Efecto bactericida in vitro del extracto del zea mays L (maíz morado) sobre cepas sensibles y meticilino resistentes de staphylococcus aureus
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(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Dedicatoria. M. ed. ici. na. A Dios. lio. te c. a. de. A mi hermosa familia.. Bi b. A mis amigos.. 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Agradecimientos. A Dios: por ser el guía mi vida, porque ha sido siempre fiel y me guarda. ici. na. de todo mal.. A mis padres, Eduardo Correa y Esther Alayo y mis hermanos: por. ed. su amor y su apoyo a lo largo de esta larga carrera, porque sin ellos no. de. M. sería la persona que soy.. A mi abuelita, Marina: por su amor, dedicación y su educación, porque sé que desde el cielo, está velando para que todas mis metas se hagan. te c. a. posible.. lio. A mis amigos Jorge Contreras y José Cortegana: amigos quienes me. Bi b. apoyaron desinteresadamente durante toda la ejecución de este trabajo.. A la Doctora Elvita: por su paciencia, su apoyo, su entrega y dedicación para que se pudiera hacer realidad este trabajo.. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE Pág. DEDICATORIA……………………………………………..……....................i. na. AGRADECIMIENTOS………………………………………………………..ii. ici. RESUMEN………………………………….……………………………….....iv. ed. ABSTRACT………………………………………………………….…............vi. M. I.- INTRODUCCIÓN…...………………………….…………………………7. de. II.- MATERIAL Y MÉTODO……………………………………….……….11 III.- RESULTADOS………………………...……………………….………...22. te c. a. IV.- DISCUSIÓN…………………….………..………………………...…….28 V.- CONCLUSIONES.……………………………………………….…..…..33. lio. VI.- RECOMENDACIONES……….………………………………………....34. Bi b. VII.-REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………35 ANEXOS…………………………………………………………...…........42. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. “Efecto bactericida in vitro del extracto del Zea mays L. (maíz morado) sobre cepas sensibles y meticilino resistentes de Stapylococcus aureus” RESUMEN El Zea mays ha demostrado efecto protector in vitro y en animales frente a diferentes. na. enfermedades (hipertensión arterial, arterioesclerosis, diabetes entre otras). Esto. ici. gracias a la gran cantidad de polifenoles que posee. Además existen diversos. ed. estudios, en varias plantas, que demuestran el poder bactericida in vitro de los polifenoles en cepas como S. aureus, E. coli, H. pylori, entre otros. El objetivo del. M. presente estudio fue demostrar el efecto bactericida in vitro del extracto acuoso de la coronta del Zea mays sobre Staphylococcus aureus sensibles y meticilino resistente. de. (SAMS y SARM). Se realizó la prueba de efectividad antibacteriana, mediante la técnica de Kirby y Bauer, colocándose discos embebidos en las concentraciones al. te c. a. 100, 75 y 50% del extracto acuoso. Las placas se incubaron a 37°C midiéndose los halos después de 24 horas. Además se empleó el método de dilución en tubos, en. lio. ambas cepas, con concentraciones de 100, 75 y 50% del extracto, incubándose luego por 24 horas, para luego ser sembrados 0,1 mL de cada dilución en placas con agar. Bi b. Mueller Hinton para determinar las Unidades Formadoras de Colonias (UFC), las cuales fueron contabilizadas 24 horas después. Se observó efecto bactericida del extracto acuoso al 100% en las cepas de SAMS y efecto inhibitorio del extracto acuoso al 50% en S. aureus sensibles y meticilino resistentes. Se concluye que el extracto acuoso de Zea mays posee actividad bactericida in vitro sobre el crecimiento. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de cepas de S. aureus sensibles a meticilina y un efecto antibacteriano inhibitorio en cepas de S. aureus meticilino resistentes. PALABRAS CLAVE: Staphylococcus aureus meticilino resistente, Staphylococcus. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. na. aureus sensibles a meticilina, Zea mays, extracto acuoso, in vitro, polifenoles.. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT Zea mays has shown protective effect in vitro and in animals (hypertension, arteriosclerosis, diabetes). This thanks to the large amount of polyphenols that it possesses. In addition, several studies have demonstrated the in vitro bactericidal. na. activity of polyphenols in strains such as S. aureus, E. coli, H. pylori, among others. The objective of the present study was demonstrated the in vitro bactericidal effect of. ici. the aqueous extract of the Zea mays crown on Staphylococcus aureus sensitive and. ed. methicillin resistant. The antibacterial efficacy test was performed, applying the. M. Kirby and Bauer technique, placing discs embedded in the concentrations at 100, 75 and 50% of the aqueous extract. The plates were incubated at 37 °C and the halos. de. were measured after 24 hours. In addition, the dilution method was used in tubes in two strains with concentrations of 100, 75 and 50% of the extract, then incubated for. a. 24 hours, then 0.1 ml of each dilution was plated on Mueller Hinton agar plates. te c. Determine Colony Forming Units (UFC), which were counted 24 hours later. A bactericidal effect of 100% aqueous extract on SAMS strains and 50% aqueous. lio. extract inhibitory effect on S. aureus sensitive and methicillin resistant was observed.. Bi b. It is concluded that the aqueous extract of Zea mays possesses bactericidal activity in vitro on the growth of strains of methicillin sensitive S. aureus and an inhibitory antibacterial effect in strains of methicillin resistant S. aureus.. KEY WORDS: Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, methicillin-sensitive Staphylococcus aureus, Zea mays, aqueous extract, in vitro, polyphenols. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN El Zea mays (Z. mays.) es una planta de la familia de las Gramineae, originaria de América, caracterizada por su gran variedad de colores: blanco, amarillo, rojo, morado, marrón, verde y azul. El Z. mays L. o maíz morado,. na. tiene su origen en países de Latinoamérica como México, Bolivia y Perú. En este último, su cultivo se realiza principalmente en los departamentos de. ici. Cajamarca, Ayacucho, Ancash, Lima y Arequipa, siendo en todo el país su. ed. uso común para la elaboración de la bebida “Chicha morada”, mazamorras,. M. caramelos, yogurt, entre otros productos1,2.. de. En los últimos años, el Z. Mays ha demostrado presentar un efecto protector significativo n vitro y en animales, en diferentes modelos de enfermedades. a. crónicas como ateroesclerosis, hipertensión arterial, diabetes y un gran poder. te c. anti cancerígeno. Todo esto debido a la gran cantidad de polifenoles encontrados en su coronta1,3,4,5.. Estos se definen químicamente como. lio. sustancias que tienen un anillo aromático con uno o más sustituyentes. Bi b. hidroxilo, incluyendo sus derivados funcionales como esteres, éteres, glucósidos, etc6.7.. Los polifenoles, constituidos por un amplio grupo de compuestos químicos, son investigados actualmente por atribuírseles una variada actividad farmacológica, en general, asociada a la capacidad de actuar como agentes 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. antioxidantes y barredores de radicales libres1,3,8.Estos componentes no energéticos producidos en gran variedad de plantas (uva, eucalipto, mandarina, ginseng, toronja, limón, romero, avena, etc.), cumplen la función de proteger a la planta contra otras plantas patógenas y contra la agresión de. na. animales herbívoros, respondiendo su producción a condiciones de estrés. Esto se logra gracias a sus características fisicoquímicas, que le permiten de. ici. modular la actividad de diferentes enzimas, pudiendo interferir así, en. ed. mecanismos de señalización y en distintas reacciones metabólicas celulares de. M. óxido reducción4.Son por estas características, que los polifenoles vienen siendo estudiados por tener potenciales propiedades curativas como. de. antioxidantes (inhibiendo la oxidación de los β carotenos y siendo agentes quelantes), antiaterogénicas (bloqueando la oxidación de las lipoproteínas de. lio. te c. las células)5.. a. baja densidad), anticancerígenas (inhibiendo el daño oxidativo del ADN de. Además de esto, múltiples estudios bacteriológicos tanto in vitro como in. Bi b. vivo han asociado la acción bacteriostática y bactericida a los compuestos fenólicos (agliconas de flavinoides, ácidos fenólicos o sus ésteres ya que muchos flavonoides son conocidos por conferir resistencia frente al ataque de microorganismos) extraidos de plantas como Camellia sinensis (té verde) frente a Staphyloccocus aureus3,8,9,10,11,12,13.. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El S. aureus es una bacteria Gram positivas cuya. pared celular está. compuesta de una gruesa capa de peptidoglicano, polímero polisacárido compuesto por cadenas laterales de pentapéptidos, las cuales se hallan conectadas al residuo de ácido murámico y tienen unión cruzada por un. na. puente pentaglicina fijada a L-lisina de una cadena y la D-alanina de la otra cadena; manteniendo la rigidez de la pared bacteriana y su resistencia. ici. osmótica14,15,16. Por otro lado, considerando su material genético, el gen. ed. “meca” constituye uno de los determinantes de resistencia a Meticilina,. M. mientras que el gen “erm” lo es para Clindamicina y eritromicina17, 18.. de. Estas bacterias causan diversas infecciones, desde una simple infección cutánea (forunculosis, impétigo, foliculitis, etc.) hasta manifestaciones. a. sistémicas que pueden llevar a la muerte del huesped por sepsis. Si bien el S.. te c. aureus se ha relacionado con infecciones nosocomiales en unidades de cuidados intensivos, unidades de quemados y en neutropénicos (prevalencia. lio. internacional de infecciones hospitalarias por S. aureusfluctua entre 15.5 y. Bi b. 82.8%, y a nivel nacional entre 9.7-24.2%), el principal reservorio se encuentran en la colonización de la mucosa nasal de las personas y en animales de la comunidad (prevalencia de portación nasal a nivel latinoamericano fluctúa entre 10.5 y 28.6%)13, 19.. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En la actualidad las cepas de S. aureus tienen un amplio rango de resistencia a los antibióticos y se pueden encontrar cepas resistentes a meticilina y vancomicina13,16,20,21.. La. adquisición. de. esta. resistencia. se. debe. principalmente al intercambio de manera horizontal de genes (ya antes. na. mencionados) que son transportados por elementos genéticos móviles como. ici. plásmidos, transposones (Tn) y secuencias de inserción (IS) 16,22,23,24.. ed. A nivel de América Latina, las infecciones intrahospitalarias por S. aureus. M. meticilino resistentes han sobrepasado el 50% de prevalencia y probablemente seguirá aumentando con el pasar de los años. Es por ello que en los últimos. de. años, para poder combatir estas bacterias resistentes a medicamentos, se está ideando la agregación de un coadyuvante en el tratamiento farmacológico, lo. a. que disminuiría los factores de riesgo e impediría el desarrollo bacteriano en. te c. el ser humano21,23,25,26, 27.. Debido a todo esto, en el presente estudio se planteó el siguiente problema:. lio. ¿Tendrá efecto bactericida el extracto de Zea mays L. in vitro sobre. Bi b. cepas de Staphylococcus aureus sensibles y meticilino resistentes?. OBJETIVOS:. 