Efecto del suero de leche en medio sólido y líquido sobre el crecimiento micelial “in vitro” de Pleurotus pulmonarius (Fr ) Quél ICFC 396/06

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. N. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. IN FO. RM. Efecto del suero de leche en medio sólido y líquido. DE. sobre el crecimiento micelial “in vitro” de Pleurotus. SI ST. EM. AS. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 TESIS. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. IO. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. CC. AUTOR: Br. JOANN GERARDO GUERRERO RUBIO. DI. RE. ASESOR: Ms.C. JULIO CÉSAR ARELLANO BARRAGÁN. TRUJILLO – PERU 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. AC IÓ. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. N. TRUJILLO. UN IC. Dr. Orlando Velásquez Benites. CO. M. VICERRECTOR ACADEMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL. A. Y. DE TRUJILLO. RM. ÁT. IC. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. IN FO. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. AS. DE. Dr. José Mostacero León. SI ST. EM. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS. DE. Dr. William Zelada Estraver. MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA Dra. Bertha Soriano Bernilla. DI. RE. CC. IO. N. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. II. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe, asesor de la tesis Efecto del suero de leche en medio sólido. AC IÓ. N. y líquido sobre el crecimiento micelial “in vitro” de Pleurotus pulmonarius (Fr.). UN IC. Quél. ICFC 396/06. M. CERTIFICA. Y. proyecto y con las orientaciones pertinentes al tesista.. CO. Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su respectivo. IC. A. El informe, ha sido redactado bajo mi asesoramiento acogiendo mis. RM. ÁT. observaciones y sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo al bachiller. IN FO. JOANN GERARDO GUERRERO RUBIO para continuar con los trámites. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. correspondientes.. Ms. C. Julio César Arellano Barragán Profesor Principal D.E. Departamento de Química Biológica y Fisiología Animal Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología. Facultad de Ciencias Biológicas - Universidad Nacional de Trujillo. III Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. En cumplimiento con lo dispuesto en el Reglamento General para el. AC IÓ. N. otorgamiento del Título Profesional de la UNIVERSIDAD NACIONAL DE. UN IC. TRUJILLO, me permito someter a vuestra consideración la TESIS TITULADA:. CO. “in vitro” de Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06. M. Efecto del suero de leche en medio sólido y líquido sobre el crecimiento micelial. Y. Propongo el presente trabajo a vuestro criterio y consideración para que con. IC. A. serenidad y justicia que ustedes poseen, sea evaluado y se emita el dictamen. Trujillo, 11 de setiembre del 2014. Joann Gerardo Guerrero Rubio Bachiller en Ciencias Biológicas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. correspondiente.. IV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. MIENBROS DEL JURADO. M. Dr. Steban Ilich Zerpa. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. PRESIDENTE. DE. M. Sc. Julio Arellano Barragán. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIO. Dr. Marco Salazar Castillo VOCAL. V Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A Dios y a la Virgen de la Puerta por haberme dado la oportunidad de. AC IÓ. N. seguir adelante, por darme fuerzas para superar los obstáculos y. UN IC. dificultades a lo largo de toda mi vida y por permitirme llegar hasta este. CO. M. momento tan importante de mi formación profesional.. A. Y. A mis padres, dedico este trabajo a las personas más importantes de mi. ÁT. IC. vida; mi madre Gladys Lorenza Rubio Salazar y mi padre Baciano. RM. Guerrero Hernández, que no les importo vivir situaciones difíciles en esta. IN FO. vida para sacar adelante a sus hijos con cariño, respeto, ejemplo de. DE. trabajo, honradez y dedicación, gracias a su apoyo incondicional y. AS. confianza durante estos inolvidables años de vida. Ustedes fueron parte. SI ST. EM. fundamental para la realización de esta meta, tengo una profesión y la oportunidad de superarme aun después de mis tropiezos.. IO. N. DE. Sinceramente, LOS QUIERO MUCHO…Muchas Gracias. RE. CC. A mis hermanos Melissa, Marium y Jesús, por compartir momentos de. DI. alegría y tristeza, por confiar en mí, por demostrarme su cariño y apoyo. cuando lo necesitaba y porque la superación sea siempre su meta. Los quiero… Gracias.. VI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A mi sobrinito Darien, por ser la gota de alegría de mi hogar, por ser mi motivación para salir adelante y a quien más que un sobrino te considero. AC IÓ. N. como mi hermano. Te quiero… Gracias.. UN IC. A mis amigos y compañeros de la universidad que me permitieron. M. compartir cosas y momentos inolvidables, porque ustedes saben el trabajo. CO. que es esforzarse día con día, por todos los días tristes y felices que. A. Y. pasamos y porque sé que aun cuando no estamos juntos, jamás. RM. ÁT. IC. olvidaremos esos años que convivimos, gracias por su amistad.. IN FO. Les agradezco a todos ustedes el haber llegado a mi vida y el compartir. DE. momentos tristes, difíciles y agradables, pero esos momentos son los que. AS. nos hacen crecer y valorar a las personas que nos rodean. Muchas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Gracias, nunca los olvidare.. VII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTO. Otorgo mi más sincero reconocimiento al Maestro Julio César Arellano. AC IÓ. N. Barragán por haberme brindado la oportunidad de aprender nuevas cosas y de. formar parte de su incansable búsqueda de la verdad, así mismo agradezco su. UN IC. profesionalismo, sus concejos, su asesoría en la elaboración y culminación del. M. presente trabajo, gracias maestro por su calidad humana y sobre todo por ser. A. Y. CO. amigo.. ÁT. IC. A todos mis Profesores de la Facultad de Ciencias Biológicas, por su. RM. dedicación y entrega, por transmitirnos y enseñarnos cuan valiosa es nuestra. IN FO. profesión.. DE. A la Universidad Nacional de Trujillo, a la Facultad de Ciencias Biológicas y de. AS. manera especial a la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. SI ST. EM. Parasitología por aprender tantas cosas, por haberme brindado el espacio y el lugar para albergar momentos inolvidables y conocer buenas personas, por. DE. abrirme las puertas al conocimiento y por haberme convertido en un. IO. N. Microbiólogo… “Por todo, Gracias Escuela de Microbiología y Parasitología,. DI. RE. CC. jamás te olvidaré”. VIII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. DEL ASESOR. III. AC IÓ. