Efecto de Bacillus subtilis y Klebsiella variicola sobre el crecimiento de Capsicum baccatum var pendulum en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. CI. Efecto de Bacillus subtilis y Klebsiella variicola sobre el. CI EN. crecimiento de Capsicum baccatum var. pendulum en. DE. condiciones de laboratorio. TESIS. CA. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. TE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. BL. IO. AUTOR: Br. RODRIGUEZ ANTICONA, Anghi Nataly Br. RUIZ VIDAURRE, Cynthia Susana. BI. ASESOR: Dr. ROBLES CASTILLLO, Heber Max TRUJILLO – PERÚ 2019. I Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. Dr. Orlando Moisés Gonzáles Nieves. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. CI EN. CI. AS. BI. O. RECTOR. Dr. Rubén César Vera Véliz. Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. BI. BL. IO. TE. CA. DE. VICERRECTOR. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. LO. Dr. Freddy Rogger Mejia Coico. CI. AS. BI. O. DECANO DE LA FACULTAD CIENCIAS BIOLOGICAS. CI EN. Dr. William Elmer Zelada Estraver. Dra. Manuela Natividad Luján Velasquez. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO DE LA FACULTAD CIENCIAS BIOLOGICAS. DIRECTOR DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DEL ASESOR. y Klebsiella variicola sobre el crecimiento de. LO. Capsicum baccatum var. pendulum en condiciones de laboratorio”. G. “Efecto de Bacillus subtilis. IC. El que suscribe: Dr. Heber Max Robles Castillo, asesor de la presente tesis titulada:. BI. O. CERTIFICA:. AS. Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la. CI. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. CI EN. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. DE. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. Por lo tanto, autorizo a Rodriguez Anticona Anghi Nataly y Ruiz Vidaurre. TE. CA. Cynthia Susana, continuar con el trámite del reglamento correspondiente.. BI. BL. IO. Trujillo, setiembre del 2019. Dr. Heber Max Robles Castillo ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AS. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. IC. Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y. LO. G. criterio, el informe de tesis titulado: “Efecto de Bacillus subtilis y Klebsiella variicola sobre el crecimiento de Capsicum baccatum var. Pendulum en. O. condiciones de laboratorio”, con el propósito de obtener el Título Profesional de. DE. CI EN. CI. AS. BI. Biólogo – Microbiólogo.. IO. TE. CA. Trujillo, Setiembre del 2019. Br. Ruiz Vidaurre Cynthia Susana. BI. BL. Br. Rodriguez Anticona Anghi Nataly. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. ---------------------------------------------------. CI EN. CI. AS. BI. O. Dr. Heber Robles Castillo PRESIDENTE. G. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. --------------------------------------------------. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Ms. C. Aníbal Quintana Díaz. ----------------------------------------------Dr. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que. AS. el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales,. LO. G. IC. siendo aprobado por unanimidad.. BI. Dr. Heber Robles Castillo. O. ---------------------------------------------------. CI EN. CI. AS. PRESIDENTE. DE. --------------------------------------------------. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. Ms. C. Aníbal Quintana Díaz. ----------------------------------------------Dr. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DEDICATORIA. A Dios, por darme las fuerzas para continuar en lo adverso y darme sabiduría en las. G. IC. situaciones difíciles.. LO. A mi madre María Anticona por darme la vida y apoyarme con espíritu y coraje, a mi. O. padre Renato Rodriguez por su poyo en el inicio de mis estudios, a mi hermana Andrea. BI. por la confianza que depositó siempre en mí, a mi sobrino Mateo por ser la motivación. AS. de mi vida y mi razón de ser.. CI. Es para mí una gran satisfacción poder dedicar esta investigación a mis abuelos, tíos y. CI EN. primos, que son personas que me han ofrecido el amor y la calidez de la familia a la cual amo.. DE. A Christian Cosavalente Briceño, mi esposo, y a nuestro futuro hijo, que con su amor. mi vida.. RODRIGUEZ ANTICONA ANGHI NATALY. BI. BL. IO. TE. CA. me inspiraron para culminar mis estudios, y a todos mis amigos que formaron parte de. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AS. A Dios por siempre guiarme, por darme fuerzas y aliento para seguir adelante.. LO. en mí y por darme su apoyo en cada momento.. G. IC. A mis padres, Amelia y César, por su amor incondicional y por su confianza depositada. O. A mis abuelos María y Augusto porque son las personas que se preocupan por mí, por. BI. sus enseñanzas, sus consejos y valores que me ha inculcado y su excelente manera de. AS. instruirme para afrontar los retos de la vida y encaminarme por un buen sendero que. CI. siempre los mantendré conmigo el resto de mi vida.. CI EN. A mis tías, por haberme apoyado siempre, por sus consejos, sus valores, por la motivación que me ha permitido ser una persona de bien.. DE. A mis hermanos Caroline, María y David, por ser las personas que alegran mi día y. CA. son mi motivación para seguir adelante y ser un ejemplo a seguir para ellos.. TE. A mis amigas, Martha, Malu, Rosalin y Mili por siempre contar con ellas, por darme. sus deseos de ser cada día mejor.. BI. BL. IO. las fuerzas de seguir superándome, sus consejos, sus buenas vibras y contagiarme de. RUIZ VIDAURRRE CYNTHIA SUSANA. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. AS. Un especial agradecimiento al Dr. Heber Robles Castillo, nuestro asesor de tesis, por. IC. su orientación y conocimientos brindados durante la realización de este trabajo de. LO. G. tesis.. O. Así mismo agradecemos al Ms.C. Jorge Luis del Rosario Chávarri, por su apoyo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. brindado en la realización de esta investigación.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. RESUMEN. IC. Actualmente, Bacillus y Klebsiella de gran importancia por sus resultados positivos en el. G. crecimiento y producción de las diferentes plantas de la familia Solanáceas, dentro de esta. LO. se encuentra al ají escabeche (Capsicum baccatum), alimento importante económicamente. O. en el Perú. Planteándose por objetivo evaluar el efecto de Bacillus subtilis y Klebsiella. BI. variicola sobre el crecimiento de Capsicum baccatum var. pendulum en condiciones de. AS. laboratorio. Se trabajó con cepas bacterianas de Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella variicola ATCC 31488, las cuales fueron estandarizadas e inoculadas en plantines de 15. CI EN. CI. días, individualmente y en combinación, en contraste con un control (agua destilada); la inoculación se realizó a raíces de 25 plantines por cada tratamiento: 10 mL de agua destilada (T1), 10 mL de Bacillus subtilis ATCC 19659 (T2), 10 mL de Klebsiella. DE. variicola ATCC 31488 (T3) y 10 mL en combinación de Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella variicola ATCC 31488 (T4). Dichos plantines se sometieron a riego por. CA. capacidad de campo de 3 a 4 veces por semana, a una temperatura de 20°C y con. TE. penetración de luz blanca (12 horas). Se determinó el crecimiento de los plantines. IO. mediante peso fresco y peso seco, 35 días después de realizada la inoculación. Los. BL. resultados de esta investigación muestran que existe una diferencia significativa de los. BI. promedios tanto para peso fresco como para peso seco, con lo cual se puede concluir que estas bacterias se complementan para promover mayor crecimiento de Capsicum baccatum var. pendulum. Palabras clave: Crecimiento, Capsicum baccatum var. pendulum, Bacillus subtilis ATCC 19659, Klebsiella variicola ATCC 31488. xi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ABSTRACT. Currently, Bacillus and Klebsiella of great importance for their positive results in the. G. IC. growth and production of the different plants of the Family Solanáceas, within it is the chili. LO. pickle (Capsicum baccatum), economically important food in Peru. Considering the. O. objective of evaluating the effect of Bacillus subtilis and Klebsiella variicola on the growth. BI. of Capsicum baccatum var. Pendulum in laboratory conditions. Work was worked with. AS. bacterial strains of Bacillus subtilis ATCC 19659 and Klebsiella variicola ATCC 31488 which were standardized and inoculated on 15 day campuses, individually and in. CI. combination in contrast to a control (distilled water); inoculation was performed to the. CI EN. roots of 25 plants for each treatment: 10 mL distilled water (T1), 10 mL Bacillus subtilis ATCC 19659 (T2), 10 mL Klebsiella variicola ATCC 31488 (T3) and 10 mL in. DE. combination with Bacillus subtilis ATCC 19659 and Klebsiella variicola ATCC 31488 (T4). These plants underwent field capacity irrigation 3 to 4 times per week at a. CA. temperature of 20oC and with penetration of white light (12 hours). The growth of the. TE. plants was determined by fresh weight and dry weight, 35 days after inoculation. The. IO. results of this research show that there is a significant difference in averages for both fresh. BL. weight and dry weight, it can be concluded that these bacteria complement each other to. BI. promote increased growth of Capsicum baccatum var. Pendulum.. Key words: Growth, Capsicum baccatum var. Pendulum, Bacillus subtilis ATCC 19659, Klebsiella variicola ATCC 31488.. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ................. ……ii. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ............................ iii. IC. DEL ASESOR ...................................................................................................................... iv. G. PRESENTACIÓN ................................................................................................................. v. LO. MIEMBROS DEL JURADO ............................................................................................... vi. O. APROBACIÓN ................................................................................................................... vii. BI. DEDICATORIA ................................................................................................................. viii. AS. AGRADECIMIENTOS ......................................................................................................... x RESUMEN ........................................................................................................................... xi. CI. ABSTRACT ........................................................................................................................ xii. CI EN. ÍNDICE ............................................................................................................................... xiii I. INTRODUCCIÓN .................................................................................................. 