Efecto in vitro del extracto etanólico de tropaeolum majus maztuerzo sobre escherichia coli uropatógena

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. M. ed. ici. na. ESCUELA DE MEDICINA. “EFECTO “IN VITRO” DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Tropaeolum majus. de. “MASTUERZO” SOBRE Escherichia coli UROPATÓGENA” INFORME DE TESIS. te c. a. PARA OPTAR EL GRADO DE. lio. BACHILLER EN MEDICINA AUTOR:. Bi b. ALUMNA: AGUIRRE RODRÍGUEZ ROSA YOSILYN ASESORA: DRA. AYALA RAVELO, MARÍA SOLEDAD CO-ASESORA: DRA. MEJÍA DELGADO ELVA MANUELA. TRUJILLO – PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. DEDICATORIA. na. Dedico este trabajo primero a Dios, quien ha forjado y guiado mi camino desde que inicie esta aventura, y gracias a quien hoy puedo alcanzar una de las metas más importantes de mi vida.. M. ed. ici. A mi padre Santos Eugenio Aguirre Gonzales, la fuerza de mi familia, quien me inculcó el respeto y responsabilidad para con cada uno de mis actos, además del coraje necesario para superar los obstáculos que se presentaron durante el transcurso de mi formación profesional y quien me alentó a seguir adelante siempre, al que amo y respeto con todo mi corazón.. Bi b. lio. te c. a. de. A mi madre Segunda Inés Rodríguez Calderón, pilar de vital importancia quien siempre me brindó su amor y apoyo incondicional en todo momento, quien se preocupó y cuidó de mí cuando pasaba por momentos difíciles y rio conmigo en mis momentos felices, a la que amo y atesoro con todo mi corazón.. A mi hermano Juan Ronaldo Aguirre Rodríguez la chispa de alegría en mi familia, quien en mis momentos de tristeza y cansancio siempre supo sacarme una sonrisa, gracias a quien nunca me siento sola y con el que sé que podré contar toda mi vida. Te amo y eres la alegría de mi corazón.. A mis abuelos Juan Aguirre, Rosa Gonzales, Augusto Rodríguez y Santos Calderón; quienes desde el cielo sé que están orgullosos y me brindan sus bendiciones. Los llevo en mi corazón y sé que me acompañan en todo momento. A mi familia en general, en especial a mi tío Rosendo y a mis tías Enma, Mayla, Flor y a mi primo Jean; por creer en mí y brindarme su apoyo incondicional en la realización de este sueño que comenzó desde mi infancia. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. AGRADECIMIENTOS. ed. ici. na. A la Dra. María Soledad Ayala Ravelo, por alentarme en investigación y ejecución del presente trabajo de tesis, por su asesoramiento acertado y apoyo.. a. de. M. A la Dra. Mejía Delgado Elva Manuela, de manera especial por su profesionalismo, paciencia y apoyo incondicional en la ejecución del presente trabajo de tesis.. Bi b. lio. te c. A mis profesores quienes con su experiencia y conocimientos me guiaron en la realización de esta aventura.. A mis amigos y compañeros, en especial a Krystel, Rosa y Milagritos; con quienes compartí momentos inolvidables en el transcurso de nuestra formación universitaria, a quienes agradezco cada palabra de apoyo en mis momentos difíciles y cada sonrisa en mis momentos de alegría.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FACULTAD DE MEDICINA. ÍNDICE. na. Pág.. ici. DEDICATORIA……………………………………………..……................ii. ed. AGRADECIMIENTOS…………………………………………………….iii RESUMEN………………………………….…………………………...…...5. M. ABSTRACT………………………………………………………….………6 INTRODUCCIÓN……………………………………………………...........7. II.. MATERIAL Y MÉTODO…...……………………………...……………...12. de. I.. te c. a. III. RESULTADOS……………………………………………………………..22 IV. DISCUSIÓN…….……………………………………..................................28 CONCLUSIONES...…………………………………………………..........31. lio. V.. Bi b. VI. RECOMENDACIONES…..……………………………………………….32 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……….…………………………...33. VIII. ANEXOS………………………………………………………………....…39. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN Para evaluar. el efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus. “mastuerzo” sobre Escherichia coli uropatógena, se preparó 3 concentraciones: 25% (250µg/mL), 50% (500µg/mL) y 75% (750µg/mL), mediante el método de Kirby Bauer (difusión en disco) y la determinación de la concentración inhibitoria mínima (CIM), y. na. se expuso a E. coli y 13 repeticiones en cada caso. Existe diferencia estadísticamente significativa del efecto antimicrobiano entre las diferentes concentraciones del extracto. ici. etanólico de Tropaeolum majus sobre el crecimiento de E. coli uropatógena (p<0.05),. ed. para lo cual se utilizó las pruebas de Análisis de Varianza (Anova) y Dunkan. E. coli. M. uropatógena según la Escala de Duraffourd fue sensible a las concentraciones de 25% y 50% y muy sensible a la concentración del 75% del extracto etanólico. La CIM para E.. de. coli uropatógena fue del 75% (750µg/mL). Se concluye así que el extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” tiene efecto antimicrobiano “in vitro” sobre Escherichia. ca. coli uropatógena.. Bi b. lio te. Palabras clave: Tropaeolum majus, Escherichia coli, extracto etanólico.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT It was evaluated the effect "in vitro" of the extract ethanolic of Tropaeolum majus "mastuerzo" on Escherichia coli uropatogena, to concentrations of 25% (250µg / mL), 50% (500µg / mL) and 75% (750µg / mL). We used the Kirby Bauer method and the determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC), doing 13 repetitions with. na. each method. It was observed that there is difference statistically significant antimicrobial effect at the tested concentrations of extract ethanolic of Tropaeolum majus on the growth. ici. of E. coli uropatogena (p < 0.05), discussed the results with the tests, Analysis of. ed. Variance (Anova) and Dunkan. According to the scale of Duraffourd E. coli was sensitive. M. to concentrations of 25% and 50% and very sensitive to the concentration of 75% of the ethanolic extract. The MIC to E. coli uropatogena was of the 75% (750µg / mL). It. de. concludes that the extract ethanolic of Tropaeolum majus "mastuerzo" has antimicrobial effect "in vitro" on Escherichia coli uropatogena.. Bi b. lio te. ca. Key words: Tropaeolum majus, ethanolic extract, in vitro effect, Escherichia coli. