Determinación de fitoconstituyentes de la raíz y hojas de mimosa albida procedentes de Conache – La Libertad

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(1)BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. (Presidente). Roger Rengifo Penadillos. (Miembro). UI. M. IC A. Segundo Guillermo Ruiz Reyes. (Miembro). BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. Marilú Soto Vásquez. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN Estimados Señores Miembros del Jurado: En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, sometemos a vuestra consideración y elevado criterio, la presente Tesis I. IC A. titulada: “Determinación de fitoconstituyentes de la raíz y hojas de Mimosa albida. UI. M. procedentes de Conache – La Libertad”. O. Q. Esperando que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su criterio. Trujillo, Noviembre de 2015. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. desarrollo del presente trabajo de investigación.. Y. BI. establecido a pesar de la existencia de alguna deficiencia encontrada durante el. QUEZADA GARCIA, Marco W. AUTOR. RIVERA MARTÌNEZ, María del Pilar AUTOR. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A DIOS… Quién supo guiarme por el buen camino, darme fuerzas para seguir adelante y no desmayar en los problemas que se presentaban, enseñándome a encarar las adversidades. IC A. sin perder nunca la dignidad ni desfallecer en el intento. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. GRACIAS. FA R. M. Mis PADRES…. GARCIA VALDIVIEZO. CA. DE. SANTOS ERASMO QUEZADA VILLARREAL Y EVA ESMERALDA. Por su apoyo, consejos, comprensión, amor, ayuda en los momentos. IO TE. difíciles, y por ayudarme con los recursos necesarios para estudiar.. BI. BL. Me han dado todo lo que soy como persona, mis valores, mis. principios, mi carácter, mi empeño, mi perseverancia, mi coraje para conseguir mis objetivos. GRACIAS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mis HERMANOS DORIS, VERONICA, DEYBI, HENRY Y YASIRA Por estar siempre presentes, acompañándome para poderme realizar. A mi sobrina KEYSI quien ha sido y. IC A. es una mi motivación, inspiración y felicidad.. BI. O. Q. UI. M. GRACIAS. A. Y. A la Dra SOTO VÁSQUEZ ROXANA MARILÚ. AC I. Por su esfuerzo y dedicación, su paciencia, sus conocimientos, sus. M. orientaciones, su metodología de trabajar, su persistencia y sobre todo su periodo. GRACIAS. MARCO WILFREDO QUEZADA GARCIA. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. paciencia y su motivación han sido fundamentales a lo largo de este. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A DIOS. Por todas las bendiciones que me da cada, a través de mis padres y profesores. Porque me permite seguir. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. avanzando en los proyectos trazados.. A MIS PADRES. Con mucho cariño le dedico todo mi. esfuerzo y trabajo puesto para la realización de esta Tesis, a mis padres, quienes a lo largo de mi vida han velado por mi bienestar y educación siendo mi apoyo en todo momento, por todo el amor, la paciencia y apoyo que me brindan cada día.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A MI ASESORA. Por los consejos brindados durante la elaboración y ejecución del proyecto. Así mismo en la redacción del. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. presente informe. MARÍA DEL PILAR RIVERA MARTINEZ. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. RESUMEN ................................................................................................................... i ABSTRACT ................................................................................................................ ii INTRODUCCIÓN ......................................................................................... 01. II.. MATERIAL Y MÉTODO............................................................................. 07. III.. RESULTADOS .............................................................................................. 20. IV.. DISCUSIÓN................................................................................................... 22. V.. CONCLUSIONES ......................................................................................... 34. VI.. REFERENCIAS ............................................................................................ 35. VII.. ANEXOS ........................................................................................................ 40. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. I.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN La finalidad del presente trabajo de investigación fue identificar los fitoconstituyentes presentes de la raíz y hojas de Mimosa albida (tapa tapa) procedente de Conache - La Libertad mediante la marcha fitoquímica preliminar de Martínez y Cuellar; realizando así la extracción de principios activos a partir de 1 Kg de Mimosa albida seco y molido tanto en la raíz como en hojas, para luego comenzar a separar los mismos con solventes de diferente polaridad. (diclorometano, etanol y agua), a los cuales se. IC A. procedió a realizar la identificación del tipo cualitativo, haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación, identificándose que. la raíz y hojas presentan. UI. M. fitoconstituyentes como triterpenos y esteroides, flavonoides, lactonas, antocianidinas,. Y. BI. O. Q. taninos, fenoles, catequinas, azúcares reductores, grasas y aminoácidos.. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Palabras claves: Mimosa albida, fitoconstituyentes, marcha fitoquímica.. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT The purpose of this research was to identify present phytoconstituents root and leaves of Mimosa albida (Tapa tapa) from Conache - La Libertad by running preliminary phytochemical and Cuellar Martinez; thereby performing the extraction of active ingredients from 1 kg of dried and ground Mimosa albida both root and leaves, and then begin to separate them with solvents of different polarity (dichloromethane, ethanol and water), to which He proceeded to make the identification of the qualitative type,. IC A. using staining reagents and precipitation, identifying the root and leaves have. M. phytoconstituents as triterpenes and steroids, flavonoids, lactones, anthocyanins,. BI. O. Q. UI. tannins, phenols, catechins, reducing sugars, fats and amino acids.. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. Keywords: Mimosa albida, phytoconstituents, phytochemical march.