Determinación de los metabolitos secundarios presentes en las hojas de crotton s p (la tunga)

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA. BI. O. Q. UI M. IC A. Y BIOQUIMICA. RM. AC. IA. Y. Tesis - I. AUTORAS:. CA. DE. FA. DETERMINACIÓN DE LOS METABOLITOS SECUNDARIOS PRESENTES EN LAS HOJAS DE Crotton s.p (LA TUNGA).. TE. LEIVA PEREDA, NIMIA ELIZABETH. BI BL. IO. LEYVA PEREDA, NINFA KARINA. ASESOR: M.Sc. Q.F. HUGO ENRIQUE CASANOVA HERRERA. Trujillo - Perú 2012. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. DEDICATORIA. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE. N.L.P. A Dios por guiar siempre mi camino. Por todas Sus bondades y darme la fortaleza así como el optimismo para alcanzar todas mis metas y de esta manera poder ser el orgullo de mis padres, familiares y amigos que forman parte de mi 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. existir.. O. Q. A mis padres: Martin y Doris que sin. Y. BI. esperar nada a cambio, han sido pilares en. AC. IA. mi camino y así, forman parte de este. RM. logro que me abre puertas inimaginables. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. en mi desarrollo profesional. K.L.P. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTOS. Nuestro agradecimiento en primer lugar a Dios por regalarnos la vida.. IC A. A nuestros profesores, que hoy pueden ver un reflejo de lo que han formado y que sin. UI M. duda han calado hondo en nuestras vidas, permitiéndonos escoger esta profesión, por el. BI. O. Q. amor que hemos visto reflejados en su desarrollo profesional.. Y. Un especial agradecimiento a nuestro asesor Msc. Q.F. Hugo Enrique Casanova. AC. IA. Herrera, Por su profesionalismo, paciencia y todo el apoyo brindado para la realización. FA. RM. de nuestro trabajo.. BI BL. IO. TE. CA. DE. A todas aquellas personas que hicieron posible el desarrollo del presente trabajo.. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACION. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. De conformidad con las disposiciones legales y vigentes del reglamento de Grados y. IC A. Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de. UI M. Trujillo, Sometemos a vuestro elevado criterio el presente informe de investigación. BI. O. Q. titulado:. IA. Y. DETERMINACIÓN DE LOS METABOLITOS SECUNDARIOS PRESENTES EN. RM. AC. LAS HOJAS DE Crotton s.p (LA TUNGA).. FA. Sea propicia esta oportunidad para manifestar el más agradecimiento a nuestra alma. DE. mater y toda su plana docente, por su meritoria de educadores y por la formación. TE. CA. profesional que nos han brindado por medio de sus enseñanzas.. BI BL. del jurado.. IO. De manera muy especial agradecemos la valiosa colaboración de los señores miembros. Dejamos a vuestra consideración Señores Miembros del Jurado, la respectiva calificación del presente informe. Trujillo, Setiembre del 2012. _____________________. ____________________. Leiva Pereda, Nimia E.. Leyva Pereda, Ninfa K. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UI M. IC A. JURADO DICTAMINADOR. ………………. PRESIDENTE. IA. Y. BI. O. Q. Dr. Valdemar Vigo Alcántara. ………………. MIEMBRO. DE. FA. RM. AC. MSc.Q.F. Hugo Casanova Herrera. ……………….. MIEMBRO. BI BL. IO. TE. CA. Dr. Eduardo Ibáñez Zavaleta. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE RESUMEN…………………………………………………………… pág.8 ABSTRACT…………………………………………………………. pág.9 I. PLAN DE INVESTIGACION  Realidad Problemática…………... ………………… pág.10. UI M. IC A.  Justificación ………………………………………… pag.18. Q.  Problema…………………………………………….. pág.21. IA. Y. BI. O.  Objetivos……………………………………………... pág.20. FA. RM. AC. II. MATERIAL Y METODO…………………………………….. pag.22. Pag.27. CA. DE. III. RESULTADOS ……………………………………………….. pag.29. IO. TE. IV. DISCUSION………………………………………………….... pág.43. VI. RECOMENDACIONES…………………………………….. pag.44. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS…………………….. pág. 45. VIII. ANEXOS…………………………………………………….. pág.50. BI BL. V. CONCLUSIONES…………………………………………….. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. Cada día se presta más atención al estudio de las plantas medicinales de forma que la etnobotánica, la fitoterapia y la fitoquímica están tomando un auge insospechado ya que el empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una práctica que se ha utilizado desde tiempo inmemorial, y que desde el comienzo de la medicina fueron ellas. IC A. las que proveyeron las estructuras bases para numerosos medicamentos. La. UI M. identificación de la planta en estudio se realizó mediante el método tradicional o clásico de herborización y su clasificación se llevó a cabo comparando el material fresco en el. BI. O. Q. Herbarium Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo, llegando a concluir que. Y. se trata de Crotton s.p (La Tunga). La finalidad del estudio fue extraer, separar en. AC. IA. fracciones e identificar metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p. RM. (La Tunga). Se trabajó con la marcha fitoquímica descrita por la Dra. Olga Look y. FA. modificada por el Q.F.Hugo Casanova Herrera realizando la extracción de principios. DE. activos a partir de 50g de hojas de Crotton s.p (La Tunga). Seco y molido, para luego. CA. comenzar a separar los mismos con solventes de diferente polaridad, y con cambios de. TE. PH aprovechando la solubilidad de los principios activos, llegando así a obtener. BI BL. IO. fracciones A, B, C, D, E; a las cuales se procedió a realizar la identificación del tipo cualitativo, haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación; también se realizó la identificación de saponinas. Se logró determinar la presencia de, Flavonoides, Taninos,. Quinonas,. Cardenolidos,. Esteroides,. Alcaloides,. Saponinas. y. Leucoantocianidinas, en las hojas de Crotton s.p (La Tunga).. Palabras claves: Crotton s.p (La Tunga), Marcha Fitoquímica, Metabolitos Secundarios.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. More and more were paying attention to the study of the medicine plants, so the ethnobotany, phytotherapy and phytochemistry are taking an unexpected development. We Know that the use of medicine plants with curative aims; is a practice which has been used since other times and from the beginning of the medicine. They gave us the. IC A. bases for numerous medicine productions. The identification of this botany specie was. UI M. done through the traditional method of herbarium and its classification was done by comparing the fresh material in the herbarium of the National University of Trujillo to. BI. O. Q. conclude that treats of Crotton s.p (La Tunga).The goal of this research was: to extract,. Y. separate infractions and identify the secondary matabolytes presents in the stem of. AC. IA. Crotton s.p (La Tunga). it was worked with phytochemistry described for Dr.Olga Look. RM. and modified for the studied by the Ch. Hugo Casanova Herrera he did the extraction of. FA. the active elements from 50 gr of stem of. Crotton s.p (LaTunga),dried and crushed. DE. ,then he separated the components with solvents of different polarity and with changes. CA. ofpH,using the solubility of active elements; with this process he got A,B,C,D,and E. TE. fractions,of which they were identified in a qualitative way,using the coloration an. BI BL. IO. precipitaton reagents;also performed the test for saponins.The precense of flavonoids ,tannin,quinane,cardenolidos,esteroides,alkaloids,saponines. and. leucoantocianidinas. were found in the abstract of the stem of Crotton s.p (La Tunga).. Key Words: Crotton s.p (La Tunga), Phytotherapy March, Secondary Metabolytes.