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. Las infecciones del tracto urinario (ITU) constituyen una de las patologías infecciosas más frecuentes tanto en la comunidad como en el ámbito hospitalario. Entonces, no sólo representan un problema clínico, sino que tienen además una gran repercusión económica por los costos sanitarios que representan1,2.. na. Las bacterias uropatógenas que causan con mayor frecuencia infección del tracto urinario pertenecen a la familia Enterobacteriaceae, constituyen un grupo grande y heterogéneo. ici. de bacterias Gram negativas3. Más del 95% de las ITU están causadas por una única. ed. especie bacteriana, Escherichia coli causa entre el 75-95% de las infecciones del tracto urinario, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae, entre otros son responsables de la. M. gran mayoría de los episodios restantes1. Escherichia coli es un bacilo Gram negativo, no. de. esporulado, capaz de causar infecciones intraintestinales como extraintestinales4,5. La infección del tracto urinario se define como la presencia y multiplicación de. ca. microorganismos, conocidos como uropatógenos en las vías urinarias con invasión de los. lio te. tejidos. La definición exacta exige no solo la presencia de gérmenes en las vías urinarias, sino también su cuantificación en al menos 105 UFC/mL de orina1,6.. Bi b. La infección del tracto urinario se caracteriza por la aparición brusca de disuria y polaquiuria, con menor frecuencia se observa incontinencia, tenesmo y dolor suprapúbico que a veces aumenta con la micción; además puede presentarse fiebre7. La prueba estándar para el diagnóstico de cualquier forma de ITU es el urocultivo. A veces, no se considera necesario un urocultivo en pacientes ambulatorios con ITU, porque es debida a un uropatógeno prevalente; sin embargo, siempre debería realizarse el urocultivo y si es positivo, solicitar el antibiograma. El urocultivo más el antibiograma tiene dos tiempos: el primero, suele ser de 24 horas, lo que normalmente tarda en hacerse patente el. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. crecimiento del uropatógeno; y un segundo, en el que se hace la identificación y se determina la susceptibilidad, tarda entre 48 y 72 horas. La sensibilidad y especificidad del cultivo utilizando como punto de corte la concentración tradicional de 105 UFC/mL es de 51% y 95%, respectivamente, y cuando el punto de corte se ajusta a una concentración de 102 UFC/mL, de 95% y 85%, respectivamente6.. na. En la actualidad la prevalencia de la resistencia a los antibióticos está aumentando con las enterobacterias, de modo que casi todos los aislados nosocomiales, y muchos de los. ici. aislados adquiridos en la comunidad, son ahora resistentes a varias clases de antibióticos,. ed. lo que complica la antibióticoterapia6. En un estudio realizado en Francia, en el año 2009,. M. según el Observatoire National de l’Epidémiologie et de la Résistance Bactérienne aux Antibiotiques (ONERBA), un 43% de E. coli era resistente a la amoxicilina, un 27% a la. de. asociación de amoxicilina-ácido clavulánico, un 18% al cotrimoxazol y un 10% a las fluoroquinolonas. La resistencia a las fluoroquinolonas ha ido aumentando, en el 2008 un. ca. 18% de las cepas de E. coli causantes de bacteriemias era resistente a las fluoroquinolonas, mientras que la resistencia a la gentamicina y a la cefotaxima sólo. lio te. afectaba al 5% y al 7% de las cepas, respectivamente2. La aparición de la resistencia de los agentes infecciosos a los antimicrobianos ha generado. Bi b. la intensificación de esfuerzos en la investigación, para encontrar nuevos agentes antimicrobianos y para desarrollar nuevas estrategias en el tratamiento de enfermedades infecciosas. Por esta razón, en los últimos años se trata de identificar tratamientos alternativos para las formas clásicas representadas por la terapia con antibióticos. Una posible solución está en el uso de productos naturales, tales como aceites volátiles y extractos extraídos de diversas plantas (Nair et al. 2006). Las plantas han sido utilizadas en tratamientos tradicionales para curar diversas enfermedades durante miles de años,. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. además numerosos estudios han demostrado que los aceites volátiles y extractos obtenidos a partir de plantas presentan efecto antibacteriano, antifúngico, antiviral, insecticida y propiedades antioxidantes8. Las plantas medicinales constituyen una fuente natural importante en la búsqueda de nuevos compuestos con actividades farmacológicas de interés. Así encontramos que. na. Tropaeolum majus “mastuerzo” perteneciente a la familia de las Tropeoláceas, original de Perú y que fue introducida en España en el siglo XVI. Se le conoce comúnmente como:. ici. “La capuchina”, “flor de amor”, “marañuelas”, “pelón”, “sombrerito de abad” o. ed. simplemente “mastuerzo”9. Las partes utilizadas del Tropaeolum majus “mastuerzo”. M. son: las hojas, flores y frutos. Esta planta dentro de su composición química contiene isotiocianato de bencilo, que le confiere propiedades antibióticas que impide la. de. reproducción de numerosos microorganismos patógenos (estafilococos, neumococos, enterobacterias del género Salmonella). Además presenta la ventaja de no destruir la flora. ca. bacteriana ni provocar sensibilizaciones o reacciones alérgicas10,11.. lio te. Entre los métodos de laboratorio pueden ser usados para determinar “in vitro” la susceptibilidad de bacterias ante agentes microbianos el test de difusión en agar es usado en forma rutinaria para bacterias de rápido crecimiento y algunas bacterias patógenas. Bi b. exigentes. Es el que actualmente recomienda el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Para el método de difusión en disco se han desarrollado estándares para su interpretación que están apoyados por datos clínicos y de laboratorio. Resultados confiables sólo se pueden obtener con un disco de ensayo de difusión que use el principio de metodología estandarizada y con medidas de diámetro de zonas12. Los ensayos de susceptibilidad están indicados para apoyar la obtención de nuevos compuestos con actividad antimicrobiana, para utilizarlo en el tratamiento de procesos. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. infecciosos causados por bacterias en las que la identidad del microorganismo no es suficiente para predecir en forma confiable su susceptibilidad12. Estos ensayos son a menudo indicados cuando se piensa que el organismo causante pertenece a una especie capaz de mostrar resistencia a los agentes antimicrobianos más comúnmente usados. 12. . Butnariu M y Bostan, revelaron la acción antimicrobiana del. na. aceite volátil de Tropaeolum majus sobre una amplia gama de especies Gram-positivas y Gram-negativas, utilizándose el método de difusión en disco de papel de filtro, los. ici. resultados se correlacionaron la concentración inhibitoria mínima (CIM)13. Dolejal G, et. ed. al; encontró que el extracto etanólico de Tropaeolum majus presenta actividad antibacteriana para los microorganismos Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus. M. aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Salmonella 14.. de. La presente investigación se justifica en la utilización de plantas como una fuente importante en la búsqueda de nuevos compuestos con actividades medicinales, para su. ca. uso en nuevos tratamientos frente a microorganismos que han adquirido resistencia a los. lio te. antimicrobianos utilizados en forma rutinaria. Por los motivos antes expuestos el presente trabajo, busca determinar: ¿Cuál es el. Bi b. efecto del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Escherichia coli uropatógena?. 