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÒN. Las plantas medicinales son vegetales que producen componentes químicos que se denominan fitoquimicos o fitoconstituyentes, que tienen un efecto favorable sobre la salud de los seres humanos a pesar de que no son necesarios como nutrientes especiales. A pesar de ello son primordiales en aliviar diferentes enfermedades; es decir, tienden a. IC A. disminuir o neutralizar el desequilibrio orgánico en el organismo enfermo 1,2.. M. Las plantas son consideradas un laboratorio biosintético, que elabora metabolitos. Q. UI. primarios: proteínas, ácidos grasos, polisacáridos, carbohidratos, lípidos, triglicéridos,. O. etc. participando en la actividad celular de todo ser vivo, a partir de estos producen los. BI. fitoconstituyentes a quienes se les atribuye sus propiedades terapéuticas son, sumamente. Y. complejos y en algunos casos aún se desconoce su naturaleza química; otros son. AC I. A. aislados y purificados e incluso sintetizados3, 4,5.. FA R. M. Los diversos fitoconstituyentes sintetizados en las plantas tenemos esteroides, poliosidos, flavonoides, cumarinas, taninos, alcaloides, etc. Dichos compuestos difieren. DE. por su carácter químico, estructura, potencia y concentración, lo que producen ciertos efectos beneficiosos en el organismo para lo cual deben ser extraídos con métodos. IO TE. CA. adecuados y así conocer su acción fisiológica5. La obtención de metabolitos secundarios de plantas es uno de los temas de mayor. BL. interés en la actualidad con el fin de buscar y conocer de donde provienen, los diferentes. BI. mecanismos de su producción (biosíntesis) y la utilización de estos en la planta para los diferentes procesos que permitan su crecimiento (alimentación, mecanismos de defensa, interacción con el medio, entre otros), la utilización de estos en reemplazo de productos sintéticos; mostrando siempre un desarrollo del conocimiento y ayudando a entender mejor otras ramas de la ciencia como la química, la biología y la medicina 6. Para poder determinar los fitoconstituyentes debe asegurarse la presencia de estos a través de métodos de extracción específicos (secuencia lógica de extracción con solventes apropiados, aplicación de pruebas de coloración y precipitación). Es así que. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. una de las técnicas que se emplea para evidenciar la presencia de estos grupos de fitoconstituyentes es la del Tamizaje Fitoquímico de Martínez y Cuellar, donde cada muestra fue sometida a la acción extractiva de solventes de polaridad creciente: diclorometano, etanol y agua7,8. El Perú es considerado el tercer país mega diverso del planeta, lo que implica, que en nuestro territorio existe un gran potencial de estudio de muchas especies vegetales, 50 000 para ser exactos, lo que constituye el 20% de las especies del planeta, de las que, 2. IC A. 000 han sido utilizadas con fines curativos. Las variadas condiciones climáticas y geográficas que nuestro país ofrece, han permitido que se desarrolle esta gran diversidad. UI. M. de flora, existiendo una gran cantidad de especies conocidas, así como por descubrir. Q. (UNIDO, 2006), por lo que, urge la necesidad de estudios preliminares para poder. BI. O. conocer, las que pueden tener potencial terapéutico, por lo que, es necesario estudiarlas. Y. y conocer preliminarmente su composición fitoquímica para abrir paso a estudios más. A. profundos que puedan determinar a estas nuevas especies como fuentes potenciales de. AC I. nuevos fármacos. Realizar el estudio fitoquímico de la raíz y las hojas de la especie. FA R. M. endémica del Perú de la familia Fabaceae es el principal aporte de este trabajo 8. Las clasificaciones están hechas en cuanto a familias y especies como es el caso de la. DE. familia Fabaceae, la cual presenta alrededor de 145 géneros y 1000 especies siendo una. CA. de ellas la Mimosa albida conocida como “Tapa tapa”.. IO TE. El género Mimosa tiene alrededor de 600 especies que viven en las regiones tropicales y subtropicales. Son arbolillos o hierbas con o sin espinas, hojas bipinnadas, legumbres,. BL. plantas membranosas, divididas en artejos que se separan a la madurez 9.. BI. Mimosa albida es un arbusto de 1 m de alto, sus tallos con abundantes espinas encorvadas, hojas pecioladas sensibles al tacto. Su distribución es desde México a Perú, siendo encontrado el ejemplar que estudiaremos en el caserío de Conache el cual está ubicado en el departamento de La Libertad, a una altitud de 89 m.s.n.m. En este lugar la especie de Mimosa albida es usada tradicionalmente la hoja y la raíz como antidiarreico y antibacteriano 10. La especie en estudio no registra antecedentes. No obstante su género presenta las siguientes investigaciones:. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Un estudio sobre la investigación del Efecto del extracto etanólico de Mimosa púdica (mimosa), realizado por Jorge Arroyo (2010) en Lima, encontró que esta planta presenta alcaloides, esteroides y triterpenos, taninos, naftoquinonas, saponinas y flavonoides, atribuyendo a este último la actividad estrogénica in vitro e in vivo 11. Camargo (2000) realizó un proyecto sobre la descripción, distribución, anatomía, composición química y usos de Mimosa tenuiflora (Fabaceae-Mimosoideae) en México encontrando en la corteza de esta planta metabolitos secundarios como: taninos,. IC A. saponinas, alcaloides, lípidos, fitoesteroles, glucósidos y xilosa 12.. M. J.C. Rejón-Orantes, col (2012) en su trabajo de investigación Actividad antinociceptiva. UI. en extracto acuoso de raíz de Mimosa albida Humb. &Bonpl. Ex Willd en ratones, se. O. Q. comprobó que el extracto acuoso posee efectos antinociceptivos en diversos tipos de. Y. BI. dolor a través de mecanismos que no implican la vía sistémica opioide 13.. A. Dnyaneshwar D. Kokane, Rahul Y. More, y col (2009) en su estudio Evaluación de la. AC I. actividad cicatrizante de heridas de la raíz de Mimosa púdica, concluyeron que el. FA R. constituyentes fenólicos presentes14.. M. extracto etanólico presenta buena actividad cicatrizante probablemente por los. DE. Rakotomalala T, Agard C, y col; en la investigación titulada Extracto de Mimosa pigra. CA. atenúa la hipertensión pulmonar experimental crónica. Los resultados mostraron una. IO TE. acción protectora endotelial en extracto hidrometanólico de la hoja de Mimosa pigra, el cual es probable que sea debido a su acción antioxidante puesto que contiene. BL. flavonoides15.. BI. Rekha R y Ekambaram K, realizaron un estudio llamado Actividad hipolipemiante de extracto clorofórmico de hojas de Mimosa púdica. Los resultados obtenidos podrían confirmar que la presencia de fitoconstituyentes tales como flavonoides, alcaloides y glucósidos en el extracto de cloroformo, serían los responsables de la actividad hipolipemiante significativa observada 16.