Efecto del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne sp

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. DE. CI EN. Efecto del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne sp. TESIS. TE. CA. PARA OBTENER EL TÍTULO DE BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO. BL. IO. AUTOR: Br. HIRWIN DANY CASTILLO BACA Br. JOSE LUIS HUAYÁN RADAS. BI. ASESOR: Ms. C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG TRUJILLO – PERÚ 2018 i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AS. BI. O. LO. G. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IC. Dr. Orlando Gonzales Nieves. Dr. Rubén Vera Véliz. CI EN. CI. VICE-RECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL. CA. DE. DE TRUJILLO. TE. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. DE TRUJILLO. BI. BL. IO. VICE-RECTOR DE INVESTIGACIÓN DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. Dr. Freddy Rogger Mejía Coico. BI. O. LO. G. IC. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. Dr. William Elmer Zelada Estraver. CA. DE. CI EN. CI. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dra. Bertha Soledad Soriano Bernilla. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. BI. BL. IO. TE. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. iii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. DEL ASESOR. IC. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis titulada: “Efecto. LO. G. del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne sp”.. BI. O. CERTIFICA:. AS. Que, la investigación ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido por la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con su. CI. correspondiente proyecto y que el informe ha sido redactado acogiendo las observaciones y. CI EN. sugerencias alcanzadas.. Por tanto, autorizo a los Bachiller CASTILLO BACA HIRWIN DANY y HUAYÁN RADAS JOSE LUIS,. BI. BL. IO. TE. CA. Trujillo, Mayo 2018. DE. para continuar con los procedimientos correspondientes según sus fines.. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. IC. AS. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. G. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de Grados y Títulos de. LO. la Universidad Nacional de Trujillo, presentamos a vuestra consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada: “Efecto del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne sp.”, con. AS. BI. O. el objetivo de obtener el título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. Trujillo, Mayo 2018. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. Esperamos que este trabajo sea de su aprobación.. BI. Br. Hirwin Dany Castillo Baca. Br. Jose Luis Huayán Radas. v. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. MIEMBROS DEL JURADO. IC. Dr. Heber Max Robles Castillo. AS. BI. O. LO. G. PRESIDENTE. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg. Ms.C. Anibal Quintana Diaz VOCAL. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. SECRETARIO. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaran que el presente. AS. Informe de Tesis titulado: “Efecto del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne sp.”, ha. O. LO. G. IC. cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. CI EN. CI. AS. PRESIDENTE. BI. Dr. Heber Max Robles Castillo. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg. Ms.C. Anibal Quintana Diaz VOCAL. vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. DEDICATORIA. G. A Jesucristo nuestro Señor por amarnos, guiarnos, y permitirnos. BI. O. LO. concluir todos los objetivos trazados hasta el día de hoy.. AS. A María Santísima Madre nuestra, por su amor y por velar por nosotros acercándonos más a su hijo Jesús, cuando más lo. CI EN. CI. necesitábamos.. DE. A nuestros Padres, por ser los mejores amigos infalibles que nos han ayudado a crecer como persona, con mucho amor y cariño les. CA. dedicamos todo nuestro esfuerzo y trabajo puesto para la realización de esta tesis, quienes a lo largo de nuestra vida han velado por nuestro. BI. BL. IO. TE. bienestar y educación siendo nuestro apoyo en todo momento.. viii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC. AS. AGRADECIMIENTOS. LO. Al Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, Profesor Asociado D.E. del Departamento de. BI. AS. el asesoramiento en la realización de la presente Tesis.. O. Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo, por su amistad, consejos y. CI. A nuestros amados hermanos Castillo Baca Denis Bremner, Tec. en Mecánica Automotriz. CI EN. y Huayán Radas Lorenz Iván, Dr. en Economía, por su amistad incondicional, motivación y por. DE. hacer posible la realización del presente trabajo.. CA. Al Ing. Rito Antonio Llanos Llanos, Profesor Colombiano en Electricidad industrial, por. IO. TE. su amistad, apoyo y asesoramiento en todo momento para la realización del presente trabajo.. BL. A los Ing. Ángeles Sánchez Pedro y Paredes Zare Humberto, gerentes de la Empresas. BI. FONTH SAINE S.A.C. y TECNO SOLUCIONES OZONORAI S.A.C., por su apoyo y predisposición en pro del desarrollo de la presente investigación.. ix. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se evaluó el efecto del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne sp en plantas de Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate”. Para ello se empleó 4 tratamientos: plántulas. AS. no inoculadas con Meloidogyne sp. no tratadas con ozono acuoso, inoculadas tratadas, inoculadas. IC. no tratadas, no inoculadas tratadas, todos ellos con 10 repeticiones. El suelo franco arenoso para la. G. germinación de semillas fue recolectado, esterilizado y preparado con humus en proporción 1:1. Las. LO. semillas fueron lavadas con agua destilada estéril, sembradas en germinador y regadas periódicamente con agua potable; las plántulas de 21 días de edad fueron trasplantadas a bolsas de. BI. O. cultivo para luego ser inoculadas con 1 ml de solución de huevos a una concentración de 3000 huevos por mililitro, dichos huevos fueron extraídos inicialmente de las raíces de un huésped nativo Beta. AS. vulgaris var. cicla “acelga” para luego ser inoculados a plántulas de tomate y de estas agallas se. CI. extrajo el inoculo final para los tratamientos. Para la extracción de huevos en ambos casos se realizó. CI EN. un lavado de las raíces con agua de caño, desinfección con hipoclorito de sodio y un licuado a velocidad media; la solución obtenida fue pasada a través de 4 tamices (710, 180, 38 y 25 μm). El ozono fue producido “in