1. Enunciado del Problema ¿Cuál es el efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Escherichia coli uropatógena? 2. Hipótesis El extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” tiene efecto antimicrobiano “in vitro” sobre Escherichia coli uropatógena.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3. Objetivos a. General: Evaluar el efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Escherichia coli uropatógena b. Específicos:. na.  Determinar el efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” utilizando concentraciones al. ici. 25%, 50% y 75% sobre Escherichia coli uropatógena.. ed.  Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” utilizando. Bi b. lio te. ca. de. uropatógrna.. M. concentraciones al 25%, 50% y 75% sobre Escherichia coli. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÉTODO. MATERIAL BOTÁNICO Se utilizaron las flores y hojas de Tropaeolum majus “mastuerzo” para la elaboración del extracto etanólico. MICROORGANISMOS. na. Para determinar el efecto del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”, se. ici. utilizó una cepa de Escherichia coli, que se mantuvieron en el Cepario de Microbiología. ed. de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo; las cuales fueron aisladas de pacientes con infección del tracto urinario.. M. POBLACIÓN OBJETIVO. de. Cepa de Escherichia coli mantenida en el Cepario de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo y que fueron aisladas de pacientes con. ca. infecciones del tracto urinario:. lio te. a. Muestra: Para calcular el número de ensayos que se realizarán se utilizó la. Bi b. siguiente fórmula:. n = Número de repeticiones a efectuar en cada investigación. Zα = 1,96; desviación normal para error alfa, para α=0,05. Zβ = 0,84; desviación normal para error beta, para β=0,2. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. S= 0,9 (X1 - X2); valor asumido por no haber estudios previos con estas bacterias. - Reemplazando en la fórmula se determinó una muestra de 13 observaciones para cada concentración (25%, 50% y 75%) del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. - De la cepa de Escherichia coli uropatógena, se utilizó 13. na. muestras para cada concentración (µg/mL) del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” (25%, 50% y. ici. 75%).. ed. b. Criterios de Inclusión. Cepa de Escherichia coli uropatógena del Cepario de Microbiología de la. M. Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo y que se aislaron. de. de pacientes con infecciones del tracto urinario. DISEÑO. ca. Se procesaron un total de 39 repeticiones con la cepa de Escherichia coli uropatógena, divididas en 3 grupos, las cuales fueron expuestas a la acción del extracto etanólico de. lio te. Tropaeolum majus “mastuerzo” a concentraciones de 25% (250µg/mL), 50%. Bi b. (500µg/mL) y 75% (750µg/mL), respectivamente.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Presencia de halos inhibitorios en las muestras de Escherichia coli uropatógena. Colonias de Escherichia coli uropatógena. EXPOSICIÓN. na. Concentraciones al 25%, 50% y 75% del extracto etanólico del Tropaeolum majus “mastuerzo”. ici. (1000 µg/mL es el 100% de concentración). Método de Difusión en Disco. M. . ed. . Método Macrodilución en Caldo. . Bi b. . lio te. ca. de. . 75%. 50% 25% . Presencia de halos inhibitorios en las muestras de Escherichia coli uropatógena. Exposición a concentraciones al 25%, 50% y 75% del extracto etanólico del Tropaeolum majus “mastuerzo” (partiendo 1000 µg/mL que es el 100% de concentración).. Exposición de E. coli uropatógena a concentraciones de 25%, 50% y 75% del extracto etanólico del Tropaeolum majus “mastuerzo” (partiendo 1000µg/mL que es el 100% de concentración), para determinar la Concentración Inhibitoria Mínima (CIM). Conteo de Colonias formadas extracto etanólico del Tropaeolum majus “mastuerzo”.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VARIABLES. INDICADOR. TIPO. ESCALA. VARIABLE INDEPENDIENTE. Concentraciones al 25%, 50% y 75% del extracto etanólico.. Cuantitativa. Ordinal. Discreta. M. de. Concentración Inhibitoria Mínima. (Número de Colonias de Escherichia coli uropatógena ). Cuantitativa. Discreta. lio te. ca. Efecto “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Escherichia coli. Cuantitativa. ed. Diámetros del halo de inhibición. VARIABLE DEPENDIENTE. ici. Extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. na. VARIABLES. PROCEDIMIENTOS. Bi b. 1. Obtención del Extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” a. Preparación de la Muestra . Selección y lavado de. la muestra: El material recolectado fue. transportado al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se seleccionaron las hojas y flores en buenas condiciones y eliminaron las sustancias extrañas presentes en la muestra. Luego se procedió a lavar el material vegetal con agua destilada, seguido de una desinfección, 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó un enjuague de la planta con suficiente agua destilada estéril, para retirar los residuos de hipoclorito15,18. . Secado: Las hojas y flores de mastuerzo fueron colocada sobre papel Kraft y secadas primero a temperatura ambiente por 24 horas, y luego en la. . na. estufa a una temperatura de 40°C15,18. Pulverización: Una vez secadas se pulverizó con ayuda de un. Tamizaje: El material obtenido de la pulverización, se pasó a través de. ed. . ici. mortero15,18.. los tamices, obteniéndose partículas de polvo semifino15,18. Almacenamiento: El polvo de las hojas y flores de mastuerzo obtenidas,. M. . de. se guardaron en frascos de vidrio de color ámbar de boca ancha15,18. b. Preparación del Extracto Etanólico. ca. En un envase estéril de vidrio ámbar de boca ancha de 1 litros de capacidad, fueron colocados 100 g de polvo de hojas y flores previamente pulverizadas. lio te. y tamizadas. Luego, se añadió etanol al 70% cantidad suficiente hasta cubrir la muestra por sobre 2 cm de altura. Teniendo en cuenta que la mezcla debe. Bi b. ocupar como máximo las ¾ partes del recipiente. Se tapó el recipiente y se maceró en ausencia de luz por 7 días, agitándose 10 minutos, dos veces al día. Transcurrido el tiempo de maceración, fue filtrado el líquido al vacío, con papel de filtro Whatman N° 1. Al líquido filtrado se le denominó extracto etanólico. A continuación, el extracto etanólico se concentró en un rotavapor (Heidolph WB 2000) a presión reducida y temperatura controlada, no mayor a 40°C. Finalmente, el extracto fue colocado en cápsulas de porcelana y llevado a secar a la estufa a 40ºC. A partir de este extracto seco se preparó una. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. solución madre del extracto etanólico a la concentración de 100% (1000 µg/mL). De la solución madre fueron preparadas las demás concentraciones de 75% (750 µg/mL), 50% (500 µg/mL) y 25% (250 µg/mL). Luego cada concentración del extracto fue esterilizado por filtración con membrana, usando filtros Millipore de 0.4µm y 0.22µm. Finalmente, las. na. concentraciones preparadas del extracto etanólico se colocaron en viales ámbar de 10 mL y fueron almacenadas a 4°C hasta su posterior utilización15,16.. ici. 2. Prueba de Antibiograma:. ed. a. Técnica de difusión en disco de KIRBY-BAUER. Es un estudio de susceptibilidad por difusión en disco. Se basa en la capacidad. M. de muchos agentes antimicrobianos de difundir en el agar creando un. de. gradiente continuo de concentración. Si el disco que contiene el antibiótico se deposita sobre una placa recién inoculada, se producirá la inhibición del. ca. crecimiento del microorganismo analizado en un punto del gradiente y dará como resultado un área concéntrica al disco de inhibición del crecimiento. La. lio te. zona de inhibición es medida y se relaciona inversamente con la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), permitirá la distinción de cepas. Bi b. sensibles, resistentes o intermedias19. Para que esta prueba resulte efectiva debe pasar por los siguientes pasos: . Medio de Cultivo Agar Müeller -Hinton (MH): Medio ideal para realizar pruebas de susceptibilidad antimicrobiana debido a su alta reproducibilidad, su bajo contenido de substancias inhibidoras y el crecimiento satisfactorio que presentan la mayoría de patógenos21.. . Preparación del inóculo: Se seleccionaron cinco colonias del microorganismo en estudio de la cepa en que se haya obtenido el. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. aislamiento primario del microorganismo. Fueron transferidas las colonias solo tocando la parte superior de cada una con el asa bacteriológica a un tubo que contenga 3.5cc de caldo estéril de Müeller-Hinton. Incubándose el cultivo a 35ºC, por un tiempo de 18 horas hasta que se produjo un crecimiento moderado. Finalmente se. na. diluyó el cultivo con caldo estéril hasta obtener una turbidez de 0.5 en la escala de McFarland, lo cual corresponde a aproximadamente 108. Siembra de la Muestra: Para la siembra se sumergió un aplicador de. ed. . ici. microorganismos viables por mL19.. algodón estéril dentro de la suspensión del microorganismo en estudio. M. y se procedió al sembrado en las placas Petri conteniendo agar Müeller-Hinton. Al sembrar el medio se tuvo en cuenta lo siguiente:. de.  Evitar inóculos muy concentrados o muy diluidos.. ca.  Permitir que la superficie del medio sembrado se seque durante 520 minutos, manteniendo la caja con la tapa cerrada.. lio te.  Colocar los discos sobre la superficie del agar con pinzas estériles; con éstas, presionar los discos ligeramente sobre el agar para. Bi b. asegurar un contacto uniforme..  Reposar 20 minutos para que difunda el antibiótico. Incubar las cajas inmediatamente o en los próximos 30 minutos a 35°C..  Leer las placas Petri después de 16-24 horas de incubación. . Determinación del efecto antimicrobiano: Se utilizó el método de difusión de discos de Kirby Bauer, para lo cual se prepararon 3 diluciones del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” a concentraciones de 25%, 50% y 75% y las diluciones fueron conservadas a 4ºC para el estudio microbiológico.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Después de sembrar la Cepa de Escherichia coli uropatógena en las placas Petri se realizó la prueba de susceptibilidad, para lo cual se prepararon discos de papel de filtro estériles (6 mm de diámetro), los cuales fueron sumergidos dentro de cada una de las concentraciones (25%, 50% y 75%) del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” por el periodo de 1 hora, luego con una aguja. na. estéril éstos se colocaron sobre los cultivos de Escherichia coli uropatógena en las placas Petri previamente preparadas.. ici. Las placas recién sembradas fueron incubadas a 37ºC por 18 horas. La lectura se. ed. llevó a cabo a las 18 horas mediante la inspección visual de cada placa. Efectuándose el registro en milímetros de los halos de inhibición para cada una de. M. las concentraciones, incluyendo el área del disco del papel de filtro.. de. Además fue empleada en todos los casos la escala de Duraffour que considera la actividad se antimicrobiana en función al diámetro de los halos de inhibición del. ca. crecimiento del microorganismo25:.  Nula (-): Diámetro inferior a 8mm.. lio te.  Sensible (+): Diámetro entre 8 a 14mm.  Muy sensible (++): Diámetro entre 14 a 20mm.. Bi b.  Sumamente sensible (+++): Diámetro superior a 20mm. b. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI): Macrodilución en caldo Müeller Hinton La concentración mínima inhibitoria (CIM) es la menor concentración de antimicrobiano capaz de inhibir completamente el desarrollo bacteriano. El caldo Müeller Hinton es el medio recomendado para las pruebas de sensibilidad de patógenos aeróbicos o facultativos de crecimiento rápido17.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Preparación del Inóculo y Mezcla con las Diluciones del Extracto Etanólico: Se preparó un inóculo bacteriano (como el preparado para la prueba de disco difusión), ajustando la turbidez del caldo de cultivo al estándar 0,5 de McFarland para que contenga 105 UFC/ml. Luego se colocó 0.2 mL del inóculo estandarizado a cada tubo del extracto etanólico. na. de Tropaeolum majus “mastuerzo” en sus diferentes concentraciones (25%, 50%, 75%), conteniendo 0.8 mL del mismo y a los tubos controles. ici. de crecimiento, y finalmente se homogenizó la mezcla. No transcurrieron. ed. más de 15 minutos entre la preparación del inóculo y su colocación en el tubo17,19.. Incubación: Todos los tubos se colocaron a 37°C por 24 horas. Se selló. M. . de. cada tubo de ensayo con algodón.. Después del tiempo transcurrido se tomó 0.1 mL de cada tubo para. ca. sembrarlo en placas conteniendo agar Müeller Hinton, dispersando la muestra con el asa de Drigalsky. Se incubaron nuevamente las placas Petri. lio te. sembradas a 37°C por 18 horas, luego de las cuales se contaron las unidades formadoras de colonias (UFC)17,19.. . Lectura de los resultados: La CMI es la menor concentración del. Bi b. extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” capaz de inhibir completamente el desarrollo bacteriano. Para determinar el punto final de desarrollo, se determinó las cuentas viables de UFC en cada una de las placas Petri sembradas22.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Para la presente investigación se utilizó tablas de resumen del promedio de diámetros de los halos de inhibición y unidades formadoras de colonias (UFC) de E. coli uropatógena, así mismo se utilizaron gráficos adecuados para presentar los resultados de la investigación. Se utilizó el análisis de varianza y la prueba de Duncan; para ambas. na. pruebas estadísticas se consideró un nivel de significancia de 0.05. Se contó con el apoyo. ici. de una hoja de cálculo de Microsoft Excel y el programa Statistica v 10.. ed. ASPECTOS ÉTICOS.  