EFECTO DE NANOPARTÍCULAS DE PLATA SOBRE EL CICLO CELULAR EN MERISTEMOS RADICULARES DE Allium cepa “cebolla”

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE CIENCIAS. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. BIOLÓGICAS. CI EN. EFECTO DE NANOPARTÍCULAS DE PLATA SOBRE EL CICLO CELULAR EN MERISTEMOS RADICULARES DE. TESIS. PARA OBTENER EL TÍTULO. PROFESIONAL DE BIÓLOGO. BL. IO. TE. CA. DE. Allium cepa “cebolla”. BI. AUTOR: Br. ALICIA SHIRLEY REBAZA CALDERON ASESOR: Mg. JUAN CARLOS RODRÍGUEZ SOTO TRUJILLO – PERÚ 2017 i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. CI. AS. BI. O. RECTOR. LO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. G. IC. AS. TRUJILLO. CI EN. Dr. Rubén Vera Véliz. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. VICE-RECTOR DE INVESTIGACION. BI. BL. IO. TE. CA. DE. VICE-RECTOR ACADÉMICO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. BI. O. LO. G. DECANO. IC. Dr. Freddy Roger Mejia Coico. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. Dr. William Elmer Zelada Estraver. CA. DE. CI EN. SECRETARIO. Dr. Freddy Peláez Peláez. BI. BL. IO. TE. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PREOFESIONAL DE BIOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AS. Señores miembros del Jurado. IC. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el régimen de Grados y Títulos de. G. la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a. LO. vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de tesis titulado:. O. Efecto de nanopartículas de plata sobre el ciclo celular en meristemos radiculares de. BI. Allium cepa “cebolla”.. CI EN. CI. AS. Con el cual pretendo obtener el Título Profesional de Biólogo.. DE. Trujillo, mayo del año 2017. CA. _________________________. BI. BL. IO. TE. Br. Alicia Shirley Rebaza Calderón. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe, profesor asesor de la presente tesis para optar por el Título Profesional. AS. de Biólogo, certifica que ha sido desarrollada de conformidad con los objetivos propuestos y que el informe ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias. G. IC. alcanzadas.. LO. Por lo tanto autorizo a la Br. Alicia Shirley Rebaza Calderón a continuar con los trámites. AS. BI. O. correspondientes.. CI. ____________________________. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. Mg. Juan Carlos Rodríguez Soto. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. O. Dr. José Antonio Saldaña Jiménez. LO. ____________________________. G. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. CI EN. CI. AS. BI. PRESIDENTE. ____________________________ MsC. Carlos Heli Quijano Jara. ____________________________ Mg. Juan Carlos Rodríguez Soto VOCAL. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN DE TESIS. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que esta reúne. O. LO. G. IC. AS. todos los requisitos exigidos, por lo que fue aprobada por:. BI. ____________________________ Dr. José Antonio Saldaña Jiménez. CI EN. CI. AS. PRESIDENTE. ____________________________. DE. MsC. Carlos Heli Quijano Jara. BI. BL. IO. TE. CA. SECRETARIO. ____________________________ Mg. Juan Carlos Rodríguez Soto VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AS. A DIOS por darme cada día, un motivo. IC. más para salir adelante, por protegerme. O. LO. G. y guiarme por el camino correcto.. BI. A mis padres Cosme y Marcelina, por su entrega,. AS. humildad, infinito amor, paciencia, comprensión y apoyo incondicional, que me motivan a seguir. CI. luchando para lograr cada una de mis metas. Les. DE. CI EN. estaré eternamente agradecida.. CA. A mis hermanos Freddy, José, Moisés y Cristina por estar siempre presentes. BI. BL. IO. TE. y brindarme su apoyo incondicional.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. AS. Expreso mi más profundo agradecimiento a mi asesor, Mg. Juan Carlos. IC. Rodríguez Soto por brindarme sus conocimientos, su dedicación y apoyo. G. constante en la elaboración de este proyecto de tesis, siempre estaré. LO. agradecida hacia su persona y no me cansare de darle las gracias.. BI. O. Al profesor Dr. Claver Wilder Aldama Reyna por el apoyo brindado para la. AS. elaboración de este proyecto.. CI. Al biólogo Brayan Tello por su apoyo incondicional y aliento para seguir. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. adelante.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. AS. En el presente trabajo se determinó el efecto de las tres concentraciones de nanopartículas de plata en células meristemáticas radiculares de Allium cepa. El diseño. IC. experimental que se realizó fue completamente al azar, se evaluaron cuatro tratamientos;. LO. G. un control con agua declorinada filtrada a 14 horas y tres concentraciones con el 25%, 50% y 100% de AgNPs. Posteriormente se realizó preparados citológicos con los ápices. BI. O. de raicillas de Allium cepa a una y cuatro horas de recuperación y se obtuvo datos del índice mitótico y de fases. Los resultados obtenidos evidenciaron una disminución del. AS. índice mitótico en T4 (6.23%) con respecto al control T1 (13.2%), lo mismo ocurrió a. CI. cuatro horas de recuperación donde notamos que los índices de los tratamientos con. CI EN. AgNPs se observan ligeramente superiores a los de una hora de recuperación, lo que nos indicaría que la recuperación de los índices normales del ciclo celular se restablece. DE. lentamente frente a la acción de la plata. También se observó un efecto genotóxico en meristemos radiculares de Allium cepa reportándose alteraciones como puentes. IO. TE. CA. anafásicos, células binucleadas y telofases amorfas.. BI. BL. PALABRAS CLAVES: nanopartículas, plata, citotoxicidad, genotoxicidad, Allium cepa.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. AS. In this study, was determined the effect of the three concentrations of silver nanoparticles on Allium cepa root meristematic cells. The experimental design was completely. IC. randomized, four treatments were evaluated; a control with dechlorinated water filtered. LO. G. at 14 hours and three concentrations with 25%, 50% and 100% of AgNPs. Subsequently, cytological preparations were prepared with the apices of Allium cepa rootlets at one and. BI. O. four hours of recovery and mitotic and phase index data were obtained. The results obtained evidenced a decrease in the mitotic index in T4 (6.23%) compared to the control. AS. T1 (13.2%), the same happened to four hours of recovery where we noticed that the. CI. indices of the treatments with AgNPs are observed slightly superior to those of one hour. CI EN. of recovery, which would indicate that recovery of normal cell cycle indexes is slowly restored to the action of silver. A genotoxic effect was also observed on root meristems. DE. of Allium cepa with alterations such as anaphasic bridges, binucleate cells and amorphous. IO. TE. CA. telophases.. BI. BL. KEY WORDS: nanopartículas, silver, cytotoxicity, Allium cepa.