situ” e inyectado a un tanque de 30 litros de agua hasta llegar la. DE. concentración de 1 mg/L. El ozono acuoso obtenido fue aplicado mediante un sistema de riego tecnificado por goteo a las plántulas no infectadas tratadas e infectadas tratadas; las plántulas no. CA. infectadas no tratadas e infectadas no tratadas fueron regadas con agua potable. La aplicación del. TE. riego con ozono acuoso se realizó los primeros 9 días, el tiempo restante se regó con agua potable y. IO. cada 10 días se aplicó en el riego un fertilizante foliar. La evaluación de resultados como: número de. BL. agallas, Tasa de Multiplicación del Nematodo (TMN), porcentaje de materia seca de la parte aérea y radicular (con diferencia significativa p<0.05) y la altura de la planta (sin diferencia significativa. BI. p>0.05) se realizó a los 60 días después de la inoculación. Los resultados de este estudio permiten concluir que el aplicar ozono acuoso a la concentración de 1 mg/L a un cultivo de L. esculentum, reduce la viabilidad de Meloidogyne sp. evidenciándose en la disminución de un 74,14% del número de agallas en las plantas infectadas tratadas en comparación con las infectadas no tratadas.. x. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA DE CONTENIDO Pág. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO…...….……………………………………………ii AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS…..………………………………………….………iii. AS. DEL ASESOR………………………………………………………………………………………..…………….……………..………iv PRESENTACIÓN……………………………………………………………………………………….……………………….…….…v. IC. MIEMBROS DEL JURADO…………………………………………………………..…………………………………….…..…..vi. G. APROBACIÓN………………………………………………………………………………………….………………………………vii. LO. DEDICATORIA………………………………………………………………............................................................viii AGRADECIMIENTOS…………………………………………………………………..……………………….……………………ix. O. RESUMEN……………………………………………………………………………………………….…………………………………x. BI. TABLA DE CONTENIDO……………………………………………………………………………………………….……………xi INTRODUCCIÓN………………………………………………………..……………………………………….……………………..1. AS. MATERIAL Y METODOS……………………………………………………….……………….…………….……………………..7 2.1 MATERIALDE ESTUDIO……………………………………………………………………………….……………………...7. CI. 2.2 PROCEDIMIENTO…………………………………………………………........................................................7. CI EN. 2.2.2. Recolección, esterilización y preparación del sustrato……………….……………………………………7 2.2.3 Tratamiento superficial, siembra de semillas y trasplante de plántulas de Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate” a bolsas de cultivo. ……............………8. DE. 2.2.4. Extracción de huevos de Meloidogvne sp. ……………………………………………………………………..8 2.2.5 Inoculación de una suspensión de huevos de Meloidogyne sp………………………………………..9 2.2.6 Tratamiento con ozono acuoso a la concentración de 1 ppm en plantas de. CA. Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate”…………………….......…………………………9. TE. 2.2.7 Evaluación del efecto del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne sp. en plantas de Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate” ……..…………………….10. IO. 2.2.8 Análisis de datos ……………………………………………………………………………………………....……….…11. BL. RESULTADOS………………………………………………………………………………………………………………..…………12 DISCUSIÓN…………………………………………………………………………………..………………………………………...17. BI. CONCLUSIONES………………………………………………………………………………...………………………….………..22 RECOMENDACIONES………………………………………………………………………………...……………………………23 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS……………………………………………………………….……………………………...24 ANEXOS……………………………………………………………………………………………….……………………....………..30. xi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN El ozono es un gas incoloro que existe naturalmente en la atmósfera a una altura de 20 a 30 km (estratosfera), y protege toda especie de vida en la Tierra de la dañina acción de la radiación. AS. ultravioleta. También se puede producir dicho gas artificialmente fusionando la molécula de. IC. oxígeno por métodos como el de una descarga eléctrica, por luz ultravioleta o por reacciones. G. electrolíticas y químicas1. El ozono es un alótropo triatómico de oxígeno (O3). Es inestable y se. LO. descompone con cierta facilidad en oxígeno (O2) y oxígeno naciente, que es un fuerte oxidante. O. (O2-)2. Debido a esta característica, el ozono actúa con gran eficiencia como agente. BI. desinfectante, el cual ha sido utilizado para el control de un amplio espectro de microorganismos. AS. patógenos y muchos contaminantes químicos en una amplia gama de corrientes de agua y aguas. CI. residuales3, para la desinfección y conservación de productos frescos 4,5, como en el tratamiento. CI EN. de frutas y hortalizas para aumentar la vida útil de los productos6.. DE. El ozono puede ser utilizado eficazmente en estados tanto gaseoso como acuoso 7. Aunque el ozono gaseoso puede ser fitotóxico a concentraciones bajas 8, estas. CA. propiedades se alteran cuando se aplica en forma acuosa, la física de transferencia de. TE. masa y la estabilidad química son muy diferentes que en el estado del gas libre9,10, así. IO. el ozono acuoso puede ser aplicado a través de un sistema de tuberías, dejar el ozono. BL. en solución es útil para limpiar todo el sistema de biofilm y prevenir la proliferación de. BI. patógenos1.. El acto de crear y disolver el ozono en el agua de riego también conduce a un mayor contenido de oxígeno disuelto. Se ha demostrado que la oxigenación mejorada tiene 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. beneficios en términos de productividad mejorada y control de patógenos en la producción de invernadero11.. AS. Los productores que incorporan ozono en su estrategia de manejo de irrigación. IC. permiten que el ozono se disipe o elimine activamente antes de la distribución al. G. cultivo. Esta eliminación se lleva a cabo como una acción prudente para evitar. LO. cualquier daño potencial de la cosecha como resultado de la salida del gas ozono. Esta. O. prudencia está particularmente justificada en los sistemas de irrigación, ya que si no. BI. se administra adecuadamente posiblemente podría causar daños foliares12. Cuando. AS. se aplica directamente al sustrato de crecimiento (por ejemplo, riego por goteo) este. CI. riesgo se reduce en gran medida, ya que las concentraciones en las soluciones acuosas. CI EN. son bajas en comparación con las atmosféricas.. DE. Los cultivos agrícolas mayormente son afectados por nematodos endoparásitos sedentarios como los del género Meloidogyne pertenecientes al orden Tylenchida13.. CA. Las especies de este género