Efecto In Vitro De Temperaturas De 0°, 5°, 10°C, Ambiental Y Corporal En Medio Ácido Y Neutro Para Pseudomona Arruginosa

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(1)Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. FO R. MA TI. CA. ESCUELA DE MEDICINA. IN. “EFECTO IN VITRO DE TEMPERATURAS DE 0º, 5º, 10ºC,. E. AMBIENTAL Y CORPORAL EN MEDIO ÁCIDO Y NEUTRO. TESIS. SI S. TE. MA S. PARA Pseudomona aeruginosa.”. PARA OPTAR EL GRADO DE:. AUTOR:. IN. A. DE. BACHILLER DE MEDICINA. OF. IC. TONY ALEX ALBURQUEQUE TELLO. ASESORA: MG. ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO TRUJILLO – PERÚ 2009. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. DEDICATORIA. CA. A DIOS. MA TI. Quien es la luz que guía mi camino. IN. FO R. M e fortalece en los momentos difíciles. E. A MIS PADRES: ERNESTO E HILDA. MA S. Quienes son mi razón de seguir adelante y buscar cada vez mas objetivos llevando siempre. TE. presente sus consejos que guían mi vida.. SI S. Gracias por su sacrificio y apoyo constante.. OF. IC. IN. A. DE. Son un ejemplo a seguir, los admiro.. A MIS HERMANOS: ROBIN Y DANY Por su comprensión y apoyo incondicional.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. A MI ASESORA ELVA MEJÍA Por su confianza, disposición y paciencia. CA. durante la realización de este trabajo y. FO R. MA TI. por transmitirme siempre fe y fuerza.. A MI AMOR SANDRITA. IN. Por ser quien le dio luz y sentido a mi vida, que me. E. impulsó a seguir y que juntos nos hemos fijamos. MA S. metas para concluirlas, porque estamos en la búsqueda continua de nuevos horizontes,. TE. compartiendo la palabra desafío… y a su familia. SI S. quienes me han hecho sentir como uno de ellos. profesional.. OF. IC. IN. A. DE. facilitando y apoyando mi formación académica y. A MI UNIVERSIDAD Base de mi formación como profesional y donde me permitió conocer amigos con los que puedo contar en cualquier momento.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. INDICE. RESUMEN………………………………………………... 5. II.. INTRODUCCIÓN………………………………………... 6. III.. MATERIAL Y MÉTODO ……………………………….. 11. IV.. RESULTADOS ……………………………………………. 15. V.. DISCUSIÓN ………………………………………………. 26. VI.. CONCLUSIONES………………………………………... 31. VII.. RECOMENDACIONES …………………………………. 32. VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ………………….. 33. ANEXOS ………………………………………………….. 36. TE. OF. IC. IN. A. DE. SI S. IX.. E. IN. FO R. I.. MA S. MA TI. CA. Pág.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. I. RESUMEN. Con el objetivo de conocer el efecto de la temperatura en el crecimiento de. CA. Pseudomona aeruginosa en medio ácido y neutro, in vitro, se realizó el presente. MA TI. estudio de tipo explicativo en la sección de Microbiología de la Facultad de Medicina de la UNT. Se trabajó con la cepa de P. aeruginosa aislada de un. FO R. paciente quemado del HRDT, la cual fue reactivada y conservada en TSA. Se realizaron pruebas a temperaturas de 0º, 5º, 10ºC, ambiental y corporal con pH. IN. ácido y neutro. Los cultivos se incubaron por 24 horas con medio caldo peptonado a cada Tº y pH, luego se sembraron en medio agar nutritivo por 24 horas para. MA S. E. determinar las UFC.. A Temperaturas de 0º, 5º, 10º, ambiental y corporal existe crecimiento de. TE. P. aeruginosa en medio neutro, in vitro. El medio ácido impide el crecimiento de P. aeruginosa, in vitro, a Temperaturas de 0º, 5º, 10º, ambiental y corporal. Las. SI S. temperaturas en las que se observó mayor turbidez, es en la Ambiental y Corporal. DE. trabajadas en medio neutro, por lo que se trabajó hasta en 6 diluciones de la cepa para contabilizar con exactitud las UFC.. IN. A. Según el Análisis de Varianzas y la Prueba de Duncan existe diferencia. IC. altamente significativa entre las UFC de P. aeruginosa a las temperaturas. OF. estudiadas en medio neutro, mostrando gran variación entre las Tº de 0, 5, 10ºC con la Ambiental y Corporal. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. II.- INTRODUCCIÓN. A lo largo de miles de millones de años, las bacterias han venido estando. formas. de. vida. existentes. en. (1,2). determinados. Actualmente, las únicas. MA TI. creando numerosos mecanismos de adaptación.. CA. sometidas a diversas presiones ambientales, y han respondido evolutivamente. ambientes. extremos. son. FO R. exclusivamente procarióticas. Desafiando a nuestras ideas preconcebidas de lo que es la vida "normal", encontramos extraordinarios seres vivos unicelulares. IN. viviendo a pH muy ácidos o muy alcalinos, medrando en salmueras y salinas, o reproduciéndose a temperaturas de más de 100ºC y a grandes presiones. Uno de. MA S. E. ellos es Pseudomona aeruginosa el cual puede ser un agente letal para el ser. TE. humano. (2,3). P. aeruginosa, es una bacteria gramnegativa, aeróbica, que se encuentra. SI S. ampliamente distribuida en la naturaleza. Aunque se considera como un. DE. microorganismo con poder patógeno mínimo, en las últimas décadas ha pasado a ser uno de los patógenos oportunistas más importantes en el medio hospitalario. (3). IN. A. La infección por P. aeruginosa raramente ocurre en personas con defensas. IC. normales. Para que la infección se presente deben haber factores predisponentes,. OF. como: enfermedades malignas, hematológicas, metabólicas. Prioritariamente infecta el tracto pulmonar, el urinario, tejidos, heridas, y también causa otras infecciones de sangre. También puede causar infecciones del sitio quirúrgico. (3,4). 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Esta bacteria representa un problema de salud importante, especialmente cuando se trata de pacientes con cáncer o quemados. Una vez que se establece la infección, P. aeruginosa produce una serie de compuestos tóxicos que causan no. (7). Entre las proteínas que intervienen en la. MA TI. funcionamiento del sistema inmune.. sino adicionalmente interfieren con el. CA. (5,6). sólo daño tisular extenso,. infección de P. aeruginosa encontramos toxinas, como las exotoxinas A y S, así. FO R. como enzimas hidrolíticas que degradan las membranas y el tejido conjuntivo de diversos órganos. (8, 9) Esta situación se ve agravada por la dificultad para tratar las. IN. infecciones por P. aeruginosa, ya que esta bacteria presenta muy alta resistencia. MA S. E. natural a distintos antibióticos y desinfectantes. (10, 11). Existe un grupo poblacional especialmente vulnerable a las infecciones. TE. por P. aeruginosa, formado por los pacientes con enfermedad fibroquística. Esta bacteria coloniza muy eficientemente el tracto respiratorio de estos pacientes y a. DE. bacteria. (4,12- 14). SI S. medida que progresa la infección se seleccionan derivados mucoides de esta. IN. A. Esta bacteria es capaz de utilizar una enorme variedad de compuestos. IC. orgánicos como sustrato para crecer, capacidad que le permite colonizar nichos en. OF. los que son escasos los nutrimentos que otros organismos no pueden asimilar. Así coloniza, con frecuencia variable, zonas húmedas del organismo, como la piel de las axilas, el conducto auditivo, la región perineal y las mucosas.. (15). Pseudomonas llegan a los hospitales a través del agua del grifo, por los desagües e, incluso, con los ramos de flores, sin contar con las presentes normalmente en la. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. flora del personal hospitalizado. Se ha reportado el aislamiento de P. aeruginosa de ambientes tan inhóspitos como son el combustible de avión, soluciones de. CA. clorhexidina y el jabón. (15,16). MA TI. La Pseudomona crece fácilmente en los medios de cultivo ordinarios. En agar sangre forma colonias planas, de olor peculiar y color verdoso debido a la (5,16). FO R. producción de pigmentos, piocianina y pioverdina.. IN. Por otro lado existen diversas formas de destrucción de este agente patógeno, tales como el tratamiento antibiótico y la interacción con agentes. MA S. E. ambientales. Al subir la temperatura por encima del nivel máximo de crecimiento, se dejan sentir los efectos sobre la viabilidad, cuya pérdida significa, que las. TE. bacterias dejan de ser capaces de crecer y dividirse, aun cuando las transfiramos a un medio idóneo. La muerte por calor es una función exponencial de primer. DE. SI S. orden. (1,17,18). Pseudomona aeruginosa es incapaz de formar esporas y crece. IN. A. aeróbicamente. La temperatura óptima para su desarrollo es 25 a 30 ºC, aunque. IC. puede crecer desde los 10º hasta los 42 ºC aproximadamente. No crece bajo. OF. condiciones ácidas (pH ≤ 4.5) y necesita preferentemente pH neutro. (3,15-19). En estudios realizados con otros agentes patógenos como: “Métodos de. Preservación y el Crecimiento de Xanthhomonas Campestres. PV vitícola in vitro a variable temperatura, pH y concentración de Na Cl”, los autores Ana Nascimento. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. y Rosa Mariano llegaron a la siguiente conclusión: “ El crecimiento de X. Campestres se. observó en el rango de 5 a 35 °C, mientras que un gran crecimiento se observó a partir de 27 a los 29 °C. Se determinó así mismo que esta bacteria no aumentó su. MA TI. CA. crecimiento a 0 y a 40 °C. (20). Justificación:. FO R. Pseudomona. aeruginosa es considerada un patógeno oportunista. Bajo ciertas condiciones esta bacteria puede infectar diferentes tipos de heridas,. IN. particularmente quemaduras, pero también el tracto urinario y respiratorio. Esta bacteria produce artritis, osteomielitis, neumonía, endocarditis, queratitis,. MA S. E. meningitis, absceso cerebral, traumatismos en neurocirugía, punción lumbar contaminada, sepsis y algunas cepas producen grandes cantidades de polisacárido. TE. extracelular, relacionadas a casos de fibrosis quística. También puede causar. de infecciones.. SI S. infecciones del sitio quirúrgico y han sido responsables de epidemias en este tipo. DE. Por ende, este microorganismo es responsable de diversas enfermedades letales para el ser humano, razón por la cual, es necesario incrementar las investigaciones. IN. A. de su medio de reproducción, crecimiento y destrucción, a fin de detener su alto. IC. poder letal. La temperatura en la cual se desenvuelva este microorganismo es. OF. fundamental para su viabilidad, por ello, es necesario realizar trabajos de investigación al respecto, ya que en nuestro país y más aún en nuestra localidad, según la literatura revisada no existen investigaciones de este tema en particular. Es por ello que surge el interés por realizar este trabajo de investigación, para lo cual se plantea el siguiente problema:. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. PROBLEMA: ¿Cuál es el efecto de la temperatura a 0º, 5º, 10º C, ambiental y corporal en medio. CA. ácido y neutro del crecimiento de Pseudomona aeruginosa In Vitro?. MA TI. HIPÓTESIS:. A temperaturas menores de 10ºC y el medio ácido impiden el crecimiento de. FO R. Pseudomona aeruginosa.. IN. OBJETIVOS: Objetivo General:. MA S. E.  Conocer el efecto de la temperatura y el pH en el crecimiento de. Objetivos Específicos:. TE. Pseudomona aeruginosa In Vitro.. SI S.  Determinar el efecto de la temperatura a 0º en medio ácido y neutro. DE. del crecimiento de Pseudomona aeruginosa In Vitro.  Determinar el efecto de la temperatura a 5º en medio ácido y neutro. A. del crecimiento de Pseudomona aeruginosa In Vitro.. IC. IN.  Determinar el efecto de la temperatura a 10º en medio ácido y. OF. neutro del crecimiento de Pseudomona aeruginosa In Vitro.  Determinar el efecto a temperatura ambiental en medio ácido y. neutro del crecimiento de Pseudomona aeruginosa In Vitro.  Determinar el efecto a temperatura corporal en medio ácido y neutro del crecimiento de Pseudomona aeruginosa In Vitro.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. III.- MATERIAL Y MÉTODOS. El presente estudio de tipo explicativo, experimental se realizó en la sección de. MA TI. CA. Microbiología de la Facultad de Medicina de la UNT, en la ciudad de Trujillo.. Muestra:. FO R. Fueron 60 observaciones de la cepa de Pseudomona aeruginosa aislada de un paciente quemado del Hospital Regional Docente de Trujillo, donde por cada. IN. temperatura (0º, 5º, 10º, ambiental y corporal) se trabajó con 6 repeticiones en medio. E. ácido y neutro.. MA S. Tipo de Muestreo. DISEÑO EN BLOQUE CON SUBMUESTREO. TE. Modelo: Yijk = µ + ßi + τj + εij + ηijk. i= 1,2. SI S. J= 1,2,…,5 K= 1,2,…,6. A. DE. Esquema para los datos en un diseño en bloque con submuestreo.. Medi o ácido. OF. IC. 1.. IN. Bloques. 2.. Medi o Neutro. 0º Y111 Y116 Y211 Y216 T1. Total Media Ŷ.1. Tratamientos: Temperaturas Total 5º 10º Ambiental Corporal Y121 Y131 Y141 Y151 B1 Y126 Y136 Y146 Y156 Y221 Y231 Y241 Y251 B2 Y226 Y236 Y246 Y256 T2 T3 T4 T5 T Ŷ.2 Ŷ.3 Ŷ.4 Ŷ.5. Media Ŷ… Ŷ… Ŷ…. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Diseño de Experiencia: Tº Corporal - pH 4. CA. La cepa de Pseudomona aeruginasa se conservó en TSA. Cepa Diluida. FO R. Se diluyó la cepa hasta obtener 106 bacterias por mililitro. Tº Ambiental - pH 4. MA TI. Se colocó 4 ml de caldo peptonado más 1 ml de la cepa diluida en cada tubo de ensayo. E. IN. Se colocó 4 ml de caldo peptonado más 1 ml de la cepa diluida en cada tubo de ensayo. 5ºC - pH 4. 10ºC - - pH 4. Cuando se observó turbidez en los tubos de ensayo, se sembró en placas con agar nutritivo. IC. IN. A. DE. 24 horas después. SI S. TE. MA S. 0ºC - pH 4. OF. Se sembró por 24 horas colocándose en estufa a 37º C. Se determinó las cuentas viables mediante el conteo de UFC por placa.. “El mismo procedimiento se repite para pH de 7.”. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Variables y escala de medición: Variable independiente: Temperatura y pH. Variables dependientes: Cepa de Pseudomona aeruginosa. Tipo. Escala de Medición. Temperatura. Cuantitativa-Continua. Razón. pH. Cuantitativa-Continua. Razón. MA TI. FO R. Definiciones Operacionales:. CA. Variable. A) Cepa de Pseudomona aeruginosa: Aislada de un paciente quemado. E. IN. del Hospital Regional Docente de Trujillo.. MA S. B) Temperatura: Magnitud física que mide la sensación subjetiva de calor o frío de los cuerpos o del ambiente, que para efectos de este trabajo. TE. experimentamos con:. SI S. 0º: Obtenida en recipiente con hielo seco. 5º: Obtenida en refrigeradora regulada.. DE. 10º: Obtenida en refrigeradora regulada. Ambiental: De acuerdo a nuestro medio, oscila entre 20º a 25º C.. IC. IN. A. Corporal: Consideramos según la bibliografía a 37º C. (14,15). OF. C) pH: Es el coeficiente logarítmico negativo de la concentración de. H+ que indica el grado de acidez o basicidad de una solución, para efectos de este trabajo experimentaremos con: PH Neutro: Consideramos pH de 7. pH Ácido: Consideramos pH de 4.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Proceso de captación de información: Se determinó el crecimiento de Pseudomona eruginosa en cada temperatura y pH, utilizando placas con medios adecuados para dicho germen contabilizando las. MA TI. CA. unidades formadores de colonias.. Análisis estadístico:. FO R. Se realizó mediante el Cuadro de Análisis de Varianza para un Diseño de Bloque. Grado de. Suma de. Cuadrado. Variación. Libertad. Cuadrados. Medio. Tratamientos. t–1. Tyy. T. Error experimental. t (n-1). Eyy. E. Total. Σ Y2. MA S. T/E. SI S. tn – 1. F. que existen diferencias estadísticas entre los tratamientos en. DE. Para confirmar. E. Fuente de. TE. IN. con Submuestreo con la Prueba F y con un Nivel de Significancia al 5 %.. IN. A. estudio se aplicó la Prueba de Duncan.. OF. IC. Aspectos Éticos. El estudio se realizó tomando en cuenta los principios de investigación de Helsinsky II y contó con el permiso del Comité de Investigación y Ética de la Facultad de Medicina de la UNT.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IV.- RESULTADOS. Se trabajó con la cepa de Pseudomona aeruginosa aislada de un paciente. CA. quemado del Hospital Regional Docente de Trujillo, la cual fue reactivada y conservada en Agar Soya Tripticasa.. MA TI. Se realizaron pruebas a diferentes temperaturas (0º, 5º, 10ºC, ambiental y corporal) y pH (ácido y neutro). Los cultivos se incubaron por 24 horas con. FO R. medio caldo peptonado a cada Tº y pH, luego se sembraron en medio agar nutritivo por 24 horas a 37ºC para determinar las UFC. Se sembraron también. IN. aquellas que no presentaron turbidez, para una mejor interpretación y. E. validación de los resultados.. MA S. De las cuales se obtuvieron los siguientes resultados: No existió crecimiento de la cepa de Pseudomona aeruginosa a temperaturas de 0º C, 5º C, 10º C,. TE. Ambiental y Corporal cuando se trabajó en medio ácido. (Tabla 1, 2, 3, 4, 5). SI S. Se evidenció crecimiento de la cepa de Pseudomona aeruginosa a temperaturas de 0º C, 5º C, 10º C, Ambiental y Corporal cuando se trabajó en. DE. medio neutro. (Tabla 1, 2, 3, 4, 5). A. Las temperaturas en las que se observó mayor turbidez, es en la Ambiental. IN. y Corporal trabajadas en medio neutro (Fig. 4j, 5m), por lo que se trabajó. IC. hasta en 6 diluciones de la cepa para contabilizar con exactitud las UFC.. OF. (Tabla 4, 5).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. Tabla Nº 1: Efecto de la Temperatura a 0º C, in vitro, para Pseudomona. MA TI. aeruginosa en medio Ácido y Neutro, expresado en Unidad. FO R. Formadora de Colonias (UFC). T2. 0. T4. SI S. T5. 108. 0. 108. 0. 108. 0. 108. DE. T6. 108. 2. TE. T3. (UFC) 108. E. (UFC) 0. MA S. T 0º C T1. IN. MEDIO ÁCIDO MEDIO NEUTRO. IN. A. Fuente: Resultados obtenidos del trabajo “Efecto in Vitro de Temperaturas de 0º,. OF. IC. 5º, 10º, Ambiental y Corporal en Medio Ácido y Neutro para P. Aeruginosa.”,. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Figura Nº 1: Efecto de la Temperatura a 0º C, in vitro, para Pseudomona. IN. FO R. MA TI. CA. aeruginosa en medio Ácido y Neutro.. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. (a) Tubos de ensayo conteniendo siembra de P. aeruginosa en caldo peptonado, expuestos durante 24 horas a 0º C en medio ácido y neutro.. (c) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (a) en medio neutro, luego de 24 horas en estufa a 37º C. Se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. OF. IC. (b) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (a) en medio ácido, luego de 24 horas en estufa a 37º C. No se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. Tabla Nº 2: Efecto de la Temperatura a 5º C, in vitro, para Pseudomona. MA TI. aeruginosa en medio Ácido y Neutro, expresado en Unidad. FO R. Formadora de Colonias (UFC). T2. 0. T4. SI S. T5. 109. 0. 109. 0. 109. 0. 109. DE. T6. 109. 0. TE. T3. (UFC) 109. E. (UFC) 0. MA S. T 5º C T1. IN. MEDIO ÁCIDO MEDIO NEUTRO. IN. A. Fuente: Resultados obtenidos del trabajo “Efecto in Vitro de Temperaturas de 0º,. OF. IC. 5º, 10º, Ambiental y Corporal en Medio Ácido y Neutro para P. Aeruginosa.”,. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Figura Nº 2: Efecto de la Temperatura a 5º C, in vitro, para Pseudomona. IN. FO R. MA TI. CA. aeruginosa en medio Ácido y Neutro.. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. (d) Tubos de ensayo conteniendo siembra de P. aeruginosa en caldo peptonado, expuestos durante 24 horas a 5º C en medio ácido y neutro.. (f) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (d) en medio neutro, luego de 24 horas en estufa a 37º C. Se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. OF. IC. (e) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (d) en medio ácido, luego de 24 horas en estufa a 37º C. No se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. Tabla Nº 3: Efecto de la Temperatura a 10º C, in vitro, para Pseudomona. MA TI. aeruginosa en medio Ácido y Neutro, expresado en Unidad. FO R. Formadora de Colonias (UFC). T2. 0. T4. SI S. T5. 109 109. 0. 109. 0. 109. 0. 109. DE. T6. (UFC) 109. 0. TE. T3. E. (UFC) 0. MA S. T 10º C T1. IN. MEDIO ÁCIDO MEDIO NEUTRO. IN. A. Fuente: Resultados obtenidos del trabajo “Efecto in Vitro de Temperaturas de 0º,. OF. IC. 5º, 10º, Ambiental y Corporal en Medio Ácido y Neutro para P. Aeruginosa.”,. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Figura Nº 3: Efecto de la Temperatura a 10º C, in vitro, para Pseudomona. IN. FO R. MA TI. CA. aeruginosa en medio Ácido y Neutro.. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. (g) Tubos de ensayo conteniendo siembra de P. aeruginosa en caldo peptonado, expuestos durante 24 horas a 10º C en medio ácido y neutro.. (i) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (g) en medio neutro, luego de 24 horas en estufa a 37º C. Se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. OF. IC. (h) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (g) en medio ácido, luego de 24 horas en estufa a 37º C. No se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. Tabla Nº 4: Efecto de la Temperatura Ambiental, in vitro, para Pseudomona. MA TI. aeruginosa en medio Ácido y Neutro, expresado en Unidad. FO R. Formadora de Colonias (UFC). (UFC) 17. T2. 0. SI S. T5. MA S. T4. TE. T3. (UFC) 1012 1012. 0. 1012. 0. 1012. 0. 1012. 0. 1012. DE. T6. E. Tº Ambiental T1. IN. MEDIO ÁCIDO MEDIO NEUTRO. IN. A. Fuente: Resultados obtenidos del trabajo “Efecto in Vitro de Temperaturas de 0º,. OF. IC. 5º, 10º, Ambiental y Corporal en Medio Ácido y Neutro para P. Aeruginosa.”,. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Figura Nº 4: Efecto de la Temperatura Ambiental, in vitro, para Pseudomona. IN. FO R. MA TI. CA. aeruginosa en medio Ácido y Neutro.. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. (j) Tubos de ensayo conteniendo siembra de P. aeruginosa en caldo peptonado, expuestos durante 24 horas a Temperatura Ambiental en medio ácido y neutro. Se evidencia turbidez en los tubos de medio neutro. (l) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (j) en medio neutro, luego de 24 horas en estufa a 37º C. Se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. OF. IC. (k) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (j) en medio ácido, luego de 24 horas en estufa a 37º C. No se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. Tabla Nº 5: Efecto de la Temperatura Corporal, in vitro, para Pseudomona. MA TI. aeruginosa en medio Ácido y Neutro, expresado en Unidad. FO R. Formadora de Colonias (UFC). (UFC) 0. T2. 0. 3,8 x 1012. 0. 2,1 x 1012. 0. 3,84 x 1012. 0. 1012. SI S. T5. DE. T6. 1012. MA S. T4. (UFC) 2,12 x 1012. 0. TE. T3. E. Tº Ambiental T1. IN. MEDIO ÁCIDO MEDIO NEUTRO. IN. A. Fuente: Resultados obtenidos del trabajo “Efecto in Vitro de Temperaturas de 0º,. OF. IC. 5º, 10º, Ambiental y Corporal en Medio Ácido y Neutro para P. Aeruginosa.”,. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Figura Nº 5: Efecto de la Temperatura Corporal, in vitro, para Pseudomona. IN. FO R. MA TI. CA. aeruginosa en medio Ácido y Neutro.. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. (m) Tubos de ensayo conteniendo siembra de P. aeruginosa en caldo peptonado, expuestos durante 24 horas a Temperatura Corporal en medio ácido y neutro. Se evidencia turbidez en los tubos de medio neutro. (o) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (m) en medio neutro, luego de 24 horas en estufa a 37º C. Se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. OF. IC. (n) Placa con agar nutritivo y siembra de cada tubo de la fig. (m) en medio ácido, luego de 24 horas en estufa a 37º C. No se evidenció crecimiento de colonias de P. aeruginosa.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. V.- DISCUSIÓN. P. aeruginosa, es una bacteria gramnegativa, aeróbica, que se encuentra. CA. ampliamente distribuida en la naturaleza. Aunque se considera como un. MA TI. microorganismo con poder patógeno mínimo, en las últimas décadas ha pasado a ser uno de los patógenos oportunistas más importantes en el medio. FO R. hospitalario.(3,21-23). P. aeruginosa puede provocar infecciones graves como: bacteriemias,. IN. neumonía, infecciones del SNC, infecciones del tracto urinario, infecciones cutáneas en grandes quemados y en el sitio quirúrgico. Estas infecciones,. MA S. E. generalmente nosocomiales, tienen un curso fulminante y una letalidad extremadamente alta a pesar de un tratamiento antimicrobiano adecuado. (3,12,22). TE. La prevalencia de microrganismos multirresistentes es un problema creciente, y en el ámbito intrahospitalario cobra un particular interés. (23-25). SI S. P. aeruginosa se considera un microorganismo centinela, y una. DE. modificación en el patrón de resistencia es una determinante muy importante en los sistemas de vigilancia epidemiológica, ya que uno de los factores de riesgo. A. asociados a la multirresistencia es el uso expandido, en ocasiones indiscriminado,. IC. IN. de antibióticos en hospitales y en la comunidad. (26,27). OF. Existen diversas formas de destrucción de este agente patógeno, tales. como el tratamiento antibiótico y la interacción con agentes físicos y químicos como son la temperatura y el pH(1,28-30) , comprobándose en este estudio que el pH ácido y las temperaturas menores o iguales a 10º C inciden sobre el desarrollo de la Pseudomona aeruginosa.