01. DE. II. MATERIAL Y MÉTODOS ................................................................................... 04 III. RESULTADOS ...................................................................................................... 08. CA. IV. DISCUSIÓN ........................................................................................................... 13. TE. V. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 15. IO. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÀFICAS .................................................................. 16. BI. BL. ANEXOS……...……………………………………………………………………….…..19. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. El crecimiento de las plantas es el resultado de la interacción de raíces y brotes con el medio. AS. ambiente. El medio ambiente para las raíces es el suelo, el cual proporciona soporte. IC. estructural, así como también agua y nutrientes a la planta; además se ha demostrado que. G. también provee de la presencia de ciertos microorganismos que ejercen efecto benéfico sobre. LO. el crecimiento y la supervivencia de las plantas 1. Por ello en los últimos años se ha. O. implementado el uso de rizobacterias promotoras del crecimiento de las plantas (PGPR) como. BI. inoculantes para la biofertilización, la fitoestimulación y el control biológico 2.. AS. Entre los diferentes géneros microbianos que son comercializados se encuentran. CI. Agrobacterium radiobacter, Azospirillum brasilense, Azotobacter chroococcum, Bacillus spp.,. CI EN. Bacillus subtilis, Bacillus subtilis var. amyloliquefaciens, Burkholderia cepacia, Delfitia acidovorans, Paenobacillus macerans, Pantoea agglomerans, Pseudomonas spp., Serratia entomophilia, Streptomyces spp., y varias especies de Rhizobia spp., ya que promueven el. DE. crecimiento de las plantas debido a que poseen capacidad de solubilizar fosfatos, fijar N2,. TE. fitohormona 3.. CA. producir sideróforos, producción de ácido indol acético (AIA) y citosinas, modular. El género Bacillus ha demostrado ser promotor de crecimiento vegetal mediante su capacidad. IO. solubilizar fosfatos, producir AIA y secretar sideróforos logra aumentar la biomasa seca,. BL. aumentar el peso fresco de raíz y brotes y aumentar la longuitud de raíz; esto se infiere a partir. BI. de los estudios citados a continuación. Un estudio realizado en tomate, okra y espinaca africana, inoculados con B. subtilis y P. aeruginosa, a los 60 días se observó un aumento de biomasa seca de 31% para tomate, 36% y 29% para okra, y 83% y 40% para espinacas africanas, respectivamente, sobre el control no bacteriano 4. Cepas de B. simplex (KBS1F-3). y B. cereus (KFP9-F) solubilizan fosfatos, producen ácido indolacético y secretan sideróforos, 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. por lo que su aplicación en tomate dio un aumento significativo en el peso fresco y seco de la raíz y los brotes, y la longitud total de la raíz 5. Además, la aplicación de Bacillus sp. Rh219 en arroz, solubilizó fosfato inorgánico y producen AIA in vitro, esto ayudó a la mejora de la. AS. salud de la planta en términos de reducción del área foliar enferma (80%), mejorando la longitud del tallo (31%), longitud de la raíz (41%) y peso seco de la planta (60%) en. G. IC. comparación con el control infectado de la planta 6.. LO. El género Klebsiella también es de gran importancia como promotor de crecimiento vegetal,. O. ya que, además de solubilizar fosfatos, producir AIA y secretar sideróforos; posee capacidad. BI. antagónica contra hongos y hay especies que tienen capacidad de actuar en presencia de. AS. herbicidas o fungicidas; esto se infiere a partir de los estudios citados a continuación. Klebsiella sp. aislada de Carica papaya L. demostró su eficiencia en la solubilización de. CI. fosfato, la producción de fitohormonas y sideróforos, y la inhibición del crecimiento micelial. CI EN. de diversos hongos fitopatógenos 7, 8. En la cepa Klebsiella sp. PS19 se determinó su uso para facilitar el crecimiento y el rendimiento de los cultivos incluso en suelos contaminados con. DE. herbicidas 9; así como Klebsiella oxytoca podría ser usada como bioinculante, ya que puede solubilizar fosfatos incluso en presencia de fungicidas 10.. CA. Las Solanáceas son una de las familias económicamente más importantes a nivel mundial e 11. . El. TE. incluye cultivos de gran importancia alimenticia como: papa, tomate, berenjena y ajíes. IO. Perú es un área importante de diversificación de Capsicum sp. (C. annuum, C. chinense, C.. BL. frutescens, C. baccatum y C. pubescens) 12, especies como: C. annuum posee altos niveles de vitamina C (ácido ascórbico) y provitamina A (caroteno). 13. , Capsicum baccatum var.. BI. pendulum, C. annuum y C. chinense mostraron potencial de resistencia a bacterias y virus 14.. Si bien la diversidad de ajíes mencionada, ha venido siendo aprovechada a través de la comercialización y exportación, alcanzar un nivel de producción agrícola adecuada para. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. satisfacer la creciente demanda mundial actual depende en gran medida de la aplicación racional de fertilizantes químicos sintéticos, principalmente los nitrogenados y fosfóricos. 