Validacion del metodo analitico para la determinacion de amilasa en el laboratorio quintanilla s r l

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. O. Q. UI M. IC A. ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA. BI. VALIDACION DEL METODO ANALITICO PARA LA. IA. Y. DETERMINACION DE AMILASA EN EL LABORATORIO. RM. AC. QUINTANILLA S.R.L.. FA. INFORME DE INTERNADO. CA. DE. PARA OPTAR EL:. TÍTULO. Br. PERALTA TINGAL ELENA ELIZABETH. BI BL. AUTOR:. IO. TE. DE QUÍMICO FARMACÉUTICO. ASESOR: Dr. Q.F. PEDRO MARCELO ALVA PLASENCIA. TRUJILLO – PERU 2009. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios Porque siempre me guíe e ilumina, agradezco infinitamente por darme el coraje para seguir adelante.. UI M. IC A. Te llevo siempre en mi vida y en todo momento…. BI. O. Q. A mi mamita Lidia. Y. Por su amor incondicional. AC. IA. Me enseñaste el valor de la verdad y confiaste en mí. FA. RM. Gracias por tu apoyo, escuchar tus palabras me llenaron de. A mi papito Segundo. BI BL. IO. TE. CA. DE. coraje para seguir adelante. Te quiero mucho. Por su apoyo incondicional Por hacerme sentir fuerte para cumplir mis metas Gracias de todo corazón, espero nunca defraudarte y ser motivo de orgullo. Te quiero mucho. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A mi esposo Oliverio Por ser mi amigo y compañero de vida Gracias por tu apoyo constante e incondicional, por creer en mí. IC A. y hacerme sentir importante, por tu cariño, paciencia y. Q. UI M. comprensión, sé que siempre estaremos juntos para apoyarnos.. RM. AC. IA. Y. BI. O. Te amo. DE. FA. A mi pequeñita Milagros. CA. Por ser la razón de mí existir. IO. TE. Tú llenaste mi vida de dicha e ilusiones. Gracias por ser tan. BI BL. pequeña y entenderme, por tu cariño, tus abrazos y tu alegría. Mi vida no sería jamás la misma sin ti. Le ruego a Dios siempre tengas salud y felicidad. Te amo. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. JURADO DICTAMINADOR. (Presidente). UI M. IC A. Mg. Q.F. Nelly Jave M.. (Miembro). Y. BI. O. Q. Mg. Q.F. Jesús Gallardo M.. (Miembro). BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Dr. Q.F. Pedro Alva P.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores miembros del jurado:. Dando cumplimiento a lo establecido por el Reglamento de Grados y. IC A. Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional. Q. UI M. de Trujillo, someto a vuestra consideración y elevado criterio profesional el. BI. O. presente informe internado intitulado “Validación del método analítico para. IA. Y. la determinación de amilasa, en el Laboratorio Quintanilla S.R.L”., para. RM. AC. optar el Grado de QUÍMICO FARMACEÚTICO.. FA. Es propicia esta oportunidad para manifestar mi más sincero. DE. reconocimiento a nuestra Alma mater y toda su plana docente que, con su. TE. CA. capacidad y voluntad, contribuyen con mi formación profesional.. IO. Dejo a vuestro criterio señores miembros del jurado dictaminador la. BI BL. calificación del presente Informe de Internado.. Trujillo, Julio del 2009.. Peralta Tingal Elena Elizabeth. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. La validación del método analítico para la determinación de Amilasa se realizó en el. IC A. Laboratorio Quintanilla S.R.L – Clínica Peruano Americana. Antes de dar inicio a la. UI M. validación se realizó la calificación del Fotómetro BPC BioSed, que incluye: a). Q. Calificación de la instalación (IQ), b) Calificación Operacional (OQ) y c) Calificación. BI. O. de la Performance (PQ). Los parámetros validados fueron: Linealidad, Repetitividad,. AC. IA. Y. Precisión intermedia y exactitud, en 2 niveles; parámetros que se deben realizar. RM. para una validación Tipo I, según la USP XXII. De los parámetros evaluados. FA. estadísticamente, se comprobó que no existe diferencia significativa en ambos. CA. DE. niveles, así se puede utilizar 500 ul reactivo, con 10 ul de muestra bajo las mismas. TE. condiciones; es lineal nivel 1 y 2 (> 0.990); Preciso nivel 1 y 2 (C.V < 4.0 %); exacto. BI BL. IO. nivel 1 y 2 (texp < ttab).. Palabras clave: Linealidad, Precisión, Exactitud. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The validation of the analytical method for the determination of amylase was made. IC A. in the Quintanilla Laboratory S.R.L. yields of the American Peruvian Clinic. Before. UI M. beginning the validation, photometer BPC BioSed qualification was made, it. O. Q. includes: a) qualification of the installation (IQ), b) operational qualification (OQ) and. Y. BI. c) performance qualification (PQ). The validated parameters that must be made for. AC. IA. a validation type I, according to USP XXII. From the statistically parameters. RM. evaluated, it was verified that significant difference in both levels does not exist,. DE. FA. That way 500 ul can be used reactive, with 10 sample ul under the same. CA. conditions; Level is linear 1 and 2 ( > 0,990 ); Precise level 1 and 2 ( C.V < 4,0 % );. BI BL. IO. TE. Exact level 1 and 2 ( texp < ttab ).. Key words: Linearity, Precision, Exactness. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. PAGINAS PRELIMINARES Dedicatoria………………………………………………………………………………….…… i. IC A. Jurado dictaminador …………………………………………………………….………… iii. Q. UI M. Presentación…………………………………………………………………………………… iv. BI. O. Resumen……………………………………………………………………………….………… v. RM. AC. IA. Y. Abstract………………………………………………………………………………..………… vi. DE. FA. INTRODUCCIÓN………………………………………………………………......……………1. CA. MATERIAL Y MÉTODO…………………...…………………………………………..………5. IO. TE. RESULTADOS ……………………….…………………………………………………..……19. BI BL. DISCUSIÓN……………………………………………………………........…………...……25 CONCLUSIONES……….…………………………………………………….……….………28 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………….………….…………….…29 ANEXOS……………………………………………………………………..…………….….…32. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. I. INTRODUCCIÓN. En el mundo actual donde el interés de las industrias es mantener controladas todas las variables que intervienen en los procesos productivos, toman particular importancia los procesos de validación como una herramienta importante para asegurar la trazabilidad de cada una de las variables que. IC A. intervienen en un proceso 7,14.. UI M. Para cualquier empresa es de suma importancia contar con sistemas que. O. Q. demuestren que el producto o servicio final es de calidad. Esto toma una. BI. relevancia aún mayor en un laboratorio de análisis clínicos, en donde deben. IA. Y. contarse con los estándares de calidad adecuados, de lo contrario pudiese tener. AC. consecuencias que perjudiquen al paciente. Debido a esto, en los últimos años ha. RM. tomado fuerza el concepto de “Aseguramiento de la Calidad”, que no es otra cosa. DE. FA. que demostrar que lo que declara de calidad, efectivamente lo posea 11,15.. CA. La validación es la herramienta que nos da la certeza de tener un proceso. TE. más eficiente y con menor ocurrencia de reprocesos y pérdidas. La validación es,. BI BL. IO. por lo tanto, un procedimiento claramente diseñado para establecer en forma documentada que un sistema, un equipo, un proceso de producción o una metodología analítica de control de un producto, cumple con los parámetros de calidad especificados 2,3. Para implementar un plan de validación es necesario un trabajo en conjunto de las distintas áreas de un laboratorio, además, la colaboración y capacitación del personal encargado. Por esta razón, el personal debe estar debidamente entrenado y consciente que su trabajo es una gran responsabilidad 6,11.. -1Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. El hecho de contar con los procesos validados no sólo significa para un laboratorio tener procesos de calidad que le permitan garantizar el proceso, sino también significa un valioso ahorro en tiempo y dinero, ya que se minimizan los riesgos de errores generados durante el proceso 1,3. Durante la evaluación de la competencia técnica de los laboratorios clínicos, la demostración de la validación y verificación de los procedimientos de examen. IC A. requiere la aplicación de criterios técnicos uniformes y consistentes 4.. UI M. La calidad de los servicios se apoya en la confiabilidad y uniformidad de las. IA. Y. BI. evaluación de la incertidumbre de las mismas 10.. O. Q. mediciones, cuyo fundamento está establecido en la trazabilidad y en la. AC. Todo lo que se puede medir se puede controlar. Las mediciones recopilan. RM. datos cuyas mediciones generan datos cuya evaluación constituye una de las. FA. funciones más importantes de un sistema de calidad que pueden usarse. DE. efectivamente para el control de procesos. Entre otros, la medición sistemática. CA. puede tener los siguientes propósitos: a) Verificar la conformidad frente a los. IO. TE. requisitos (eficacia), b) Determinar la eficiencia de un proceso (competencia), c). BI BL. Suministrar datos con los que se hará un análisis de base (validación) 5. Las amilasas son enzimas que degradan moléculas hidrocarbonadas complejas en componentes más pequeños. La amilasa es producida por el páncreas exócrino y las glándulas salivales para ayudar a digerir el almidón. También se ha detectado la presencia de amilasa en hígado, trompas de Falopio, músculo estriado, tejido adiposo, y leche humana. La determinación del nivel de amilasa sérica se utiliza fundamentalmente para hacer el diagnóstico de pancreatitis aguda. En este caso, se observa casi siempre un aumento en las. -2Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. primeras doce horas, alcanzándose el máximo después de veinte a treinta horas de producido el ataque. El aumento de la amilasa urinaria esta retardado unas seis a diez horas frente a la amilasa sérica. La amilasa sérica también esta aumentada en: afecciones que producen bloqueo de la secreción salival como parotiditis y paperas, úlcera péptica perforada, obstrucción intestinal, pancreatitis crónica, carcinoma de cabeza de páncreas, colecistitis y apendicitis 18.. IC A. Para desarrollar la validación de la amilasa se aplican ciertos parámetros:. UI M. Linealidad, precisión y exactitud; estos parámetros se aplican sobre el analito. Q. para determinar si el método cumple con las especificaciones y los resultados. BI. O. que se obtengan sean confiables y puedan constituir un apoyo diagnóstico a la. AC. IA. Y. salud de los pacientes. RM. La exactitud expresa el grado de proximidad entre el valor que es aceptado. FA. convenientemente como el valor verdadero, valor nominal, teórico o un valor de. DE. referencia y el valor encontrado experimentalmente. Es la capacidad del método. CA. analítico para proporcionar resultados lo más cercanos posibles al valor teórico o. TE. nominal. Matemáticamente se expresa como el valor numérico del error. BI BL. IO. sistemático (diferencia entre el valor medio hallado y el verdadero) o bien como el error relativo porcentual. La Linealidad mide Capacidad del método para proporcionar resultados que son directamente o por medio de transformaciones matemáticas proporcionales a la concentración del analito en la muestra dentro de un rango establecido La Precisión mide la capacidad de un método para proporcionar resultados próximos entre sí, grado de dispersión de los resultados analíticos respecto a su valor medio. Se puede estudiar a 2 niveles: La Repetitividad evalúa la precisión. -3Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. del método efectuando una serie de análisis sobre la misma muestra en las mismas condiciones operativas. (aparatos, reactivos, analistas) en un mismo. laboratorio y un periodo de tiempo cero; la Precisión intermedia evalúa la precisión del método frente a las variaciones internas del laboratorio (analito, día, instrumento, etc). La validación demuestra que, siguiendo las actividades de un proceso tal y. IC A. cómo están descritas, se puede obtener un producto con los requisitos. UI M. especificados, ya que cada una de las etapas del proceso es diseñada y. Q. controlada para tener la máxima seguridad que el producto