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. N. INDICE. IV. UN IC. PRESENTACION. M. MIEMBROS DEL JURADO. CO. DEDICATORIA. VI VIII. IC. A. Y. AGRADECIMIENTO. V. ÁT. ÍNDICE. IN FO. RM. RESUMEN. DE. ABSTRACT. X XI. 1. AS. I. INTRODUCCIÓN. IX. 11. SI ST. EM. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 18. IV. DISCUSIÓN. 27. N. DE. III. RESULTADOS. 31. CC. IO. V. CONCLUSIONES. 32. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 33. DI. RE. VI. RECOMENDACIONES. IX Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Con el fin de encontrar un medio de cultivo que permita conservar y. AC IÓ. N. manejar cepas de hongos comestibles a nivel de laboratorio, se evaluó. el crecimiento micelial de la cepa Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC. UN IC. 396/06 en medios de cultivo a base de suero de leche. El método está. M. basado en la medición del crecimiento radial del hongo en agar extracto. CO. de malta (AEM), agar suero de leche (ASL) y agar suero de leche con. A. Y. extracto de levadura (ASLEL); a la vez, se midió el peso seco de la. y suero. de. leche. con. extracto. de. levadura. (CSLEL),. RM. (CSL). ÁT. IC. biomasa formada en los caldos extracto de malta (CEM), suero de leche. IN FO. respectivamente. Además se describieron características macro y microscópicas del micelio formado. Los resultados mostraron diferencias. DE. significativas (p <0.05) entre los medios utilizados. La cepa, presentó su. AS. mayor crecimiento en ASLEL, con 74.7 mm y una velocidad de. EM. crecimiento de 4.12 mm/día; en cambio en el AEM se presentó el. SI ST. crecimiento más bajo, con 64.4 mm y una velocidad de 3.3 mm/día. La. DE. producción de biomasa fue mayor en el CSLEL, con 1.19 g y menor en. IO. N. el CEM, con 0.91 g. En cuanto a las características macro y. DI. RE. CC. microscópicas, P. pulmonarius presentó un micelio de color blanco, textura. algodonosa,. regular. cantidad. de. micelio. aéreo,. hifas. entrelazadas, septadas, de paredes delgadas con esporas asexuales (conidios). El suero de leche resultó ser un medio de cultivo ideal para el crecimiento micelial de P. pulmonarius.. X Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. AC IÓ. N. In order to find a medium that allows conserve and manage strains of. edible fungi on a laboratory, mycelial growth of the strain was evaluated. UN IC. Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06 in culture media based on. M. whey. The method is based on measurement of the radial growth of the. CO. fungus on malt extract agar (MEA), whey agar (WA) and whey agar with. Y. yeast extract (WYEA); while, the dry weight of the biomass formed in. IC. A. malt extract broth (MEB), buttermilk (WB) and whey yeast extract. RM. ÁT. (WYEB) respectively, was measured. Also macro and microscopic. IN FO. characteristics of the mycelium formed was described. The results showed significant differences (p <0.05) between the means. The strain. DE. showed the highest growth WYEA with 74.7 mm and a growth rate of. AS. 4.12 mm / day; however at the lowest growth MEA, with 64.4 mm and a. EM. speed of 3.3 mm / day was introduced. Biomass production was higher in. SI ST. the WYEB with 1.19 g lower in MEB, with 0.91 g. As for macro and. DE. microscopic characteristics, P. pulmonarius presented a white mycelium,. N. cottony texture, fair amount of aerial mycelium, hyphae intertwined,. medium for mycelial growth of P. pulmonarius crop.. DI. RE. CC. IO. septate, with walls thin asexual spores (conidia). Whey proved ideal. XI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCION. El estudio sistemático de los hongos cuenta solamente con tres. N. siglos, pero han sido conocidos por el hombre hace miles de años.. AC IÓ. Constituyen un grupo muy variable y polimórfico difícil de caracterizar,. UN IC. sin embargo, cuando se hace referencia a ellos se habla de organismos. M. con núcleo portadores de esporas, carecen de clorofila, se reproducen. CO. sexual o asexualmente y tienen un cuerpo generalmente formado por. Y. filamentos muy ramificados llamados hifas, los cuales en conjunto. RM. ÁT. IC. A. forman el micelio1.. IN FO. Cualquier organismo tiene un potencial de incremento en masa por división o alargamiento celular, a este incremento se le denomina. DE. crecimiento; en los hongos es apical. De las porciones viejas del micelio. AS. se translocan hacia el ápice sustancias sintetizantes que hacen posible. EM. el crecimiento. El tipo de crecimiento tiene una gran influencia en el. SI ST. desarrollo del hongo, respondiendo a su entorno de una manera muy. DE. diferente. Los hongos cultivados en un medio con agar forman colonias. N. circulares, si el medio es líquido el crecimiento se presentara como. DI. RE. CC. IO. esférulas (“pellets”) sobre todo si es cultivo agitado2,3.. La taxonomía de los hongos se basa en las características del. desarrollo de las estructuras reproductivas sexuales, ya que dichas características se consideran “conservadoras”, es decir, menos sujetas a las presiones de selección, y por lo tanto menos sujetas a la evolución.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Es conveniente distinguirlos primero entre los hongos sin pared celular (Myxomycota) y los hongos con pared (Eumycota), estos últimos se dividen. en:. Mastigomycotina,. Zygomycotina,. Ascomycotina,. AC IÓ. N. Basidiomycotina y Deuteromycotina4.. UN IC. El género Pleurotus representa un grupo de hongos perteneciente a la división Basidiomycotina; con cuerpos fructíferos que muestran un. CO. M. sombrero o píleo liso, raramente redondo, casi siempre en forma de. Y. ostra o concha. Puede mostrar escamas hacia el centro o en la base. Su. IC. A. color es variable, blanco, amarillo, rosa, gris según la especie. El estípite. RM. ÁT. es corto, excéntrico o lateral, engrosado gradualmente hacia el lado del. IN FO. sombrero o píleo, algunas veces no se presenta. Las esporas son hialinas, lisas a veces cilíndricas, con un tamaño promedio de 9.5 × 3.5. AS. DE. micras5.. EM. Pleurotus spp. forma cuatro basidiósporas en el extremo de cada. SI ST. basidio, en las laminillas del cuerpo fructífero. Las esporas (con un. DE. núcleo) germinan para convertirse en micelio primario. Luego dos. N. micelios primarios compatibles forman el micelio secundario por. CC. IO. plasmogamia. La cariogamia se presenta en las puntas de las hifas que. DI. RE. forman la capa fértil del basidiocarpo (himenio), dando origen a basidios monocarioticas y diploides. Posteriormente el núcleo (2n) presenta meiosis y da origen a cuatro núcleos haploides (1n) que migran hacia los esterigmas, para formar las basidiósporas generalmente haploides y con un solo tipo de núcleo6. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Para la mayoría de los propósitos rutinarios de laboratorio, se cultiva a los hongos en agar preparado con extractos de plantas como papa, malta, etc. Sin embargo, dada una fuente de carbono adecuada. N. muchos hongos crecen en nutrientes inorgánicos y simples, ya que. AC IÓ. pueden sintetizar los constituyentes celulares necesarios a partir de. UN IC. nitrógeno inorgánico, fósforo, potasio y azufre4.. CO. M. El carbono es necesario para los hongos porque es la fuente. Y. directa de energía para su metabolismo y para la formación de sus. IC. A. diferentes estructuras celulares. La mayoría de los basidiomicetos son. RM. ÁT. considerados “degradadores de madera” porque son capaces de crecer. IN FO. sobre la biomasa proveniente de las plantas leñosas. Pleurotus spp. es considerado de pudrición blanca ya que es capaz de degradar. DE. materiales ricos en lignina. Tiene la capacidad de crecer sobre el nitrato. AS. de potasio o la úrea, aunque prefieren las fuentes orgánicas, como la. SI ST. EM. peptona, extracto de levadura5.. DE. Para el óptimo crecimiento micelial de Pleurotus spp. su rango de. N. pH es de 5.0 y 6.0. La temperatura óptima es de 20-25°C, pero algunas. CC. IO. cepas termófilas alcanzan un óptimo crecimiento a 25-35°C. Es un. DI. RE. hongo apropiado para el cultivo en áreas subtropicales y tropicales. Los micelios de este hongo son muy resistentes a la alta concentración de dióxido de carbono durante la incubación. La concentración de CO2 debe ser inferior a 800 ppm en su crecimiento reproductivo. Estos valores sin embargo suelen variar entre cepas y especies6. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El cultivo de Pleurotus spp. fue reportado a inicios del siglo veinte. A pesar de ser relativamente reciente, ha tenido un rápido desarrollo, de tal manera que en la actualidad se cultiva en casi todas las latitudes del. N. mundo. De todos los países hispanoparlantes, España es el mayor. AC IÓ. productor de Pleurotus spp., además es cultivado en Estados Unidos,. UN IC. Cuba, México, Colombia, Guatemala, Venezuela y Brasil. Por otra parte, ha habido intentos por desarrollarlo o existen pequeñas empresas de. CO. M. producción variable en El Salvador, Perú, Ecuador, Argentina y Costa. IC. A. Y. Rica5,7.. RM. ÁT. Para determinar el efecto de tres suplementos sobre el. IN FO. crecimiento micelial de Pleurotus eryngii, en paja de cebada, se evaluaron in vitro tres cepas en cuatro medios de cultivo; medio estéril. DE. de extracto de malta, agar bacteriológico y extracto de levadura, más. AS. uno de los siguientes suplementos: polvo de madera de encino (MEA),. EM. polvo de paja de trigo (MTA) y polvo de madera de eucalipto (MEUA);. SI ST. además de extracto de malta como testigo (MEMA). Los resultados. DE. mostraron una influencia significativa (p<0.05) del suplemento utilizado. N. como de la cepa evaluada. Las cepas presentaron su mayor tasa de. DI. RE. CC. IO. crecimiento (mm/día) en los medios MEA y MTA8.. Se investigó la influencia de diversos medios de cultivo sobre el. crecimiento micelial de una cepa de P. pulmonarius. En el agar extracto de malta (MEA), extracto mazorca de maíz (CCEA) y extracto de cáscara de yuca (CPEA), la cepa presentó un diámetro micelial de 75, 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 71, y 68 mm respectivamente. Estos tres medios fueron considerados como excelentes para el crecimiento y densidad del micelio de P. pulmonarius. Mientras que en el agar papa dextrosa (PDA) y extracto. N. cáscara de plátano (PPEA), la cepa tuvo un diámetro de 44 y 32 mm,. AC IÓ. siendo observados ambos medios como poco eficientes para el. UN IC. crecimiento del micelio9.. CO. M. Se evaluaron medios alternativos en la propagación de P.. Y. ostreatus y se comparó su comportamiento con un medio comercial. IC. A. (agar papa dextrosa). La respuesta a estos medios fue medida mediante. RM. ÁT. la adaptación del hongo en cebada para la obtención de semilla y esta a. IN FO. su vez en un sustrato a base de bagazo de caña para la obtención de orellanas. El medio con extracto de salvado de trigo y pH 5.0 fue el más. DE. adecuado para el crecimiento del P. ostreatus, cuyo rendimiento fue. AS. apropiado para obtener niveles de producción competitivos. en. SI ST. EM. crecimiento y fructificación10.. DE. La fisiología de una cepa P. pulmonarius, que creció en agar papa. N. dextrosa superpuesta con una membrana de celofán (PDA-WC). CC. IO. presentó una densidad considerable de biomasa y un potencial. DI. RE. importante para la formación del cuerpo fructífero, en comparación con el agar papa dextrosa sin celofán (PDA-OC), pero la tasa de crecimiento radial y el contenido de glucanos de la pared celular no fueron significativamente diferentes. Estos resultados demuestran que el uso del celofán como herramienta para el estudio in vitro de la fisiología de 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hongos. puede. afectar. a. la. interpretación. de. los. resultados. experimentales11. Al evaluar diferentes concentraciones de peróxido de hidrógeno. N. (H2O2) e hipoclorito de sodio (NaClO) para la esterilización del agar. AC IÓ. extracto de malta (MEA), en la propagación de P. pulmonarius y G.. UN IC. lucidum, se determinó que el NaClO no es eficiente en este proceso, en cambio el H2O2 arrojó resultados satisfactorios en la obtención de la. Y. CO. M. cepa in vitro12.. IC. A. Con el fin de conocer la capacidad Pleurotus spp. para degradar. RM. ÁT. el insecticida endosulfán, se estudió el crecimiento en medio sólido con. IN FO. dicho insecticida de diez cepas de este género. Las cepas estudiadas crecieron en presencia del insecticida, pero con una reducción en la. DE. velocidad de crecimiento. Se seleccionó P. pulmonarius ECS-0190 por. AS. su capacidad para degradar el insecticida. Esta cepa es capaz de reducir. EM. en 99.8% el contenido inicial de endosulfán de un sustrato contaminado. DE. SI ST. al crecer y fructificar en él13.. descubrimiento. del. queso. es. contemporáneo. a. la. N. El. CC. IO. domesticación del ganado, cuando el hombre primitivo observó que la. DI. RE. leche guardada en recipientes se coagulaba rápidamente y era comestible. La producción a gran escala de este producto lácteo llegó con la Revolución Industrial. Ya en el siglo XIX, los descubrimientos de Pasteur sobre la fermentación se aprovecharon para entender los procesos de transformación de la leche en queso14. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El suero de leche se usaba para enriquecer productos de la industria alimenticia, pero era sólo suero de leche deshidratado, con una. N. proporción de proteína del 25%, demasiado bajo para ser considerado. AC IÓ. como una proteína de calidad. Fue a fínales de los 80 que el suero fue. UN IC. estudiado por expertos en nutrición clínica, principalmente en Europa, dónde se observó que el balance de aminoácidos que lo conformaban. Y. CO. M. era superior, incluso a los encontrados en la ovoalbúmina15.. IC. A. Suero es el producto lácteo líquido obtenido durante la. RM. ÁT. elaboración del queso, la caseína o productos similares, mediante la. IN FO. separación de la cuajada, después de la coagulación de la leche y/o los productos derivados de la leche. La coagulación se obtiene mediante la. AS. DE. acción de enzimas del tipo del cuajo16.. EM. La composición y tipo de lactosuero varía considerablemente. SI ST. dependiendo del tipo de leche, del queso elaborado y el proceso de. DE. tecnología empleado. La lactosa es el principal componente (4,5 % p/v),. N. proteína (0,8% p/v), y lípidos (0,5%). Concretamente, las proteínas del. CC. IO. suero suponen alrededor del 20% de las proteínas de la leche de vaca.. DI. RE. Estas proteínas no sólo juegan un importante papel nutritivo como una rica y balanceada fuente de aminoácidos, sino que además, en muchos casos, parecen ejercer determinados efectos biológicos y fisiológicos, in vivo17,18.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El lactosuero es una sustancia de alto valor nutritivo, pero muy contaminante al contacto con el agua y caro de procesar. Debido a sus componentes, el suero representa un serio problema de contaminación. N. cuando se vierte a los cursos de agua, más del 90% se debe a la. AC IÓ. lactosa. Actualmente, existen varias alternativas biotecnológicas que. UN IC. usan al suero lácteo como medio de cultivo, aprovechando su composición química para la elaboración de distintos productos en la. CO. M. industria alimentaria y reduciendo el problema ecológico que generan. IC. A. Y. sus componentes19, 20.. RM. ÁT. Se propagó una cepa de levadura del género Kluyveromyces sp.. IN FO. sobre suero de queso en polvo, reconstituido a una concentración de lactosa de 20 g/L y suplementado con sales inorgánicas como fuente de. DE. nitrógeno y fósforo. El efecto del pH en el rango de 4,5 - 5,5 resultó no. AS. significativo con relación a la tasa máxima de crecimiento (μmax) o el. EM. rendimiento de biomasa. La composición de la biomasa mostró valores. DE. SI ST. similares a los obtenidos a partir de diferentes sustratos carbonados21.. N. Por otro lado, a partir de esta revisión bibliográfica es importante. CC. IO. realizar un estudio que facilite la obtención de nuevos medios de cultivo. DI. RE. de bajo costo y alta eficiencia en el crecimiento micelial de hongos comestibles. De esta manera en la presente investigación se planteó la siguiente interrogante: ¿Cuál es el efecto del suero de leche en medio sólido y líquido sobre el crecimiento micelial “in vitro” de Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06? 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Es natural afirmar que Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06, presentará buen crecimiento micelial “in vitro” sobre el suero de leche en medio sólido y líquido. Ya que es un organismo poco exigente. N. en cuanto a sus requerimientos nutricionales y como el suero de leche. AC IÓ. contiene fuentes de carbono y nitrógeno, puede ser utilizado como. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. medio para el crecimiento micelial de este hongo.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBJETIVOS: A. General:. N.  Evaluar el crecimiento micelial de la cepa de P. pulmonarius (Fr.). AC IÓ. Quél ICFC 396/06 sobre agar extracto de malta (AEM), agar suero. UN IC. de leche (ASL), y agar suero de leche con extracto de levadura. CO. M. (ASLEL).. IC. A. Y. B. Específicos:. RM. ÁT.  Describir las características macro y microscópicas del micelio. IN FO. formado en los medios con agar por la cepa P. pulmonarius (Fr.). DE. Quél ICFC 396/06.. AS.  Comparar y evaluar la velocidad de crecimiento de la cepa. EM. P. pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06 en agar extracto de malta. SI ST. (AEM), agar suero de leche (ASL), y agar suero de leche con. N. DE. extracto de levadura (ASLEL).. DI. RE. CC. IO.  Comparar la biomasa desarrollada por la cepa P. pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06 en los medios líquidos sin agitación: Caldo extracto de malta (CEM), caldo suero de leche (CSL) y caldo suero de leche extracto de levadura (CSLEL).. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y METODOS. 2.1. MATERIAL . AC IÓ. N. Material biológico:  05 litros de suero de leche.. UN IC.  Cepa de P. pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06, conservada en. M. agar papa dextrosa, proporcionada por el laboratorio de. CO. Tecnología Enzimática, Productos Naturales y Entomopatógenos.. . IC. A. Y. CC.BB. UNT.. RM. ÁT. Medios de Cultivo:. IN FO.  Agar suero de leche, preparado en el laboratorio de Tecnología Enzimática, Productos Naturales y Entomopatógenos. CC.BB.. DE. UNT.. EM. AS.  Caldo suero de leche preparado en el laboratorio de Tecnología. SI ST. Enzimática, Productos Naturales y Entomopatógenos. CC.BB.. DE. UNT. . N. Reactivos:. DI. RE. CC. IO.  Azul de lactofenol.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2. MÉTODOS. 2.2.1.. Reactivación de la cepa:. N. De la cepa de P. pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06, conservada. AC IÓ. en agar papa dextrosa (APD) en el laboratorio de Tecnología. UN IC. Enzimática, Productos Naturales y Entomopatógenos, se inoculó una asada del micelio del hongo en la parte central de una placa. CO. M. Petri de 90 mm de diámetro con 10 mL de agar papa dextrosa22.. IC. A. Y. Se incubó a temperatura ambiente durante 15 días.. Selección de los medios de cultivo para el crecimiento. RM. ÁT. 2.2.2.. IN FO. micelial de la cepa de P. pulmonarius (Fr.) Quél ICFC 396/06: Se usó seis medios de cultivo. Cuatro de dichos medios son: el. DE. agar suero de leche (ASL), el caldo suero de leche (CSL), el agar. AS. suero de leche con extracto de levadura (ASLEL), y el caldo de. EM. suero de leche con extracto de levadura (CSLEL) en estos medios. SI ST. se centrará el estudio del crecimiento de la cepa de P.. DE. pulmonarius. Los otros dos medios son: el agar extracto de malta. en el aislamiento de hongos23.. DI. RE. CC. IO. N. (AEM) y el caldo extracto de malta (CEM), utilizados comúnmente. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.3.. Determinación del medio óptimo para el crecimiento de la cepa de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06: Para determinar en cuál de los medios sólidos, P. pulmonarius. AC IÓ. N. tiene mejor crecimiento, se procedió de la siguiente manera:. UN IC. 2.2.3.1. Inoculación del micelio de P. pulmonarius en los. M. medios de cultivo sólidos:. CO. Del micelio de P. pulmonarius que creció en APD, se. A. Y. separó una pequeña porción discoidal de 5 mm de. ÁT. IC. diámetro con la ayuda de una pipeta Pasteur estéril. RM. (extremo ancho).. IN FO. El inóculo discoidal se sembró en el centro de placas Petri (90 mm de diámetro) que contenían 10 mL, cada. DE. una, de AEM, ASL y ASLEL; cuidando de colocar el lado. EM. AS. del micelio en íntimo contacto con el medio de cultivo a. SI ST. utilizar. Se incubó a temperatura ambiente, bajo. totalmente la superficie del medio de cultivo24.. DI. RE. CC. IO. N. DE. condiciones de oscuridad, hasta que el micelio cubra. 