15. .. Sin embargo, el uso excesivo de estos fertilizantes en la agricultura representa un peligro 16. . Por ello el uso microorganismos. AS. ambiental con riesgos potenciales en la salud humana. como las BSF podría desempeñar un papel importante en el suministro de macronutrientes a. G. IC. las plantas de manera que contribuya con la sostenibilidad del medio ambiente 17.. LO. En la actualidad, las bacterias del género Bacillus y Klebsiella son de gran importancia por. O. sus resultados positivos en el crecimiento y producción de las diferentes plantas de la familia. BI. de las Solanáceas. La actual demanda de productos alimenticios como el ají escabeche. AS. depende en gran medida de la utilización de fertilizantes químicos, los cuales ocasionan repercusiones negativas en el medio ambiente como en el ámbito económico. Por tal motivo;. CI. se considera de gran importancia el uso de Bacillus subtilis y Klebsiella variicola como. CI EN. alternativa favorable, de costos reducidos y con corto periodo de tiempo, para la mejora del enriquecimiento agrícola y para el incremento de la exportación de un cultivo. DE. económicamente importante y representativo del Perú, como es el ají escabeche (Capsicum baccatum).. CA. Se plantea como objetivo de la presente investigación determinar el efecto de Bacillus subtilis. TE. ATCC 19659 y Klebsiella variicola ATCC 31488, individualmente y en combinación, sobre. IO. el crecimiento de Capsicum baccatum var. pendulum en condiciones de laboratorio. Por lo. BL. antes mencionado, se espera que Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella variicola ATCC. BI. 31488 en combinación, promuevan en mayor proporción el crecimiento de plantines de Capsicum baccatum var. pendulum que cuando se aplican individualmente, en condiciones de laboratorio.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODOS. AS. 1. MATERIAL. IC. 1.1.Población: Plantines de Capsicum baccatum var. pendulum cultivadas en. G. Laboratorio de Biotecnología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la. LO. Universidad Nacional de Trujillo, Perú, en octubre y noviembre del 2018.. O. 1.2.Muestra: 100 plantines de Capsicum baccatum var. pendulum. cultivadas en el. BI. Laboratorio de Suelos y Foliares.. AS. 1.3.Unidad de Muestra: Un plantín de Capsicum baccatum var. pendulum.. CI. 2. MÉTODO:. CI EN. 2.1.Reactivación, cultivo y estandarización de ATCC 19659 y Klebsiella variicola ATCC 31488. DE. 2.1.1. Reactivación de las cepas bacterianas Las cepas bacterianas de Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella. CA. variicola ATCC 31488 procedentes del laboratorio GenLab de Lima, Perú. TE. S.A.C (Anexo N°16 y 17) se reactivaron de acuerdo con las instrucciones. BI. BL. IO. adjuntas; que consistió en realizar una suspensión en tubo con tapa rosca, con un hisopado en 30 mL de Caldo Nutritivo y se dejó incubar a 20°C en agitación constante (Shaker) a 150 rpm durante 24 h.. 2.1.2. Cultivo y estandarización de los inóculos bacterianos Las bacterias se sembraron en placas de Petri con Agar Nutritivo para realizar la observación de las características culturales (Anexo N° 1 y 2) y se hizo tinción de Gram para observación de características microscópicas (Anexo N° 3 y 4). 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se tomó una colonia de cada bacteria sembrada y se procedió a inocular en dos matraces (250 mL) con 30 mL de Caldo Nutritivo respectivamente, se dejó incubar en agitación constante (150 rpm) a 20°C por 8 horas;. AS. posterior a ello se midió la DO600 de las cepas reactivadas y se procedió a calcular la cantidad de inóculo a aplicar en 50 mL de Caldo Nutritivo,. G. IC. utilizando la siguiente fórmula:. LO. (D.O.) (XµL) = (0.005) (50 000µL). O. 2.2.Curva de crecimiento. BI. Se inoculó la cepa estandarizada de B. subtilis en un matraz 250 mL con 50 mL de. AS. Caldo Nutritivo (B1) y un control (50 mL de Caldo Nutritivo), fueron incubadas en agitación constante a 20 °C y posteriormente se realizaron lecturas de la DO 600 en. CI. el espectrofotómetro cada hora, durante 13 horas (Anexo N° 5 y 7).. CI EN. Se inoculó la cepa estandarizada de K. variicola en un matraz 250 mL con 50 mL de Caldo Nutritivo (K1) y un control (50 mL de Caldo Nutritivo), fueron incubadas. DE. en agitación constante a 20 °C y finalmente se realizaron lecturas de la DO600 en el espectrofotómetro cada hora, durante 13 horas (Anexo N° 6 y 8).. CA. 2.3.Esterilización y preparado de suelo. TE. Se compró dos costales de 10 Kg de arena. La arena se llevó a esterilizar a la. IO. autoclave a 121°C y a 15 libras de presión durante 30 minutos, utilizando una. BL. autoclave de 50 L, luego se repartió la arena en 2 bandejas de plástico de 50. BI. pocillos, agregando 195 g por cada pocillo, 9.750 Kg de arena en cada una.. 2.4.Siembra de Capsicum baccatum var. pendulum Se sembró 1 semilla de Capsicum baccatum var. pendulum, adquiridas de Hortus S.A., Perú, en cada pocillo de cada bandeja con arena preparada y se regó con agua mineral aplicando el método de riego propuesto por Saleh 18, el cual consiste en un. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. riego por goteo a capacidad de campo en cada pocillo de 3 a 4 veces por semana, durante 50 días. El experimento se mantuvo bajo condiciones de laboratorio controladas, a una. AS. temperatura de 20°C y con penetración de luz blanca (12 horas).. G. IC. 2.5.Propagación e inoculación de Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella. LO. variicola ATCC 31488 en plantines de Capsicum baccatum var. pendulum. O. 2.5.1. Propagación de Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella variicola. BI. ATCC 31488. AS. De las cepas reactivadas se dispensaron 100 µL a 2 frascos con 500 mL de caldo nutritivo en agitación constante y a 20°C. Se utilizaron estas cepas a. CI. las 8 horas de incubación (fase exponencial) y se realizó la lectura de la. CI EN. DO600 de cada frasco. Posteriormente se estandarizaron las cepas incubadas y se calculó la cantidad de inoculo a agregar en 450 mL de agua. DE. destilada estéril, llevándolo a una DO600 de 0.1 (3 x 108 UFC/mL). CA. 2.5.2. Inoculación de Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella variicola. TE. ATCC 31488 en plantines de Capsicum baccatum var. pendulum. BI. BL. IO. Se emplearon cuatro tratamientos, en cada tratamiento se usaron 25 plantines de Capsicum baccatum var. pendulum (de 15 días), mediante riego en suelo, se administraron 10 mL de agua destilada (T1), 10 mL de una suspensión bacteriana de Bacillus subtilis ATCC 19659 equivalente a. 0.1 OD600 (T2), 10 mL de una suspensión bacteriana de Klebsiella variicola ATCC 31488 equivalente a 0.1 OD600 (T3) y 10 mL de una suspensión bacteriana en combinación de Bacillus subtilis ATCC 19659 y. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Klebsiella variicola ATCC 31488 equivalente a 0.1 OD600 (T4); teniendo contacto con el tallo de los plantines. Finalmente se sigue irrigando los plantines y se mantienen en las mismas condiciones controladas de. AS. laboratorio durante 35 días. 2.6.Evaluación del efecto de la inoculación bacteriana sobre Capsicum baccatum. G. IC. var. pendulum. LO. Las variables evaluadas fueron: peso fresco y peso seco (con dos días de secado a. O. 65°C), según edad fisiológica se evaluaron 20 plantines por tratamiento, a los 35. BI. días después de realizada la inoculación de los plantines de Capsicum baccatum. AS. var. Pendulum (Anexo N° 15). 2.7.Análisis estadístico. CI. Para determinar si existió diferencia significativa entre los tratamientos evaluados. CI EN. (T1, T2, T3 y T4), se empleó la prueba estadística de ANAVA, con 95% de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. confiabilidad (Anexo N° 11, 12, 13 y 14).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. AS. El crecimiento de Capsicum baccatum var. pendulum fue determinado mediante la. IC. evaluación a los 35 días de realizado la inoculación con los diferentes tratamientos (T1, T2,. G. T3 y T4), para ello se obtuvieron los datos de peso fresco y peso seco (Tabla 1). Se. LO. determinó que existe diferencia significativa entre los tratamientos evaluados empleando el. O. análisis estadístico de ANAVA, con 95% de confiabilidad, y se encontró que el tratamiento. BI. diferenciador fue T4, esto se realizó mediante la Prueba de Tukey (Tabla 2 y 3); donde el. AS. tratamiento en combinación de Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella variicola ATCC. CI. 31488 (T4) muestra diferencia significativa en el crecimiento de plantines de Capsicum. CI EN. baccatum var. pendulum, con respecto al control (T1), a Bacillus subtilis ATCC 19659. BI. BL. IO. TE. CA. DE. (T2) y a Klebsiella variicola ATCC 31488 (T3).. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1. Porcentaje de peso fresco y peso seco de plantines de Capsicum baccatum var.. IC. AS. pendulum según los tratamientos aplicados.. PARÁMETROS Promedio (g). T1 0.19348. T2 0.2197. T3 0.20435. T4 0.276795. TOTAL. Porcentaje. 100 %. 113.6 %. 105.6 %. 143.1 %. PESO SECO. Promedio (g). 0.016895. 0.024655. 0.022065. 0.028105. TOTAL. Porcentaje. 100 %. 145.9 %. O. LO. G. EVALUACIÓN PESO FRESCO. 166.4 %. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. 130.6 %. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) b a. a. a. LO. 0.15. G. 0.2. IC. 0.25. AS. 0.3. O. 0.1. BI. 0.05 0 T1 (CONTROL). T2 (B. SUBTILIS). AS. PROMEDIO DE PESO FRESC0 DE PLANTINES DE C. baccatum var. pendulum. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. T3 (K. VARIICOLA). T4 ( B. SUBTILIS + K. VARIICOLA). CI EN. CI. TRATAMIENTOS APLICADOS. DE. Gráfica 1. Promedio de peso fresco de plantines de Capsicum baccatum var.. BI. BL. IO. TE. CA. pendulum según los tratamientos aplicados. a = p: > 0.05; b = p: < 0.05.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) AS IC. 0.03. b. 0.015. a. BI. O. a. LO. a. 0.02. G. 0.025. AS. 0.01. CI. 0.005. 0 T1 (CONTROL). T2 (B. SUBTILIS). CI EN. PROMEDIO DE PESO SEC0 DE PLANTINES DE C. baccatum var. pendulum. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. T3 (K. VARIICOLA). T4 ( B. SUBTILIS + K. VARIICOLA). DE. TRATAMIENTOS APLICADOS. CA. Gráfica 2. Promedio de peso seco de plantines de Capsicum baccatum var. pendulum. BI. BL. IO. TE. según los tratamientos aplicados, a = p: > 0.05; b = p: < 0.05.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2. Prueba de Tukey para hallar la diferencia significativa entre los. -0.02149. -0.01087. 0.02149. 0.01062. T3. 0.01087. -0.01062. T4. 0.083315. 0.061825. T4. -0.083315 -0.061825 -0.072445. 0.072445. CI EN. CI. AS. BI. T2. IC. T3. G. T1. T2. LO. T1. O. TRATAMIENTOS. AS. tratamientos según evaluación de peso fresco.. Tabla 3. Prueba de Tukey para hallar la diferencia significativa entre los. T1. TE. T2. IO. T3. T2. T3. T4. -0.00776. -0.00517. -0.01121. 0.00259. -0.00345 -0.00604. 0.00776 0.00517. -0.00259. }. 0.01121. 0.00345. 0.00604. BI. BL. T4. T1. CA. TRATAMIENTOS. DE. tratamientos según evaluación de peso seco.