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Efecto del aceite esencial de Satureja pulchella sobre el crecimiento de Escherichia coli y Bacillus cereus

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Academic year: 2020

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. UN IC AC IÓ. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA. N. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. Y PARASITOLOGÍA. Efecto del aceite esencial de Satureja pulchella sobre. SI ST. EM. AS. DE. el crecimiento de Escherichia coli y Bacillus cereus TESIS. DE BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. EC CI. O. N. DE. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL. DI R. Tesista: Br. Luisa Yrene Mendoza Yamashiro Asesor: MsC. María Nelly Vásquez Valles TRUJILLO – PERU 2015. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. UN IC AC IÓ. N. TRUJILLO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. DE. Dr. Rube Vera Veliz. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. VICERECTOR ACADÈMICO. Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa. SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. UN IC AC IÓ. Dr. José Mostacero León. IC A. Dr. William Zelada Estraver. Y. CO. M. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. IN FO. RM. ÁT. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. Dra. Bertha Soriano Bonilla. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA.. Dr. Juan Guevara Gonzáles JEFE DE DEPARTAMENTO. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. UN IC AC IÓ. N. Señores Miembros del Jurado Dictaminador:. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. M. títulos de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la. IC A. Y. consideración y criterio el presente trabajo de Tesis titulado:. CO. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra. ÁT. ¨Efecto del aceite esencial de Satureja pulchella sobre el crecimiento de Escherichia. RM. coli y Bacillus cereus”. Con el objetivo de obtener el título profesional de Biólogo-. IN FO. Microbiólogo.. DE. .. SI ST. EM. AS. Espero que este trabajo sea de vuestra aprobación.. EC CI. O. N. DE. Trujillo, 21 de Julio del 2015. DI R. Br. Luisa Yrene Mendoza Yamashiro. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. IC A. Y. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. CO. _________________________________. M. UN IC AC IÓ. N. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. AS. _________________________________. SECRETARIA. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. Ms. C. Icela Rodríguez Haro. _________________________________ Ms. C. María Nelly Vásquez Valles VOCAL. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que el. N. presente Informe de Tesis titulado: “Efecto del aceite esencial de Satureja pulchella. UN IC AC IÓ. sobre el crecimiento de Escherichia coli y Bacillus cereus”, ha cumplido con los. IC A. Y. CO. M. requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. ÁT. _________________________________. RM. Ms. C. Pedro Alvarado Salinas. AS. DE. IN FO. PRESIDENTE. Ms. C. Icela Rodríguez Haro SECRETARIA. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. _________________________________. _________________________________ Ms. C. Nelly Vásquez Valles VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. UN IC AC IÓ. N. El que suscribe, en calidad de profesor asesor de la tesis titulada: Efecto del. aceite esencial de Satureja pulchella sobre el crecimiento de Escherichia coli y. CO. M. Bacillus cereus,. Y. CERTIFICA:. IC A. Que ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la. RM. ÁT. Facultad de Ciencias Biológicas, estando en conformidad con su correspondiente. IN FO. proyecto y con las orientaciones brindadas a la Tesista. En cuanto al informe, este ha. DE. sido revisado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. AS. .. EM. Por lo tanto, autorizo al Br. LUISA YRENE MENDOZA YAMASHIRO continuar con. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. el trámite del reglamento correspondiente.. _________________________________ Ms.C. María Nelly Vásquez Valles ASESOR. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A DIOS por guiar mi camino, brindarme sabiduría, fuerza. UN IC AC IÓ. N. para no desmayar y seguir adelante.. Con todo mi amor y gratitud, por. CO. M. su confianza y sacrificio a mi MARÍA. quien. representa. IC A de. el. mi. principal constante. ÁT. motivo. YAMASHIRO. Y. madre. RM. superación, y a mi padre JOSÉ MENDOZA,. aunque. no. se. IN FO. encuentre físicamente a mi lado,. AS. DE. lo tengo presente en mi corazón.. EM. A mis hermanos JOSÉ y. YOLANDA por su apoyo y. SI ST. a mis sobrinas SOFIA y. Con Amor y admiración a:. DI R. EC CI. O. N. DE. MARIA.. ALAN VENEGAS Por ser mi apoyo incondicional, compartir conmigo penas, alegrías, sueños y los mismos deseos de superación personal y profesional. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. A mi asesora Ms.C María Nelly Vásquez Valles, por brindarme aquellas. N. sugerencias y correcciones que aportaron a la ejecución de la presente. UN IC AC IÓ. investigación. A Edmundo Venegas Casanova por su orientación y contribución para la. M. obtención del aceite esencial.. CO. A Juan Casanova, Carmen de la Cruz e Hipólito Uceda por su apoyo brindado. IC A. Y. para la ejecución de la presente tesis.. ÁT. A José Mendoza y Vanessa Venegas, por su contribución en la ejecución de la. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. presente tesis.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC IÓ. N. RESUMEN. El objetivo del presente trabajo fue determinar la actividad antibacteriana del aceite esencial de Satureja pulchella “Panizara” frente a Escherichia coli y Bacillus cereus.. CO. M. Las plantas de S. pulchella fueron recolectadas del Caserío de Tambillo, provincia de Otuzco, departamento La Libertad. El aceite esencial fue obtenido de las hojas mediante. IC A. Y. el método de hidrodestilación. La actividad antibacteriana sé determinó por el método. ÁT. de difusión en agar en pocillo. En los resultados se observó que a las concentraciones de. RM. 25, 50, 75 y 100% de aceite esencial de S. pulchella, el halo de inhibición de. IN FO. crecimiento de E. coli fue de 6.60 mm, 12.07 mm, 15.87 mm, 23.60 mm. DE. respectivamente; así mismo, para B. cereus el halo de inhibición del crecimiento al 25,. AS. 50,75 y 100% fue de 15.8 mm, 26.47 mm, 36.27 mm y 57.40 mm respectivamente. Se. EM. empleó Cloranfenicol y Vancomicina como controles para E. coli y B. cereus. SI ST. respectivamente. Para los dos microorganismos ensayados a medida que se incrementó. DE. el porcentaje de aceite esencial, los halos de inhibición del crecimiento fueron mayor.. N. Por lo tanto; el presente estudio permite afirmar que el aceite esencial de S. pulchella. DI R. EC CI. O. tiene efecto inhibitorio sobre E. coli y B. cereus. Palabras claves: Actividad antibacteriana, aceite esencial, E. coli, B. cereus,. hidrodestilación. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. UN IC AC IÓ. N. The aim of this study was to determine the antibacterial activity of the essential oil of Satureja pulchella "Panizara" against Escherichia coli and Bacillus cereus. S. pulchella plants were collected from the hamlet of Tambillo, Otuzco province, La Libertad. M. department. The essential oil was obtained from the leaves by the method of. CO. hydrodistillation. The antibacterial activity was determined by the agar diffusion. IC A. Y. method in well. In the results it was observed that at concentrations of 25, 50, 75 and. ÁT. 100% of essential oil S. pulchella, the halo of growth inhibition of E. coli was 6.60 mm,. RM. 12.07 mm, 15.87 mm, 23.60 mm respectively; likewise, B. cereus for the growth. IN FO. inhibition halo 25, 50, 75 and 100% was 15.8 mm, 26.47 mm, 36.27 mm and 57.40 mm respectively. Chloramphenicol and Vancomycin was used as controls for B. cereus and. DE. E. coli respectively. For the two microorganisms tested as the percentage of essential. EM. AS. oil increased, the growth inhibition halos were greater.. SI ST. Therefore; the present study to suggest that the essential oil of S. pulchella has. DI R. EC CI. O. N. DE. inhibitory effect on E. coli and B. cereus. Keywords: antibacterial activity, essential oil, E. coli, B. cereus, hydrodistillation. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE GENERAL. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO……...........ii. UN IC AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS…………....iii. PRESENTACIÓN……………………...………………………..………..……...…...iv MIEMBROS DEL JURADO………………………………..………..…….................v. M. APROBACIÓN…………………………………………...……………..……………vi. CO. DEL ASESOR…………………………………………………………………..........vii. IC A. Y. DEDICATORIA………………………………………………………...…..…........viii. ÁT. AGRADECIMIENTO…...………………………………………………....………....ix. RM. RESÚMEN…...………………………………………………………………..............x. IN FO. ABSTRACT…...……………………………………………………………………...xi INDICE GENERAL..…………………………………………………………...........xii. DE. INTRODUCCIÓN…………………………………………………………...…....…...1. EM. AS. MATERIAL Y MÉTODO………………………………………………………....…10. SI ST. 1. Material Biológico………………………...…………………………….……10 2. Procedimientos. DE. 2.1. Procedimiento para obtención de aceite esencial del Satureja pulchella. 10. O. N. 2.1.1. Recolección y transporte de Satureja pulchella………………….10. EC CI. 2.1.2. Identificación Taxonómica ……………………………...……….10. DI R. 2.1.3. Extracción de aceite esencial………………………………….….11. 2.2. Reactivación de los cultivos ...…………………………………………..12 2.3. Preparación del Inóculo ...……………………………………………… 13 2.4.Preparación de las concentraciones del aceite esencial ……………….…13 2.5.Prueba de inhibición de crecimiento.…………………...……………… 13 xii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.6. Lectura de los resultados ………………………………………………..14 2.7. Análisis Estadístico …………………………………………………......14 RESULTADOS………………………………………………...……………..……...16. UN IC AC IÓ. N. DISCUSIÓN…………………………………………………………………...…..…20 CONCLUSIONES…………………………………………………...………...…..…28 RECOMENDACIONES……………………………………………………………..29. M. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………………………...…..30. CO. ANEXOS…………………………………………………………..………..….….....40. Y. ANEXO 01. Constancia de Identificación taxonómica……………….………...........41. IC A. ANEXO 02. Foto 1 Plantas de Satureja pulchella……………………………...........42. RM. ÁT. ANEXO 03. Foto 2. Equipo de destilación…...........................................…………..43. IN FO. ANEXO 04. Foto 3. Procediendo de prueba de inhibición ……..……………………44 ANEXO 05. Foto 4. Halos de inhibición del crecimiento de Escherichia coli frente a. DE. diferentes concentraciones de aceite esencial de Satureja pulchella (25, 50, 75 y 100 %). AS. y frente a Cloranfenicol………………………………………………………….…. 45. EM. ANEXO 06. Foto 6. Halos de inhibición del crecimiento de Bacillus cereus frente a. SI ST. diferentes concentraciones de aceite esencial de Satureja pulchella (25, 50, 75 y 100. DE. %) y frente a Vancomicina..……………………………………………………….. 46. N. ANEXO 07. Promedios de los halos de inhibición del crecimiento de Escherichia. EC CI. O. coli frente a diferentes concentraciones de aceite esencial de Satureja pulchella (25,. DI R. 50, 75 y 100 %) y frente a Cloranfenicol………………………………...…..………47 ANEXO 08. Promedios de los halos de inhibición del crecimiento Bacillus cereus frente a diferentes concentraciones de aceite esencial de Satureja pulchella (25, 50, 75 y 100 %) y frente a Vancomicina…………………..………………………..............48. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ANEXO 09. Análisis estadístico realizados a los halos de inhibición del crecimiento Escherichia coli a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % del aceite de Satureja pulchella y comparada con los controles Etanol y Cloranfenicol............................... 49. UN IC AC IÓ. N. ANEXO 10. Análisis estadístico realizados a los halos de inhibición del crecimiento Bacillus cereus a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100 % del aceite de Satureja. DI R. EC CI. O. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC A. Y. CO. M. pulchella y comparada con los controles Etanol y Vancomicina.................................52. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. Durante las últimas décadas las innovaciones en las técnicas de. N. I. INTRODUCCION. IC. producción de alimentos y el interés creciente por la inocuidad. M UN. alimentaria han llevado a los consumidores a exigir productos con. CO. menos aditivos sintéticos, porque relacionan los compuestos químicos con alergias y enfermedades diversas y con un menor impacto sobre el. A. Y. medio ambiente,(1) aumentando la tendencia al uso de conservantes. ÁT. IC. naturales, que han llegado a constituir una alternativa promisoria como. RM. fuente de sustancias con actividad antimicrobiana,(2) en lugar de. IN. FO. conservadores sintéticos. (3, 4). DE. La contaminación microbiológica es un riesgo para la salud debido a la de. algunos. EM AS. resistencia. microorganismos. a. los. antibióticos. ST. convencionales y a los conservantes sintéticos utilizados en la industria. SI. alimentaria como responsables de ser cancerígenos y teratogénicos por (3, 5, 6). Uno de los principales problemas de los. DE. su toxicidad residual.. N. procesadores de alimentos a través de los años, ha sido la conservación. DI. RE. CC. IO. de los mismos. (7).. Por lo cual es necesario la búsqueda de nuevas formas para reducir o eliminar el crecimiento de microorganismos patógenos durante la vida útil de los productos y reducir los riesgos de los peligros químicos en la 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fabricación de alimentos. (8) La demanda por alimentos más naturales ha. Ó. a partir de extractos de plantas tradicionalmente reconocidas por sus. N. llevado a los investigadores a desarrollar nuevos agentes antimicrobianos. M UN. IC. AC I. múltiples propiedades. (3). Las plantas representan una alternativa como fuente indispensable para. CO. la obtención de productos beneficiosos en la historia de la humanidad.. Y. Asimismo son capaces de protegerse del ataque de diversos. IC. A. microorganismos patógenos, produciendo grandes cantidades de. RM. ÁT. metabolitos secundarios, entre los más importantes relacionados con los. FO. mecanismos de defensa, destacan los flavonoides, fenoles, terpenos,. IN. aceites esenciales, alcaloides, lectinas y polipéptidos(9) ;hidrocarburos. aldehídos,. cetonas,. ésteres,. sustancias. azufradas. y. EM AS. alcoholes,. DE. alicíclicos y aromáticos, así como sus derivados oxigenados, como. nitrogenadas. Los compuestos más frecuentes derivan biológicamente. ST. del ácido mevalónico y se les cataloga como terpenos, los más. N. DE. SI. abundantes los monoterpenos y los sesquiterpenos. (10). CC. IO. Los aceites esenciales son sustancias odoríferas de naturaleza oleosa. DI. RE. encontradas prácticamente en todos los vegetales; son muy numerosos y están ampliamente distribuidos en distintas partes del mismo vegetal: en las raíces, tallos, hojas, flores y frutos.. (11). Algunos de estos aceites y extractos. de plantas han demostrado poseer características insecticidas, antioxidantes, antibacteriano, antifúngico y antiviral. (12) 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Son utilizados para muchos y diversos fines, entre estos, protección contra. Ó. N. plagas, enfermedades, aplicaciones en el campo de la nutraceutica,. Tal es el caso del aceite esencial. IC. (13). M UN. químicas para los fármacos sintéticos.. AC I. suplementos de alimentos, intermediarios farmacéuticos y entidades. de Salvia officinalis empleado de manera extensiva en la preparación de (14). CO. alimentos, demostrando actividad antibacterial contra Salmonella spp.. Y. También el aceite esencial de Lippia palmei, Zynnamomum zeylanicum y. Asimismo el aceite esencial de Salvia officinalis. ÁT. (13). RM. michiganensis.. IC. A. Thymus vulgaris mostraron actividad antibacteriana sobre Clavibacter. FO. empleada de manera extensiva en la preparación de alimentos, demostró. DE. IN. actividad inhibitoria contra Salmonella sp. (14). EM AS. Vásquez en la investigación del aceite esencial de Zingiber oficinale demostró efecto inhibitorio sobre S.aureus, Streptococcus fecalis y B.cereus. Asimismo Pino en el estudio del aceite esencial de Piper lanceaefolium. ST. (11). DE. SI. presento actividad (8). contra. S.aureus. y. Pseudomonas. Otros estudios han demostrado la efectividad del aceite. N. aeruginosa.. antibacteriana. IO. esencial de Thymus vulgaris y Eucalyptus globulus; empleados de forma. DI. RE. CC. combinada para el control de bacterias marinas. (15). Además Chorianopoulus menciona la actividad inhibitoria sobre S. aureus, Listeria monocytogenes, B. cereus, y E. coli de los aceites esenciales de Satureja thymbial, S. spinosa, Origanum vulgare, O.dictamus y Thymus 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. longicaulis.. (5). Además diversas especies del genero Satureja presentan. acción inhibitoria contra diferentes microorganismos, como S. boissieri, S.. Ó. N. coerulea, S. icarica y S. pilosa que tienen actividad inhibitoria sobre E. coli,. M UN. IC. AC I. S. aureus y Salmonella sp. (16). El género Satureja comprende cerca de 30 especies entre las que se tiene a. CO. S. seriacea, S. hortensis, S. parvifolia, S. lopezzi, S. Weberbaueri, S.. Y. Vargassi y S. pulchella, (16) S. pulchella, conocida como “Panizara” es una. IC. A. planta herbácea, propia de los andes crece a más de 2500 m.s.n.m es. RM. ÁT. aromática, tiene un tallo delgado muy ramificado. Sus hojas son pequeñas,. FO. con base acorazonada y ápice agudo, dentadas, verde en la cara superior y. IN. blanca en la parte inferior debido a que es pubescente. Es utilizada como. DE. estimulante, carminativa en la medicina tradicional; como agentes. EM AS. soporíferos en los alimentos y confituras, en las industrias de las especias,. ST. perfumes y cosméticos. (17). DE. SI. Las enfermedades de transmisión alimentaria (ETA) constituyen uno de los. N. principales problemas de salud pública de mayor importancia a nivel (18). Afectan. CC. IO. mundial, ya que ocasionan alta morbilidad y mortalidad.. DI. RE. principalmente a niños, mujeres embarazadas y ancianos de países en vías de desarrollo, generando pérdidas económicas y grandes costos a los servicios de salud.(19,. 20 ). Su transmisión y frecuencia se relaciona con. algunos factores asociados a la falta de higiene, la desnutrición, las malas condiciones sanitarias,la pérdida de calidad microbiológica de los alimentos, 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. la pobreza, el crecimiento de la población, la aparición de nuevos agentes productores de ETA o nuevos mutantes con una mayor patogenicidad son. AC I. Ó. N. estos problemas (21, 22). M UN. IC. Se han descrito alrededor de 250 agentes causantes de enfermedades. transmitidas por alimentos (ETA), entre los que se incluyen bacterias, virus, ,23). Se estima que la incidencia anual de. CO. hongos, parásitos y metales.