cumple con las. Y. BI. O. especificaciones 9,15.. AC. IA. Los resultados obtenidos en el presente informe demostraron que el método. RM. es lineal en el intervalo de las concentraciones de 50 % hasta el 150 % de la. FA. muestra; preciso porque cumple la repetitividad (Nivel 1: C.V 2.0384 % y Nivel 2:. DE. 0.8572) y precisión intermedia (Nivel 1: C.V 1.5780 %, Nivel 2: 0.7260 %); exacto. CA. porque no hay diferencia significativa entre la recuperación media (Nivel 1:. IO. TE. 100.53 % , Nivel 2: 100.01) y el 100 % teórico.. BI BL. Por lo tanto, al determinar los parámetros de validación, concluimos en dar como validado al método analítico para la determinación de amilasa, en el laboratorio quintanilla S.R.L.. -4Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. II. MATERIAL Y MÉTODOS 1. MATERIAL 1.1 MUESTRA  Standartrol Wiener 2 niveles, a partir del cual se obtuvieron las concentraciones deseadas.. IC A. 1.2 MATERIAL DE LABORATORIO. UI M.  Baño María. Y. BI.  Micropipetas de 10 – 100 uL “Boeco”. O. Q.  Pipetas volumétricas de 5 mL. IA.  Puntas descartables. RM. AC.  Cronómetro. DE.  Tubos de vidrio. FA.  Calculadora. IO. 1.3 EQUIPOS. TE. CA.  Guantes descartables. BI BL. Los equipos fueron calibrados y verificados.  Fotómetro automático BPC Biosed Marca: “PRIME” Calificación de la instalación: Enero 2009 Calificación de la operación: Enero 2009 Calificación de la Performance: Febrero del 2009. -5Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 1.4 REACTIVOS  Amilasa Nombre: Amilasa 405 A Fabricante: Wiener Lab (Argentina) Lote: 0804007252 Vencimiento: 08/2009. UI M. Composición. IC A. Contenido del Kit de muestras: 3 x 10 mL. Q. Sol. Contenida CNP – G3 2.25 mmol/l, acetato de calcio 6 mmol/l,. BI. O. NaCl 70 mmol/l, tiocianato de potasio 90 mmol/L y Buffer MES pH 6,. AC. IA. Y. mmol/l. RM.  Standartrol 2 niveles. FA. Nombre: Standartrol 2 niveles. DE. Fabricante: Wiener Lab (Argentina). CA. Lote: 0801002740. TE. Vencimiento: 05/2009. BI BL. IO. Contenido del Kit de muestras: 3 x 5 mL Composición Standartrol S – E Nivel 1 (Normal): Suero homogeneizado y liofilizado. en viales para 5 mL con concentraciones normales o en los niveles de decisiones médicas de metabolitos y enzimas Standartrol S - E Nivel 2 (Patológico): Suero homogeneizado y liofilizado en viales para 5 mL con concentraciones patológicas o en los niveles de decisiones médicas de metabolitos y enzimas. -6Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2. MÉTODO 2.1. DESARRROLLO DE PARÁMETROS EVALUADOS PARA LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO Para validación el método analítico utilizado para la determinación de amilasa, se tomaron los parámetros adecuados según criterios de validación que aparecen reportados en la USP. IC A. Según la USP XXII, los métodos analíticos se clasifican en varias categorías. UI M. para su validación. Los métodos que son objeto de estudio en el presente. Q. trabajo pertenecen a la categoría I y se clasifican como “Métodos. BI. O. cuantitativos para la determinación de un analito”. Los parámetros de. Y. validación que se deben considerar varían según la literatura consultada. AC. IA. para este tipo de métodos debe evaluarse: Linealidad, precisión y. RM. exactitud.. FA. A. Linealidad. DE. Para evaluar la linealidad se procesaron. 3 concentraciones. CA. conocidas (50 %, 100 %, 150 %) del standartrol – 2 niveles, cada. IO. TE. uno por triplicado y por un mismo analista.. BI BL. B. Precisión Para determinar la Precisión del método, se tomaron en cuanta 2 parámetro: Repetibilidad y Precisión intermedia, que a continuación se detalla: . Repetitividad Se realizaron un número de 10 determinaciones del standartrol en ambos niveles por un mismo analista, el mismo. -7Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. día, con los mismos reactivos y los mismos instrumentos de medición. Precisión intermedia. . Se realizaron 10 determinaciones del standartrol en ambos niveles, por 2 analistas diferentes, en días diferentes, pero con los mismos reactivos y los mismos instrumentos de medición.. IC A. C. Exactitud. UI M. Se evaluó, tomando 3 concentraciones conocidas en ambos niveles,. O. Q. se procedió según técnica y cada proceso por triplicado. IA. AC. A. Fundamento del Método:. Y. BI. 2.2. PROCEDIMIENTO. RM. La α-amilasa hidroliza el sustrato definido 2 – Cloro – p - nitrofenil. FA. – α – D - maltotriósido (CNP), formándose 2 – cloro – nitrofenil – α. DE. – D - maltósido (CNP –G2), maltotriosGa (G3) y glucosa. El CNP. CA. absorbe a 405 nm y a la velocidad de aparición del color es. TE. directamente proporcional a la actividad enzimática.. BI BL. IO. El uso de este sustrato definido, sustancia de estructura y peso molecular conocido, posibilita la expresión de los resultados en U/I y no requiere enzimas auxiliares. Cada una de las determinaciones realizadas fue efectuada empleado la técnica descrita en el inserto del Kit de reactivos; el cual se describe a continuación: -. Preincubar 1 mL de Reactivo por 3 min. – Baño María–37º C. -. Luego agregar 20 uL de muestra, agitar y mezclar bien. -. Leer inmediatamente a 405 nm. -8Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.3. CALIFICACIÓN INSTRUMENTAL DEL FOTÓMETRO AUTOMÁTICO “PRIME” La calibración del equipo con el cual se desarrolló la validación del método analítico, es comprobar formal, sistemática y documentadamente de que el equipo es el adecuado para los fines previstos, de tal forma se procede a la calibración del equipo. La validación del Fotómetro automático BPC Biosed “PRIME” es la. IC A. verificación del rendimiento del instrumento elegido para la técnica. UI M. analítica en particular, así como el software y el hardware que lo controla.. O. Q. A. Calificación de la instalación (IQ). Y. BI. Es la verificación documentada de que todos los aspectos claves de. AC. IA. la instalación están de acuerdo con las recomendaciones del. RM. fabricante y corresponden a las especificaciones aprobadas en el. FA. diseño. DE. B. Calificación Operacional: (OQ) de que los equipos funcionan en la forma. CA. Es la verificación. TE. esperada y son capaces de operar satisfactoriamente; sobre todo. BI BL. IO. en el rango de los parámetros operacionales para los que han sido diseñados. Se realiza por un técnico calificado (los parámetros sobre los problemas y posibles soluciones, se pueden observar en el anexo II del presente trabajo C. Calificación de la performance (PQ) Se realiza para demostrar la reproducibilidad del proceso bajo condiciones normales de operación y bajo condiciones limites de operación. Se verifica por el usuario, trabajando con estándares certificados.. -9Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.4. ANÁLISIS ESTADÍSTICO Para asegurar que los diferentes procedimientos de validación se encuentran dentro de los límites establecidos. 