Efecto del enalapril sobre la remodelación cardiaca inducida en ratas hipertensas

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS MÉDICAS. M. ed. ici. na. ESCUELA DE MEDICINA. de. EFECTO DEL ENALAPRIL SOBRE LA. a. REMODELACION CARDIACA INDUCIDA EN. te c. RATAS HIPERTENSAS. Bi b. lio. TESIS DE PREGRADO AUTOR. Malca Atoche Joel Cristian ASESOR:. Dra. Luz Marina Guerrero Espino TRUJILLO – PERÚ 2015. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ed. “La ciencia avanza paso a paso, no en saltos. Creo firmemente que la mayor parte del trabajo es gradual…... La solución. M. sistemática de problemas de alta complejidad requiere de una. Thomas C. Südhof, MD. Premio Nobel de Medicina 2013. Bi b. lio. te c. a. de. visión a futuro y mucha paciencia”.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ed. ici. na. DEDICATORIA. A Dios. M. El presente trabajo de tesis primeramente me gustaría agradecerte a ti Dios por. de. bendecirme en cada paso que doy, por darme fuerza para seguir adelante y. Bi b. lio. te c. a. porque haces realidad un sueño anhelado desde niño.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mi familia. Gracias a esas personas importantes en mi vida, que siempre estuvieron listas para. na. brindarme toda su ayuda, ahora me toca regresar un poquito de todo lo. ustedes.. ed. ici. inmenso que me han otorgado. Con todo mi cariño está tesis se las dedico a. Por apoyarme en todo momento, por los valores que me han inculcado, y por haberme dado. M. la oportunidad de tener una excelente educación en el transcurso de mi vida.. Mis padres Miguel y Marleny. te c. a. de. Sobre todo por ser un excelente ejemplo de vida a seguir.. Este trabajo está también dedicado a dos personas muy especiales para mi,. lio. mis abuelos, que aunque no están físicamente conmigo sé que desde el cielo. Bi b. me cuidan y me guían para que todo salga bien. Ustedes, desde el cielo, saben que estoy cumpliendo la promesa que les hice. Mis abuelitos Segundo y Lucila. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. na. AGRADECIMIENTOS. ici. A mi asesora. ed. Dra. Luz Guerrero Espino, por su esfuerzo y dedicación, quien con sus conocimientos, su experiencia, su paciencia y su motivación ha logrado en. A mis maestros. lio. te c. a. de. M. mí que pueda terminar este trabajo con éxito. Que en este andar por la vida, influyeron con sus lecciones y experiencias en. Bi b. formarme como una persona de bien y preparada para los retos que pone la vida, a todos y cada uno de ellos les dedico esta tesis.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Al Sr. Américo Aguilar, personal técnico de la Facultad de Medicina, a la Sra. Jovita, del Departamento de Patología de los Hospital Belén. na. de Trujillo, al Dr. Antonio Zavaleta, médico patólogo, a Deyvis Mejia, encargado del Bioterio de la Facultad de Farmacia y Bioquímica; y. A mis compañeros. te c. a. de. M. ed. ici. demás personal que me apoyaron durante la ejecución de esta tesis.. de manera desinteresada para que este sueño se haga realidad.. Bi b. lio. Manuel Ñique y Pedro Navarrete, quienes me apoyaron. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE GENERAL ÍNDICE GENERAL………………………………………………………..…................................…i ÍNDICE DE FIGURAS…………………………………………….........…................................…iv ÍNDICE DE TABLAS…………………………………………….........…....................................…v ABREVIATURAS………………………………………….........…..............................................…vi RESUMEN………………………………………….........…............................................................…vii. I.. na. ABSTRACT………………………….........….......................................................................... .......…viii INTRODUCIÓN………………….........….....................................................................................…01. ici. 1.1.ANTECEDENTES………………….........…......................................................... ..................…01. ed. Remodelación cardíaca………………….........…....................................................................…03 Relación entre la hipertensión y la remodelación cardíaca………………..................…04 Enalapril………………….........…................................................................................................ …05. M. 1.2.JUSTIFICACIÓN………………….........…..........................................................................…08 1.3.PROBLEMA………………….........….....................................................................................…09. de. 1.4.HIPÓTESIS………………….........….......................................................................................…09 1.5. OBJETIVOS……….................................................................................................................…10. a. 1.5.1. OBJETIVO GENERAL………………….........…........................................…10. II.. te c. 1.5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS………….............................................….....…10 MATERIAL Y MÉTODOS………………….........…................................................... .............…11 2.1.DISEÑO DE CONTRASTACIÓN…………………..................................... .................…11. lio. 2.1.1. Diseño del estudio………………….........….........................................................11 2.1.2. Esquema del diseño del estudio………………….........…............................11. Bi b. 2.2.DISEÑO MUESTRAL………………….........…........................................ ...........................…12 2.2.1. Unidad de análisis………………….........….....................................................…12 2.2.2. Tamaño de muestra………………….........….................................................…12. 2.3.ANIMALES Y GRUPOS EXPERIMENTALES………………….......................…13 2.3.1. Grupos experimentales………………….........…..........................................…13 2.3.2. Obtención del fármaco………………….........…..........................................…14 2.3.3. Preparación de la dosis………………….........…..........................................…14 2.3.4. Administración del fármaco…………………............…..............................…14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. i.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.MODELO EXPERIMENTAL DE HIPERTENSIÓN ARTERIAL…….......…15 2.5.MEDICIÓN DE LA PRESIÓN ARTERIAL SISTÓLICA…….......................…15 2.6.OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DEL MATERIAL DE ESTUDIO……...16 2.7.ANÁLISIS CUANTITATIVO POR ANÁLISIS DE IMAGEN……….....…......17 2.7.1. Análisis morfométrico computarizado……......….......................................17 2.7.2. Calibración del software……......