2.2.3.2. Cálculo. de. la. velocidad. de. crecimiento. de. P. pulmonarius Se determinó la velocidad de crecimiento micelial, al medir dos díametros que se crucen perpendicularmente, luego se sumó y dividió entre dos para calcular el diámetro medio. Este cálculo del diámetro medio se 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. realizó cada dos días, estimando la velocidad de crecimiento de la cepa con respecto al tiempo 24. El radio de las colonias de hongos y la longitud de las. AC IÓ. N. hifas no ramificadas aumentan linealmente con el tiempo. (es decir, que crecen a una tasa constante, Kr)25. De. UN IC. esta manera se podrá obtener los datos de la velocidad. M. de crecimiento en medio sólido con la siguiente. CO. ecuación:. IC. A. Y. Kr = R1 - R0 / t1 - t0. RM. ÁT. En donde:. IN FO. R1 = radio de la colonia en el tiempo t1. R0 = radio de la colonia en t0.. EM. AS. DE. Kr= Constante de la velocidad de crecimiento.. SI ST. 2.2.3.3. Medición del peso seco para determinar la biomasa. DI. RE. CC. IO. N. DE. formada en medio líquido: Siguiendo el primer paso del método 2.2.3.1, se sembró el inóculo discoidal en botellas planas (250 mL de capacidad) con 50 mL, cada una, de CEM, CSL y CSLEL. Se incubó las botellas en forma estacionaria, a temperatura ambiente, bajo condiciones de oscuridad,. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hasta que el micelio cubra totalmente la superficie del medio de cultivo. Una vez desarrollado el micelio, se filtró con una bomba. AC IÓ. N. de vacío a través de un papel filtro previamente pesado. y se colocó sobre un embudo Büchner de porcelana. La. UN IC. biomasa se cuantificó por determinación de peso seco,. M. para ello se colocó el papel filtro conteniendo el micelio. CO. del hongo, en un horno a 80°C por 10 minutos y se. A. Y. mantuvo en este proceso de secado hasta haber. IC. alcanzado el peso constante. Se calculó el peso del. RM. ÁT. micelio por diferencia de peso con la tara del papel24.. IN FO. Para medir el peso seco de la biomasa micelial formada. DE. se utilizó la siguiente ecuación:. EM. AS. PS1/3= PS01/3+ (4πρ/3)1/3Δlt. SI ST. En este caso se considera que solo el córtex de las. DI. RE. CC. IO. N. DE. pelotitas del hongo, de espesor Δ fijo y densidad ρ, crece. en tres dimensiones a una tasa de extensión lineal (l).. Esta relación indica que la raíz cúbica de la biomasa en peso (PS) en un cultivo líquido es directamente proporcional al tiempo de cultivo (t), al espesor de la zona de crecimiento constante y a la tasa de extensión lineal5,26.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.4.. Análisis estadístico: Los promedios de las velocidades de crecimiento y de peso seco de la biomasa micelial, fueron analizados mediante el análisis de. N. varianza de un factor y la prueba de comparación múltiple. AC IÓ. Diferencia Mínima Significativa - DMS (para saber qué media. UN IC. difiere de otra); utilizando el programa estadístico SPSS Statistics 20, para comparar si existió diferencia significativa en el P. pulmonarius en los medios. CO. M. crecimiento micelial de. Y. usados. De esta manera se determinó si existen poblaciones. RM. ÁT. IC. A. estadísticamente diferentes.. Determinación de las características macroscópicas de la. IN FO. 2.2.5.. cepa P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06:. DE. Transcurrido el tiempo de incubación para el crecimiento de la. AS. cepa de P. pulmonarius en placas con AEM, ASL y ASLEL, se. EM. observó y evaluó las características macroscópicas del micelio27: Tipo de crecimiento: Homogéneo, irregular, ralo y con anillos. SI ST. -. DE. de crecimiento. Textura: Algodonosa, venosa, aterciopelada y cerosa.. -. Color: Blanco, blanquecino y amarillento.. -. Micelio aéreo: Abundante, regular, escaso y ausente.. -. Densidad. DI. RE. CC. IO. N. -. del. micelio(a. trasluz):. Abundante,. regular,. escaso.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.6.. Determinación de las características microscópicas de la cepa. P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06, mediante el. método del Microcultivo en portaobjetos:. N. Sobre un disco de papel filtro en el fondo de una placa Petri. AC IÓ. fueron apoyadas un par de varillas de vidrio que sirvieron de base. UN IC. para una lámina portaobjetos. Un bloque pequeño, de 10 mm de lado, de agar papa dextrosa (APD) se colocó en la superficie de. CO. M. este portaobjetos. Luego se inoculó cada lado del bloque con una. Y. pequeña porción del micelio de la cepa. Sobre la superficie del. IC. A. bloque de APD se aplicará un cubreobjeto. Se tapó la placa y el. RM. ÁT. disco de papel filtro se mantuvo húmedo con agua destilada. IN FO. durante 5 días a temperatura ambiente. Después del período de incubación se retiró el cubreobjeto con micelio y se colocó sobre. Luego. AS. portaobjetos.. DE. una gota de azul de lactofenol aplicada a la superficie de otro se. observó. en. el. microscopio. las. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. características microscópicas de la cepa28.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. La Tabla 1 y Figura 1 muestran el crecimiento radial del micelio de. AC IÓ. N. Pleurotus pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06, a los 20 días de. incubación, alcanzando 74.7 mm de diámetro micelial en el agar suero. UN IC. leche con extracto de levadura, 69.8 mm en el agar suero de leche y. CO. M. 64.4 mm en el agar extracto de malta.. Y. La Figura 2 muestra el promedio de la raíz cubica del peso seco. IC. A. de la biomasa formada por P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06,. RM. ÁT. obteniendo el mayor valor en caldo suero con leche extracto de. IN FO. levadura, a los 15 días de incubación.. DE. La Tabla 2 y 3 muestran que existe diferencia significativa entre. AS. los medios de cultivo utilizados, resultando mediante la prueba de. EM. análisis de varianza de un factor y la prueba de comparación múltiple. SI ST. DMS, diferencias entre cada uno de los promedios de la velocidad de. DE. crecimiento y la biomasa obtenida por P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC. DI. RE. CC. IO. N. 396/06.. La Tabla 4 y Figura 3 muestran las características macroscópicas. de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06. El cual presenta crecimiento regular, micelio aéreo, algodonoso y de color blanco.