2.4.1 EVALUACION ESTADÍSTICA DE LA LINEALIDAD 2.4.1.1. Cálculos de los parámetros de Regresión a. Ecuación de la Recta de Regresión. IC A. Con los datos obtenidos en este ensayo se procedió a. UI M. elaborar la recta de regresión, la cual tuvo la siguiente. O. Q. fórmula:. Y. BI. y  bx  a. AC. IA. Donde:. RM. y  Lecturas obtenidas a partir de Standartro l 2 - niveles x  Cocentraci ón de las muestras utilizadas. DE. FA. b  Pendiente de la recta de regresión a  Intercepto de la recta de regresión con el eje de ordenadas. BI BL. IO. TE. CA. b. Fórmula empleada para calcular la pendiente o coeficiente de regresión (b) La. pendiente. o. coeficiente. de. regresión. fue. determinada empleando la siguiente fórmula:. x y   n b  x  x  xy. 2. 2. n. Donde: x  Concentrac ión de las muestras utilizadas y  Lecturas obtenidas n  Número de determinac iones. - 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. c. Fórmula empleada para el cálculo del intercepto (a):. y  b x  a n. d. Fórmula empleada para el Calculo del coeficiente de Correlación (r):. 2. 2. . n.     .  y  y   n IC A. x. n. 2. UI M.     .  x y 2.     . BI. O. Q. r.  xy  x. IA. Y. e. Fórmula empleada para el Calculo del coeficiente. r 2  (r ) 2. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. Determinación (r2). - 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.4.1.2. Cálculos efectuados en el test de linealidad de la Pendiente b a. Cálculo del Test de Regresión (t de Student) para el Coeficiente de Correlación Se calcula el valor de regresión (Test de regresión) con n – 2 grados de libertad y un intervalo de confianza de. IC A. 95 % (α=0.05), luego se compara con el valor de la ttabla. UI M. (t tabulado) para el nivel de confianza requerido. r (n  2) (1  r 2 ). Y. BI. O. Q. t regresion . AC. IA. Donde:. FA. RM. n : Número de determinac iones r : Coeficient e de Correlació n 2. BI BL. IO. TE. CA. DE. b. Cálculo del valor de la varianza residual( ( S x , y ). S x2, y. y . 2. a.  y  b xy. n2. Donde: b  Pendiente de la recta de regresión a  Intercepto con el eje de abcisas n  nº de detremiaci ones. 2. c. Cálculo del valor de la varianza de la pendiente b ( Sb ). S b2. S x2, y. . x. 2. . (.  x). 2. n. - 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. d. Cálculo del valor de la desviación estándar de la pendiente b (Sb) Se obtuvo a partir del valor de la varianza de la pendiente b. Sb . IC A. S b2. Q. Confianza de la pendiente:. UI M. e. Fórmula empleada para determinar el Intervalo de. BI. O. I .C  b  tsb. IA. Y. Donde:. AC. b : Pendiente de la recta de regresión. RM. t : t tab para un nivel de significan cia del 95 % y n - 2 grados de libertad. FA. S b : Desviación estándar de la pendiente b. DE. f. Cálculo del valor de texp. TE. CA. Se determinó empleando la siguiente fórmula. BI BL. IO. t exp . b Sb. Donde: b : Pendiente de la recta de regresión S b : Desviación estándar de la pendiente b. - 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.4.1.3. Cálculos efectuados en el test de Proporcionalidad a. Cálculo de la varianza del Término Independiente ( S a2 ):. . S a2. Sb2 ..  x2 n. b. Fórmula empleada para determinar la Desviación. Sa2. UI M. Sa . IC A. Estándar del Término independiente:. O. Q. c. Fórmula empleada para determinar el Intervalo de. BI. Confianza del Intercepto a. AC. IA. Y. Int .Conf  a  tsb Donde:. RM. b : Pendiente de la recta de regresión. FA. t : t tab para un nivel de significan cia del 95 % y n - 2 grados de libertad. CA. DE. Sb : Desviación estándar de la pendiente b. TE. El método será lineal si texp es mayor al ttab con el 95 % de. BI BL. IO. confianza y n-2 grados de libertad y el coeficiente de correlación (r) es igual o mayor que 0.990 2.. - 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.4.2 EVALUACIÓN ESTADÍSTICA DE LA PRECISIÓN 2.2.4.1. Repetitividad a. Determinación de la media Se utilizó la siguiente fórmula: n. x. . xi. i 1. n. Donde:. IC A. X  Media. UI M. n  Numero de determinac iones. Q. b. Determinación de la Desviación Estándar (s). BI. O. Se utilizó la siguiente fórmula:.  x. IA. Y. n. x. . 2. i 1. n 1. RM. AC. s. i. FA. c. Determinación del coeficiente de variación. BI BL. IO. TE. CA. DE. Se utilizó la fórmula descrita a continuación. CV . s *100 x. Donde: S  Desviación estándar X  Media. d. Determinación del Porcentaje de Recuperación Se utilizó la fórmula descrita a continuación. %R . CC.Práctica x100 CC.Teórica. Donde: CC : Concentrac ión. - 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.2.4.2. Precisión Intermedia Los valores de concentraciones prácticas, de la media, de la desviación estándar y coeficiente de variación se obtuvieron de manera idéntica que en el ensayo de repetibilidad. a. Test F (Snedecor). IC A. Este test se realizó con el objetivo de comparar la. UI M. semejanza del comportamiento entre los 2 analistas a. Q. través de su varianza obtenida por el tratamiento de los. Y. BI. O. datos individuales. AC. IA. Fcalculado . 