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Según la literatura revisada no existen trabajos que estudien de manera específica el efecto del pH como la temperatura sobre el crecimiento de P. aeruginosa, pero sí hay estudios con otras especies como la P. fluorescens así. CA. como con otros microorganismos. (20, 31-33). MA TI. Los hallazgos encontrados en este trabajo rechazan parcialmente la hipótesis planteada con respecto a temperaturas menores de 10º C, in vitro, impiden el crecimiento de P. aeruginosa, ya que con pH neutro aún a esas. FO R. temperaturas pueden crecer (Tabla 1 – 3). Sin embargo el pH ácido impide el. IN. crecimiento en las diferentes temperaturas estudiadas, resultados que coinciden con otros autores. (3,15-19,34,35). MA S. E. Estos hallazgos se deben a que tanto la temperatura como el medio modifican la velocidad de crecimiento de estos microorganismos, provocando. TE. cambios que, a determinados valores de dichos factores pueden llegar a ocasionar la muerte de esta bacteria; condicionando la distribución de los microorganismos. SI S. en sus ecosistemas y hábitats naturales; además, la utilización de estos parámetros. DE. permiten controlar el crecimiento microbiano, mediante la mutagénesis, la esterilización y desinfección, la quimioterapia . (1,28,36). IN. A. El experimento se realizó bajo las condiciones adecuadas, teniendo. IC. cuidados en la preparación de los materiales a utilizar, usando el tiempo necesario. OF. entre la inoculación de las placas y su posterior incubación a la temperatura indicada; así como el método usado es un método estándar que es recomendado por la OMS con fines clínicos y de vigilancia como prueba para determinar susceptibilidad de los microorganismos. (37,38). 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. En este estudio se evidenció el crecimiento de la cepa de Pseudomona aeruginosa a temperaturas de 0º C, 5º C, 10º C, Ambiental y Corporal cuando se trabajó con pH neutro. (Tabla 1, 2, 3, 4, 5), se pudo observar también que al. CA. aumentar la temperatura el microorganismo aumenta su velocidad de crecimiento,. MA TI. llegando a tener mayor número de UFC a temperatura Ambiental y Corporal (Tabla 4, 5) (Fig. 1) Estos resultados se obtienen por que el desarrollo de la. FO R. biomasa está estrechamente ligado al intervalo de temperaturas para el que un organismo desarrolle sus funciones metabólicas. Dentro de este intervalo existe. IN. una temperatura óptima, y por tanto, el consumo de sustrato y el desarrollo de biomasa será máximo. Si se considera que estamos por debajo de la temperatura. crecimiento bacteriano.. (1,39). MA S. E. óptima, el aumento de temperatura provocará un aumento en la velocidad de El efecto de la temperatura sobre el crecimiento es. TE. complejo. Por un lado cada reacción química individual, de todas las que conforman el metabolismo, es afectada por la temperatura, por lo que un. SI S. incremento de ésta resulta en una mayor velocidad de reacción Por otra parte,. DE. aumentos o disminuciones posteriores de temperatura inactivan las enzimas que catalizan las reacciones, con lo que el valor decrece rápidamente. La temperatura (39-40). Respecto a los. IN. A. óptima resulta de la interacción de estos dos efectos.. IC. resultados obtenidos concuerda con algunos autores de artículos de revisión. OF. manifestando que P. aeruginosa se encuentra dentro de Microorganismos psicrófilos que se definen como un organismo que tiene una temperatura optima de crecimiento de 15ºC o inferior, una temperatura máxima 20ºC y una temperatura mínima de 0ºC pero tiene temperaturas optimas de 20 – 40ºC se llaman psicrotolerantes(40-42) , pero no concuerda con algunas revisiones que. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. refieren que la temperatura óptima para su desarrollo es 25 a 30 ºC, aunque puede crecer desde los 10º hasta los 42 ºC aproximadamente. (13-15-19) Se realizo estudios con Pseudomona fluorescens: crece a 6ºC de manera lenta, y bien a 28 y 37ºC. No. CA. crece a 55ºC. (31). MA TI. No existe crecimiento de la cepa de Pseudomona aeruginosa a temperaturas de 0º C, 5º C, 10º C, Ambiental y Corporal que se trabajó en medio. FO R. ácido. (Tabla 1, 2, 3, 4, 5), Estos resultados se deben a que el medio ácido desnaturaliza o al menos inhibe la actividad de enzimas y moléculas ácido-lábiles. IN. como el ATP y DNA, el transporte de nutrientes, además el transporte de aniones. E. afecta el metabolismo. Así como las concentraciones de hidrógenos afectan el. MA S. estado iónico del microorganismo. Las enzimas ligadas a membrana regulan el tamaño y variación del flujo de protones para proveer nutrientes y energía. Este. TE. experimento concuerda con los estudios y trabajos revisados en los que refiere que. SI S. No crece bajo condiciones ácidas (pH ≤ 4.5) y necesita preferentemente pH neutro. Algunas bacterias son inhibidas por medio de ácido láctico. Frank (1990). DE. reportó que 40 mg/l de ácido láctico (24 h a 22ºC) fueron necesarias para destruir. A. Staphylococcus aureus y 300 mg/l para destruir Pseudomona aeruginosa.(43). IN. Además algunos autores refieren que el ácido acético y el ácido siálico son. IC. bactericidas a determinadas concentraciones por lo que se está usando para tratar (44-45). OF. determinadas patologías como las otitis.. Pero hay que tener presente que. dichos ácidos deben estar a la concentración y el tiempo adecuado para no ser perjudicial en el caso de las personas. (45). 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Al realizar el análisis estadístico entre las temperaturas y medios estudiados; se trabajó sólo las diferencias significativas en medio neutro, debido a que en medio ácido como no hubo crecimiento de UFC de P. aeruginosa las. MA TI. temperaturas como con el medio ácido (Tabla 1,2,3,4,5). CA. varianzas resultaban 0, por lo que no había forma de comparación, tanto de. Se realizó el Análisis de Varianzas entre las UFC de P. aeruginosa con las. FO R. temperaturas estudiadas en medio neutro (ANEXO 1) observándose que existe diferencia altamente significativa entre los promedios de las Temperaturas (F=. IN. 19.2), que según la tabla de grados de libertad que son 4 y 25 con error de significancia al 5 %, le corresponde 2.75, al 1 % le corresponde 4.25; por lo que el. MA S. E. presente estudio tendría un aproximado de 0.00 de error de significancia. Para una mejor interpretación de los resultados obtenidos así como de las diferencias. TE. significativas se realizó la Prueba de Duncan (ANEXO 1), la cual es específica para este tipo de experimentos, donde observamos que existe diferencia. SI S. significativa entre las Tº de 0, 5, 10ºC comparadas con Tº ambiental y mayor aún. DE. comparada con la Tº corporal; así mismo entre Tº ambiental y Tº corporal existe diferencia significativa, no siendo así cuando se comparan entre las Temperaturas. OF. IC. IN. A. de 0º, 5º y 10 ºC con un nivel de significancia al 5%.