1.3. Objetivo general. . Demostrar el efecto bactericida in vitro del extracto de coronta de Zea mays L. sobre las cepas de Staphylococcus aureus sensibles y meticilino resistentes. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3.1. Objetivos específicos o Determinar el efecto bactericida in vitro del extracto de coronta de Zea mays L. sobre cepas sensibles de Staphylococcus aureus.. na. o Determinar el efecto bactericida in vitro del extracto de coronta resistentes de. ici. de Zea mays L. sobre cepas meticilino. ed. Staphylococcus aureus.. M. o Identificar cuál de las tres concentraciones de Zea mays (50, 75 y 100 %) presenta un poder antibacteriano inhibitoria (CI) in vitro. de. de sobre cepas sensibles de Staphylococcus aureus.. te c. a. o Identificar cuál de las tres concentraciones de Zea mays (50, 75 y 100 %) presenta un poder antibacteriano inhibitoria (CI) sobre. MATERIAL Y MÉTODO. Bi b. II.. lio. cepas resistentes a la meticilina de Staphylococcus aureus.. 1. MATERIAL Y PROCEDIMIENTOS (MÉTODOS) 1.1 Material botánico: Se utilizaron corontas de Zea mays “maíz morado” para la elaboración del extracto acuoso, las mismas que fueron obtenidas de cultivos, provenientes del distrito de Moche. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2 Muestra de Estudio: Cepas jóvenes de Staphylococcus aureus del cepario del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Nacional de Trujillo. na. 2. MÉTODOS Y TÉCNICAS. ici. 2.1 Tipo de investigación. ed. Diseño experimental. 2.2. Diseño estadístico de muestreo. M. 2.2.1. Unidad de análisis:. La unidad de análisis lo constituyó cada uno de los. de. discos de difusión y placas Petri. a. 2.2.2. Tamaño de muestra. te c. Para determinar el tamaño de la muestra se hizo uso de. Bi b. lio. la siguiente fórmula: Tamaño muestral Para calcular el efecto bactericida del Zea mays, se consideró que los antibióticos de uso común presentan 80% de alta efectividad28.. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Donde:. na. n = Número de elementos necesitados en cada uno de los dos grupos p1= Proporción estimada con el atributo del grupo 1. ici. p2 = Proporción estimada con el atributo del grupo 2. q2 = 1 - p2. ed. q1 = 1 - p1. M. p2 - p1 = Mínimo nivel de diferencia que desea detectar entre los dos grupos (En estudio y contraste). de. Zα = Desviación normal para error alfa. Para 0,05 y dos colas Zα= 1.96 Zβ = Desviación normal para error beta. Para 0,2 y una cola Zß= 0.84. a. Reemplazando valores:. te c. p1= 0,80. Bi b. lio. p2= 0,28 q1= 0,20 q2= 0,72 Zα = 1,96 Zß = 0,84. n = 10. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3. PROCEDIMIENTO Y CAPTACIÓN DE LA INFORMACIÓN DEFINICIÓN Y OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES: Efecto antibacteriano inhibitorio in vitro: Capacidad de un compuesto, el cuál, en un período de tiempo. na. determinado (24 horas), es capaz de inhibir el crecimiento in vitro. ici. de un inóculo bacteriano previamente estandarizado 29.. ed. Efecto bactericida in vitro. Capacidad de un compuesto, el cuál, en un período de tiempo. M. predeterminado (24 horas), es capaz de inducir la muerte in vitro del 99.9% de una población bacteriana previamente 29.. de. Extracto acuoso:. Es la infusión obtenida, tras la ebullición con agua hirviendo de un. te c. a. compuesto, durante cinco minutos con el fin de extraer las sustancias solubles que hay en ella 25. En este caso, consistirá en el. lio. resultante de el hervor por 5 minutos de 500 ml de agua destilada y. Bi b. 400 g de coronta de Zea mays.. Halo de Inhibición: Zona alrededor del disco donde una sustancia antibacteriana es capaz de impedir el crecimiento de la bacteria al cabo de 18 a 24 horas de incubación. Se utilizará como medida los diámetros de estas. zonas. en. mm,. según. la. escala. de. Duraffourd. y. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. cuantitativamente según la concentración inhibitoria mínima (CIM)21. Escala. de. Duraffourd:. Escala. utilizada. para. determinar. cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de. na. inhibición17.. Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.. . Sensibilidad límite (sensible = +) para. un diámetro. ed. ici. . comprendido entre 8 a 14 mm.. Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20. M. . . de. mm.. Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20. a. mm.. te c. 2.4. PROCEDIMIENTOS: A- Recolección de la muestra:. lio. Cepa Bacteriana. Bi b. Las cepas de Staphylococcusaureus (MSR) se obtuvieron del cepario de la Facultad de Medicina UNT. Las cepas se conservaron en agar soya tripticasa, hasta la realización del trabajo experimental.