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Según lo expuesto anteriormente se planteó el siguiente problema: ¿Cuáles son los fitoconstituyentes de la raíz y hojas de Mimosa albida (Tapa tapa) procedentes de Conache - La Libertad? La presente investigación es de tipo descriptiva, por tanto, su hipótesis se encuentra implícitamente sostenida en el enunciado del problema científico. Y para responder a este problema no basamos en el desarrollo de la Marcha Fitoquímica preliminar de Martínez y Cuellar; donde se planteó los siguientes objetivos:. IC A. - Determinar los fitoconstituyentes de la raíz y hojas de Mimosa albida (tapa tapa). BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. procedentes de Conache - La Libertad. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. MATERIAL Y MÈTODO. 2.1 MATERIAL. 2.1.1 Material biológico: Raíz y hojas de Mimosa albida (tapa tapa) procedente del caserío de Conache, departamento de La Libertad.. IC A. 2.1.2 Material de vidrio. UI. M. De uso común en el Laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de. O. Q. Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo.. BI. 2.1.3Equipos e Instrumentos de Laboratorio:. -. Refrigeradora Coldex RN30. -. Baño María Presisterm S-140. -. Estufa de Secado THELCO H.W.. -. Balanza triple brazo OHAUS 700/800 series. -. Cocina eléctrica Finely. -. Set de tamices. -. Lámpara manual UV 254 – 365 nm DESAGA. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. Balanza analítica OHAUS GA 200. BI. 2.1.4. -. Material Reactivo:. -. Ácido 3,5 – dinitrobenzoico. -. Ácido acético glacial. -. Ácido clorhídrico. -. Ácido nítrico. -. Ácido pícrico. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Ácido sulfúrico. -. Alcohol amílico. -. Anhídrido acético. -. Bicloruro de mercurio. -. Carbonato de sodio anhidro. -. Clorhidrato de hidroxilamina. -. Cloruro férrico. -. Glicerina. -. Hidróxido de potasio. -. Hidróxido de sodio. -. Magnesio. -. Ninhidrina. -. Nitrato de plata. -. Pentacloruro de antimonio. -. Resorcina. -. Subnitrato de bismuto. -. Sudán III. -. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. -. BL. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. Sulfato cúprico pentahidratado. -. Tartrato de sodio y potasio. -. Tricloruro de antimonio. -. Yodo. -. Yoduro de potasio. 2.1.5 Solventes: -. Acetona. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Agua destilada. -. Benceno. -. Cloroformo. -. Etanol absoluto. -. Diclorometano. -. Etanol 96 °GL. -. Etanol 70 ° GL. -. Éter dietílico. -. Metanol. -. Tetracloruro de carbono. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. -. A. 2.2 MÉTODO. AC I. 2.2.1. RECOLECCIÓN DE LA ESPECIE. FA R. M. La especie de Mimosa albida (tapa tapa) fue recolectada en el caserío de Conache ubicado en el distrito de Laredo. Provincia de Trujillo. Región La. DE. Libertad. A una altitud de 89 m.s.n.m. La recolección de la especie se. IO TE. CA. realizó por el método convencional o clásico de herborización, seleccionando el material en el campo y verificando que estuviera en. BI. BL. buenas condiciones. 2.2.2. IDENTIFICACIÓN. Y DETERMINACIÓN TAXÓMICADE LA. ESPECIE La identificación botánica del material, estuvo a cargo del Dr. Eric Rodríguez Rodríguez, curador del Herbarium Truxillense (HUT). El ejemplar de la especie vegetal fue depositado en el Herbarium Truxillense (HUT) con el código 58005 (Anexo 1).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3. ANÁLISIS FITOQUÍMICO 2.2.3.1. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA 2.2.3.1.1. Selección de la muestra: El material recolectado fue trasportado al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en donde se eliminó las sustancias. IC A. extrañas presentes en el material vegetal y se. necesarias. para. su. utilización;. O. Q. condiciones. UI. M. descartaron partes de la muestra que no reunieron las. Y. BI. eliminándose así restos en la raíz y las hojas marchitas,. AC I. A. además de las que estuvieron cubiertas por hongos y. M. materia extraña.. FA R. 2.2.3.1.2. Lavado de la droga: Luego de la separación de las. DE. sustancias extrañas, se procedió a lavar el material. CA. vegetal con agua potable a chorro y después con agua. IO TE. destilada.. BI. BL. 2.2.3.1.3. Secado: Una vez lavado las muestras de raíz y hojas fueron colocados sobre papel Kraft con orificios y se secó a temperatura 40 °C invirtiéndolas cada día hasta peso constante. 2.2.3.1.4. Pulverización: Una vez secada las muestras de raíz y hojas, estas se pulverizarán con ayuda de un molino. Luego fueron sometidas a un proceso de tamizaje hasta obtener partículas de tamaño homogéneas de 7 mm.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3.1.5. Preparación de los extractos. Se pesaron por separado 50 g de hojas secas y raíces previamente secadas, tamizadas y pulverizadas las cuales fueron sometidas a maceración por 48 horas, en diclorometano. Terminado el tiempo de maceración se filtró el extracto de diclorometano y posteriormente se guardó en frasco de color ámbar para su posterior. IC A. identificación.. UI. M. El macerado de la muestra anterior (diclorometano) se llevó a. O. Q. secar a la estufa de 40°C para evaporar el solvente y. Y. BI. posteriormente se llevó a pesar. Luego fue sometido a. AC I. A. maceración por 48 horas, en etanol de 70° G.L. Terminado el. M. tiempo de maceración se filtró el extracto etanólico, el cual se. FA R. guardó en frasco de color ámbar para su posterior. DE. identificación.. CA. El macerado de la muestra anterior (etanol de 70º G.L.) se. IO TE. llevó a secar a la estufa de 40°C para evaporar el solvente y. BI. BL. posteriormente se llevó a pesar. Luego fue sometido a maceración por 48 horas, en agua destilada. Terminado el tiempo de maceración se filtró el extracto acuoso, el cual se guardó en frasco de color ámbar para su posterior identificación.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3.2. TAMIZAJE FITOQUÍMICO PRELIMINAR El Tamizaje Fitoquímico preliminar se realizó siguiendo el método de Martínez yCuellar17. 2.2.3.2.1. Fundamento: De acuerdo con este método, cada muestra fue sometida a la acción extractiva de solventes de polaridad creciente: diclorometano, etanol y agua,. IC A. modificando el pH del medio con el fin de obtener los. UI. M. fitoconstituyentes de acuerdo a su solubilidad. Luego. O. Q. de separar las fracciones se realizó la identificación de. Y. BI. los fitoconstituyentes haciendo uso de reactivos de. AC I. A. coloración y precipitación.. M. 2.2.3.2.2. Método y Procedimiento: En este caso se empleó un. FA R. esquema general, el cual utilizó una extracción sucesiva. DE. con solventes de polaridad creciente (diclorometano,. CA. etanol y agua). De este modo, se realizó la extracción. BI. BL. IO TE. sucesiva del material vegetal para la aplicación de técnicas de Tamizaje fitoquímico detallado en el. esquema I (Ver Anexo 3). Una vez obtenido los extractos, se realizó la identificación cualitativa de los fitoconstituyentes, mediante. ensayos. químicos. de. coloración. y. precipitación. (Esquemas II, III y IV) (Ver Anexo 4, 5 y 6).