Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el crecimiento de Escherichia coli y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio, 2014

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AC IÓ. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. N. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. EM. AS. DE. IN FO. Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el crecimiento de Escherichia coli y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio, 2014 TESIS. ST. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. DE. SI. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. DI. RE CC IO. N. BIÓLOGO Angel Gutierrez Autor : Br. Jorge Sebastian Asesor : Dr. Luis Alberto Llenque Díaz TRUJILLO - PERU 2015. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. AC IÓ. N. TRUJILLO. M UN. IC. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. IC. A. Y. CO. RECTOR. RM ÁT. Dr. Rubén Vera Véliz. EM. AS. DE. IN FO. VICERECTOR ACADÉMICO. VICERECTOR DE INVESTIGACIÓN. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Dr.Weyder Portocarrero Cárdenas. Dr. Esteban Ilich Zerpa. SECRETARIO GENERAL. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS. M UN. IC. AC IÓ. N. BIOLÓGICAS. CO. Dr. José Mostacero León. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. DECANO. DE. Dr. William Zelada Estraver. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. SECRETARIO. Dra. Bertha Soriano Bernilla. DI. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO. Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en. AC IÓ. N. concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. Y. CO. M UN. IC. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. IC. A. _________________________________. RM ÁT. Dra. Icela Rodriguez Haro. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. EM. _________________________________. SECRETARIO. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz. _________________________________ Ms. C. Aníbal Quintana Díaz VOCAL. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. A mi asesor, Dr. Luis Alberto Llenque Díaz, por brindarme su tiempo, apoyo y. AC IÓ. N. dedicación, así como las sugerencias constructivas durante el desarrollo de la presente. IC. investigación, además por brindarme su amistad y conocimientos académicos durante mi. CO. M UN. formación profesional.. Y. A mis compañeros y amigos Omar, Arturo y Laura por brindarme su apoyo en parte. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. del desarrollo de la presente tesis.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIAS A Dios Por estar conmigo en cada paso que doy, cuidándome y dándome fuerzas para. AC IÓ. N. seguir adelante y no desalentarme en el intento, por haberme dado salud para lograr. M UN. IC. mis objetivos y permitir llegar a este momento importante de mi vida profesional.. A mi hijo David. CO. Por darme la alegría y placer de ser padre, guiarme y cuidarme desde el. A. Y. cielo, solo tengo tu recuerdo pero eres el motivo de mí existir y constante lucha del. RM ÁT. IC. día a día en mi vida. Te amo hijo mío.. A mi madre Teodora. IN FO. Por ser el motivo de mi existencia, por sus consejos, comprensión, amor, valores, y apoyo incondicional en todo momento, por inculcar en mí el sabio don de. A mi padre Armando. ST. EM. AS. DE. la responsabilidad ¡Gracias por estar siempre conmigo! A pesar de la distancia.. SI. A quien admiro porque es un ejemplo de esfuerzo y sacrificio, a no darse por. DE. vencido ante cualquier dificultad, a pesar de las diferencias siempre te tengo presente,. DI. RE CC IO. N. gracias por tus consejos.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. Señores Miembros del Jurado:. IC. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. M UN. Títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la. CO. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulado:. IC. A. Y. “Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el crecimiento Escherichia coli. RM ÁT. y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio, 2014” con el cual pretendo. DE. IN FO. obtener el Título Profesional de Biólogo Microbiólogo.. DE. SI. ST. EM. AS. Trujillo, Junio del 2015. DI. RE CC IO. N. Br. Jorge Sebastián Angel Gutierrez. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR. AC IÓ. N. El que suscribe, docente asesor de la tesis titulada:. Y. CO. y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio, 2014”. M UN. IC. “Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el crecimiento Escherichia coli. IC. A. Certifica que la tesis ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por. RM ÁT. la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. DE. IN FO. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. AS. Por lo tanto, autorizo a Jorge Sebastian Angel Gutierrez continuar con el trámite. ST. EM. del reglamento correspondiente.. RE CC IO. N. DE. SI. Trujillo, Junio del 2015. _________________________________. DI. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz ASESOR. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los docentes que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que el presente. AC IÓ. N. Informe de Tesis titulado: “Efecto del extracto de Vaccinium corymbosum sobre el. IC. crecimiento Escherichia coli y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio,. M UN. 2014”, ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO. Y. CO. por UNANIMIDAD.. IC. A. _________________________________. RM ÁT. Dra. Icela Rodriguez Haro. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. EM. _________________________________. SECRETARIO. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. Dr. Luis Alberto Llenque Díaz. _________________________________ Ms. C. Aníbal Quintana Díaz VOCAL. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONTENIDO. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo………………………….……….ii. AC IÓ. N. Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas……………………….…………. iii Miembros del jurado………………………………………………………..…………iv. M UN. IC. Agradecimiento………………..………………………….….………………………..v. CO. Dedicatoria………………………………………………………...……….………....vi Presentación…………………………………………………….………….………....vii. A. Y. Certificación del Asesor…………………………………...…….………….………..viii. RM ÁT. IC. Aprobación………………………………………………...……………….…………ix Contenido…………………………………………………….