distorsionan la morfología de la raíz mediante la formación. TE. de agallas y la interrupción del xilema. Daños en la raíz y la disfunción debido a las. IO. alteraciones en la anatomía de esta estructura pueden afectar las relaciones hídricas. BL. de la planta hospedante y suprime el crecimiento y el desarrollo de la planta 14.. BI. Consecuentemente la planta disminuye su calidad, el rendimiento de la cosecha y la resistencia a otros tipos de estrés, lo cual puede conducir a la pérdida total de la cosecha15. La cantidad de plantas que afecta este género son de alrededor de 5.500. especies de plantas, mientras que, sólo la especie Meloidogyne incognita puede 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. infectar a 1.700 especies de plantas16, por eso son considerados los más importante en el ámbito mundial, ya que parasitan en raíces de una amplia gama de cultivos en especial de hortalizas (polífagos)17, así como la severidad de los daños, la reducción en. IC. AS. producción y calidad de su planta huésped18.. G. Meloidogyne sp. es un endoparásito obligado que se alimenta exclusivamente en el. LO. citoplasma de las células de plantas vivas. El ciclo de vida se completa entre 25 y 60. O. días, dependiendo de la temperatura del suelo. Las temperaturas de 25 a 30 °C son las. BI. ideales para el crecimiento y el desarrollo de este nematodo, así en épocas de verano,. AS. el ciclo puede durar de 2 a 4 semanas. Mientras que en invierno el ciclo puede durar. CI. hasta un mes. Temperaturas inferiores a 15 °C o superiores a 33 °C interrumpen el. CI EN. desarrollo de las hembras que no llegan a completar madurez; estos nematodos. DE. prefieren suelos sueltos (franco-arenosos) y requieren humedad para desplazarse19.. Los huevos de Meloidogyne se encuentran agrupados en masas de 100 a 1.200. CA. individuos, protegidos por una matriz gelatinosa secretada por la hembra. Estas masas. TE. se encuentran en el suelo o en los restos de raíces del cultivo anterior. Una vez que. IO. estos huevos larvados eclosionan, los juveniles de segundo estado (J2), detectan los. BL. componentes químicos de los exudados de las raíces a través de sus órganos. BI. quimiosensoriales, orientando al nematodo hacia las raíces de las plantas20; luego penetran en ellas y migran hacia el cilindro central en desarrollo, cerca de la zona elongación radicular; con sus estiletes perforan las paredes de las células e inyectan secreciones de sus glándulas esofágicas, las cuales causan un agrandamiento las 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. células en el cilindro vascular (hipertrofia) y aumentan la proporción de la división celular en el periciclo (hiperplasia), lo que conlleva a la formación de nódulos radiculares21. Así Meloidogyne establece y mantiene un grupo permanente de células,. AS. conocidas como células gigantes (GC), las cuales le sirven como fuente exclusiva de. IC. nutrientes para su desarrollo22. En la parte aérea de la planta el daño se manifiesta. G. como clorosis (amarillamiento), marchitez, enanismo y reducción de rendimiento. Los. LO. nematodos agalladores de la raiz han desarrollado mecanismos sofisticados para. BI. O. explotar las plantas, con profundo impacto agrícola.. AS. Para evitar grandes pérdidas de cultivos, muchos agricultores optan por el uso de. CI. nematicidas químicos, porque presentan un modo relativamente sencillo de aplicación. CI EN. y un mecanismo rápido de acción; sin embargo a pesar del uso intensivo de nematicidas sintéticos, el control de estos fitoparásitos no es eficiente, y en algunos. DE. casos este método reduce o elimina las poblaciones de antagonistas naturales asociados a la rizósfera23,24. Así, en los últimos años, por su distribución, el nematodo. CA. de la raíz Meloidogyne sp. representa un problema importante para los cultivos. TE. protegidos, especialmente En los países mediterráneos donde las condiciones. BL. IO. climáticas favorecen su desarrollo25.. BI. Recientemente, se ha mostrado interés en aplicación de ozono acuso directamente sobre las plantas para controlar las enfermedades. Por ejemplo, el ozono acuso se ha utilizado como una alternativa a los productos químicos para el control de Oídio en los pepinos10,25, u otras enfermedades como el tizón temprano y el moho foliar en tomate 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 26.. Se ha demostrado que el ozono tiene un potencial para mejorar el rendimiento de. los cultivos. En un experimento en invernadero, concluyeron que el riego con ozono acuoso durante un mes aumentó el área de la hoja y el peso fresco de Pak Choi. AS. (espinaca china)27. en otro experimento, las aplicaciones individuales de ozono acuoso. IC. no tuvieron ningún efecto sobre el área foliar y peso seco, sin embargo, los niveles de. 28.. G. patógenos se redujeron significativamente en todos los tratamientos con ozono. LO. Esta información disponible de la aplicación directa de ozono acuoso al sustrato de. O. crecimiento sugiere que el potencial fitotóxico puede ser sobrestimado y el uso del. Con un número cada vez mayor de estudios que muestran que niveles bajos de. AS. 29,30.. BI. ozono acuso puede sostener la promesa de diversificar las opciones de manejo de riego. CI. ozono acuoso no son nocivos para las plantas, dejar el ozono en solución para riego. CI EN. puede ser factible 31. Así mismo hay pocos estudios sobre el impacto del ozono acuoso sobre el control de los patógenos del suelo 32, y poca información sobre el uso de ozono. DE. acuoso como una nueva estrategia de control de plagas sostenible contra los nematodos33. Además, el efecto de los mecanismos subyacentes que el ozono acuso. CA. tiene sobre la interacción entre los nematodos y sus plantas huésped no se han. IO. TE. estudiado del todo hasta la fecha.. BL. Un interés particular reside en el potencial del ozono acuoso como tecnología de. BI. remediación del agua de riego y como un medio para controlar los patógenos sin dejar residuos químicos, un inconveniente de muchas estrategias actuales de control de plagas y una preocupación creciente de la salud pública27.. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El uso del ozono acuso podría ofrecer una alternativa de control frente a nematodos agalladores, por tal razón el presente estudio se planteó como objetivo conocer el potencial el efecto nematicida del ozono acuoso a 1 mg/L sobre la viabilidad de. AS. Meloidogyne sp. en plantas de L. esculentum aplicado mediante riego tecnificado por. IC. goteo a nivel de invernadero; así mismo conocer la Tasa de Multiplicación de. G. Nematodos y la evaluación de la biomasa para determinar la posible fitotoxicidad del. LO. ozono acuoso (Altura y % materia seca). Estos estudios representan pasos iniciales. O. hacia el desarrollo de una compresión más amplia del umbral de tolerancia de un. BI. cultivo hacia el ozono acuoso, lo cual es un paso clave en el desarrollo de nuevas. AS. aplicaciones que ayudará a los productores a obtener mayores beneficios, al tiempo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. que resuelve los desafíos de un entorno cambiante y operacional.. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. 1.1.. Material de estudio. AS. En el presente estudio se utilizaron:. IC.  Cuarenta plántulas de Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate”. LO. G. de 21 días de edad, cultivadas a partir de semillas certificadas adquiridas de Agronegocios “HORTUS” S.A. Trujillo (Perú).. BI. O.  Huevos de Meloidogyne sp. extraídos de plantas de Beta vulgaris var. cicla “acelga” con síntomas de nódulos radiculares.. AS.  Suelo franco arenoso estéril.. CI EN. CI.  Ozono acuoso a la concentración de 1 mg/L.. 1.2. PROCEDIMIENTO. DE. El diseño experimental utilizado consto de 4 tratamientos: 1 experimental, 2. CA. controles positivos y 1 control negativo, todos ellos con 10 repeticiones. 1.2.1 Recolección, esterilización y preparación del sustrato. Se recolectó suelo franco arenoso, el cual fue colocado en bolsas de. TE. . IO. polipropileno y esterilizado en autoclave a 121°C durante 45 minutos. La. BL. preparación del sustrato para la germinación de las semillas consistió en agregar. BI. 1 Kg de suelo y 1 Kg de humus (1:1) para llenar 200 pocillos de un germinador. Para los tratamientos el sustrato solo consistió en suelo franco arenoso estéril, para llenar 40 bolsas de cultivo, que fueron distribuidas en 10 bolsas por tratamiento. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 1.2.2. Tratamiento superficial, siembra de semillas y trasplante de plántulas de Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate” a bolsas de cultivo.. AS. Las semillas fueron lavadas 3 veces consecutivas con agua destilada estéril para. IC. eliminar los productos químicos de la certificación y puestas a secar, finalmente. G. se sembró dos semillas por pocillo del germinador. Se realizó un monitoreo de. LO. la temperatura ambiental, la humedad relativa y un fotoperiodo de 12 h luz/12. O. h de oscuridad (natural); los pocillos fueron regados periódicamente con agua. BI. potable.. AS. Las plántulas de Lycopersicum esculentum de 21 días de edad fueron. CI. trasplantadas a bolsas de cultivo con suelo de cultivo agrícola franco arenoso. CI EN. estéril, para su posterior tratamiento.. DE. 1.2.3 Extracción de huevos de Meloidogvne sp. Los huevos de Meloidogyne sp. fueron extraídos inicialmente de las raíces de. CA. un huésped nativo Beta vulgaris var. cicla “acelga” que presentaban síntoma. TE. de agallamiento radicular, para luego ser inoculados a plántulas de. IO. Lycopersicum esculentum var. Río Grande “tomate”; de estas agallas se extrajo. BL. el inoculo final para los tratamientos. La extracción de huevos en ambos casos. BI. se realizó de la siguiente manera: lavado de raíces bajo flujo abundante de agua de caño, desinfección durante 2 minutos en solución de hipoclorito de sodio al 2%, triple lavado con agua destilada estéril y licuado de agallas. Para determinar el número de huevos/mL. se procedió a desintegrar las masas de 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. huevos, homogenizando la solución licuada de agallas con hipoclorito de sodio 1,2% durante 5 minutos, luego se hizo pasar esta solución a través de 4 tamices (710, 180, 38 y 25 μm); con la ayuda de una piseta se recolecto los huevos. AS. retenidos en el último tamiz; de esta suspensión se tomó una alícuota y se. IC. procedió hacer recuento mediante una cámara de Neubauer, finalmente se. LO. G. aforó a un volumen conocido hasta conseguir la concentración deseada.. O. 1.2.4 Inoculación de una suspensión de huevos de Meloidogyne sp.. BI. Se calculó la concentración de 3000 huevos/mL de Meloidogyne sp. y se inoculó. AS. 1 mL cerca de la raíz tanto de las plantas del grupo experimental como del. CI. control positivo que no fue tratado con ozono acuoso. Las plantas no infectadas. CI EN. tratadas con ozono acuoso y no tratadas serán utilizadas como control positivo y negativo respectivamente.. DE. 1.2.5 Tratamiento con ozono acuoso a la concentración de 1 mg/L en plantas de Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate”. CA. Las plantas de 21 días de edad fueron expuestas a 4 tratamientos, para esto se. TE. almacenó agua potable en dos tanques de 30 L cada uno; estos fueron. IO. conectados mediante un sistema de riego tecnificado (por goteo) a sus. BL. respectivos grupos. A uno de los tanques le fue inyectado gas ozono mediante. BI. un equipo generador de ozono “A2Z MP 3000”(ANEXO 16) conectado a una. bomba sumergible “Sobo” cuyo caudal es de 15000 L/h. El agua se dejó homogenizar con el gas ozono producido “in situ” durante una hora. La concentración de ozono disuelto en el agua (1 ppm) se determinó mediante un 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. medidor digital de ozono “CLEAN DOZ30”. Todas las plantas fueron regadas cada día con 500 mL de agua por bolsa de cultivo y cada 10 días con fertilizante foliar “KELPWAY NPK 20%” (ANEXO 17). Las plantas del grupo experimental y. AS. un control positivo fueron regadas con ozono acuoso. Las plantas de control. IC. negativo y un control positivo fueron tratadas con agua potable, tal y como se. LO. G. muestra en el siguiente esquema de tratamiento:. C(+). C(+). L. e. L. e. L. e. L. e. M. __. M. __. O3. O3. __. __. F. F. F. F. CI EN. CI. AS. BI. O. Experimental. Donde:. L.e (Lycopersicum esculentum).. . M (Meloidogyne sp.).. . 03 (riego con ozono acuoso a 1 mg/L).. . F (fertilizante foliar).. TE. CA. DE. . C(-). IO. 1.2.7 Evaluación del efecto del ozono acuoso sobre la viabilidad de Meloidogyne. BL. sp. en plantas de Lycopersicum esculentum var. Río Grande “Tomate”. BI. A los 60 días después de la inoculación (dpi), cada planta fue extraída de las bolsas de cultivo; se midió la altura (cm) de la parte aérea; las raíces fueron separadas y procesadas individualmente (número de agallas). En ambos casos se determinó el % de materia seca. El suelo fue procesado mediante la técnica 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de Christie y Perry35 para la extracción y recuento de nematodos móviles. Con los resultados obtenidos se calculó la tasa de multiplicación del nematodo (TMN).. AS. 1.2.8. Análisis de datos. IC. Para determinar si existía diferencia significativa entre los tratamientos. G. evaluados se realizó un análisis de varianza y se obtuvo un p < 0,05 por lo cual se. LO. realizó una prueba POSTANOVA empleando para esto el programa estadístico. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. SPSS (V.22).. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En la Tabla 1 se muestra que los resultados del número promedio de agallas por planta de L. esculentum var. Rio Grande no inoculas con Meloidogyne sp. no tratadas con ozono acuoso, inoculadas tratadas, inoculadas no tratadas, no inoculadas tratadas, fueron: 0, 58, 225 y 0. AS. respectivamente. El análisis estadístico de estos promedios mediante ANOVA y la prueba de rangos múltiples de Duncan, mostraron que existe diferencia significativa (p<0.05) entre las. IC. plantas inoculadas no tratadas frente a las inoculadas tratadas, no inoculadas no tratadas,. G. no inoculadas tratadas; pero no existe diferencia significativa entre los últimos tres. LO. mencionados.. O. En la Tabla 2 se muestra que los resultados de las tasas de multiplicación del nematodo. BI. (TMN) promedio, presentes por 100 g de rizosfera de plantas de L. esculentum var. Rio Grande no inoculas con Meloidogyne sp. no tratadas con ozono acuoso, inoculadas tratadas,. AS. inoculadas no tratadas, no inoculadas tratadas, fueron: 0.0, 0.17, 1.79 y 0,0 respectivamente. El análisis estadístico de estos promedios mediante ANOVA y la prueba de. CI. rangos múltiples de Duncan, mostraron que existe diferencia significativa (p<0.05) entre las. CI EN. plantas inoculadas no tratadas frente a las inoculadas tratadas, no inoculadas no tratadas, no inoculadas tratadas; pero no existe diferencia significativa entre los últimos tres mencionados.. DE. En la Tabla 3 se muestra que los resultados de la altura promedio de las plantas de plantas de L. esculentum var. Rio Grande no inoculas con Meloidogyne sp. no tratadas con ozono. CA. acuoso, inoculadas tratadas, inoculadas no tratadas, no inoculadas tratadas, fueron: 152.6, 157.9, 162.8 y 159.5 respectivamente. El análisis estadístico de estos promedios mediante. TE. ANOVA mostró que no existe diferencia significativa (p>0.05) entre estos grupos.. IO. En la Tabla 4 se muestra que los resultados del porcentaje de materia seca promedio de las. BL. plantas de plantas de L. esculentum var. Rio Grande no inoculas con Meloidogyne sp. no tratadas con ozono acuoso, inoculadas tratadas, inoculadas no tratadas, no inoculadas. BI. tratadas, fueron: 69.5, 69.39, 35.36 y 70.47 respectivamente en cuanto a raíz y 59.96, 55.92, 37.49 y 64.95 respectivamente en cuanto a tallo. El análisis estadístico de estos promedios mediante ANOVA y la prueba de rangos múltiples de Duncan, mostró que existe diferencia significativa (p<0.05) entre las plantas inoculadas no tratadas frente a las inoculadas. tratadas, no inoculadas no tratadas, no inoculadas tratadas; pero no existe diferencia significativa entre los últimos tres mencionados.. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Número promedio de agallas radiculares en plantas de Lycopersicum. LO. Tabla 1.. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. esculentum var. Rio Grande inoculadas y no inoculadas con Meloidogyne. CI EN. Sin nematodo y sin ozono. CI. TRATAMIENTOS. AS. BI. O. sp. tratadas y no tratadas con ozono acuoso.. # de agallas por planta 𝟎𝒃. Nematodo + ozono. 𝟓𝟖𝒃. Nematodo. 𝟐𝟐𝟓𝒂 𝟎𝒃. DE. Ozono. CA. Valores con la misma letra no presentan diferencia significativa entre sí, según la prueba de. BI. BL. IO. TE. Duncan.. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Tabla 2.. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tasa de multiplicación promedio de nematodos agalladores (TMN) en. AS. plantas de Lycopersicum esculentum var. Rio Grande inoculadas y no. CI EN. CI. inoculadas con Meloidogyne sp. tratadas y no tratadas con ozono acuoso.. Tasa de multiplicación (Pf/Pi). Sin nematodo y sin ozono. 𝟎. 𝟎𝟎𝒃. Nematodo + ozono. 𝟎. 𝟏𝟕𝒃. Nematodo. 𝟏. 𝟕𝟗𝒂. Ozono. 𝟎. 𝟎𝟎𝒃. TE. CA. DE. TRATAMIENTOS. IO. Valores con la misma letra no presentan diferencia significativa entre sí, según la prueba de. BI. BL. Duncan.. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Tabla 3.. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Altura promedio de plantas de Lycopersicum esculentum var. Rio Grande. AS. inoculadas y no inoculadas con Meloidogyne sp. tratadas y no tratadas. Altura de planta (cm). Sin nematodo y sin ozono. 𝟏𝟓𝟐. 𝟔𝒂. Nematodo + ozono. 𝟏𝟓𝟕. 𝟗𝒂. Nematodo. 𝟏𝟔𝟐. 𝟖𝒂. CA. TRATAMIENTOS. DE. CI EN. CI. con ozono acuoso.. 𝟏𝟓𝟗. 𝟓𝒂. IO. TE. Ozono. Valores con la misma letra no presentan diferencia significativa entre sí, según la prueba de. BI. BL. Duncan.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Porcentaje promedio de materia seca de raíz y tallo de plantas de. BI. Tabla 4.. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Lycopersicum esculentum var. Rio Grande inoculadas y no inoculadas con. TRATAMIENTOS. CI EN. CI. AS. Meloidogyne sp. tratadas y no tratadas con ozono acuoso.. %materia seca Raíz. Tallo. 𝟔𝟗. 𝟓𝒂. 𝟓𝟗. 𝟗𝟔𝒂. Nematodo + ozono. 𝟔𝟗. 𝟑𝟗𝒂. 𝟓𝟓. 𝟗𝟐𝒂. Nematodo. 𝟑𝟓. 𝟑𝟔𝒃. 𝟑𝟕. 𝟒𝟗𝒃. 𝟕𝟎. 𝟒𝟕𝒂. 𝟔𝟒. 𝟗𝟓𝒂. CA. DE. Sin nematodo y sin ozono. IO. TE. Ozono. Valores con la misma letra no presentan diferencia significativa entre sí en la misma columna,. BI. BL. según la prueba de Duncan.. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. Las agallas son síntomas producto de la infección por nematodos agalladores de la raíz (RKN).. AS. Los juveniles infectivos de segundo estadío (J2) de Meloidogyne penetran las puntas de las raíces. IC. y migran intercelularmente hacia el cilindro vascular, induciendo hipertrofia e hiperplasia,. G. formando así células gigantes (GC); estos sitios de alimentación especializados son la única. LO. fuente de nutrientes para este parásito de la raíz a lo largo de su vida21. El tratamiento con ozono. O. acuoso afecta la infección por Meloidogyne al causar una reducción significativa en el número. BI. de agallas presentes en las raíces de las plantas infectadas tratadas en comparación con las no. AS. tratadas con ozono (-74,14%, P <0.05) (Tabla 1, ANEXO 24). Esto se debe a que la población de J2 fue disminuida en una etapa inicial desde su estadío de huevo. El inoculo inicial fue de 3000. CI. huevos de Meloiodyne sp., estos perdieron su capacidad de eclosionar e infectar posiblemente. CI EN. al ser desintegrados por la fuerte acción oxidante del ozono residual presente en el agua de riego. La cubierta de los huevos de los nematodos son principalmente proteínas, las cuales son. DE. oxidadas rápidamente por acción del ozono, ya que tal y como han demostrado otros estudios, es un potente agente antimicrobiano, activo contra un amplio espectro de microorganismos,. CA. tanto en medio gaseosos como acuosos; destruyendo la cubierta y dejando expuesta el. TE. contenido celular6.. IO. Los huevos que no tuvieron contacto con el gas llegaron a eclosionar y ser infectivos, esto. BL. posiblemente se deba a que la concentración de ozono disuelto (DOC) en el tanque de. BI. abastecimiento principal (1 mg/L) fue alterada por la alta reacción del ozono con la materia orgánica e inorgánica durante su distribución por el sistema de riego tecnificado y al entrar en contacto con el sustrato, así mismo su efecto se vio disminuido al regarse 9 de los 10 días requeridos para el tratamiento, puesto que el décimo día se aplicó solución nutritiva en el agua de riego. El volumen de agua por día fue establecido en base a los 500 mL requeridos por la 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. planta46, es así que durante el experimento se regó con este volumen en dos turnos (mañana y tarde), el cual se completaba a los 5 minutos de abiertas las llaves del sistema de irrigación, así mismo el periodo de riego estuvo sujeto al tiempo necesario para la penetración de J2 en las. AS. raíces, el cual depende de factores como vigor del nematodo, distancia a la raíz, temperatura, humedad y condiciones edáficas36. Es necesario completar el periodo de riego mínimo de 10 días. IC. ya que la tasa de penetración puede iniciar lenta pero se incrementa después de 48 horas, y. LO. G. prosigue hasta 240 horas después, a medida que los J2 van eclosionando de los huevos37. Es así como el DOC inicial sufre una disminución considerable, sin embargo, el DOC residual es. BI. O. suficientemente efectivo para reducir considerablemente el inoculo inicial, prueba de ello es la. AS. presencia de agallas en las plantas infectadas tratadas con ozono, pero en una cantidad mínima. La presencia de escasas agallas puede deberse también a que el ozono acuoso actúa como un. CI. elicitor efectivo, ya que puede provocar resistencia de la planta ante la infección por. CI EN. Meloidogyne38. Una vez eclosionado los huevos, el ozono acuso no tiene efecto discernible sobre la viabilidad de J2 directamente, ni en su capacidad para penetrar, migrar e inducir células. DE. gigantes; sin embargo produce un retraso en el desarrollo de estas, ya que afecta el desarrollo normal del sitio de alimentación, logrando así una menor susceptibilidad de la planta a la. CA. infección por M. incognita 39, 40. Las GC de las agallas de las plantas tratadas con ozono acuoso. TE. pueden mostrar una apariencia comparable a las de las plantas no tratadas o contener una vacuola ampliada (ocupando casi todo el volumen de la GC), característica típica de las primeras. IO. etapas de la formación del sitio de alimentación 41. Estas GC se caracterizan por síntomas visibles. BL. de senescencia como descomposición de material celular, agregados de membrana y. BI. desorganización de todo el protoplasto; el área disminuida de las GC tratadas en comparación con los no tratadas, podría ser el último efecto de varias respuestas de la planta hospedadora desencadenadas por el ozono, solo o en combinación con el estrés biótico 40 .. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En las agallas de las plantas tratadas se generan altos niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) los cual mejora la resistencia contra diversos patógenos 42. Estos niveles de ROS pueden tener un papel directo como agente antimicrobiano; durante el experimento, se observó que el. AS. número de agallas de las plantas tratadas frente a las no tratadas, disminuyó (Tabla 1); esta interacción entre Meloidogyne y su planta huésped se vio afectada posiblemente debido a que. IC. el ozono proporcionó protección contra el estrés oxidativo durante el desarrollo del sitio de. LO. G. alimentación de los nematodos; esto puede ser uno de los principales factores de aumento de. O. la resistencia en las raíces de las plantas de tomate tratadas con ozono acuoso contra RKN.. BI. Así mismo podemos observar que hubo una disminución en la población de nematodos móviles. AS. presentes en la rizosfera de las plantas infectadas tratadas en comparación con las no tratadas con ozono; el análisis estadístico indica que existe diferencia significativa (p < 0,05) entre la Tasa. CI. de multiplicación de nematodos (TMN) presentes por 100 g de tierra tomados de estos. CI EN. tratamientos (Tabla 2). Es preciso tener en cuenta que la disminución de TMN se deba a una interrupción del ciclo de vida de RKN. Los resultados obtenidos muestran que no existe. DE. diferencia significativa (p>0,05) entre las plantas infectadas tratadas con ozono y las plantas que estuvieron libres del parasito, por todo esto podemos evidenciar que la aplicación de ozono. CA. acuso tiene una alta eficacia para disminuir la susceptibilidad del tomate frente a los parásitos. TE. presentes en la rizosfera, debido a que protege a las plantas de la infección por nematodos a. IO. través de la modulación de los mecanismos de defensa basal 40; por ello el ozono acuoso puede usarse como una estrategia alternativa para la prevención y control de RKN, tal es el caso de. BI. BL. Meloidogyne.. La altura promedio de las plantas de todos los tratamientos según el análisis estadístico no presentan diferencia significativa (p > 0,05) (Tabla 3). Observándose plantas largas pero delgadas en las que fueron inoculas no tratadas y largas pero gruesas en los demás tratamientos, esto puede deberse a la forma de cultivar y nutrir los tomates. En el presente estudio se cultivaron 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. plantas de tomate indeterminadas, siendo sembradas en bolsas de cultivo las cuales fueron nutridas con NPK cada 10 días y siendo entutoreadas a los 21 días para prolongar y direccionar su crecimiento. Para poder determinar si el riego con ozono acuoso tuvo un efecto sobre el. AS. cultivo de tomate, se comparó el porcentaje de materia seca promedio de las plantas de tomate, tanto de la parte aérea como de las raíces (Tabla 4), ya que estos parámetros son concomitantes;. IC. encontrándose que existe una diferencia significativa (p < 0,05) entre las plantas que fueron. LO. G. infectadas no tratadas con ozono (positivo-nematodo) y los demás tratamientos.. O. Es conocido que bajos niveles de oxígeno en la zona de la raíz tienen un impacto negativo bien. BI. establecido sobre la productividad de la planta43. Es por ello que la relación encontrada entre. AS. biomasa y ozono acuoso nos sugiere que dicho gas posee un potencial benéfico para el desarrollo de la planta. Estadísticamente las plantas tratadas infectadas (experimental) así como. CI. las tratadas no infectadas (positivo-ozono) son iguales en biomasa a las plantas en condiciones. CI EN. óptimas (negativo). Esto posiblemente se debe a que el ozono proporciona una mayor oxigenación a la raíz. La molécula triatómica de oxígeno reacciona rápidamente con cualquier. DE. materia orgánica e inorgánica presente en el sustrato volviendo a su estado de O2 rápidamente1, de esta manera aplicar ozono en el agua de riego es una forma de suministrar mayor oxígeno a. CA. la raíz, permitiéndole un mejor desarrollo a la planta a través de un mejor enraizamiento (ANEXO. TE. 20); beneficiando así el rendimiento de la producción de dicho cultivo.. IO. Los resultados obtenidos en los parámetros de crecimiento (Tabla 3, Tabla 4) muestran que la. BL. aplicación de ozono acuoso al sistema radicular no tiene efecto fitotóxico sobre la acumulación. BI. de biomasa del cultivo de tomate, tal y como se ha demostrado anteriormente28, esto probablemente se debe a que la vida media del ozono disuelto en agua es muy corta, por lo general menos de 20 minutos, dependiendo de factores como temperatura, pH, y sales presentes en el medio1. Durante el experimento se usó un DOC de 1 mg/L, el cual se encuentra. dentro del rango propuesto por He26, cuyo DOC es de 0.6 - 1.8 mg/L para controlar 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. enfermedades transmitidas por el aire en plantas de tomate mediante pulverizado y está por debajo del límite superior de 3 mg/L para cultivos hidropónicos de tomate mediante riego por goteo30; concentraciones superiores podrían ser fitotóxicas, aunque recientemente se han. AS. realizado estudios en cultivos de tomate en sustrato sólido a concentraciones que superan estos límites (10 mg/L) sin presentar efectos fitotóxicos40, más estudios sobre el posible potencial. IC. fitotóxico de DOC elevados son requeridos; es por ello que el uso de DOC bajas es justificable en. LO. G. escenarios de aplicación diaria. Durante el experimento se determinó a través de un medidor digital que para mantener un DOC estable, es necesario el reflujo constante de la inyección de. BI. O. dicho gas en el medio líquido y su distribución a través de microburbujas, las cuales proporcionan una mayor área de contacto, garantizando una transferencia de masa de gas y una. AS. alta solubilidad en agua44,45. Por otra parte, también influye el método de aplicación, en este. CI. caso riego tecnificado por goteo, da como resultado una exposición limitada de las raíces al gas.. CI EN. El presente estudio realizado propone el uso de gas ozono, aplicado como una solución acuosa al suelo cercano a las raíces de un cultivo de tomate susceptible, como una estrategia alternativa. DE. para la prevención y control de RKN, tal es el caso de Meloidogyne sp. Así mismo se muestra que no presenta efecto fitotóxico, más por el contrario beneficia el rendimiento de la producción de. CA. dicho cultivo, así mismo el O2 que deja como residuo es biodegradable lo cual lo convierte en. TE. una alternativa ecológica que puede responder a la creciente preocupación de salud ambiental. BI. BL. IO. y pública asociadas con el uso de algunos nematicidas.. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. . El aplicar ozono acuoso a la concentración de 1 mg/L a un cultivo de L.. AS. esculentum, reduce la viabilidad de Meloidogyne sp. evidenciándose en la. IC. disminución del número de agallas y la Tasa de Multiplicación del Nematodo. G. (TMN).. LO.  La aplicación de ozono acuoso a la concentración de 1 mg/L al sistema radicular. parámetros de crecimiento estudiados.. La aplicación de ozono acuoso a la concentración de 1 mg/L en el agua de riego. AS. . BI. O. no tiene efecto fitotóxico sobre la acumulación de biomasa del cultivo, según los. CI. es una forma de suministrar mayor oxígeno a la raíz, permitiéndole un mejor. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. desarrollo a la planta a través de un mejor enraizamiento.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES  Debido a que existe materia orgánica en el sustrato utilizado que puede reaccionar con el ozono acuoso, se debe aplicar riegos previos con ozono acuoso. AS. a las bolsas de cultivo de los tratamientos, esto garantiza una mejor acción del. IC. ozono residual en cada tratamiento.. LO. G.  Concentrar el ozono acuoso inyectando gas ozono producido “in situ” mediante reflujo constante y micro burbujas durante 30 – 60 minutos para obtener la. BI. O. concentración requerida.. AS.  Evaluar las características del sustrato a ser utilizados en el tratamiento, para estimar la concentración de ozono acuoso requerido.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI.  Regar con solución nutritiva los días que no se aplique riego con ozono acuoso.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. AS. 1. Graham DM. Use of ozone for food processing. Food Technol. 1997; 51: 72-75.. IC. 2. Restaino L, Frampton EW, Hemphill JB, Palnikar P. Efficacy of ozonated wáter. G. against various food-related microorganisms. Appl Env Microbiol. 1995; 61:. LO. 3471-3475.. O. 3. Hassenberg K, Frohling A, Geyer M, Schluter O, Herppich WB. Ozonated wash. BI. water for inhibition of Pectobacterium carotovorum on carrots and the effect on. AS. the physiological behaviour of produce. Eur J Hortic Sci. 2008; 73: 37-42.. CI. 4. Zhang LK, Lu ZX, Yu ZF, Gao X. Preservation of fresh-cut celery by treatment with. CI EN. ozonated water. Food control. 2005; 16: 279-283. 5. Guzel-Seydim ZB, Greene AK, Seydim AC. Use of ozone in the food industry. LWT. DE. Food Sci Technol. 2004; 37(4): 453-460. 6. Perry JJ, Yousef AE. Decontamination of raw foods using ozone-based. CA. sanitization techniques. Annu Rev Food Sci Technol. 2011; 2: 281-298.. TE. 7. Bergmann E, Bender J, Weigel HJ. Ozone threshold doses and exposure-response. IO. relationships for the development of ozone injury symptoms in wild plant. BL. species. New Phytol. 