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. PLAN DE INVESTIGACION.  REALIDAD PROBLEMÁTICA. Las plantas medicinales han constituido desde tiempos remotos un recurso de gran importancia, para cubrir las necesidades terapéuticas. Su uso como agentes de la salud. IC A. es ampliamente conocido en múltiples culturas del mundo y ha sido transmitido a través. UI M. de generaciones. Este saber tradicional se ha ido perfeccionando a lo largo del tiempo,. O. Q. tamizado hoy, por el rigor científico de ensayos químicos, farmacológicos,. AC. IA. Y. y que permite además la vigencia de su empleo 1.. BI. toxicológicos y clínicos; para explicar en forma racional el uso terapéutico de una planta. RM. Se considera que toda la vegetación de nuestro planeta alcanza un medio millón de. FA. especies y se ha reconocido últimamente que la región occidental contiene la mayor. DE. biodiversidad y complejidad de éstas, siendo nuestro país privilegiado en ese aspecto y,. IO. TE. CA. por ende se crea la necesidad de un mayor estudio de dichos recursos 1.. BI BL. A pesar de un gran progreso en la investigación médica durante las últimas décadas, el tratamiento de muchas enfermedades queda aún como problema. Hasta ahora no hay drogas disponibles que podrían efectivamente tratar la causa de esas enfermedades y proveer su cura. Para ello se ha internado en el reino vegetal, escudriñando sus secretos hasta encontrar en las plantas un alivio a sus padecimientos, razón por la cual las plantas medicinales constituyen un arsenal terapéutico1, 2.. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Desde 1977, La Organización Mundial de la Salud (OMS) ha promovido el estudio prudente y la incorporación de las plantas medicinales en la atención de la salud. Es así que hasta el 2008 al menos 5 000 millones de personas todavía dependían de la medicina tradicional basada en plantas, como forma primordial del cuidado de su salud. Las formas de uso de las recetas son múltiples, tantas como del ingenio humano 3.. IC A. Según la Organización Mundial de la Salud (OMS), planta medicinal se define como el. UI M. material derivado de una planta o una preparación con beneficios terapéuticos y otros. O. Q. beneficios sobre la salud del ser humano y que contiene materia prima o ingredientes. BI. procesados de una o más plantas. Hacia fines de la década de los 70, la OMS reconoce. IA. Y. el rol de las plantas medicinales en la cura de diversas enfermedades que afectan al. AC. hombre.. RM. El empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una práctica que se ha. FA. empleado desde tiempo inmemorial. Durante mucho tiempo los remedios naturales, y. DE. especialmente las plantas medicinales, fueron el principal e incluso el único recurso de. TE. CA. que disponían los médicos. Esto hizo que se profundizara en el conocimiento de las. IO. especies vegetales que poseen propiedades medicinales y ampliara su experiencia en el. BI BL. empleo de los productos que de ellas se extrae 3,4.. En la actualidad las plantas medicinales ocupan un rol muy importante y son la primera instancia de consulta y tratamiento en gran parte de nuestro país. Algunos las utilizan simultáneamente con los productos farmacéuticos, potenciando su acción o disminuyendo sus efectos colaterales, así mismo existe una tendencia de integrarlas dentro de los programas oficiales de salud a fin de aprovechar las características positivas de ambos enfoques terapéuticos 4. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las plantas contienen elementos activos que las protegen de los insectos, mohos y otros parásitos, así como de los rayos ultravioletas del sol. Muchos de estos componentes ya sea de forma individual o en diferentes combinaciones poseen efectos estimulantes, calmantes o terapéuticos en el hombre 5.. En el metabolismo normal de todos los seres vivos, el organismo produce algunas. IC A. sustancias a partir de los nutrientes obtenidos del medio; algunos de estos compuestos. UI M. químicos forman parte del proceso en todas o casi todas las especies, mientras que otros reflejan las peculiaridades de cada una de ellas. Entre los compuestos de la primera. BI. O. Q. clase, llamados metabolitos primarios, se encuentran sustancias tales como las. Y. proteínas, los ácidos nucleicos, los carbohidratos y los lípidos, producidos y utilizados. AC. IA. por todos los seres vivos. Los compuestos de uso terapéutico, por el contrario,. RM. corresponde normalmente a los metabolitos secundarios y se obtienen solo de. FA. organismos específicos 6.. DE. Los metabolitos secundarios son considerados compuestos no esenciales para el. CA. funcionamiento de la célula vegetal, por cuanto no participa en las transformaciones. TE. bioquímicas comunes o su función no está bien entendida. La variabilidad cuantitativa. BI BL. IO. entre especies y familias botánicas se mantiene, en muchos casos, dependiendo de factores climáticos, fisiológicos, genéticos y edáficos con sus diferentes interacciones. Muchos de los componentes producidos por las plantas silvestres son aprovechados por estas para protegerse de condiciones ambientales adversas 7.. Los metabolitos secundarios vegetales pueden dividirse en tres grupos químicamente diferentes: terpenos, fenoles y compuestos que contienen nitrógeno; siendo los más comunes los alcaloides, esteroides, diterpenos, sesquiterpenolactonas, flavonoides, 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. cumarinas, benzofuranos, xantanos y quinonas. Estos son de estructura relativamente compleja cuya función metabólica aun no es clara, en los cuales sus propiedades terapéuticas están siendo científicamente comprobadas, para sustentar su uso tradicional en problemas de salud 8. A principio de este siglo, el desarrollo de la química y el descubrimiento de complejos procesos de síntesis orgánica desembocaron en la puesta en marcha, por parte de la. IC A. industria farmacéutica, de una nueva producción de medicamentos. Para la fabricación. UI M. de muchos de ellos se emplearon los principios activos de determinadas plantas. O. Q. medicinales, creyendo que las acciones imputables a dichas sustancias, se verían. BI. incrementadas, al poder realizar terapias donde la cantidad de principio activo era. IA. Y. superior al que posee la planta. Nada más lejos de la realidad, ya que se comprobó que. AC. las propiedades de dichas sustancias, eran menos eficaces y existía peligro de producir. RM. intoxicaciones e intolerancias, cosa que no ocurría con la utilización de la planta entera.. FA. Durante mucho tiempo se han utilizado plantas medicinales, para combatir muchas. DE. patologías, de forma intuitiva. Actualmente se emplean como material para la. TE. CA. extracción de constituyentes inactivos, o constituyentes que son transformados por. IO. síntesis parcial en compuestos. DS Vol. 11, Núm. 1, Enero-Junio 2003 86 activos;. BI BL. también son usadas, tal cual, como extractos o preparaciones tradicionales. No obstante, aunque el margen de tolerancia es bastante amplio, no se puede descartar el que puedan aparecer efectos secundarios y posibles interacciones con otros tratamientos; todo ello motiva que deba existir una legislación adecuada ya que está en juego la salud de las personas 2. Los problemas de salud son cada vez más frecuentes en nuestra sociedad, para lo que se recurre a plantas medicinales con actividad biológica diversa como por ejemplo,. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. actividad antibacteriana, antifúngica, anticancerígena, anticoagulante, citotóxica, hipocolesterolémica, antihelmítica, insecticida, etc. En el Perú, la Leishmaniasis constituye una endemia que afecta a 13 departamentos de los 24 que lo conforman, es la segunda endemia de tipo tropical y la tercera causa de morbilidad por enfermedades transmisibles después de la Malaria y la Tuberculosis.. IC A. Se han reportado un promedio de 7 000 a 9 000 casos probados, anualmente. Para 1997. UI M. se estimó que la población en riesgo de infección era de 1 187 104 habitantes. La zona. O. Q. endémica comprende aproximadamente el 74% del área total del país (951 820 km2).. BI. La leishmaniasis, como otras enfermedades parasitarias, sigue siendo un problema de. IA. Y. salud muy importante, que se presenta en regiones tropicales del planeta. Se calcula que. AC. cada año hay 400. 000 casos nuevos en el mundo. Se trata de un grupo de enfermedades. RM. que son producidas por un protozoario flagelado del género Leishmania, familia. FA. Tripanosomatidae, clase Mastigophora que afectan según la forma clínica: piel, mucosa. DE. o vísceras, con lesiones cuyo aspecto, severidad y evolución son variadas. No hay. TE. CA. contagio persona a persona, son transmitidas por la picadura de la hembra de un. IO. pequeño mosquito piloso pertenecientes a los géneros Phlebotomus (Viejo Mundo) y. BI BL. Lutzomya (Nuevo Mundo) 1, 2, 8,25. La variedad de especies de Lutzomya es muy grande en zonas endémicas. En áreas andinas del Perú, la especie predominante es Lutzomya peruensis, esta especie se considera como vector en áreas de Uta. Se conocen tres formas clínicas: Leishmaniasis cutáneas, forma mucocutánea o Leishmaniasis americana y Leishmaniasis visceral que es la forma más grave en el que los órganos vitales del cuerpo están afectadas. La leishmaniasis cutánea es la forma más común. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El parasito causante de la Leishmaniasis es un protozoario del genero leshmania, que presenta dos estadios, uno carente del flagelo (amastigote) que se encuentra en los tejidos y otro flagelar (promastigote) que se encuentra en el vector y en los cultivos. La aparición de las lesiones cutáneas a veces se encuentra asociada con la picadura del vector; sin embargo a pesar que el periodo de incubación para desarrollar la enfermedad. IC A. clínica evidente puede variar de semanas a meses, un trauma local puede activar una. UI M. infección latente. En promedio, después de un período de incubación que varía entre dos. O. Q. semanas a dos meses o más, aparece en la piel una pequeña lesión inicial con aspecto de. BI. una pápula eritematosa de unos 3 mm, un nódulo o una simple induración que puede ser. .. AC. 22,25. IA. Y. única o múltiple. En general estas lesiones respetan palmas, plantas y cuero cabelludo. RM. La especie de leishmania infectante, la localización de la lesión y la respuesta inmune. FA. del huésped son los principales determinantes para las manifestaciones clínicas y la. DE. cronicidad de las lesiones no tratadas. Por ejemplo las lesiones causadas por la L. (L.). TE. CA. mexicana tienden a ser pequeñas y menos crónicas que aquellas causadas por L. (V.). IO. braziliensis. En la leishmaniasis producida por L. (V.) peruviana se presenta. BI BL. principalmente formas pápulofoliculares y las llamadas “nodulares dérmicas”, a diferencia de las lesiones cutáneas producidas por la L. (V.) braziliensis donde predominan las formas ulcerosas francas. La leishmaniasis causada por L. (V.) guyanensis, causa úlceras múltiples que, sin tratamiento pueden extenderse por las cadena linfáticas de forma similar a la esporotricosis; en una baja proporción de casos muestran tendencia a la forma mucocutánea. Las lesiones ulcerosas que produce la L. (V.) panamensis no tienden a la curación espontánea; y presentan afectación linfática comúnmente en forma de rosario. La leishmaniasis producida por la L.(L.) amazonensis 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. raras veces produce enfermedad en el hombre, puesto que es transmitida por un vector muy poco antropofílico; la lesión única o múltiple, tiene una fuerte tendencia a producir leishmaniasis cutánea difusa resistente a la curación [1]. La L. (V.) lainsoni produce principalmente lesiones cutáneas 22. A nivel epidemiológico, es importante destacar que la Leishmaniasis es una de las enfermedades con mayor carga en términos de discapacidad, estimada para el año 2003. IC A. a nivel mundial en 2,4 millones de años de vida ajustados por discapacidad (AVAD).. UI M. Leishmaniasis amenaza a unos 350 millones de hombres, mujeres y niños en 88 países. O. Q. de todo el mundo. Tanto como 12 millones de personas se cree que son infectadas en la. BI. actualidad, con cerca de 1-2 millones de casos estimados nuevos que se producen cada. IA. Y. año.. AC. La Leishmaniasis es una enfermedad parasitaria que afecta a 88 países del área tropical. RM. de todo el mundo; es actualmente una enfermedad trasmisible desatendida por la. FA. Organización Mundial de la Salud. En Perú se encuentran indicios prehispánicos de la. DE. afectación reflejados en artesanías de la época. En el 2003 se reportaron 6 318 casos de. TE. CA. Leishmaniasis cutánea en Perú y sólo en la región La Libertad 408 casos. Se realizó una. IO. revisión atendiendo a 67 fuentes, con el objetivo de describir el cuadro clínico y las. BI BL. características macroscópicas de las formas de expresión de la Leishmaniasis Cutánea en la región La Libertad, Perú. El propósito es aproximar a la situación actual, que contribuya a la capacitación y ejecución de posteriores labores de prevención y promoción de salud de las Brigadas Estudiantiles de la Salud-Trujillo. Finalmente, la Leishmaniasis es una enfermedad endémica en la región La Libertad y es conocida como La Uta 2,9. La frecuencia es mayor en los adolescentes y adultos jóvenes. La forma cutánea andina afecta predominantemente a los menores de 15 años, en especial a los niños menores de 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 5 años, y la forma mucocutánea, al grupo mayor de 15 años. La Leishmaniasis es considerada como una enfermedad ocupacional en las personas que se trasladan por motivo de trabajo a las áreas endémicas. En las áreas de transmisión de la forma cutánea andina hay una rápida incorporación de menores de 15 años a actividades de desbroce y preparación del terreno de cultivo, y a la transmisión intradomiciliaria y peridomiciliaria. La