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B- Preparación del extracto acuoso de Zea mays a. Recolección E Identificación Taxonómica La coronta de maíz fue obtenida de mazorcas de Z. mays, las cuales fueron recolectadas, por la mañana, del distrito de. na. Moche (33m.s.n.m.), provincia de Trujillo y de la región La Libertad, en el mes de julio. Un ejemplar completo de la. ici. planta se llevó posteriormente al Herbarium Truxillense de. ed. la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación y. M. posterior verificación taxonómica, obteniendo el código de. de. identificación del espécimen N° 58300 (anexo N°1).. a. b. Elaboración Del Extracto Acuoso. te c. Se preparó el extracto utilizando 217.4 gramos de corontas. Bi b. lio. de Z.mays. Estás se depositaron en un matraz y se agregó 1. litro de agua destilada. Acto seguido el matraz fue llevado a una autoclave para su posterior calentamiento hasta los 100° C durante 5 minutos. La solución obtenida se consideró como un estándar de concentración (100%). Las soluciones al 50% y 75% se obtuvieron al mezclando la solución madres con solución salina (NaCL) al 0.9%. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. C- PREPARACIÓN DEL INÓCULO DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS. Método de suspensión directa de colonias El método de suspensión directa de colonias es el más. na. adecuado para la preparación del inóculo.. ici. (1) Se preparó el inóculo de S. aureus sensibles y meticilino. ed. resistentes haciendo un cultivo directo en solución salina de las. M. cepas aisladas con un tiempo de cultivo de 18 a 24 horas en. de. agar soya tripticasa a fin de obtener colonias jóvenes.. (2) Se ajustó la turbidez de la suspensión hasta que sea. te c. a. equivalente al estándar 0,5 de la escala de McFarland, obteniéndose. así,. una. suspensión. que. contenía. lio. aproximadamente de 1 a 2 x 108 unidades formadores de. Bi b. colonias (UFC)/ml para Staphylococcus aureus. Para realizar este paso con exactitud, se realizó el procedimiento durante la mañana, haciendo uso de la luz del día adecuada para comparar el tubo del inóculo con el estándar 0,5 de McFarland frente a una tarjeta de fondo blanco y líneas negras.. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. D- PRUEBA DE EFECTIVIDAD ANTIBACTERIANA: Mediante la técnica de Kirby y Bauer: (1) Dentro de los 15 minutos después de haber ajustado la turbidez de la suspensión del inóculo, se sumergió un hisopo de. na. algodón estéril en la suspensión. Se rotó el hisopo varias veces. ici. y se presionó firmemente por las paredes internas del tubo por encima del nivel del líquido. Este procedimiento eliminó el. ed. exceso de líquido del hisopo.. M. (2) Se inoculó la superficie seca de una placa de agar Mueller-. de. Hinton estriando con el hisopo toda la superficie del agar estéril. Se repitió este procedimiento estriando dos veces más el. a. hisopo, rotando la placa aproximadamente 60º cada vez para. te c. asegurar una distribución homogénea del inóculo. Como paso final, se realizó el hisopado por el borde del agar.. lio. (3) La tapa se dejó entreabierta durante tres a cinco minutos,. Bi b. para permitir que el exceso de humedad de la superficie se absorba antes de aplicar los discos impregnados con el extracto. Se prepararon discos de papel de filtro estériles, los cuales fueron sumergidos dentro de cada concentración de Zea mays: 50%, 75% y 100% por un periodo de 1 hora, luego con una aguja estéril, éstos se colocaron sobre los cultivos de S. aureus 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en las placas petri previamente preparadas; las placas se mantuvieron en la misma posición por un periodo de 10 minutos. Como control se colocaron discos de sensibilidad de. na. Vancomicina en placas petri con cultivo de S. aureus sensible y. ici. meticilino resistente, los cuales sirvieron de control, ya que. ed. ambas cepas son sensibles a la vancomicina.. Luego de este tiempo las placas se voltearon de posición y se. M. incubaron a 37º C, durante 24 horas. Todo el procedimiento se. de. llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm de la llama de un mechero.. a. La lectura de los resultados, se llevó a cabo mediante la. te c. inspección visual de cada placa. Esto se efectuó tomando el registro en milímetros de los halos de inhibición del. Bi b. lio. crecimiento de Staphylococcus aureus.. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. E- DETERMINACIÓN INHIBITORIA. DE. (CI). LA IN. CONCENTRACIÓN. VITRO. DE. TRES. CONCENTRACIONES DE ZEA MAYS SOBRE CEPAS SENSIBLES Y RESISTENTES A LA METICILINA DE. na. STAPHYLOCOCCUS AUREUS.. ici. Se determinó la concentración inhibitoria (CI) mediante la técnica de dilución en tubos de cada una de las cepas. ed. sensibles y resistentes a la meticilina de Staphylococcus. M. aureus, con las tres concentraciones preparadas de 50, 75 y. de. 100% de Zea mays.. Los ensayos se repitieron 10 veces para cada concentración. a. de Zea mays, por lo que, cada grupo estuvo conformado por. te c. 10 placas petri.. Bi b. lio. En los tubos se colocaron 0.2 ml. de la dilución de la cepa en solución salina (semejante a tubo # 0,5 de McFarland) seguido de 0.8 ml de cada concentración de Zea mays. (50%, 75% y 100%). Luego, se incubaron todos los tubos de ensayo en la estufa a 37º C por 24 horas. Posteriormente se sembró 0.1 mL. de la solución de cada uno de los tubos en placas petri con agar Mueller