El proyecto de investigación se presentó para consideración, comentario, consejo. Universidad Nacional de Trujillo.. M. y aprobación de los comités designados por la Facultad de Medicina de la. de.  Para la realización de la investigación se tuvo en cuenta los principios de. ca. bioseguridad, prestando atención adecuada a factores que puedan dañar el medio ambiente. Además se consideraron las normas establecidas según el Código de. lio te. Ética y Deontología del Colegio Médico del Perú en la Sección segunda: De los Preceptos Deontológicos en la Práctica Médica. Título III: De los Documentos. Bi b. Médicos. Capítulo 6: Del trabajo de Investigación. Artículo 42°. Todo médico que investiga debe hacerlo respetando la normativa internacional y nacional que regula la investigación con seres humanos, tales como las “Buenas Prácticas Clínicas”, la Declaración de Helsinki, la Conferencia Internacional de Armonización, el Consejo Internacional de Organizaciones de las Ciencias Médicas (CIOMS) y el Reglamento de Ensayos Clínicos del Ministerio de Salud23.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Se observa la medida de los halos de inhibición registrados en 13 repeticiones expuestos a cada una de las tres concentraciones del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” (25%, 50% y 75%). Se Encontró que el promedio de los diámetros. na. de los halos de inhibición a las concentraciones de 25%, 50% y 75% son de 9.31 mm, 11.85 mm y 15.85 mm respectivamente, es decir que a mayor concentración del. ici. extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” el promedio de los diámetros de. ed. los halos de inhibición también se incrementa (Ver tabla N°1 y Gráfico Nº 1).. M. Según los valores obtenidos se evidencia que E. coli uropatógena es sensible al. de. extracto a las concentraciones de 25% y 50% (+) y muy sensible a la concentración. ca. de 75% (++), según la Escala de Duraffourd (Ver Gráfico Nº 1).. Existe diferencia estadísticamente significativa entre el promedio del diámetro de los. lio te. halos de inhibición del crecimiento de E. coli en función a la concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”, (p<0.05), (Ver Anexo 1: Tabla. Bi b. N° 2).. Se comparó cada uno de los promedios de halos de inhibición de crecimiento de Escherichia coli uropatógena tras las exposición a los discos con extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” a diferentes concentraciones, y mediante el Análisis Estadístico Método de Duncan se corroboró que existe diferencia estadísticamente significativa entre los tratamientos, siendo el mejor el extracto etanólico al 75% de concentración (p<0.05), (Ver Anexo 1: Tabla N° 3).. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se observa el número de UFC registradas en las 13 repeticiones expuestos a cada una de las tres concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” (25%, 50% y 75%) y los promedios de éstas. Con el incremento de la concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” se produce una disminución del número de UFC de Escherichia coli uropatógena. Encontrándose que el promedio. na. de UFC que crecen tras ser expuestas a las concentraciones de 5%, 50% y 75% extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” son de 594.69 UFC/mL, 176.23. ici. UFC/mL y 0 UFC/mL respectivamente. La concentración inhibitoria mínima de. ed. (CIM) del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” sobre Escherichia coli uropatógena fue del 75% (750µg/mL), porque es la menor concentración a la que. de. M. no se produce crecimiento de ninguna UFC (Ver tabla N°2 y Gráfico Nº 2).. Existe una diferencia estadísticamente significativa entre el crecimiento de Unidades. ca. Formadoras de Colonias de E. coli en función a la concentración del extracto etanólico. lio te. de Tropaeolum majus “mastuerzo”, (p<0.05), (Ver Anexo 2: Tabla N° 2).. Se comparó cada uno de los promedios del número de UFC de Escherichia coli uropatógena en función de las tres concentraciones del extracto etanólico de. Bi b. Tropaeolum majus “mastuerzo”. Se determinó las existencia de tres grupos estadísticamente diferentes en cuanto a la actividad inhibitoria del crecimiento de E. coli uropatógena a un nivel de significancia de (p<0.05), corroborado mediante el Análisis Estadístico Método de Duncan, siendo el mejor tratamiento el extracto etanólico al 75% de concentración (Ver Anexo 2: Tabla N° 3).. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla Nº 1: Diámetro de halo de inhibición de Escherichia coli uropatógena en función de la exposición a tres diferentes concentraciones de extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” CONCENTRACIÓN 50%. 75%. REPETICIONES. (250µg/mL). (500µg/mL). (750µg/mL). Medida 01 (mm). 12 mm. 12 mm. 18 mm. Medida 02 (mm). 11 mm. 13 mm. 17 mm. Medida 03 (mm). 7 mm. 10 mm. 15 mm. Medida 04 (mm). 10 mm. 9 mm. 14 mm. Medida 05 (mm). 8 mm. ed. ici. na. 25%. 15 mm. 10 mm. 13 mm. 14 mm. 9 mm. 12 mm. 15 mm. 8 mm. 13 mm. 16 mm. 7 mm. 14 mm. 16 mm. 11 mm. 12 mm. 18 mm. Medida 11 (mm). 10 mm. 10 mm. 17 mm. Medida 12 (mm). 9 mm. 13 mm. 15 mm. Medida 13 (mm). 9 mm. 12 mm. 16 mm. 121 9.31 mm. 154 11.85mm. 206 15.8mm. M. 11 mm. Medida 06 (mm). Medida 08 (mm). ca. Medida 09 (mm). de. Medida 07 (mm). Bi b. lio te. Medida 10 (mm). Total Promedio. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gráfico N° 1: Promedio del diámetro de halos inhibición del crecimiento de Escherichia coli uropatógena en función de cada una de las tres concentraciones del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. 15.85 14.00 11.85 12.00 9.31. ici. 10.00. na. 16.00. ed. 8.00. M. 6.00 4.00 2.00. 0.00 25%. de. Promedio de los diamettros de los halos de inhibición (mm) Escherichia coli uropatógena. 18.00. 50%. 75%. lio te. ca. Concentración del Extracto Etanólico de Tropaeolum majus "mastuerzo". Bi b. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 2: Concentración inhibitoria minina según el número de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de Escherichia coli uropatógena en función de tres concentraciones del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”.. CONCENTRACIÓN 25%. (250µg/mL) (500µg/mL) 550. 100. Placa 02: UFC/mL. 650. 180. Placa 03: UFC/mL. 635. Placa 04: UFC/mL. 434. Placa 05: UFC/mL. 720. Placa 06: UFC/mL. 574. ed. 146. 0 0 0 0. 178. 0. 160. 0. 658. 176. 0. 728. 188. 0. de. M. 150. ca. Placa 08: UFC/mL. (750µg/mL). ici. Placa 01: UFC/mL. Placa 07: UFC/mL. 75%. na. REPETICIONES. 50%. 536. 256. 0. Placa 10: UFC/mL. 586. 265. 0. Placa 11: UFC/mL. 390. 160. 0. Placa 12: UFC/mL. 678. 170. 0. Placa 13: UFC/mL. 592. 162. 0. Total. 7731. 2291. 0. Promedios. 594.69. 176.23. 0. Bi b. lio te. Placa 09: UFC/mL. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Gráfico N° 2: Promedio de UFC/mL de Escherichia coli uropatógena con cada una de las tres concentraciones del extracto etanólico de Tropaeolum majus. 700.00 594.69. na. 600.00 500.00. ici. 400.00. ed. 300.00. 176.23. M. 200.00 100.00 0.00 25%. de. Promedio de Unidades Formadoras de Colonias (UFC /ml) de Escherichia coli uropatógena. “mastuerzo”. 0.00 50%. 75%. lio te. ca. Concentración del Extracto Etanólico de Tropaeolum majus "mastuerzo". Bi b. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. Los productos naturales han sido utilizados durante siglos en cada cultura del ámbito mundial. Los científicos y profesionales de la medicina han dirigido sus investigaciones a la identificación y aislamiento de estas sustancias que tienen actividad antimicrobiana y han logrado probar que un gran número de especies. na. vegetales inhiben el crecimiento de bacterias y hongos patógenos para el hombre24. El presente estudio demostró el efecto antimicrobiano “in vitro” del extracto etanólico. ici. de Tropaeolum majus “mastuerzo” a tres diferentes concentraciones 25%, 50% y 75%. en disco) y con la determinación de la CIM.. ed. frente a Escherichia coli uropatógena utilizando el método de Kirby Bauer (difusión. M. Se determinó que tras la exposición de Escherichia coli uropatógena al extracto. de. etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” a tres diferentes concentraciones 25%, 50% y 75% los promedios de los diámetros de los halos de inhibición son de 9.31 mm,. ca. 11.85 mm y 15.85 mm respectivamente, es así que según los valores obtenidos al comparar los promedios de los diámetros de los halos de inhibición según la escala. lio te. de Duraffourd, se evidencia que E. coli uropatógena es sensible al extracto a las concentraciones de 25% y 50% (+) y muy sensible a la concentración de 75% (++).. Bi b. Existe diferencia estadísticamente significativa entre el promedio del diámetro de los halos de inhibición del crecimiento de E. coli en función a la concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”, (p<0.05), siendo el mejor el extracto etanólico al 75% de concentración (Anexo 1: Tabla N° 3). El efecto inhibitorio se debería a los diversos principios activos, dentro de los que encontramos a los glucosinolatos los cuales provienen de los metabolitos secundarios y son un grupo de tioglucósidos en plantas del orden Brassicales que incluye a la especie Tropaeolum majus “mastuerzo” encontradas en sus flores y hojas26.. Una de las. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. principales acciones es su actividad antimicrobiana, se explica por la presencia del isotiocicato de bencilo un producto de degradación de la glucotropaeolina (principal glucosinolato)27,28. El isotiocianato de benzilo, un compuesto lipofílico, el cual le confiere propiedades antibióticas; que actúa como un verdadero bacteriostático que impide el crecimiento de numerosos microorganismos patógenos (estafilococos, neumococos)24.. na. Así mismo al realizar el tamizaje fitoquímico del extracto etanólico de las hojas y flores de Tropaeolum majus “mastuerzo” mediante el ensayo de Fehling se reconocieron la. ici. presencia de azúcares reductores en el extracto etanólico con alta evidencia (+++); lo que. ed. sugiere la presencia de glucosinolatos y por consiguiente de isotiocianato de bencilo que le daría el efecto antimicrobiano al extracto (Anexo 4). La actividad antimicrobiana del. M. isotiocianato de bencilo ha sido ampliamente documentada, es así que Jang y cols (2010). de. investigaron las actividades antibacterianas de 4 isotiocianatos (3-butenilo, 4-phentenyl, 2-feniletilo, e isotiocianato de bencilo) contra 4 bacterias Gram-positivas (Bacillus. ca. cereus, Bacillus subtilis, Listeria monocytogenes y Staphylococcus aureus) y 7 Gramnegativo bacterias (Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella. lio te. choleaesuis, Salmonella enterica, Serratia marcescens, Shigella sonnei, y Vibrio parahaemolyticus) mediante un ensayo de difusión en disco de agar, encontrando una potente actividad antibacteriana, además fueron más eficaces contra las bacterias Gram-. Bi b. positivas que las contra las bacterias Gram-negativas29. Zanetti y cols. (2003), demostraron que las fracciones de hexano y de cloroformo obtenidas a partir de extracto etanólico de Tropaeolum majus. al 70% presentan metabolitos con actividad. antibacteriana para los microorganismos Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae y Salmonella Setubal. La concentración inhibitoria minima para E. coli uropatógena fue la del 75%, ya que a partir de esa concentración no se presentó crecimiento de ninguna UFC, todas las 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. concentraciones utilizadas del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” tuvieron un efecto inhibitorio “in vitro”.Se encontró que el promedio de UFC de Escherichia coli uropatógena que crecen tras ser expuestas a las concentraciones de 25%?, 50% y 75% del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” son de 594.69 UFC/mL, 176.23 UFC/mL y 0 UFC/mL respectivamente. Entonces a mayor. na. concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” el promedio de UFC/ mL de Escherichia coli uropatógena que crecen es menor. Finalmente se determinó. ici. la existencia de tres grupos estadísticamente diferentes en cuanto a la actividad inhibitoria. ed. del crecimiento de E. coli uropatógena, además se pudo corroborar que existe diferencia significativa entre los tratamientos, siendo el mejor el que presenta la concentración de. M. 75% del extracto etanólico y con el que no hay crecimiento de ninguna UFC de E. coli. de. uropatógena.. Los resultados obtenidos con el presente trabajo de investigación demuestran el efecto. ca. antimicrobiano “in vitro” del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” frente E. coli uropatógena, siendo en la actualidad las bacterias uropatógenas las. lio te. causantes del 80% al 90% de estas infecciones, de éstas el 75-95% son causadas por una única especie bacteriana, Escherichia coli uropatógena. Sin embargo con el uso. Bi b. rutinario de medicamentos estos microorganismos han adquirido resistencia. Es así que, el presente estudio abre nuevas posibilidades en el campo de la investigación clínica como farmacológica, la cual proporciona una nueva opción antimicrobiana natural, eficiente y de bajo costo, para el tratamiento de las infecciones de tracto urinario, además se podrá contribuir a la disponibilidad de información para la generación de nuevos medicamentos en base a plantas como materia prima.