2 S analista 2 2 S analista 1. RM. Si F calculado < F crítico (8; 0.05) no hay diferencia. FA. significativa entre las varianzas obtenidas a través de. CA. DE. los 2 analistas. IO. TE. El método será preciso si en los ensayos de repetibilidad y. BI BL. Precisión intermedia se obtienen coeficientes de variación menores al 5 % 2.. - 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.2.4.3. Evaluación estadística de repetitividad del método en la reducción de reactivo (de 1 mL a 500 mL) a. Varianza (S2). s. 2. ( x  x)  . 2. i. n 1. Donde: S2 : Varianza x i : Valor uniario de cada prueba. IC A. x : Valor promedio de cada prueba. UI M. n : nº de determinac iones del grupo. Q. b. Valores de Varianza Combinada ( s x2, y ). BI. O. (n  1) S12  (n2  1) S 22  n1  n2  2. IA. Y. s x2, y. AC. Donde: S12. : Varianza Combinada del primer grupo : Varianza Combinada del segundo grupo. FA. S22. RM. S2x, y : Varianza combinada. : nº de determinac iones (1º grupo ). n2. : nº de determinac iones (2º grupo). CA. DE. n1. TE. c. Determinación de la prueba “t”. BI BL. IO. t. x1  x 2 S x2, y n1. . S x2, y n2. Donde: x 1 , x 2 : Valor uniario de cada prueba S 2x,y : Varianza combinada n 1 : Tamaño del primer grupo n 2 : Tamaño del segundo grupo. - 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 2.4.3 EVALUACION ESTADÍSTICA DE LA EXACTITUD 2.4.3.1 Cálculo del % de recuperación En la determinación de la exactitud del método los valores de las concentraciones se expresaron como % de recuperación de la siguiente forma:. CC.Práctica x100 CC.Teórica.  x n. x. . n 1. Y. Desviación Standar Media (%) Recuperaci ón. x100. RM. AC. IA. C.V . BI. O. Q. s. i 1. 2. UI M. i. 2. . IC A. %R . FA. 2.4.3.2 Cálculos efectuados en la aplicación del t de Student. DE. Para la aplicación de esta prueba fue necesaria la. CA. determinación del valor de texp mediante la siguiente. BI BL. IO. TE. fórmula:. t exp . 100  % R. n. CV. Donde: % R  Valor del promedio de los % de Recuperaci ón n  nº de determinac iones CV  Coeficient e de variación. El método será exacto si el valor de ttab es mayor que el texp, al 95% de confianza y n-2 grados de libertad en la aplicación del Test de Student 2.. - 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. III. RESULTADOS. - 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. TABLA 1: Evaluación estadística de repetitividad del método en la reducción de reactivo, para el método utilizado para la determinación de la Amilasa RESULTADO NIVEL 1. NIVEL 2. 2,137. 1,173. ESPECIFICACIONES.  T DE STUDENT COMBINADA). < 2,228*. IC A. (VARIANZA. BI. O. Q. UI M. * Tabla de t de Student para: g/l = n-2 y p= 0.005. Y. TABLA 2:. AC. IA. Valores de los parámetros de regresión lineal obtenidos en el ensayo de. RESULTADO NIVEL 2. ESPECIFICACIONES. y = 3,1467 x + 115,79. ---------------. 0,6123. 3,1467. ---------------. BI BL. RM. Linealidad del método utilizado para la determinación de la Amilasa. 10,912. 115,79. ---------------. CORRELACIÓN (r). 0,997. 0,998. > 0,990*. 0,994. 0,996. > 0,990*. FA. NIVEL 1. DE.  ECUACIÓN DE LA. y = 0,6123 x + 10,912. TE. IO.  PENDIENTE B. CA. RECTA.  INTERCEPTO A.  COEFICIENTE DE.  COEFICIENTE DE DETERMINACIÓN (r2). * Tabla de Significación de r para: g/l= n-2 y p=0.05. - 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. TABLA 3: Tratamiento estadístico de los parámetros del Test de Linealidad de la pendiente (b), obtenidos en el ensayo de Linealidad del método utilizado. para la. determinación de la Amilasa RESULTADO LINEALIDAD DE LA PENDIENTE  COEFICIENTE DE VARIACIÓN  TEST DE REGRESIÓN (T DE STUDENT)  INTERVALO DE CONFIANZA DE LA. NIVEL 2. ESPECIFICACIONES. 1,3787 %. 0,4758 %. <5%. 34,0539. 43,4153. - 0,76 - 1,98. 0,59 - 5,70. BI. PENDIENTE. NIVEL 1. IC A. DE. UI M. TEST. Q. DEL. O. PARÁMETROS. Y.  INTERVALO DE CONFIANZA DEL. IA. 10.62 - 11.21. 116.11. --------. --------. RM. AC. INTERCEPTO. 115.48 –. > 2,3646*. FA. * Tabla de t de Student para: g/l = n-2 y p= 0.05. DE. TABLA 4:. CA. Tratamiento estadístico de los valores obtenidos. en el ensayo de Precisión. IO. BI BL. de la Amilasa. TE. (Repetibiliad y Precisión intermedia) del método utilizado para la determinación. PARÁMETROS DE REGRESIÓN  REPETIBILIDAD:. RESULTADO NIVEL 1. NIVEL 2. ESPECIFICACIONES. 2,0384 %. 0,8572 %. <5%. 1,5780 %. 0,7260 %. <5%. 0,2165. 0,4939. < 3.35*.  COEF. VARIACIÓN  PRECISIÓN INTERMEDIA:  COEF. VARIACIÓN  TEST F (SNEDECOR). * Tabla de la distribución F de Snedecor. para: g/l = n-2 y p= 0.05. - 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. TABLA 5: Tratamiento estadístico de los valores obtenidos en el ensayo de Exactitud del método utilizado para la determinación de la Amilasa RESULTADO PARÁMETROS DE REGRESIÓN. NIVEL 1. NIVEL 2. 100,53%. 100,01%. ESPECIFICACIONES.  PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN. 98 % - 102 %. UI M.  REPETIBILIDAD:. IC A. PARÁMETROS DE REGRESIÓN. Q. COEF. VARIACIÓN PORCENTAJE DE. BI. O. RECUPERACIÓN. Y.  PORCENTAJE DE RECUPERACIÓN. 1,3795 %. AC. IA.  COEF. VARIACIÓN. 1.1526. <5%. 0.0068. < 2.306*. FA. RM.  T DE STUDENT. 0,4880 %. BI BL. IO. TE. CA. DE. * Tabla de t de Student para: g/l = n-2 y p= 0.05. - 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. IV. DISCUSION La validación de un método analítico se mide con los parámetros que sean evaluados para el proceso; estos serán dependientes directos de la naturaleza del método y las especificaciones con las que se debe cumplir. En el método validado en el presente trabajo, esta clasificado como un método de determinación. IC A. cuantitativo, a los que corresponden evaluar Linealidad, Precisión, exactitud y. UI M. sensibilidad; sin embargo las características señaladas como requeridas puedan. O. Q. ser no necesarias y viceversa; así tenemos que la sensibilidad es un parámetro. Y. BI. del análisis cuantitativo para niveles bajos de compuestos, es decir se emplea. AC. IA. cuando se realizan determinaciones de analitos a nivel de trazas, no siendo este. RM. el caso no se realizó la aplicación en el proceso 5,13.. FA. En la tabla 1 se presentan los resultados obtenidos de la comparación entre. DE. el uso de 1000 uL y 500 uL de reactivo ; se realizaron 10 