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VI.- CONCLUSIONES. A Temperaturas de 0º, 5º, 10º, ambiental y corporal existe crecimiento de. MA TI. CA. Pseudomona aeruginosa en medio neutro, in vitro.. El medio ácido impide el crecimiento de Pseudomona aeruginosa, in vitro, a. FO R. Temperaturas de 0º, 5º, 10º, ambiental y corporal.. IN. La temperatura de 0º C y medio neutro no impiden el crecimiento de Pseudomona aeruginosa y el crecimiento de esta bacteria fue directamente proporcional al. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. aumento de temperatura.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VII. RECOMENDACIONES. Es conveniente el estudio con otras especies de Pseudomona y con otros agentes. CA. químicos ácidos a determinadas concentraciones que no sean nocivos tal como el. MA TI. ácido acético y el ácido láctico.. FO R. Se deben realizar estudios en animales, para verificar la inocuidad de los agentes. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. químicos utilizados y así posteriormente poder utilizarlos en humanos.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VIII.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Iañez P. Acción de los agentes físicos sobre las bacterias. Microbiología. CA. general 2003:23:1-12.. MA TI. 2. Demming JW. Ecological strategies of barophilic bacteria in the deep ocean. Microbiol. Sci. 2002:3: 205-211.. FO R. 3. Poole K. Multidrug efflux systems in Pseudomonas aeruginosa: resistance, regulation and activity. Biotechnology and Pathogenesis, Maui, Hawaii. ASM. IN. Press, Washington, D. C. 2004.. E. 4. Hoiby N. New antimicrobials in the management of cystic fibrosis Journal of. MA S. Antimicrobial Chemotherapy. 2002;49:235-238. 5. Britigan BE, Roeder TL, Rasmussen GT, Shasby ML. Interaction of the. TE. Pseudomonas aeruginosa secretory product pyocyanin and pyochelin generates. SI S. hydroxyl radicals and causes synergistic damage to endothelial cells. J. Clin. Invest. 2002, 90: 2187-2196.. DE. 6. Costerton JW, Lewandowski D, DeBeer D, Caldwell D, Korber G. Biofilms,. A. the customized microniche. J. Bacteriol. 2005, 176: 2137- 2142.. IN. 7. Singh PK, Parsek MR, Greenberg EP, Welsh J. A component of innate. IC. immunity prevents bacterial biofilm development. Nature. 2002, 917: 552-555.. OF. 8. Kievit T, Kakai Y, Register K, Pesci C, Iglewski BH. Role of the Pseudomonas aeruginosa las and rhl quorum-sensing systems in rhlI regulation. FEMS Microbiol. Lett. 2002, 212: 101-106.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 9. Wagner EV, Bushnell D, Passador L, Brooks AI, Iglewski BH. Microaaray analysis of Pseudomonas aeruginosa quorum-sensing regulons: effects of growth phase and environment. J. Bacteriol. 2003, 185: 2080-2095.. CA. 10. Nikaido H. Multiple antibiotic resistance and efflux. Curr. Opin. Microbiol.. MA TI. 1998, 1: 516-523.. 11. Whiteley ME. Promoter specificity elements in Pseudomonas aeruginosa. FO R. quorum-sensing-controlled genes. J. Bacteriol. Greenberg. 2001:183: 55295534.. IN. 12. Deretic V, Schurr M, Boucher J. and Martin D. Conversion of Pseudomonas aeruginosa to mucoidy in cystic fibrosis: environmental stress and regulation. MA S. E. of bacterial virulence by alternative sigma factors. J. Bacteriol. 2003; 176:2773- 2780.. TE. 13. Elkin S, Geddes D. Pseudomonal infection in cystic fibrosis: the battle continues. Expert review of anti-infective therapy 2003:1 (4): 609-18.. SI S. 14. Tania Valmaseda, Lázaro Alba, Rolando Ochoa, Aniel Moya, Yadira Pino,. DE. Sara Catalina Esnard. Determinación de las condiciones de ensayo óptimas en un ELISA para la detección de anticuerpos séricos IgG anti-LPS de VacciMonitor 1 8 Año 13 No. 3 Julio-. IN. A. Pseudomonas aeruginosa O11.. IC. Septiembre del 2004.. OF. 15. Harrison-Balestra C., Cazzaniga A., stephen B. and Mertz P. A wound isolated Pseudomonas aeruginosa grows formed biofilm in vitro within 10 hours and is visualized by ligh microscopy. Dermatologic. Surgery. 2003; 29(69):631.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 16. Hardalo, C. & S. C. Edberg 2006. Pseudomonas aeruginosa: Assessment of risk from drinking water. Crit. Rev. Microbiol. 23: 47-75. 17. Ryan KJ; Ray CG. Sherris Medical Microbiology, 4th ed., McGraw Hill.. CA. 2004, p. 8385-8529.. MA TI. 18. Iglewski BH. Pseudomonas. In: Baron's Medical Microbiology (Barron S et al, eds.), 4th ed., Univ of Texas Medical Branch. 2003 p. 1271-1295. FO R. 19. Schuster M, Lostroh CP, Ogi T, Greenberg EP. Identification, timing and signal specificity of Pseudomonas aeruginosa quorum controlled genes: a. IN. transcriptome analysis. J. Bacteriol. 2003, 185: 2066-2079. 20. Nacimiento RP, et al. Métodos de preservação e crescimento de Xanthomonas. MA S. E. campestris pv. viticola em meio de cultura variando temperatura, pH e concentração de NaCl. Fitopatol. bras. 30(6), nov - dez 2005.. TE. 21. Lebeque YP, Morris HQ, Calás NV. Infecciones nosocomiales: incidencia de la Pseudomonas aeruginosa. Rev Cubana Med 2006; 45(1). SI S. 22. Zuazo JL. El recurso microbiológico en el diagnóstico de las enfermedades. DE. infecciosas. En: Llop A, Valdés M, Zuazo J. Microbiología y Parasitología Médicas. La Habana: ECIMED; 2001. p. 571-80.. IN. A. 23. Rodríguez D. El laboratorio de microbiología en las infecciones. IC. intrahospitalarias. En: Llop A, Valdés M, Zuazo J. Microbiología y. OF. Parasitología Médicas. La Habana: ECIMED; 2001. p. 631-41. 24. Tapia R. Infecciones nosocomiales. Salud Pública Méx. 1999; 41(1):3-4.. 25. Edmon M, Wenzel R. Nosocomial Infections. En: Mandell G, Bennet J, Dolin R, ed. Principles and practice of infections diseases. 5a ed. Philadelphia :Churchill Livingstone; 2000; p. 2988-3074.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 26. Gamero Delgado MC, García-Mayorgas AD, Rodríguez F, Ibarra A, Casal M. Sensibilidad y resistencia de Pseudomonas aeruginosa a los antimicrobianos. Rev Esp Quimioterap, Junio 2007; Vol. 20 (Nº 2): 230-233. CA. 27. Vilar D, Jacquemin B, Díaz A, Velázquez C, Volkow P. Brote por. quirúrgicas,. en. pacientes. MA TI. Pseudomonas aeruginosa, en el área de atención ambulatoria de heridas posmactectomizadas.. Pública. Méx.. FO R. 2003;45(5):371-8.. Salud. 28. Neidhart FC, Ingraham JL, Schaechter M. Physiology of the bacterial cell: a. IN. molecular approach. Sinauer Associates, Sunderland, Massachusetts. 