….....................................................................17. na. 2.8.EVALUACIÓN DE LA REMODELACIÓN VENTRICULAR……......…......18 2.8.1. EVALUACIÓN DE LA HIPERTROFIA VENTRICULAR……18. ici. 2.8.1.1.Relación entre el peso ventricular y el peso corporal….....18 2.8.1.2.Remodelación geométrica del ventrículo…….......................…18. ed. 2.8.1.3.Área transversal de los miocitos cardíacos……...................…18 2.8.2. EVALUACIÓN DE LA FIBROSIS VENTRICULAR………....…19. M. 2.8.2.1.Evaluación de la fibrosis intersticial ventricular……......….19 2.8.2.2.Evaluación de la fibrosis perivascular ventricular……....…19. RESULTADOS……......….................................................................................................................. 21. a. III.. de. 2.9.ANÁLISIS ESTADÍSTICO……......…................................................................................20. 3.1.SUPERVIVENCIA……......….................................................................................................. 21. te c. 3.2.RESULTADOS DE LA PRESIÓN ARTERIAL……......…......................................21 3.3.EVALUACIÓN DE LAS CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS…...23. lio. 3.3.1. EVALUACIÓN PONDERAL……......….................................................... 23. Bi b. 3.3.1.1.Peso corporal…….....................................................................................…23 3.3.1.2.Peso ventricular……......….....................................................................23 3.3.1.3.Índice de Masa Ventricular……......….............................................24. 3.3.2. EVALUACIÓN DE LA GEOMETRÍA VENTRICULAR……...26 3.3.2.1.Espesor de la pared del ventrículo izquierdo……................…26 3.3.2.2.Diámetro de la cavidad del ventrículo izquierdo…….......…26 3.3.2.3.Relación Espesor de la pared/Diámetro de la cavidad del ventrículo izquierdo……........................................................................…26. 3.4.EVALUACIÓN. MICROSCÓPICA. DE. LAS. CARACTERÍSTICAS. HISTOPATOLÓGICAS……......…........................................................................................ 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. ii.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.4.1. Descripción microscópica cualitativa ventricular. Microscopía de luz……......…......................................................................... .........................................28 3.4.2. Valoración microscópico-cuantitativa por análisis de imagen de las variables cardíacas……...............................................................................…28 3.4.2.1.Área transversal de los miocitos cardíacos……........…...........30 3.4.2.2.Fibrosis intersticial ventricular……......….......................................32. DISCUSIÓN……..............................................................................................................................…36. ici. IV.. na. 3.4.2.3.Fibrosis perivascular ventricular…….........................................…34. 4.1.CARACTERÍSTICAS GENERALES DE LOS ANIMALES…….....................36. ed. 4.2.EFECTO DEL ENALAPRIL SOBRE LA HIPERTENSIÓN ARTERIAL INDUCIDA POR L-NAME……................................................ ...........................................…36 DE. LA. REMODELACIÓN. VENTRICULAR:. M. 4.3.EVALUACIÓN. HIPERTROFIA Y FIBROSIS VENTRICULAR……......................................….....38. de. 4.4.RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN…….....................................................…43. CONCLUSIONES……......................................…............................................................................ 44. VI.. RECOMENDACIONES……................................................................................................... ...…45. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…….........................................................................…46. VIII.. ANEXOS DEL REGLAMENTO DE INVESTIGACIÓN……................................…55. Bi b. lio. te c. a. V.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. iii.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE DE FIGURAS. Figura 1. Máscara del Software ImageJ 1.46 (NIH, USA)………………………........…17. Figura 2. Fotografías representativas del corazón y sus respectivos ventrículos. na. (Cortes transversales)……………………..........................................................................................…25. de. los. miocitos. cardíacos. en. ici. Figura 3. Área transversal de los miocitos cardíacos: Fotografías representativas cortes. transversales. teñidos. con. H-. ed. E................................................................................................... ................................................................…31. de. ventrículo. M. Figura 4. Fibrosis intersticial ventricular: Fotografías representativas de la pared izquierdo. teñido. con. Tricrómica. de. de. Masson.......................................................................................................... .............................................…33. Figura 5. Fibrosis perivascular ventricular: Fotografías representativas de la de. ventrículo. izquierdo. a. pared. teñido. con. Tricrómica. de. Bi b. lio. te c. Masson......................................................................................................... ..............................................…35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. iv.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE DE TABLAS. Tabla I. Evaluación ponderal……………………..........................................................................…24. na. Tabla 2. Evaluación de la geometría ventricular.................................................................…27. Tabla 3. Evaluación de las variables cardiacas microscópicas estudiadas por. ici. análisis de imagen……………………........................................................ ......................................…29. ed. ANEXO I……………………............................................................................. ...................................…56. M. 1.1. Análisis de varianza del índice de masa ventricular........................................…56 1.2. Análisis de varianza de la remodelación geométrica del ventrículo......…57. de. 1.3. Análisis de varianza del área transversal de los miocitos cardiacos......…58 1.4. Análisis de varianza de la fibrosis intersticial ventricular............................…59. Bi b. lio. te c. a. 1.5. Análisis de varianza de la fibrosis perivascular ventricular.......................…60. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. v.