5 x 108. RE CC IO. N. ufc/mL previamente estandarizado. A cada placa se le realizó 3 orificios de 4 mm de diámetro cada uno. A estos orificios se les añadió 50 uL de cada una de las. DI. concentraciones del aceite esencial y posteriormente se colocaron los antibióticos de Gentamicina y Sulfametoxazol Trimetoprim e incubó a 37°C por 24 horas. Posteriormente se midieron los halos.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.2.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO. El procesamiento y análisis de los resultados obtenidos para la actividad. AC IÓ. N. antimicrobiana del aceite esencial de Cirus sinensis contra Listeria monocytogenes y se determinó mediante el análisis de varianza, ANOVA un. IC. diseño completo al azar (DCA). La significancia se reportó con un nivel de. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. confianza del 95%.49. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. AC IÓ. N. En la Fig. 1 Se muestra el promedio de la medición de los halos de inhibición de Listeria monocytogenes tratados con aceite esencial de Citrus sinensis a concentraciones de 20%,. M UN. IC. 40%, 60%, 80% y 100%. Se observa que la concentración del 100% presenta mayor efecto antimicrobiano en relación a las demás concentraciones; y se evidencia diferencia. A. Y. CO. significativa. (p<0.05). RM ÁT. IC. En la Fig. 2 Se muestra el promedio de la medición de los halos de inhibición de Listeria monocytogenes tratados con aceite esencial de Citrus sinensis al 100% frente a los halos. IN FO. de inhibición de Gentamicina, observándose que presentan igual efecto antimicrobiano;. DE. y no se evidencia diferencia signifitcativa. (p>0.05). EM. AS. En la Fig. 3 Se muestra el promedio de la medición de los halos de inhibición de Listeria. ST. monocytogenes tratados con aceite esencial de Citrus sinensis al 100% frente a los halos. SI. de inhibición de Sulfametoxazol Trimetoprim, observándose que presentan mejor efecto. DI. RE CC IO. N. DE. antimicrobiano; y se evidencia diferencia signifitcativa. (p<0.05). 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig 1. Promedio de los halos de inhibición en el crecimiento (mm) de Listeria monocytogenes a las concentraciones de 20%, 40%,60%, 80% y 100% del aceite esencial. AC IÓ. N. de Citrus sinensis.. IC. 40. 33. CO. 30. IC. A. Y. 24. 25. 14. 15. 10. IN FO. 10. RM ÁT. 20. AS. DE. 5 0 20%. EM. Promedio de los halos de inhibición (mm). M UN. 35. 35. 40%. 60%. 80%. 100%. Listeria monocytogenes. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Concentraciones del aceite de Citrus sinensis. DI. Concentración del 100% vs. las concentraciones (20%. 40%,60%, 80%) p<0.05. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig 2.. Promedio de los halos de inhibición en el crecimiento (mm) de Listeria. monocytogenes entre la concentración del 100% del aceite esencial de Citrus sinensis y. AC IÓ. N. el antibiótico Gentamicina.. M UN. CO. 35. Y. 30. RM ÁT. IC. A. 25 20. IN FO. 15. DE. 10 5. AS. Promedio de los halos de inhibición (mm). 36. 35. IC. 40. EM. 0. Gentamicina. ST. 100%. 100%. Gentamicina. p>0.05. DI. RE CC IO. N. DE. SI. Concentración aceite de Citrus sinensis y el antibiótico. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig 3.. Promedio de los halos de inhibición en el crecimiento (mm) de Listeria. AC IÓ. N. monocytogenes entre la concentración del 100% del aceite esencial de Citrus sinensis y. M UN. IC. el antibiótico Sulfametoxazol Trimetoprim.. CO. 40 36. 34. IC RM ÁT. 30. IN FO. 25 20. DE. 15. EM. AS. 10. SI. 0. ST. 5. 100%. Sulfametoxazol Trimetoprim. DE. Promedio de los halso de inhibición (mm). A. Y. 35. DI. RE CC IO. N. Concentración del aceite de Citrus sinensis y el antibiótico 100%. Sulfametoxazol Trimetoprim. P<0.05. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. N. Estudios han reportado que especies cítricas poseen características antifúngicas,. AC IÓ. antimicrobianas y fitoterapeúticas, las que las hacen una especie promisoria para evitar la. IC. proliferación de microorganismos causantes de enfermedades20, como el de Dabbah et. M UN. al. 1970, quienes encontraron que los aceites esenciales de naranja y toronja mostraron. CO. tener actividad antibacteriana contra cepas bacterianas de: Staphylococcus aureus,. RM ÁT. IC. A. Y. Escherichia coli, Bacillus subtilis, Pseudomona aeruginosa y Salmonella sp.34. En la Fig. 1 se demuestra que el aceite esencial de Citrus sinensis a concentraciones de. IN FO. 20% y 40%, muestra menor actividad antimicrobiana por la formación de los halos de 10 mm y 14 mm respectivamente; existiendo un p<0.05, lo que nos demuestra que existe. EM. AS. DE. diferencia significativa entre los halos formados por estas concentraciones.. ST. Se observa también que los halos de inhibición formado a las concentraciones de 60% y. DE. SI. 80% del aceite esencial de Citrus sinensis fueron de 24 mm y 33 mm respectivamente;. N. existiendo un p<0.05, lo que significa que existe diferencia significativa; mientras que la. RE CC IO. concentración del 100% del aceite esencial de Citrus sinensis supera a todas las concentraciones con un halo de 35 mm, presentando un p<0.05, lo cual indica que es. DI. significativamente mayor que las concentraciones de 20,40,60 y 80%.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Estos resultados nos permite asegurar que el aceite esencial de Citrus sinensis si presenta efecto antimicrobiano contra Listeria monocytogenes, y que mientras mayor sea la concentración del aceite esencial, mayor será su efecto antimicrobiano; como lo. AC IÓ. N. demostraron Martínez et al. 2003 que el aceite esencial de Citrus reticulata variedad Dancy contra S. aureus, E. coli, Klebsiella sp, y Proteus mirabilis; a mayores. IC. concentraciones de 90% y 100% presentó mayor actividad antibacteriana a diferencia de. M UN. la concentración 1% que no presentó actividad antibacteriana; mientras que Sartoratto et P. aeruginosa,. CO. al. 2004 determinaron que las bacterias Gram negativas: E. coli,. Y. Salmonella tiphymurium, Salmonella cholerae suis y Vibrio cholerae y las bacterias. IC. A. Gram positivas: S. aureus y Bacillus cereus, mostraron diferentes grados de sensibilidad,. RM ÁT. concluyendo en que el aceite esencial de Citrus sinensis posee alta actividad microbinana. DE. IN FO. contra todas las bacterias Gram positivas evaluadas que contra las Gram negativas.38,39. AS. Trujillo M. 2012 demostró que la concentración de 100% del aceite esencial de Citrus. EM. reticulata variedad Satsuma, presentó mayor efecto antimicrobiano en relación a las. ST. concentraciones de 20, 40, 60 y 80% , contra Pseudomona aeruginosa y Staphylococcus. SI. aureus. La concentración del 100% es significativamente más eficaz contra. RE CC IO. N. DE. Staphylococcus aureus y que Vancomicina, pero menos eficaz que Ciprofloxacina 42. Bergonzelli et al. 2003, en su estudio sobre caracterización de los componentes del aceite. DI. de algunos cítricos como la mandarina, la naranja, la lima y la toronja han demostrado que poseen los siguientes componentes mayoritarios: limoneno, linalol, acetato de linalilo, mirceno, terpenos, entre otros compuestos fenólicos, presentando gran capacidad inhibitoria principalmente sobre bacterias Gram positivas40; Yañez. et al. 2007. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. demostraron que el aceite esencial de la naranja dulce Citrus sinensis estaba compuesto por un 90% de limoneno, y compuestos fenólicos, causando inhibición en microorganismos Gram positivos, además de su uso agregado de la cáscara de naranja al. IC. AC IÓ. N. no ser aprovechado únicamente como abono 41. M UN. El efecto antimicrobiano se debe a la presencia de principios activos de Citrus sinensis. CO. como los compuestos fenólicos, terpenoides y d-limoneno que interfieren en la bicapa de. Y. fosfolípidos de la membrana celular causando el incremento de su permeabilidad y. IC. A. pérdida de sus constituyentes celulares al destruir el sistema de enzimas incluyendo la. RM ÁT. producción de energía celular y de respiración bacteriana; además de provocar daños severos de sus componentes estructurales como pérdida de homeostasis, inactivación o. DE. IN FO. destrucción de su material genético dando lugar a la muerte celular.48. AS. En la Fig. 2 se muestra que la mejor concentración del 100% del aceite esencial de Citrus. ST. EM. sinensis presenta un halo de inhibición de 35 mm y el halo formado por el control. SI. Gentamicina fue de 36 mm; lo que indica que presenta un nivel de significancia de. DE. p>0.05; no existiendo diferencia significativa entre la eficacia del tratamiento y el. RE CC IO. N. antibiótico, estos resultados coinciden con los de Mac Gowan et al. 1990, no encontraron ninguna cepa de Listeria monocytogenes resistente Gentamicina, lo cual podría deberse a. DI. que Listeria monocytogenes posee una alta sensibilidad natural a aminoglucósidos.45. En la Fig. 3 se muestra que la mejor concentración del 100% del aceite esencial de Citrus sinensis presenta un halo de inhibición de 36 mm superando al halo del antibiótico que fue de 34 mm; presentando un p<0.05 lo que indica que el halo de inhibición formado por 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. el aceite esencial a la concentración del 100% es significativamente mayor al formado por el control Sulfametoxazol Trimetoprim.. AC IÓ. N. Estos resultados son los mismos encontrados en trabajos de Zamora et al. 2005, en su estudio sobre Comparación del perfil de sensibilidad a antibióticos de cepas de Listeria. M UN. IC. monocytogenes y Salmonella; demostraron que 20 cepas de Listeria monocytogenes de origen alimentario presentaron una sensibilidad de un 95% frente a Sulfametoxazol. CO. Trimetoprim y 100% frente a Gentamicina al bloquear los enlaces peptídicos entre las. A. Y. diferentes cadenas de peptidoglucano.43 Vega J. 2013, en su estudio sobre Sensibilidad. RM ÁT. IC. antibacteriana de cultivos de Listeria sp aislados de lugares de expendio de pollo y quesos, encontró una frecuencia de 100% de sensibilidad de cultivos de Listeria sobre. Ampicilina,. Penincilina,. Sulfametoxazol. Trimetoprim,. IN FO. monocytogenes. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. Vancomicina, Rifampicina y Tetraciclina. 44. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. CONCLUSIONES. AC IÓ. 1. El aceite esencial de Citrus sinensis si presenta efecto antimicrobiano contra. IC. Listeria monocytogenes. M UN. 2. La concentración del 100% de aceite de Citrus sinensis presenta igual actividad. CO. antimicrobiano que el antibiótico Gentamicina.. Y. 3. La concentración del 100% de aceite de Citrus sinensis presenta mejor actividad. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. antibacteriano que el antibiótico Sulfametoxazol Trimetoprim.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICAS. 1. Who. World health report.Reducing risks, promoting healthy life. Geneva, World Health. N. Organization, 30 October 2002. ISSN 1020-3311, p. 248.. AC IÓ. 2. Gandhi M, Chikindas M. Listeria: A food borne pathogens that know how to survive. International Journal of Food Microbiology. 2007. Vol.113. p.1-15.. M UN. IC. 3. Gonzáles L, Martínez F, Rossi L, Tornese M, Tronaso A. Enfermedades transmitidas por alimentos: Análisis de riesgo microbiológico. Rev. Chillnfect.: 2010.27 (6): 513-524.. CO. 4. Tajkarimi M, Ibrahim S.A., Cliver D.O. Antimicrobial herb and spice compounds in food.. Y. Food Control. 