transmisión de la forma. IC A. mucocutánea se relaciona con la migración intermitente y la colonización de áreas poco. O. Q. de oro, petróleo, madera y construcción de carreteras 24.. UI M. exploradas de la Selva Alta y Baja, asociadas a actividades de extracción y explotación. BI. En el año 2003 fueron reportados oficialmente 6 318 casos de Leishmaniasis cutánea en. IA. Y. el Perú, la mayoría procedía de Ancash, seguida por Cusco, Madre de Dios y La. AC. Libertad, y 327 casos de Leishmaniasis mucocutánea, en su mayoría del Cusco, seguida. RM. de Huánuco y Loreto. La tasa de incidencia acumulada nacional era de 23,62 por 100. FA. 000 habitantes, para la Leishmaniasis cutánea, y de 1,22 por 100 000 habitantes, para la. DE. mucocutánea. Sin embargo, ya para el año 2007 se reportó una tasa de morbilidad. TE. CA. nacional de 35.5 por 100 000 habitantes, reportándose en la región La Libertad 914. IO. casos con una tasa de 59.4 por 100 000 habitantes.. BI BL. En La Libertad, los datos del 2003 precisan que 35 distritos reportaron 408 casos con una morbilidad acumulada de 26.5 x 100 000 hab., de los cuales uno de ellos se encuentra en alto riesgo; el distrito de La Cuesta (provincia de Otuzco) que registra la mayor morbilidad (19.46 x 1 000 hab.) El grupo de edad más afectado es el de varones con el 58% del total de casos, esto puede deberse a las labores agrícolas y minerales que ejercen los hombres y los obliga a adentrarse en los nichos 9.. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . JUSTIFICACIÓN DEL PROBLEMA:. Teniendo en cuenta la labor del Químico Farmacéutico en la prevención y tratamiento de las enfermedades, nos vemos identificados con la necesidad de hacer un estudio con el propósito de identificar los metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p (La Tunga) y de esta forma poder realizar el presente proyecto de investigación con. IC A. el fin de mejorar los conocimientos y prácticas sobre leshmaniasis ,teniendo en cuenta. UI M. que en el Perú, la Leishmaniasis constituye una endemia que afecta a 13departamentos de los 24 que lo conforman, es la segunda endemia de tipo tropical y la tercera causa de. BI. O. Q. morbilidad por enfermedades transmisibles ,y que la Leshmaniasis cutánea es la que. AC. IA. Y. más número de casos tiene reportados.. RM. La leishmaniasis cutánea y mucocutánea es una enfermedad de alta prevalencia en. FA. muchas áreas tropicales y subtropicales del mundo y es la segunda endemia de tipo. DE. tropical en el Perú (74% del territorio nacional), razones que la convierten en una. CA. entidad de gran interés nacional. Es una enfermedad en la cual quedan aún muchas. TE. interrogantes por resolver. No existe vacuna y para su tratamiento se usan aún terapias. BI BL. IO. de principios de siglo que consisten en saturar al cuerpo con inyecciones de antimonio. Además, por las características geográficas de la enfermedad (selvas y valles interandinos) está más difundida en gente de bajos recursos económicos, en la que además de mermar su salud y economía, también causa indirectamente problemas psicológicos (baja autoestima) por las deformaciones que genera. La medicina tradicional o alternativa usa desde hace mucho tiempo diversos tipos de plantas para el tratamiento de una gran variedad de enfermedades. Para el tratamiento de Leishmaniasis. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. por estos métodos, se usan por ejemplo, de acuerdo a la zona, plantas tan diversas como maíz, eucalipto, sábila, llantén, malva, matico, taya y muchos otros 9. Además, el uso de medicamentos de origen químico para el tratamiento de enfermedades como la Leishmaniasis ha demostrado un efecto cada vez más común, la “saturación farmacológica”, sobre todo en niños y personas de avanzada edad, que llegan a causar, en la mayor parte de los casos, efectos secundarios graves. Gran. IC A. cantidad de científicos han encontrado en el uso terapéutico de flores, raíces, hojas y. UI M. frutos de las plantas un valioso aliado, ya que ayudan, de forma contundente, a. O. Q. combatir todo tipo de trastornos sin que, por ello, aporten ningún tipo de. Y. BI. contraindicación o efecto nocivo para la salud, además de ser un tratamiento económico. AC. IA. y de fácil acceso, sobre todo para la población de bajos recursos 10.. RM. El género Crotton, perteneciente a la familia de las Euphorbiaceae, comprende más de. FA. 1500 especies distribuidas en regiones tropicales y subtropicales de todo el mundo,. DE. muchas de estas especies son utilizadas por la tradición popular para el tratamiento de. CA. numerosas enfermedades. Gran número de poblaciones indígenas, especialmente de. TE. Sudamérica utilizan infusiones de las hojas o corteza de diferentes especies de Croton. BI BL. IO. para el tratamiento de heridas, dolencias estomacales e inflamación.. El género Crotton ha sido motivo de estudios fitoquímicos debido principalmente a las posibilidades terapéuticas que han podido ser identificadas en estas plantas. Una de las plantas más estudiadas, por su uso para el tratamiento del cáncer (Pieters 1992) e inflamaciones (Cai 1993), es la Croton lecheri 11.. Se han realizado estudios en la especie de Crotton alnifolius L, en el cual concluyen que los metabolitos secundarios identificados en el extracto del tallo de Crotton 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. alnifoliusL.son:taninos,flavonoides,esteroides,quinonas,cardenolidos,alcaloides. y. saponinas, teniendo como precedente que las especies del genero Crotton poseen numerosos beneficios terapéuticos, como se señala en un estudio realizado en Croton celtidifolius donde se puede evidenciar el efecto antioxidante mediante el incremento de la actividad de Superoxido dismutasa,y el efecto antiinflamatorio de la fracción etil acetato del extracto de dicha especie en pleuritis inducida por carragenanos en ratas. de. los. metabolitos. secundarios. de. diferentes. plantas. del. genero. UI M. varios. IC A. machos(NARDI,G y col);otro estudio, señala el efecto antibacteriano y cicatrizante de. O. Q. Euphorbia(AMIR,R.),y el efecto vasodilatador de dos nuevos diterpenos aislados de. BI. Crotton schiedeamus en anillos de rata previamente contraídos con cloruro de potasio. AC. IA. Y. o fenilefrina(GUERRERO,M y col)25.. RM. Actualmente, los pobladores de la sierra y tribus selváticas, utilizan plantas con. FA. propiedades curativas contra la leishmaniasis, siendo de gran interés su estudio, ya que. DE. el reino vegetal es considerado como fuente de productos naturales con valor medicinal. TE. CA. o de precursores útiles para el desarrollo de nuevos productos farmacéuticos.. IO. El tamizaje fitoquímico preliminar de plantas se hace en muchos países que tienen una. BI BL. amplia biodiversidad y una cultura de técnicas curativas por productos naturales, contribuyendo a su conocimiento científico para un posterior aislamiento del compuesto responsable de la curación o alivio de alguna patología; que podrían dar lugar en el futuro a una explotación racional de los mismos y por último se contribuye al desarrollo socioeconómico del país 24. De acuerdo a lo expuesto nos planteamos el siguiente problema de investigación: ¿Cuáles son los metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p (La Tunga)? 