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABREVIATURAS Antagonista de los receptores de angiotensina II. AT II:. Angiotensina II. ATM:. Área transversal de los miocitos cardiacos. DVI:. Diámetro de la cavidad del ventrículo izquierdo. ECA:. Enzima convertidora de angiotensina. FRCV:. Factor de riesgo cardiovascular. FVC:. Fracción de volumen de colágeno. HTA:. Hipertensión arterial. HVI:. Hipertrofia ventricular izquierda. IECA:. Inhibidor de la enzima convertidora de angiotensina. IMV:. Índice de masa ventricular. L-NAME:. N(ω) -Nitro-L-arginine methyl ester. LVM:. Masa ventricular izquierda. NO:. Óxido nítrico. ici. ed. M. de. a. Óxido nítrico sintasa. Óxido nítrico sintasa endotelial. lio. eNOS:. Presión arterial sistólica Peso ventricular. Bi b. PV:. te c. NOs:. PAS:. na. ARA II:. PC:. Peso corporal. ROS:. Especies reactivas de oxígeno. SRA:. Sistema renina-angiotensina. SRH:. Ratas espontáneamente hipertensas. VI:. Ventrículo izquierdo. %CI:. Porcentaje de colágeno intersticial. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. vi.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN EFECTO DEL ENALAPRIL SOBRE LA REMODELACION CARDIACA INDUCIDA EN RATAS HIPERTENSAS Autor: Malca Atoche Joel. na. Asesor(a): Dra. Luz Marina Guerrero Espino. INTRODUCCIÓN:La HTA es la principal causa de morbimortalidad en adultos mayores. ici. de 50 años, constituyendo el factor de riesgo cardiovascular modificable más prevalente en el mundo. En el corazón produce un proceso conocido como remodelamiento cardiaco, que. ed. incluye hipertrofia del ventrículo izquierdo y fibrosis ventricular, siendo el tratamiento antihipertensivo la piedra angular para evitar y/o atenuar este proceso, entre ellos tenemos. M. los IECAS, como el enalapril, que es unos principales fármacos usados en nuestro país. OBJETIVO:Identificar el efecto del Enalapril sobre la remodelación cardiaca inducida en. de. ratas hipertensas.. MATERIALES Y MÉTODOS:Diseño experimental aleatorio simple de tres grupos (21 ratas): Control (n=7), L-NAME (n=7), L-NAME + Enalapril (n=7). En los dos últimos. a. grupos se le administró L-NAME (40 mg/Kg/día), fármaco que produce HTA persistente y. te c. cambios a nivel arterial y cardiaco. Al último grupo se le administró Enalapril (10 mg/Kg/día) durante 5 semanas. Al final del experimento los animales fueron sacrificados,. lio. se extrajo los corazones, los cuales fueron medidos, pesados, y procesados para el estudio microscópico.. Bi b. RESULTADOS:El grupo L-NAME mostró cambios estructurales más intensos comparado a los otros dos grupos (p<0.05). Mientras que el tratamiento con L-NAME + Enalapril atenuó sus efectos al inhibir el IMV, la remodelación geométrica del ventrículo, el área transversal de los miocitos cardiacos, la fibrosis intersticial y perivascular ventricular. Estos dos últimos presentaron diferencia estadística con los controles (p<0.05). CONCLUSIÓN: El tratamiento con enalapril atenuó los cambios estructurales de la remodelación cardíaca en este modelo experimental de hipertensión . Palabras clave: HTA, remodelación cardiaca,L-NAME, enalapril.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. vii.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT EFFECT OF ENALAPRIL ON CARDIAC REMODELING INDUCED IN HYPERTENSIVE RATS Author: Malca Atoche Joel. na. Assessor: Dr. Luz Marina Guerrero Espino INTRODUCTION: The HTN is the main cause of morbidity and mortality in adults over. ici. 50 years, being the most prevalent modifiable cardiovascular risk factor in the world. At the heart produces a process known as cardiac remodeling, including left ventricular. ed. hypertrophy and ventricular fibrosis, antihypertensive treatment being the cornerstone to prevent and/or reduce this process, including ACE inhibitors, as enalapril, which is a main. M. drugs used in our country.. OBJECTIVE:To identify the effect of enalapril on cardiac remodeling induced. de. hypertensive rats.. MATERIALS AND METHODS: Experimental design simple randomized three groups (21 rats): Control (n = 7), L-NAME (n = 7), L-NAME + enalapril (n = 7). In the two latter. a. groups was administered L-NAME (40 mg / kg / day), a drug that produces persistent. te c. hypertension and changes in arterial and cardiac levels. The last group was given enalapril (10 mg / kg / day) for 5 weeks. At the end of the experiment the animals were sacrificed,. study.. lio. the hearts was removed, which were measured, weighed, and processed for microscopic. Bi b. RESULTS: The L-NAME group showed more intense structural changes compared to the other two groups (p<0.05). While treatment with L-NAME + Enalapril attenuated its effects by inhibiting the IMV, the geometric remodeling of the ventricle, the cross sectional area of cardiac myocytes, interstitial fibrosis and perivascular ventricular. The latter two had statistical difference with controls (p <0.05). CONCLUSION: Treatment with enalapril attenuated structural changes of cardiac remodeling in this experimental model of hypertension. Keywords: HTN, cardiac remodeling, L-NAME, enalapril.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/. viii.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1. INTRODUCCIÓN. 1.1.ANTECEDENTES. na. La hipertensión arterial (HTA) es el factor de riesgo cardiovascular (FRCV) modificable más prevalente en todos los continentes y es especialmente abrumador en. ici. los países de ingresos bajos y medianos1. Según la Organización Mundial de la Salud,. ed. afecta al 15% de la población del planeta2.. M. La hipertensión arterial es una condición clínica crónica muy frecuente en el mundo occidental. Así, se calcula que en Estados Unidos hay unos 50 millones de personas. de. hipertensas; es decir, la prevalencia es de 24%3. En Latinoamérica la cifra bordea el 20%4, y en el Perú, según el estudio TORNASOL II, es del 27,3%, es decir, uno de. te c. a. cada cuatro peruanos mayores de 18 años es hipertenso5, 6; y se estima que el 29.2%. lio. de la población padecerá esta condición para el año 20257.. La HTA es en la actualidad la principal causa de morbimortalidad en los mayores de. Bi b. 65 años, grupo etario en el que alcanza la mayor prevalencia (60%)8 y de acuerdo a los datos obtenidos de múltiples trabajos de investigación efectuados en distintos países en los últimos años, la gran mayoría de las personas hipertensas no están bien controladas, ignoran su condición de tales y otros, a pesar de que la conocen, continúan con valores elevados de presión arterial, lo que representa un grave problema de salud9-10.