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En cada caso, para realizar los ensayos se procedió de la siguiente forma: - Ensayo de Sudán: Permitió reconocer compuestos grasos, para ello, a la alícuota de la fracción diclorometánica, se le añadió 1mL de una solución diluida en agua del colorante Sudán III. Se calentó. IC A. en baño de agua hasta evaporación del solvente. La. UI. M. presencia de compuestos grasos se considera. O. Q. positiva cuando aparecen gotas o una película. Y. BI. coloreada de rojo en el seno del líquido o en las. AC I. A. paredes del tubo de ensayo.. M. - Ensayo de Dragendorff: Permitió reconocer la. FA R. presencia de alcaloides, para ello, cuando la alícuota. DE. del extracto estuvo disuelta en el solvente orgánico,. BI. BL. IO TE. CA. este seevaporó en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1mL de ácido clorhídrico al 1%. Con el extracto acuoso, a la alícuota se le añadió I gota de ácido. clorhídrico. concentrado, (calentando. suavemente y dejando enfriar); con esta solución acuosa ácida se realizó el ensayo añadiéndosele III gotas del reactivo de Dragendorff. Se considera un ensayo positivo de opalescencia (+), turbidez (++) y precipitado (+++).. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Ensayo de Mayer: Se realizó según la forma descrita anteriormente, hasta la obtención de la solución acuosa ácida. Se añadió luego, una pizca de cloruro de sodio en polvo, se agitó y filtró. Se añadió III gotas de la solución reactiva de Mayer. Se considera un ensayo positivo de opalescencia (+),. IC A. turbidez (++) y precipitado (+++).. UI. M. - Ensayo de Wagner: Se procedió al igual que en los. O. Q. casos anteriores de la solución acuosa ácida; se. Y. BI. añadió III gotas del reactivo de Wagner. Se. AC I. A. considera un ensayo positivo de opalescencia (+),. M. turbidez (++) y precipitado (+++).. FA R. - Ensayo de Baljet: Permitió reconocer la presencia. DE. de Cumarinas. Para ello, cuando la alícuota del. BI. BL. IO TE. CA. extracto no se encontró en alcohol, se evaporó el solvente en baño de agua y se redisolvió en la menor cantidad de alcohol (1mL). En estas condiciones se adicionó 1mL del reactivo, considerándose un ensayo positivo la aparición de coloración (+) o precipitado rojo (++).. - Ensayo de Borntrager: Permitió reconocer la presencia de quinonas. Por ello, como la alícuota del extracto no se encontró en cloroformo, el solvente se evaporó en baño de agua y el residuo se redisolvió. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en 1mL de cloroformo. Se agregó 1mL de hidróxido de sodio e hidróxido de potasio Se agitó mezclando las fases y se dejó en reposo hasta su ulterior separación. El ensayo se considera positivo cuando la fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosado (++) o rojo (+++). de. Lieberman-Burchard:. IC A. - Ensayo. Permitió. UI. M. reconocer la presencia de triterpenos y/o esteroides.. O. Q. Para ello, como la alícuota del extracto no se. Y. BI. encontró en cloroformo, el solvente se evaporó en. AC I. A. baño de agua y el residuo se redisolvió en 1mL de. M. cloroformo. Se adicionó 1mL de anhídrido acético y. FA R. se mezcló bien. Por la pared del tubo de ensayo se resbalar. III. gotas. de. ácido. sulfúrico. DE. dejó. BI. BL. IO TE. CA. concentrado sin agitar. Un ensayo positivo se ha de reconocerse por un cambio rápido de coloración. El ensayo se considera positivo por el cambio rápido de coloración rosado-azul (muy rápido), verde intensovisible (rápido) y verde oscuro-negro (final de reacción). Importante: Para realizar este ensayo no. puede haber agua en el medio de reacción, pues ésta con el ácido sulfúrico reacciona de forma violenta y puede ocurrir un accidente.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Ensayo de Catequinas: Para ello se tomó I gota del extracto alcohólico, y con la ayuda de un capilar se aplicó sobre papel filtro. Posteriormente sobre la mancha se aplicó solución de carbonato de sodio. La reacción se considera positiva cuando apareció una mancha verde carmelita al exponerla a la luz UV.. IC A. - Ensayo de Resinas: Para detectar este tipo de. UI. M. compuesto, se añadió a 2 mL de la solución. O. Q. alcohólica, 10mL de agua destilada. La aparición de. Y. BI. un precipitado indica un ensayo positivo.. AC I. A. - Ensayo de Fehling: Permitió reconocer en un. M. extracto la presencia de azúcares reductores. Para. FA R. ello, como la alícuota del extracto no se encontró. DE. solamente en agua, se evaporó el solvente en baño. BI. BL. IO TE. CA. de agua y el residuo se redisolvió en 2 mL de agua. Se adicionó 2 mL del reactivo y se calentó en baño de agua por 8 minutos. El ensayo se consideró positivo cuando la solución se colorea de rojo o aparece precipitado rojo.. - Ensayo de la Espuma: Permitió reconocer la presencia de saponinas. De modo que cuando la alícuota se encontró en alcohol, se diluyó con cinco veces su volumen en agua y se agitó dicha mezcla fuertemente durante 8 minutos. El ensayo se. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. considera positivo si apareció espuma en la superficie del líquido de más de 2 mm de altura y persistente por más de 2 minutos. - Ensayo de Cloruro férrico: Permitió reconocer la presencia de compuestos fenólicos y/o tanino. En el extracto alcohólico, el ensayo determinó tanto. IC A. fenoles como taninos. Para ello, a una alícuota del. UI. M. extracto alcohólico se le añadió III gotas de una. O. Q. solución de tricloruro férrico al 5% en solución. Y. BI. salina fisiológica. En el extracto acuoso, el ensayo. AC I. A. determinó fundamentalmente taninos. Para ello, a. M. una alícuota del extracto se añadió acetato de sodio. FA R. para neutralizar y III gotas de una solución de férrico. al 5%. en. solución salina. DE. tricloruro. BI. BL. IO TE. CA. fisiológica. El ensayo positivo cuando la solución desarrolla:. Coloración. rojo-vino:. compuestos. fenólicos en general; coloración verde intensa: taninos del tipo pirocatecólicos; Coloración azul: taninos del tipo pirogalotánicos. - Ensayo de la Ninhidrina: Permitió reconocer la presencia de aminoácidos libres o de aminas alcohol en general. Se tomó una alícuota del extracto alcohólico, o el residuo de la concentración en baño de agua, si el extracto se encuentra en otro solvente. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. orgánico, se mezcló con 2mL de solución al 2% de ninhidrina. La mezcla se calentó 7 minutos en baño de agua. Este ensayo se considera positivo cuando se desarrolló un color azul violáceo. - Ensayo. de. Shinoda:. Permitió. reconocer. la. presencia de flavonoides. Cuando la alícuota del. IC A. extracto se encontró en alcohol, se diluyó con 1mL. UI. M. de ácido clorhídrico concentrado y un pedacito de. O. Q. cinta de magnesio metálico. Después de la reacción. Y. BI. se esperó 5minutos, se añadió 1 mL de alcohol. AC I. A. amílico, se mezclaron las fases y se dejó reposar. M. hasta que se separaron. Cuando la alícuota del. FA R. extracto se encontró en agua, se procedió de igual. DE. forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico. BI. BL. IO TE. CA. concentrado. El ensayo se considera positivo cuando el alcohol amílico se coloreó de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intensos en todos los casos.. - Ensayo de Kedde: Permitió reconocer en un extracto la presencia de glucósidos cardiotónicos. Una alícuota del extracto alcohólico se mezcló con 1 mL del reactivo y se dejó reposar durante 7 minutos. Un ensayo se consideró positivo cuando se desarrolla. una. coloración. violácea. persistente. durante 1 a 2 horas.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. - Ensayo de Antocianidinas: Permitió reconocer la presencia de flavonoides de estructura C6-C3-C6. Para ellos, se calentó 2mL del extracto alcohólico por 10minutos con 1mL de ácido clorhídrico concentrado. Se dejó enfriar y se añadió 1mL de agua y 2 mL de alcohol amílico. Se agitó y se dejó. IC A. separar las dos fases. La aparición de color rojo a. UI. M. marrón en la fase amílica se consideró un ensayo. O. Q. positivo.. Y. BI. - Ensayo de Mucílagos: Permitió reconocer la. AC I. A. presencia de una estructura tipo polisacárido, el cual. M. forma un coloide hidrófilo de alto índice de masa. FA R. que aumenta la densidad del agua donde se extrae.. DE. Para ello una alícuota del extracto se enfrió en agua. consistencia gelatinosa el ensayo se considera positivo.. BL. IO TE. CA. de 0 a 5 ºC y cuando la solución tomó una. BI. En el estudio Fitoquímico se buscó los siguientes componentes: Alcaloides, Aminoácidos, Antocianidinas, Azúcares Reductores, Catequinas, Compuestos grasos, Cumarinas, Esteroides, Fenoles, Flavonoides, Glicósidos cardiotónico, Lactonas, Mucílagos, Quinonas, Resinas, Saponinas, Taninos y Triterpenoides.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3.3.1 TRATAMIENTO DE RESULTADOS Los resultados se reportaron en cuadros utilizados del programa Microsoft Office ®, donde se indica la ausencia (-) o presencia. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. (+) de los fitoconstituyentes.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. TABLA 1: Fitoconstituyentes identificados en raíz de Mimosa albida (Tapa tapa).. RAÍZ DE Mimosa albida FITOCONSTITUYENTES. ENSAYO. EXTRACTO DICLOROMETANO ETANOLICO 70º. Dragendorff ALCALOIDES. -. Wagner Mayer. -. Lieberman-Burchard. IC A. TRITERPENOS Y ESTEROIDES. M. +++. Baljet. -. COMPUESTOS FENOLICOS. FeCl3. AMINOÁCIDOS O AMINAS. Ninhidrina. QUINONAS. Bortranger. GLUCÓSIDOS CARDIOTÓNICOS. Kedde. SAPONINAS. Espuma. RESINAS. Resinas. AZÚCARES REDUCTORES. Fehling. CATEQUINAS. Catequinas. GRASAS. Sudán. -. +++ + + +++ +++. A AC I. -. M. -. -. FA R. ++. DE. CA. +. +. IO TE. -. BL. +. BI. Leyenda:. +. +. Gelatina. TANINOS. +. -. Mucilagos. POLISACÁRIDOS. +. +. Y. BI. LACTONAS. O. Antocianidinas. Q. UI. Shinoda. FLAVONOIDES. ACUOSO. IDENTIFICACIÓN:. INTENSIDAD* Positiva Negativa. :+ :-. Baja Moderada Alta. :+ : ++ : +++. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 2: Fitoconstituyentes identificados en las hojas de Mimosa albida (Tapa tapa).. HOJA DE Mimosa albida FITOCONSTITUYENTES. ENSAYO. EXTRACTO DICLOROMETANO ETANOLICO 70º. ALCALOIDES. Dragendorff Wagner. +++. Mayer TRITERPENOS Y ESTEROIDES. Lieberman. FLAVONOIDES. Shinoda. LACTONAS. Baljet. COMPUESTOS FENÓLICOS. FeCl3. AMINOÁCIDOS. Ninhidrina. QUINONAS. Bortranger. GLUCÓSIDOS CARDIOTÓNICOS. Kedde. SAPONINAS. Espuma. RESINAS. Resinas. AZÚCARES REDUCTORES. Fehling. CATEQUINAS. Catequinas. GRASAS. Sudán. POLISACÁRIDOS. Mucilagos. TANINOS. Gelatina. IC A. Antocianidinas. O. Q. UI. M. -. +++. ACUOSO. +. +. +. BI. -. Y. -. A. -. -. AC I. -. M. ++. +. + +. + -. DE. FA R. +++ + + +++. Leyenda: IDENTIFICACIÓN:. IO TE. CA. +. INTENSIDAD* :+ :-. Baja Moderada Alta. BI. BL. Positiva Negativa. :+ : ++ : +++. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSION. El tamizaje fitoquímico o “screening” fitoquímico es una de las etapas iniciales de la investigación fitoquímica, que permite determinar cualitativamente los principales grupos de constituyentes químicos presentes en una planta y, a partir de allí, orientar la extracción y/o fraccionamiento de los extractos para el aislamiento de los grupos de mayor interés4. En el presente trabajo se realizó la identificación preliminar de los fitoconstituyentes. IC A. presentes en las hojas y raíz de mimosa albida (Tapa tapa); los cuales son identificados. M. mediante el desarrollo del Tamizaje Fitoquímico de Martínez y Cuellar a partir de los. UI. extractos obtenidos de dicho tamizaje y sus respectivos ensayos cualitativos a los que. BI. O. Q. fueron sometidos.. Y. El tamizaje Fitoquímicoconsistió en extraer los fitoconstituyentes según orden de. A. polaridad ascendente (diclorometano, alcohol 70º y agua),debido a que las células de. AC I. donde se los ha de extraer, constituyen sistemas hidrofílicos internos, donde se. M. encuentran los primeros, inmersos dentro de una vesícula, que consta de una membrana. FA R. lipofílica. Cuando se pulveriza la droga, se rompen las paredes y membranas celulares,. DE. dejando libres las vesículas que almacenan a los metabolitos. Es así, que se partió con solventes de polaridad creciente (diclorometano, etanol y agua) puesto que el. CA. diclorometano, al ponerse en contacto con la droga pulverizada, va a difundirse. IO TE. fácilmente por la membrana vesicular, disolviéndola a su paso y extrayendo los principios activos de polaridad semejante (lipofílicos); este solvente, no extrae aquellos. BL. metabolitos secundarios unidos no covalentemente a sistemas hidrofílicos (proteínas,. BI. péptidos) en el citoplasma expuesto; sino que se repele con estos últimos18,8. La extracción de los fitoconstituyentes se logró realizar al poner en contacto las muestras de raíz y hojas con los diferentes solventes de diferente polaridad, a determinadas condiciones, logrando así solubilizar los fitoconstituyentes que estén presentes, permitiendo su separación y su extracción, para posteriormente detectar cualitativamente la presencia de determinados grupos de fitoconstituyentes mediante la formación de precipitados, coloraciones, etc.17.