determinaciones con. CA. cada uno : 1 mL de Reactivo frente a 20 uL de muestra y 500 uL de Reactivo. IO. TE. frente a 10 uL de muestra, bajo las mismas condiciones de reacción indicadas en. BI BL. el inserto y para ambos niveles (normal y patológico); en la aplicación de la prueba t de student, se obtuvo 2,137 y 1,173 nivel 1 y 2 respectivamente, siendo estos menores al valor crítico: 2,228 (0.05; 10); por tanto, no existe diferencia significativa y se puede aplicar la reducción sin afectar el resultado final 14. En la tabla 2, se muestran los parámetros que evalúan la linealidad del método; para ello se analizaron las siguientes concentraciones: 50 %, 100 % y 150 %, luego de efectuar los cálculos se determinó que el método presenta la capacidad de brindar resultados linealmente proporcionales a la concentración - 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. del analito en estudio. El coeficiente. de correlación, nos indica el grado de. relación entre la concentración (x) y la respuesta (y), se obtuvo un coeficiente de correlación de 0.997 y 0.998 nivel 1 y 2 respectivamente, y tenemos que en las tablas de r para n-2 gl (8; 0.005) es 0.990, los valores obtenidos aceptan una correlación positiva con una probabilidad superior al 95 %. La pendiente b o coeficiente de regresión está relacionada con la sensibilidad del método, de tal. IC A. forma que a mayor pendiente mayor sensibilidad (respuesta del analito frente a. UI M. los cambios de la concentración del analito); esto se observa en los gráficos 1 y. Q. 2.8, 12.. BI. O. En la tabla 3, tenemos la aplicación del test de linealidad de la pendiente, se. IA. Y. obtuvo un texp de 34,053 y 43,415 nivel 1 y 2 respectivamente, que es mayor al. AC. ttabla(n - 2 gl) que es de 2,3646 con un nivel de confianza del 95 %, este valor es. RM. tan alto que indica que la probabilidad de que la pendiente “b” sea diferente de. FA. cero es muy elevada. También se determinó que cumplen con las. DE. especificaciones del coeficiente de variación: 1,3787 % y 0,4758 % nivel 1 y 2;. CA. deben ser < 5 %. Sin embargo no son suficientes para demostrar la linealidad del. IO. TE. método, sino que además se demostró mediante el empleo de un Test de. BI BL. linealidad, siendo uno de los más confiables la prueba t de student, utilizada para determinar la significancia estadística de la varianza de la pendiente b, la aplicación demostró que cumple con el criterio de linealidad, pues el valor del texp (34,0539 y 43,4153 nivel 1 y 2 respectivamente, es mayor al ttab (2.228). En la tabla 4, para determinar la precisión del método, se evaluó la repetibilidad, que se define como el grado de concordancia entre los valores de una serie repetida de ensayos analíticos efectuados sobre una muestra homogénea por un mismo analista bajo la mismas condiciones, es decir, la - 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. capacidad de un método para dar resultados semejantes cuando se aplica a una muestra; para ello se efectuaron 10 determinaciones para ambos niveles (normal y patológico), la precisión se expresa por la desviación Standard pero la mejor forma de medirla es mediante el coeficiente de variación, se obtuvo 2,0384 % y 0,8572 nivel 1 y 2, respectivamente, lo cual nos indica que cumple con el criterio de precisión (CV <5 %). En la determinación de la Precisión intermedia se. IC A. efectuaron 10 mediciones similares a los efectuados para la repetibilidad (antes. UI M. descritas), definida como la medida de la precisión de los resultados de un método analítico efectuado sobre la misma muestra homogénea pero con. BI. O. Q. analistas diferentes. El Coeficiente de variación obtenido en el ensayo fue de. Y. 1,5780 % y 0,7260 % nivel 1 y 2; el cual es menor al establecido por la USP para. AC. IA. este tipo validación (CV < 5 %). La precisión está relacionada con la dispersión de. RM. una serie de mediciones, pero no nos indica de lo cerca que esta del valor exacto,. FA. por ello podemos tener mediciones muy precisas pero poco exactas 16, 17.. DE. En la tabla 5, se muestra el tratamiento estadístico aplicado para determinar. CA. la exactitud del método; que expresa la cercanía entre el valor teórico y el valor. IO. TE. práctico obtenido al aplicar el análisis, se realizaron 3 concentraciones (50 %, 100. BI BL. % y 150 %) por triplicado para cada uno de los niveles; si la diferencia entre el Valor Teórico y el práctico es grande revela la posible existencia de errores que deberían ser corregidos. El coeficiente de variación obtenido fue de: 1,3795 % y 0,4880 % (< 5 %); la exactitud se demostró con la aplicación del t de student con el 95 % de confianza y 8 gl, obteniéndose un valor de texp de 1.1526 y 0,0068 nivel 1 y 2, siendo éste menor al punto crítico 2.306 (ttabla), con la probabilidad de cometer error de p = 0.05 y n – 1 gl;. indicando que no existe diferencia. significativa, por tanto el método es exacto 2, 10,17.. - 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. V. CONCLUSIONES Luego de haber aplicado los parámetros establecidos de validación del método analítico para la determinación de amilasa, en el Laboratorio Quintanilla S.R.L se concluye lo siguiente:  El método es lineal en el intervalo de las concentraciones de 50% hasta el. IC A. 150 % de la muestra. UI M.  El método es preciso porque cumple la repetitividad (Nivel 1: C.V 2.0384 % y. O. Q. Nivel 2: 0.8572) y precisión intermedia (Nivel 1: C.V 1.5780 % y Nivel 2:. BI. 0.7260 %). IA. Y.  El método es exacto porque no hay diferencia significativa entre la. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. recuperación media (Nivel 1: 100.53 % y Nivel 2: 100.01) y el 100 % teórico.. - 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Alzate, R ; Mora, C.: Diplomado en Buenas Prácticas de Manufactura con Énfasis en Validación y Auditoría. Facultad de Ciencias Químicas y Farmacéuticas. Universidad de Chile. Santiago. Mayo 2006. 