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. iii iv. IC. PRESENTACIÓN. ii. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. LO. G. DEL ASESOR MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. BI. O. APROBACION DE TESIS. AS. DEDICATORIA AGRADECIMIENTOS. CI. RESUMEN. CI EN. ABSTRACT. CA. METODOLOGÍA. DE. INTRODUCCIÓN. v. vi vii viii ix x xi. 1 6 11. DISCUSIÓN. 27. TE. RESULTADOS. 36. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 37. BL. IO. CONCLUSIONES. 43. BI. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. La nanociencia es aquella ciencia que se encarga del estudio, la. AS. composición y el control de fenómenos, así como la manipulación de materiales a escalas nanométricas. Las investigaciones en estas áreas son interdisciplinarias,. G. IC. pues requieren de amplios conocimientos que no se limitan a campos como la. LO. Física, la Química, la Medicina o la ciencia de los materiales (Aqel et al., 2012;. O. Bawaski et al., 2008).. BI. Durante las últimas décadas, la investigación en ciencia y tecnología se ha. (1nm=10-9m),. lo. que. comúnmente. se. conoce. como. CI. manométricas. AS. centrado en la fabricación de estructuras atómicas y materiales a escalas. CI EN. “nanotecnología” (Savage et al., 2007). Esta nueva ciencia multidisciplinar proporciona productos con nuevas propiedades fisicoquímicas diferentes a las de las moléculas individuales o sólidos de la misma composición (Medina et al.,. DE. 2007).. CA. El desarrollo de la nanotecnología, no obstante, tiene que ir acompañado. TE. de estudios de toxicidad que permitan conocer los efectos que estas nanoparticulas. IO. (NPs) van a tener tanto en la salud humana como en el medio ambiente (EFSA,. Entre las NPs que han demostrado tener propiedades microbicidas las más. BI. BL. 2011).. importantes son las de plata, óxido de zinc, cobre u óxidos de hierro. Las primeras tres sustancias ya presentan esta propiedad en su forma macroscópica, mientras que los óxidos de hierro únicamente resultan ser microbicidas en forma nanoestructurada (Seil y Webster, 2012). 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Sin embargo, los mecanismos de toxicidad que presentan las NPs con diferentes acciones como la bactericida no han sido completamente dilucidados, aunque se han postulado varias hipótesis. Entre estas se pueden mencionar. AS. perturbaciones en las funciones de la membrana celular (las cuales alteran la permeabilidad y la respiración celular), el ingreso de las NPs a la célula lo que. G. IC. genera una alteración en las funciones de las proteínas y el ADN, o la producción. LO. de especies oxidativas debido a la presencia de NPs en el interior de la célula. O. (Hajipour et al., 2012; Cioffi y Rai, 2012).. BI. Las aplicaciones de NPs van a depender del tamaño de partícula, la carga,. AS. la hidrofobicidad, la función superficial, etc. Estos fenómenos hacen que la. CI. nanotecnología desempeñe un papel importante en la ciencia y la. CI EN. tecnología. Aplicaciones antibacterianas y fabricaciones de nanocompuestos son algunas de las aplicaciones más importantes de las nanoparticulas de plata. et al., 2005).. DE. (AgNPs) entre muchos (Dowling et al., 2003; Canción y Wang, 2004; Kokkoris. CA. En los últimos años, la plata ha ganado mucho interés debido a su buena. TE. conductividad, estabilidad química y su actividad catalítica y antibacteriana. Las. IO. AgNPs se están convirtiendo en una de las categorías de productos de mayor. BL. crecimiento en la industria de la nanotecnología. Su fuerte actividad antimicrobiana es la principal característica para el desarrollo de productos con. BI. AgNPs. En el ámbito médico, existen apósitos para heridas, dispositivos anticonceptivos, instrumental quirúrgico y prótesis óseas, todos ellos recubiertos o integrados con AgNPs para así evitar el crecimiento bacteriano (Cheng et al., 2004; Cohen et al., 2007).. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Además, también se está evaluando la utilización de las AgNPs contra el tratamiento de enfermedades que requieren una concentración mantenida de fármaco en sangre o con un direccionamiento específico a células u órganos. AS. (Panyman et al., 2003), como ocurre con el virus del VIH-1, ya que ha sido demostrado que el tratamiento in vitro con AgNPs interacciona con el virus e. G. IC. inhibe su capacidad para unirse a las células del huésped (Elechiguerra et al.,. LO. 2005).. O. Las AgNPs también tienen su aplicación en el sector alimentario,. BI. concretamente en agricultura y en el envasado de los alimentos. Dentro del campo. AS. de la agricultura, las AgNPs se emplean para prolongar la conservación de frutos,. CI. ya que además de su actividad antibacteriana presentan un efecto fungistático que. CI EN. retarda el crecimiento de hongos fitopatógenos. Estas NPs pueden aplicarse junto con un recubrimiento biodegradable en los frutos, mediante la inmersión de los mismos en la solución formadora de recubrimiento (Aguilar, 2009). Además, las. DE. AgNPs también son empleadas en la fabricación de materiales en contacto con los. CA. alimentos, eliminando hasta en un 90% el crecimiento de microorganismos en los alimentos (ObservatoryNANO, 2009), siendo una alternativa a otros métodos de. TE. conservación de alimentos que emplean la radiación, tratamiento térmico,. IO. almacenamiento a baja temperatura, o la introducción de aditivos antimicrobianos. BI. BL. (Brody et al., 2008). Con respecto a la toxicidad de las AgNPs se ha observado la aparición de. argiria en heridas abiertas tratadas con concentraciones excesivas de Ag. Además, en ciertos estudios se sugiere que, por su tamaño y por sus propiedades microbicidas, las AgNPs pueden generar daños en el medioambiente debido a su. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. acumulación (Braydich et al., 2005). En trabajos que involucran células eucariotas, como células hepáticas humanas y fibroblastos se considera que las AgNPs son tóxicas ya que provocan daños en la respiración celular y ciclos de. AS. división celular pero aún son tópicos que deben ser mejor estudiados (Asharani et. IC. al., 2008).. G. El ciclo celular es la historia de la vida de una célula, los estadios por los. LO. cuales pasa de una división a la siguiente. Este proceso es crítico para la genética. O. porque a través del ciclo celular las células progenitoras pasan a las células hijas. BI. las instrucciones genéticas para todas las características. Se inicia un ciclo nuevo. AS. después de que una célula se ha dividido y ha producido dos células nuevas. Cada. CI. célula nueva metaboliza, crece y se desarrolla. Al final de su ciclo la célula se. CI EN. divide para producir dos células, las que luego puedan atravesar ciclos celulares adicionales. La progresión a través del ciclo celular es regulada en puntos de transición claves llamados puntos de control. El ciclo celular consta de dos fases. DE. principales. La primera es la interfase, el periodo entre las divisiones celulares en. CA. el que la célula crece, se desarrolla y se prepara para la división. La segunda es la fase M (fase mitótica), ele periodo de división celular activa. La fase M incluye la. TE. mitosis, es decir, el proceso de división nuclear, y la citocinesis o división. BL. IO. citoplasmática (Pierce, 2010). La aplicación del test Allium con bulbos de cebolla, permite evaluar el. BI. daño citotóxico y genotóxico de una sustancia o una mezcla de sustancias, así como también de otras que podrían poseer efectos protectores frente a daños oxidativos (Fistesjo, 1998). Este test nos permitirá determinar el efecto de las AgNPs sobre la población celular meristemática radicular en Allium cepa.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Estudios microscópicos de células meristemáticas radiculares de cebolla, creciendo en diferentes medios tóxicos, muestran un amplio rango de alteraciones citológicas, lo que indica la fina sensibilidad de las raíces de Allium cepa para. AS. detectar sustancias potencialmente peligrosas tanto para la salud humana como. IC. para el medio ambiente en general (Smaka-Kincl et al. 1996; Silva et al., 2003).. G. Cuando las células del tejido meristemático de A. cepa se encuentran en. LO. equilibrio proliferativo, la duración de cada uno de los períodos del ciclo celular. O. permanece constante; de esta forma, el número de células que están en una fase. BI. determinada es también constante y proporcional a la duración en tiempo de la. AS. misma; pero cuando se lleva a cabo en presencia de sustancias tóxicas, la división. CI. celular de los meristemos radiculares puede inhibirse, ya sea retardando el proceso. CI EN. de mitosis o destruyendo las células. Este tipo de alteraciones generalmente impide el crecimiento normal de la raíz y por tanto, su elongación (Díaz et al.,. DE. 2007).. En base a los antecedentes expuestos la presente investigación determinó. CA. el efecto de diferentes concentraciones de nanopartículas de plata sobre el ciclo. BI. BL. IO. TE. celular en tejido meristemático radicular de Allium cepa “cebolla”.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. METODOLOGÍA. 1. Material biológico. AS. Los bulbos de Allium cepa L. var. Roja Arequipeña, tuvieron un peso. IC. aproximado de 80g, forma de perilla y buen estado de conservación. Se. G. adquirió del centro de abastos “La Hermelinda” del distrito de Trujillo.. O. LO. 2. Obtención de nanopartículas de plata. BI. En el laboratorio de Óptica y Láseres de la Facultad de Física y. AS. Matemática de la Universidad Nacional de Trujillo, empleando el laser Nd: YAG, 532 nm “Brillant" se irradió a una placa de plata de alta pureza con. CI EN. CI. radiación infrarroja de 37,5 milijoule de energía con la técnica de Ablación Láser Pulsada en Medio Líquido (ANEXO 1) (Danian, 2014; Sukhov, 2014; Reyes, 2015; Urusov, 2015), teniendo como medio agua ultrapura.. DE. Obteniéndose solución saturada (ANEXO 2) a partir de la cual se obtuvo las 3 concentraciones de nanopartículas de plata (25%, 50% y 100% del índice. TE. CA. de saturación obtenido, el mismo que se aproxima a 0,854 ppm).. BI. BL. IO. 3. Caracterización de las Nanopartículas de Plata. La caracterización de las partícula de plata obtenidas a través de la. técnica de Ablación Láser Pulsada en Medios Líquidos utilizando el láser Nd:YAG 532 nm. “Brilliant” en el Laboratorio de Óptica y Láser de la Facultad de Física y Matemática fue caracterizada siguiendo el protocolo de caracterización de nanopartículas obtenidas por ablación láser (Danian, 2014;. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Sukhov, 2014; Reyes, 2015; Urusov, 2015), determinando tamaño, forma, concentración, estabilidad y demás parámetros. Dichos procesos estuvieron a. AS. cargo de personal del mismo laboratorio (Rivera, 2016).. IC. 4. Instalación del sistema biológico. G. Se utilizó 40 bulbos de Allium cepa “cebolla” a los cuales se les quitó y. LO. limpió cuidadosamente de las catáfilas y raicillas secas, eliminando todo resto. O. sin dañar al disco germinativo. (ANEXO 3). En la parte ecuatorial de los. BI. bulbos se introdujeron tres mondadientes distribuidos equidistantemente para. AS. sostener el bulbo en la boca del vaso de 8 onzas, que promovió el crecimiento. CI EN. CI. de las raicillas en agua declorinada. (ANEXO 4).. Las cebollas se mantuvieron en un sistema de soporte diseñado especialmente hecho de triplay; se utilizó un motor de pecera para. DE. proporcionar aireación constante a razón de 10-20 ml /min., a 25 ºC, la renovación del agua contenida en los vasos fue diaria; 72 horas después se. CA. seleccionaron aquellos bulbos con más de 10 raicillas con longitud promedio. TE. de 2,5 a 3 cm., a fin de asegurar la presencia de la cinética del ciclo celular.. IO. El sistema se desarrolló en un ambiente oscuro (Otiniano, 2014). (ANEXO. BI. BL. 5).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 5. Diseño experimental. Se realizó un diseño experimental completamente al azar con tres repeticiones para cada tratamiento, estableciéndose cuatro tratamientos según. T3. T4. IC. T2. CI. AS. BI. O. LO. G. T1. AS. el siguiente esquema.. 72h. 72h. 72h. CI EN. 72h. DE. Aplicación de los tratamientos: diferentes concentraciones de AgNPs. Evaluación del índice mitótico e índice de fases Evaluación de la alteración del ciclo celular. IO. TE. CA. 1h. BI. BL. 3h. Evaluación del índice mitótico e índice de fases Evaluación de la alteración del ciclo celular. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 6. Obtención de preparados citológicos. Luego de la aplicación de los tratamientos, las raicillas de los bulbos de cebolla fueron disectadas y fijadas en Carnoy´s. Luego se lavó tres veces con. AS. agua destilada para retirar de esta manera los restos del fijador. Luego se. IC. procedió a secarlas con papel toalla para eliminar los restos de agua en la. G. superficie. Por último estas fueron depositadas en una luna de reloj, y se. LO. procedió a colorear con 9 gotas de Orceina acética 2% y 1 gota de HCl 1N. O. por 30 minutos de acuerdo a la técnica de Tjio y Levan (Tjio y Levan, 1956).. BI. Pasado el tiempo de coloración, fueron disectados los ápices de las raicillas y. AS. colocados entre una lámina porta y cubreobjetos para realizar la técnica de. CI EN. CI. “squash” o del aplastamiento.. 