Hinton, utilizando el asa de Driglasky para 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. dispersar la muestra, Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro de un diámetro de 10 cm. de la llama de un mechero. Dichas placas se colocaron en estufa por 48 horas a 37°C. Finalmente se observó el crecimiento bacteriano y se. na. realizó el conteo de las Unidades Formadoras de Colonias. ici. (UFC).. ed. El efecto bactericida se comprobó cuando en las placas no se desarrollaron colonias, es decir UFC= 0.. M. Estos resultados fueron comparados con el crecimiento que. de. hubo en una placa de agar Mueller Hinton con 0.2 ml de la dilución de la cepa en solución salina y 0.8 ml de. a. Vancomicina, y control bacteriano sembrado en las placas. te c. de S. aureus sin ningún tratamiento. lio. 2.5 ASPECTOS ÉTICOS. El proyecto de investigación fue presentado al Comité de Ética de la. Bi b. Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. Así mismo, para la realización de la investigación se tuvo en cuenta los principios de bioseguridad, poniendo atención a factores que pudieran dañar el medio ambiente; así como las normas establecidas en el Código de Ética y Deontología del Colegio Médico del Perú en la sección 2 art 42°, concerniente al trabajo de Investigación30. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6. Análisis e interpretación de la información Para determinar el efecto bactericida del extracto de coronta de Zea mays sobre las cepas de S. aureus, se utilizó el método estadístico de Distribución de Fisher para muestras relacionadas (p <0,05), el cual. na. permitió el análisis de la variación del diámetro de las muestras.. ici. Por otro lado, se evaluó la concentración mínima inhibitoria a través. ed. del conteo de Unidades Formadoras de Colonias, el cual un crecimiento nulo confirmó el poder bactericida del extracto a. M. determinada concentración, y la disminución por encima del 80% de Unidades Formadoras de Colonias (menor a 4 x 105), confirmó el. RESULTADOS. te c. III.. a. de. poder antibacteriano inhibitorio.. En el presente estudio experimental cuyo objetivo principal fue conocer el. lio. efecto antibacteriano in vitro del extracto acuoso de Zea mays sobre. Bi b. Staphylococcus aureus sensible y meticilino resistente, se obtuvieron los siguientes resultados:. Luego de realizar la prueba de efectividad bacteriana de Kirby y Bauer midiendo los halos de inhibición y de acuerdo a la escala de Duraffourd se encontró:. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las cepas de S. aureus sensibles a meticilina mostraron tener una sensibilidad límite en un 30% y una sensibilidad nula en un 70 % en una concentración de 50% con una media de 6.9 (sensibilidad nula), mientras que al 75% ´se observó una media de 8.1 (sensibilidad límite) con un 90% de sensibilidad. na. límite y un 10% de sensibilidad nula. Así mismo, a un 100% de concentración del extracto de Zea mays, las cepas presentaron un 80% de sensiblidad límite. ici. y un 20% de sensibilidad nula con una media de 8.8 (sensibilidad límite). ed. (Tabla 2.1).. M. Para las cepas de S. aureus meticilino resistentes, tanto para las concentración de 50%, 75% y 100% presentaron un 50% de sensibilidad límite y un 50% de. %. de. sensibilidad nula, con una media de 7.7 para las concentraciones de 50 y 100 y una media de 7.4 para la de 75% (sensibilidad nula para las 3. te c. a. concentraciones) (Tabla 2.1).. Ambas cepas mostraron tener una sensibilidad media a los discos con. lio. Vancomicina en todas las repeticiones, al presentar halos de inhibición con. Bi b. una media de 15.1mm para las cepas SAMS y 15.4 para las cepas SAMR.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 1. Determinación del efecto antibacteriano: Mediante la difusión de discos de Kirby y Bauer. Resultados obtenidos por el grupo investigador. CEPAS. DISCOS. n°. MEDIA. DESV EST. 6.9. 75%. 10. 8.1. 100%. 10. 8.8. Vancomicina. 10. 50%. 10 10. de. 75%. 0.88 0.88. ici. 10. 2.14. ed. SAMR. 50%. 15.1. 0.88. 7.7. 1.15. 7.4. 0.8. M. SAMS. na. (mm). 10. 7.7. 1.7. Vancomicina. 10. 15.4. 0.84. lio. te c. a. 100%. La diferencia entre los resultados fue significativa en el caso de las cepas de. Bi b. S. aureus sensibles a meticilina (P: 0.013) y no significativa en caso de las cepas de SAMR (P: 0.27) usando la Distribución de Fisher con un grado de confiabilidad del 95%.. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Determinación de la concentración inhibitoria (CI) in vitro: Resultados obtenidos por grupo investigador Cepas. Discos. N°. Media. DesvEst. 3.8. 8.35. 75%. 10. 1.9. 4.0. 100%. 10. 0. Vancomicina. 10. 50%. 10. 75%. 10. 100%. ici. na. 10. 10. a. 0. 0. 633.8245. 142.9. 10. 291.027. 162.2. 149.6306. 52.9. 0. 0. te c. Vancomicina. 0. ed. SAMR. 50%. M. SASM. de. (UFC). lio. Con respecto a la determinación de la Concentración Inhibitoria (CI), para las. Bi b. cepas SAMS, tanto en las concentraciones de 50 y 75 % se evidenció crecimiento solo en el 20% del total de muestras: 24 y 14 UFC para la concentración de 50%, con una media de 3.8 UFC y 11 y 8 UFC para la de 75% con una media de 1.9 UFC. Sin embargo, las cepas expuestas al extracto al 100% no mostraron crecimiento en ninguna placa UFC =0 (Gráfico 1).. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M. Gráfico 1: Crecimiento bacteriano (UFC) en cepas de SAMS expuestas a. de. extracto acuoso de Zea mays y a Vancomicina. Para las cepas SAMR, en las tres concentraciones hubo crecimiento bacteriano, con. a. una media de 6339, 2937 y 1583 UFC en las cepas expuestas al extracto al 50%,. te c. 75% y 100% respectivamente.. Mientras que los controles expuestos a Vancomicina, no se evidenció crecimiento. Bi b. lio. alguno tanto para las cepas SAMS como SARM.. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Media de Unidades Formadoras de Colonias SAMS 700 600. 633.8. 500. 300. na. 400 291. 200. 0 50%. 75%. 100%. M. Concentración. 0 Vancomicina. ed. 149.6. 100. ici. Media (UFC). de. Gráfico 2: Crecimiento bacteriano (UFC) en cepas de SAMR expuestas a extracto acuoso y a Vancomicina. a. La diferencia entre los resultados, comparada con el estándar (2x106 UFC). te c. fue significativa tanto para el caso de las cepas de S. aureus sensibles a meticilina (P: 0.008) como para las cepas de S. aureus meticilino resistentes y. lio. no significativa en caso de las cepas de SAMR (P: 0.014) usando la. Bi b. Distribución de Fisher con un grado de confiabilidad del 95%.. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN Los resultados, demostraron que las cepas ce S. aureus sensibles a meticilina son sensibles al extracto de Zea mays (Tabla 1) y presentan poder bactericida en el extracto acuoso al 100% y un efecto antibacteriano inhibitorio en. na. concentraciones menores, plasmados en la Tabla 2.Esto se debería a que el extracto acuoso a elevadas concentraciones actuaría como como bactericida.. ici. Si bien al momento de realizar este trabajo, no se encontró literatura. ed. relacionada al uso de su extracto como bactericida, si existe referencia sobre. M. el poder bactericida de los polifenoles (compuestos también presentes en el Zea mays) en extractos de Punicagranatum L.(granada) sobre E. coli y S.. de. aureus31, Zizyphusjujuba (azufaifo) y Zanthoxylum piperitum(Pimienta de Sichuan) sobre SAMR32, Orthosiphon stamineus (te de Java) sobre S. aureus,. te c. a. B. cereus y H. alvei entre otros arrojando resultados similares33.. Así mismo, se ha documentado que los diferentes grupos de polifenoles tienen. lio. sensibilidad a determinados agentes infecciosos, estos comprenden tanto. Bi b. algunas bacterias, virus y hongos, como por ejemplo los flavonoles tienen poder antibacterial frente a V. cholerae, E. coli, H. pylori, posen efecto antiviral sobre los adenovirus, enterovirus y poder antifúngico contra Candida albicans; los Taninos tienen efecto sobre E. coli, S. aureus y contra el virus de la influenza A, entre otros34.. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Sin embargo, aún no se tiene muy claro el mecanismo por el cual los polifenoles pueden comportarse como bactericidas. Existen algunas hipótesis que implican la formación de especies reactivas de oxígeno (EROS); las cuales. generan. un. estrés. oxidativo,. ocasionando. peroxidación 36. así. na. macromoléculas ocasionando la fragmentación del ADN bacteriano35,. de. como la interrupción de la membrana celular, alterando así la permeabilidad. ici. de membrana, destruyendo el sistema de trasporte de electrones y la. ed. inhibición de enzimas incrustadas en la membrana. El daño a este nivel se ve. M. reflejado en el trabajo de Cuchnie y colaboradores (2007), quien luego de exponer a cepas de S. aureus a una disolución acuosa con galangina (un. de. flavonol), observó la agregación microscópica en racimos, que adoptaba las cepas muertas de S. aureus, planteando un posible daño en la membrana. a. citoplasmática, al postular que galangina penetra y expone las regiones. te c. hidrófobas presentes dentro de la bicapa de fosfolípidos de las membranas bacterianas, resultando la agregación de regiones hidrofóbicas de diferentes. lio. células37.. Zea mays, los. Bi b. Debido al poder antioxidante del extracto acuoso del. polifenoles de dicha planta han sido estudiados, por lo que se tiene registro de los compuestos que este posee. Entre estos, encontramos principalmente compuestos como los flavonoides, flavanoles, antocianinas, proantocianidinas y ácido gálico. Estos compuestos suelen encontrarse en gran cantidad en la. 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. coronta del maíz, llegando a contener alrededor del 80% del total de polifenoles del fruto 35, 38 y 39. En el presente estudio, se trabajó con extracto acuoso de Zea mays, el cual permite extraer los una gran cantidad de polifenoles, sobretodo las. na. antocianinas, las cuales, como ya se mencionó tienen un efecto antibacterial, antiviral e incluso antifúngico.. ici. Los resultados en la prueba de efectividad bacteriana de Kirby y Bauer no. ed. demostraron un efecto significativo en ambas cepas (Tabla 1), estos. M. resultados podrían deberse a una humedad excesiva del medio de cultivo o a un deterioro en los discos de aplicación lo que no permitió una buena difusión. de. del inóculo en toda la superficie del disco, generando así un halo inhibitorio escaso.. a. Sin embargo en la prueba de micro dilución, este efecto si se manifestó sobre. te c. todo en las cepas SASM (Gráfico 1), demostrando que las cepas de S. aureus sensibles a meticilina lo son también para la gran variedad de polifenoles que. lio. posee el extracto de Zea mays, lo que no se vio en las cepas resistentes a. Bi b. meticilina. Estás