(18. Y. diarrea estimada en el mundo es de 1.500 millones de casos. Se conoce que. Dentro del grupo de bacterias. ÁT. (18,24). RM. con microorganismos y/o sus toxinas.. IC. A. 70% de las diarreas se originan por la ingestión de alimentos contaminados. FO. que se transmiten a través del consumo de alimentos contaminados o por un. IN. manipulador de alimentos portador asintomático, se mencionan a (4, 25). Las. DE. Staphylococcus aureus, Salmonella spp, E. coli, B. cereus,. EM AS. enfermedades producidas por E. coli y S. aureus causan gastroenteritis y diarrea, siendo responsables de más de 5000 muertes diarias. (26) En el 2008. ST. la cantidad mundial de muertes por diarrea en niños menores de 5 años fue. DE. SI. estimada en 1,87 millones, lo cual constituye el 19% de las muertes en. CC. IO. N. niños.(27). DI. RE. E. coli es una bacteria Gram negativa, perteneciente a la familia Enterobacteriaceae de forma cilíndrica, móvil, no esporulado, se dispone aislado o en parejas, Es anaerobio facultativo, oxidasa negativo, catalasa positivo y β-galactosidasa +, fermenta glucosa y lactosa con producción de gas, reduce nitrato a nitrito, produce reacción positiva de rojo de metilo, y 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (28, 29). negativa de Vogues-Proskauer.. E. coli es un habitante regular en el. intestino, en las heces, también puede vivir en las ubres de las vacas y puede. M UN. IC. AC I. ambiente ya que es capaz de sobrevivir a diferentes temperaturas. (28). Ó. N. llegar a la leche que no está pasteurizada. Se puede encontrar en el medio. Los E. coli patógenos se encuentran en una menor proporción. E. coli. CO. O157: H7 es un patógeno importante transmitido por los alimentos, es un. Y. indicador de contaminación fecal que se propaga por inadecuadas prácticas. IC. A. de higiene; los vegetales y las frutas que han sido regados o lavados con. RM. ÁT. agua sucia, pueden ser, portadores. (27) La mayoría de las enfermedades se ha. IN. FO. asociado con la comida, las frutas y verduras como fuentes de E. coli. (28). DE. Uno de los microorganismos implicados en brotes de intoxicación. EM AS. alimentaria es B. cereus, un microorganismo Gram positivo móvil, esporulado, aerobio facultativo.. (30). Debido a la capacidad para producir. ST. esporas que sobreviven a altas temperaturas y crecen a bajas temperaturas,. DE. SI. este microorganismo representa un riesgo asociado a enfermedades. N. transmitidas por alimentos. (31) Este microorganismo se ha aislado a partir de. IO. productos lácteos, comidas deshidratadas, arroz frito, arroz hervido, carnes,. DI. RE. CC. pastas y vegetales. (30). Las enterotoxinas que elaboran B. cereus se asocian a las dos formas de enfermedad transmitida por los alimentos, la toxina cereulida provoca emesis. (31, 32). . El síndrome emético está caracterizado por náuseas agudas y 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. vómitos. (33). . La producción de la toxina ocurre durante la fase estacionaria. del crecimiento, y se acumula en el alimento a medida que transcurre el. Ó. N. tiempo. La forma diarreica de la intoxicación con B. cereus se desencadena. AC I. por la acción de al menos dos enterotoxinas producidas durante la fase. IC. exponencial del crecimiento de la bacteria, en el intestino delgado del. CO. M UN. huésped (34).. Y. Las cepas que producen la toxina emética crecen bien en arroz y otros. IC. A. alimentos farináceos, mientras que las cepas que producen la toxina. RM. ÁT. diarregénica crece en una amplia variedad de alimentos que van desde. FO. vegetales hasta salsas y guisados; numerosas hierbas desecadas, especias. IN. para condimentar y alimentos deshidratados han mostrado presencia de esta. DE. bacteria (30, 31). El envenenamiento alimentario por B. cereus fue descrito por. EM AS. primera vez por Hauge en Noruega en la década del 50 del siglo XX luego del consumo de salsa de vainilla contaminada. (35, 36). .Debido a la ubicuidad. ST. en el medio ambiente, puede contaminar fácilmente cualquier sistema de. DE. SI. producción y procesamiento de alimentos, por la presencia de endosporas,. N. puede sobrevivir a la pasteurización, el calentamiento incluso a la. IO. irradiación con rayos gamma, usados para reducir los patógenos en los. DI. RE. CC. alimentos. (37). B. cereus se aísla con frecuencia a partir de leche y productos lácteos. Se encuentra en arroz debido a las condiciones particulares de su cultivo, comprendiendo aproximadamente el 10 % de la microflora del suelo, en el 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. arroz crudo tanto con cáscara como descascarado es posible encontrar cantidades en el orden de 103 UFC/gr de alimento, (38). El síndrome emético. mesófilo,. sin. embargo,. se. han. N. . B. cereus es un. identificado. Ó. organismo. (33). variantes. AC I. causado por B. cereus se asocia altamente a arroz. CO. M UN. descomposición a temperaturas tan bajas como 5 °C (37, 38).. IC. psicrotróficas en leche cruda y pasteurizada capaces de crecer e iniciar la. Y. Los alimentos tienen gran trascendencia en la salud de los consumidores. IC. A. quienes exigen productos naturales, ya que estos son vehículos de. RM. ÁT. transmisión de diferentes microorganismos. El uso de aceites esenciales en. FO. estos puede ser utilizado para inhibir el crecimiento microbiano .Se conocen. IN. diversas técnicas para el control e inhibición de microorganismos con el fin. DE. de preservar los alimentos, una de estas es la adición de sustancias naturales. EM AS. que le permitan sustituir las sustancias químicas.. ST. En la actualidad se está investigando con mayor importancia el uso de los. DE. SI. metabolitos secundarios de las plantas como agentes antimicrobianos, tal es. N. el caso de los aceites esenciales que representan una alternativa en la. CC. IO. conservación de alimentos, con el fin de proveerle calidad microbiológica,. DI. RE. la actividad se le atribuye a la presencia de compuestos que tienen acción inhibitoria sobre el crecimiento de diversos microorganismos causantes d enfermedades. Tal es el caso del aceite esencial de Thymus vulgaris con. acción antibacteriana sobre E. coli, S. aureus y B.cereus; así como del aceite esencial de Satureja boissieri, S. coerulea, S. icarica y S. pilosa que tienen 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. efecto inhibitorio sobre E. coli, S. aureus y Salmonella sp.. Asimismo. Lippia palmei, Zynnamomum zeylanicum y Thymus vulgaris con acción. Ó. N. antimicrobiana sobre Clavibacter michiganensis; dado que los aceites. AC I. esenciales presentan acción antibacteriana sobre microorganismos causantes. M UN. IC. de enfermedades de transmisión alimentaria (ETAS). Y debido a que no se han reportado investigaciones respecto a la actividad antimicrobiana del microorganismos causantes de. CO. aceite esencial de S. pulchella en. Y. enfermedades de transmisión alimentaria, de allí que la investigación estuvo. IC. A. orientada a evaluar el efecto del aceite esencial de S. pulchella sobre el. FO. RM. ÁT. crecimiento de E. coli y B.cereus.. DE. Objetivo General. IN. OBJETIVOS. EM AS. - Determinar el efecto de las diferentes concentraciones del aceite esencial. DE. SI. cereus.. ST. de Satureja pulchella sobre el crecimiento de Escherichia coli y Bacillus. N. Objetivo Específico. DI. RE. CC. IO. - Determinar cuál de las bacterias empleadas (E. coli y B. cereus) presenta mayor inhibición frente al aceite esencial de S. pulchella.. - Determinar que concentración de 25, 50, 75 y 100 % del aceite esencial de S. pulchella tiene mayor efecto inhibitorio sobre el crecimiento de E. coli y B. cereus.