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  OBJETIVOS:.  Extraer los metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p (LaTunga).. UI M. IC A.  Separar los metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p. O. Q. (La Tunga).. Y. BI.  Identificar los metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. (La Tunga), mediante reacciones de coloración y precipitación.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y METODO. 1. DISEÑO DE INVESTIGACIÓN:. 1.1. MATERIAL DE ESTUDIO:  La muestra en estudio está constituida por 1 Kg. de las hojas de , Crotton s.p (La Tunga).. UI M. IC A.  Las plantas se seleccionaron en base a los criterios etnofarmacológios.. BI. O. Q. 1.2. METODO:. IA. Y. 1.2.1. Recolección y Clasificación Botánica de la Especie:. AC. La especie se recolecto en la Zona Reserva Chancay Baños, en la provincia. RM. de Santa Cruz, Departamento de Cajamarca, en el mes de junio del 2012.. FA. Las plantas se seleccionaron en base a los criterios etnofarmacológios.. DE. La identificación de esta especie botánica se realizó mediante el método. TE. CA. tradicional o clásico de herborización, seleccionando el material en el. IO. campo, verificando que este en buenas condiciones, llevando a cabo la. BI BL. clasificación comparando el material fresco con la bibliografía del Botánico José Mostacero León. Esta planta se encuentra en el Hebarium Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo con el código de Crotton s.p Peláez. y col. (2419.HUT) la cual aún no se ha identificado la especie, pero la podemos ubicar con el código antes mencionado.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2.2.. Preparación de la muestra: Se seleccionaron las plantas en óptimas condiciones de conservación, limpiándolas adecuadamente; dejándolas libre de polvo y de otros contaminantes.. IC A. 1.2.3. Extracción e identificación:. UI M. Para efectuar la identificación fitoquímica se separó primero los metabolitos. O. Q. secundarios que estén presentes en las hojas de Crotton s.p (La Tunga), de. BI. acuerdo al Método de Separación de Metabolitos Secundarios de Plantas. AC. IA. Y. Medicinales descritas por Q.F. Hugo Casanova Herrera.. FA. RM. FUNDAMENTO:. DE. De acuerdo con este método para la marcha fitoquímica, cada muestra fue. CA. sometida a la acción extractiva de Solventes como: Hexano, Etanol y Agua,. TE. modificando el pH del medio con el fin de obtener los metabolitos secundarios. BI BL. IO. de acuerdo a su solubilidad, para luego llevar a concentrar dichos extractos.. 1.3. PROCEDIMIENTO:. 1.3.1. PROCESAMIENTO DE LA MUESTRA:. A. PRIMERA FASE: Se tomó una muestra de 1 Kg de las hojas de Crotton s.p (La Tunga), seco y debidamente molido, se agregó 200 mL de etanol 96 % se dejó macerar por 48 horas a temperatura ambiente, se llevó a reflujo por 3 horas. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Luego filtramos en caliente, dejamos enfriar y separamos 10 mL del total que vendrá a ser la parte soluble en agua la cual constituye la Fracción “A” donde realizamos la identificación de Fenoles, Flavonoides y Taninos ,y la no soluble se lleva a concentrar en baño maría constituyendo el Extracto Seco8.. IC A. B. SEGUNDA FASE:. UI M. Al extracto seco obtenido se le agrego 30 mL de HCL al 1%, y se calentó a 50 ºC por 15 minutos, y luego se dejó enfriar y se filtró, obteniéndose la. BI. O. Q. Fracción “B” (insoluble). Nuevamente se agregó al extracto seco 15 mL de. Y. HCl al 1% realizando el procedimiento anterior. La fase insoluble constituye. AC. IA. la Fracción “B” que se unió a lo obtenido anteriormente, la cual contiene. RM. metabolitos como Esteroides y Quinonas. Al unir las dos soluciones viene a. DE. FA. ser la Solución Ácida 8.. C. TERCERA FASE:. TE. CA. Se Concentró la solución ácida hasta 45 mL en baño maría. Se alcalinizo la. IO. solución ácida con Hidróxido de Amonio hasta un pH de 7-8 obteniendo la. BI BL. Solución Alcalina. A la solución alcalina se extrajo con 25 mL de Hexano y 15 mL de etanol por dos veces, donde se formó dos fases: Fase Orgánica y Fase Acuosa 8.. D. CUARTA FASE: A la fase Orgánica, se lavó con 40 mL de agua donde se formó dos fases: La Fase Orgánica a la que se le agrego sulfato de sodio para deshidratar, se separó la fase acuosa de la orgánica, y esta última vino a ser la Fracción 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. “C”, donde identificamos Cardenólidos, Esteroides y alcaloides; y la fase acuosa que la uniremos a la fase anterior 8.. E. QUINTA FASE: A la fase acuosa, se agregó 25 mL de hexano y 15 mL de etanol, por dos veces, se formó 2 fases: la fase orgánica y la fase acuosa. A la fase orgánica se agregó sulfato de sodio para deshidratar, se formó 2 fases, la fase orgánica. UI M. IC A. constituye la Fracción “D” en donde identificamos Flavonoides, Esteroles, Alcaloides, Cardenólidos y Leucoantocianinas; y la fase acuosa que la. O. Q. unimos a la fase acuosa anterior. Obteniendo así la Fracción “E” donde. AC. IA. Y. BI. encontramos Flavonoides y Leucoantocianidinas 8.. RM. F. SEXTA FASE:. FA. A un gramo de muestra le agregamos 50 mL de agua lo llevamos a baño. DE. maría durante 15 minutos. Luego filtramos en caliente para obtener la. IO. TE. CA. Fracción “F” donde identificamos Saponinas 8.. BI BL. 1.3.2. IDENTIFICACIÓN DE METABLITOS SECUNDARIOS:. Con cada una de las fracciones obtenidas procedimos a la Identificación de Metabolitos Secundarios, Utilizando Reactivos de Coloración y Precipitación (VER ANEXO Nº 01).. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. Cuadro N° 1: Metabolitos Secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p (La Tunga). FRACCION. METABOLITO. REACCION. COLOR/. SECUNDARIO. PRECIPITADO Gelatina. Precipitado. Fenoles. Tricloruro. Verde Oscuro. +. IC A. Taninos. +. Rojo(flavonoides). +. UI M. A. RESULTADO. O. Q. Férrico Shinoda. Esteroides. Liebermann-. AC. IA. Y. BI. Flavonoides. +. Rojo. +. Baljet. Rojo Claro. +. Legal. Rojo Oscuro. +. Liebermann-. Verde amarillento. +. Hager. Cristales amarillos. +. Mayer. Precipitado blanco. RM. Verde o Naranja. Burchard. FA. B. Borntrager. TE. CA. Cardenolidos. DE. Quinonas. C. BI BL. IO. Esteroides. Alcaloides. Burchard. + amarillento. Cardenolidos. Dragendorff. Precipitado naranja. +. Baljet. Rojo ladrillo. +. Legal. Rojo. +. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esteroides. Liebermann-. D. Verde amarillento. +. Hager. Cristales amarillos. +. Mayer. Precipitado blanco. Burchard Alcaloides. +. Precipitado naranja. +. Leucoantocianidinas. Rosenhein. Rojo intenso-rosado. +. Flavonoides. Shinoda. O. +. Leucoantocianidinas. Rosenhein. Q. UI M. Dragendorff. Y. BI. Rojo(flavonoides). Rojo intenso-rosado. +. DE. FA. RM. AC. IA. E. IC A. amarillento. +. BI BL. IO. TE. DE SAPONINAS. >15 min. CA. IDENTIFICACION Espuma. LEYENDA: (-): Ausente.. (+): Presente.. 