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. AS. Los resultados de la presente investigación descritos en la Tabla N° 1 demuestran un aumento en el porcentaje tanto en peso fresco como en peso seco en cada tratamiento. El. IC. peso fresco aumento en 13.6%, 5.6%, y 4.3% respectivamente a los tratamientos (T2, T3 Y. LO. G. T4), en contraste al control (T1); también los datos obtenidos para este parámetro fueron analizados estadísticamente utilizando el programa estadístico de ANAVA, los resultados. BI. O. de ello se observan en la Gráfica N°1, el cual indica con diferentes letras (a, b), que el promedio de Peso fresco de los plantines de C. baccatum var. pendulum evaluados son. AS. significativamente diferentes a p <0.05 con una confiabilidad del 95%. Así mismo, para. CI. determinar el tratamiento diferenciador se le aplicó la prueba estadística de Tukey, la cual. CI EN. determinó que el T4 es el que promueve un mayor crecimiento en los plantines de C. baccatum var. pendulum con respecto a los otros tratamientos (T1, T2, y T3).. DE. En cuanto al peso seco, los resultados descritos en la Tabla N° 1 demuestran aumento en 45.9%, 30.6%, y 66.4% respectivamente a los tratamientos (T2, T3 Y T4), en contraste al. CA. control (T1); Así mismo, los datos obtenidos para este parámetro fueron analizados. TE. estadísticamente utilizando el programa estadístico de ANAVA, el análisis se observa en la. IO. Gráfica N°1, el cual indica con diferente letras (a, b), que el promedio de Peso seco de los. BL. plantines de C. baccatum var. pendulum evaluados son significativamente diferentes a p. BI. <0.05 con una confiabilidad del 95%. Por otro lado, para determinar el tratamiento diferenciador se le aplicó la prueba estadística de Tukey, la cual determinó que el T4 es el que promueve un mayor crecimiento en los plantines de C. baccatum var. pendulum con respecto a los otros tratamientos (T1, T2, y T3).. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dichos resultados descritos anteriormente para los cultivos de B. subtilis y K. variicola coinciden con los estudios realizados. En un estudio realizado por Adesemoye y col. con Bacillus sp. y P. aeruginosa, aplicados en demostró que, a los 60 días de evaluación,. AS. Bacillus sp. era responsable del crecimiento de cultivos por un aumento de biomasa seca del 31% para tomate, 36% para okra, y 83% para espinacas africanas con respecto al. G. IC. control 4. Otro estudio realizado por Hansse y Labuschagne concluyen que la aplicación de. LO. Bacillus sp. en tomate dio un aumento significativo en el peso fresco y seco de la raíz y los. O. brotes, y la longitud total de la raíz en tomate dio un aumento significativo en el peso. BI. fresco y seco de la raíz y los brotes, y la longitud total de la raíz debido a la capacidad de. AS. solubilizar fosfatos, producen ácido indolacético y secretar sideróforos 5. Otra habilidad de Bacillus sp. es formar endosporas resistentes al calor y desecación, esto hace que puedan. CI. retener la viabilidad durante largos períodos de tiempo, ya sea en almacenamiento o en el. CI EN. suelo 19.. Por otro lado, Ahemad y col. demostraron el uso de Klebsiella sp. facilita el crecimiento y. DE. el rendimiento de los cultivos incluso en suelos contaminados con herbicidas. A demás que. CA. demostró que Klebsiella sp. tiene eficiencia para la solubilización de fosfato, la producción de fitohormonas y sideróforos, y la inhibición del crecimiento micelial de diversos hongos 7, 8. . Por lo que las complementaciones de las propiedades promotoras de. TE. fitopatógenos. IO. crecimiento de estas cepas bacterianas expliquen porque el T4 tuvo un mayor crecimiento. BL. con respecto a los demás tratamientos (T1, T2 y T3).. BI. Los resultados encontrados en la presente investigación sirven de base para la consideración a futuro de la aplicación de biofertilizantes, en este caso, bacterianos en diversas especies de cultivos vegetales. En este estudio fueron aplicados en cultivos del género Capsicum, que es representante de Perú, ello se demuestra con la colección de más de 700 accesiones de Capsicum incluidas el banco nacional de germoplasma del INIA, de 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las cuales especies como Capsicum annuum, Capsicum baccatum, Capsicum chinense y Capsicum frutescens representan la biodiversidad del Perú 20.. IC. AS. CONCLUSIONES. G. En la presente investigación se concluye que Bacillus subtilis ATCC 19659 y. LO. Klebsiella variicola ATCC 31488 en combinación, promueven en mayor. O. proporción el crecimiento de plantines de Capsicum baccatum var. pendulum que. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. cuando se aplicaron individualmente, en condiciones de laboratorio.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Gupta A, Gopal M, Tilak KV. Mechanism of plant growth promotion by. Bloemberg GV, Lugtenberg BJ. Molecular basis of plant growth promotion and. LO. 2.. G. rhizobacteria. Indian J Exp Biol. 2000; 38 (9): 856-62.. IC. 1.. AS. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. Bernard RG. Plant Growth-Promoting Bacteria: Mechanisms and Applications.. BI. 2.. O. biocontrol by rhizobacteria. Curr Opin Plant Biol. 2001; 4 (4): 343-50.. Adesemoye AO, Obini M, Ugoji EO. Comparison of plant growth-promotion. CI. 3.. AS. Scientifica. 2012; 1: 15.. CI EN. with Pseudomonas aeruginosa and Bacillus subtilis in three vegetables. Braz J Microbiol. 2008; 39 (3): 423-426. 