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y METODOS. N. II.. AC I. Ó. MATERIAL BIOLOGICO. IC.  Hojas de S. pulchella “Panizara” provenientes del Caserío de Tambillo-. M UN. Otuzco, Departamento La Libertad.. CO.  Cultivos de E. coli y B. cereus procedente del Laboratorio de. Y. Microbiología y Tecnología de Alimentos de la Universidad Nacional de. ÁT. IC. A. Trujillo.. RM. PROCEDIMIENTO. IN. FO. A. Obtención del aceite esencial de S. pulchella. DE. 1. Recolección y transporte de S. pulchella. EM AS. Las plantas de S. pulchella fueron recolectadas del Caserío de Tambillo en la provincia de Otuzco, Departamento La Libertad (a 3260 m.s.n.m.),. ST. transportadas al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia. SI. y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo para la extracción. DE. del aceite esencial.. IO. N. 2. Identificación taxonómica de S. pulchella.. DI. RE. CC. Una planta completa fue llevada al Herbario de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación taxonómica. (Anexo 1). 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3. Extracción del aceite esencial de S. pulchella. Método de Hidrodestilación (9). Ó. N. Las hojas de S. pulchella, fueron separadas de los tallos e inflorescencias,. AC I. luego lavadas y pesadas para realizar la extracción del aceite esencial.. M UN. IC. Se colocó 200 g de hojas de S. pulchella en un matraz esférico de tres bocas esmerilado de 1000 ml de capacidad. Se llenó con agua el balón. CO. destilador, previa instalación del conducto refrigerante, y se hizo circular. A. Y. el agua a través del mismo. Luego se llevó a calentamiento hasta. ÁT. IC. desprendimiento de un líquido inmiscible conteniendo vapor de agua. RM. condensada y el aceite esencial, que fueron recolectados en un embudo. FO. de decantación.(Anexo3).El aceite colectado se deshidrató con sulfato de. IN. sodio anhidro en frascos de color ámbar, se llevó a refrigeración a 4°C ±. EM AS. DE. 0.2 °C hasta el momento de su utilización.. B. Estudio Físico del aceite esencial. ST. 1 Densidad:. SI. Se utilizó un densímetro digital Densymeter DMA35- Aton Paar para. 2 Índice de refracción: Mediante el refractómetro de círculo Carl Zeis se obtuvo el valor del índice de refracción: 1.494. DI. RE. CC. IO. N. DE. medir la densidad de la muestra; 1.037 g/ml.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. C. Preparación de los inóculos bacterianos.. 1.. Reactivación de Escherichia coli. Ó. N. Del cultivo conservado de E. coli se sembró en 4 ml de caldo Infusión. AC I. Cerebro- Corazón (BHI), se incubó a 37°C por 24horas.. M UN. IC. Terminado el tiempo de incubación de E. coli, se sembró por superficie en Agar Mac Conkey; se llevó a incubar a 37°C por 24 horas.. CO. De la colonia se tomó una azada, se realizó la coloración Gram.. A. Y. De la parte restante de la colonia se sembró en agar común semisólido. ÁT. IC. inclinado.. RM. Se llevó a incubar a 37°C por 24 horas.. Reactivación de B. cereus. DE. 2.. IN. FO. Se conservó los cultivos en refrigeración para su posterior uso.. EM AS. Se sembró el cultivo conservado de B. cereus en 4 ml de caldo Infusión Cerebro- Corazón (BHI), se incubó a 37°C por 24h.. ST. Terminado el tiempo de incubación, se sembró por superficie en Agar. DE. SI. selectivo para B. cereus; se llevó a incubar a 37°C por 24 horas.. inclinado. Se llevó a incubar a 37°C por 24 horas. Se conservó los cultivos en refrigeración para su posterior uso.. DI. RE. CC. IO. N. De la colonia se tomó una azada y se sembró en agar común semisólido. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3.. Preparación de inóculo. Se realizó a partir del cultivo puro de cada bacteria sembrado en Agar. N. común con 6-8 horas de incubación para E. coli y con 18 horas de. AC I. Ó. incubación para B. cereus.. IC. Se hizo una suspensión en 5 ml de Solución Salina Fisiológica Estéril. M UN. (SSFE) a una turbidez equivalente al tubo N° 0.5 del nefelómetro de. A. Preparación de las concentraciones de aceite esencial. IC. 4.. Y. CO. Mac Farland (1.5 x 108 ufc/ml).. ÁT. El aceite puro obtenido fue considerado como tratamiento al 100%, a. RM. partir del cual se realizó diluciones para obtener las concentraciones de. FO. 25, 50 y 75% de aceite de S. pulchella; utilizando como solvente etanol. DE. IN. absoluto.. EM AS. D. Prueba de inhibición del crecimiento de E. coli y Bacillus cereus. ST. Método de Difusión en Agar. SI. - En tres placas con 25 ml de Agar Müller Hinton, se vertió sobre la. DE. superficie 0.1 ml del inoculo de E. coli.. DI. RE. CC. IO. N. - Las placas se llevaron a secar en la estufa por 30 minutos a 37°C.. - En cada una de las placas, con ayuda de un sacabocado estéril se hizo un pocillo, con un diámetro de 6 mm en cada placa. - Se inoculó 25 µl de muestra a concentraciones de 25, 50, 75 y 100% de aceite esencial en cada uno de los pozos de las placas, en otra placa. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. se colocó 25 µl de etanol y un disco de Cloranfenicol (30µg/disco) como control positivo.. AC I. discos de Vancomicina (30µg/disco) como control positivo.. Ó. N. - Se siguió el mismo procedimiento para el cultivo de B.cereus, con. M UN. IC. - Se dejó en reposo durante una hora, para una mejor difusión del aceite en el agar.. A. Y. CO. - Después se llevó a incubación a 37°C por 18 a 24 horas. RM. ÁT. IC. E. Lectura. FO. - La lectura de los resultados se realizó en base a la presencia de los. IN. halos de inhibición del crecimiento, formados alrededor de cada. DE. pocillo por efecto de la actividad antibacteriana del aceite esencial a. pozo.. EM AS. concentraciones de 25, 50,75 y 100% luego se restó los 6 mm del. ST. - Las mediciones se realizaron en 4 direcciones y se sacó el promedio.. DE. SI. - Las pruebas se realizaron por triplicado con 5 repeticiones.. DI. RE. CC. IO. N. F. Análisis de Datos Los datos obtenidos fueron sometidos al test de Kolmogorov –Smirnov para determinar la distribución normal de los valores (Normal: p>0.05 y No Normal: p<0.05). Como los valores siguieron una distribución normal fueron analizados con la prueba de Anova, para determinar diferencia 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. significativa entre los tratamientos, luego se aplicó la prueba de comparaciones múltiples paramétricas de Tukey con un intervalo de. Ó. N. confianza del 95% para determinar diferencia significativa entre. AC I. concentraciones de aceite y entre los cultivos de bacterias la prueba. M UN. IC. Anova; para lo cual se utilizaron los programas estadísticos SPSS. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. Statistics 20.0 para Windows y Microsoft Office Excel 2010.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Ó. N. III.. AC I. En la Fig.01 Se presenta el promedio de los halos de inhibición del. IC. crecimiento (mm) de E. coli por la acción de diferentes concentraciones (25,. M UN. 50, 75 y 100%) del aceite de Satureja pulchella “Panizara” y del. CO. cloranfenicol (control positivo) y etanol ; se observa la existencia de. Y. diferencia significativa entre estos grupos, siendo la concentración de 100%,. IC. A. con un halo de inhibición de 23.60 mm, la de mayor efecto en relación al. FO. RM. ÁT. Cloranfenicol con un halo de inhibición de 20.00 mm (p<0.05).. IN. En la Fig.02 Se presenta el promedio de los halos de inhibición del. DE. crecimiento (mm) de B. cereus por la acción de diferentes concentraciones. EM AS. (25, 50, 75 y 100%) del aceite de S. pulchella “Panizara” y de la Vancomicina (control positivo) y etanol; se observa la existencia de. SI. ST. diferencia significativa entre estos grupos, siendo las concentraciones de 50,. IO. N. DE. 75 y 100% las de mayor efecto en relación a la Vancomicina (p<0.05).. CC. En la Fig.03 Se presenta la comparación de los promedios de los halos de. DI. RE. inhibición del crecimiento (mm) de E. coli y B. cereus a concentraciones de (25, 50, 75 y 100%) del aceite de S. pulchella, observándose que existe diferencia significativa entre ambas especies, con un p<0.05 a todas las concentraciones. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Ó UN IC AC I. 23.60. 25.00. 20.60. M. 20.00. a. ÁT IC A. d. e. FO. b. RM. c. 6.60. IN. 5.00. 12.07. f. DE. 10.00. Y. 15.00. CO. 15.87. 0.00 25%. 50%. AS. Halos de inhibicion (mm) del crecimieento de E. coli. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 75%. 100%. Cloranfenicol. Etanol. SI ST. EM. Concentraciones del aceite esencial de S. pulchella. O. N. DE. Fig.01. Halos de inhibición del crecimiento de E. coli a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de S. pulchella y de los grupos control cloranfenicol y etanol.. DI RE. CC I. p<0.05: Letras diferentes indican que existe diferencia significativa.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC I. 57.40. 36.27. d. e. DE. b. f. AS. a. 19.27. IN. c. FO. 15.8. RM. 26.47. 30. 10. ÁT IC A. Y. 40. 20. CO. M. 50. EM. Halo de inhibicion (mm) del crecimiento de B. cereus. 60. 0 50%. 75%. 100%. Vancomicina. Etanol. SI ST. 25%. DE. Concentraciones del aceite esencial de Satureja pulchella. CC I. O. N. Fig.02. Halos de inhibición del crecimiento de B. cereus a las concentraciones de 25, 50, 75 y 100% del aceite esencial de S. pulchella y de los grupos control Vancomicina y etanol.. DI RE. a: p<0.05: p<0.05: Letras diferentes indican que existe diferencia significativa.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) UN IC AC I. 60. CO. M. 50. 57.4. 36.27. ÁT IC A. Y. 40. 26.47. 30. RM. 15.8. 20. 15.87. FO. 12.07. 23.6. 6.6. DE. IN. 10. AS. 0 25%. 50%. 75%. 100%. EM. Halo de inhibicion de crecimiento (mm) de E. coli y B. cereus.. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SI ST. Concentraciones del aceite esencial de Satureja pulchella Bacillus cereus. O. N. DE. Escherichia coli. DI RE. esencial de S. pulchella.. CC I. Fig.03. Comparación de los halos de inhibición (mm) entre E. coli y B. cereus frente a concentraciones (25, 50, 75 y 100%) del aceite. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. N. IV.. (38). para extender la vida útil de los. (41,42). antifungicos,. (40). En esta investigación se evaluó el efecto inhibitorio del. CO. antioxidativos,. (39). M UN. alimentos, que muestran efectos antimicrobianos,. IC. usados como conservantes naturales,. AC I. Ó. Los aceites esenciales de muchas plantas son uno de los principales productos. aceite de S. pulchella frente a dos especies bacterianas causantes de. ÁT. IC. A. Y. intoxicación alimentaria, E. coli y B. cereus.. RM. La extracción del aceite esencial de S. pulchella, se realizó por el método de. FO. Hidrodestilación con 0.21 % de rendimiento Así mismo en un estudio realizado. IN. por Viturro y colaboradores (43) menciona que el rendimiento de S. boliviana, S.. EM AS. DE. odora y S. parvifolia fue de 0.22, 0.50 y 0.96% respectivamente.. ST. La calidad de un aceite esencial depende de variables intrínsecas; como. SI. genéticas y biosinteticas; también extrínsecas; como clima, composición del. DE. suelo, altitud, radiación solar, época de cosecha, etapa fenológica de la planta,. IO. N. técnica utilizada para su extracción.(44) La composición y cantidad de los. CC. compuestos en los aceites varía de acuerdo a las diferentes partes de la planta de. DI. RE. la cual se hayan extraído. (45). por todo lo mencionado, es habitual encontrar. diferencias en el contenido del aceite entre vegetales de la misma especie dando lugar a la variabilidad; en la investigación Viturro et al. (43). encontró una. evidencia de variabilidad química en plantas de la misma especie, tres. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. poblaciones de S. parvifolia de Tucumán son distintas en la química de sus aceites. esenciales,. pertenecen. a. tres. quimiotipos. diferentes:. E-. Ó. N. isocitralpulegona, carvacrol-acetato de carvacrol, acetato de carvacrol –. AC I. piperitenona. El aceite esencial del género Satureja tiene como componentes. M UN. IC. principales al Timol y carvacrol (46,47). CO. Los resultados en esta investigación, revelan que E. coli y B. cereus presentan. Y. inhibición estadísticamente significativa (p<0.05) frente al aceite esencial de S.. IC. A. pulchella, es decir el aceite presenta actividad antibacteriana por lo tanto inhibe. RM. ÁT. el crecimiento de ambas bacterias, el grado de inhibición depende de la. IN. FO. concentración del aceite esencial usada.. DE. En la Fig. 1, se observa que E.coli es sensible frente a las concentraciones de. EM AS. 25, 50 y 75 % del aceite de S. pulchella, pues se observa la formación de halos de inhibición del crecimiento de 6.60, 12.07 y 15.87mm respectivamente; pero. ST. el diámetro de estos halos es menor en comparación con el halo de inhibición. DE. SI. formado por el antibiótico Cloranfenicol (control positivo) que fue de 20.6 mm;. N. aunque producen sensibilidad en la bacteria, no son concentraciones eficaces.. DI. RE. CC. IO. (Anexo 5). Asimismo el halo de inhibición formado por la concentración del 100% del aceite, fue de 23.60 mm; que presenta p<0.05, este dato se interpreta que el halo de inhibición formado por el aceite al 100% es significativamente mayor en comparación con el control. Siendo esta concentración eficazmente sensible 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. para E.coli. La mayor zona de inhibición del crecimiento de E.coli se obtuvo con la concentración de 100% de aceite esencial de S. pulchella y el más bajo. Ó. N. con la concentración del 25% del aceite. Este resultado permite asegurar que. IC. M UN. esencial de S. pulchella que al antibiótico Cloranfenicol (30µg).. AC I. E.coli es significativamente más sensible a la concentración de 100% del aceite. CO. Mkaddem y colaboradores (48) al realizar el estudio de actividades de los aceites. Y. esenciales extraídos de hojas de Mentha longifolia L. y Mentha viridis revela. presenta en su resultado una resistencia de E.coli al aceite. ÁT. (49). RM. Rezvanpanah. IC. A. que E. coli es menos susceptible que otras bacterias Gram negativas. Asi como. (50). señala que la actividad antibacteriana del extracto de S. hortensis. IN. Sahin. FO. esencial de S. hortensis, a diferencia de una bacteria Gram positiva. No obstante. diferentes. concentraciones. del. extracto. oleoso. de. Allium. EM AS. probó. DE. presenta actividad inhibitoria en E.coli pero no en B. cereus. Además Dávila (51). ampeloprasum Var. Porrum en las cinéticas del crecimiento bacteriano, logró. SI. ST. la inhibición de E. coli en un 91%, para S. aureus en un 72%, y para B.. DE. cereus en un 65%, en este estudio obtuvo mayor efecto en una bacteria Gram. CC. IO. N. negativa a diferencia de las Gram positivas.. DI. RE. Los datos obtenidos en esta investigación difieren con los reportados por Bastos (52). en el que reporta que la actividad antimicrobiana del aceite esencial de. Origanum vulgare es mayor sobre bacterias Gram negativas como E. coli, a diferencia del efecto sobre las Gram positivas como B. cereus y S. aureus; con. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. un halo de inhibición de 29.5 ±3.43 mm, mientras que el aceite de S. pulchella. Ó. N. obtuvo un halo de inhibición de 23.6 mm para E. coli.. AC I. Los resultados obtenidos se deben a que las bacterias Gram negativas tienen. M UN. IC. menor sensibilidad al aceite debido a la estructura de la membrana externa y a la constitución de su pared; ya que la membrana externa de las bacterias Gram. CO. negativas contiene lipopolisacaridos y no fosfolípidos, presentando mayor. Y. complejidad de la envoltura de doble membrana, en comparación con la. IC. A. glicoproteína de una sola membrana / ácido teicoicos de la bacteria Gram. RM. ÁT. positiva. Los aceites esenciales se introducen a través de los lípidos de la. IN. FO. membrana celular, alterando su estructura y haciéndolas más permeables. (52). DE. En la Fig.2 B. cereus presenta menor sensibilidad a la concentración de 25% del. EM AS. aceite de S. pulchella con un halo de inhibición de 15.8 mm, en comparación con el halo de inhibición formado por el antibiótico Vancomicina (control. ST. positivo) que fue de 19.27 mm, presenta p >0.05 este dato significa que el halo. DE. SI. de inhibición formado al 25% del aceite, no es significativamente mayor al. N. formado por el control. Por lo cual esta concentración no es eficazmente. CC. IO. sensible para B. cereus; aunque produce sensibilidad en la bacteria, no es. DI. RE. concentración eficaz en relación al antibiótico.. Las concentraciones de 50, 75 y 100 % del aceite de S. pulchella presentaron halos de inhibición de 26.47, 36.27 y 57.40 mm respectivamente con respecto a la Vancomicina, con una concentración de 30µg, con un halo de 19.27 mm, se 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. obtuvo un resultado de p<0.05 para cada una de las concentraciones mencionadas, lo cual indica la existencia de diferencia significativa entre el. Ó. N. halo de inhibición formado por el aceite a 50% y el formado por la. AC I. Vancomicina, así como también existe diferencia significativa para los halos de. M UN. IC. inhibición formados al 75 y 100%. (Anexo 6). CO. La mayor zona de inhibición de B.cereus se obtuvo con la concentración de. Y. 100% de aceite esencial de S. pulchella y el más bajo con la concentración de B.cereus es. IC. A. 25% del aceite. Este resultado permite asegurar que. RM. ÁT. significativamente más sensible a la concentración de 100% del aceite esencial. IN. FO. de S. pulchella que al antibiótico Vancomicina.. (53). donde el mayor efecto. DE. Estos resultados coinciden con los de Silva. EM AS. inhibitorio se presenta en B.cereus a una concentración de 100% con un halo de inhibición de 57.40 mm a diferencia de E. coli que presenta menor efecto a la. ST. misma concentración, con un halo de inhibición de 23.60 mm. Así como en la (54). se evidencia un efecto inhibitorio del. DE. SI. investigación realizada por Sousa. N. aceite esencial de L. camara contra B.cereus a una concentración de 210 mg/ml. CC. IO. (25 %) con un halo de inhibición de 16 mm; mientras que a una concentración. DI. RE. de 259.4 mg/ml (25%) del aceite esencial de S. pulchella se obtiene un halo de inhibición de 15.8 mm; estos resultados pueden deberse a la acción del principio activo de cada aceite, o a la acción de los componentes mayoritarios;. el género Satureja principalmente tiene como componentes mayoritarios al Timol y carvacrol. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la Fig. 3 Se compara los promedios de los halos de inhibición de E.coli y B.cereus frente a cada concentración (25, 50,75 y 100%) del aceite esencial de. Ó. N. S. pulchella, existiendo diferencia significativa entre ambas bacterias, es decir. AC I. una de las bacterias presenta mayor inhibición frente al aceite esencial,. M UN. IC. reflejando que B.cereus es más sensible al aceite de S. pulchella a las. CO. concentraciones de 25.50, 75 y 100% en comparación a E. Coli.. Y. Los resultados obtenidos en esta investigación concuerdan con los reportados. IC. A. por Cosentino (55) en el que reporta que el aceite esencial de Thymus vulgaris. RM. ÁT. por su alto contenido en compuestos fenólicos como el carvacrol y timol resultó. FO. ser más eficaz contra cepas como E.coli, S. aureus y B. cereus, siendo los Gram. (56). en su investigación menciona que el aceite esencial extraído de. DE. Olivera. IN. positivos los más susceptibles a diferencia de los Gram negativos. Así también. EM AS. Mansoa alliacea presenta actividad antibacteriana frente a bacterias Gram positivas como B. cereus; en cambio para las bacterias Gram negativas como. DE. SI. ST. E.coli y P. aeruginosa, la actividad antimicrobiana que presenta es menor.. N. Así como el aceite esencial de Rosmarinus officinalis tiene mayor efecto. CC. IO. inhibitorio contra bacterias patógenas Gram positivas, excepto E. fecalis y. DI. RE. mutantes resistentes a fármacos de E coli, en comparación con las bacterias Gram negativas. (57) Así mismo los resultados encontrados por Fisher (58) señala que los aceites de Citrus limón, C. sinensis y C. bergamia tienen efecto inhibitorio sobre L. monocytogenes, S. aureus, B. cereus, E. coli y C. jejuni; en el cual Citrus bergamia es el más eficaz, aunque de las bacterias Gram 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. positivas, S. aureus es la menos susceptible. Por otro lado, Herrera. (59). con el. extracto de Cinnamomum verum tiene un efecto inhibidor con un promedio de. Ó. N. halo de inhibición de 10 mm contra S. aureus y de 6 mm contra B. cereus,. AC I. siendo superiores a los presentados contra Salmonella spp., E. coli y P.. M UN. IC. aeruginosa.. CO. Otros resultados obtenidos por Yayli (60) en la evaluación del aceite esencial de. Y. Sedum pallidum y S. spurium de Turquía, mostraron baja actividad contra. IC. A. bacterias Gram positivas, negativas y hongos levaduriformes, aunque no se (61). RM. ÁT. observó actividad antibacteriana contra B. cereus. Sin embargo Valero. FO. realizo un estudio a los principales componentes de diferentes aceites esenciales. IN. como el carvacrol, borneol, cinamaldehido, eugenol, mentol, timol y la vainilla. la. inhibición. del. crecimiento. bacteriano.. Estos. agentes. EM AS. resultado. DE. en caldo de zanahoria inoculado con B. cereus ; en el que obtiene como. antimicrobianos prolongan la fase de latencia y reducen tanto la tasa de. DE. SI. ST. crecimiento exponencial y las densidades de población final. (62).. N. Diversas investigaciones mencionan que existe una relación entre las. CC. IO. estructuras químicas de los compuestos más abundantes en el aceite esencial y. DI. RE. su actividad antimicrobiana. Teniendo en cuenta la variedad de los compuestos químicos presentes en los aceites, es posible que su actividad antibacteriana no se deba a un mecanismo específico, sino a la combinación de ellos, principalmente para el género Satureja la actividad antibacteriana se debe a. componentes como el carvacrol y timol, componentes en mayor cantidad.(42,60) 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La información brindada por Azas. (63). encontró al carvacrol como componente. principal de los aceites de S. icarica, S.boissieri y S.pilosa, a diferencia de S.. Ó. N. coerulea que tienen betacariofileno y oxido de cariofileno como constituyentes. AC I. principales. Así como también en su estudio realizado al aceite esencial de S.. M UN. IC. kitaibelii se obtiene que el compuesto dominante es el p-cimeno. (64). CO. El mecanismo del efecto antimicrobiano de los aceites esenciales se explica por. Y. alertar a la estructura y función de la membrana citoplasmática, que se. IC. A. acompaña por el flujo de salida de los componentes citoplasmáticos incluyendo. RM. ÁT. ATP en los microorganismos diana, provoca la deformación de la membrana y. FO. los consiguientes cambios en su permeabilidad. Los aceites esenciales que. IN. tienen propiedades hidrófobas pueden penetrar en la membrana celular de las. DE. bacterias, se disuelven en la membrana y como consecuencia, reducir su. EM AS. función cambiando el patrón de transporte de iones y la inactivación enzimática. En general, los aceites esenciales poseen sus propiedades. ST. antimicrobianas al interferir y desestabilizar el rendimiento de la biocapa de. DE. SI. fosfolípidos de la membrana celular, las actividades enzimáticas y los recursos. CC. IO. N. genéticos en las bacterias. (57). DI. RE. Con los resultados obtenidos en esta investigación se afirma que el aceite esencial de S. pulchella muestra mayor efecto inhibitorio sobre el crecimiento de B. cereus que sobre E. coli, lo que revela su potencial como alternativa de conservante natural en productos alimenticios.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. El aceite esencial de Satureja. pulchella a las concentraciones de 25, 50, 75. N. . AC I. Ó. y 100% tiene efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Escherichia. coli y. El aceite esencial de Satureja pulchella tiene mayor efecto inhibitorio sobre. M UN. . IC. Bacillus cereus.. CO. el crecimiento de Bacillus cereus. . Y. El aceite esencial de Satureja. pulchella a la concentración de 100% tiene. IC. A. mayor efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Escherichia. coli y Bacillus. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. cereus.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. Realizar la caracterización fitoquímica del aceite esencial de S. pulchella.. . Se recomienda evaluar diferentes concentraciones del aceite esencial de S. pulchella. IC. AC I. Ó. N. . DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. en otras bacterias de interés clínico y alimentario.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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