………………………..x. IN FO. Resumen…………………………………………………………………………...... xi INTRODUCCIÓN…………………………………………………………………….1. DE. Objetivos………..………………………………………………………………….....10. AS. MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………………………….11. ST. EM. 1. Material biológico………………………………………………………………..11. SI. 2. Procedimiento……………………………………………………………………11. DE. 2.1 Recolección y tratamiento de los frutos de V. corymbosum………………...11. RE CC IO. N. 2.2 Obtención del extracto de V. corymbosum …………………………………11 2.3 Preparación de las concentraciones de V. corymbosum………………….….12. DI. 2.4 Determinación del efecto del extracto de V. corymbosum …………………12 2.4.1 Reactivación del cultivo bacteriano……………………………………...12 2.4.2 Preparación de inóculo bacteriano……………………………………….12 2.4.3 Siembra en placas………………………………………………………..12. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4.4 Preparación de excavaciones y colocación de los discos………………..13 2.4.5 Lectura de resultados…………………………………………………….13. N. 3. Análisis de resultados……………………………………………………………..14. AC IÓ. RESULTADOS………………………………………………………………………...15. M UN. IC. DISCUSIÓN……………………………………………………………………………19 ENUNCIADO RESUMEN…………………………………………………………….24. CO. RECOMENDACIONES……………………………………………………………….25. A. Y. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………………26. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. ANEXOS……………………………………………………………………………….31. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto del. AC IÓ. extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” sobre el crecimiento de. IC. Escherichia coli y Staphylococcus aureus mediante un diseño experimental de. M UN. estímulo creciente. Para ello se trituraron los frutos, se filtró y se obtuvo el. CO. extracto del Arándano al 100% y se prepararon las concentraciones al 75% y 50%. Y. por dilución con agua destilada estéril. La prueba de sensibilidad se realizó. IC. A. mediante el método de Kirby Bauer, utilizando 50µL de extracto de cada. RM ÁT. concentración vertidos en las excavaciones de 6mm diámetro en placas con agar Muller – Hinton previamente sembrados por superficie con E. coli y S. aureus por. IN FO. separado con concentraciones iguales al tubo N° 0.5 de Mac Farland, se usó como. DE. Control, discos de sensibilidad de Gentamicina. La lectura se hizo a las 18 horas. AS. de incubación a 37°C en estufa. Se midieron los diámetros de inhibición (mm) de. EM. cada una de las concentraciones para E. coli y S. aureus, obteniéndose un. ST. promedio de los halos de inhibición. Para el análisis de datos se empleó la prueba. DE. SI. de ANOVA para evaluar si existe diferencia significativa entre las medias para. N. cada bacteria y una prueba de Tukey y Duncan para evaluar si existe diferencia. RE CC IO. significativa entre las concentraciones que inhiben mejor el crecimiento de E. coli. y S. aureus. Los resultados demostraron que hay mayor inhibición a mayor. DI. concentración del extracto de Vaccinium corymbosum, siendo la que produce mayor inhibición la concentración al 100% y mejor efecto inhibitorio sobre el crecimiento de S. aureus que E. coli.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN. El interés de muchos investigadores por combatir las enfermedades trasmitidas. AC IÓ. N. ya sea a través de los alimentos o de manera endógena es muy grande ya que la mayoría de las bacterias que la producen han adquirido cierta resistencia a los. M UN. IC. antibióticos y esto se reconoce ampliamente como una amenaza para el ejercicio médico en todo el mundo. Esta resistencia que apareció con mayor incidencia en los. CO. ambientes hospitalarios, por ejemplo las reportadas a Klebsiella, Pseudomona. A. Y. aeruginosa y Acinetobacter, en especial en las Unidades de Cuidados Intensivos, y. RM ÁT. IC. a Staphylococcus aureus meticilino resistentes y vancomicino resistentes, se ha ido difundiendo a infecciones bacterianas adquiridas en la comunidad, tales como. IN FO. neumonía, gonorrea e infecciones del tracto urinario, cada vez más difíciles de. DE. tratar con los antibióticos usuales. 1. AS. Las plantas, por su biodiversidad y riqueza en metabolitos secundarios,. EM. proporcionan una interesante fuente de posibles sustancias activas contra muchas. ST. bacterias; por esto, en los últimos años se ha ido desarrollando un creciente interés. DE. SI. en varios centros de investigación de todo el mundo en búsqueda de efectos. N. antibacterianos de extractos de múltiples especies vegetales. 1 En este sentido, se. RE CC IO. han realizado numerosas investigaciones empleando plantas medicinales, en unos casos extracto de canela, en otros el ajo bajo la forma de extracto, aceite o polvo.. DI. En Pardo (2010), los investigadores Jones y Tamariz emplearon sangre de grado obtenida del Croton lechleri, logrando un efecto inhibidor sobre Helicobacter pylori. Lengsfeld, utilizó el extracto seco del zumo del Ribes nigrum, con lo que se consiguió bloquear los receptores de la mucosa gástrica impidiendo con ello la. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. adhesión del H. pylori a la mucosa. Estudios realizados con extracto de cocona puro, utilizado a diversas concentraciones desde 0,1 a 0,5 mL, mostró una gran actividad inhibiendo el crecimiento de H. pylori en un 100%, lo que se considera un. AC IÓ. N. hallazgo valioso, que amerita la realización de una posterior investigación in vivo; a. IC. fin de determinar la efectividad del extracto de cocona en el tratamiento de las. M UN. infecciones humanas por H. pylori2.. CO. Así mismo las propiedades medicinales del ajo, se conocen desde la antigüedad. Y. en donde los Chinos y Egipcios ya lo utilizaban alimentando con ajos a los esclavos. IC. A. que construían las pirámides porque creían que el ajo les aportaba energía, también. RM ÁT. se empleaba en el proceso de momificación y como moneda, el naturalista romano. IN FO. Plinio “el viejo” citó numerosos usos terapéuticos del ajo y la cebolla que eran invocados como deidades por los Egipcios en la toma de juramentos y en el año. DE. 1550 A.C. se dan recetas curativas en el papiro egipcio de Ebbers, el cual incluye. AS. 800 fórmulas magistrales de las cuales 22 hacen referencia al ajo, se recomienda. EM. contra las infecciones, los tumores, enfermedades cardiacas, dolores de cabeza,. SI. ST. mordiscos y parásitos intestinales. 