1999.. 29. Madigan MT, Marrs LG. Extremófilos. Inv y Ciencia 1998. 249 (junio): 60-66.. MA S. E. 30. Lebeque Y, Cobas G, Morris H, Almenares J, Camacho M. Utilización de formaldehído y tratamiento térmico en la inactivación de cultivos de. TE. Pseudomonas aeruginosa. Rev Cubana Invest Biomed. 2003;22(4):232-6. 31. Costa M, Gómez M, Molina G, Romero A. Cinética de crecimiento y. SI S. producción de proteasas de Pseudomona fluorescens en leche cruda a. DE. temperaturas de refrigeración. Órgano oficial de Nutrición Chile. 2001, vol 51, nº 4.. A. 32. Alejandrina Jimenez Mercado. Efecto de la temperatura en la eficiencia de. IC. IN. crecimiento y respiración en bacterias marinas heterotróficas. Tesis para. OF. obtener grado de maestra en ciencias de Oceanía costera. Instituto de Investigaciones Oceanológicas. Osenada, B. C., Enero de 2004.. 33. Nedwell DB. Effect of low temperature on microbial growth: lowered affinity for substrates limits growth at low temperature. FEMS Microbial Ecol.1999, 30:101-111.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 34. Simone Cappello; Salvatore P, Guglielmino P. Effects of growth temperature on polystyrene adhesion op Pseudoma aeruginosa Brazilian Journal of Microbiology (2006) 37:205-207. CA. 35. Iramain N, Pol M, Korol , S et al. Pseudomonas aeruginosa en agua y leche. MA TI. cruda: informe preliminar. InVet (B. Aires), ene./dic. 2005, vol.7, no.1, p.133137.. FO R. 36. Ryan KJ; Ray CG. Sherris Medical Microbiology, 4th ed., McGraw Hill. 2004.. IN. 37. Baur A, Kirly W, Sherris S, Turkh M, Antibiotic Suceptibility testing by a standardized single disk metod. Amer J. Clin Path 1966; 45: 490-496.. MA S. E. 38. Vandepette J, Englaek K, Heuch C. Métodos de laboratorio en bacteriología clínica. OMS. Ginebra 1993, 78,84-94.. edición. Editorial. TE. 39. Freeman, Bob A; Microbiología de Burrows 22a Interamericana, España. 1986. Pags. 57-62.. SI S. 40. Roels J. Energetics and kinetics in Biotechnology Elsevier Biomedical Press,. DE. 1983.. 41. Walker TS, Bais HP, Déziel E, Schweizer G,. Rahme R, Vivanco JM.. IN. A. Pseudomonas aeruginosa-plant root interactions. Pathogenicity, biofilm. IC. formation, and root exudation. Plant Physiol. 2004. 134:320-331. OF. 42. José Antonio Calera, Influencia de factores ambientales sobre el Crecimiento microbiano. Universidad de Salamanca. Facultad de Biología. Departamento de Microbiología y Genética. 2007. 43. Frank J. Efecto del ácido láctico en el crecimiento de microoganismos. Rev Cubana Invest Biomed. 2006; 22(4):232-6.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 44. Biswajit Khatua, Angana Ghoshal, Kaushik Bhattacharya, Chandan Mandal, Paul R. Crocker, and Chitra Mandal. Sialic acids, important constituents and selective recognition factors of Pseudomonas aeruginosa, an opportunistic. CA. pathogen. Infectious diseases and Immunology Division, Indian Institute of. 45. Mañós-Pujol M,. MA TI. Chemical Biology, 2008.. Gil E, Jiménez R, Dicenta M.La medicación tópica. bacteriana en Otología. Jano EMC. Febrero 2002. Volumen 62 – Número 1420. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. p. 37 – 39.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ANEXO 1 ANÁLISIS ESTADÍSTICO ANVA (ANÁLISIS DE VARIANZAS). CA. Diferencia entre las Unidades Formadoras de Colonias de P. aeruginosa a. neutro. GL. Suma de. Variación. Cuadrados. Medio. 62,1 x 1023. 4. 248,5 x 1023. Error. 25. 80,7 x 1023. Total. 29. 329,2 x 1023. F. P. 19,2 0.00. 3,2 x 1023. TE. MA S. E. IN. Tratamientos. PRUEBA DE DUNCAN. Cuadrado. FO R. Fuente de. MA TI. Temperaturas de 0º C, 5º C, 10º C, Tº Ambiental y Tº Corporal en medio. SI S. Diferencia entre las Unidades Formadoras de Colonias de P. aeruginosa a Temperaturas de 0º C, 5º C, 10º C, Tº Ambiental y Tº Corporal en medio. DE. neutro.. N. 1. 0º C. 6. 108. 5º C. 6. 109. 10º C. 6. 109. Tº Ambiental. 6. Tº Corporal. 6. OF. IC. IN. A. Tratamientos. α= 0.05. P. 2. 3. 1012. 0.998. 1.000. 2,3 x 1012 1.000. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. GRAFICA Nº 1: Curva de Crecimiento de UFC de Pseudomona aeruginosa a Temperaturas de 0º C, 5º C, 10º C, Tº. FO R. MA TI. CA. Ambiental y Tº Corporal en medio neutro.. IN. 2,5 x 1012. E. 2 x 1012. MA S. 1,5 x 1012. UFC. 5 x 1011. SI S. TE. 1 x 1012. 0º C. 5º C. IN. A. DE. 0 x 100. 10º C. Amb.. Corp.. OF. IC. Temperaturas. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ANEXO 2. EVALUACION DE LA TESIS El Jurado deberá: Consignar las observaciones y objeciones pertinentes relacionados a los. CA. a.. Anotar el calificativo final.. c.. Firmar los tres miembros del jurado.. FO R. b.. MA TI. siguientes items.. TESIS:....................................................................................................................... ..................................................................................................................................... IN. ..................................................................................................................................... DE LAS GENERALIDADES :. E. 1.. MA S. El Título:....................................................................................................... ......................................................................................................................... TE. Tipo de Investigación:.................................................................................. ........................................................................................................................ DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN :. SI S. 2.. Antecedentes:................................................................................................. DE. Justificación:................................................................................................. Problema:....................................................................................................... A. ......................................................................................................................... IN. Objetivos:....................................................................................................... IC. Hipótesis:....................................................................................................... Diseño de Contrastación:............................................................................. OF. Tamaño Muestral:....................................................................................... Análisis Estadístico:..................................................................................... 