2. Castro, M.: Validación de Métodos analíticos. Asociación Española de. IC A. Farmacéuticos de la Industria. Sección Catalana 1º ed. Ed Farma. UI M. Internacional. España.2000. Pp: 70-74. Q. 3. Castillo, B ; González, R.: Protocolo de Validación de Métodos Analíticos. BI. O. para la Cuantificación de Fármacos. Revista Cubana de Farmacia [online].. Y. ene.-abr. 2000, vol.30, no.1. Pp: 2-4. Disponible en:. IA. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0034751519960. AC. 00100009&lng=es&nrm=iso>. ISSN 0034-7515.. FA. RM. Consultado 16 de febrero del 2009. 4. Castelluci, F.: “Recomendaciones Armonizadas para la validación de. CA. DE. Métodos de Análisis (Informe Técnico)”. París. 2005. Pp: 5-6. TE. 5. Fernández, A ; Aguilera.: Validación de los Métodos Analíticos para la. IO. Identificación y Cuantificación del Dextrometorfano Jarabe. Revista. BI BL. Cubana de Farmacia. 2002. 36(1):28-34. 6. García H ; Aparici, M.: La formación como herramienta de la gestión de calidad. Industria Farmacéutica 2002 Julio / Agosto. Pp: 71 – 75. 7. Guía de Validación de Métodos Analíticos. Disponible en: http://www.ministeriodesalud.go.cr/protocolos/guiavalidacionmetodosana liticos.pdf Consultado 14 de marzo del 2009. - 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 8. Guidelines for Collaborative Study - Procedures to Validate Characteristics of a Method of analysis, AOAC International, revised May 2002, publicado originalmente en J. Assoc. Off. Anal. Chem. 72, 694-704 (2000). 9. ICH.: Guidance for Industry. Q2B Validation of Analytical Procedures: Methodology. Noviembre. 2003. Pp: 1 – 10. Disponible en: http://www.fda.gov/cder/guidance/1320fnl.pdf Consultado 24 de febrero del 2009. IC A. 10. Líneas directivas para evaluar y expresar incertidumbre en la medida NIST. UI M. resultan ", NIST nota técnica 1297, 2001, el Instituto Nacional de. O. Q. Estándares y la Tecnología.. BI. 11. Organización Mundial de la Salud.: Curso de Gestión de Calidad para. Y. Laboratorios. Módulo 1, EE.UU. 2007. Pp: 4-6. Disponible en:. AC. IA. www.paho.org/Spanish/aad/tsh/ev/labs-CGC.htm.. RM. Consultado 17 de marzo del 2009. FA. 12. Organización Mundial de la Salud. : Comité de Expertos de la OMS en. DE. Especificaciones para las Preparaciones Farmacéuticas. 2003. 32º. TE. CA. Informe, Anexo 5. Ginebra.. IO. 13. Organismo Argentino de Acreditación.: Guía para la Validación de Métodos. BI BL. de Ensayo. Argentina. 2003. Pp: 1 – 16. Disponible en: http://www.oaa.org..ar/evaluadores/DC-LE-05.pdf Consultado 15 de marzo del 2009 14. Rodríguez, G ; Blanco, R.: “Aseguramiento de la calidad analítica y norma ISO 17 025 en laboratorios químicos y clínicos”. Rev. Costarricense de Ciencias Médicas. San José, Costa Rica. Vol. 22 (2). 2001. Disponible en: http://www.ia.csic.es/sea/revista/VOL36-34/03.pdf Consultado 23 de febrero del 2009. - 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. 15. Taylor, J. : Validation of Analytical Methods. Analytical Chemistry, Vol. 55 (6). 2006. Pp: 12 – 15 16. Tapia, M.: Desarrollo y Validación de Metodologías Analíticas. Memoria de práctica para optar al título de Químico Farmacéutico. Santiago. Universidad de Chile. 2003. 17. The United States PHARMACOPEA Convention. The United States. IC A. PHARMACOPEA XXIX. 29º Edition. USA. 2006. Pp: 1436-1437, 3328-3331.. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. Chemistry .Vol. 34 (10), 2005-2008. Pp: 8 - 12. UI M. 18. Winn-Deen, E.: DEVELOPMENT OF A DIRECT ASSAY FOR "-AMYLASE, Clin.. - 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXOS. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. IC A. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. - 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. ANEXO Nº I. I. CÁLCULOS PARA COMPARAR ENTRE EL USO DE 1000 uL y 500 uL DE RVO, SEGÚN PRUEBA t DE Student a. Cálculo de la varianza (s2); Varianza combinada y t Student.  (x .  x) 2. i. n 1. Q. (n  1) S12  (n2  1) S 22  n1  n2  2. IA. Y. BI. O. s x2, y. UI M. IC A. s x2. y. x1  x 2. AC. t. RM. S x2, y. S x2, y n2. Punto crítico. NIVEL 1. 2,137. < 2,228. 1,173. < 2,228. IO. TE. T Student. BI BL. CA. DE. FA. n1. . NIVEL 2. - 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. II. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA LINEALIDAD DEL MÉTODO a. Cálculo de la recta de Regresión Se determina la curva de regresión, sobre los puntos individuales y sin promediar Para el caso de una recta la función toma la forma de la siguiente ecuación. y  bx  a. 100 %. UI M x2. 42. 41,90. 1769,5767. 42. 42,50. 69. 42,23. 69. 69,31. 69. f(x/y) 1,0016. 1783,6544. 1755,6100. 0,9921. 1794,9167. 1783,6544. 1806,2500. 1,0063. 4810,3450. 4816,8227. 4803,8761. 0,9987. 4765,9269. 4816,8227. 4715,5689. 0,9894. 68,67. 4874,1961. 4816,8227. 4932,2529. 1,0119. 70,23. 10482,0005. 10496,6855. 10467,3361. 0,9986. 69,40. 10756,5755. 10496,6855. 11022,9001. 1,0248. 102,31. 10251,4805. 10496,6855. 10012,0036. 0,9766. 51291,49 51305,09. 8.9735. Promedio. 0.9971. Desviación estándar. 0,0138. Coeficiente de variación %. 1,379 %. Y. IA. AC. 642,27 51291,49. BI BL. IO. 642. y2 1789,2900. DE. TE. 102. CA. 102. 1783,6544. O. 1786,4700. BI. 42,30. Q. xy. 42. 102. 150 % ∑. Resultado en CCs “y”. RM. 50%. CC del analito “x”. FA. CC Nominal del analito (%). IC A. Tabla 1: Linealidad del método – NIVEL 1. - 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. Tabla 2: Linealidad del método – NIVEL 2. y2. f(x/y). 279. 279,15. 77779,5645. 77634,6769. 77924,7225. 1,0019. 279. 276,18. 76952,0334. 77634,6769. 76275,3924. 0,9912. 279. 280,56. 78172,4328. 77634,6769. 78713,9136. 1,0069. 419. 419,26. 175865,595. 175952,284. 175778,948. 0,9995. 419. 420,93. 176566,104. 175952,284. 177182,065. 1,0035. 419. 418,21. 175425,155. 175952,284. 174899,604. 0,9970. 593. 593,47. 352107,729. 352008,845. 352206,641. 1,0003. 593. 595,55. 353341,8. 352008,845. 354679,803. 1,0038. 593. 590,89. 350577,007. 352008,845. 349150,992. 0,9959. 1816812. 8.9735. Promedio. 0,9964. Desviación estándar. 0,0048. Coeficiente de variación %. 