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES. 1. El extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” tiene efecto antimicrobiano “in vitro” sobre Escherichia coli uropatógena.. na. 2. El extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo” en las concentraciones 25%, 50% y 75% si presenta efecto inhibitorio “in vitro”. ici. sobre una cepa de Escherichia coli uropatógena, existiendo diferencia. ed. significativa entre las diferentes concentraciones utilizadas.. M. 3. La concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de Tropaeolum. de. majus “mastuerzo” utilizando concentraciones al 25%, 50% y 75% sobre una cepa de escherichia coli uropatógena fue de 75% (750µg/ml), existiendo. Bi b. lio te. ca. diferencia estadísticamente significativa.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. . RECOMENDACIONES. Se recomienda realizar otros estudios para ampliar el espectro de actividad antimicrobiana de Tropaeolum majus “mastuerzo”.. Se recomienda realizar otros tipos de extractos de Tropaeolum majus. na. . “mastuerzo” para compararlos con el extracto etanólico y determinar la. ed. Se recomienda aislar los principios activos causantes de la actividad. M. . ici. efectividad de los diversos extractos.. . de. antimicrobiana de Tropaeolum majus “mastuerzo”.. Se recomienda la realización de pruebas in vivo para valorar la efectividad y. ca. toxicidad que pueden proporcionar los componentes activos de Tropaeolum. Bi b. lio te. majus “mastuerzo”, así como la dosis terapéutica para la población humana.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÀFICAS. 1. Pigrau C. Infección del Tracto Urinario [Internet]. Barcelona: SALVAT; 2013 Dic. [citado. 2014. Jun. 7].. 176. p.. Disponible. en:. http://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/otrosdeinteres/seimc-. na. dc2013-LibroInfecciondeltractoUrinario.pdf. Sep. [citado. 2014. Jun. 7].. 16(3):178-1,2.. Disponible. en:. ed. 2012. ici. 2. Leroy H, Tattevin P. Infecciones Urinarias. EMC - Tratado de medicina [Internet].. M. http://linkinghub.elsevier.com.sci-hub.org/retrieve/pii/S1636541012627305. 3. Puerta A, Mateos F. Enterobacterias [Internet]. España: Medicine; 2010 Ene 2014. Jun. 11].. 10(51):6-1.. de. [citado. Disponible. en:. http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/pdf/Enterobacterias_Medici. lio te. ca. ne2010.pdf. 4. Horna G, Silva M, Vicente W, Tamariz J. Concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida de ciprofloxacino en bacterias uropatógenas. Bi b. aisladas en el Instituto Nacional de Enfermedades Neoplásicas. [revista en internet]. 2005 Mar [citado 2014 Nov 13]; 16 (1): 39-45. Disponible en: <http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1018130X2005000100007&lng=es&nrm=iso>. ISSN 1729-214X.. 5. Puerta A, Mateos F. Enterobacterias. [revista en internet]. 2010 [citado 2014 Nov 13];. 10. (51):. 3426-31.. Disponible. en:. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/pdf/Enterobacterias_Medici ne2010.pdf. 6. Echevarría J, Sarmiento E, Osores F. Infección del Tracto Urinario y Manejo Antibiótico [Internet]. Lima: Acta Méd Peruana; 2006 Ene [citado 2014 Jun 7]. Disponible. en:. http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S1728-. na. 16(3):6-1.. ici. 59172006000100006&script=sci_arttext. ed. 7. González E. Infecciones de tracto urinario. In: Lorenzo-Sellarés V, López-Gómez JM, editors. Nefrología al día [Internet]. 2 ed. Barcelona (Spain): Sociedad. M. Española de Nefrología/Plusmedical; 16/01/2013 [citado 2014 Jul 14].. de. http://dx.doi.org/10.3265/Nefrologia.2010.pub1.ed80.chapter1830. ca. 8. Butnariu M, Bostan C. Antimicrobial and anti-inflammatory activities of the volatile oil compounds from Tropaeolum majus L. (Nasturtium). African Journal. lio te. of Biotechnology [Internet]. 2011 Jun [citado 2014 Jun 14]. 10(31):10-1. Disponible. en:. Bi b. http://www.researchgate.net/publication/236163561_Antimicrobial_and_antiinfl ammatory_activities_of_the_volatile_oil_compounds_from_Tropaeolum_majus _L._(Nasturtium). 9. Nanzi A. Capuchina, Tropaeolum majus L. [Internet]. 1999 Nov [citado 2014 Jun 30]. 6 p. Disponible en: http://www.youblisher.com/p/61602-CapuchinaTropaeolum-majus-L/. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 10. Vanaclocha B, Cañigueral S. Fitoterapia Vademecum de Prescripción. 4ª ed. Edit. Masson España. 2003.. 11. Guía Práctica de Plantas Medicinales y la Salud- Edit. Editors. Barcelona- Cuarta. na. edición 1992. 12. Prat S. Prueba de Susceptibilidad Antimicrobiana por Difusión en Agar [Internet].. ici. Chile: Ministerio de Salud; 2013 Dic [citado 2014 Jun 22]. 42 p. Disponible en:. ed. http://www.ispch.cl/lab_sal/doc/manual_susceptibilidad.pdf. M. 13. Butnariu M, Bostan C. Antimicrobial and anti-inflammatory activities of the. de. volatile oil compounds from Tropaeolum majus L. (Nasturtium). African Journal of Biotechnology [revista en la Internet]. 2011 Jun [citado 2014 Jul 01]; 10(31): DOI:. 10.5897/AJB11.264. Disponible. en:. ca. 5900-5909.. http://www.academicjournals.org/article/article1380902607_Butnariu%20and%. lio te. 20Bostan.pdf. Bi b. 14. Dolejal G, Palermo M, Da Silva S, Vera P, Morel A. Toxicida de Aguda e Ativida de Antibacteriana dos Extratos de Tropaeolum majus L. Acta Farm. Bonaerense [revista en la Internet]. 2003 Sep [citado 2014 Jul 05]; 22 (2): 159-62. Disponible en:. http://www.latamjpharm.org/trabajos/22/2/LAJOP_22_2_1_10_QYO1970ZXK. pdf. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 15. Boncún M, Zari G, Ruiz R, Soto M, Vengas M. Guía de prácticas de Farmacognosia I. 2da edición. 2012. Facultad de Farmacia y Bioquímica. Universidad Nacional de Trujillo.. 16. Miranda M, Cuellar A. Manual de prácticas de laboratorio de análisis. na. farmacognóstico. Editorial Ciencia y Educación. Cuba. 1992.. ici. 17. Malbrán C. Método de Determinación de Sensibilidad Antimicrobiana Por. ed. Dilución. MIC testing. M07-A9. Vol. 32 No. 2. Replaces M07-A8. Vol. 29 No. 2.. M. 18. Miranda M. Métodos de Análisis de Drogas y Extractos. Instituto de Farmacia y. de. Alimentos. Universidad Habana de Cuba.2002.. 19. Bernal M, Guzmán M. El antibiograma de discos: técnica de Kirby-Bauer. [revista. ca. en internet]. 1984 [citado 2014 Nov 13]; 04 (3): 112-121. Disponible en:. lio te. http://pruebas.revistabiomedica.org/index.php/biomedica/article/download/1891/ 1917. Bi b. 20. Remington. Farmacia. 20° ed. Editorial Médica Panamericana S. A. Argentina. 2003.. 21. Murray P, Rosenthal K, Faller M. Microbiología Médica. 6a. ed. España, Elsevier, 2009.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 22. Loreto M, Gardeweg M. Manual de Microdiagnóstica [base de datos en línea] Toma de muestras, medios de transporte, medios de cultivo y pruebas diferenciales [fecha de acceso 29 de Agosto de 2012]. URL disponible en: http://www.lablinsan.cl/manual/MANUAL_PARTE_3.pdf. na. 23. Colegio Médico del Péru. Código de Ética y Deontología. Limma Oct 2007. ici. [citado 2014 Jul 10]. ed. 24. Castillo A, Pascual Y, Cunha L, Lorente C, Cañete F. Evaluación de la actividad antimicrobiana de extractos de hojas y semillas de Morinda citrifolia L. (noni).. M. Rev Cubana Plant Med [revista en la Internet]. 