3. RESULTADOS:................................................................................................... 4. DISCUSIÓN: ....................................................................................................... ............................................................................................................................... 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 5. CONCLUSIONES: ............................................................................................. 6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:................................................................ CA. ................................................................................................................................ MA TI. 7. RESUMEN:.......................................................................................................... ................................................................................................................................ FO R. 8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:. ................................................................................................................................ IN. 9. ORIGINALIDAD: ................................................................................................ E. 10. SUSTENTACION. Formalidad: ....................................................................................... 10.2. Exposición: ........................................................................................ 10.3. Conocimiento del Tema: ................................................................... DE. CALIFICACIÓN:. SI S. TE. MA S. 10.1. A. (Promedio de las 03 notas del Jurado). IN. JURADO:. Código Docente. Dr............................................. Firma. …………… ………….. IC. Presidente:. Nombre. OF. Grado Académico: ……………………………………………...………………. Secretario:. Dr............................................. ……………. ………….. Grado Académico: …………………………………………...…………………. Miembro:. Dr............................................... ……………. ………..... Grado Académico: …………………………………….………….…………….... 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. ANEXO 3. RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO. CA. El Tesista deberá responder en forma concreta a las observaciones del jurado. MA TI. a manuscrito en el espacio correspondiente: a. Fundamentando su discrepancia. FO R. b. Si está de acuerdo con la observación también registrarla.. IN. c. Firmar. E. TESIS:........................................................................................................................ MA S. ..................................................................................................................................... TE. 1. DE LAS GENERALIDADES :. SI S. El Título: ………………………………………………………………… …………………………………………………………………………….. DE. Tipo de Investigación:………………………………………………….... A. …………………………………………………………………………….. IN. 2. DEL PLAN DE INVESTIGACIÓN :. IC. Antecedentes:................................................................................................. OF. Justificación:................................................................................................. Problema:...................................................................................................... ........................................................................................................................ Objetivos:...................................................................................................... Hipótesis:........................................................................................................ 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Diseño de Contrastación:………………………………………………. Tamaño Muestral:………………………………………………………. CA. Análisis Estadístico:…………………….……………………………….. MA TI. 3. RESULTADOS:..................................................................................................... 4. DISCUSIÓN: ........................................................................................................ FO R. 5. CONCLUSIONES: ............................................................................................. …………………………………………..…………………………………………... IN. 6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:................................................................ MA S. E. ………………………………………………………………..…………………….. 7. RESUMEN: ……………………………………………….……………………. TE. …………………………………………………………………………………….. SI S. 8. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN:……………….……………… ………………………………………………………………………………………. DE. 9. ORIGINALIDAD:.................................................................................................. IN. A. ..................................................................................................................................... IC. 10. SUSTENTACION. OF. 10.1. Formalidad:…………………………………………………………... 10.2.Exposición: ........................................................................................... 10.3.Conocimiento del Tema:…………………………………………….. ….................................................... Nombre: Firma: 44. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CONSTANCIA DE ASESORÍA. CA. Yo, ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO, Profesora Asociada a Tiempo completo del Departamento Académico de Ciencias Básicas- Sección. MA TI. Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo, dejo constancia expresa de haber asesorado durante la realización total de la tesis ,. FO R. para obtener el grado de Bachiller en Medicina, titulada: “EFECTO IN VITRO DE TEMPERATURAS DE 0º, 5º, 10ºC, AMBIENTAL Y CORPORAL EN. IN. MEDIO ÁCIDO Y NEUTRO PARA Pseudomona aeruginosa.”, cuyo autor es el TONY ALEX. E. ex alumno de la Facultad de Medicina de la UNT,. DE. SI S. TE. MA S. ALBURQUEQUE TELLO.. Código UNT: 3147. OF. IC. IN. A. MG. ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

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