1999; 144: 423-435.. BI. 8. Fujiwara K, Fujii T. Efectos de la pulverización de agua ozonizada sobre la gravedad de la infección del mildiu en hojas de pepino. Ozone Sci Eng. 2002; 24: 463-469.. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 9. Gottschalk C, Libra JA, Saupe A. Ozonation of Water and Waste Water. In: A Practical Guide to Understanding Ozone and its Applications. Weinheim: WileyVCH Verlag GmbH; 2010. p. 183-187.. AS. 10. Cayanan DF, Zheng Y, Zhang P, Graham T, Dixon M, Chong C, Llewellyn J.. IC. Sensitivity of Five Container-grown Species to Chlorine in Overhead Irrigation. G. Water. Hort Sci. 2008; 43(6): 1882-1887.. LO. 11. Piedra NR. Manejo biológico de nematodos fitoparásitos con hongos y bacterias.. O. Tecnología en Marcha. 2008; 21 (1): 123-132.. AS. Food Sci Technol. 2004; 37 (4): 453-460. BI. 12. Guzel-Seydim ZB, Greene AK, Seydim AC. Use of ozone in the food industry. LWT. CI. 13. Ma J, Kirkpatrick TL, Rothrock CS, Brye K. Effects of Soil Compaction and. CI EN. Meloidogyne incognita on Cotton Root Architecture and Plant Growth. J Nematol. 2013; 45 (2):112-21.. DE. 14. Zeng Q, Huang H, Zhu J, Fang Z, Sun Q, Bao S. A nematicidal compound produced by Streptomyces albogriseolus HA10002. Antonie Van Leeuwenhoek. 2013; 103. CA. (5): 07-11.. TE. 15. Adam M, Heuer H, Hallmann J. Bacterial antagonists of fungal pathogens also. IO. control root-knot nematodes by induced systemic resistance of tomato plants.. BL. PLoS One. 2014; 9 (2): 37-42.. BI. 16. Carrillo FJ, Garcia ER, Allande MR, Marquez ZI, Cruz OJ. Identificación y distribución de Especies del nematodo nodulador (Meloidogyne spp.) en Hortalizas, en Siloa, Mexico. Rev. Mexicana de Fitopatología. 2000; 18 (2): 115119. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 17. Pinkerton JN, Forge TA, Ivors KL, Ingham RE. Plant-Parasitic Nematodes Associated witch Grapevines, Vitis vinífera, in Oregon Vineyards. Journal of Nematology 1999; 31(4) :624-634.. IC. contrast and divergence. Annu Rev Phytopathol. 2009; 47: 313-332.. AS. 18. Moens M, Perry RN. Migratory plant endoparasitic nematodes: a group rich in. G. 19. Curtis RH. Plant-nematode interactions: Enviromental Signals Detected by The. LO. Nematode´s Chemosensory Organs Control Changes in The Surface Cuticle and. O. Behaviour. Parasite. 2008; 15 (3): 310-316.. AS. Estados Unidos: Artes Gráficas; 1983.. BI. 20. Taylor AL, Sasser JN. Biología, Identificacion y Control de Nódulos de la Raíz.. CI. 21. Gheysen G, Mitchum MG. How nematodes manipulate plant development. CI EN. pathways for infection. Curr Opin Plant Biol. 2011; 14: 415–421. 22. Howell C. Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological. DE. control of plant diseases: The history and evolution of current concepts. Plant Disease. 2003; 87 (1): 4-10.. CA. 23. Santos M, Diánez F, Cara M, Camacho F, Tello JC. El control Biológico de Plagas y. TE. Enfermedades. Un Encuadre Crítico. Cuadernos de Estudios Agroalimentarios.. IO. Noviembre 2010; 61-72.. BL. 24. Fernández L. Microorganismos antagonistas para el control fitosanitario. Manejo. BI. Integrado de Plagas. 2001; 62: 96-100.. 25. Fujiwara K, Fujii T, Park JS. Comparison of foliar spray efficacy of electrolytically ozonated water and acidic electrolyzed oxidizing water for controlling powdery mildew infection on cucumber leaves. Ozone: Sci Eng. 2009; 31: 10-14. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 26. He H, Zheng L, Li Y. and Song W. Research on the feasibility of spraying micro/nano bubble ozonated water for airborne disease prevention. Ozone: Sci Eng. 2015; 37: 78-84.. AS. 27. Graham T, Zhang P, Woyzbun E, Dixon M. “Response of Hydroponic Tomato to. IC. Daily Applications of Aqueous Ozone via Drip Irrigation.” Scientia Horticulturae.. G. 2011; 129: 64 -71.. LO. 28. Ohashi-Kaneko K, Yoshii M, Isobe T, Park JS, Kurata K, Fujiwara K. Nutrient. O. solution prepared with ozonated water does not damage early growth of. BI. hydroponically grown tomatoes. Ozone: Sci Eng. 2009; 31: 21-27.. AS. 29. Sloan JJ, Engelke MC. Effect of ozonated water on creeping bentgrass growth in. CI. a sand medium. HortTechnology. 2005; 15(1): 148-152.. CI EN. 30. Graham T, Zhang P, Dixon M. Closing in on upper limits for root zone aqueous ozone application in mineral wool hydroponic tomato culture. Sci Hort. 2012;. DE. 143: 151-156.. 31. Ciccarese F, Longo O, Schiavone D, Ambrico A, Ziadi T, Sasanelli N. Control of. CA. corky root on tomato in open field by ozone fumigation. Proceedings of the 12th. TE. Congress of the Mediterranean Phytopathological Union, 11-15 June, pp. 549-. IO. 551.. BL. 32. Sasanelli N, D’Addabbo T, Mancini L, Ciccarese F. Effect of ozone treatment of. BI. suppressivity of a composted sewage sludge on Meloidogyne incognita. Proc. VII IS on Chem. and Non-Chem. Soil and Substrate Disinfestation. Acta Hort. 2010; 883: 403-408.. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 33. Rizhsky L, Liang HJ, Shuman J, Shulaev V, Davletova S, Mittler R. Cuando las vías de defensa chocan. La respuesta de Arabidopsis a una combinación de sequía y estrés por calor. Fisiología vegetal. 2004. Vol. 134 (Pág. 1683-1696). AS. 34. Ohashi-Kaneko K, Yoshii M, Isobe T, Park J-S, Kurata K, Fujiwara, K. Nutrient. IC. solution prepared with ozonated water does not damage early growth of. G. hydroponically grown tomatoes. Ozone-Sci Eng. 2009; 31(1): 21-27.. LO. 35. Zuckerman BM, Mai WF, Harrison MB. Plant Nematology: Laboratory Manual.. O. Massachusetts: University of Massachusetts Agricultural Experiment Station;. BI. 1985.. AS. 36. Moura R, Davis E, Luzzi B, Boerma H, Hussey R. Postinfectional development of. CI EN. Nematropica. 1993; 23 (1): 7-13.. CI. Meloidogyne incognita on susceptible and resistant soybean genotypes.. 37. Gourd TR, Schmitt DP, Barker KR. Penetration Rates by Second-stage Juveniles. DE. of Meloidogyne spp, and Heterodera glycines into Soybean Roots. Journal of Nematology. 1993; 25 (1): 38-41.. CA. 38. Sahebani N, Hadavi NS, Zade FO. The effects of ß-aminobutyric acid on resistance. TE. of cucumber against root-knot nematode, Meloidogyne javanica. Acta Physiol. IO. Plant. 2011; 33: 443–450.. BL. 39. Melillo MT, Leonetti P, Veronico P. Benzothiadiazole effect in the compatible. BI. tomato-Meloidogyne incognita interaction: changes in giant cell development and priming of two root anionic peroxidases. Planta. 2014; 240: 841-854.. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..