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Por ello, las guías de actuación clínica, entre ellas The Eighth Joint National Committee (JNC 8), coinciden en que el objetivo de tratamiento del paciente hipertenso debe ser no sólo el control de la presión arterial (PA), sino la protección de los órganos diana de la hipertensión y la disminución de la morbilidad y la mortalidad. na. asociadas11.. ici. La HTA en la actualidad es una compleja enfermedad cardiovascular que en ausencia. ed. del adecuado tratamiento puede progresar mediante lesiones en sus órganos blancos o. M. diana, entre los que tenemos: el corazón, el riñón, el cerebro, los ojos y las arterias, teniendo una relación muy estrecha, continua y graduada con el desarrollo de. de. Enfermedad Cerebro Vascular (ECV), infarto agudo del miocardio (IAM), insuficiencia renal, enfermedad arterial periférica y todas las causas de muerte. te c. a. cardiovascular12.. A nivel cardiaco, existe una relación continua entre el aumento de la presión arterial y. lio. el riesgo de determinados trastornos cardiacos como la enfermedad coronaria, la. Bi b. hipertrofia ventricular, la insuficiencia cardiaca, determinadas arritmias y la muerte súbita. Entre ellos la hipertrofia ventricular izquierda (HVI) es un factor independiente de riesgo cardiovascular relacionado con las complicaciones cardiovasculares en pacientes con hipertensión13, 14.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. REMODELACIÓN CARDÍACA. El Consenso del International Forum on Cardic Remodeling la define como un conjunto de modificaciones en la expresión genética, celular e intersticial, que se manifiestan clínicamente como cambios en el tamaño, forma y función del corazón. ici. na. después de una injuria cardiaca15.. ed. Recientemente el Grupo de trabajo „Función miocárdica‟ de la Sociedad Europea de Cardiología, en el 2011, propuso restringir el uso de HVI a los miocitos cardiacos que. M. pueden o no estar acompañados por complejos reordenamientos tisulares que. (incluyendo. la. fibrosis. miocárdica). reciben. ahora. la. denominación. de. te c. a. „remodelamiento‟16. de. producen cambios en la forma o tamaño ventricular, todas estas modificaciones. El remodelamiento estructural adverso del miocardio, visto en la HTA, es un proceso. lio. difuso que incluye, hipertrofia miocítica, fibrosis intersticial y engrosamiento de la. Bi b. media de los vasos coronarios intramurales17.. La hipertrofia ventricular se considera como un mecanismo de adaptación frente al incremento de la tensión de las paredes del ventrículo izquierdo. Este proceso, como ocurre con otros mecanismos compensadores, deja de ser beneficioso en algún momento de la evolución de los pacientes y propicia la aparición de manifestaciones clínicas adversas y de complicaciones, ya que la mayor masa muscular no se. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. acompaña de un aumento equivalente del riego sanguíneo, lo que puede producir insuficiencia coronaria y angina de pecho. Además, la HVI no sólo se produce a expensas de un aumento en el tamaño de los cardiomiocitos, sino que existe un aumento del espacio intersticial (constituido por fibroblastos y fibras de colágeno).. na. Este aumento del tejido intersticial hace que el corazón tenga una peor capacidad de contraerse y relajarse, y provoca una disfunción de los vasos de pequeño calibre. ed. ici. intramiocárdicos18, 19.. RELACIÓN ENTRE LA HIPERTENSIÓN Y LA REMODELACIÓN. M. CARDÍACA. de. A lo largo de los últimos años se han descrito los sistemas fisiopatológicos involucrados en el remodelamiento cardiaco asociado a la HTA, adquiriendo una. te c. a. notable importancia el sistema renina-angiotensina (SRA)20,21. Este sistema, por medio de la angiotensina II (AT II, su principal molécula efectora), provoca que los. lio. miocitos ventriculares se sensibilicen y liberen ATII, producido en un sistema intracelular conocido como renina-angiotensinógeno ATII local endógeno, el cual se. Bi b. retroalimenta en el miocardio de manera autocrina para promover el crecimiento. De igual manera, la ATII se une a una proteíncinasa (proteíncinasa C) por medio de una proteína G activa también a los proto-oncogenes que promueven el crecimiento22, 23. Por otra parte, la ATII activa a la enzima NADPH oxidasa, desencadenando un exceso de formación de especies reactivas de oxígeno (ROS) y generando, por tanto, estrés oxidativo (definido como un desbalance entre las sustancias oxidantes y. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. antioxidantes del organismo, a favor de las primeras). Las ROS, que actúan como moléculas de señalización intracelular, activan una serie de rutas enzimáticas que ponen en funcionamiento, entre otros, los procesos inflamatorios y generando todo. na. ello fibrosis, proliferación celular e hipertrofia en las células cardiacas24, 25.. La relación entre los diferentes mecanismos y la presión sanguínea elevada, está muy. ici. bien definida y documentada en multitud de trabajos usando animales o pacientes. ed. hipertensos26; por ello, se han propuesto terapias, no solo con el objetivo de disminuir. M. los valores de presión arterial, sino como protección de los órganos dianas 27.. de. ENALAPRIL. a. El enalapril se administra por vía oral, hecho indispensable para los tratamientos a. te c. largo plazo de las enfermedades crónicas. La administración oral de un IECA (Inhibidor de la Enzima Convertidora de Angiotensina) se corresponde al profármaco. lio. el cual se absorbe mejor que su metabolito activo desde el tracto gastrointestinal. De esta manera, tras su administración oral, el enalapril es rápidamente absorbido y. Bi b. metabolizado en el hígado dando lugar, mediante hidrólisis, a su metabolito diácido activo, el enalaprilato, el cual bloquea potentemente la producción de angiotensina II desde la angiotensina I. La excreción del enalapril y enalaprilato es principalmente renal aunque también ocurre en las heces. Debido a que la excreción de la mayor parte de los IECAs es fundamentalmente renal, existe el riesgo de que, en pacientes con daño renal, se pueda incrementar la exposición plasmática al metabolito activo 28.