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV DISCUSION. La riqueza de plantas y el conocimiento popular de su uso son recursos que no se han aprovechado a plenitud, por las condiciones sociales, culturales, políticas y económicas prevalecientes. Teniendo en cuenta que sobre las prácticas tradicionales de curación y agricultura se ha visto limitado porque la transmisión ha sido en forma oral, no existe. IC A. una metodología que facilite la recuperación de las prácticas de curación y recursos. UI M. terapéuticos empleados.. O. Q. Las plantas son consideradas un laboratorio biosintético, que elabora metabolitos. BI. primarios: carbohidratos, proteínas participando en la actividad celular de todo ser vivo. IA. Y. además sintetiza, otro tipo de compuestos como esteroides, poliosidos, flavonoides,. AC. cumarinas, taninos, etc.. RM. Considerados los metabolitos secundarios siendo los principios activos de la planta;. FA. dichos compuestos difieren por su carácter químico, estructura potencia y. DE. concentración, lo que producen ciertos efectos beneficiosos en el organismo 21.. TE. CA. Las plantas tienen una casi ilimitada habilidad de sintetizar sustancias aromáticas, gran. IO. cantidad de ellas son fenoles o sus derivados de oxígenos sustituidos. Muchos son. BI BL. metabolitos secundarios de los cuales por lo menos 12000 han sido aislados, un número estimado menor en un 10% del total. En numerosos casos estas sustancias sirven como mecanismos de defensa de las plantas contra la predación por microorganismos, insectos y herbívoros. Algunos, tales como los terpenoides, dan a las plantas sus olores; otros (quinonas y taninos) son responsables del pigmento de las plantas. Muchos componentes son asimismo responsables del sabor de las plantas (el terpenoide capsaicina en caso del ají), y algunas de las hierbas y especies usados por los humanos para sazonar los alimentos producen compuestos medicinales útiles 8,24. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La identificación de las diferentes drogas es realizada principalmente por métodos fisicoquímicos a través de una serie de ensayos de tipo cualitativo sobre la droga entera, pulverizada o incluso extractos de la droga, estos métodos se han desarrollado para una determinación preliminar de los diferentes. constituyentes químicos en las plantas. basados en la extracción de estos con solventes apropiados 24. En la determinación de los metabolitos secundarios de. Crotton s.p (La Tunga), se. IC A. utilizó la marcha fitoquímica descrita por la Dra. Olga Look y modificada por el. UI M. Q.F.Hugo E. Casanova Herrera, obtenidas las fracciones se realizó las pruebas de. O. Q. coloración y precipitación 8.. BI. La marcha fitoquímica empleada consiste en poner en contacto la droga con solventes. IA. Y. de diferente polaridad, bajo determinadas condiciones, logrando solubilizar los. AC. metabolitos secundarios que estén presente. Marcha Fitoquímica que se fundamenta en. RM. los efectos de la polaridad de los solventes, el pH y la temperatura del medio sobre la. FA. solubilidad de los metabolitos secundarios de las plantas medicinales; es decir que las. DE. fuerzas intermoleculares, además de afectar los puntos de ebullición y de fusión de las. TE. CA. sustancias, determinan las propiedades de solubilidad de los compuestos orgánicos. BI BL. IO. permitiendo la separación de los metabolitos secundarios 8,24.. La polaridad es una propiedad que permite describir la forma como se comportan las moléculas (ej. metabolitos secundarios) frente a otras moléculas (ej. solventes); la polaridad de una molécula está en función dela proporción de los enlaces polares y apolares que presentan los átomos de su estructura. Un enlace en el que los electrones de enlace están compartidos por igual entre dos átomos enlazados se llama enlace no polar. En un enlace no polar la nube electrónica de carga está distribuida homogénea y simétricamente alrededor de ambos átomos al tener la misma electronegatividad, es 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. decir los electrones se comparten de igual manera entre dos átomos. En el caso del enlace polar, la nube electrónica se distribuye asimétricamente, siendo más voluminosa alrededor del átomo más electronegativo, es decir un átomo ejerce mayor atracción sobre los electrones que el otro. La capacidad de un átomo de atraer electrones por sí mismo en un enlace químico se conoce como electronegatividad. La proporción de enlaces polares y no polares de una misma molécula determina la polaridad total de la. IC A. molécula que para nuestro interés serían los metabolitos secundarios presentes en la. UI M. especie en estudio, hecho que justifica su presencia o ausencia en cada una de las. BI. O. Q. fracciones de acuerdo a los solventes utilizados 8,20.. IA. Y. La solubilidad es la máxima cantidad de soluto que se disolverá en una cantidad dada de. sustancia para disolverse en otra. La sustancia que se disuelve se. RM. determinada. AC. disolvente a una temperatura específica. Es una medida de la capacidad de una. FA. denomina soluto y la sustancia donde se disuelve el soluto se llama solvente. No todas. DE. las sustancias se disuelven en un mismo solvente .En la solubilidad, el carácter polar o. TE. CA. apolar de la sustancia influye mucho, ya que, debido a este carácter, la sustancia será. IO. más o menos soluble en el solvente; esto se fundamenta en los grupos funcionales. BI BL. presentes en las moléculas, ya que son estos los que confieren la polaridad, gracias a las. Interacciones que permite que se den. En general, cuanto más sean las interacciones entre el soluto y las moléculas de disolvente, mayor será la solubilidad 18,19. Las características de solubilidad de compuestos no iónicos, están determinadas principalmente por su polaridad, las sustancias no polares se disuelven en disolventes no polares, o ligeramente polares; los compuestos muy polares lo hacen en disolventes de alta polaridad. “Una sustancia disuelve a otra similar”, es una regla empírica muy útil 25.. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La extracción con disolventes consiste en poner en contacto la droga con un disolvente capaz de solubilizar los principios activos .Los principios activos deben pasar de la droga al disolvente de manera que se obtenga un extracto líquido. Posteriormente dicho extracto se puede concentrar eliminando mayor a menor cantidad de disolvente. La extracción con disolventes es uno de los métodos que se emplea con más frecuencia para la obtención de principios activos14, 24.. IC A. En la separación de metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p (La. UI M. Tunga), se utilizaron los siguientes solventes: Hexano, Etanol de 96° y Agua destilada.. O. Q. Respecto a los solventes utilizados, la polaridad se encuentra muy relacionada con la. BI. solubilidad, es por ello que un compuesto que forma enlaces de hidrogeno con el agua. IA. Y. tiende a ser más soluble en ella que uno que no los forma. Por tanto, se puede decir que. AC. el agua es un excelente disolvente de compuestos polares porque los solvata. Así. RM. también, el etanol forma puentes de hidrogeno y puede disolver compuestos polares,. FA. pero en menor proporción; el etanol es mejor solvente que el hexano para sustancias. DE. polares, de otro lado el hexano no puede disolver compuestos polares. Dependiendo de. IO. de