3. DE. De la misma manera las frutas en general tienen un valor nutricional y un efecto. RE CC IO. N. potenciador de la salud4. El arándano o “blueberry” es el fruto de un arbusto perenne, generalmente de hoja caduca, nativo del Hemisferio Norte, que pertenece. DI. a la familia de las Ericáceas, y al género Vaccinium. El arándano es una fruta baja en calorías y sodio, fuente de fibras y pectinas destacándose su alta concentración en vitamina C. Este fruto se consume tanto fresco como procesado. El arándano se destaca no solo como fruto comestible, sino también en medicina (antioxidante,. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. vásculo-protector, antiséptico urinario), industria de colorantes, pastelería, mermeladas, conservas, yogures, golosinas, etc5.. AC IÓ. N. El arándano americano, fruto de Vaccinium macrocarpon Aiton, ha demostrado un efecto beneficioso sobre el mantenimiento de la salud de las vías urinarias,. IC. debido a su composición en proantocianidinas, proporciona un beneficio adicional. M UN. gracias a su actividad inhibitoria de la adherencia bacteriana, por lo que puede tener. CO. un efecto beneficioso en determinadas afecciones bacterianas5. La evidencia clínica. Y. demuestra que su consumo puede disminuir la recurrencia de infecciones del tracto. IC. A. urinario (ITUs), y este efecto ha sido estudiado principalmente en mujeres, aunque. RM ÁT. también se ha obtenido una importante reducción de la frecuencia de estas. IN FO. infecciones en hombres. Los principales componentes del arándano americano son las proantocianidinas, mayoritariamente del tipo A, las antocianinas, los flavonoles,. DE. ácidos fenólicos, ácidos quínico, málico y cítrico, iridoides, ácido ursólico, frutosa. EM. AS. y otros azúcares6.. ST. En los últimos años, se ha demostrado también una acción antibacteriana más. SI. directa del arándano relacionado con distintos grupos de constituyentes. Se ha. DE. observado in vitro que las tres fracciones constituida por azúcares y ácidos. RE CC IO. N. orgánicos, compuestos fenólicos o por las antocianinas, poseen acción antibacteriana frente a Escherichia coli. La acción de los compuestos fenólicos y. DI. antocianinas se produce a través de una interacción específica que induce la desintegración localizada de la membrana exterior de la bacteria, y que podría estar relacionada con la quelación de iones metálicos y por la inducción de cambios en la. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. expresión de diferentes genes; sin embargo, la actividad de la fracción de azúcares y ácidos orgánicos parece estar relacionada con un efecto de shock osmótico 6.. AC IÓ. N. Los protocolos para evaluar los principios activos de las plantas sobre los microbios se ha logrado estandarizar, tal es así que Ardila et al (2009) realizaron. IC. ensayos para determinar la actividad antibacteriana de extractos de Allium sativum,. M UN. Coriandrum sativum, Eugenia Caryophyllata, Origanum vulgare, Rosmarinus. CO. officinalis y Thymus vulgaris frente a Clostridium perfringens (cepa ATCC: 13124). Y. por el método de Kirby Bauer en agar SPS, utilizando la vancomicina como control. IC. A. en el cual se observa cómo los extractos hexano-cloroformo y hexano-acetona de. RM ÁT. Origanum vulgarey Thymus vulgaris, no produjeron un efecto inhibitorio sobre. IN FO. Clostridium perfringens; en cambio Eugenia caryophyllatay y Allium sativum, muestran efectos inhibitorios7. De la misma manera García Rico y Herrera Arias. DE. (2007) determinaron la inhibición de crecimiento de Escherichia coli, Salmonella. AS. spp, Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa y Bacillus cereus por. EM. extractos acuosos Allium sativum, Allium fistulosum y Allium cepa en el cual los. SI. ST. resultados son más eficientes para Staphylococcus aureus el cual presenta halos de. DE. mayor tamaño8.. RE CC IO. N. Por otro lado Arilmi et al determinaron la actividad antimicrobiana de Allium sativum L y Bixa orellana L en el cual los resultados del análisis antimicrobiano de. DI. ambos extractos, indican formación de halos de inhibición de crecimiento microbiano de Escherichia coli, Enterobacter aeruginosa, Klebsiella sp, Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus y Candida albicans cuando los que evaluaron frente al extracto hidroalcohólico de Bixa orellana por el método de placas Petri. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. excavadas y de Aspergillus niger sobre placas CCD de silicagel cuando se realizaron el ensayo empleando el extracto acuoso de Allium sativum y cuyos. AC IÓ. N. resultados validan sus actividades antimicrobianas 9.. Las infecciones de las vías urinarias son un problema de salud mundial, con una. IC. proporción de 9 a 1 en la mujer respecto del hombre. En 90% de los casos la. M UN. bacteria que la origina es Escherichia coli. Durante la vida reproductiva, esta. CO. infección es motivo de gran cantidad de incapacidades laborales, de ahí la. Y. necesidad de insistir en su profilaxis. El jugo de arándano rojo es una opción para. IC. A. prevenir la infección de vías urinarias, cualidad demostrada en diferentes. RM ÁT. publicaciones recientes, en las que se destaca que su mecanismo de acción radica en. IN FO. el efecto que ejercen las proantocianidinas, especialmente las de tipo A, en el urotelio, que evitan que E. coli se adhiera a éste; es así como ejerce su acción. DE. antibacteriana, que se consigue con la ingestión de, por lo menos, 300 mL de jugo. EM. AS. al día10.. ST. Las enterobacteriáceas son un vasto grupo heterogéneo de bacilos gramnegativos. SI. cuyo hábitat natural es el intestino de humanos y animales. Esta familia incluye. DE. muchos géneros por ejemplo, Escherichia, Shiguella, Salmonella, Enterobacter,. RE CC IO. N. Klebsiella, Serratia, Proteus y Otros. Algunos microorganismos entéricos, como E. coli, forman parte de la flora normal e incidentalmente causan enfermedad 11. En las. DI. dos últimas décadas se ha apreciado un marcado incremento en la incidencia registrada de intoxicaciones alimentarias microbianas en Europa y Norteamérica. Concretamente, se ha visto un aumento en la frecuencia de salmonelosis, enteritis por Campylobacter, listeriosis y colitis hemorrágica, debida esta última a E. coli. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. enterohemorrágica serotipo O157:H7. En la actualidad se reconocen 5 categorías enteropatógenas de E. coli: enterotoxigénicas, enteroinvasivas, enteropatógenas. AC IÓ. N. clásicas, enterohemorrágicas y enteroagregativas12.. Los estafilococos son células esféricas gramposisitvas, generalmente dispuestas. IC. en racimos irregulares parecidos a racimos de uvas, crecen con rapides sobre. M UN. muchos tipos de medios. El género Staphylococus contiene al menos 30 especies,. CO. tres de importancia clínica son Staphylococus aureus, Staphylococus epidermidis y. Y. Staphylococus saprophyticus. El primero es coagulasa-positivo, que lo diferencia. IC. A. de las otras especies11. Generalmente, S. aureus es agente etiologico de diversas. RM ÁT. patologías, incluyendo infecciones de piel y tejidos blandos, bacteremia. IN FO. endocarditis, infección del SNC y del tracto genitourinario. Por su ubicuidad y en función de los procedimientos médicos y uso de antimicrobianos, se confiere. DE. especial énfasis al aislamiento y estudio epidemiológico de S. aureus, considerando. EM. AS. su rol primordial en las infecciones nosocomiales13 .. ST. En la comunidad, las infecciones por S. aureus son a menudo agudas, piogénicas. SI. y superficiales, aunque también puede producir, con menor frecuencia, infecciones. DE. profundas como osteomielitis, neumonía y endocarditis aguda. A nivel nosocomial. RE CC IO. N. S. aureus es un importante agente de infecciones de herida quirúrgica, de prótesis y otras. También S. aureus es causa de una serie de infecciones producidas por. DI. toxinas como el síndrome del shock tóxico, la intoxicación alimentaria y el síndrome de piel escaldada. Se caracteriza por poseer resistencia para diferentes antimicrobianos, mediante la producción de penicilinasa. Otras cepas comunitarias son resistentes a meticilina u oxacilina, y en cuanto a los aislamientos de origen. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. nosocomial, un elevado porcentaje de los mismos tienen varios determinantes de resistencia y fundamentalmente resistencia a meticilina, asociada a resistencia a. AC IÓ. N. aminoglucósidos, macrólidos y quinolonas14.. Los antimicrobianos se definen, como medicamentos que destruyen los. IC. microorganismos o impiden su multiplicación o desarrollo y puede ser producido. antivirales,. antimicobacterianos,. La primera familia de medicamentos. Y. antiparasitarios y antirretrovirales.. antimicóticos,. CO. dividen en antibacterianos,. M UN. en forma natural por microorganismos o sintéticamente en el laboratorio y se. IC. A. antibacterianos que aparecieron en la terapéutica son las penicilinas. El mecanismo. RM ÁT. de acción de las penicilinas consiste en una inhibición de la síntesis de la pared. IN FO. celular a través de la inhibición de la enzima transpeptidasa15.. DE. Las penicilinas se dividen en diferentes grupos. El primer grupo incluye a las. AS. penicilinas G y V. Las penicilinas G más utilizadas son la penicilina G procainica y. EM. la penicilina G benzatinica. Estas tienen un amplio espectro de acción que incluye. grupo. se. SI. segundo. ST. streptococcus, enterococos, listeria, meningococo, espiroquetas, entre otros. El conoce. como. penicilinas. penicilinasa-resistente,. o. DE. isoxazolilpenicilinas, e incluye a la meticilina, oxacilina, cloxacilina, dicloxacilina. RE CC IO. N. y nafcilina. Su espectro de acción es, principalmente en cocos Gram (+) productoresde β-lactamasas, como el staphylococcus aureus y el staphylococcus. DI. epidermidis. El tercer grupo se les llama aminopenicilinas, y sus ejemplos clásicos son la ampicilina y la amoxicilina. Tienen un espectro similar a las penicilinas G y V, pero son inactivados por la lactamasa β. Además, este grupo amino incluye. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. acción contra enterobacteriaceae, E. coli, proteus mirabilis, salmonella, shigella, haemophilus influenzae y helicobacter pylori15.. AC IÓ. N. El antibiograma define la actividad in vitro de un antibiótico frente a un microorganismo determinado y refleja su capacidad para inhibir el crecimiento de. IC. una bacteria o población bacteriana16. El antibiograma disco-placa basado en el. M UN. trabajo de Bauer, Kirby y colaboradores es uno de los métodos que el National. CO. Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) recomienda para la. Y. determinación de la sensibilidad bacteriana a los antimicrobianos. El antibiograma. IC. A. disco-placa consiste en depositar, en la superficie de agar de una placa de petri. RM ÁT. previamente inoculada con el microorganismo, discos de papel secante. IN FO. impregnados con los diferentes antibióticos. Tan pronto el disco impregnado de antibiótico se pone en contacto con la superficie húmeda del agar, el filtro absorbe. DE. agua y el antibiótico difunde al agar. El antibiótico difunde radialmente a través del. AS. espesor del agar a partir del disco formándose un gradiente de concentración.. DE. SI. ST. de inhibición17.. EM. Transcurridas 18-24 horas de incubación los discos aparecen rodeados por una zona. RE CC IO. N. JUSTIFICACIÓN. Teniendo en cuenta que en la actualidad existen enfermedades recurrentes causadas. DI. por muchas bacterias dentro de las cuales se encuentran Staphylococcus aureus y Escherichia coli capaces de invadir y causar infecciones, además se sabe que están siendo resistentes a los antibióticos tradicionales por el uso irracional de los mismos. Así mismo, existe escasa bibliografía de consulta con relación a los efectos. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de Vaccinium corymbosum “Arándano” sobre el crecimiento bacteriano; entonces, el presente trabajo pretendió investigar el efecto de diferentes concentraciones del extracto de V. corymbosum sobre el crecimiento de E. coli y S. aureus en. AC IÓ. N. condiciones de laboratorio y valorar su uso potencial en la medicina como en la. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. industria alimentaria, farmacéutica y microbiológica.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBJETIVOS. AC IÓ. N. 1. Determinar el efecto del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las concentraciones de 100%, 75% y 50% sobre el crecimiento de Escherichia. M UN. IC. coli y Staphylococcus aureus en condiciones de laboratorio.. CO. 2. Comparar el efecto del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las. Y. concentraciones 100%, 75% y 50% sobre el crecimiento de E. coli, S. aureus, y. RM ÁT. IC. A. el antibiótico Control Gentamicina.. IN FO. 3. Determinar si existe diferencia significativa o no entre los promedios de los halos de inhibición obtenidos con cada una de las concentraciones ensayadas. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. para cada bacteria.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y MÉTODOS. 1. Material biológico. AC IÓ. N. Frutos maduros de Vaccinium corymbosum “Arándano” procedentes de la provincia. IC. de Virú, adquiridos de los supermercados de la ciudad de Trujillo Región La Libertad.. M UN. Cultivos de Escherichia coli, proporcionados por el laboratorio de Microbiología y. Y. CO. Tecnología de Alimentos.. IN FO. 2. Procedimiento. RM ÁT. Microbiología y Tecnología de Alimentos.. IC. A. Cultivos de Staphylococcus aureus, proporcionados por el laboratorio de. DE. 2.1. Recolección y tratamiento de los frutos de V. corymbosum. AS. Los frutos maduros fueron recolectados en recipientes de plásticos (Anexo 1, Fig.. EM. 4a) y transportados al laboratorio. Luego fueron lavados con agua corriente y. ST. desinfectados con solución de hipoclorito de sodio al 0,1% durante 3 min.. DE. SI. Posteriormente fueron lavados progresivamente con agua destilada estéril hasta. RE CC IO. N. eliminar el olor característico del hipoclorito de sodio18. 2.2. Obtención del extracto de V. corymbosum. DI. Los frutos fueron pelados y triturados con la ayuda de un mortero (Anexo 1, Fig.. 4b); después se filtró con papel de filtro Whatman Nº 10, y el filtrado se guardó. en frascos ámbar en refrigeración hasta su evaluación, lo que constituyó el extracto a una concentración del 100 %.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3. Preparación de las concentraciones de V. corymbosum A partir del extracto obtenido anteriormente (100%), se hizo diluciones seriadas con agua destilada estéril para obtener las concentraciones acuosas de 75% y 50%. AC IÓ. N. (Anexo 1, Fig. 4e), los mismos que fueron guardados en frascos ámbar, en. M UN. IC. refrigeración hasta su evaluación.. 2.4. Determinación del efecto del extracto de V. corymbosum sobre E. coli y S.. CO. aureus. A. Y. 2.4.6 Reactivación del cultivos bacterianos. RM ÁT. IC. A partir de las colonias conservadas en refrigeración de cada bacteria, se. IN FO. hizo siembras en superficie en agar nutritivo y se incubaron a 37ºC por 18 h.. 2.4.7 Preparación de inóculo bacteriano. DE. Se recogieron varias colonias a partir de la placa de cultivo incubada por 18. AS. h, con un asa bacteriológica y se preparó una suspensión bacteriana (Anexo. EM. 2, Fig. 5b); equivalentes al tubo N° 0.5 de la escala de Mac Farland en. SI. ST. solución salina fisiológica estéril, y se agitó manualmente por 30 segundos,. DE. lo que constituyó el inóculo19.. RE CC IO. N. 2.4.8 Siembra en placas Antes que transcurran 15 minutos de haber ajustado el inóculo, se introdujo. DI. un hisopo estéril dentro de la suspensión, retirándola y haciendo presión sobre la pared del tubo por encima del nivel del líquido con la finalidad de eliminar el exceso de inóculo. Seguidamente, se sembró en la superficie de las placas con Agar Mueller-Hinton; esto se consiguió deslizando el hisopo. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. por la superficie del agar tres veces, rotando la placa unos 60º cada vez y pasándola por último por la periferia del agar para conseguir una siembra uniforme (Anexo 2, Fig. 5c). Luego se dejó secar de 3 a 5 minutos en estufa. IC. M UN. 2.4.9 Preparación de excavaciones y colocación de discos. AC IÓ. N. a 37ºC19.. Se hicieron tres excavaciones de 6 mm de diámetro en el agar Mueller-. CO. Hinton de las placas, con la ayuda de un sacabocado. Luego se agregó 50µL. A. Y. de cada concentración de extracto acuoso de Vaccinium corymbosum (100,. RM ÁT. IC. 75 y 50 %) con la ayuda de una micropipeta (Anexo 2, Fig. 5d), en cada excavación, respectivamente. Así mismo, se colocó el disco de sensibilidad. IN FO. de gentamicina (Control) con la ayuda de una pinza estéril, sobre la superficie del agar, asegurándose que toda la superficie del disco tengan. AS. DE. contacto con el medio, luego las placas se incubaron a 37°C por 18 a 24 h.. EM. Todo este procedimiento se realizó para cada uno de los cultivos de. SI. ST. Escherichia coli y Staphylococcus aureus por tres veces consecutivas.. DE. 2.4.10 Lectura de resultados. RE CC IO. N. Se midió el diámetro, en milímetros, de las zonas de completa inhibición (Anexo 3 y 4) del crecimiento para cada bacteria, con una regla. DI. milimetrada, tomando 4 medidas para cada halo de inhibición de cada concentración, y se obtuvo el diámetro promedio en cada ensayo.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3. Análisis de resultados Los datos obtenidos fueron sometidos al análisis estadístico de tipo ANOVA para hallar la diferencia significativa entre las medias y la prueba de Tukey y Duncan. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. de significancia de 0.05% y con intervalos de confianza de 0 a 95% 20.. AC IÓ. N. (Anexo 3 y 4) para comparar las diferentes concentraciones con el control con un nivel. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. En la Fig.01, se presentan los diámetros promedios de halos de inhibición del. AC IÓ. N. crecimiento de Escherichia coli frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las 18 horas, utilizando el método. M UN. IC. de excavación y difusión en placa (Kirby Bauer), observándose que la mayor inhibición lo presenta la concentración al 100% presentando un halo de inhibición de. CO. 11.90mm. También se observó que existe una diferencia significativa entre cada. A. Y. concentración y que a mayor concentración de V. corymbosum mayor fue la. RM ÁT. IC. inhibición.. En la Fig.02, se presentan los diámetros promedios de halos de inhibición del. IN FO. crecimiento de Staphylococcus aureus frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del. DE. extracto acuoso de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las 18 horas, utilizando el. AS. método de excavación y difusión en placa (Kirby Bauer), observándose que la mayor. EM. inhibición lo presenta la concentración al 100% presentando un halo de inhibición de. ST. 14.29mm. También se observó que existe una diferencia significativa entre cada. DE. SI. concentración y que a mayor concentración de V. corymbosum mayor será la. RE CC IO. N. inhibición.. En la Fig.03, se presentan los diámetros promedios de halos de inhibición del. crecimiento de Escherichia coli y Staphylococcus aureus frente a concentraciones. DI. 100%, 75% y 50% del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” a las 18 horas, utilizando el método de excavación y difusión en placa (Kirby Bauer), observándose que la mayor inhibición en ambas bacterias en estudio, lo presenta la concentración al 100% presentando un halo de inhibición de 11.90mm y 14.29mm, respectivamente. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. 14.87. 14.00. IC. 11.90. 12.00 10.00. M UN. 10.70. CO. 9.11. Y. 8.00. IC. A. 6.00. 4.00. RM ÁT. Diámetro promedio de halos de inhibición(mm). 16.00. N. Escherichia coli. 2.00. IN FO. 0.00 100%. 75%. 50%. Gentamicina. EM. AS. DE. Concentración del extracto de Vacccinium corymbosum. ST. Fig. 01. Diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de. SI. Escherichia coli frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del. DE. extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” y del antibiótico. DI. RE CC IO. N. Control (Gentamicina).. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Staphylococcus aureus. IC M UN. 14.29 14. 13.35 12.34. CO. 12 10.22. A. Y. 10. RM ÁT. IC. 8 6. 4. IN FO. Diámetro promedio de halos de inhibición (mm). 16. 2. DE. 0 100%. 75%. 50%. Gentamicina. SI. ST. EM. AS. Concentración del extracto de Vaccinium corymbosum. DE. Fig. 02. Diámetros promedios de los halos de inhibición del crecimiento de. extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” y del antibiótico Control (Gentamicina).. DI. RE CC IO. N. Staphylococcus aureus frente a concentraciones 100%, 75% y 50% del. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 14.29. 10.70. M UN. 12.34. 10.22. 10.00. CO. 11.90. 12.00. IC. 14.00. 9.11. Escherichia coli. A. Y. 8.00. Staphylococcus aureus. RM ÁT. IC. 6.00. 4.00 2.00. IN FO. Diámetros promedio de halos de inhibición (mm). 16.00. 0.00. 75%. 50%. DE. 100%. SI. ST. EM. AS. Concentración del extracto de Vaccinium corymbosum. DE. Fig. 03. Comparación de los diámetros promedios de los halos de inhibición del. RE CC IO. N. crecimiento de Escherichia coli y Staphylococcus aureus frente a. concentraciones 100%, 75% y 50% del extracto de Vaccinium corymbosum. DI. “Arándano”. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. De los resultados obtenidos se evidencia que el extracto de Vaccinium. AC IÓ. N. corymbosum (EVC) tuvo un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Escherichia coli (Fig. 01) y Staphylococcus aureus (fig.02); dicho efecto, se debería a la. IC. presencia de algunos componentes antibacterianos. Una investigación realizada por. M UN. Risco E. et al. (2010), afirma que la acción inhibitoria del extracto acuoso de. CO. Vaccinium corymbosum sobre diferentes bacterias se debe a las proantocianidinas,. Y. mayoritariamente del tipo A, las antocianinas, flavonoles, ácidos fenólicos, ácidos. RM ÁT. IC. A. quínico, málico y cítrico, iridoides, ácido ursólico, frutosa y otros azúcares6.. En la Fig. 01 se presenta el promedio de los halos de inhibición de E. coli. IN FO. frente a las concentraciones del 100%, 75% y 50%, observándose que existe mayor. DE. efecto inhibitorio a una concentración de 100% y disminuye el halo de inhibición a. AS. medida que disminuye la concentración del EVC. En el Anexo 9, se presentan los. EM. tres ensayos realizados a las concentraciones al 100%, 75% y 50% del EVC,. ST. observándose que el mayor halo de inhibición de E. coli fue de 12.13mm a la. SI. concentración de 100% y el menor halo de inhibición fue 9.03mm a la. DE. concentración de 50% a las 18horas de incubación. Estos valores son similares a los. RE CC IO. N. estudios realizados por Sahr C. (2004), quien utilizando el EVC y sus diluciones en. DI. discos contra E. coli, obtuvo halos de inhibición de 11.06 ± 0.48 mm (100%) 27.. El análisis estadístico de ANOVA de los promedios de los halos de inhibición. del EVC contra E. coli determinó que existe diferencia significativa entre las concentraciones evaluadas, y que la concentración al 100% es más eficiente en relación a las concentraciones de 75% y 50% (Anexo 05). Posteriormente se realizó. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. una prueba post ANOVA para determinar la concentración de EVC que inhibe mejor el crecimiento de E. coli para lo cual se realizó la prueba de Duncan, obteniendo cuatro subgrupos(grupo control, 100%, 75% y 50%) observándose que. AC IÓ. N. hay diferencia significativa entre ambos subgrupos (Anexo 06), además podemos. IC. afirmar que el EVC concentrado al 100% inhibe mejor el crecimiento de E. coli que. M UN. las concentraciones al 75% y 50%, así mismo es menos eficaz que el antibiótico. CO. Gentamicina (Control).. Y. En la Fig. 02 se presenta el promedio de los halos de inhibición de. IC. A. Staphylococcus aureus frente a las concentraciones del 100%, 75% y 50%,. RM ÁT. observándose que existe mayor efecto inhibitorio a una concentración de 100% y. IN FO. disminuye el halo de inhibición a medida que disminuye la concentración del EVC. En el Anexo 10, se presentan los tres ensayos realizados a las concentraciones al. DE. 100%, 75% y 50% del EVC, observándose que el mayor halo de inhibición de S.. AS. aureus es 14.53mm a la concentración de 100% y el menor halo de inhibición es de. EM. 10.17mm a la concentración de 50% a las 18horas de incubación. Resultados muy. SI. ST. similares a Sahr C. (2004)27 que obtuvo halos de inhibición de 14.58 ± 1.03 mm. DE. cuando trabajó con el EVC 100%; mientras que, el estudio realizado por Rodríguez. RE CC IO. N. (2011) utilizando el EVC al 100% obtuvo halos de inhibición de 12.0 ± 0.6 mm26.. El análisis estadístico de ANOVA de los promedios de los halos de inhibición. DI. del EVC contra S. aureus determinó que existe diferencia significativa entre las. concentraciones evaluadas, y que la concentración al 100% es más eficiente en relación a las concentraciones de 75% y 50% (Anexo 07). Posteriormente se realizó una prueba post ANOVA para determinar la concentración de EVC que inhibe. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mejor el crecimiento de S. aureus para lo cual se realizó la prueba de Duncan, obteniendo cuatro subgrupos(grupo Control, 100%, 75% y 50%) observándose que hay diferencia significativa entre ambos subgrupos (Anexo 08), además podemos. AC IÓ. N. afirmar que el EVC concentrado al 100% inhibe mejor el crecimiento de S. aureus. IC. que las concentraciones al 75% y 50%, así mismo es más eficaz que el antibiótico. M UN. Gentamicina (Control).. CO. El efecto inhibidor del EVC sobre el crecimiento bacteriano se debería a la. Y. acción relacionada con los diferentes principios activos presentes. Así en el estudio. IC. A. realizado por Risco E. et al. (2010), observó in vitro que las tres fracciones. RM ÁT. constituida por, azúcares y ácidos orgánicos, compuestos fenólicos, o por las. IN FO. antocianinas, poseen acción antibacteriana frente a E. coli. La acción de los compuestos fenólicos y antocianinas se produce a través de una interacción. DE. específica que induce la desintegración localizada de la membrana exterior de la. AS. bacteria, y que podría estar relacionada con la quelación de iones metálicos y por la. EM. inducción de cambios en la expresión de diferentes genes, por ejemplo en los genes. SI. ST. 33 y 35; sin embargo, la actividad de la fracción de azúcares y ácidos orgánicos. DE. parece estar relacionada con un efecto de shock osmótico 6.. RE CC IO. N. Cabe resaltar que la actividad antibacteriana del EVC puede no estar solo. determinada por la anatomía de las bacterias sino por otros factores. Puupponen-. DI. Pimiä et al. (2005) demostraron que el pH puede ser un factor influyente en la inhibición del crecimiento bacteriano dado que uno de los parámetros que determinan el crecimiento de bacterias en los alimentos es precisamente su pH; y su efecto varía según la especie de bacteria y los compuestos fenólicos presentes y,. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. dado que las frutas presentan un pH bajo (2.4-3.5), podría haber influenciado en la actividad antibacteriana, inhibiendo así el crecimiento bacteriano 28.. AC IÓ. N. En la Fig. 03 se presenta la comparación de los halos de inhibición del crecimiento de ambas bacterias promedio para cada concentración ensayada,. IC. observándose que todas las concentraciones (100%, 75% y 50% del EVC) tiene un. M UN. mayor efecto inhibitorio sobre S. aureus y menor para E. coli, siendo la. CO. concentración al 100% la que tiene mayor efecto sobre ambas bacterias. Según esto. Y. podemos inferir que S. aureus es más sensible que E. coli a los efectos. IC. A. antibacterianos del EVC ya sea concentrado o diluido. La diferencia de sensibilidad. RM ÁT. de ambas bacterias es que son especies de distinto género; y que S. aureus es Gram. IN FO. positiva, mientras que E. coli es Gram negativa; por tanto, presentan distintos mecanismos de resistencia a los componentes antimicrobianos del EVC. Esto se. DE. sustenta con la investigación realizada por Lizcano et al. (2008), quienes afirman. AS. que una bacteria Gram positiva es más sensible debido a que tiene una pared celular. EM. menos compleja, pues está compuesta solamente por una capa gruesa de. SI. ST. peptidoglicano, en comparación con una bacteria Gram negativa que tiene una. DE. pared más compleja ya que posee una membrana citoplasmática externa, una. RE CC IO. N. delgada capa de peptidoglicano, lipopolisacáridos y proteínas30.. La diferencia de los resultados que se puede observar con otros trabajos. DI. realizados por algunos autores, se debería a que se usaron diferentes métodos de extracción (decoccto, tintura, infusión, etc.) de los principios activos, así como de los solventes utilizados, concentraciones y cantidades de extracto, esto influiría en la cantidad de la sustancia activa presente y evaluada, al igual que su pureza y. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. grado de madurez del fruto y la especie29. Por tanto los resultados obtenidos demuestran que V. corymbosum tiene efecto antibacteriano, es por ello que podemos afirmar que tiene gran potencial para ser utilizado en la industria de. AC IÓ. N. medicamentos, alimentos y otros rubros por su efecto antibacteriano de interés. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. clínico, microbiológico y alimentario.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. ENUNCIADO - RESUMEN. N. Las concentraciones utilizadas del extracto de V. corymbosum al 50%, 75% y 100%. IC. AC IÓ. tienen efecto inhibidor sobre el crecimiento de E. coli y S. aureus.. M UN. Se determinó que el extracto de V. corymbosum al 50%, 75% y 100% tiene un. CO. mayor efecto inhibidor sobre el crecimiento de S. aureus que sobre E. coli.. A. Y. Existe diferencia significativa entre los diámetros promedios de los halos de. RM ÁT. IC. inhibición del crecimiento de E. coli y S. aureus por efecto del extracto de V.. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. corymbosum en cada una de las concentraciones evaluadas.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. RECOMENDACIONES. Investigar otras propiedades biológicas del extracto de Vaccinium corymbosum.. -. Investigar el efecto del extracto de Vaccinium corymbosum con otras. IC. AC IÓ. N. -. M UN. concentraciones diferentes al presente trabajo sobre Escherichia coli y. CO. Staphylococcus aureus.. Y. Evaluar diferentes concentraciones del extracto de Vaccinium corymbosum sobre. A. -. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. otras cepas bacterianas y/o fúngicas.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Pérez J, Isaza G, Acosta M. Actividad antimicrobiana de Phenax rugosus y. AC IÓ. N. Tabeburia chrysantha. BIOSALUD 2007; 6: 59 – 68.. IC. 2. Pardo M. Efecto in vitro del extracto de Solanum sessiliflorum “Cocona” sobre el. M UN. crecimiento de Helicobacter pylori. Facultad de Farmacia y Bioquímica,. CO. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Ciencia e Investigación 2010; 13(1):. A. Y. 30-33.. RM ÁT. IC. 3. Tejerina M. Estudio de diferentes fracciones y extractos de Allium sativum sobre la reacción vascular, niveles de colesterol y cultivos celulares. [Tesis doctoral].. IN FO. Madrid: Universidad Complutense de Madrid; 2001.. DE. 4. Cunningham D, Vannozzi S, Turk R, Roderick R, O ´Shea E, Brillant K.. AS. Constituyentes fitoquímicos del arándano americano (Vaccinium macrocarpon) y. ST. EM. sus beneficios para la salud.Revista de fitoterapia 2005; 5(1):5-16.. SI. 5. Pérez D, Mazzone L. Arándano, Mercados internacionales Comercio argentino. DE. Aspectos económicos y productivos del cultivo en Tucumán. Publicación especial. RE CC IO. N. 2006; 30: 4-20.. DI. 6. Risco E, Miguélez C, Sánchez E, Rouseaud A. Efecto del arándano americano (cysticlean)‚ sobre la adherencia de escherichia coli a células epiteliales de vejiga. estudio in vitro y ex vivo. Arch. Esp. Urol. 2010; 63 (6): 422-430.