2010. Vol. 21, p. 1199–1218.. IC. A. 5. Torres F. Impacto de los pulsos eléctricos de alta intensidad y tratamiento térmico sobre la. RM ÁT. calidad y seguridad de productos derivados de jugo de naranja. IATA-CSIC Valencia España.2006.. IN FO. 6. FAO/WHO Codex Alimentarius Commission. 2007.. ftp://ftp.fao.org/codex/ Circular letters /CXCL2007/cl07_31e.pdf Skandamis P, Koutsoumanis K, Fasseas K y Nychas G. Inhibition of orégano essential oil. DE. 7.. AS. and EDTA on E. coli O157:H7. Italian Journal of Food Science.2001. Vol.13, p. 55–65.. EM. 8. Hong Y, Ku M, Bing K. Inactivation of Listeria monocytogenes and Campylobacter jejuni. ST. chicken by aqueous chlorine dioxide treatment. J Food Nur. 2007. (12):279-283.. SI. 9. Vásquez J, Kuhn M, Chakrabarty T, Domínguez G. Listeria pathogenesis and molecular. DE. virulence determinants Clin Microbiol Rev. 2001.14:584-640.. RE CC IO. N. 10. Nightingale K, Winmdham K, Wiedmann M. Evolution and molecular phylogeny of Listeria monocytogenes sisolated from human and animal listeriosis cases and foods.J.Bacteriol.2005;. DI. (187):5537-5551.. 11. Jajali M, Abedi D. Prevalence of Listeria species in food products in Isfahan. Iran. Oub Med. 2008.122 (3):336-40.. 12. Hof H, Nichterlein T y Kret Schmar M. Management of listeriosis. ClinMicrob.1997. Rev. (10):345-57.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 13. FAO-OMS. Evaluación de riesgos de Listeria monocytogenes en los alimentos listos para el consumo .Informe técnico. Serie sobre Evaluación de Riesgos Microbiológicos.2004. (5).265. 14. Copes T, Pellicer K, Malvestiti L y Stanchi N. Sobrevivencia en tablas de cocina de Madera y plástico involucradas experimentalmente con Listeria monocytogenes. Revista Analecta. AC IÓ. N. Veterinaria. 2000. 20(2):47-50.. 15. Chmpoux J, Lawwwnce Drew W, Neidhardt F, Plorde J. Microbiología médica. Introducción. M UN. IC. a las enfermedades infecciosas. 4° Edición. México. McGraw- Hill Interamericana Editores S.A de C.V.2005.. CO. 16. Crespo M, Vélez J, Castañeda C, Hoyos F, López M, y Salazar J. Aislamiento de Listeria. Y. monocytogenes en un hospital del tercer nivel. Revista Colombiana Médica.1990.30 (2):89-. IC. A. 98.. RM ÁT. 17. Schelz Z, Molnar J, Hohmann, J. Antimicrobial and antiplasmid activities of essential oils. Fitoterapia. 2006.77:279–285.. IN FO. 18. Teixeira Duarte MC, Leme EE, Delarmelina C, Soares AA, Figueira, GM, Sartoratto A. Activity of essential oils from Brazilian medicinal plants on Escherichia coli. J. Ethnopharm.. DE. 2007.11: 197–201. AS. 19. Saunt J. Variedades de cítricos del mundo. Editorial Sinclair. Valencia (España).1992.. EM. 20. Kalemba D, Kunicka A. Antibacterial and Antifungical Properties of Essential Oils. Current. ST. Medicinal Cheministry. Poland. 2003. 10: 813-82. SI. 21. Lopez B, Jean F, Gagnon H, Collin G, Garneau F, Pichette A. Essent Oil Res. 2005. 17: 1-7. DE. 22. Smith P, Stewart J, Fyfe L. Antimicrobial properties of plant essential oils and essences. RE CC IO. N. against five important food-borne pathogens. Letters in Applied. Microbiology. 1998. 26 (2): 118-122. 23. Grosse R. Extracción del Aceite Esencial de Naranja Casera Citrus. Acta Científica. DI. Venezolana 2000.51 (2): 200-208.. 24. Viuda M, Ruiz Y, Fernandez J, Perez J. Antifungal activity of lemon (Citrus lemon L.), mandarina (Citrus reticulata L.), grapefruit (Citrus paradisi L.) and orange (Citrus sinensis L.) essential oils. Food Control. 2008.19 (12): 1130–1138 25. Yáñez X. Monoterpenos y sesquiterpenos del aceite esencial foliar de Myrcianthes. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. rhopaloides (Kunth) Mc Vaugh, obtenido por hidrodestilación asistida por microondas. CLON .2005. 3 (2): 24-30. 26. Sánchez R, Pino J, Chang L, Roncal E, Rogert E. Desterpenación de aceite esencial de naranja por extracción con etanol diluido. Alimentaria.1994. 249: 59-61.. AC IÓ. N. 27. Akgul A, Kivanc M. Inhibitory effect of six Turkish thyme-like spices on some emmon foodborne bacteria. Die Nahrung. 1988.32 (2): 201-203.. M UN. IC. 28. Cabra E. Los aceites esenciales, Panorama Internacional y del Mercado Colombiano. Tecnología. 1988.175 (5): 55-60.. CO. 29. Oussalah M, Caillet E, Saucier E., Lacroix L. Inhibitory effects of selected plant essential oils. Y. on the growth of four pathogenic bacteria: E. coli O157:H7. Salmonella typhimutium,. IC. A. Staphylococcus aureus and Listeria monocytogenes. Canadá. 2005.414-420.. RM ÁT. 30. Smid E, Gorris L. Natural antmicrobials for food preservation. In Handbook of Food Preservation; Rahman M. Ed. Marcel Dekker: New York. 1999. 285-308.. IN FO. 31. López J, Gagnon H, Collin G, Pichette A. Los sitios de acción de los agentes antimicrobiano en la célula microbiana, incluye a la membrana celular, pared celular, enzimas metabólicas,. DE. síntesis de proteínas y el sistema genético. Essent Oil Res. 2005.17: 1-7. AS. 32. Chou, D.K. et al. Effects of Tween 20 and Tween 80 on the stability of Albutropin during. EM. agitation. In: J. Pharm. Sci.Bd. 94, S. 1368–1381; PMID 15858848; doi 10.1002/jps.20365. ST. 2005.. SI. 33. Identificación y cuantificación de los componentes principales del aceite esencial del flavedo. DE. (cáscara) de Citrus reshni (Mandarina Cleopatra), Citrus reticulata (Mandarina común) y. RE CC IO. N. Citrus reticulata Blanco o Citrus tangerina (Mandarina Dancy) por medio de Cromatografía de. Gases. acoplada. a. Espectrometría. de. Masas.. DI. http://www.portales.unipamplona.edu.co/unipamplona/hermesoft/. 34. Dabbah R, Edwards A, Motas W. Antimicrobial Activity of Some Citrus Fruits Oils on Selected Food- Borne Bacteria. Appl. Microbiology. 1970.19 (1): 27-31.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 35. Webber H. History and development of the Citrus Industry. In W.Reuther; LD. Bachlorand HJ.Webber (eds), The Citrus Industry.1.History world distribution batany and varieties University of California Press Berkeley, pp. 1-39. 36. Cona T, Erna. Condiciones para el buen estudio de suceptibilidad mediante test de difusión. AC IÓ. N. en agar. Rev.Chil.Infectol.2002.19:77-81. 37. Moreira M, Ponce A, Del Valle C, Roura S. Inhibitory parameters of essential oils to reduce. M UN. IC. a foodborne pathogen Lebensmittel. Wissen Chaff Und-Technology. 2005.Vol.38,p.565-570 38. Martínez J, Sulbarán B. Ojeda G, Ferrer A. y Nava R. Actividad antibacteriana del aceite. CO. esencial de mandarina. Rev. Fac. Agron. 2003. Vol.20 Nº 4.. Y. 39. Sartorato A, Machado A, Delarmelino C, Figueroa G, Duarte M, Rehder L. Composition and. IC. A. antimicrobial activity of essential oils from aromatic plants used in Brazil. Braz I Microbiol.. RM ÁT. Brazil. 2004.35(4):275-280.. 40. Bergonzelli E, Donnicola D, Porta N, Cortéis E. Essential oils as components of a diet-based. IN FO. approach to management of Helicobacter infection. Journal Antimicrob Agents Chemother. 2003.47(10):3240-3246.. DE. 41. Yáñez Rueda X, Lugo Mancilla L. L, Parada Parada D. Estudio del aceite esencial de la. AS. cáscara de naranja dulce (Citrus sinensis, variedad Valencia) cultivada en Labateca. Vol. 5. EM. Nº1.2007; 3-8.. ST. 42. Trujillo M. Sensibilidad de Pseudomona aeruginosa y Staphylococcus aureus frente a. SI. diferentes concentraciones del aceite de Citrus reticulata variedad Satsuma “mandarina”.. RE CC IO. N. 2012.. DE. Tesis para optar el grado de Biólogo Microbiólogo. Universidad Nacional de Trujillo.Perú,. 