7. Análisis citológico para la determinación de la citotoxicidad y genotoxicidad del ciclo celular. DE. Se empleó un microscopio compuesto Olympus CX 21 con el objetivo. CA. de 40x para las lecturas de los preparados citológicos. Se procedió a contar un total de 2000 células por repetición para cada uno de los diferentes. TE. tratamientos ensayados utilizando la técnica de barrido. Para la evaluación de. IO. la citotoxicidad se estimaron los valores del índice mitótico y de fases. BL. (ANEXO 6). Los resultados obtenidos fueron expresados en porcentaje. Así. BI. mismo se evaluó la presencia de puentes anafásicos, células binucleadas y telofases amorfas.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 8. Análisis estadístico. Los datos obtenidos se los organizó en tablas, gráficos y figuras. Se aplicó además el respectivo análisis de varianza y comparación de medias,. AS. utilizándose para ello el programa Statgraphics Centurion versión 16.1.15. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. para Windows versión de prueba. (ANEXO 7-18). 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. En el presente trabajo, se determinó el efecto de diferentes concentraciones. AS. (0%, 25%, 50% y 100% del índice de saturación 0,854 ppm.) de nanopartículas. IC. de plata sobre el ciclo celular en meristemos radiculares de Allium cepa,. LO. G. obteniéndose los siguientes resultados.. O. En la tabla 1 y 2, se observa los índices mitóticos, índice de fases y. BI. porcentaje de anomalías del material hereditario, en tejido meristemático radicular. AS. de Allium cepas expuestas a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata con una y cuatro horas de recuperación, los índices con tratamiento de AgNPs. CI EN. CI. tienen valores menores que el tratamiento testigo.. En el gráfico 1 y 2, se muestra el porcentaje del índice mitótico a una y. DE. cuatro horas de recuperación respectivamente, donde se observa una disminución. CA. del índice a medida que aumenta la concentración de AgNPs.. TE. En el gráfico 3 y 4 se observa que el porcentaje del índice de fases a una y. IO. cuatro horas de recuperación respectivamente, a medida que aumenta la. BL. concentración de las nanopartículas de plata, el índice profásico y metafásico. BI. aumentan, luego se tiene una disminución en los índices anafásico y telofásico respecto al testigo conforme aumenta la concentración de AgNPs.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En los gráficos 5 y 6 se muestra el porcentaje de anomalías del material hereditario a una y cuatro horas de recuperación respectivamente, donde se observa un aumento de anomalías a medida que aumenta la concentración de. AS. AgNPs.. G. IC. En la Figura 1 se observa las fases normales del ciclo celular en tejido. LO. meristemático radicular de Allium cepa observadas en el conteo de los. BI. O. tratamientos con AgNPs.. anomalías del ciclo celular en tejido. AS. En la figura 2 muestran las. meristemático radicular de Allium cepa observadas en el conteo de los. CI EN. células das y telofases amorfas.. CI. tratamientos con AgNPs, entre las cuales está la presencia de puentes anafásicos,. DE. En la tabla 3 y 4, se muestra el análisis de varianza de índice mitótico, índice de fases e índice de anomalías del material hereditario en tejido. CA. meristemático radicular de Allium cepa sometido a diferentes concentraciones de. TE. nanopartículas de plata a una y cuatro horas de recuperación, encontrándose. En los cuadros 1 y 2, se muestra el análisis de comparación de medias de. BI. BL. IO. diferencias significativas entre los tratamiento para cada uno de los índices.. los índices mitóticos, índice de fases e índice de anomalías del material hereditario en tejido meristemático radicular de Allium cepa sometido a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata a una y cuatro horas de recuperacion, encontrando diferentes grupos homogéneos para cada índice.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Índice. Índice. Índice. Índice. (%) de las. Mitótico. Profásico. Metafásico. Anafásico. Telofásico. anomalías. T1. 13.2 ± 0.17. 45.83 ± 1.15. 15.12 ± 0.35. 10.45 ± 0.15. 28.6 ± 1.97. 0±0. T2. 7.15 ± 0.29. 56.52 ± 0.71. 21.74 ± 1.08. 8.7 ± 0.14. 13.04 ± 1.06. 2.4 ± 2.45. T3. 6.61 ± 0.26. 71.43 ± 0.63. 11.25 ± 0.82. 6.2 ± 0.36. 11.12 ± 0.94. 2.78 ± 0.47. T4. 6.23 ± 0.02. 79.71 ± 0.53. 4.35 ± 0.26. 5.8 ± 0.35. 10.14 ± 0.13. 3.17 ± 4.78. TE CA. DE. CI. EN. CI AS. Índice. TRATAMIENTOS. BI. O. LO. Tabla 1. Porcentajes de los índices mitóticos, índice de fases y anomalías del material hereditario en tejido meristemático radicular de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata con una hora de recuperación.. BI. BL I. O. Leyenda: T1: 0% NpAg. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. O. LO. Tabla 2. Porcentaje de los índices mitóticos, índice de fases y anomalías del material hereditario en tejido meristemático radicular de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanoparticulas de plata con cuatro horas de recuperación.. Índice. (%) de las. Metafásico. Anafásico. Telofásico. anomalías. 11.9 ± 0.13. 28.15 ± 0.92. 0±0. 22.45 ± 0.29. 7.14 ± 0.44. 20.41 ± 0.74. 3.02 ± 4.92. 17.05 ± 0.05. 6.76 ± 0.01. 19.05 ± 1.03. 3.43 ± 1.24. 8.33 ± 0.13. 6.67 ± 0.17. 10.33 ± 0.13. 3.73 ± 1.25. CI AS. Índice. 12.95 ± 0.38. 45 ± 2.24. 14.95 ± 0.20. T2. 8.72 ± 0.17. 50 ± 0.98. T3. 7.43 ± 0.78. 57.14 ± 0.09. T4. 6.95 ± 0.01. DE. CI. T1. TE CA. Índice. EN. TRATAMIENTOS Índice Mitótico Índice Profásico. O. 74.67 ± 1.21. BI. BL I. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC AS. Gráfico 1. Índices mitóticos en meristemos radiculares de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata a una hora de recuperación.. 12. O. a. 14. 10. b. 8 6. CI AS. BI. 13.2%. c. c. 6.61%. 6.23%. 7.15%. EN. % de Ìndice mitòtico. LO. 16. CI. 4. DE. 2. Tratamientos T1. T2. T3. T4. O. TE CA. 0. BI. BL I. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag. Nota: Letras semejantes indican un mismo grupo homogeneo.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC AS. Gráfico 2. Índices mitóticos en meristemos radiculares de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata a cuatro horas de recuperación.. 16. BI. 12.95%. b. 10 8. CI AS. 12. 8.72%. 7.43%. EN. 6 4. c. CI. % de Ìndice mitòtico. O. a. 14. DE. 2. TE CA. 0. Tratamientos T1. T2. T3. T4. BI. BL I. O. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag. Nota: Letras semejantes indican un mismo grupo homogeneo.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. c 6.95%.