0,476 %. 3874. Q. UI M. IC A. x2. 3874. 1816787. 1816787. FA. RM. AC. IA. 150 % ∑. Xy. O. 100 %. Resultado en CCs “y”. Y. 50%. CC del analito “x”. BI. CC Nominal del analito (%). TE. CA. DE. De los datos obtenidos de la tabla 1 se obtienen los siguientes valores:. a (Intercepto). b (Pendiente). 115,79. 3,1467. BI BL. IO. NIVEL 1 NIVEL 2. 10,912. 0,6123. Ecuación de la recta. Ecuación de la recta. NIVEL 1 NIVEL 2. y = 0,6123 x + 10,912 y = 3,1467 x + 115,79. - 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. b. Cálculo del coeficiente de Correlación “r”. Coef. Correlación (r). Criterio de aceptación. 0,998. > 0.990. 0,997. NIVEL 1 NIVEL 2. > 0.990. c. Cálculo del coeficiente de Determinación “r2”. 0,994. NIVEL 1 NIVEL 2. > 0.990 > 0.990. AC. IA. d. Cálculos efectuados en el test de linealidad. Y. BI. O. Q. 0,996. Criterio de aceptación. UI M. Coef. Determinación (r2). IC A. Se determinó para evaluar el grado de ajuste de la ecuación. RM. Cálculo del Test de Regresión ( t de Student )para el Coeficiente de. Test de regresión t - Student. Criterio de aceptación. 34,0539. > 2,3646. 43,4153. > 2,3646. BI BL. IO. TE. CA. NIVEL 1 NIVEL 2. DE. FA. Correlación). Intervalo de Confianza (rango aceptable) Intervalo de confianza de la pendiente b. NIVEL 1 NIVEL 2. Sb 0,5805. Pendiente b. Int. Conf.. 0,6123. 0,76 - 1,98. 1,0804. 3,1467. 0,59 - 5,70. - 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. Intervalo de confianza del intercepto a. NIVEL 1 NIVEL 2. Sa 0.1270. Intercepto a 10,912. 10.62 - 11.21. Int. conf. 0.1326. 115,79. 115.48 – 116.11. e. Calculo del Coeficiente de Variación (C.V) de los factores de respuesta. Coeficiente de variación (CV). Criterio de aceptación <5%. IC A. 1.3787 %. NIVEL 1 NIVEL 2. <5%. BI BL. IO. TE. CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI M. 0.4758 %. - 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. III. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA PRECISIÓN DEL MÉTODO a. Cálculo de la Precisión Datos de Repetitividad y Precisión Intermedia Tabla 3: Repetitividad y Precisión Intermedia del método – NIVEL 1. Analista 1. Cant. Recuperada. Analista 2. Cant. Recuperada. (13/03/09). (98 % - 102 %). (14/03/09). (98 % - 102 %). 71,79. 70,59. 102,30%. 102,64%. 71,11. 103,06%. 69,99. 101,43%. 70,17. 101,70%. 69,51. 100,74%. 69,99. 101,43%. 70,14. 101,65%. 70,08. 101,57%. 68,35. 99,06%. 70,22. 101,77%. 73,77 70,76. Q. UI M. IC A. 70,82. 99,68%. 71,08. 103,01%. 106,91%. 70,29. 101,87%. 102,55%. 69,78. 101,13%. 101,83%. 69,93. 101,35%. Y. BI. O. 68,78. IA. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10. 104,04%. AC. Ensayo nº. FA. RM. 70,26. CA. Analista 1. TE. Ensayo nº. DE. Tabla 4: Repetitividad y Precisión Intermedia del método – NIVEL 2. (13/03/09). IO BI BL. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10. 419,26. Cant. Recuperada. Analista 2. Cant. Recuperada. (98 % - 102 %). (14/03/09). (98 % - 102 %). 100,06%. 423,12. 100,98%. 413,21. 98,62%. 420,17. 100,28%. 418,21. 99,81%. 419,68. 100,16%. 423,68. 101,12%. 425,64. 101,58%. 416,29. 99,35%. 417,58. 99,66%. 422,25. 100,78%. 420,65. 100,39%. 423,07. 100,97%. 420,55. 100,37%. 423,25. 101,01%. 418,67. 99,92%. 420,08. 100,26%. 420,08. 100,26%. 423,96. 101,18%. 424,33. 101,27%. - 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. b. Análisis estadístico Tabla 5: Análisis estadístico. Análisis Estadístico Repetitividad. NIVEL 1. NIVEL 2. Repetitividad. Precisión Repetitividad Precisión Intermedia Intermedia 10 20 10 20. ............ 70,56. 70,37. 420,33. 420,69. ............ 1,44. 1,11. 3,60. 3,05. ............ 2,038 %. 1,578 %. 0,857 %. 0,726%. <5%. UI M. IC A. Nº de determinaciones Media (Promedio: x) Desviación Estándar (S) Coeficiente de Var. (C.V). Criterio de Aceptación. O. Q. c. Test F (Snedecor). BI. Este test fue realizado con el objetivo de comparar la semejanza del. AC. tratamiento de los datos individuales.. IA. Y. comportamiento entre los 2 analistas a través de su varianza obtenida por el. NIVEL 1 Desv. Standard Varianza (S) (s2). FA. RM. Analistas. 1,4400. DE. 1 2. 0,4489. 3,6000. 12,9600. 2,5300. 6,4009. CA. 0,6700. 2,0736. NIVEL 2 Desv. Standard Varianza (S) (s2). BI BL. IO. TE. Comparación de las varianzas entre el analista 1 y el analista 2. F calculado. Fcalculado . 2 S analista 2 2 S analista 1. NIVEL 1. NIVEL 2. Punto crítico. 0,2165. 0,4939. < 3.35. Interpretación: Como Fcalculado < Fcrítico, no hay diferencia significativa entre las varianzas obtenidas a través de los 2 analistas, por esto podemos considerar que las varianzas son estadísticamente homogéneas. - 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA __________________________________________________________________________________________________________. IV. CÁLCULOS PARA DETERMINAR LA EXACTITUD DEL MÉTODO a. Calculo del % de Recuperación, Desviación Standard y Coeficiente de variación Tabla 6: Exactitud del método – NIVEL 1. 42 42 42 69 69 69 102 102 102. 1 2. Cantidad Recuperada. 50 42,30 50 41,90 50 42,50 100 69,31 100 68,67 100 70,23 150 102,31 150 104,99 150 100,06 Media (%) Recuperación Desviación Standard Coeficiente de variación. Cantidad Recuperada (%). 279 279 279 419 419 419 593 593 593. DE. FA. 1. BI BL. IO. TE. CA. 2 3. CC Nominal (%). AC. CC del analito. RM. Ensayo nº. IA. Tabla 7: Exactitud del método – NIVEL 2. 100,71% 99,76% 101,19% 100,45% 99,52% 101,78% 100,30% 102,93% 98,10% 100,53% 0,0139 1,3795 %. Y. BI. O. Q. 3. CC Nominal (%). IC A. CC del analito. UI M. Ensayo nº. Cantidad Recuperada. 50 279,15 50 276,18 50 280,56 100 419,26 100 420,93 100 418,21 150 593,47 150 595,55 150 590,89 Media (%) Recuperación Desviación Standard Coeficiente de variación. Cantidad Recuperada (%). 100,05% 98,99% 100,56% 100,06% 100,46% 99,81% 100,08% 100,43% 99,64% 100,01% 0,0049 0,4880 %. b. Análisis estadístico según ( t de Student ). t de Student. NIVEL 1. NIVEL 2. Punto crítico (8;0.05). 1.1526. 0.0068. < 2.306. - 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.