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 7. Ardila M, Vargas F, Pérez E y Mejía F. Ensayo preliminar de la actividad antimicrobiana de Allium sativum, Coriandrum sativum, Eugenia caryophyllata, Origanum vulgare, Rosmarinus officinalis y Thymus vulgaris frente a Clostridium. AC IÓ. N. perfringes. BIOSALUD 2009; 8: 47 – 45.. M UN. IC. 8. García R y Herrera F. Evaluación de la inhibición de cinco cepas bacterianas por extractos acuosos de Allium sativum. Allium fistulosum y Allium cepa: Estudio. Y. CO. preliminar in vitro. BISTUA 2007; 5(2); 68 – 79.. IC. A. 9. Arilmí G, Inchaustegui R y Quispe F. Actividad Antimicrobiana de Allium. RM ÁT. sativum L y Bixa orellana L. REDALYC 2003; 10(2): 61 – 71.. IN FO. 10. Ruz E, González C, Jaen S, Gutiérrez P, Kunhardt E, Ovadía L, Salazar C, Velázquez P. El jugo de arándano y su papel en las infecciones de las vías urinarias.. AS. DE. Ginecol Obstet Mex. 2009; 77(11):512-7.. EM. 11. Brooks G, Butel J, Morse S. Microbiología medica de Jwetz, Melnick y Adelberg.. SI. ST. México. Editorial Manual moderno; 2005.p.219.. DE. 12. Argilagos G, Cabrera M, Cuz M, López A. Categorías enteropatógenas de. RE CC IO. N. Escherichia coli en alimentos. Rev. prod. anim. sept.1999- jul.2000; 12:87-90.. 13. Gil M. Staphylococus aureus: Microbiologia y aspectos moleculares de la. DI. resitencia a meticilina. Rev Chil Infect. 2000; 17(2): 145-152.. 14. Seija V. Temas de bacteriología y virología médica. McGraw-Hill Interamericana; 2002. p. 257-271.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 15. Girón W. Antimicrobianos. Universidad Nacional Autónoma de Honduras. Rev.. N. Fac. Cienc. Méd. 2008: 70-77.. AC IÓ. 16. García J, Cantón R, García E, Gómez M, Martínez L, Rodríguez-Avial C, Vila J.. IC. Métodos Básicos para el estudio de la sensibilidad a los antimicrobianos.. M UN. Procedimientos en Microbiología Clínica. Recomendaciones de la Sociedad. CO. Española de Enfermedades. Infecciosas y Microbiología Clínica. 2000.. A. Y. 17. National Committee For Clinical Laboratory Standards (NCCLS). Methods for. RM ÁT. IC. dilution antimicrobial susceptibility tests for bacteria that grow aerobically.. IN FO. Approved Standard M7-A5. NCCLS, Wayne, PA. 2000.. 18. Cárdenas C. Paredes R. Velarde Q. Efecto del extracto hidroalcohólico de tallo e. DE. inflorescencia de Brassica oleracea var. Itálica sobre el crecimiento in vitro de. AS. Staphylococus aureus coagulasa positvo. [Tesis pregrado]. Universidad Nacional de. ST. EM. Trujillo. Escuela de Microbiologia y Parasitologia. 2009.. SI. 19. Escobar L, Chávez M. Efecto in vitro de diferentes concentraciones de extracto. DE. alcohólico de Caelespinia spinosa (Molina) Kuntze, sobre la viabilidad de. RE CC IO. N. Corynebacterium diphtheriae. 2008. 20. Boqué R. y Marote A. El análisis de varianza. UOC. 2011; 14: 1 – 23.. DI. 21. Prat S. Prueba de susceptibilidad antimicrobiana por difusión en agar. Ministerio de Salud. Instituto de Salud Pública. Sección Bacteriología. Gobierno de Chile. 2012.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Disponible en http://www.ispch.cl/lab_sal/doc/manual_susceptibilidad.pdf. Citado 10/07/13.. AC IÓ. N. 22. Hall V, Pocha M y Rodríguez E. Plantas Medicinales. CIMED 2002; 2: 1 – 110.. IC. 23. Exebio C. Estadística Aplicada a la Investigación Científica en Ciencias de la. M UN. Salud. Trujillo, Perú: Editorial EXLO; 2001.. CO. 24. Koneman E, Allen S, Dowell V, Janda W, Sommers H. Diagnóstico. Y. Microbiológico. 5ª ed. Editorial Médica Panamericana. Buenos Aíres, Argentina.. RM ÁT. IC. A. 1999. 1432pp. 25. Céspedes A, Portan P. Actualidad y perspectivas de drogas antibacterianas. Rev. IN FO. Cub Med Mil 1989; 27 (2): 1 – 9.. DE. 26. Rodríguez J. Evaluación de la actividad antibacteriana de cuatro extractos. AS. etanólicos de briófitos y de jugos de diez frutas de interés comercial en Colombia. ST. EM. contra cuatro bacterias patógenas. Bogotá D.C. 2011.. SI. 27. Sahr C. Determinación del efecto inhibidor in vitro del jugo de Cranberry. N. DE. (Vaccinium macrocarpon Ait) sobre microorganismos patógenos. Valdivia – Chile.. RE CC IO. 2004.. DI. 28. Puupponen-Pimiä R, Nohynek L, Alakomi H, Oksman-Caldentey K. Bioactive berry compounds—novel tools against human pathogens (mini-review). Appl Microbiol Biotechnol 2005; 67:8–18.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 29. Tolentino J. Efecto del extracto acuoso de Caesalpinia spinosa sobre el crecimiento de Staphylococus aureus y Escherichia coli. [Tesis pregrado].. AC IÓ. N. Universidad Nacional de Trujillo. Escuela de Microbiologia y Parasitologia. 2011.. 30. Lizcano R. y Vergara J. Evaluación de la actividad antimicrobiana de los extractos. M UN. IC. etanólicos y/o aceites esenciales de las especies vegetales Valeriana pilosa, Hesperomeles ferruginea, Myrcianthes rhopaloides y Passiflora manicata frente a. CO. microorganismos patógenos y fitopatógenos. Pontificia Universidad Javeriana.. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. Bogotá D.C., Colombia. Carrera de Microbiologia Industrial. 2008.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. ANEXOS. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 1. Obtención del extracto de Vaccinium corymbosum “Arándano” y las diferentes. A. Y. CO. M UN. IC. AC IÓ. N. concentraciones a evaluar.. (b). (d). DI. RE CC IO. N. DE. SI. (c). ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. (a). (e) 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig. 4: Frutos de Vaccinium corymbosum(Arándano) previamente lavados (a). Trituración de los frutos de V. corymbosum y obtención del extracto (b). Filtrado del extracto acuoso de V. corymbosum con papel filtro Whatman N°10 (c). Extracto final de. AC IÓ. N. V. corymbosum (d). Concentraciones al 50%, 75% y 100% del extracto de V.. DI. RE CC IO. N. DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. corymbosum (e).. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..