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC AS. Gráfico 3. Índices de fases en meristemos radiculares de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata a una hora de recuperación.. LO. 100. c. BI. 80. 71.43%. a. 50. a. 45.83%. b a. 15.12%. 28.6%. 10.45%. 0 T1. c. 8.7%. bc. c. 13.04%. 11.25% 6.2% 11.12%. T2. T3. I-Metafásico. I-Anafásico. I-Telofásico. O. I-Profásico. b. b. 21.74%. TE CA. a. DE. 30. 10. EN. 56.52% 40. 20. 79.71%. CI AS. b. CI. % de índice de fases. 70 60. d. O. 90. BI. BL I. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag. Nota: Letras semejantes indican un mismo grupo homogeneo.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. d. c. 4.35% 5.8% T4. c 10.14%.

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC AS. Gráfico 4. Índices de fases en meristemos radiculares de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata a cuatro horas de recuperación.. LO. 90. d. BI. O. 80. c. a 50. 50%. b. 30. a. 14.95%. 28.15%. DE. 10. a. b. CI. a. 45%. EN. 57.14%. 40. 20. 74.67%. CI AS. b. 60. 22.45%. 11.9%. TE CA. % de índice de fases. 70. 0 T1. 20.41%. 17.05%. 7.14%. bc. 19.05%. 6.76%. T2. T3 I-Metafásico. I-Anafásico. I-Telofásico. BL I. O. I-Profásico. b. b. c. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag.. BI. Nota: Letras semejantes indican un mismo grupo homogeneo.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. d. c. c. 8.33% 6.67% 10.33% T4.

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. Gráfico 5. Porcentaje de anomalías del material hereditario en tejido meristemático radicular de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata con una hora de recuperación.. O. b. BI. 2.5. EN. 1.5. CI AS. 2.4. CI. 1. 0.5. a 0. TE CA. 0. DE. % de anomalÍas. 2.78. 2. Tratamientos t1. t2. t3. d. LO. c 3. G. 3.5. t4. BI. BL I. O. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag. Nota: Letras semejantes indican un mismo grupo homogeneo.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. 3.17.

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. Gráfico 6. Porcentaje de anomalías del material hereditario en tejido meristemático radicular de Allium cepa expuestos a diferentes concentraciones de nanoparticulas de plata con cuatro horas de recuperación.. d. c. LO. 4. b. BI. O. 3.5. 3.02. 3.43. EN. 2. CI AS. 2.5. 1.5. CI. % de anomalías. 3. 1. a. DE. 0.5. G. 4.5. 0. TE CA. 0. Tratamientos t1. t2. t3. t4. BI. BL I. O. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag. Nota: Letras semejantes indican un mismo grupo homogeo.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. 3.73.

(33) A. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI EN. CI. AS. BI. O. B. C. E. BI. BL. IO. TE. CA. DE. D. Figura 1. Fases normales del ciclo celular en tejido meristemático radicular de Allium cepa. observadas con el aumento de 100X en el conteo de los tratamientos con nanopartículas de plata. A: célula en interfase. B: célula en profase. C: célula en metafase. D: célula en anafase. E: célula en telofase.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. C. BI. BL. IO. TE. CA. DE. B. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. A. Figura 2. Anomalías del ciclo celular en tejido meristemático radicular de Allium cepa. observadas con el aen el conteo de los tratamientos con nanopartículas de plata. A: puente anafásico. B: célula binucleada. C: telofase amorfa.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Gl. Cuadrado Medio. O. Suma de Cuadrados. Razón-F. Valor-P. 691.66. 0.0. 2059.6. 3. 686.533. 1091.68. 0.0000 *. Entre Índice Metafásico. 476.142. 3. 158.714. 312.44. 0.0000 *. Entre Índice Anafásico. 43.1756. 3. 14.3919. 195.41. 0.0000 *. 676.119. 3. 225.373. 153.03. 0.0000 *. 7324.91. 3. 2441.637. 223.64. 0.0000 *. EN. Entre Índice Profásico. TE CA. BL I. O. Entre Índices Anomalías. 32.4735. CI. 97.4204. Entre Índice Telofásico. 3. DE. Entre Índice Mitótico. CI AS. BI. Fuente de variación. LO. G. Tabla 3. Análisis de varianza de índices mitóticos, índice de fases e índices de anomalías en el material hereditario en tejido meristemático radicular de Allium cepa sometido a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata con una hora de recuperación. BI. * diferencias significativas (p < 0.05). 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. *.

(36) IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. Tabla 4. Análisis de varianza de índices mitóticos, índice de fases e índice de anomalías del material hereditario en tejido meristemático radicular de Allium cepa sometido a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata con cuatro horas de recuperación. Cuadrado Medio. Razón-F. 3. 22.3477. 338.22. 0.0. 3. 504.894. 270.09. 0.0000 *. 3. 102.264. 2868.56. 0.0000 *. Gl. O. Suma de Cuadrados. Valor-P. BI. Fuente de variación. 67.043. Entre Índice Profásico. 1514.68. Entre Índice Metafásico. 306.793. Entre Índice Anafásico. 57.6026. 3. 19.2009. 326.96. 0.0000 *. 479.823. 3. 159.941. 256.03. 0.0000 *. 10680.660. 3. 3560.220. 347.30. 0.0000 *. *. TE CA. DE. CI. EN. CI AS. Entre Índice Mitótico. BL I. Entre Índice Anomalías. O. Entre Índice Telofásico. BI. * diferencias significativas (p < 0.05). 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Cuadro 1. Análisis de comparación de medias de los índices mitóticos, índices de fases e índice de anomalías del material hereditario en tejido radicular de Allium cepa sometido a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata con una hora de recuperación mediante LSD.. METAFÁSICO. X. 3. 3. 6.61. X. 2. 3. 7.15. 1. 3. 13.2. 1. 3. 45.83. 2. 3. 56.52. 3. 3. 71.43. 4. 3. 79.71. 4. 3. 3. 3 3. 15.12. CI EN. 1. CA. BI. BL. IO. TE. TELOFÁSICO. ANOMALÍAS. X. LO. G. X. X X. X. 4.35. X. X. 11.25. X X. 2. 3. 21.74. 4. 3. 5.8. X. 3. 3. 6.2. X. 2. 3. 8.7. 1. 3. 10.45. 4. 3. 10.14. X. 3. 3. 11.12. XX. 2. 3. 13.04. X. 1. 3. 28.6. 4. 3. 63.33. 3. 3. 55.67. 2. 3. 48.00. 1. 3. 0. DE. ANAFÁSICO. AS. 6.23. IC. 3. O. PROFÁSICO. 4. BI. MITÓTICO. Grupos Homogéneos. AS. Tratamientos Casos Media. CI. Índice. X. X X. X. X X X X. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag LSD: Límite de significancia de diferencias de medias de Fisher.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Cuadro 2. Análisis de comparación de medias de los índices mitóticos, índices de fases e índice de anomalías del material hereditario en tejido radicular de Allium cepa sometido a diferentes concentraciones de nanopartículas de plata con cuatro horas de recuperación mediante LSD.. METAFÁSICO. X. 3. 