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La Tabla 5, Figura 4 y 5 muestran las características microscópicas de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06. El cual presenta hifas entrelazadas, de paredes delgadas, septadas y esporas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. asexuales similares a los conidios.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1. Promedio del crecimiento radial del micelio (mm) de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 en medios de cultivo sólidos: agar extracto de malta (AEM), agar suero de leche (ASL) y agar suero de leche con. UN IC. AC IÓ. N. extracto de levadura (ASLEL); a los 20 días de incubación.. 6. 13.05. 11.4. 21.05. 19.5. 31.25. 29.25. 27.85. 38.8. 37.45. 36.95. 12. 45.75. 45.4. 45.95. 14. 51.6. 52.85. 54.5. 16. 56.7. 59.6. 62.6. 18. 60.8. 65.45. 69.65. 20. 64.4. 69.8. 74.7. DE. 10. 22.95. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. ICFC 396/06. Y. 14.95. A. 4.05. IC. 4. ASLEL. 5.6. ÁT. 6.7. ASL. RM. 2. 8 P .pulmonarius (Fr.) Quél.. AEM. IN FO. Hongo. CO. M. Medios de cultivo. Tiempo (días). 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 80 75 70. N. 65. AC IÓ. 60. Radio AEM. UN IC. 50 45. M. 40. Radio ASLEL. CO. 35. Radio ASL. 30 25. Y. Crecimiento (mm). 55. IC. A. 20. ÁT. 15. RM. 10. 0 0. 2. 4. 6. 8. IN FO. 5 10. 12. 14. 16. 18. 20. 22. EM. AS. DE. Tiempo (Días). SI ST. Figura 1. Curva de crecimiento radial del micelio (mm) de P. pulmonarius (Fr.). DE. Quél. ICFC 396/06 en AEM, ASL y ASLEL; a los 20 días de. DI. RE. CC. IO. N. incubación.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.4. 1.3 1.19 1.086. 1.1 1. UN IC. 0.912. 0.9. CSL. M. 0.8. CEM. CO. 0.7 0.6. CSLEL. Y. Biomasa (∛PS g). AC IÓ. N. 1.2. IC. A. 0.5. ÁT. 0.4. RM. 0.3. IN FO. 0.2 0.1. DE. 0. CSL. CSLEL. Tiempo (15 Días). SI ST. EM. AS. CEM. Figura 2. Promedio de la raíz cubica del peso seco (∛PS) de la biomasa. DE. micelial producida por P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 en. suero con leche extracto de levadura (CSLEL); a los 15 días de incubación.. DI. RE. CC. IO. N. caldo extracto de malta (CEM), caldo suero de leche (CSL) y caldo. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 2. Comparación de la velocidad de crecimiento de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 producida en los medios de cultivo sólidos AEM, ASL y ASLEL. Estos resultados se obtienen del promedio de 4. AC IÓ. N. experimentos con 5 repeticiones cada uno.. UN IC. Velocidad de crecimiento(mm/día) Hongo. ASLEL. 3.3. a. 3.65. a. 4.12. a. A. Y. ICFC 396/06. CO. P. pulmonarius (Fr.) Quél.. IC. Representa diferencias altamente significativas (p<0.05). IN FO. RM. ÁT. a. ASL. M. AEM. Tabla 3. Comparación de la raíz cúbica del peso seco de la biomasa formada. DE. por P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 en los medios de cultivo. EM. AS. líquidos CEM, CSL y CSLEL. Estos resultados se obtienen del. SI ST. promedio de 4 experimentos con 5 repeticiones cada uno.. DE. ∛PS (g) CEM. CSL. CSLEL. IO. N. Hongo. RE. CC. P. pulmonarius (Fr.) Quél.. DI. a. ICFC 396/06. 0.912. a. 1.086. a. 1.19. a. Representa diferencias altamente significativas (p<0.05). 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 4. Características macroscópicas del micelio de P. pulmonarius (Fr.). Anillos de crecimiento. Densidad del micelio. Textura. AEM. Ausente. Presente. Escasa. Aterciopelado. Blanco. ASL. Presente. Presente. Regular. Algodonoso. Blanco. ASLEL. Presente. Ausente. Regular. Algodonoso. Blanco. Color. A. Y. CO. M. Micelio aéreo. UN IC. AC IÓ. Características macroscópicas de la cepa. Medio de cultivo. N. Quél. ICFC 396/06 en AEM, ASL y ASLEL.. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. (A). CC. IO. N. DE. SI ST. (B). DI. RE. Figura 3. Placas con micelio de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 en AEM, ASL y ASLEL. Se observa el diámetro micelial (A) y la presencia de micelio aéreo (B), a los 20 días de incubación.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 5. Características microscópicas del micelio de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 en los medios de cultivo sólidos.. N. Medio de cultivo. Características de las hifas. AC IÓ. Hongo. AEM. Hifas entrelazadas, de paredes delgadas,. UN IC. P .pulmonarius (Fr.) Quél.. ASL. septadas y presencia de esporas asexuales (conidios).. M. ICFC 396/06. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. ASLEL. DI. RE. CC. IO. Figura 4. (Izquierda) Se observa hifas entrelazadas de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06, visto a 40x. (Derecha) Se observa una hifa del mismo hongo, de pared delgada y septada, visto a 100x. Ambas observaciones fueron teñidas con azul de lactofenol.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. Figura 5. (Izquierda) Se observa hifas con esporas asexuales (conidios) de. A. Y. P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06. (Derecha) Se observa una. ÁT. IC. hifa septada del mismo hongo, con aparente conidióforo, el cual. RM. sostiene numerosos conidios. Ambas observaciones fueron vistas a. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. 100x y teñidas con azul de lactofenol.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. N. Los medios de cultivo empleados en este trabajo, permitieron que la P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 adquiera diferentes. AC IÓ. cepa. UN IC. comportamientos en su crecimiento. La cepa, a los 20 días de incubación, tuvo el mayor diámetro micelial en agar suero de leche. CO. M. extracto de levadura (ASLEL), con 74.7 mm y una velocidad de. Y. crecimiento de 4.1 mm/día, tal como se observa en la tabla 1 y 4. En el. IC. A. mismo período de incubación la cepa obtuvo un diámetro micelial en. ÁT. agar suero de leche (ASL) y agar extracto de malta (AEM) de 69.8 mm y. RM. 64.4 mm, con una velocidad de crecimiento de 3.7 y 3.3 mm/día. IN FO. respectivamente. Estos valores, son similares a los encontrados, con. DE. una cepa mexicana de P. djamor var. djamor (IE-121) y dos cepas P. ostreatus (lE-179),. AS. europeas, P. pulmonarius (lE-180) y. EM. cultivadas en agar papa dextrosa; las cuales han alcanzado el mayor. SI ST. diámetro y velocidad de crecimiento entre los 14 y 18 días de. DE. incubación29.. IO. N. P. pulmonarius (ICFC 396/06) a los 15 días de incubación, alcanzó la. RE. CC. mayor cantidad de biomasa micelial en caldo suero de leche con. DI. extracto de levadura (CSLEL), con un peso seco de 1.19 g, como se observa en la figura 2. En el mismo período de incubación, en el caldo. suero de leche (CSL) la biomasa formada obtuvo un peso seco de 1.086 g y 0.91 g de peso seco para el caldo extracto de malta (CEM).. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Con base a estos resultados y a la formulación de los medios de cultivo se puede afirmar que la cepa P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06, no necesita elevadas concentraciones de carbohidratos (lactosa y glucosa). N. y nitrógeno (extracto de levadura y proteínas del suero lácteo) para su. AC IÓ. crecimiento. La fuente de carbohidratos y nitrógeno es proporcionada. UN IC. por los componentes del suero lácteo. En este trabajo se usó suero. CO. Y. media de lactosa al 48 g/L y proteína al 6 g/L17,30.. M. dulce (por adición del cuajo) que puede presentar una composición. IC. A. La glucosa, manosa y galactosa se encuentran entre las fuentes de. RM. ÁT. carbono preferidas por las especies de Pleurotus, mientras que la xilosa. IN FO. y la arabinosa producen un crecimiento deficiente. Además existen trabajos que demuestran el buen crecimiento de P. ostreatus, sobre. AS. DE. medios con celobiosa, lactosa, glicógeno, pectina y almidón31,32.. EM. La afinidad por las fuentes de nitrógeno varía entre las diferentes. SI ST. especies de Pleurotus, pero además varía para una cepa determinada. DE. según el substrato sobre el que ésta crece; por ejemplo, se ha P. ostreatus alcanza un máximo rendimiento en. N. encontrado que. CC. IO. cultivo líquido cuando se usa un hidrolizado de turba suplementado con. DI. RE. extracto de levadura33.. El crecimiento del hongo en medio sólido presenta una fase de crecimiento más o menos lineal en lugar de una fase exponencial. Se considera que los hongos filamentosos tienen una “unidad de. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. crecimiento” que se duplica a una tasa constante, donde las hifas se extienden a una tasa lineal, mientras que la totalidad del micelio crece de manera exponencial, esto queda demostrado en la figura 1, en la cual el. N. crecimiento muestra un ajuste lineal. De la misma manera en un cultivo. AC IÓ. líquido este tipo de hongos difícilmente pueden mantener el ritmo de. UN IC. crecimiento exponencial, ya que las “unidades” de crecimiento del hongo no se separan si no que forman colonias tridimensionales. Algunos. CO. M. investigadores reportan que para visualizar mejor el crecimiento fúngico. Y. en cultivos sumergidos se debe ajustar a la raíz cúbica del peso. RM. ÁT. IC. A. seco25,26,34,35.. IN FO. Al emplear el análisis de varianza para comparar la velocidad crecimiento en los tres medios AEM, ASL y ASLEL se determinó que. DE. existen diferencias significativas (p<0.05) entre ellos y por lo tanto el. AS. crecimiento de la cepa en cada medio representa una población. EM. estadísticamente diferente, tal como se observa en la tabla 2. Para el. SI ST. peso seco de la biomasa micelial formada en CEM, CSL y CSLEL,. DE. también se obtuvo diferencias significativas (p<0.05) entre ellos, es decir. N. que la biomasa formada en cada medio representa una población. DI. RE. CC. IO. estadísticamente diferente, así como se observa en la tabla 3.. Por otra parte, en cuanto a las características macroscópicas, el micelio de P. pulmonarius presentó en el ASLEL crecimiento regular y homogéneo,. micelio. aéreo,. textura. algodonosa,. sin. anillos. de. crecimiento y de color blanco. El ASL también presentó crecimiento 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. regular y homogéneo, micelio aéreo, algodonoso, sin anillos de crecimiento y de color blanco. Y en el AEM el micelio aéreo era escaso, aterciopelado y ceroso, con un crecimiento irregular y en forma de. N. anillos, como se muestra en la figura 3. Estas características fueron. AC IÓ. similares, a las reportadas por Sobal (1989), donde las cepas de. UN IC. diferentes especies de Pleurotus, presentan generalmente un micelio de color blanco a amarillento, textura de algodonosa a aterciopelada,. Y. CO. M. densidad de abundante a escasa y micelio aéreo abundante a escaso36.. IC. A. Al realizar las observaciones microscópicas de la cepa se determinó que. RM. ÁT. posee hifas entrelazadas, de paredes delgadas, septadas y presencia de. IN FO. esporas asexuales (conidios), tal como se observa en las figuras 4 y 5. Algunos autores, coinciden en que varias especies de basidiomicetos. DE. presentan hifas de paredes delgadas, septadas y uninucleadas. Además. AS. pueden reproducirse asexualmente por medio de yemas, fragmentación. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. de micelio, por producción de conidios, artrosporas y oídios4,5.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. El suero de leche resultó ser un medio de cultivo ideal para el crecimiento. -. UN IC. AC IÓ. micelial “in vitro” de la cepa P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06.. N. -. CONCLUSIONES. Los medios de cultivo más adecuados para el crecimiento, preservación y. CO. M. manejo de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06. en el laboratorio, fueron. Y. el agar suero de leche extracto de levadura (ASLEL) y el caldo suero de. ÁT. IC. A. leche extracto de levadura (CSLEL).. Estadísticamente se determinó que existen diferencias significativas al. RM. -. IN FO. comparar la velocidad de crecimiento producida por P. pulmonarius (Fr.). DE. Quél. ICFC 396/06, en los medios AEM, ASL y ASLEL. De igual manera. AS. existen diferencias significativas al comparar la biomasa formada por la. P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 presentó en los medios AEM, ASL. DE. -. SI ST. EM. cepa en CEM, CSL y CSLEL.. N. y ASLEL, un micelio de color blanco, textura de algodonosa a. CC. IO. aterciopelada, regular cantidad de micelio aéreo, hifas entrelazadas, de. DI. RE. paredes delgadas, septadas y presencia de esporas asexuales (conidios). Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. -. RECOMENDACIONES. Evaluar el efecto del pH, y la temperatura sobre el crecimiento de la cepa. AC IÓ. N. P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 a efecto de encontrar las mejores. Evaluar el crecimiento de la cepa de P. pulmonarius en otros medios de. M. -. UN IC. condiciones ambientales para su desarrollo.. CO. cultivo sólidos con la finalidad de encontrar el mejor soporte para la. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. producción de inóculo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Alexopoulus, C. Introducción a la micología. Universidad de Buenos Aires.. AC IÓ. N. 1965.. UN IC. 2. Castillo, J. Micología General. Limusa, México D.F. 1987.. M. 3. Leveau, J. y Bouix. M. Microbiología industrial: Los microorganismos de. CO. interés industrial. Acribia, Zaragoza. 2000.. A. Y. 4. Deacon, J. Introducción a la Micología Moderna. Limusa, México D.F. 1990.. ÁT. IC. 5. Sánchez, J. Crecimiento y fructificación. En: La Biología y el Cultivo de. RM. Pleurotus spp. Sánchez, J. y Royse, D. (Eds). Limusa, México. 2001; 3: 54-. IN FO. 64.. DE. 6. MushWorld. Mushroom growers handbook 1. Oyster mushroom cultivation.. AS. MushWorld, Heineart Inc., Seoul, Korea. 