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La polaridad, es la habilidad de las moléculas de interactuar de distintas formas (comportamiento intramolecular de los fitoconstituyentes y solventes) cuantas más formas de interactuar tenga el solvente, más polar será. Es una propiedad inherente a cada molécula que más importancia tiene sobre la solubilidad, de ésta forma se cumple la regla general de que lo semejante disuelve lo semejante, es decir, una sustancia polar se disolverá en un solvente polar, así mismo una sustancia no polar se disolverá en un solvente no polar 6,17,19.. IC A. El etanol, como solvente de polaridad intermedia, extrae los metabolitos afines; su labor se ve facilitada por la secuencia del procedimiento: el diclorometano ya disolvió las. UI. M. membranas vesiculares, tal es así que solo se remite a romper las interacciones que. Q. mantienen atraídos (no unidos) a los principios activos, hacia los sistemas hidrofílicos.. BI. O. Finalmente, el agua extrae los principios activos más hidrosolubles, debido a su elevada. A. AC I. particularidades de los solventes anteriores20.. Y. polaridad; esta es capaz de extraerlos en sus formas ionizadas, situación que escapa a las. M. La identificación cualitativa de los fitoconstituyentes usa extracciones sucesivas con. FA R. solventes de diferente polaridad, en este caso: diclorometano, etanol 70° y agua respectivamente; estos solventes penetran en la droga vegetal y disuelven las sustancias,. DE. luego se conserva a baja temperatura; y se lleva a polaridad creciente para facilitar la. CA. solubilidad de principios activos que contiene la droga cruda18.. IO TE. El inicio de la extracción de los fitoconstituyentes se realiza con el uso del diclorometano (solvente de baja polaridad) al poner en contacto con las muestras. BL. trituradas de raiz y hojas respectivamente, extrayendo los principios activos de. BI. polaridad semejante (lipofilicos); por ende los fitoconstituyentes como las proteínas y péptidos no son extraídos en el citoplasma expuesto, sino que solamente se repelen21. Posteriormentelas muestras (raíz y hojas) se puso en contacto con el solvente de polaridad intermedia etanol 70º, quien extrae fitoconstituyentes afines ya que su labor se ve facilitada por la disolución previa de las vesículas por acción del diclorometano en la primera extracción, por lo que permite romper solo las interacciones que aún se. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. mantienen atraídas (no unidos) a los principios activos hacia los sistemas hidrofilicos. Por la mayor cantidad de fitoconstituyentes que extrae este solvente y por combinación de propiedades (ofrece la capacidad de formar enlaces de hidrógeno, ceder pares de electrones debido al grupo que esté presente, poseen un extremo lipófílo que puede ayudar a la solvatación de sustratos orgánicos) se puede considerar el mejor22,23. Finalmente las muestras (raíz y hojas) se puso en contacto con el solvente de elevada. IC A. polaridad que fue el agua, este se encarga de extraer fitoconstituyentes mas. UI. M. hidrosolubles, por lo que es capaz de extraerlos en forma ionizadas diferencia que tiene. O. Q. de los otros solventes anteriores, al poseer un numero grande de enlaces hidrogeno;. Y. BI. surgiendo así la interacción dipolo-dipolo22,23.. A. En la tabla 1 y 2 se observan los resultados del tamizaje fitoquímico realizado a las. AC I. hojas y raíces de la especie Mimosa albida, notándose una gran variedad de. M. metabolitos, entre ellos los compuestos fenólicos, los cuales se evidenciaron con la. FA R. aparición de color verde al reaccionar con tricloruro férrico, identificados con mayor. CA. muestras de raíz y hojas.. DE. intensidad en el extracto etanolico en comparación con el extracto acuoso tanto para las. IO TE. También se identificaron a los flavonoides, los cuales dieron reacción positiva con el reactivo de Shinoda dando coloraciones de anaranjado a rojo en la fase amílica.Los. BL. flavonoides son los metabolitos que dan coloraciones a las plantas por eso son. BI. considerados pigmentos naturales, encontrándose generalmente en las flores, frutos y hojas fundamentalmente en forma de glicósidos, lo que les infiere una alta solubilidad en agua y disolventes polares, la cual se incrementa por la alta polaridad de sus estructuras. Los flavonoides protegen a las células de exceso de, radiación ultravioleta, que se acumulan en las capas epidérmicas de las hojas y tallos, además de ser moduladores del trasporte polar de auxinas. Los flavonoides, han sido empleados para la reducción de la fragilidad capilar, protección frente a estados tóxicos agudos, en terapéutica estrogénica e inflamatoria por su acción similar a la cortisona. Además, son. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. usados como antioxidantes, antivirales, antidiarreicos, antihelmínticos y citostáticos. Asimismo, se evidenció la presencia de antocianidinas, dando una coloración rojo a marrón en la fase amílica, estos son un tipo de flavonoides responsables de la mayoría de los colores rosa, rojo, morado y azul en las plantas y se encuentran acumulados en las vacuolas de la célula. Debido a que colorean flores y frutos, las antocianinas son muy importantes en la atracción de animales para la polinización y la dispersión de las semillas. Estos metabolitos, han sido reportados como anticancerígenos, antitumorales,. IC A. antiinflamatorios y antidiabéticos 4,7,17,25,26. Por otro lado, se encontró catequinas en el extracto etanólico de los órganos de las. UI. M. especies estudiadas, las cuales dieron una mancha verde carmelita a la luz ultravioleta,. propiedades. antioxidantes,. antidiabéticas,. O. presentan. antiinflamatorias,. BI. y. Q. indicándonos un ensayo positivo. Estos metabolitos, también son un tipo de flavonoide. Y. inmunoestimulantes 17.. AC I. A. Otro compuesto fenólico encontrado tanto en las muestras de hojas y raíces, son los. M. taninos, los cuales dieron precipitado blanco al reaccionar con gelatina. Estos. FA R. metabolitos secundarios son de sabor amargo, astringentes, que precipitan las proteínas y alcaloides. Los taninos están ampliamente distribuidos en muchas especies de plantas,. DE. donde juegan un papel importante para disuadir a los animales de su consumo y también. CA. en la regulación del crecimiento vegetal y se encuentran en hojas, brotes, semillas,. IO TE. raíces, tallo y tejidos de diversas plantas. Estos metabolitos son un amplio grupo de compuestos polifenólicos hidrosolubles, capaces de precipitar las proteínas y de formar. BL. sales con los alcaloides. Como consecuencia, sus principales propiedades son su. BI. capacidad de curtir la piel y su astringencia.Se caracterizan por poseer acciones antidiarréicas, astringentes, cicatrizantes y hemostáticas. Existen dos tipos de taninos, los hidrolizables, también denominados gálicos o pirogálicos (ésteres de monosacáridos con el ácido gálico, que es un ácido fenol simple) y los catéquicos o condensados o proantocianidinas. (polímeros. formados. por. condensación. de. catequinas. y. leucoantocianos)27,28. Por otro lado, las lactonas, se evidenciaron en las hojas y raíces de la planta en estudio,las cuales reaccionaron con Baljet dando coloración roja. Estos metabolitos le. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. confieren actividades insecticidas y puede ser utilizada en terapia de reemplazo hormonal en mujeres posmenopáusicas. Según los resultados, las lactonas de naturaleza sesquiterpénica se obtuvieron, de acuerdo a su intensidad de coloración, en mayor proporción en el solvente de más baja polaridad; resultando menor en etanol y nula en el agua. Esto justifica la presencia de lactonas muy lipofílicas, las cuales están poco fusionadas, en contraposición con las solubles en agua, que poseen sustituyentes hidrofílicos. Cabe resaltar, también que las lactonas pueden estar en forma de glucósidos; pero éstos son muy inestables (Glucósidos lactónicos) y que se pudieron. IC A. destruir en el tratamiento previo de la droga, a la marcha fitoquímica. Tal es así que no. UI. M. aparecieron en el extracto acuoso 18,29,30.. Q. Respecto a los triterpenos y esteroides, estos se han identificado en las muestras de. BI. O. hojas y raíces; tanto para los extractos de diclorometano y etanolico, los cuales dieron. Y. reacción positiva con el reactivo de Liebermann-Burchard dando coloraciones de rojo. A. (triterpenos) y color azul verdoso (esteroides). Los esteroides biogenéticamente están. AC I. relacionados a los triterpenos. Los esteroides son compuestos fundamentales en la. M. estructura vegetal. Los triterpenos son compuestos de 30 átomos de carbono producidos. FA R. por ciclación del escualeno, los cuales se consideran liposolubles. La reacción de. DE. Liebermann-Burchard es típica de los triterpenos y esteroides que contienen dos dobles enlaces conjugados, en un mismo anillo, en dos anillos adyacentes o un doble en un. CA. anillo adyacente con un grupo hidroxilo. Esta reacción es típica de los ciclos fusionados. IO TE. que contienen dos dobles enlaces conjugados, en un mismo anillo, en dos anillos adyacentes o un doble en un anillo adyacente con un grupo hidroxilo. La reacción debe. BL. realizarse en medio absolutamente anhidro, ya que, al existir moléculas de agua, estas. BI. reaccionan con el anhídrido acético, anulando de esta manera la formación de un agente oxidante, muy necesario para la efectividad del ensayo en mención 18,31,32. El Cloroformo solubiliza a la muestra, favoreciendo la captación de algunas moléculas de agua presentes, debido a que es un solvente inmiscible, que absorbe el agua y el ácido sulfúrico, reacciona con el anhídrido acético, dando lugar a la liberación de hidrogeniones, los cuales catalizan la dimerización del triterpeno inicial y además, la generación de Trióxido de azufre, el agente oxidante que promoverá una deslocalización generalizada y, con ello la generación de un compuesto coloreado 18,31,32.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por otro lado, también se evidencia la presencia de grasas en las hojas y raíces de la especie en estudio. Estos, se identificaron mediante el ensayo de Sudan III; método utilizado generalmente para demostrar la presencia de grasas mediante tinción de triglicéridos, aunque también tiñe otros lípidos. Pertenece al grupo de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen afinidad por estructuras ácidas o básicas. Son insolubles en el agua y tiñen aquellas sustancias que tienen un poder de disolución superior al del líquido empleado para preparar la solución colorante.Los colorantes para grasas son más solubles en las propias grasas que en el medio en el que van disueltos.. IC A. Así, al bañar la grasa con la solución del colorante, éste tiende a disolverse en la grasa. M. que se va cargando del colorante. Por regla general estos colorantes siempre van en. UI. solución alcohólica o bien en una mezcla de alcohol/acetona o alcohol/agua 34,35,36.. O. Q. El ensayo para azúcares reductores resultó positivo; en los extractos etanólico y acuoso.. BI. Esta situación está más que justificada porque dichos azúcares se caracterizan por ser de. A. Y. naturaleza altamente polar, debido al marcado número de grupos funcionales hidroxilo. AC I. (-OH) que poseen. Éstos, según su estructura de Fisher (forma abierta) poseen un grupo. M. carbonilo en el primer o segundo carbono o según la cíclica, un Carbono anomérico, el. FA R. cual es altamente reactivo. En el ensayo se utilizó reactivos diferentes, el llamado Fehling A, que es una solución acuosa de sulfato de cobre (II) y el Fehling B, que. DE. contiene hidróxido de sodio y tartrato de sodio y potasio; la función de este último es. CA. formar un quelato con el Cu2+ y evitar que este ion sea precipitado por los iones. IO TE. hidróxido. Al mezclarlos, se genera el tartrato de cobre (II), éste va a reaccionar con la forma abierta del azúcar reductor, específicamente con el grupo aldehído (que en las 2-. BL. hidroxicetonas, puede producirse por una tautomería). Como productos se va a llevar a. BI. la oxidación del grupo aldehído, hacia el carboxílico correspondiente y un metal con su mínimo estado positivo de oxidación (Cu1+). Esta peculiar forma del metal se caracteriza por presentar un color rojo-ladrillo, característico de una reacción positiva para dicho ensayo 37. Los aminoácidos y aminas libres, se pudo evidenciar cualitativamente (según su intensidad de la coloraciónque varía de azul a violeta intenso) en los extractos etanólico y acuoso. La mayor intensidad se manifestó en el extracto etanolico; hecho que sugiere una mayor proporción de aminoácidos y/o aminas de naturaleza semejante. Los. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. aminoácidos libres constituyen el grupo de los aminoácidos no proteicos, cuya función no se conoce muy bien, así como la de la mayoría de los metabolitos secundarios. Éstos se caracterizan por ser de mediana a elevada polaridad; debido a que poseen los grupos amino y carboxílico; los cuales le confieren una polaridad relativa; la naturaleza total, va de la mano con la cadena lateral, que puede resultar hidrofóbica, para nuestro estudio. La ninhidrina empleada para esta determinación, es un reactivo que, sometido a la acción de aminoácidos y/o aminas primarias, sufre un proceso de desaminación oxidativa, facilitado por el calor, seguida de la formación de una base de Schiff,. IC A. altamente deslocalizada y muy coloreada 37,38.. UI. M. En un estudio realizado en el Departamento de Química Farmacéutica Chilukur Balaji,. O. Q. India; sobre el aislamiento de componentes químicos delextracto de la hoja de Bauhinia. Y. BI. variegata una especie de planta perteneciente a la familia Fabaceae, donde se expuso a. AC I. A. diferentes extractos como extracto de petróleo etéreo, extracto de cloroformo, extracto. M. de acetona-agua y extracto acuoso, se concluye que se realizó estudios fitoquímicos. FA R. preliminares de plantas seleccionadas se encontró que el extracto metanólico contiene. DE. flavonas, glucósidos flavonoides y taninos con diversos extractos39.. CA. En un estudio realizado en el departamento de Zoología de la Facultad de Ciencias,. IO TE. Universidad Annamalai, Annamalainagar, (TN) – India; sobre Estudios fitoquímicos y. BL. HPTLC de extracto metanólico de Tinctoria Indigofera (Fabaceae). Se realizó. BI. Tamizaje fitoquímico preliminar se reveló la presencia de azúcares, taninos, polifenoles, alcaloides, aminoácidos, triterpenoides, saponinas, flavonoides40. En una revisión de estudios fitoquímicos, etnomédicos y farmacológicos sobre género Sophora, Fabaceae; realizado en el departamento de Farmacognosia, Nalanda Colegio de Farmacia de la India, departamento de Farmacología de la Facultad de Farmacia de Nalanda, India. El artículo revisa la etnofarmacología, las actividades biológicas y los. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. compuestos químicos correlacionados de género Sophora, Fabaceae. Más de 300 compuestos se ha aislado, entre ellos los principales son alcaloides quinolizidínicos particularmente matrine y oxymatrine y flavonoides particularmente prenylated e. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. isoprenylated flavonoides 41.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. 1.. CONCLUSIONES. La raíz y hojas de Mimosa albida (tapa tapa) procedentes de Conache, región La Libertad presenta los siguientes fitoconstituyentes: triterpenos y esteroides,. flavonoides,. lactonas,. antocianidinas,. taninos,. fenoles,. BI. BL. IO TE. CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI. O. Q. UI. M. IC A. catequinas, azúcares reductores, grasas y aminoácidos.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. Brunenton J. Elementos de Fitoquimica y Farmacognosia. España: Acribia S.A. 1991. P. 131 – 200. 2. Torres J, et al. Moringaoleifera: phytochemical detection, antioxidants, enzymes and antifugal properties. Scielo. [En linea]. 2013. Jun. [Fecha de acceso 20 de septiembre de 2015]. vol.82 no.2. Disponible en: http://es.educationcollege.info/college-higher-. IC A. education/college/1008021367.html. M. 3. Villar A. Farmacognosia General. España: Síntesis. 1999. P. 251.. UI. 4. Look O. Investigación Fitoquimica. 2ª ed. Perú: Pontifica Universidad Católica. O. Q. del Perú. 1994. P. 15 – 35.. BI. 5. Gutiérrez M, Alva S., Fitoconstituyentes de las hojas de Psoralea glandulosa y. Y. efecto del infuso sobre la Glicemia en Rattus rattus var. albinus con. de. acceso. 20. de. AC I. A. hiperglicemia experimental. Revistas Peruanas. [En linea]. 2006. mayo. [Fecha septiembre. de. 2015].. v.3. n.2.. Disponible. en:. FA R. M. http://revistas.concytec.gob.pe/scielo.php?pid=S181720752006000200002&script=sci_arttext. DE. 6. Vargas J. Aislamiento e identificación de metabolitos secundarios presentes en. CA. hojas de Wigandiaurens (Hydrophyllaceae). 2011. Universidad Nacional. IO TE. Autónoma de México instituto de Química (México) Universidad Tecnológica de Pereira Escuela de Química (Colombia). T547.756 V297.. BL. 7. Miranda M, Cuellar A. Manual de prácticas de laboratorio de Farmacognosia y. BI. Productos Naturales. Cuba: Universidad de la Habana. 2002. 8. Soto R. Estudio fitoquímico de las hojas, flores y frutos de Solanum multifidum Lam. y Lycianthes lycioides (L.) Hassl. (Solanaceae) procedentes del Cerro Campana, Región La Libertad-Perú. Arnaldoa 21 Enero - Junio 21 (1). 2014. Pág. 92, 93,94. 9. Mostacero J. Fanerógamas del Perú (2009). Perú. Pp. 202-204 10. Martínez-Bernal. A,. Grether. R,. Gonzáles-Amaro. R.. Leguminosae. I. Mimosoidae: Mimosa. Instituto de Ecología A.C. México (acceso 13 de abril. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2014).. Disponible. en:. http://www1.inecol.edu.mx/publicaciones/resumeness/flover/147martinez_bernal.pdf 11. Arroyo J, Almora J. Efecto del extracto alcohólico de Mimosa púdica (mimosa) sobre la fertilidad en ratas. Perú 2010. An. Fac. med. v.71 n.4 Lima dic. 2010 (acceso. 15. de. abril. de. 2014).. Disponible. en:. http://www.scielo.org.pe/scielo.php?pid=S102555832010000400010&script=sci_arttext. IC A. 12. Camargo S. Descripción, distribución, anatomía, composición química y usos de. M. Mimosa tenuiflora (Fabaceae-Mimosoideae) en México. Revista de biologia. http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?pid=S0034-. Q. en:. O. Disponible. UI. tropical Vol. 48, No. 04, Dic. 2000. P. 939-954 (acceso 15 de abril del 2014).. BI. 77442000000400018&script=sci_arttext. A. Y. 13. Rejón-Orantes J., Suaréz D., y col. Aqueous root extracts from Mimosa albida. AC I. Humb. & bonpl. ex willd display antinociceptive activity in mice. J. M. Ethnopharmacol. 2013 Sep 16 (acceso 17 de abril de 2014). Disponible en:. FA R. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23906780 14. Kokane DD, Más RY y col. Evaluación de la actividad la cicatrización de. abril. de. 2014).. Disponible. en:. CA. de. DE. heridas de la raíz de Mimosa pudica. J Ethnopharmacol 2009 Jul 15 (acceso 18. IO TE. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19397984 15. Rakotomalala T, Agard C y col. Extracto de Mimosa pigra atenúa la. BL. hipertensión pulmonar experimental crónica. J Ethnopharmacol 2013 Jun 21 17. de. abril. del. 2014).. Disponible. BI. (acceso. en:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23583901 16. Rajendran R, Krishnakumar E. Hypolipidemic Activity of Chloroform Extract of Mimosa púdica Leaves. Avicenna J MedBiotech 2010; 2(4): 215-221 (acceso 17 de. abril. del. 2014).. Disponible. en:. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3558166/. 17. Miranda M, Cuellar A. Manual de prácticas de laboratorio de Farmacognosia y Productos Naturales. Cuba: Universidad de la Habana. 2002.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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