4.. Hassen A, Labuschagne N. Root colonization and growth enhancement in wheat. DE. and tomato by rhizobacteria isolated from the rhizoplane of grasses. World J. 5.. CA. Microbiol Biotechnol. 2010; 26 (10): 1837-1846. Yasmin S, Zaka A, Imran A, Zahid MA, Yousaf S, Rasul G, et al. Plant Growth. TE. Promotion and Suppression of Bacterial Leaf Blight in Rice by Inoculated. IO. Bacteria. PLoS ONE. 2016; 11 (8): e0160688. Prakash Singh R, Jha P, Nath Jha P. The plant-growth-promoting bacterium. BL. 6.. BI. Klebsiella sp. SBP-8 confers induced systemic tolerance in wheat (Triticum. 7.. aestivum) under salt stress. Braz J Plant Physiol. 2015; 184: 57-67. Melo J, Carolino M, Carvalho L, Correira P, Tenreiro R, Chaves S, et al. Crop management as a driving force of plant growth promoting rhizobacteria physiology. SpringerPlus. 2016; 5 (1): 1574. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 8.. Ahemad M, Saghir Khan M. Toxicological Effects of Selective Herbicides on Plant Growth Promoting Activities of Phosphate Solubilizing Klebsiella sp. Strain PS19. Curr Microbiol. 2011; 62: 532-538. Buddhi CW, Mi JK, Min HY. Effect of Fungicides on Phosphate Solubilization. AS. 9.. by Klebsiella oxytoca and Enterobacter ludwigii. Korean J Soil Sci Fert. 2013;. G. IC. 46 (2): 112-116.. LO. 10. Sierra-Muñoz JC, Siqueiros-Delgado ME, Flores-Ancira E, Moreno-Rico O,. O. Arredondo-Figueroa JL. Riqueza y distribución de la familia Solanaceae en el. BI. estado de Aguascalientes, México. Bot sci. 2015; 93 (1): 97-117.. AS. 11. Van Zonneveld M, Ramirez M, Williams DE, Petz M, Meckelmann S, Avila T, et al. Screening Genetic Resources of Capsicum Peppers in Their Primary. CI. Center of Diversity in Bolivia and Peru. PLoS ONE. 2015; 10 (9): e0134663.. CI EN. 12. Howard LR, Talcott ST, Brenes CH, Villalon B. Changes in Phytochemical and Antioxidant Activity of Selected Pepper Cultivars (Capsicum Species) As. DE. Influenced by Maturit. J Agric Food Chem. 2000; 48 (5): 1713-1720. 13. Bento CS, de Souza AG, Sudré CP, Pimenta S, Rodrigues R. Multiple genetic. CA. resistances in Capsicum spp. Genet Mol Res. 2017; 16 (3): gmr16039789.. TE. 14. Patiño Torres C, Sánchez de Prager M. Efecto de la aplicación de roca fosfórica. IO. y la inoculación con bacterias solubilizadoras de fosfatos sobre el crecimiento. BL. del ají (Capsicum annum). Acta Agron. 2014; 63 (2): 1-13.. BI. 15. Vejan P, Abdullah R, Khadiiran T, Ismail S, Boyce NA. Role of Plant Growth Promoting Rhizobacteria in Agricultural Sustainability-A Review. Molecules. 2016; 21 (573).. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 16. Mohammad SK, Almas Z, Parvaze A, Wani. Role of phosphate-solubilizing microorganisms in sustainable agricultura. A review. Agron Sustain Dev. 2007; 27 (1): 29-43.. Deficit Irrigation Practice. Int J Agric For. 2012; 2 (5): 262-267.. AS. 17. Saleh MI. Water Use Efficiency and Bird Pepper Production as Affected by. G. IC. 18. Young CS, Lethbridge G, Shaw LJ, Burns RG. Survival of inoculated Bacillus. LO. cereus spores and vegetative cells in nonplanted and rhizosphere soil. Soil Biol. O. Biochem. 1995; 27: 1017-1026.. BI. 19. Meckelmann SW, Riegel DW, van Zonneveld M, Ríos L, Peña K, Ugas R, et al.. AS. Compositional characterization of native Peruvian chili peppers (Capsicum. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. spp.). J Agric Food Chem. 2013; 61: 2530–2537.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. ANEXOS. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ANEXO N° 1. Fig. 1. Colonias de Bacillus subtilis ATCC 19659 en Agar Nutritivo, se. DE. observan colonias de borde irregular, a 4X.. BI. BL. IO. TE. CA. Fuente: Propia. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ANEXO N° 2. CA. Fig. 2. Colonias de Klebsiella variicola ATCC 31488 en Agar Nutritivo,. TE. se observan colonias pequeñas y de consistencia mucosa, a 4X.. BI. BL. IO. Fuente: propia. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ANEXO N° 3. ATCC 19659 a inmersión.. BL. IO. Fig. 3. Observación de Grampositivos pertenecientes a Bacillus subtilis. BI. Fuente: propia. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ANEXO N° 4. ATCC 31488 a inmersión.. IO. TE. Fig. 4. Observación de Gramnegativos pertenecientes a Klebsiella variicola. BI. BL. Fuente: propia. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. ANEXO N° 5. G. Tabla 4. Lecturas de la O.D. de Bacillus subtilis a 600 nm, a partir de la hora 6 se realizó. BI. O. LO. dilución al 10%.. OD600. HORA. 0.013. CI EN. 2. AS. 1. 0.008. CI. 0. B1. 0.045. 4. 0.077. 5. 0.146. IO. TE. CA. DE. 3. 6. 0.038. 7. 0.049. 8. 0.060. 9. 0.091. 10. 0.112. 11. 0.116. 12. 0.116. 13. 0.117. BI. BL. 0.021. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO N° 6. AS. Tabla 5. Lecturas de la O.D. de Klebsiella variicola a 600 nm, a partir de la hora 6 se. 0.007. 1. 0.008. 2. 0.023 0.054. CI EN. 4. 0.010. CI. 3. BI. 0. AS. K1. 0.100. 6. 0.041. 7. 0.068. 8. 0.093. 9. 0.107. 10. 0.128. 11. 0.140. 12. 0.171. 13. 0.172. CA. DE. 5. BI. BL. IO. TE. O. OD600. HORA. LO. G. IC. realizó dilución al 10%.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ANEXO N° 7. Curva de crecimiento de B. subtilis. IC. 1.400. G. 1.200. LO O. 0.800 0.600. B. subtilis. BI. DO600. 1.000. 0.200 0.000 0. 2. 4. 6. CI. AS. 0.400. 8. 10. 12. 14. CA. DE. CI EN. Tiempo (horas). BI. BL. IO. TE. Gráfica 3. Curva de crecimiento de Bacillus subtilis a 20°C.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ANEXO N° 8. G. 2.000. LO. 1.800 1.600. O. 1.400 1.200 1.000. BI. DO600. IC. Curva de crecimiento de K. variicola. 