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Su mecanismo incluye la inhibición de la ECA disminuyendo la formación de angiotensina II circulante e induce un decline concomitante de la concentración de aldosterona. Debido a estos mecanismos, el enalapril mejora las consecuencias negativas de la vasoconstricción y la retención de sodio en pacientes con fallo. na. cardíaco 29.. ici. Igualmente, existe evidencia de que los IECAs también ejercen efectos tisulares. ed. locales por inhibir la producción de angiotensina II en órganos específicos, tales. M. como el corazón y el endotelio vascular. Este mecanismo hace que estos fármacos pueden prevenir algunas consecuencias negativas de la remodelación vascular y la. de. hipertrofia ventricular izquierda 30.. a. Por su parte el tratamiento antihipertensivo juega un papel importante en la. 32, 33. te c. prevención y regresión de la hipertrofia ventricular izquierda y fibrosis miocárdica31, ; siendo los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (IECA) y los. lio. bloqueadores de receptores de angiotensina (BRA) los que han mostrado mayor. Bi b. eficacia en el logro de este objetivo31, 34, 35.. Dahlöfet al36 analizaron los datos de 109 ensayos (que comprende más de 2 300. participantes) donde hubo regresión de la HVI demostrable por ecocardiografía después del tratamiento antihipertensivo. Se informó de que los inhibidores de la ECA, los antagonistas de los canales de calcio y los β-bloqueantes reduce HVI mediante la inversión de la hipertrofia de la pared. Al comparar estos grupos se. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. observó que los IECA son los más eficaces en la reducción de masa ventricular izquierda (LVM) y de la fibrosis miocárdica.. El meta-análisis realizado por Cruickshank et al37con 104 ensayos publicados llegó a. na. las mismas conclusiones: los IECA produjeron una disminución significativa LVM en todos los ensayos, lo mismo ocurrió en la mayoría de los ensayos que utilizaron. ed. ici. bloqueadores β-adrenérgicos, α-o, o ambos, o antagonistas de los canales de calcio.. M. En el meta-análisis realizado por Klingbeil et al38se describe que la capacidad de los distintos grupos farmacológicos para hacer regresar la HVI es distinta: el tratamiento. de. con antagonistas de canales de calcio, IECAS o con antagonistas de los receptores de angiotensina II (ARA-II) consigue una mayor regresión de la HVI que el tratamiento. te c. a. con diuréticos o bloqueadores beta adrenérgicos.. A propósito de este fármaco De Andrade Zorzi et al39, encontró que la administración. lio. de enalapril tiene un efecto beneficioso sobre la remodelación vascular y la. Bi b. hipertrofia miocárdica en ratas espontáneamente hipertensas (SHR).. Dentro de los IECA, Enalapril es uno de los antihipertensivos más utilizados en nuestro medio, por su accesibilidad económica y adecuado cumplimiento por parte del paciente40.Es por ello que se pretende realizar este estudio con este fármaco para. evaluar los cambios producidos por el remodelamiento cardiaco en un modelo diferente de hipertensión.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2.. JUSTIFICACIÓN. La morbimortalidad del hipertenso sin hipertrofia ventricular izquierda, como parte de la remodelación cardiaca, es similar a la de la población normal; pero para el. na. hipertenso con hipertrofia es cinco veces mayor que la de la población normal.. ici. En nuestro país, como parte del tratamiento farmacológico, el 82.2 % de pacientes. ed. recibe IECAs41, a pesar de ello hay pocos estudios que evalúen el efecto de este medicamento, en la remodelación cardiaca (hipertrofia ventricular izquierda y fibrosis. M. ventricular) de sujetos hipertensos, debido a ello es que se pretende evaluar dicho. de. efecto a través de un modelo de hipertensión provocado por la inhibición de la. a. síntesis de Óxido Nítrico (NO).. te c. Este estudio buscó establecer los posibles efectos de los IECA (Enalapril) en la progresión de la hipertrofia ventricular izquierda y la fibrosis ventricular, lo que. Bi b. lio. podría ser una ventaja en la prescripción médica de pacientes hipertensos.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3.. PROBLEMA. ¿Cuál es el efecto del Enalapril sobre la remodelación cardiaca inducida en. HIPÓTESIS. de. 1.4.. M. ed. ici. na. ratas hipertensas?. Bi b. lio. te c. a. Enalapril atenúa la remodelación cardiaca inducida en ratas hipertensas. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.5.. OBJETIVOS. na. 1.5.1. OBJETIVO GENERAL. ici. Identificar el efecto del Enalapril sobre la remodelación cardiaca inducida en ratas. M. ed. hipertensas. de. 1.5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. a. Determinar los efectos del Enalapril sobre la hipertrofia ventricular izquierda. te c. . . lio. inducida en ratas hipertensas. Determinar los efectos del Enalapril sobre la fibrosis ventricular inducida en. Bi b. ratas hipertensa. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2. MATERIAL Y MÉTODOS 2.1.. DISEÑO DE CONTRASTACIÓN 2.1.1. Diseño del estudio. na. Diseño experimental aleatorio simple de tres grupos. 2.1.2. Esquema del diseño del estudio. ed. ici. Rattus rattus var. Holtzman. de. M. MEDIDA DE LA PRESIÓN ARTERIAL. L-NAME (n=7). L-NAME + Enalapril (n=7). ADMINISTRACIÓN DE L-NAME. lio. Día 7. te c. Día 0. a. Control (n=7). MEDIDA DE LA PRESIÓN ARTERIAL. Día 21. MEDIDA DE LA PRESIÓN ARTERIAL. Día 28. MEDIDA DE LA PRESIÓN ARTERIAL. Día 35. MEDIDA DE LA PRESIÓN ARTERIAL. Bi b. Día 14. MEDIDA DE LA PRESIÓN ARTERIAL. Sacrificio de ratas. Análisis macroscópico y microscópico del corazón 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.. DISEÑO MUESTRAL. 2.2.1. Unidad de análisis. na. Ratas albinas “Rattus rattus var. Holtzman” machos de 8-9 semanas de edad,. ici. con peso de 200 + 20.0g.. ed. 2.2.2. Tamaño de muestra. M. El universo muestral está constituida por especímenes de Rattus rattus var.. de. Holtzman, para determinar el tamaño de la muestra se empleó la siguiente formula. Donde:. te c. a. estadística:. lio. Zα = 1.65, coeficiente de confiabilidad para α = 0.05. Bi b. Zβ = 0.85, coeficiente de confiabilidad para β = 0.20. S2=Varianza. E = Error estándar Se. asume. por no haber estudios realizados en nuestro medio. Reemplazando valores, se obtuvo: N=6.25≈7. Según este resultado la investigación se debería realizar con 7 ratas por grupo.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.. ANIMALES Y GRUPOS EXPERIMENTALES. Se utilizaron ratas machos adultas, Rattus rattus var. Holtzman (200±20gr), de 8-9 semanas de edades aparentemente sanas al inicio del estudio, obtenidos del. na. bioterio de la Universidad Nacional de Trujillo, Facultad de Farmacia y Bioquímica. Los animales fueron mantenidos en condiciones estándar de iluminación (ciclos. ici. diarios de 12 horas de luz y 12 de oscuridad).. ed. Estos animales se mantuvieron a una temperatura de 19-22°C, y los experimentos se realizaron a la misma hora. Su alimentación fue una dieta estándar. M. para roedores de acuerdo a lo establecido por el bioterio y agua ad libitum.. de. El experimento se llevó a cabo según la Guía para el uso y el cuidado de animales de laboratorio publicada por el Instituto Nacional de Salud de Los Estados. te c. a. Unidos42.. 