últimas cepas; que cuentan con sistemas de protección para ciertos fármacos como algunos β lactámicos (oxacilina, ampicilina y cefmetazol), a aminoglucócidos como estreptomicina y a macrólidos como eritromicina32; pueden protegerse de los componentes del extracto acuoso de Z. mays con los mismo mecanismo de defensa con el que se defienden de los fármacos como: hidrólisis, acetilación o fosforilación enzimática de los 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. diferentes tipos de polifenoles o síntesis de dipéptidos con afinidad reducida a estos40. A pesar de esto, el efecto fue notable ya que a su máxima concentración, el extracto acuoso disminuyó de un 2x 106 a un 1.5x 102 unidades formadoras de. na. colonias de S. aureus resistentes a meticilina (Gráfico 2). Esto se podría deber a que gran cantidad de flavonoides (presentes en la coronta del Zea mays) que. ici. podrían tener el mismo efecto que la Glabridina, polifenol flavonoide extraído. ed. del Glycyrrhiza glabra, la cual es conocida por estimular genes relacionados a. M. la homeostasis del hierro (fur, ftn, peR), a la detoxificación celular (soda, KatA, alpC, tpx1 y tpx2) y relacionados a la reparación de macromoléculas. de. como el ADN y proteínas (dps, lexA, recA, msrA, trxA y trxB) a bajas dosis (como muchos polifenoles)34, sin embargo a elevadas dosis, Singh y. a. colaboradores (2015) demostraron que la Glabridina inhibe la expresión de. te c. dichos genes en cepas de S. aureus meticilino resistentes41. Este sería la principal causa del efecto antibacteriano inhibitorio del extracto de Zea mays. lio. en las cepas meticilino resistentes, por lo que se podría inducir que a mayor. Bi b. concentración, dichas cepas se vuelven más sensibles a la acción oxidativa de los polifenoles. Además de esto, los polifenoles poseen un efecto adicional en las cepas resistentes a fármacos. Hatano T. y colaboradores evidenciaron in vitro una reducción en la concentración mínima inhibitoria de Oxacilina (128-256 µg/ml a 8-16 µg/ml) en cepas de S. aureus resistentes a meticilina al agregar 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 4µg/ml de licoricidina (flavonoide presente en el Glychyrrhi zauralensis) así como la reducción del MIC de la estreptomicina en presencia de Theasineansina A; subproducto de la Epigalocatequina galato, polifenol presenten en el té negro- Camelliasinensis32.. na. Todo esto es de gran importancia ya que podrían ayudar a reducir la incidencia de efectos adversos como la nefro y ototoxicidad de los. ici. aminoglucósidos, o reducir el efecto anafiláctico en los pacientes alérgicos a. ed. las penicilinas y β-lactámicos, al usarse como coadyuvante en el tratamiento. M. de enfermedades infecciosas, al reducir la dosis de antibiótico, o al disminuir la resistencia de las baterías a dichos antibióticos. Todo esto, se podría lograr. de. en un futuro, ingiriendo de manera oral el extracto acuoso conjuntamente con los antibióticos o a través de la administración de los principios activos. Bi b. lio. te c. a. (polifenoles).. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES:. El extracto de Zea mays tiene efecto bactericida solo en cepas de S. aureus sensibles a meticilina mas no para cepas de S. aureus resistentes a meticilina.. vitro frente a S. aureus sensible a meticilina.. na. El extracto acuoso de Zea mays preparado al 100 % tiene efecto bactericida in. ici. En las cepas de S. aureus meticilino resistentes, el extracto acuoso de Zea. ed. mays no presentó un efecto bactericida in vitro en ninguna de sus. M. concentraciones.. Los extractos acuosos de Zea mays preparados al 50% y 75% presentan un. de. efecto antibacteriano inhibitoria in vitro del extracto acuoso de Zea mays para las cepas de S. aureus sensibles a meticilina.. a. Los extractos acuosos de Zea mays preparados al 50%, 75% y 100%. te c. presentan un efecto antibacteriano inhibitorio in vitro del extracto acuoso de. Bi b. lio. Zea mays para las cepas de S. aureus resistentes a meticilina.. 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. RECOMENDACIONES:. Incrementar investigaciones experimentales para demostrar el efecto antimicrobiano del uso del extracto acuoso de Zea mays “maíz morado” a. na. mayores concentraciones en cepas de SAMS y SAMR , utilizando modelos animales y en humanos.. ici. Realizar estudios que evalúen las características farmacocinéticas de Zea mays. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. como medicamento por diferentes vías de administración.. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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(44) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. M. ANEXOS. 43. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°1: REGISTRO DE IDENTIFICACIÓN DEL ESPÉCIMEN Zea mays L. EN EL HERBARIUMTRUXILLENSE DE LA UNIVERSIDAD. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. na. NACIONAL DE TRUJILLO. 44. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N°2: PREPARACIÓN DEL MATERIAL BOTÁNICO Y DEL. ici. na. EXTRACTO ETANÓLICO DE Tropaeolum majus “MASTUERZO”. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. Fotografía N°1.coronta de Zea mays L.. Fotografía N°2.Medición en gramos de la coronta previa preparación del extracto acuoso. 45. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. na. Fotografía N°3. Preparación del extracto acuoso de Zea mays. Fotografía N°4. Extracto acuoso al 100 % de Zea mays L.. 46. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de. M. ed. ici. na. ANEXO N°3: TÉCNICA DE DIFUSIÓN EN DISCO KIRBY-BAUER. Bi b. lio. te c. a. Fotografía 5 y 6: Elaboración de los discos de Kirby y Bauer. 47. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(49) M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. Fotografía N°7. Formación de los halos de inhibición de los discos embebidos con extracto de Zea mays al 100 %. 48. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(50) M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. Fotografía N°8. Formación de los halos de inhibición de los discos embebidos con extracto de Zea mays al 50%. Fotografía N°9. Formación de los halos de inhibición de los discos embebidos con extracto de Zea mays al 75% 49. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(51) a. de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. Fotografía N°10. Formación de los halos de inhibición de los discos control con Vancomicina vs Extracto acuoso al 100 %. 50. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(52) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de. M. ed. ici. na. ANEXO N° 4: TÉCNICA DE DILUCIÓN EN TUBOS CON CONTEO DE UFC. Bi b. lio. te c. a. Fotografía N°11. Elaboración de las diluciones con extracto acuoso de Zea mays al 50, 75 y 100%. Fotografía N°12. Administración del inóculo de cepas de S. aureus sensibles y meticilino resistentes a cada una de las diluciones. 51. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(53) Bi b. lio. te c. a. de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Fotografía N°13. Sembrando las placas con el asa de Digralsky en agar Muller Hinton. 52. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(54) M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. Fotografía N°14. Sembrado de cepasde S. aureus sin tratamiento. Fotografía N°15. Nulo crecimiento de S. aureus sensible a meticilina expuestas al extracto acuoso al 100% 53. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(55) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. M. Fotografía N°16. Crecimiento de S. aureus sensible a meticilina expuestas al extracto acuoso al 75%. Fotografía N°17.Crecimiento de S. aureus sensible a meticilina expuestas al extracto acuoso al 50% 54. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(56) M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. Fotografía N°18. Crecimiento de S. aureus meticilina resistentes expuestas al extracto acuoso al 100%. Fotografía N°19. Crecimiento de S. aureus resistente a meticilina expuestas al extracto acuoso al 75% 55. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(57) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio. te c. a. de. M. Fotografía N°20. Crecimiento de S. aureus resistentes a meticilina expuestas al extracto acuoso al 75%. Fotografía N°21. Grupo expuesto a Vancomicina: 0 UFC. 56. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(58) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO Nº 05: HOJA DE RECOLECCIÓN DE DATOS Método de difusión Kirby Bauer: Cepas S. aureus meticilino sensibles (SAMS) CONCENTRACIÓNES 75%. 7. Diámetro 3. 7. Diámetro 4. 8. Diámetro 5. 6. ed. Diámetro 2. 7 7. M. 6. 8 8. 10. 8. 10. 8. 12. 8. 8. 6. a te c. Diámetro 6. de. 9. lio. Diámetro 1. ici. (cm). 100%. na. OBSERVACIONES 50%. 7. 9. 12. Diámetro 8. 8. 8. 6. Diámetro 9. 6. 9. 8. Diámetro 10. 6. 8. 8. PROMEDIOS. 6.9 cm. 8.1. 8.8 cm. Bi b. Diámetro 7. 57. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(59) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Cepas de S. aureus Meticilino Resistente (SAMR) CONCENTRACIÓNES 50%. 75%. 7. Diámetro 3. 7. Diámetro 4. 7. Diámetro 5. 6. ed. Diámetro 2. 9 8. M. 9. 6 7 7. 6. 8. 8. 8. 7. 7. 8. a te c. Diámetro 6. de. 7. lio. Diámetro 1. ici. (cm). 100%. na. OBSERVACIONES. 8. 7. 12. Diámetro 8. 8. 8. 8. Diámetro 9. 10. 8. 6. Diámetro 10. 8. 7. 7. PROMEDIOS. 7.7 cm. 7.4. 7.7 cm. Bi b. Diámetro 7. 58. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(60) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Método de Dilución y Conteo de colonias de S. aureus Meticilino Sensible (SAMS). 75%. Placa 1. 0. 0. Placa 2. 0. Placa 3. 24. Placa 4. 0. Placa 5. 14. 100%. ici. 50%. 0. 8. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. Placa 7. te c. a. 0. M. 0. de. ed. Número de colonias. na. CONCENTRACIÓNES. 0. 11. 0. Placa 8. 0. 0. 0. Placa 9. 0. 0. 0. Placa 10. 0. 0. 0. PROMEDIOS. 3.8. 1.9. 0. Bi b. lio. Placa 6. 59. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(61) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Método de Dilución y Conteo de colonias de S. aureus Meticilino Resistentes (SAMR). na. CONCENTRACIÓNES Número de colonias. 50%. 75%. Placa 1. 578.235. 317.25. Placa 2. 521.97. Placa 3. 470.29. Placa 4. 476.875. Placa 5. 584.82. ed. ici. 100%. 158.625 204.72. 413.025. 38.151. 506.8. 135.285. 578.235. 273.155. 107.55. 921.825. 362.345. 234.72. Placa 8. 654.255. 445.95. 107.55. Placa 9. 712.52. 261.325. 171.7. Placa 10. 839.22. 0. 159.625. PROMEDIOS. 633.8245. 291.027. 149.6306. Placa 6. Bi b. lio. Placa 7. te c. a. 0. de. M. 330.42. 178.38. 60. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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