2004.. SI ST. Zaragoza. 1992. EM. 7. Wainwright, M. Introducción a la Biotecnología de los Hongos. Acribia,. DE. 8. Gaitán R. Evaluación in vitro del hongo comestible Pleurotus eryngii: Efecto. N. de diferentes suplementos orgánicos en el crecimiento micelial y. CC. IO. producción de cuerpos fructíferos. Rev. Mexicana de Micología. 2005; 21:. RE. 77-84. DI. 9. Stanley HO, Nyenke CU. Cultural Studies on Mycelia of Pleurotus pulmonarius (Oyster Mushroom) in Selected Culture Media. Society for Science and Nature, Nigeria. 2011; 2(2): 183-185. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10. Ríos M, Hoyos J, Mosquera S. Evaluación de los parámetros productivos de la semilla de Pleurotus ostreatus propagada en diferentes medios de cultivo. Universidad del Cauca. 2010; 8: 86-94. AC IÓ. N. 11. Tellez M, Días G, Sánchez C. Physiology of a colony of Pleurotus pulmonarius grown on medium overlaid with a Cellophane membrane.. UN IC. Microbiol Biotechnol, México. 2003; 63: 212–216. M. 12. Uribe A, Moreno J, Ayala C. Evaluación del peróxido de hidrógeno y el. dos. especies. de. hongos. nutricéuticos:. Y. de. Pleurotus. A. producción. CO. hipoclorito de sodio como esterilizantes de los medios y sustratos en la. ÁT. IC. pulmonarius (Fries) Quelet y Ganoderma lucidum (WM. Curtis: Fries). RM. Karsten. Revista de la Universidad Católica de Oriente, Colombia. 2007;. IN FO. 23: 43-53. DE. 13. Sánchez J, Orozco G, Rodríguez D, Nieto M, Márquez F. El Cultivo de. AS. Setas Pleurotus spp en México: El Sustrato Degradado por Pleurotus. EM. pulmonarius para la Degradación del Insecticida Endosulfán. El Colegio de. SI ST. la Frontera Sur, Chiapas. México. 2007; 5(3):199-207. DE. 14. Bonet, B.; Juárez, M.; Moreno, B.; Ortega, R. y Suárez, L. El Libro Blanco. N. de los Lácteos. Federación nacional de industrias lácteas, España. 2009.. CC. IO. 15. Sevilla A. Suero de leche: La proteína del nuevo milenio. México D.F. 2005.. RE. 16. Codex Alimentarius. Leche y Productos Lácteos. Organización de las. DI. Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación (FAO) y la Organización Mundial de la Salud (OMS). 2011.. 17. Parra R. Lactosuero: Importancia en la Industria de Alimentos. Rev. Fac. Nal. Agr. Medellín, Colombia. 2009; 62(1): 4967-4982. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 18. Baró L, Jiménez J, Martínez A, Bouza J. Péptidos y proteínas de la leche con propiedades funcionales. Universidad de Granada, España. 2001; 42: 3-4; 135-145.. AC IÓ. N. 19. Cruz J, Páez R, Pirola M, Schmidt E. Características Generales sobre el. Tecnología Industrial y Agropecuaria, Argentina. 2010.. UN IC. Uso del Suero de Queso en la Provincia de Santa Fe. Instituto Nacional de. M. 20. Degrossi C, Wachsman M. Estudio de algunas características de las cepas. CO. de levaduras y de su rendimiento celular utilizando un medio de cultivo a. IC. A. Y. base de suero lácteo. Universidad de Belgrano, Argentina. 2005.. ÁT. 21. Otero M, Saura G, Wagner J, Guerrero I. Propagación discontinua de la. RM. levadura Kluyveromyces spp. a partir de suero de queso. Instituto Cubano. IN FO. de Investigaciones de los Derivados de la Caña de Azúcar. Cuba. 2009; 43:. DE. 3-7.. AS. 22. Merck, E. Manual de medios de cultivo. Merck, Darmstadt. Alemania. 2000.. SI ST. EM. 23. Bridson, E. The Oxoid Manual. Oxoid Ltd., Hampshire. England. 1998. 24. Mier, T.; Toriello, C. y Ulloa, M. Hongos microscópicos saprobios y. DE. parásitos: Métodos de laboratorio. Universidad Nacional Autónoma de. IO. N. México. 2002.. CC. 25. Trinci A. Influence of the width of peripheral growth zone on the radial. RE. growth rate of fungal colonies on solid media. J. Gen. Microbiol, Great. DI. Britain. 1971; 67: 325-344.. 26. Koch A. The kinetics of mycelial growth. J. Gen. Microbiol, Great Britain. 1975; 89: 209-216.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 27. Martínez D. Cultivo de Pleurotus ostreatus sobre desechos agrícolas. Obtención y caracterización de cepas nativas en diferentes medios de cultivo sólido en laboratorio. Biótica. 1984; 9 (3): 243-248.. AC IÓ. N. 28. Koneman, E.; Allen, S; Janda, W; Schreckenberger, P y Winn, W. Diagnóstico Microbiológico. Médica Panamericana, Buenos Aires. 1999.. UN IC. 29. Guzmán G, Col. Studies in the genus Pleurotus, IV. Observations on the. M. pink forms growing in México based in the interbreeding of two different. Y. CO. strains. Mycotaxon, México. 1995; 53: 247-259.. IC. A. 30. Moya A. Aprovechamiento de lactosuero por fermentación. Producción de. ÁT. ácido láctico. Universidad de Castilla - La Mancha, España. 1995; 2: 10-13.. RM. 31. Raypeck V. Chemical composition of hemicellulose as a factor participating. IN FO. in the substrate specificity of wood destroying fungi. Wood Sci. Technol.. DE. 1977; 11: 59. AS. 32. Kurtzman R, Zadrazil F. Physiological and taxonomic considerations for. EM. cultivation of Pleurotus mushrooms. In: Chang, S.T. y. Ouimio T. H. Tropical. SI ST. mushrooms: Biological Nature and Cultivation Methods. The Chinese. DE. University Press, Hong Kong. 1982; 16: 304-324.. IO. N. 33. Manu-Tawiah W. and Martin A. Nitrogen sources and the growth response. CC. of Pleurotus ostreatus mushroom mycelium Can. Inst. Food. Sci. Technol.. RE. J. 1988; 21(2): 194-199.. DI. 34. Trinci A. A study of the kinetics of hyphal extension and branch initiation of fungal mycelia. J. Gen. Microbiol., Great Britain. 1974; 81: 225-236. 35. More G. Fundamental of the Fungi. Prentice Hall, New Jersey. USA. 1990.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 36. Sobal M. Efecto del pH sobre el crecimiento de diversas cepas mexicanas y extranjeras de hongos comestibles en el laboratorio. Micol Neotrop ApI.,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. México. 1989; 2: 19-39. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. ANEXOS. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 1. Crecimiento radial del micelio de P. pulmonarius (Fr.) Quél. ICFC 396/06 en placas Petri (9 mm) con agar extracto de malta (1), agar suero de leche (2) y agar suero de leche con extracto levadura (3),. AC IÓ. N. incubadas durante 20 días.. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. (1). N. DI. RE. CC. IO. (3). DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. (2). 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 2. Biomasa formada por P. pulmonarius en botellas planas (250 ml) con caldo extracto de malta (1), caldo suero de leche (2) y caldo suero de leche con extracto levadura (3), incubadas durante 15 días.. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. (1). SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. (2). DI. RE. CC. IO. N. DE. (3). 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..