2014 Dic [citado 2017 Ene 10]; 19. de. (1): 374-382. Disponible en: http://scielo.sld.cu/pdf/pla/v19n4/pla09414.pdf. ca. 25. Duraffourd C, Hervicourt D, Lapraz J. Cuaderno de Fitoterapia Clínica.. lio te. Barcelona, 1987.. 26. Wittstock U, Burow M. Glucosinolate Breakdown in Arabidopsis: Mechanism,. Bi b. Regulation and Biological Significance. The Arabidopsis Book / American Society of Plant Biologits. [revista en la Internet]. 2010 Jul [citado 2017 Ene 10]; 8:. e0134.. DOI:. 10.1199. /. tab.0134.. Disponible. en:. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3244901/. 27. Bazylkoa A, Granica S, Filipeka A, Piwowarski J, Stefanska J, Osinska E, Kiss A. Comparison of antioxidant, anti-inflammatory, antimicrobial activity and chemical composition of aqueous and hydroethanolic extracts of the herb of. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tropaeolum majus L. A. Bazylko et al. / Industrial Crops and Products. [revista en la Internet]. 2013 Jul [citado 2017 Ene 10]; (50): 88-94. DOI: 10.1016 / j.indcrop.2013.07.003.. Disponible. en:. http://dx.doi.org.sci-. hub.cc/10.1016/j.indcrop.2013.07.003. na. 28. Agerbirk, N, De Vos M, Kim J, et al. Phytochem. [revista en la Internet]. 2009 Ene [citado 2017 Ene 10]; 8: 101-120. DOI: 10.1007 / s11101-008-9098-0.. ici. Disponible en: http://link.springer.com.sci-hub.cc/article/10.1007%2Fs11101-. ed. 008-9098-0. M. 29. Jang, M, Hong E, Kim G-H , 2010. Evaluation of antibacterial activity of 3butenyl,4-pentenyl, 2-phenylethyl, benzyl isothiocyanate in Brassica vegetables.. de. J. Food Sci. [revista en la Internet]. 2010 Sep [citado 2017 Ene 10]; 75 (7): M412– M416. DOI: doi: 10.1111 / j.1750-3841.2010.01725.x. Disponible en:. Bi b. lio te. ca. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21535549. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Bi b. lio te. ca. de. ANEXOS. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 1 TABLA Nº 1: DIÁMETROS DE HALOS DE INHIBICIÓN EN MM DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Tropaeolum majus “MASTUERZO” SOBRE Escherichia coli UROPATÓGENA.. 50%. (250µg/mL). (500µg/mL). 12 mm. 02. 11 mm. 03. 7 mm. 04. 10 mm. 05. 8 mm. 06 07. (750µg/mL). ici. 01. 75%. na. 25%. 12 mm. 18 mm. 13 mm. 17 mm. ed. NÚMERO DE REPETICIONES. CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO. 15 mm. 9 mm. 14 mm. 11 mm. 15 mm. 10 mm. 13 mm. 14 mm. 9 mm. 12 mm. 15 mm. 8 mm. 13 mm. 16 mm. 7 mm. 14 mm. 16 mm. 11 mm. 12 mm. 18 mm. 10 mm. 10 mm. 17 mm. 9 mm. 13 mm. 15 mm. 9 mm. 12 mm. 16 mm. Total. 121. 154. 206. Promedio. 9.31 mm. 11.85mm. 15.8mm. 10 11. lio te. 12. de. 09. ca. 08. M. 10 mm. Bi b. 13. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 2: Análisis de Varianza para evaluar la diferencia entre el promedio de los diámetros de halos de inhibición de Escherichia coli uropatógena en función a la concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. Suma de Cuadrados. Grados de Libertad. Cuadrado Medio. Prueba F. Tratamiento. 282.52. 2. 141.26. 66.79. Error. 76.15. 36. Total. 6291. 39. ici. ed. 2.115. 0.05. M. P. na. Fuente de Variación. de. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. ca. Tabla N° 3: Prueba Duncan de acuerdo al Promedio del diámetro del halo de. lio te. inhibición de Escherichia coli uropatógena en función de las tres. Bi b. concentraciones del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. Ni. Tropaeolum majus 25%. 13. Tropaeolum majus 50%. 13. Tropaeolum majus75%. 13. GRUPOS DE. INVESTIGACIÓN. Grupo para Alfa 0.05. T1. T2. T3. 9.31 11.85 15.85. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 2 Tabla Nº 1: Unidades Formadoras de Colonias por mL de E. coli uropatógena tras su exposición al extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. 50% (500µg/mL) 100. 02. 650. 180. 03. 635. 146. 04. 434. 05. 720. 06 07. 75% (750µg/mL) 0 0. 178. 0. 574. 160. 0. 658. 176. 0. 728. 188. 0. 09. 536. 256. 0. 10. 586. 265. 0. 11. 390. 160. 0. 12. 678. 170. 0. 13. 592. 162. 0. Total. 7731. 2291. 0. Promedios. 594.69. 176.23. 0. Bi b. lio te. 08. de. 0. NÚMERO DE REPETICIONES. 150. M. 0. ca. ed. ici. 01. 25% (250µg/mL) 550. na. CONCENTRACIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO. FUENTE: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 2: Análisis de Varianza para evaluar la diferencia entre el promedio de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de Escherichia coli uropatógena en función a la concentración del extracto etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. Suma de Cuadrados 2425913.897. Grados de Libertad 2. Cuadrado Medio 1212956. Error. 145359.0769. 36. 4037. Total. 5146670. 39. Prueba F 300.40. ed. ici. na. Fuente de Variación Tratamiento. de. M. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. Tabla N° 3: Prueba Duncan de acuerdo al Promedio del Número de UFC de. ca. Escherichia coli uropatógena en función de las tres concentraciones del extracto. lio te. etanólico de Tropaeolum majus “mastuerzo”. GRUPOS DE. Bi b. INVESTIGACIÓN Tropaeolum majus 25% Tropaeolum majus 50% Tropaeolum majus75%. Grupo para Alfa 0.05. Ni. 13. T1 594.69. 13 13. T2. T3. 176.23 0. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2015.. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO 3 REACCIONES QUÍMICAS DEL TAMIZAJE FITOQUÍMICO SEGÚN MIRANDA Y CUÉLLAR. 1. Ensayo de resinas: Para detectar este tipo de compuesto, adicione a 2 mL de la solución alcohólica, 10 mL de agua destilada. La aparición de un precipitado, indica. na. un ensayo positivo. 2. Ensayo de Fehling: Permite reconocer en un extracto la presencia de azúcares. ici. reductores. Para ello, si la alícuota del extracto no se encuentra en agua, debe. ed. evaporarse el solvente en baño de agua y el residuo redisolverse en 1-2 mL de agua.. M. Se adicionan 2 mL del reactivo y se calienta en baño de agua 5-10 minutos la mezcla. El ensayo se considera positivo si la solución se colorea de rojo o aparece precipitado. de. rojo. El reactivo se prepara de la siguiente forma:. Solución A: Se pesan 35 g de sulfato cúprico hidratado cristalizado y se disuelven. ca. con agua hasta un volumen total de 1000 mL.. lio te. Solución B: Se pesan 150 g de tartrato de sodio y potasio y 40 g de hidróxido de sodio y se disuelven con agua hasta un volumen total de 1000 mL.. Bi b. Las soluciones se tienen preparadas de forma independiente y se mezcla igual cantidad en volumen de cada una de ellas justo en el momento de realizar el ensayo. Dicha mezcla es la que se adiciona a la alícuota a evaluar.. 3. Ensayo de Baljet: Permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos con agrupamiento lactónico, en particular Cumarinas, aunque otros compuestos lactónicos pueden dar positivo al ensayo. Para ello, si la alícuota del extracto no se encuentra en alcohol, debe evaporarse el solvente en baño de agua y redisolverse en la menor cantidad de alcohol (1 mL). En 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.