“Efecto de la concentración de Difenoconazol más Azoxystrobin sobre la germinación y el crecimiento de Stemphylium vesicarium en condiciones de laboratorio ”

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. FO. “Efecto de la concentración de Difenoconazol más Azoxystrobin. DE. IN. sobre la germinación y el crecimiento de Stemphylium vesicarium. EM AS. en condiciones de laboratorio.”. SI. ST. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. Br. YUSEFF GRABIEL ROJAS FIESTAS. DI. RE. CC. IO. N. DE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. TRUJILLO-PERÚ 2014. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. M UN. IC. Dr. Orlando Velásquez Benites. IC. A. Y. CO. RECTOR. ÁT. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. DE. IN. FO. RM. VICE-RECTORA ACADÉMICA. EM AS. Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori. Dr. Santiago Antonio Uceda Duclos SECRETARIO GENERAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. VICE-RECTOR ADMINISTRATIVO. II. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. Dr. José Mostacera León. M UN. IC. AC I. Ó. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. IN. Dr. Willian Zelada Estraver. SI. ST. EM AS. DE. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dra. Bertha Soriano Bernilla. MICROBIOLOGÌA Y PARASITOLOGÍA. DI. RE. CC. IO. N. DE. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. III. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. Ó. N. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis. AC I. titulada: “Efecto de la concentración de Difenoconazol más Azoxystrobin sobre la. M UN. IC. germinación y el crecimiento de Stemphylium vesicarium en condiciones de laboratorio”. CO. CERTIFICA:. Y. Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la. IC. A. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. ÁT. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. FO. RM. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. DE. EM AS. reglamento correspondiente.. IN. Por lo tanto, autorizo a Yuseff Grabiel Rojas Fiestas, continuar con el trámite del. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg Profesor Asociado del Departamento Académico. IO. N. DE. SI. ST. Trujillo, Julio del 2014. CC. de Microbiología y Parasitología. RE. Código 4527. DI. ASESOR. IV. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M UN. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. IC. AC I. Ó. N. PRESENTACIÓN. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados. A. Y. y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y. ÁT. IC. criterio, el informe de tesis titulado: “Efecto de la concentración de Difenoconazol. RM. más Azoxystrobin sobre la germinación y el crecimiento de Stemphylium. FO. vesicarium en condiciones de laboratorio”, con el propósito de obtener el Título. ST. EM AS. DE. IN. Profesional de Biólogo – Microbiólogo.. RE. CC. IO. N. DE. SI. Trujillo, Julio del 2014. DI. Br. Yuseff Grabiel Rojas Fiestas. V. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. PRESIDENTE. A. Y. Ms.C Eduardo Muñoz Ganoza. CO. --------------------------------------------. M UN. IC. AC I. Ó. N. MIEMBROS DEL JURADO. EM AS. -------------------------------------------Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. SECRETARIO. ----------------------------------Dra. Manuela Lujan Velásquez VOCAL. VI. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. N. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran. AC I. Ó. que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y. Y. CO. M UN. IC. fundamentales, siendo aprobado por unanimidad.. IC. A. --------------------------------------------. ÁT. Ms.C Eduardo Muñoz Ganoza. DE. IN. FO. RM. PRESIDENTE. EM AS. --------------------------------------------. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. -----------------------------------------------Dra. Manuela Lujan Velásquez VOCAL. VII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. AC I. A Dios por guiar mi sendero, permitiendo cumplir un objetivo. N. DEDICATORIA. M UN. IC. más en mi vida y con su bendición todo es posible.. A mis padres, Patricia del Roció y Osmar Wilson , por ser los. CO. mejores y maravillosos amigos incondicionales que me han. A. Y. ayudado a crecer como persona y como profesional, con mucho. IC. amor y buenos valores les dedico todo mi esfuerzo, trabajo y. RM. ÁT. todos mis logros, pues ellos han sido mi apoyo en todo momento. IN. FO. velando por mi bienestar, integridad y educación.. DE. A mis hermanos Harold, Lisette, Alexandra que están siempre a. EM AS. mi lado.. ST. A mi abuela Carmen Huanes que a pesar que está en el cielo, la. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. tengo presente espiritualmente a mi lado.. VIII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AGRADECIMIENTOS. AC I. Ó. Mi más profundo agradecimiento a mi amigo y asesor Ms. C. Juan Héctor Wilson. M UN. en base a su amplia experiencia para la realización de este proyecto.. IC. Krugg por brindarme su permanente asesoramiento, apoyo incondicional y sus consejos. CO. A Ms.C. Eduardo Ganoza docente de la Universidad Nacional de Trujillo, gracias. IC. A. Y. a su participación y apoyo e indicaciones durante el desarrollo de mi tesis.. RM. ÁT. A la Dra. Manuela Lujan Velásquez docente de la Universidad Nacional de. DE. IN. FO. Trujillo, gracias a su apoyo e indicaciones para realizar mi tesis.. EM AS. Finalmente, a mis amigos Karen Avalos, Carlos Reyna, Flor Soriano, Lizeth, Melissa Magdalena, Katherine Chacón, Jorge Zambrano, Silvia Nuñez, Carmen Leyva,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Yeny que me brindaron información y su apoyo para poder cumplir con este objetivo.. IX. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. Se determinó el efecto del Difenoconazol más Azoxystrobin principios activos del. AC I. Ó. “Amistar Top” sobre la germinación y crecimiento de Stemphylium vesicarium en condiciones de laboratorio. Para lo cual se trabajó con dos concentraciones del. M UN. IC. fungicida (243.75 ppm y 325 ppm). El porcentaje de germinación, se determinó adicionando 1 ml de cada dilución (doble concentrado) de cada concentración a tubos. CO. que contenían 1 ml de suspensión de conidios estandarizada de S. vesicarium con lo. A. Y. que se obtuvo una concentración final de 1x104 conidios/mL, incubándose a 20°C por. IC. 24 horas. Luego se realizó el recuento de conidios germinadas y no germinadas. El. RM. ÁT. crecimiento micelial de S. vesicarium se evaluó sembrando por puntura en la zona. FO. central en placas de Petri conteniendo Agar Papa Sacarosa suplementado con Carbonato. IN. de Calcio con las dos concentraciones del Difenoconazol más Azoxystrobin, estas se. DE. incubaron a temperatura ambiental entre 20 a 25 ºC con una humedad del 65 a 70% que. EM AS. fue registrado por un termohigrómetro digital durante 14 días de evaluación, al termino de los cuales se midió el diámetro de crecimiento micelial (mm) y se saco el radio. ST. promedio de cada día en (cm), para cada concentración a evaluar. Se encontró que el. SI. Difenoconazol más Azoxystrobin a la concentración de 243.75 ppm presento un. DE. porcentaje de germinación de 15.75 % disminuyendo hasta un 100 %, en la. IO. N. concentración de 325 ppm, en el crecimiento a la concentración de 243.75 ppm presento. CC. un porcentaje 18.37% mientras a la concentración de 325 ppm presento 8.16% de. DI. RE. crecimiento, Se concluye que el Difenoconazol más Azoxystrobin en las dos concentraciones establecidas presenta. un efecto significado en la germinación y. crecimiento de Stemphylium vesicarium. X. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. N. Pág.. AC I. Ó. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo ..................................................... II. Asesor ........................................................................................................................ IV. M UN. IC. Presentación ................................................................................................................. V Miembros del Jurado ................................................................................................... VI. CO. Aprobación ................................................................................................................ VII. A. Y. Dedicatoria............................................................................................................... VIII. IC. Agradecimientos ......................................................................................................... IX. RM. ÁT. Resumen ...................................................................................................................... X. FO. INTRODUCCIÓN ........................................................................................................ 1. IN. MATERIAL Y MÉTODOS .......................................................................................... 7. DE. 1. Material de estudio ................................................................................................. 7. EM AS. 2. Procedimiento ........................................................................................................ 7 2.1 Recolección de muestras para la detección de Stemphylium sp. ST. en cultivos de espárrago ............................................................................... 7. SI. 2.2 Aislamiento del hongo fitopatógeno ................................................................ 7. DE. 2.3 Identificación e incubación de Stemphylium vesicarium ................................... 8. DI. RE. CC. IO. N. 2.4 Preparación de medios de cultivos con Difenoconazol más Azoxystrobin .............................................................................................. 9. 2.5 Evaluación del crecimiento del Stemphylium vesicarium frente al Difenoconazol más Azoxystrobin................................................................... 9. XI. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.5.1 Siembra e incubación de S. vesicarium en un medio con. N. Difenoconazol más Azoxystrobin ............................................................. 9. AC I. Ó. 2.5.2 Lectura de los resultados ...................................................................... 10. IC. 2.6 Evaluación del efecto Azoxystrobin más Difenoconazol sobre la. M UN. germinación de esporas de S. vesicarium ........................................................... 11. CO. 2.6.1 Preparación de las concentraciones del. A. Y. Difenoconazol más Azoxystrobin ........................................................... 11. ÁT. IC. 2.6.2 Preparación del inóculo de conidios ........................................................... 11. RM. 2.6.3 Inoculación e incubación ........................................................................... 