3. 7.43. X. 2. 3. 8.72. 1. 3. 12.95. 1. 3. 45.0. X. 2. 3. 50.0. 3. 3. 57.14. 4. 3. 74.67. 4. 3. 1. G. LO X. X. X. 8.33. X. 3. 17.05. 2. 3. 22.45. 4. 3. 6.67. X. 3. 3. 6.76. XX. 2. 3. 7.14. X. 1. 3. 11.9. 4. 3. 10.33. 3. 3. 19.05. X. 2. 3. 20.41. X. 1. 3. 28.15. 4. 3. 74.67. 3. 3. 68.67. 2. 3. 60.33. 1. 3. 0. CI EN ANOMALÍAS. X. 14.95. DE. CA TE BI. BL. IO. TELOFÁSICO. X. 3. 3. ANAFÁSICO. AS. 6.95. IC. 3. BI. PROFÁSICO. 4. AS. MITÓTICO. Grupos Homogéneos. O. Tratamiento Casos Media. CI. Índice. X X X. X. X. X. X X X X. Leyenda: T1: 0% Np-Ag. T2: 25% Np-Ag. T3: 50% Np-Ag. T4: 100% Np-Ag LSD: Límite de significancia de diferencias de medias de Fisher.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. Las nanopartículas se podrían describir como partículas que miden de 1 a. AS. 100 nm, su comportamiento es demasiado diferente comparados a los pedazos del. IC. mismo material: más fuertes, más tóxicas y con propiedades radicalmente. G. distintas. Lo que las hace así de útiles también hace tan incierta su seguridad. Por. LO. sus propiedades únicas, las nanopartículas interactúan con las biomoléculas. O. también de forma única, esto incluye al ADN, colágeno y estructuras de. BI. membrana, etc. Las características y número de interacciones de este tipo deben. AS. de ser perfectamente comprendidas si se pretende avanzar en la comprensión de. CI. la toxicología a escala nanométrica (Callisaya, 2010). Así mismo se conoce que. CI EN. los iones plata se combinan con las proteínas y causan desnaturalización y precipitación (Alfonso, 2003).. DE. Los resultados obtenidos, a una hora de recuperación, muestran que el índice mitótico disminuye en relación al testigo (13,2%) para todos los. CA. tratamientos con AgNPs (Tabla 1 y Gráfico 1), teniendo que a mayor. TE. concentración menor índice mitótico; es así que el T2 (25%) disminuye a un. IO. 7,15%, el T3 (50%) lo hace a un 6,61% y el T4 (100%) llega hasta un 6,23%; esta. BL. importante disminución probablemente se debe a que las AgNPs en dichas. BI. concentraciones y tiempos actúan sobre el complejo ciclina B – CDK 1(FPM: Factor Promotor de la Mitosis), el que permite el paso de G2 hacia el periodo M, por lo que las células no transitarían normalmente de G2 hacia la mitosis, observando un menor número de células en división. (Aller, 1992; Karp, 2005; Watson et al., 2006). Sin embargo no podemos dejar de lado la hipótesis de que 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las AgNPs podrían estar afectando directamente a la molécula de ADN (Callisaya, 2010; White, 2001), la misma que al estar afectada inhibe la formación del factor promotor de mitosis (Alfonso, 2003). Semejantes variaciones se observaron con. AS. las medidas realizadas a cuatro horas de recuperación; donde los índices de todos los tratamientos con AgNPs (Tabla 2 y Gráfico 2) mostraron una disminución. G. IC. frente al índice del testigo (12,95%), teniendo que a mayor concentración menor. LO. índice mitótico; es así que el T2 (25%) disminuye a un 8,72%, el T3 (50%) lo hizo. O. a un 7,43% y el T4 (100%) llega hasta un 6,95%. Debemos notar además que los. BI. índices de los tratamientos con AgNPs de cuatro horas se observan ligeramente. AS. superiores a los de una hora de recuperación, lo que nos indicaría que la. CI EN. frente a la acción de la plata.. CI. recuperación de los índices normales del ciclo celular se restablece lentamente. El desarrollo del análisis de varianza evidenció la existencia de diferencias. DE. significativas entre los diferentes tratamientos ensayados tanto para una hora (Tabla 3) como cuatro horas de recuperación (Tabla 4); así mismo la comparación. CA. de medias para una hora y cuatro horas de recuperación (Cuadro 1 y 2. TE. respectivamente) señala la existencia de diferentes grupos homogéneos; teniendo. IO. que en ambos análisis, de una y cuatro horas de recuperación, los tratamientos T4. BI. BL. y T3 forman un solo grupo homogéneo, teniendo tres grupos diferentes.. Los resultados obtenidos en cuanto al índice profásico, a una hora de. recuperación, señalan el aumento de los índices de todos los tratamientos con AgNPs (Tabla 1 y Gráfico 3) frente al tratamiento testigo (45,83%), teniendo que a mayor concentración mayor índice profásico; es así que el T2 (25%) aumenta a. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. un 56,52%, el T3 (50%) lo hace a un 71,43% y el T4 (100%) llega hasta un 79,71%; este importante aumento probablemente se debe a que las AgNPs en dichas concentraciones y a dichos tiempos actúan sobre, el correspondiente, al. AS. complejo ciclina B – CDK 1, que a este nivel de la división celular, actúa sobre la formación de los centros de organización de microtúbulos (COMT), el mismo que. G. IC. induce el ensamblaje del huso mitótico, y que al verse afectado evita el paso de. LO. profase a metafase, teniendo así mayor número de células en profase (Mauro,. O. 2007; Mitchison y Kirshner, 1984; Paniagua et al., 2002). Similares índices se. BI. obtuvieron al evaluar el efecto citotóxico de otras sustancias sobre el mismo tejido. AS. (Samer, 2012; Otiniano, 2014). Semejantes variaciones se observaron con las medidas realizadas a cuatro horas de recuperación; donde los índices de todos los. CI. tratamientos con AgNPs (Tabla 2 y Gráfico 4) mostraron un aumento frente al. CI EN. índice del testigo (45%), teniendo que a mayor concentración mayor índice profásico; es así que el T2 (25%) aumentó a un 50%, el T3 (50%) lo hizo a un. DE. 57,14% y el T4 (100%) llega hasta un 74,67%. Debemos notar además que los índices de los tratamientos con AgNPs de cuatro horas se observan inferiores a los. CA. de una hora de recuperación, lo que nos indicaría que la recuperación de los. IO. TE. índices normales del ciclo celular se van restableciendo con el tiempo.. BL. El desarrollo del análisis de varianza evidenció la existencia de diferencias. BI. significativas entre los diferentes tratamientos ensayados tanto para una hora (Tabla 3) como cuatro horas de recuperación (Tabla 4); así mismo la comparación de medias para una hora y cuatro horas de recuperación (Cuadro 1 y 2 respectivamente) señala la existencia de diferentes grupos homogéneos; teniendo. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. que en ambos análisis, de una y cuatro horas de recuperación, cada tratamiento se muestra independiente, teniendo cuatro grupos diferentes.. AS. En cuanto al índice metafásico, a una hora de recuperación, la Tabla 1 y. IC. Gráfico 3 señalan variaciones en relación al tratamiento testigo (15,12%) el T2. G. (25%) aumentó a 21,7%, mientras que el T3 (50%) disminuyó a 11,25% y el T4. LO. (100%) llegó 4,35%; estás variaciones probablemente se debe a que las AgNPs en dichas concentraciones y a dichos tiempos actúan sobre, el correspondiente, al. BI. O. complejo ciclina B – CDK 1, en la concentración del T2 probablemente no tiene. AS. mayor efecto sobre los centros de organización de microtúbulos (COMT) sin embargo si hay un efecto importante con las concentraciones de los tratamientos. CI. T3 y T4 (Mauro, 2007; Mitchison y Kirshner, 1984; Paniagua et al., 2002), cuyos. CI EN. resultados son similares índices se obtuvieron al evaluar el efecto citotóxico de otras sustancias sobre el mismo tejido (Fajardo, 2012; Cabrera, 2012; Araujo,. DE. 2012; Díaz, 2011). Semejantes variaciones se observaron con las medidas realizadas a cuatro horas de recuperación; donde los índices de los tratamientos. CA. T2 y T3 (Tabla 2 y Gráfico 4) mostraron un aumento frente al índice del testigo. TE. (14,95%); es así que el T2 (25%) aumentó a un 22,45% y el T3 (50%) lo hizo a. IO. un 17,05%, mientras que el T4 (100%) disminuyó hasta un 8,33%. Debemos notar. BL. además que los índices de los tratamientos con AgNPs de cuatro horas se observan. BI. diferentes a los de una hora de recuperación, lo que nos indicaría que la importancia del tiempo de recuperación en el modelamiento de los índices normales.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El desarrollo del análisis de varianza evidenció la existencia de diferencias significativas entre los diferentes tratamientos ensayados tanto para una hora (Tabla 3) como cuatro horas de recuperación (Tabla 4); así mismo la comparación. AS. de medias para una hora y cuatro horas de recuperación (Cuadro 1 y 2 respectivamente) señala la existencia de diferentes grupos homogéneos; teniendo. O. LO. muestra independiente, teniendo cuatro grupos diferentes.. G. IC. que en ambos análisis, de una y cuatro horas de recuperación, cada tratamiento se. BI. El índice anafásico según nuestros ensayos, a una hora de recuperación,. AS. sufre disminución en referencia al tratamiento testigo (10,45%) según la Tabla 1 y Gráfico 3 donde el T2 (25%) disminuyó a 8,7%, el T3 (50%) lo hizo a 6,2% y. CI. el T4 (100%) llegó 5,8%; estás variaciones probablemente se debe a que las. CI EN. AgNPs en dichas concentraciones y a dichos tiempos actúan sobre complejo promotor de la anafase (APC), el mismo que revisa que todos los cromosomas se. DE. encuentren unidos al huso mitótico, si detecta que uno de los cinetocoros no se encuentra unido, manda una señal negativa al sistema de control, inactivando. CA. proteínas implicadas. en la separación. de. las cromátides. hermanas,. TE. específicamente APC-cdc20, lo que genera que las separasas no degraden a las. IO. cohesinas impidiendo que las cromátides hermanas migren a los polos ecuatoriales. BL. (Mauro, 2007; Aller, 1992; Alberts et al., 2006; Paniagua et al., 2002). Semejantes. BI. variaciones se observaron con las medidas realizadas a cuatro horas de recuperación; donde el índice del tratamientos control (11,9%) (Tabla 2 y Gráfico 4) se muestra superior a los índices de los tratamientos con AgNPs donde el T2 (25%) bajó a un 7,14%, el T3 (50%) lo hizo a un 6,76% y el T4 llegó a un 6,67%.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El desarrollo del análisis de varianza evidenció la existencia de diferencias significativas entre los diferentes tratamientos ensayados tanto para una hora (Tabla 3) como cuatro horas de recuperación (Tabla 4); así mismo la comparación. AS. de medias para una hora y cuatro horas de recuperación (Cuadro 1 y 2 respectivamente) señala la existencia de diferentes grupos homogéneos; teniendo. G. IC. que en el análisis de una hora de recuperación los tratamientos T4 y T3 formen un. LO. solo grupo, teniendo tres grupos diferentes. Para el análisis de los ensayos a 4. O. horas de recuperación los tratamientos T4 y T3 forman un solo grupo, sin embargo. BI. el T3 tampoco presenta diferencias significativas con el T2, formando entre ellos. AS. (T3 y T2) otro grupo homogéneo, dejando al T1 como un tercer grupo diferente.. CI. El índice telofásico según nuestros ensayos, a una hora de recuperación,. CI EN. sufre disminución en referencia al tratamiento testigo (28,6%) según la Tabla 1 y Gráfico 3 donde el T2 (25%) disminuyó a 13,04%, el T3 (50%) lo hizo a 11,12%. DE. y el T4 (100%) llegó 10,14%; estás variaciones probablemente se debe al incremento de células en profase y la continua disminución en la metafase y. CA. anafase, lo que llevaría consigo a una baja proporción de células que llegan a. TE. telofase. Similares resultados se obtuvieron al analizar la citotoxicidad de. IO. diferentes sustancias sobre tejido meristemático radicular de Alium cepa (Araujo,. BL. 2012; Otiniano, 2014). Semejantes variaciones se observaron con las medidas. BI. realizadas a cuatro horas de recuperación; donde el índice del tratamientos control (28,15%) (Tabla 2 y Gráfico 4) se muestra superior a los índices de los tratamientos con AgNPs donde el T2 (25%) bajó a un 20,41%, el T3 (50%) lo hizo a un 19,05% y el T4 llegó a un 10,33%. Debemos notar además que los índices de cuatro horas de recuperación se muestran ligeramente superiores a los de una hora. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de recuperación, lo que nos indicaría que la recuperación de los índices normales se va dando conforme vaya transcurriendo el tiempo de recuperación.. AS. El desarrollo del análisis de varianza evidenció la existencia de diferencias. IC. significativas entre los diferentes tratamientos ensayados tanto para una hora. G. (Tabla 3) como cuatro horas de recuperación (Tabla 4); así mismo la comparación. LO. de medias para una hora y cuatro horas de recuperación (Cuadro 1 y 2. O. respectivamente) señala la existencia de diferentes grupos homogéneos; teniendo. BI. que en el análisis de una hora de recuperación los tratamientos T4 y T3 formen un. AS. solo grupo, así mismo el análisis agrupa al T3 y T2 en otro grupo homogéneo, obteniendo tres grupos diferentes. Para el análisis de los ensayos a 4 horas de. CI EN. diferentes entre sí.. CI. recuperación los tratamientos T3 y T2 forman un solo grupo, teniendo tres grupos. En referencia a la presencia de anomalías observadas en el conteo celular. DE. de tejido meristemático radicular de Allium cepa expuesto a diferentes. CA. concentraciones de nanopartículas de plata con una hora de recuperación (Figura 02) se observó la presencia de anomalías en los tres tratamientos que contienen. TE. AgNPs más no en el tratamiento testigo (T1). El mayor porcentaje de anomalías. IO. estuvo presente en el T4 (3,17%), seguido del T3 (2,78%) y el T2 (2,4%); teniendo. BL. que a mayor concentración de AgNPs mayor presencia de anomalías en el material. BI. hereditario (Tabla 1). El análisis de varianza con los datos contabilizados nos arrojaron la presencia de diferencias significativas entre los tratamientos(Tabla 3), lo cual se comprobó con la prueba de comparación de medias (Cuadro 1) donde se muestra la presencia de cuatro grupos homogéneos diferentes entre sí.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En los resultados a cuatro horas de recuperación (Tabla 2) los datos muestran un comportamiento similar, teniendo al T4 de mayor concentración de AgNPs con un 3,73%; seguido del T3 con 3,43% y el T2 con 3,02%. El análisis. AS. de varianza nos arrojó la presencia de diferencias significativas entre los tratamientos (Tabla 4) y ello se corroboró con el análisis de comparación de. G. IC. medias (Cuadro 2) donde se observa la presencia de cuatro grupos homogéneos. LO. diferentes entre sí, dejando en claro que cada tratamiento es estadísticamente. O. diferente entre sí. Debemos señalar que los índices de cuatro horas de. BI. recuperación se muestran algo superiores a los de una hora de recuperación, ello. AS. se debería a que el daño de las AgNPs sobre el material hereditario estaría. CI EN. traducción (Pierce, 2010).. CI. expresándose más pasada una hora, observándose pos procesos de transcripción y. Dentro de las anomalías del material hereditario, la presencia de puentes anafásicos (Figura 2) se debería a los efectos clastogénicos, a nivel de las regiones. DE. teloméricas del ADN interaccionan con los compuestos oxidativos de las. CA. diferentes concentraciones de nanopartículas de plata, motivo por el cual los cromosomas se volverían pegajosos, haciendo posible la formación de estas. TE. figuras cromosómicas anormales (Paniagua et al, 2002; Aybar, 2015). La. IO. presencia de células binucleadas (Figura 2) se deberían a que dichas células no. BL. han llevado un normal proceso de citocinesis, probablemente el efecto oxidativo. BI. de las nanopartículas de plata originaria una inhibición de la fusión de vesículas del Aparato de Golgi que van desde el centro hacia la periferia de la célula, obstaculizando de esta manera la formación del fragmoplasto, responsable de la nueva pared celular durante la telofase trayendo como consecuencia la formación de células binucleadas (Klaessen y watkins, 2001; Dulout y Olivero, 1984; Alberts 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. et al, 2006; Díaz, 2011). La presencia de telofases amorfas se debería al accionar nocivo de las AgNPs en las diferentes estancias proteicas, donde una de las propiedades de la plata es la desnaturalización de las mismas (Alfonso, 2003), de. AS. tal manera que si las proteínas que promueven la forma normal del núcleo son. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. afectadas, la forma del núcleo estaría siendo anormal.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES.  Se determinó que las diferentes concentraciones de nanopartículas de plata tienen. AS. efecto citotóxico causando disminución de los valores de índice mitótico del ciclo. IC. celular en meristemos radiculares de Allium cepa, teniendo que a mayor concentración. LO. G. de AgNPs se observa menor índice mitótico.. O.  El tratamiento T4 (100% de AgNPs a partir del índice de saturación) produjo la mayor. BI. reducción en el índice mitótico, metafásico, anafásico y telofásico; tanto para una. AS. como cuatro horas de recuperación. Teniendo al mismo tratamiento T4 ocasionando. CI. un aumento significativo en el índice profásico para ambos ensayos de una y cuatro. CI EN. horas de recuperación..  Se determinó que las diferentes concentraciones de nanopartículas de plata tienen. DE. efecto genotóxico en tejido meristemático radicular de Allium cepa provocando la presencia de anomalías en el material hereditario como puentes anafásicos, células. CA. binucleadas y telofases amorfas, teniendo que a mayor concentración de AgNPs se. TE. observa mayor índice de anomalías.. IO.  El tratamiento T4 (100% de AgNPs a partir del índice de saturación) produjo el mayor. BL. el índice de anomalías tanto para una como cuatro horas de recuperación (3,17% y. BI. 3,73% respectivamente).. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Aguilar MA. (2009). Síntesis y caracterización de nanopartículas de plata: Efecto. IC. AS. sobre colletotrichum Gloesporioides. Tesis doctoral.. Alberts, B., Jonson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, P. (2006).. LO. G. Biología molecular de la célula. Cuarta edición. Ediciones Omega. España.. O. Alfonso, G. (2003). Remington Farmacia. Argentina: Ed. Medica Panamericana.. BI. Aller, A. (1992). The involvement of discrete genome regions in post – mitotic. AS. chromosome decondensation in G1 timing in Allium cepa L. meristematic. CI. cells. Journal of Cell Science.; 103:1047-1051.. CI EN. Aqel, A., El-Nour, K., Ammar, R., Al-Warthan, A. (2012). Carbon nanotubes, science and technology part (I) structure, synthesis and characterization. Arabian J Chem. 5(1): 1-23.. DE. Araujo, J. (2012). Efecto protector del extracto etanólico de Annona muricatasobre la citotoxicidad y genotoxicidad del sorbato de potasio en. CA. meristemos radiculares de Allium cepa. Universidad Nacional de Trujillo.. TE. Tesis para optar el título de biólogo. Trujillo – Perú.. IO. Asharani, P., Low, G., Hande. y Valiyaveettil, S. (2008). Cytotoxicity and. BL. genotoxicity of silver nanoparticles in human cells, ACS nano. 3, 279-290.. Aybar, J. (2015). Efecto citotóxico y genotóxico del extracto acuoso del. BI. pericarpio de Caesalpinia spinosa “tara”en células meristematicas de Allium cepa L. var Arequipeña. Universidad Nacional de Trujillo. Tesis para optar el título de biólogo. Trujillo – Perú.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..