2.3.1. GRUPOS EXPERIMENTALES. lio. Las ratas Holtzman albinas machos, se eligieron por su mejor manejo y. Bi b. resistencia para los procedimientos, con un peso 200±20gr y se distribuyeron en 3 grupos de 7 ratas cada uno, de la siguiente manera: . Grupo I (Control): animales a los cuales no se les administra L-NAME, ni. Enalapril. . Grupo II (L-NAME): animales a los cuales sólo se les administra L-NAME.. . Grupo III (L-NAME + Enalapril): animales a los cuales se le administra LNAME y Enalapril. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.2. OBTENCIÓN DEL FÁRMACO. Se adquirió dos cajas (100 tabletas cada una) de enalapril de 10 mg de AC. na. FARMA con R.S.: NG-1798.. ici. 2.3.3. PREPARACIÓN DE LA DOSIS. ed. Para el L-NAME, primero se hizo una dilución de 50 mg/ml. Luego se administró proporcionalmente a la dosis indicada: 40 mg/kg/día.. M. El Enalapril de 10 mg fue diluido en suero salino estéril hasta completar 1 ml,. de. luego la dosis en “mg” fue convertida a volumen y administrada a cada animal según. a. su peso diario.. te c. 2.3.4. ADMINISTRACIÓN DEL FÁRMACO. lio. La administración de L-NAME (40 mg/Kg/día) y Enalapril (10 mg/kg/ 2. Bi b. veces al día) en los grupos II, III y respectivamente se realizó durante 5 semanas. Se administró una dosis diaria por vía orogástrica a través de un tubo o “gavage”. Primero Medir la aguja de sonda oral con bombilla de punta antes de la. colocación; Luego suavemente, pero con firmeza avanzar la aguja-sonda oral y el bulbo con la punta en la rata consciente desde el lado de la boca. Hacer que la rata se trague la aguja y una vez que está colocada es en el estómago, el compuesto se puede administrar.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.. MODELO EXPERIMENTAL DE HIPERTENSIÓN ARTERIAL. La hipertensión experimental y la remodelación cardiaca fueron inducidas en la rata usando el modelo con Nω-nitro-L-arginina-metil-éster (L-NAME), el cual. na. consiste en la administración diaria de 40 mg/Kg/día por vía orogástrica. La hipertensión arterial inducida mediante la administración crónica de L-. ici. NAME, produce una inhibición de la enzima óxido nítrico sintasa (NOS) y, por. ed. consiguiente, una disminución en los niveles de NO. Este modelo experimental se caracteriza por sufrir cambios estructurales y funcionales en los vasos sanguíneos y. M. en el corazón, debidos a mecanismos oxidativos e inflamatorios, y todo ello mediado. de. por la activación el sistema renina-angiotensina-aldosterona (SRAA) (Takemoto y col., 1997; Luvará y col., 1998; Kitamoto y col., 2000).. a. La ventaja de este modelo es que genera HTA sistémica muy similar a la de la. te c. mayoría de los humanos y produce a su vez remodelación cardiaca en los modelos experimentales, convirtiéndolo en una sustancia ideal para la realización de este. Bi b. lio. estudio43. 2.5.. MEDICIÓN DE LA PRESIÓN ARTERIAL SISTÓLICA. La presión arterial sistólica se midió de forma no invasiva, una vez a la semana alrededor del mediodía por el método “tail-cuff” con un esfigmomanómetro Modelo OMROM HEM-815F modificado.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El instrumento de medición de la presión arterial fue adaptado a partir de un esfigmomanómetro digital, y probado durante 14 días. La presión de la sangre de cada rata se medió tres veces, con el promedio de los tres valores se tomó como valor de presión arterial sistólica.. na. Se consideró como rata hipertensa a valores de presión sistólica ≥ 125 mmHg,. OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DEL MATERIAL DE ESTUDIO. M. 2.6.. ed. ici. según este método.. de. Al final del seguimiento los animales se dejaron 12 horas en ayunas, luego fueron sacrificadas por sobredosis de Pentobarbital Sódico (Halatal®). Seguidamente. te c. a. se determinó el peso corporal total de cada rata y se practicó una toracotomía para extraer el corazón. El corazón recién retirado se irrigó con suero fisiológico para. lio. eliminar la sangre y coágulos en el interior de sus cavidades y se secó brevemente con papel filtro. Luego se eliminaron las aurículas y se pesaron los ventrículos. Después. Bi b. los ventrículos se dividieron transversalmente en su ecuador (a 4 mm del ápex). A continuación se pusieron en envases individuales con formaldehido al 10%. Posteriormente se obtuvieron rebanadas de las muestras y se fijaron en. parafina. Se realizaron cortes de 3-4 µm de espesor, para ser teñidos con hematoxilina-eosina (H-E) y Tricrómica de Masson para su posterior estudio. Obteniéndose dos láminas histológicas por cada espécimen.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7.. ANÁLISIS CUANTITATIVO POR ANÁLISIS DE IMAGEN. na. 2.7.1. Análisis morfométrico computarizado. Se efectuó utilizando el Software de Análisis Morfométrico Computarizado. ici. ImageJ en su versión 1.46, que se encuentra disponible de en la Web del Instituto. de. M. ed. Nacional de Salud (INH) de Estados Unidos. (Ver Fig. 1). te c. a. Figura 1: Máscara del Software ImageJ 1.46 (NIH, USA). Bi b. lio. 2.7.2. Calibración del Software. Para la evaluación macroscópica se utilizó una graduación milimétrica al. costado de casa fotografía. Para la evaluación microscópica se utilizó un portaobjeto calibrador (Motic®),. obteniendo microfotografías con graduación en micras, previo a cada medición se introdujo los valores numéricos de las escalas dentro de la función “Set Scale”.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.8.. EVALUACIÓN DE LA REMODELACIÓN VENTRICULAR. 2.8.1. EVALUACIÓN DE LA HIPERTROFIA VENTRICULAR. na. 2.8.1.1. Relación entre el peso ventricular y el peso corporal. El cociente entre el peso ventricular (PV), en miligramos y el peso corporal. ici. (PC), en gramos, para determinar su índice de masa ventricular (IMV), lo que. ed. permitió valorar la hipertrofia ventricular.. de. M. 2.8.1.2. Remodelación geométrica del ventrículo. Macroscópicamente se utilizó la relación obtenida entre el espesor de la pared. te c. a. del ventrículo izquierdo y el diámetro de la cavidad del ventrículo izquierdo.. lio. 2.8.1.3. Área transversal de los miocitos cardíacos. Bi b. Este parámetro se evaluó en los cortes histológicos del ventrículo izquierdo. teñidos con H-E. Se realizó sobre los miocitos del ventrículo izquierdo obtenidos mediante microfotografías con 400 X de aumento del microscopio y 4x de zoom de la cámara digital. El corte transversal mostró a los miocitos de forma redondeada. Las imágenes se ingresaron a un software morfométrico y se calculó el área de 30 miocitos y se tomó al promedio como el área transversal de los miocitos de cada rata.