43. Zamora J, Chaves C, Anas M. Comparación del perfil de sensibilidad a antibióticos de cepas de Listeria monocytogenes y Salmonella aislados a partir de alimentos con cepas de origen. DI. clínico. Tesis para optar el grado académico en Licenciatura en Microbiología y Químico clínico. Universidad de Costa Rica, 2005.. 44. Vega J. Sensibilidad antibacteriana de cultivos de Listeria sp. aislados de lugares de expendio de pollo y quesos en mercados de la ciudad de Trujillo (Perú). Tesis para optar el grado de Biólogo Microbiólogo. Universidad Nacional de Trujillo.Perú, 2013.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 45. Mac Gowan A, Reeves D, Mclauchlin J.Antibiotic resistence of Listeria monocytogenes. Lancet 1990. 336:513-514. 46. Edson R, Terrell C. The aminoglycosides. Mayo ClinProc.1999.74:519-528. 47. Dagan R, Einlorn M, Lang R. Once dailycefixime compared with twice daily Trimethoprim. AC IÓ. N. sulfamethoxazole for treatment of unirany tract infection in infast and children. Pediatric infect Dis. 1992. 11: 198-203.. IC. Jeongmok K, Maurice R y Cheng W. Antibacterial activity of some essential oil. M UN. 48.. components against five foodborne pathogens. Journal Agriculture Food Chemistry.. CO. 1995.43: 2839–2845.. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. 49. Boqué R. y Marote A. El análisis de varianza. UOC. 2011; 14: 1 – 23.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. ANEXOS. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 1 Equipo de destilación por arrastre con vapor de agua, utilizado para la extracción de aceite. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. de Citrus sinensis.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 2. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Cultivo de Listeria monocytogenes en Agar Oford.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 3 Halos de inhibición de Listeria monocytogenes frente a las concentraciones de 20, 40 y. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. 60% de aceite de Citrus sinensis frente al disco antibiótico Sulfametoxazol Trimetoprim.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 4 Halos de inhibición de Listeria monocytogenes frente a las concentraciones de 60, 80 y. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. 100% de aceite de Citrus sinensis frente al disco antibiótico Sulfametoxazol Trimetoprim.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 5 Halos de inhibición de Listeria monocytogenes frente a las concentraciones de 60, 80 y. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. 100% de aceite de Citrus sinensis frente al disco antibiótico Gentamicina.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 6 Halos de inhibición de Listeria monocytogenes frente a las concentraciones de 20, 40 y. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. 60% de aceite de Citrus sinensis frente al disco antibiótico Gentamicina.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 7. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Coloración Gram de Listeria monocytogenes en Agar Oxford. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 8. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Coloración Gram de Listeria monocytogenes en Caldo Fraser. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 9. N. Diámetros de los halos de inhibición de Listeria monocytogenes obtenido por las. CO. M UN. IC. AC IÓ. concentraciones de 20, 40, 60, 80 y 100 % de aceite de Citrus sinensis. Por triplicado.. HALOS (mm). 40%. 1. 10. 15. 2. 10. 13. 3. 10. ̅ 𝑿. 10. 60%. 80%. 100%. 24. 33. 35. 24. 32. 35. 14. 25. 33. 35. 14. 24. 33. 35. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. 20%. IC. A. Y. REPETICIONES. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 10 Diámetros de los halos de inhibición de Listeria monocytogenes obtenido por la concentración del 100 % de aceite de Citrus sinensis y el antibiótico Gentamicina. Por. AC IÓ. N. triplicado.. HALOS (mm). M UN. IC. REPETICIONES. GENTAMICINA. 1. 35. 36. 2. 35. 3. 35. 36 36. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. 100%. DE. ANEXO 11. AS. Diámetros de los halos de inhibición de Listeria monocytogenes obtenido por la. EM. concentración del 100 % de aceite de Citrus sinensis y el antibiótico Sulfametoxazol. SI. ST. Trimetoprim. Por triplicado.. HALOS (mm). DI. RE CC IO. N. DE. REPETICIONES. 100%. SULFAMETOXAZOL TRIMETOPRIM. 1. 36. 34. 2. 36. 34. 3. 37. 34. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 12 Promedio de los halos de inhibición (mm) formado por Listeria monocytogenes obtenidos frente a los tratamientos de 20%, 40%, 60%, 80% y 100% del aceite de Citrus sinensis. IC. AC IÓ. N. var. Tangelo con los halos de inhibición obtenido frente a Gentamicina.. 40% AN. 3. 60% AN. 3. 80% AN. 3. 100% AN. 3. Gentamicina. 3. 10 a. CO. 3. 14 b. A. Y. 20% AN. PROMEDIO DE HALOS DE INHIBICIÓN (mm). M UN. TRATAMIENTO REPETICIONES. 32,67 d 35 e 36 e. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. 24,33 c. SI. ST. a, b, c, d, e: subconjuntos obtenidos para un 𝛼= 0.05. DI. RE CC IO. N. DE. AN: aceite esencial de naranja Citrus sinensis var. Tangelo. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 13 Promedio de los halos de inhibición (mm) formado por Listeria monocytogenes obtenidos frente a los tratamientos de 20%, 40%, 60%, 80% y 100% del aceite de Citrus sinensis. IC. AC IÓ. N. var. Tangelo con los halos de inhibición obtenido frente a Sulfametoxazol Trimetoprim.. 3. 60% AN. 3. 80% AN. 3. Sulfametoxazol. 3. 100% AN. 3. 13,67 b. CO. 40% AN. 10 a. Y. 3. 24,67 c. 31,67 d. 34 e. 36,33 f. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. 20% AN. PROMEDIO DE HALOS DE INHIBICIÓN (mm). M UN. TRATAMIENTO REPETICIONES. ST. EM. a , b, c, d, e, f: subconjuntos obtenidos para un 𝛼 = 0.05. DI. RE CC IO. N. DE. SI. AN: aceite esencial de naranja Citrus sinensis var. Tangelo.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 14. N. Anova de un factor y Post- ANAVA – Control Gentamicina.. AC IÓ. ANAVA de un factor. gl. Media cuadrática. F. 1876,667. 5. 375,333. Intra-grupos. 3,333. 12. ,278. 1880,000. 17. ,000. A. Y. Total. 1351,200. Sig.. CO. Inter-grupos. M UN. Suma de cuadrados. IC. Variable dependiente: Halos de Inhibición. RM ÁT. Tratamientos. N. Subconjunto para alfa = 0.05. 40% AN. 3. (Gent.). 5. 6. 24,33. 3. 32,67. 3. 35,00. 3. 36,00 1,000. 1,000. 1,000. 1,000. ,257. DE. SI. Sig.. ST. 100% AN. 3. EM. 80% AN. 4. 14,00. AS. 60% AN HSD de Tukeya. 3. 10,00. DE. 3. 2. IN FO. 1. 20% AN. IC. Post- ANAVA. Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.. DI. RE CC IO. N. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 3,000.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 15 Anava de un factor y Post- ANAVA - Control Sulfametoxazol Trimetoprim. AC IÓ. N. ANAVA de un factor. HI gl. Media cuadrática. F. Sig.. 1822,278. 5. 364,456. Intra-grupos. 6,667. 12. ,556. 1828,944. 17. ,000. Y A. RM ÁT. IC. Total. 656,020. CO. Inter-grupos. M UN. IC. Suma de cuadrados. Post- ANAVA. N. DE. Tratamientos. IN FO. HI. 2. 3. 4. 5. 6. EM. AS. 1. Subconjunto para alfa = 0.05. 40% AN. 3 3. DE. 60% AN. RE CC IO. N. HSD de Tukeya. 3. SI. ST. 20% AN. 80% AN. 3. Sulf.. 3. 100% AN. 3. Sig.. 10,00 13,67 24,67 31,67 34,00 36,33 1,000. 1,000. 1,000. 1,000. 1,000. 1,000. DI. Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 3,000.. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(52) DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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