compuestos.. TE. CA. la finalidad deseada, el solvente utilizado solubiliza, selectivamente o no, ciertas clases. BI BL. Entre los solventes generales, los más utilizados son los alcoholes alifáticos de hasta 3 carbonos o mezclas de estos con agua, hexano y agua. El etanol, como solvente de polaridad intermedia, solubiliza fitoconstituyentes semipolares, tiene la capacidad de formar enlaces de hidrogeno y de ceder pares de electrones debido al grupo hidroxilo que se encuentra en su molécula; pero además también poseen un extremo lipófilo que ayuda a la solvatación de sustratos orgánicos especialmente a los de pequeño y mediano volumen, su labor se ve facilitada por la secuencia del procedimiento: cambios de pH, temperatura y de solvente, así el hexano disuelve las membranas vestibulares, 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. rompiendo las interacciones que mantienen atraídos a los principios activos ,hacia los sistemas hidrófilicos y finalmente, el agua solubiliza los principios activos más hidrosolubles, debido a su elevada polaridad 8,24,25.. La identificación de metabolitos secundarios presentes en las hojas de Crotton s.p (La Tunga) se dio mediante reacciones de coloración y precipitación.. IC A. Las reacciones de coloración se basan en el movimiento de electrones generados por. UI M. sustancias acidas, básicas o sales, cuando un electrón gana energía es excitado y sube de. O. Q. nivel, mientras que las reacciones de precipitación se basan en un intercambio del anión. BI. voluminoso del reactivo en acción, que reemplaza a los aniones pequeños de las sales de. IA. Y. los metabolitos secundarios, que tengan esta característica.. AC. Las reacciones de precipitación son un tipo común de reacción en disolución acuosa. RM. que se caracteriza por la formación de un producto insoluble o precipitado .Estas. FA. reacciones se fundamentan en la formación de complejos, entre los principios activos y. DE. los reactivos, dando como resultado la formación de moléculas de. elevado peso. TE. CA. molecular, por ende tiende a precipitar. Los enlaces que se forman en el complejo son. BI BL. IO. más fuertes de las que se forman en las reacciones de coloración 8, 18,24.. Las reacciones de coloración y precipitación realizadas indicaron la presencia de, Flavonoides, Taninos, Quinonas, Cardenolidos, Esteroides, Alcaloides, Saponinas y Leucoantocianidinas, en las hojas de Crotton s.p (La Tunga). Los flavonoides son metabolitos secundarios de una gran distribución en el reino Vegetal y pueden estar presentes en todas las partes de las plantas. En éstas se encuentran fundamentalmente en forma de glicósidos, esto les infiere una alta. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. solubilidad en agua y disolventes polares, lo cual se incrementa por la alta polaridad de sus estructuras15. Los flavonoides son estructuras del tipo C6-C3-C6, con dos anillos aromáticos (bencénicos) unidos entre sí por una cadena de tres carbonos ciclada a través de un oxígeno .Se considera que su estructura deriva de la. benzo- pirona con un fenilo en. posición dos 14.. IC A. Entre las numerosas sustancias aisladas a partir de plantas, los flavonoides representan. UI M. uno de los más importantes grupos de compuestos con actividad farmacológica. Poseen. O. Q. una alta reactividad química que se manifiesta por sus efectos sobre diferentes sistemas. BI. biológicos. A nivel vascular, los flavonoides muestran interesantes actividades sobre la. IA. Y. pared de los capilares, particularmente sobre el tejido peri vascular o periangio,. AC. disminuyendo su permeabilidad y fragilidad y aumentando su resistencia 16.. RM. Los flavonoides, en general, poseen capacidad para neutralizar radicales libres,. FA. responsables, cuando están dotados de un alto grado de reactividad de la aparición de. DE. determinadas patologías o del agravamiento de las mismas.. TE. CA. Los flavonoides, pigmentos de las plantas que se encuentran generalmente en mezclas. IO. como agliconas y/o glicósidos, tienen numerosos efectos sobre la fisiología de los. BI BL. organismos vivos. En el hombre presenta efecto anti-inflamatorio, entre los más importantes 16.. En la reacción de Shinoda(magnesio en ácido clorhídrico) el magnesio metálico es oxidado por el HCl concentrado, dando como productos al H2, que es eliminado en forma de gas y el MgCl2, que es el que forma complejos con los flavonoides dando coloraciones características. El magnesio divalente, actúa sobre el grupo carbonilo de 2 flavonas, produciendo una coloración roja, este aumento de intensidad es debido a que el magnesio divalente intensifica la coloración por estar doblemente coordinado .Esta 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. reacción permite distinguir algunos tipos de flavonoides: coloración naranja con las flavonas, rojo cereza con los flavonoles, violeta con las flavanonas 8,13.17.. Los flavonoides, son identificados en las fracciones A, D Y E. La solubilidad de los flavonoides depende de la forma en que se encuentren. y el número y clase de. sustituyentes presentes, así mismo los flavonoides con hidroxilos fenólicos son solubles. IC A. en soluciones alcalinas, pero algunos altamente hidroxilados se descomponen por. UI M. acción de las bases fuertes, un hecho que permite reconocerlos y diferenciarlos de otros.. O. Q. Los flavonoides presentan un gran número de actividades farmacológicas entre ellas la. BI. de hipoglicemiante a través de un incremento en la salida de insulina, además en esta. IA. Y. especie también se le atribuye el efecto hipoglicemiante a los taninos por tener acción. AC. astringente y por lo tanto al ser empleada las hojas en un preparado específicamente. RM. infuso el cual se administra por vía oral una de las formas que controle y evite la. DE. FA. hiperglicemia al disminuir la absorción intestinal 8,21.. TE. CA. Los Taninos Conforman un grupo de sustancias fenólicas poliméricas capaces de. IO. precipitar gelatina en solución, una propiedad conocida como astringente y antiséptica.. BI BL. Están divididas en dos grupos: hidrolizables y condensados. Los taninos hidrolizables están basados en el ácido gálico, usualmente como ésteres múltiples con la D-glucosa, mientras que los taninos condensados más importantes (a veces llamadas proantocianidinas) son derivados de monómeros flavonoides. Se ha considerado que los taninos, en muchas bebidas como el té verde y el vino, tienen actividades reforzadoras de la salud (estimulación de la actividad fagocitaria, actividad antitumoral mediada por el hospedero y un amplio rango de actividad antiinfecciosa). En las plantas, los taninos tienen una acción inhibitoria del crecimiento de insectos y perturban la digestión de 36. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. rumiantes. Se cree que la actividad antimicrobiana de estos compuestos se debe a su interacción sobre las adhesinas, proteínas de la pared celular, y a su capacidad de unirse a polisacáridos (Cowan, 1999). Las plantas de las especies de Vaccinium contienen taninos condensados llamados proantocianidinas. Estas sustancias son compuestos fenólicos estables que pueden prevenir la expresión de las fimbrias P de E. coli dentro de sus actividades antibacterianas, y además tienen actividades antivirales,. UI M. IC A. antiadherentes o antioxidantes (Kontiokari y col., 2001)23,25.. O. Q. Se encontró una reacción positiva al enfrentar la fracción A frente a la reacción de la. BI. gelatina por formación de puentes de hidrogeno entre el nitrógeno del enlace peptídico. IA. Y. de sus aminoácidos y el hidrogeno de los oxhidrilos fenólicos de los taninos.. AC. Las proteínas presentes en la gelatina son precipitadas por los taninos por formación de. RM. complejos, que pueden ser reversibles o irreversibles, la gelatina, conformada. FA. principalmente por colágeno es también susceptible de ser precipitada por estos. La. DE. formación reversible de complejos se explica por la formación de enlaces de hidrogeno. TE. CA. y por interacciones hidrófobas por ello es reversible; el mecanismo de su formación. IO. parece ser un fenómeno de superficie, no especifico; los taninos forman una capa. BI BL. menos hidrofilica que la misma proteína en la superficie de esta, lo que ocasiona la precipitación; establecen además (en disolución proteica concentrada) enlaces entre las moléculas proteicas; la afinidad de los taninos por las proteínas es tanto más marcada cuanto más flexible sea su conformación y mayor su riqueza en prolina (proteínas salivares colágeno)8,24.. 37. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las Quinonas comprenden un grupo de productos muy distribuidos en la naturaleza y de estructuras relacionadas, en la mayoría de los casos, con pigmentos naturales. Son más comunes en vegetales, aunque algunas estructuras se han obtenido de hongos, líquenes, insectos, o de animales marinos. Por lo general, en dependencia del grado de conjugación de la estructura presentan colores tales como el amarillo, rojo o carmelita, aunque también algunos intermedios. Cuando las estructuras se presentan en formas de. UI M. IC A. sales o con sustituciones hidroxílicas, los colores pueden ser púrpura, azul o verde 15.. O. Q. Dentro de este grupo tenemos a las antraquinonas y naftoquinonas. Las antraquinonas se. BI. encuentran fundamentalmente en vegetales. Sus coloraciones varían del amarillo al rojo,. IA. Y. siendo de las quinonas las más distribuidas en la naturaleza. Se presentan en forma de. AC. glicósidos, la unión de los azúcares por hidroxilos ocurren en las posiciones 1 ó 2 del. RM. núcleo base estructural. Las mejores fuentes de obtención de las naftoquinonas. FA. corresponden a los vegetales. Usualmente la pigmentación más común en ellas es la. DE. amarilla. El uso más generalizado es como pigmentos coloreados (lawsona). En la. IO. TE. CA. naturaleza no aparecen formando glicósidos 15.. BI BL. Las quinonas son compuestos aromáticos con dos grupos cetona, frecuentemente en para (1.4) y en muy pocos casos en orto (1.2).Son dicetonas insaturadas que por reducción, se convierten en polifenoles los que fácilmente las regeneran por oxidación. Las quinonas tienden a dar colores rojos o purpuras con álcalis concentrados y con ácido sulfúrico, lo que puede usarse para identificarlas 7,14.. En la identificación de quinonas, mediante la reacción de Borntrager, se observó una coloración roja característico de antraquinonas y naftoquinonas la cual indico una 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. reacción positiva. Esto es posible cuando el NaOH reacciona con uno de los grupos hidroxilo, tanto de las antraquinonas como de las naftoquinonas ya que la coloración depende de la cantidad de electrones deslocalizados en movimiento 8.. Los Cardenolidos son más o menos solubles en agua dependiendo de la cantidad de grupos hidroxilos que presente la parte glucosidica, siendo solubles en solventes. IC A. apolares. En la identificación de los cardenolidos se recurre a las reacciones. UI M. relativamente específicas, debido a la existencia de una lactona insaturada de 5. O. Q. miembros unida a la posición 17, para reconocerlos se usó las reacciones de baljet y. BI. Legal, estas reacciones fueron positivas en las fracciones C y D.. IA. Y. Para identificar a los cardenolidos se enfrentó la fracción C con el reactivo de Baljet, en. AC. la que se observó una coloración rojo oscuro. La coloración se debe a que el ácido. RM. pícrico reacciona en medio básico con la formación de una molécula de agua, llegando a. FA. formar así el picrato de sodio que es el que reacciona con el grupo carbonilo de la. DE. lactona insaturada de 5 miembros, lo que permite la ruptura del anillo lactónico con la. IO. TE. CA. posterior formación de un complejo de color rojo ladrillo 8.. BI BL. Los Esteroides considerados como derivados de los Triterpenoides, poseen un esqueleto tetracílico característico, el cual fusiona tres anillos de seis miembros y uno de cinco miembros. Este núcleo de 17 átomos de carbono se denomina gonano (ciclopentano perhidro fenantreno). Este núcleo esteroide es alterado por transferencia de un átomo de oxígeno del carbono 12 al carbono 11 dentro de la molécula policíclica, para utilizarlo como intermediario de la producción de cortisona 15.. 39. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la fracción B se identificó la presencia de esteroides ,que constituyo la fase insoluble en etanol, dado que estos metabolitos son apolares, se utilizó la reacción de Liebermann- Buchard en donde se pudo observar la aparición de color verde, con resultados positivos en las fracciones C y D. La reacción de Liebermann-Buchard es típica de los esteroides que contienen dos dobles enlaces conjugados, en un mismo anillo, en dos anillos adyacentes o un doble en. IC A. un anillo adyacente con un grupo hidroxilo.. UI M. El solvente apolar solubiliza a la muestra favoreciendo la separación de algunas. O. Q. moléculas de agua presentes, y el ácido sulfúrico, favorece la deficiencia electrónica del. BI. anhídrido acético el cual es estabilizado por los electrones de los dobles enlaces (dieno). IA. Y. conjugados, dando de esta manera la coloración respectiva. La reacción debe realizarse. AC. en medio absolutamente anhidro, porque de existir moléculas de agua ,estas reaccionan. RM. con el anhídrido acético ,anulando de esta manera la reacción con el núcleo esteroidal o. FA. tripertenoide.Sera indicación de resultado positivo si se obtiene una coloración verde o. DE. verde azulado 13,15.. TE. CA. Los alcaloides son sustancias orgánicas nitrogenadas con carácter básico y. IO. mayoritariamente de origen vegetal. Tienen una estructura generalmente completa y. BI BL. ejercen acciones fisiológicas diversas incluso a dosis muy bajas. Son tóxicos y capaces de precipitar con ciertos reactivos característicos.. .En la fracción C y D se identificaron alcaloides, obtenidos gracias a la modificación del pH con ácido clorhídrico e hidróxido de amonio. Los alcaloides en su mayoría son insolubles o muy poco solubles en agua, pero se disuelven bien en alcohol, éter, bencina y cloroformo. Se combina con los ácidos formando sales bastantes más solubles en el agua, fáciles de cristalizar e insolubles en los solventes orgánicos. En esta diferencia de 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.