0.800. AS. 0.600. K. variicola. 0.200 0.000 2. 4. 6. 8. CI EN. 0. CI. 0.400. 10. 12. 14. CA. DE. Tiempo (horas). BI. BL. IO. TE. Gráfica 4. Curva de crecimiento de Klebsiella variicola a 20°C.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO N° 9. AS. Tabla 6. Peso fresco de plantines de Capsicum baccatum var. pendulum a los 35 días. G. IC. de aplicados los tratamientos (T1, T2, T3 y T4).. T2. T3. (Control). (B. subtilis). (K. variicola). 01. 0.2351. 0.2732. 02. 0.3133. 0.0173. 0.1873. 0.3161. 03. 0.2382. 0.2063. 0.2053. 0.2671. 04. 0.1635. 0.1472. 0.1445. 0.2135. 05. 0.2041. 0.1881. 0.1652. 0.2055. 06. 0.2081. 0.2362. 0.2212. 0.2714. 07. 0.2892. 0.1753. 0.1664. 0.3033. 08. 0.1493. 0.2074. 0.1831. 0.2344. 0.1292. 0.1905. 0.1995. 0.2045. 0.1111. 0.1755. 0.1523. 0.1832. 0.1582. 0.1474. 0.1614. 0.2522. TE. 0.1783. 0.2253. 0.2223. 0.2853. 13. 0.2251. 0.2992. 0.2641. 0.3074. 14. 0.1511. 0.2983. 0.2675. 0.4141. 15. 0.2382. 0.2392. 0.1974. 0.2413. 16. 0.2391. 0.2123. 0.1823. 0.2483. 17. 0.1861. 0.3221. 0.2111. 0.3654. 18. 0.2042. 0.2253. 0.2444. 0.3092. 19. 0.1681. 0.3322. 0.2765. 0.3043. 20. 0.0801. 0.1811. 0.2641. 0.2761. DE. 10 11. BI. BL. 12. CA. 09. BI 0.1711. AS. CI EN. DE C. baccatum. CI. PLANTINES. O. T1. IO. N° DE. LO. Peso fresco (g). T4. (B. subtilis. +. K. variicola) 0.3333. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ANEXO N° 10. IC. Tabla 7. Peso seco de plantines de Capsicum baccatum var. pendulum a los 35. LO. G. días de aplicados los tratamientos (T1, T2, T3 y T4).. T2. (Control). (B. subtilis). 01. 0.0222. 0. 0301. 0. 0244. 0. 0304. 02. 0.0214. 0. 0257. 0. 0236. 0. 0266. 03. 0.0211. 0. 0212. 0. 0288. 04. 0.0176. 0. 0244. 0. 0271. 0. 0291. 05. 0.0157. 0. 0260. 0. 0185. 0. 0188. 06. 0.0158. 0. 0164. 0. 0173. 0. 0206. 07. 0. 0147. 0. 0192. 0. 0178. 0. 0293. 0. 0118. 0. 0203. 0. 0165. 0. 0229. 0. 0096. 0. 0167. 0. 0179. 0. 0244. 10. 0. 0240. 0. 0245. 0. 0211. 0. 0251. 11. 0. 0129. 0. 0207. 0. 0265. 0. 0273. 12. 0. 0193. 0. 0212. 0. 0210. 0. 0263. 13. 0. 0250. 0. 0361. 0. 0228. 0. 0274. 14. 0. 0121. 0. 0298. 0. 0272. 0. 0407. 15. 0. 0158. 0. 0203. 0. 0202. 0. 0251. 16. 0. 0228. 0. 0264. 0. 0245. 0. 0275. 17. 0. 0141. 0. 0341. 0. 0283. 0. 0352. 18. 0. 0201. 0. 0268. 0. 0213. 0. 0283. 19. 0. 0151. 0. 0299. 0. 0225. 0. 0372. 20. 0. 0068. 0. 0232. 0. 0216. 0. 0311. BI. BL. IO. CA. 09. DE. 08. 0. 0213. CI EN. BI. DE C. baccatum. (K. variicola). AS. PLANTINES. T3. CI. N° DE. O. T1. TE. Peso seco (g). T4 (B. subtilis. +. K. variicola). 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO N° 11. AS. Anexo N° 11. Tabla 8. Análisis de varianza de un factor, con 95% de confiabilidad,. Cuenta. Suma. Promedio. Columna 1. 20. 3.8696. 0.19348. 0.00333513. Columna 2. 20. 4.2994. 0.21497. 0.00515112. Columna 3. 20. 4.087. O. Varianza. 0.20435. 0.00168974. Columna 4. 20. 5.5359. 0.00329647. LO. Grupos. BI. G. IC. para peso fresco evaluado en plantines de Capsicum baccatum var. pendulum.. CI. AS. 0.276795. CI EN. ANEXO N° 12. Anexo N° 12. Tabla 9. Análisis de varianza de un factor, con 95% de confiabilidad,. Grupos. TE. A B C. CA. DE. para peso seco evaluado en plantines de Capsicum baccatum var. pendulum.. Suma. Promedio. Varianza. 20 20 20. 0.3379 0.4931 0.4413. 0.016895 0.024655 0.022065. 0.00002492 0.00002918 0.00001235. 20. 0.5621. 0.028105. 0.00002725. BI. BL. IO. D. Cuenta. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO N° 13. AS. Tabla 10. Análisis de varianza de los tratamientos evaluados, según peso fresco, con 95%. IC. de confiabilidad.. 0.33950037. 79. CI. AS. Total. BI. O. LO. G. Origen de Grados Promedio Valor SI las Suma de de de los Valor Probabilidad crítico para / variaciones cuadrados libertad cuadrados de F (P) F HSD NO Entre grupos 0.083523796 3 0.027841265 8.27 0.00008 2.72494392 0.05 SI Dentro de los grupos 0.255976574 76 0.003368113. CI EN. ANEXO N° 14. Tabla 11. Análisis de varianza de los tratamientos evaluados, según peso seco, con 95%. CA Suma de cuadrados 0.00133851 4 0.00177939 4 0.00311790 8. IO. TE. Origen de las variaciones. DE. de confiabilidad.. BL. Entre grupos Dentro de los grupos. BI. Total. Grados de liberta d 3 76. Promedio Valor de los Valor Probabilida crítico SI / cuadrados de F d (P) para F HSD NO 0.00044617 19.0 2.7249439 0.00 1 6 0.00 2 4 SI 0.00002341 3. 79. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. ANEXO N° 15. LO. G. IC. T2. CI. AS. BI. O. T3. DE. CI EN. T1. TE. CA. T4. IO. Fig. 5. Plantines de Capsicum baccatum var. pendulum, evaluadas a los 35 días de realizada la inoculación, a una temperatura de 20°C y con penetración de luz blanca;. BL. según tratamiento:. BI. T1: 10 mL de agua destilada estéril T2: 10 mL del inóculo de Bacillus subtilis ATCC 19659 equivalente a 0.1 OD600 T3: 10 mL del inóculo Klebsiella variicola ATCC 31488 equivalente a 0.1 OD600 T4: 10 mL del inóculo Bacillus subtilis ATCC 19659 y Klebsiella variicola ATCC 31488 equivalente a 0.1 OD600. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ANEXO N° 16. Fig. 6. Información de Bacillus subtilis ATCC 19659 procedente del laboratorio GenLab de Lima, Perú S.A.C. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ANEXO N° 17. Fig. 7. Información de Klebsiella variicola ATCC 31488 procedente del laboratorio GenLab de Lima, Perú S.A.C. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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