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.8.2. EVALUACIÓN DE LA FIBROSIS VENTRICULAR. 2.8.2.1. Evaluación de la fibrosis intersticial ventricular. La fibrosis del ventrículo izquierdo se evaluó en secciones teñidas con. na. Tricrómica de Masson y con aumento de 400 X. El ventrículo izquierdo se dividió en 4 secciones, y de cada sección se obtuvieron 4 campos, para analizar un total de 16. ici. campos microscópicos. La fracción de volumen de colágeno (FVC) o porcentaje de. ed. colágeno intersticial (%CI) se obtuvo de la división de todas las áreas de tejido. M. conectivo entre la suma de todas las áreas de colágeno con las áreas de. de. cardiomiocitos, de los 16 campos obtenidos.. a. 2.8.2.2. Evaluación de la fibrosis perivascular ventricular. te c. El colágeno perivascular se determinó dividiendo el área de colágeno de la sección transversal de las arterias coronarias por el área luminal del vaso. Sólo se. lio. analizaron 5-10 vasos intramiocárdicos circulares del ventrículo izquierdo en los. Bi b. cortes teñidos con Tricrómica de Masson.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.9.. ANÁLISIS ESTADÍSTICO. Los datos fueron procesados con el paquete estadístico SPSS 15.0; previa elaboración de la base de datos correspondiente.. na. Para determinar si existe diferencia significativa entre los promedios de los grupos se aplicó el Análisis de Varianza (ANOVA); si existieran diferencias. ici. significativas (p-valor < 0.05), querrá decir que al menos dos comparaciones son. Bi b. lio. te c. a. de. M. Duncan con una significancia de 0.05.. ed. diferentes y para comparar si hay diferencias entre cada grupo se empleó la prueba de. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.. RESULTADOS. 3.1.. SUPERVIVENCIA. Durante el desarrollo del experimento fallecieron 2 ratas en total, 1 rata. na. correspondió al grupo I y sucedió en el día 24; mientras que la otra, correspondió al grupo III y sucedió en el día 30. La causa de la muerte, en ambas, no se determinó.. ici. Las ratas restantes permanecieron sin complicaciones y llegaron al final del. M. RESULTADOS DE LA PRESIÓN ARTERIAL. de. 3.2.. ed. experimento.. Se tomó la presión arterial indirectamente, según el método “tail-cuff”, previa. a. inmovilización de 30 minutos, en la cola de cada uno de los animales por grupos una. te c. vez a la semana, durante las 5 semanas que duró el experimento. Se midió la presión arterial sistólica tres veces, considerándose la presión. lio. sistólica final al promedio de las tres.. Bi b. Los resultados se muestran en el siguiente Gráfico 1:. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ici ed M. Semana 1 105.43 140.29 101.14. Semana 2 120.14 154.43 124.86. de. PRESION ARTERIAL SISTÓLICA (mmHg). 250 225 200 175 150 125 100 75 50 25 0. na. RESULTADOS DE PRESIÓN ARTERIAL POR GRUPOS. Semana 4 121.33 225.57 122.57. Semana 5 118.33 235.14 117.17. te c. a. CONTROLES L-NAME ENALAPRIL + L-NAME. Semana 3 118.14 171.86 130.71. lio. Gráfico 1. Resultados de presión arterial por grupos experimentales. Cada uno de los. Bi b. puntos representa las medias aritméticas de las presiones arteriales sistólicas tomadas cada semana en cada uno de los grupos.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.3.. EVALUACIÓN DE LAS CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS. 3.3.1. EVALUACIÓN PONDERAL. Peso corporal. na. 3.3.1.1.. ici. El procedimiento experimental fue iniciado con ratas que tuvieron un peso. ed. cuyo rango osciló de 160 a 180 gramos; tras la aleatorización en los tres grupos. M. experimentales correspondientes no se encontró diferencias estadísticas entre ellos. Sus pesos al final del experimento se muestran en la Tabla I. Como se trata de ratas. de. aún en crecimiento es de esperarse que todas aumenten de peso; sin embargo, el peso de los animales hipertensos por L-NAME fue relativamente menor comparado con. a. los otros dos grupos.. te c. Cabe resaltar que la cantidad de alimento diario que se administró fue el mínimo necesario para evitar el sobrepeso y obesidad en los animales, con ello se. Bi b. lio. buscó evitar que se agregue la hipertensión espontánea en los grupos experimentales.. 3.3.1.2.. Peso ventricular. Las ratas que sufrieron hipertensión y no recibieron tratamiento presentaron un incremento de su peso ventricular, mostrando un ventrículo más grande (p<0.05 vs Control). El tratamiento con enalapril evitó la hipertrofia ventricular, teniendo un peso semejante al del grupo control, tal y como se puede apreciar en la Figura 2C.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.3.1.3.. Índice de Masa Ventricular (IMV). La relación PC/PV (IMV) presentó un incremento en grupo II (L-NAME, p<0.05 vs Control). El tratamiento con enalapril previno la hipertrofia ventricular por. na. inhibición del aumento del IMV, cuyo valor fue similar al del grupo Control (Ver. Control. L-NAME. Enalapril + L-. ponderables. (n=6). (n=7). NAME (n=6). PC (g). 235 ± 8.9. 216 ± 4.8. 239 ± 12. PV (g). 0.77 ± 0.07. 0.99 ± 0.04. 0.84 ± 0.10. IMV (mg/g). 4.60 ± 0.21*. 3.52 ± 0.33**. de. M. Variables. a. ed. ici. Tabla 1).. Bi b. lio. te c. 3.26 ± 0.29. Tabla I. Evaluación ponderal. PC: peso corporal; PV: peso ventricular; IMV: Índice. de masa ventricular. Las unidades se expresan entre paréntesis. Los valores se expresan como media ± desviación estándar. Prueba de ANOVA y Duncan. *p<0.05 vs. Control, **p<0.05 vs. L-NAME (Ver Anexo 1, Apartado 1,1, Tablas A y B).. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2 mm -------. de. M. ed. ici. A. 2 mm -------. Bi b. lio. te c. a. B. C. 2 mm -------. Figura 2. Fotografías representativas del corazón y sus respectivos ventrículos. (Cortes transversales). A. Grupo Control. B. Grupo L-NAME. C. Grupo Enalapril + L-NAME. Se aprecia un aumento del tamaño y pared ventricular en B. La escala respectiva se indica a la derecha de cada fila.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.3.2. EVALUACIÓN DE LA GEOMETRÍA VENTRICULAR. 3.3.2.1.. Espesor de la pared del ventrículo izquierdo. na. Como se puede apreciar en la figura 2B, existe un notable incremento del espesor de la pared del ventrículo izquierdo en el grupo L-NAME, lo que queda. ici. demostrado en la Tabla 2 (p<0.05 vs control). El espesor de la pared fue. Diámetro de la cavidad del ventrículo izquierdo. de. 3.3.2.2.. M. ed. estadísticamente similar en los grupos Control y Enalapril + L-NAME.. Como se puede observar en la Figura 2C, el diámetro de la cavidad del. Relación Espesor de la pared/Diámetro de la cavidad del ventrículo. lio. 3.3.2.3.. te c. los otros dos grupos.. a. ventrículo izquierdo fue mayor en el grupo Enalapril + L-NAME si se compara con. Bi b. izquierdo. La relación E/DVI del grupo L-NAME fue superior a los demás grupos. (p<0.05 vs control y Enalapril + L-NAME), el tratamiento con Enalapril previno el aumento de la relación E/DVI, cuyo valor fue estadísticamente semejante al grupo control. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Control. Espesor (mm) Diámetro Ventricular Izquierdo (mm) Espesor/Diámetro Ventricular Izquierdo. 2.47 ± 0.18. Enalapril + L-. (n=7). NAME (n=6). 3.29 ± 0.34*. 2.31 ± 0.18. 7.21 ± 0.77. 7.36 ± 0.73. 7.63 ± 0.61. de. M. (n=6). L-NAME. ed. Variables ponderables. 0.45 ± 0.06*. 0.30 ± 0.02**. a. 0.34 ± 0.02. te c. Tabla 2. Evaluación de la geometría ventricular. Los valores se expresan como media ± desviación estándar. Prueba de ANOVA y Duncan. *p<0.05 vs. Control, **p<0.05. Bi b. lio. vs. L-NAME (Ver Anexo 1, Apartado 1,2, Tablas A y B).. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.4.. EVALUACIÓN MICROSCÓPICA DE LAS CARACTERÍSTICAS. HISTOPATOLÓGICAS. 3.4.1. Descripción microscópica cualitativa ventricular. Microscopía de luz. na. Las ratas del grupo Control representaron el grupo de comparación de los otros dos grupos. De modo general, durante el estudio microscópico se apreciaron. ici. alteraciones importantes en los componentes estructurales del tejido cardíaco. ed. (ventrículos) en el grupo sometido a la administración de L-NAME y sin tratamiento; mientras que las ratas que recibieron enalapril mostraron cambios de menor. M. intensidad principalmente en la medición del área transversal de los miocitos. de. cardiacos, demostrándose un efecto protector y atenuador del tratamiento frente a la. a. hipertensión arterial.. te c. 3.4.2. Valoración microscópico-cuantitativa por análisis de imagen de las variables cardíacas. lio. Se realizó una valoración cuantitativa de los diversos parámetros relacionados. Bi b. con el daño vascular: área transversal de los miocitos del ventrículo izquierdo (ATMVI), fibrosis intersticial ventricular (%CI-V) y fibrosis perivascular ventricular (Ver Tabla 3).. En las siguientes tablas y figuras se muestran numérica y gráficamente los valores encontrados durante el análisis; además, se muestran sus correspondientes imágenes al microscopio de luz.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Control. L-NAME. Enalapril + L-. (n=6). (n=7). NAME (n=6). ATM-VI (µm2). 193.4 ± 7.3. 328.7 ± 31.6*. 212.8 ± 8.9**. ici. Fibrosis intersticial ventricular† Fibrosis perivascular ventricular†. na. Variables Cardiacas. 2.17 ± 0.59. 1.90 ± 0.46 1.22 ± 0.35. de. M. 0.81 ± 0.21. 3.07 ± 0.94. ed. 1.36 ± 0.26. Tabla 3. Evaluación de las variables cardiacas microscópicas estudiadas por análisis de imagen. Los valores se expresan como media ± desviación estándar. Prueba de. te c. a. ANOVA y Duncan. *p<0.05 vs. Control, **p<0.05 vs. L-NAME. † Hay diferencias significativas entre los 3 grupos con p<0.05, probabilidad de rechazo (Ver Anexo 1,. Bi b. lio. Apartados 1.3; 1.4; 1.5; Tablas A y B).. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.4.2.1. Área transversal de los miocitos cardíacos. El grupo al cual se le administró sólo L-NAME mostró un incremento en el área de sus cardiomiocitos comparado con el Control (Ver Gráfico 2). El aumento del. na. área del grupo que recibió enalapril fue mínimo y no hubo diferencia estadística significativa comparada con el Control.. ici. Por lo tanto, el tratamiento con Enalapril previno la hipertrofia de los. M. ed. cardiomiocitos al inhibir el incremento de su tamaño (Ver Figura 3).. ATM-VI. de. 350 300 250. a. 200. 100 50. lio. 0. te c. 150. L-NAME. 193.4. 328.7. ENALAPRIL + LNAME 212.8. Bi b. ATM-VI. CONTROL. Gráfica 2. Representación gráfica de valores correspondientes al promedio de las áreas de los cardiomiocitos.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. C. Bi b. lio. te c. a. de. M. A. Figura 3. Fotografías representativas de los miocitos cardíacos en cortes transversales teñidos con Hematoxilina-Eosina. A. Grupo Control. B. Grupo LNAME. C. Grupo Enalapril + L-NAME. Se aprecia un aumento de tamaño de los cardiomiocitos del grupo B.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.4.2.2. Fibrosis intersticial ventricular. El grupo L-NAME presentó un % CI ventricular o fracción de colágeno miocárdico (FCV) casi 2.5 veces superior al control, mientras el valor alcanzado por. na. el grupo que recibió enalapril fue aproximadamente el 50% más que el control (Ver Gráfico 3); habiendo diferencia estadística al comparar entre grupos, incluso entre el. M. ed. ici. grupo Control y el grupo que recibió Enalapril (Ver Tabla 3).. 3.5 3. a. 2.5. de. FIBROSIS INTERSTICIAL VENTRICULAR (%). te c. 2 1.5. 1. lio. 0.5. Bi b. 0. FIBROSIS INTERSTICIAL VENTRICULAR (%). CONTROL. L-NAME. ENALAPRIL + LNAME. 1.36. 3.07. 1.9. Gráfico 3. Representación gráfica del porcentaje de fibrosis intersticial ventricular de los grupos experimentales.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. C. Bi b. lio. te c. a. de. M. A. Figura 4. Fotografías representativas de la pared de ventrículo izquierdo teñido con Tricrómica de Masson. A. Grupo Control. B. Grupo L-NAME. C. Grupo Enalapril + L-NAME. Las áreas de fibrosis se aprecian se color azul, ligeramente aumentado en el grupo B. Las fibras se disponen como haces que surcan el intersticio.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 3.4.2.3. Fibrosis perivascular ventricular. La fibrosis perivascular de la arterias coronarias intramiocárdicas fue 3 veces aproximadamente superior comparado con el grupo control, mientras que el grupo. na. que recibió enalapril fue sólo 50% más con respecto al grupo control (Ver Gráfico 4). Aunque estadísticamente se encontró diferencia estadística entre todos los grupo,. ed. ici. incluido el grupo Control y grupo Enalapril + L-NAME (Ver Tabla 3).. M. FIBROSIS PERIVASCULAR VENTRICULAR (%). de. 2.5 2. te c. a. 1.5 1. Bi b. lio. 0.5 0. FIBROSIS PERIVASCULAR VENTRICULAR (%). CONTROL. L-NAME. ENALAPRIL + L-NAME. 0.81. 2.17. 1.22. Gráfica 4. Representación gráfica de la valoración de la fibrosis perivascular ventricular por grupos experimentales.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. B. C. Bi b. lio. te c. a. de. M. A. Figura 5. Fotografías representativas de la pared de ventrículo izquierdo teñido con Tricrómica de Masson. A. Grupo Control. B. Grupo L-NAME. C. Grupo Enalapril + L-NAME. Las áreas de fibrosis se aprecian se color azul, ligeramente aumentado en el grupo B. Las fibras se disponen en torno a los vasos intramiocárdicos.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.