11. FO. 2.6.4 Lectura ...................................................................................................... 13. IN. 2.7 Análisis de datos ................................................................................................. 13. DE. RESULTADOS ............................................................................................................. 13. EM AS. Fig.1. Porcentaje de crecimiento radial promedio de Stemphylium vesicarium frente a dos concentraciones (ppm) del. ST. Difenoconazol más Azoxystrobin a los 14 días. DE. SI. incubación .................................................................................................... 14. DI. RE. CC. IO. N. Fig.2. Crecimiento lineal Stemphylium vesicarium a diferentes concentraciones de Difenoconazol más Azoxystrobin a los. 14 días de ser sembrados................................................................................. 15. Fig.3. Porcentaje de germinación de Stemphylium vesicarium frente a dos concentraciones (ppm) del Difenoconazol mas Azoxystrobin a 24 horas de incubación .................................................................................. 16. XII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. DISCUSIÓN .................................................................................................................. 17. AC I. Ó. CONCLUSIONES .......................................................................................................... 22. M UN. IC. RECOMENDACIONES ................................................................................................ 23. CO. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................................. 24. A. Y. ANEXOS. RM. ÁT. Saboraud suplementado con CaCO3.. IC. Anexo 1. Colonia de Stemphylium vesicarium en agar. FO. Anexo 2. Presentación comercial del fungicida sistémico. DE. IN. Amistar ® Top.. Anexo 3. Lesión causada en tallo por Stemphylium vesicarium en. EM AS. espárrago.. ST. Anexo 4. Conidio de Stemphylium vesicarium germinado y no. SI. germinado. DE. Anexo 5. Usos y dosis Difenoconazol más Azoxystrobin en. IO. N. diferentes hongos fitopatógenos en campo.. concentración del Difenoconazol más Azoxystrobin durante 14 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. Anexo 6. Crecimiento radial de Stemphylium vesicarium a 0 ppm de. XIII. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 7. Crecimiento radial de Stemphylium vesicarium a 243.75 ppm de concentración del Difenoconazol más Azoxystrobin durante. N. 14 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. Ó. Anexo 8. Crecimiento radial de Stemphylium vesicarium a 325 ppm. AC I. de concentración del Difenoconazol más Azoxystrobin. M UN. IC. durante 14 días de evaluación en condiciones de laboratorio. Anexo 9. Crecimiento radial promedio de Stemphylium vesicarium.. CO. a diferentes concentraciones de Difenoconazol más Azoxystrobin. A. Y. durante 14 días de evaluación.. IC. Anexo 10. Análisis estadístico del porcentaje de crecimiento. RM. ÁT. de Stemphylium vesicarium frente a las diferentes. FO. concentraciones del Difenoconazol más Azoxystrobin,. Pruebas de Tukey y Duncan. DE. b.. IN. a. ANOVA de un factor (Análisis de varianza de un factor). Anexo 11. Porcentaje de germinación de Stemphylium vesicarium en. EM AS. diferentes concentraciones del Difenoconazol más. ST. Azoxystrobin en condiciones de laboratorio.. SI. Anexo 12. Análisis estadístico de los porcentajes de. DE. germinación de Stemphylium vesicarium frente a las. (a) ANOVA de un factor (Análisis de varianza de un factor), (b) Pruebas de Tukey y Duncan. DI. RE. CC. IO. N. diferentes concentraciones Difenoconazol más Azoxystrobin. .. XIV. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÒN. N. A nivel mundial los cultivos de producción agrícola son atacados por. AC I. Ó. muchas enfermedades y plagas, siendo los agentes principales hongos,. IC. insectos, virus, plantas superiores parásitas y nematodos los que se. M UN. aprovechan de las plantas para satisfacer sus demandas nutricionales1. A. CO. través del tiempo se han ido desarrollando y aplicando diferentes métodos. Y. para controlar a las plagas y las enfermedades que atacan a los cultivos 2.. A. Estos métodos varían considerablemente de una enfermedad a otra,. ÁT. IC. dependiendo del tipo de patógeno, del hospedante y de la interacción que se. FO. RM. establece entre los dos 3.. IN. Los hongos fitopatógenos originan grandes pérdidas en la producción de. DE. hortalizas, plantas ornamentales y forestales. El ciclo de vida de los hongos. EM AS. fitopatógenos transcurre entre las plantas hospederas y el suelo, por lo tanto, la supervivencia y patogenicidad de los hongos depende de las condiciones. ST. ambientales (humedad y temperatura) y características intrínsecas de las. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. plantas (resistencia)4.. El control de plagas y enfermedades depende, en gran parte, de la. aplicación de productos químicos. Sin embargo, el uso indiscriminado de estos, ha ocasionado severos problemas de contaminación ambiental y la aparición de organismos altamente resistentes5. Los fungicidas constituyen el grupo más numeroso y utilizados de productos químicos para el combate de enfermedades en vegetales, De acuerdo a su movilidad en las plantas, los. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fungicidas pueden ser de contacto o residuales, son aquellos que no penetran en la planta, sino forman una capa protectora e impiden la infección,. Ó. N. matando al hongo o interfiriendo con los mecanismos de penetración; o. AC I. sistémicos, los cuales penetran en la planta y se mueven en ella en grado. CO. M UN. movilizarse a grandes distancia desde el punto de aplicación 6.. IC. diverso, algunos penetran solamente la lámina foliar y otros pueden. Y. El Amistar Top (Anexo2) es un poderoso fungicida sistémico que. IC. A. previene y cura roya (Puccinia asparagi) en el cultivo de espárrago,. ÁT. ofreciendo un mayor rendimiento y calidad de la cosecha. sus dos. RM. ingredientes activos sistémicos: Azoxystrobin y Difenoconazol, tiene acción. FO. prolongada preventiva, curativa, erradicante y antiesporulante, se distribuye. DE. IN. de manera uniforme en la lámina foliar y llega a brotes nuevos, una vez dentro de la planta no es lavado por la lluvia, sus dos ingredientes activos, el. EM AS. Azoxystrobin actúa como inhibidor de la respiración mitocondrial mediante. ST. la unión del sitio Qo del citocromo b, interrumpiendo el ciclo de energía. SI. dentro del hongo, interfiriendo en el ciclo de vida del hongo principalmente. DE. durante la germinación y penetración del tejido. El segundo ingrediente, el. del ergosterol (EBI ҆s) actúando sobre el hongo patógeno durante la penetración y la formación de haustorios, DFZ detiene el desarrollo del hongo al interferir con la biosíntesis de las membranas celulares7.. DI. RE. CC. IO. N. Difenoconazol (DFZ) pertenece al grupo de triazoles inhibidor de la síntesis. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La resistencia a fungicidas se define como la habilidad desarrollada por un hongo para sobrevivir frente a estos tipos de químicos que antes fueron. Ó. N. nocivos o fatales para él, y pueden ser por inherencia, cuando un patógeno. AC I. nunca ha sido sensible a un fungicida en particular; o adquirida, cuando se. M UN. IC. desarrolla en una población de un patógeno que alguna vez fue sensible,. siendo esta última de gran importancia para los fitopatógenos. Existen otros. CO. tipos de resistencia entre los cuales tenemos: resistencia natural, cualitativa,. Y. cuantitativa, cruzada, cruzadas negativas y múltiples8. Forbes y Ayala. IC. A. demostraron altos niveles de resistencia a Fenilamidas en la población de. ÁT. Phytophthora infestans procedentes de Ecuador encontrando un mayor nivel. FO. RM. de resistencia en la población de P. infestans presentes en el Perú 9, 10,11.. DE. IN. La resistencia a fungicidas de las poblaciones de hongos debe verse como un ejemplo más de capacidad de sobrevivencia de estos organismos, debido. EM AS. a que tiene la característica de adaptarse a los cambios del medio en que. ST. viven, sustentándose en la variabilidad genética; por lo que toda medida de. SI. control de las poblaciones de hongos puede ser susceptible de ser vencida. DE. por alguna cepa adaptada, lo cual es más notorio en el caso de la resistencia. DI. RE. CC. IO. N. a fungicidas, debido al extendido uso que se ha hecho de los mismos10.. Los hongos patógenos de mayor incidencia y que más daños causan a los vegetales, son aquellos que tienen como hábitat el suelo, destacándose entre ellos S. vesicarium, hongo que pertenece a la familia Dematiaceae, pertenece al orden Moniliales, muchas de estas especies son saprofitas, son. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. capaces de vivir activamente en el suelo, plantas muertas y a falta de sus mediante Este. colonización organismo. de. materia. fitopatógeno. orgánica. causa. en. diversas. Ó. descomposición10.. la. N. hospedantes. AC I. enfermedades de importancia económica, así tenemos, la mancha gris de la. M UN. IC. hoja de tomate, quema foliar en ajo y cebolla, tizón rayado en los. crisantemos, necrosis en el ápice de hoja en dalias, mancha marrón de la. CO. pera Europea (Pyrus communis L.), mancha púrpura del espárrago y. IC. A. Y. helechos 12, 13, 14, 15,16.. ÁT. La Mancha púrpura en espárragos causada por el hongo S. vesicarium, se. RM. ha convertido en un problema significativo para el espárrago. Las lesiones. FO. ocasionadas por este hongo pueden afectar tallo principal, secundario,. DE. IN. ramas, cladiolos y turiones cosechados, también puede dar lugar a la defoliación prematura. Durante los años de epidemia, puede producirse. EM AS. aproximadamente entre un 60 a 90% de pérdida de la cosecha de. SI. ST. espàrrago 17, 18,19.. DE. La infección por S. vesicarium en espárrago se da en aquellas zonas. DI. RE. CC. IO. N. donde existe una humedad localizada, comenzando los síntomas con la aparición de unos pequeños puntos negros en las escamas secas, que se encuentran en la base de los tallos principales de las plantas (Anexo 3), estos puntos evolucionan a más circulares u ovaladas con un diámetro entre 2 - 6. mm y cuyo centro adopta una coloración grisácea, y a su vez quedan circunvaladas por un halo de color violáceo, tornándose la planta clorótica al. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. principio, degenerando a coloraciones tostadas, finalizando el proceso con la pérdida de cladiolos y dejando la parte aérea de la planta totalmente. Ó. N. despoblada. Los daños se traducen en una reducción de la superficie foliar,. AC I. ocasionando una disminución de la actividad fotosintética, influyendo en el. M UN. IC. rendimiento productivo y cualitativo 20, 21,22, 23.. es considerado como uno de los cultivos hortícolas más. Y. en Perú. CO. Asparagus officinalis “espárrago”, pertenece a la familia de la Liliacea, y. IC. A. importantes, donde la producción se destina principalmente al mercado. RM. ÁT. internacional, razón por la cual se cultiva durante todo el año24.. FO. Los valles de La Libertad ubicados en el Norte y los de Ica en la zona. DE. IN. Sur, son las dos principales zonas de producción de espárragos en el Perú. Ambas, tienen condiciones naturales privilegiadas que combinadas con la. EM AS. tecnología y cualidades empresariales han convertido al Perú en el más. ST. grande exportador de espárrago del mundo en sus dos presentaciones,. SI. espárrago blanco y verde. Actualmente en la región La Libertad los cultivos. DE. de espárrago, son afectados principalmente por la mancha púrpura del. DI. RE. CC. IO. N. espárrago, enfermedad que tiene como agente etiológico a S. vesicarium. Sin embargo, a pesar del uso de controladores químicos Antracol cuyo principio activo Propineb, la “mancha púrpura” continúa manifestándose en el cultivo de espárrago, lo que indicaría que el hongo está adquiriendo resistencia a los fungicidas debido al uso repetitivo y exclusivo de estos; esto traería como consecuencia además una contaminación innecesaria del. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ambiente debido al uso de controladores químicos que no tienen efecto alguno sobre el organismo que se desea controlar, debido a esto el. Ó. N. Difenoconazol más Azoxystrobin con sus dos ingredientes activos ha. IC. a una gran variedad de hongos fitopatógenos. M UN. demostrar ser efectivo. AC I. logrado con su acción prolongada preventiva, erradicante y antiesporulante. incluyendo la mancha púrpura del espárrago en tal sentido, esta. CO. investigación tiene como objetivo, conocer el efecto de las concentraciones. Y. 243.75 y 325 ppm de Difenoconazol más Azoxystrobin sobre la. IC. A. germinación y el crecimiento de Stemphylium vesicarium en condiciones de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. laboratorio.. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO 1. Material de estudio Un cultivo puro de Stemphylium vesicarium. . Un envase de 1L del fungicida, que tiene como principios activos. AC I. Ó. N. . M UN. IC. Difenoconazol más Azoxystrobin 2. Procedimiento. CO. 2.1 Recolección de muestras para la detección de Stemphylium. A. Y. vesicarium en cultivos de espárrago.. ÁT. IC. En el pueblo de la Portada Huancaco localizada en el distrito de. RM. Virú, perteneciente a la provincia de Virú, Región La Libertad, se. FO. ubicaron los campos de cultivo de espárrago que mostraron los. IN. posibles síntomas de la enfermedad causadas por Stemphylium sp. de. las plantas con estos síntomas, se. DE. (Anexo 3), A partir. EM AS. seleccionaron los más representativos y cada uno de ellos. Luego se tomaron muestras de la siguiente manera.. ST. Se extrajo la base de la planta, tallos secundarios y primarios que. SI. mostraban los síntomas característicos de la enfermedad. 25, 26. , luego. luego ser trasladadas al Laboratorio de Fitopatología de la Escuela. de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo .. DI. RE. CC. IO. N. DE. las muestras fueron correctamente embolsadas e identificados para. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2 Aislamiento del hongo fitopatógeno. Para este procedimiento se realizó unos cortes histológicos con un. Ó. N. bisturí de las zonas de avance de la infección comprendiendo tejido. AC I. sano y tejido enfermo, estas porciones de tejido se le realizo una. M UN. IC. desinfección superficial con una solución de hipoclorito de sodio al 2% para tejidos primarios manteniéndolos sumergido en frascos de. CO. vidrio estériles durante 2 minutos, trascurrido el tiempo, se. Y. enjuagaron en agua destilada estéril tres veces para luego ser. IC. A. transferidos asépticamente en una placa Petri que contenía papel. ÁT. filtro estéril luego se dejo secar, después con una pinza estéril los. RM. pequeños trozos de tejido se colocaron en cámaras húmedas ( placas. FO. Petri que contienen una lámina porta objetos sombre 2 varillas de. IN. vidrio, agua de estéril para las condiciones de humedad), para poder. EM AS. DE. realizar observaciones periódicas durante 2 semanas25,26.. ST. 2.3 Identificación e incubación de Stemphylium vesicarium. SI. Una vez transcurrido las dos semanas, con una asa bacteriológica. DE. en punta se realizó una toma de muestra de los micelios. DI. RE. CC. IO. N. sobresalientes en distintos puntos de los cortes histológico para luego ser coloreadas con el Azul de Lactofenol y hacer la observación de. las estructuras micromorfológicas encontradas de S. vesicarium para luego ser comparado e identificado con la literatura, luego se realizó una siembra por puntura en agar papa sacarosa suplementado con Carbonato de Calcio, de los puntos en el cual se hizo la toma de. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. muestra al hongo fitopatógeno, y se dejo incubar a temperatura 20° C durante 14 días. Se realizó una observación micro y macroscópica. Ó. N. para verificar la pureza del cultivo, obtenido el cultivo puro de S.. AC I. vesicarium (Anexo 1), se sembró por puntura en frascos planos. CO. M UN. Calcio y se llevó a incubar 20 °C durante 14 días25,26.. IC. conteniendo Agar Papa Sacarosa suplementado con Carbonato de. Y. 2.4 Preparación de medios de cultivos con Difenoconazol más. IC. A. Azoxystrobin. ÁT. Se preparó en 3 matraces conteniendo cada uno de ellos 100 mL. RM. de Agar Papa Sacarosa suplementado con Carbonato de Calcio los. FO. cuales se esterilizaron en autoclave y se dejó enfriar a una. DE. IN. temperatura aproximadamente de 45°C, posteriormente en solo dos matraces se agregó una cantidad suficiente del Difenoconazol más. EM AS. Azoxystrobin hasta obtener una concentración de 243.75 ppm y de. ST. 325 ppm (Anexo 5) respectivamente y al tercer matraz no se le. DE. SI. agrego a fin de utilizar como control.. DI. RE. CC. IO. N. 2.5 Evaluación del crecimiento del Stemphylium vesicarium frente al Difenoconazol más Azoxystrobin. 2.5.1. Siembra e incubación de S. vesicarium en un medio con Difenoconazol más Azoxystrobin. A partir de un cultivo puro de S. vesicarium se procedió a sembrar por puntura en el centro de cada una de las placas de. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Petri que contenían Agar Papa Sacarosa. suplementado. Carbonato de Calcio con las concentraciones de 243.75 y. Ó. N. 325 ppm ,y la placa control conteniendo solo el medio de cultivo. AC I. sin agregar el fungicida. Todas las placas fueron incubadas a. M UN. IC. temperatura ambiente, manteniendo un registro de temperatura y humedad relativa con un termohigrómetro digital entre el rango. CO. de 20 a 25° C y la humedad de 60 a 65% durante 14 días de. Y. evaluación.. IC. A. 2.5.2 Lectura de los resultados. ÁT. A partir del tercer día después de la siembra, y hasta el décimo. RM. cuarto día, se midió el diámetro de crecimiento lineal (mm) del. IN. obtener un radio promedio (cm). DE. luego. FO. hongo en 4 diferentes direcciones para cada repetición, para. crecimiento de S. vesicarium,. final diario de. en cada una de las. EM AS. concentraciones del Difenoconazol más Azoxystrobin. y el. ST. grupo control evaluados. Los resultados de crecimiento fueron. SI. expresados en centímetros (cm) y se calculó el porcentaje de del hongo en cada concentración del. Difenoconazol más Azoxystrobin de la siguiente manera:. DI. RE. CC. IO. N. DE. crecimiento (%C). Se consideró el crecimiento alcanzado en el ensayo control como el 100%.. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.6 Evaluación del efecto Azoxystrobin más Difenoconazol sobre la. Ó. N. germinación de esporas de S. vesicarium.. AC I. 2.6.1 Preparación de las concentraciones del. M UN. IC. Difenoconazol más Azoxystrobin. Se realizaron diferentes diluciones del Difenoconazol más. CO. Azoxystrobin en agua destilada estéril respectivamente, hasta. Y. obtener una doble concentración del fungicida en cada una de. ÁT. IC. A. las concentraciones a partir de sus muestras originales.. FO. vesicarium. RM. 2.6.2 Preparación del inóculo de conidios de Stemphylium. DE. IN. Se agregó 10 mL de agua destilada a cada frasco plano con Agar Papa Sacarosa que contenía cultivo puro S. vesicarium,. EM AS. luego se agitó moderadamente con el fin de liberar las esporas. ST. del hongo. Seguidamente, la suspensión resultante se colocó en. esporas mediante el recuento en Cámara de Neubauer y se estandarizó a una concentración final de 1x 104 conidios/mL.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. un matraz estéril, donde se determinó la concentración de. 2.6.3 Inoculación e incubación En tubos de 13 x 100 mL se colocó, en cada uno de ellos, 1mL de la suspensión de esporas obtenidas anteriormente, a los cuales se adicionaron 1 mL de cada dilución del Difenoconazol. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. más Azoxystrobin doblemente concentrado respectivamente, con lo que se obtuvo una concentración final de 1 x 10 4 esporas/mL y. Ó. N. concentraciones finales de 243.75 y 325 ppm para Difenoconazol. AC I. más Azoxystrobin respectivamente. Para el tratamiento control. M UN. IC. se utilizo un tubo de 13 x 100 mL, adicionando 1 mL de la suspensión de esporas más 1 mL de agua destilada estéril. Los. CO. tubos fueron incubados a la temperatura de 20°C durante 24. Y. horas.. IC. A. 2.6.4 Lectura. ÁT. Posterior al período de incubación se agrego 2 gotas de Azul de. RM. Lactofenol para detener el proceso de germinación y realizar el. FO. recuento de conidios, con un microscopio (40 X). Se contarán. cada. DE. IN. tanto conidios germinados, como no germinados (Anexo 4) para concentración. de. Difenoconazol. más. Azoxystrobin. EM AS. evaluada, incluyendo el control, con el fin de determinar el. Análisis de datos. SI. 2.7. ST. porcentaje de germinación.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Los datos obtenidos se procesaron utilizando el paquete. estadístico SPSS v.15, aplicando un análisis de varianza simple para comparar las medias de germinación y de crecimiento del hongo. evaluado,. Difenoconazol más. obtenidas. en. cada. concentración. Azoxystrobin; aplicándose,. de. un análisis. postanava mediante la Pruebas de Tukey y Duncan 27,28. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Ó. N. La figura 1 muestra que Stemphylium vesicarium presenta. AC I. resistencia a Difenoconazol más Azoxystrobin, Así como también que. M UN. IC. existe diferencia significativa entre el porcentaje de crecimiento radial promedio de Stemphylium vesicarium. frente a dos. diferentes. Y. CO. concentraciones utilizadas del Difenoconazol más Azoxystrobin.. de Stemphylium. IC. A. La figura 2 se muestra el crecimiento lineal. ÁT. vesicarium frente a dos concentraciones utilizadas del Difenoconazol. FO. RM. más Azoxystrobin a los 14 días de ser sembrados.. DE. IN. En la figura 3 se observa que existe diferencia significativa entre el porcentaje de germinación de Stemphylium vesicarium frente a diferentes. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. concentraciones utilizadas del Difenoconazol más Azoxystrobin.. 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM AS. Figura 1. Porcentaje de crecimiento radial promedio de. (ppm) del Difenoconazol mas Azoxystrobin a los 14 días de incubación. a: p< 0.05, existe diferencia significativa.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. S. vesicarium frente a dos concentraciones. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Figura 2 Crecimiento lineal de Stemphylium vesicarium a. ST. dos concentraciones del Difenoconazol más. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. Azoxystrobin a los 14 días de ser sembrado.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ST. Figura 3 Porcentaje de germinación de Stemphylium vesicarium. Azoxystrobin a 24 con una temperatura de 20°C de incubación. a: p < 0.05, existe diferencia significativa.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. frente a dos concentraciones (ppm) del Difenoconazol más. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Discusión. N. En relación a la resistencia “in vitro” de Stemphylium vesicarium a. AC I. Ó. diferentes concentraciones del Difenoconazol más Azoxystrobin en las (figuras 1 y 2), se observó que en el crecimiento a la concentración de. M UN. IC. 243.75 ppm presento un porcentaje 18.37% mientras a la concentración de 325 ppm presento 8.16%, por lo tanto S. vesicarium disminuye al. CO. incrementarse la concentración del fungicida, sin embargo el Difenoconazol. Y. más Azoxystrobin un fungicida sistémico que se utiliza para el control de S.. IC. A. vesicarium, no debió haber ocurrido crecimiento alguno de este hongo en. RM. ÁT. ninguna de las concentraciones empleadas, razón por la cual el crecimiento de S. vesicarium nos demuestra que es resistente al fungicida, Sin embargo,. FO. valores obtenidos de cualquier compuesto químico como agente de control. DE. IN. para enfermedades, depende del modo de acción de la molécula29, dosis,. EM AS. frecuencia y etapa de aplicación en unos o más componentes fisiológicos del. ST. ciclo de vida del patógeno.. SI. EL análisis estadístico del crecimiento de fúngico obtenido frente al. DE. Difenoconazol más Azoxystrobin se puede apreciar que existe diferencia. DI. RE. CC. IO. N. significativa entre las concentraciones evaluadas 243.75 y 325 ppm con relación al control (Anexo 10); Sin embargo, los hongos fitopatógenos. pueden adquirir resistencia a los fungicidas, lo cual debe verse como un ejemplo más de la capacidad de sobrevivencia y/o adaptación del hongo, lo que sustenta en la variabilidad genética. Normalmente la sensibilidad de los hongos a los fungicidas está regulada por un gen simple, debido a que los. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fungicidas actúan sobre un punto concreto del metabolismo; ello permite la aparición por mutación genética individual, de un individuo resistente que. Ó. N. puede dar origen a una población resistente al fungicida; por lo que la. AC I. resistencia se basa en dos fuerzas evolutivas que son la mutación y la. M UN. IC. selección. Las mutaciones se encargan de crear la información genética. necesaria para resistir a los fungicidas y la selección se encarga de hacer que. CO. la frecuencia en la población de estos individuos resistentes, se incremente. Y. hasta alcanzar niveles tales que harán fracasar al control que se realiza, lo. IC. A. que conlleva a un incremento de los problemas de resistencia, explicando en. ÁT. cierta forma lo que pudo haber pasado con S. vesicarium al ofrecer. FO. crecimiento fúngico 6,22.. RM. resistencia “ in vitro” con Difenoconazol más Azoxystrobin en términos de. DE. IN. El mecanismo de acción de los fungicidas que afectan a las células de los hongos, es inhibiendo su respiración, es decir, la transformación de los. EM AS. hidratos de carbono en energía al unirse las moléculas de los fungicidas a. ST. los grupos sulfhídricos de los aminoácidos. Las enzimas que afectan al ciclo. SI. de Krebs se desactivan y no producen ATP y al no poder completar este. DE. proceso la célula muere; los fungicidas inhiben el transporte de electrones. complejo QB del fotosistema II; disminuyen el potencial de membrana, pudiendo así los compuestos de los fungicidas atravesar la membrana en forma molecular perdiendo H+, y por consiguiente no produciendo ATP 6.. DI. RE. CC. IO. N. en la cadena respiratoria, al combinarse con algunos de los portadores del. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Respecto al porcentaje de germinación de conidios de S. vesicarium frente a las dos concentraciones del Difenoconazol más Azoxystrobin, en la. Ó. N. (Anexo 12), el análisis estadístico muestra que entre las dos concentraciones. los dos. M UN. IC. medidas de los porcentajes de germinación obtenidos en. AC I. del Fungicida, existe una diferencia estadísticamente significativa entre las. tratamientos realizados del Difenoconazol más Azoxystrobin (Anexo 9); es. CO. decir, que a medida que aumenta la concentración del fungicida disminuye. Y. el porcentaje de germinación. Así por ejemplo, Difenoconazol más. IC. A. Azoxystrobin en la concentración de 243.75 ppm presenta un porcentaje de. ÁT. germinación de 15.75 % disminuyendo hasta un 100 % en la concentración. RM. de 325 ppm; destacándose que el Difenoconazol más Azoxystrobin. FO. presenta un mayor efecto adverso sobre la germinación de S. vesicarium. La. DE. IN. disminución de la germinación del hongo podría deberse posiblemente a la variabilidad genética que existe entre ellos, tal es así que pueden existir. EM AS. conidios con una versatilidad metabólica que le brinde resistencia a. ST. inhibidores microbianos y a las condiciones adversas dadas por los. SI. agroquímicos, esto explica la existencia de conidios que germinaron a pesar. DE. de la presencia de los agroquímicos; esto podría deberse a las diferencias. DI. RE. CC. IO. N. estructurales que presentan las conidios aún cuando pertenezcan a una misma especie; posiblemente por la variabilidad genética (heterocariosis) que existe entre ellas30,31, una diferencia estructural sería la pared celular que actúa como barrera mecánica, evitando que las sustancias del medio exterior puedan ingresar o que sólo pequeñas concentraciones puedan lograrlo32. Estas propiedades de permeabilidad y selectividad, le confiere la. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. constitución de la membrana citoplasmática que le brinda protección frente a sustancias tóxicas que se encuentren en el entorno de la membrana que. Ó. N. puedan alterar su comportamiento en respuesta a estímulos como la. AC I. transducción de las señales de iniciación de la germinación y el. M UN. IC. reconocimiento del sustrato29, 33.. La germinación de esporas y el crecimiento micelial son fundamentales. CO. en el ciclo de vida S. vesicarium y en el desarrollo de la enfermedad, en este. Y. sentido un químico que inhiba la germinación micelial puede reducir la. IC. A. habilidad de S. vesicarium de causar la enfermedad.. ÁT. Actualmente no se ha realizado estudios sobre el mecanismo de acción. RM. de fungicidas sistémicos sobre el crecimiento de S. vesicarium, sin embargo,. FO. se han realizado trabajos de investigación utilizando fungicidas sistémicos. DE. IN. Trifloxystrobin, Tebuconazol, Propiconazol, Azoxystrobin, que han mostrado un control eficiente en varias enfermedades causadas por hongos. EM AS. fitopatógenos, este último fungicida, Azoxystrobin fue eficiente para reducir. ST. la raíz corchosa (Pyrenochaeta Lycopersici), la antracnosis (Colletotrichum. SI. acutatum) en tomate, en mango se realizo evaluaciones in vitro inhibieron. DE. completamente el crecimiento de C. gloeosporioides y las aplicaciones en. DI. RE. CC. IO. N. campo controlaron la enfermedad en panículas, hojas y frutos. Azoxystrobin fue el fungicida más efectivo para el control de pudriciones postcosecha en aguacate, la aplicación del fungicida redujo la incidencia de la antracnosis en precosecha (Colletotrichum gloeosporioides) en frutos de mandarina, controló pudriciones causadas por Fusarium pallidoroseum en melones almacenados a temperatura ambiente y en refrigeración 6.. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La espora o conidio de S. vesicarium durante el proceso de germinación atraviesa por dos etapas, la primera es el hinchamiento. Ó. N. hidrostático, en la cual la espora absorbe agua, luego le sigue el. AC I. hinchamiento metabólico, en el cual la conidio incorpora nuevo material que. IC. está presente en el medio externo para poder desarrollar el tubo. M UN. germinativo34,35. Debido a estos procesos es que los dos principios activos. CO. Difenoconazol más Azoxystrobin disueltos en el agua fueron absorbidos e. Y. incorporados como parte del medio externo al atravesar la pared celular del. ÁT. IC. A. conidio del hongo afectando evidentemente su germinación34, 36.. RM. La evaluación de eficiencia de los productos en campo tiene muchas. FO. interferencias y resulta más compleja; por lo que una primera evaluación in. DE. IN. vitro siempre dirige hacia los productos más eficaces. Sin embargo, los ensayos in vitro sólo dan una estimación indirecta del valor práctico del. EM AS. producto, por lo que deberá contrastarse este resultado con los obtenidos. ST. posteriormente en campo. Un producto que es eficaz in vitro no. SI. necesariamente será eficaz en campo; pues en su actuación influyen factores. DE. como la degradabilidad, persitencia, etc. Sin embargo si un producto no es. DI. RE. CC. IO. N. útil in vitro difícilmente lo será en campo37.. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. CONCLUSIONES. IC. Con respecto al efecto de Difenoconazol más Azoxystrobin sobre la. M UN. germinación y el crecimiento de Stemphylium vesicarium se concluye lo. CO. siguiente:. del. Difenoconazol. Y. concentraciones. más. IC. en el rango de 243.75 ppm a 325 ppm, disminuye. significativamente. ÁT. Azoxystrobin. las. A. incrementar. la. germinación de. Stemphylium. vesicarium. en. RM. Al. incrementar. concentraciones. del. Difenoconazol. más. en el rango de 243.75 ppm a 325 ppm disminuye el. EM AS. Azoxystrobin. las. DE. Al. IN. FO. condiciones de laboratorio.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. crecimiento de Stemphylium vesicarium en condiciones de laboratorio.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. RECOMENDACIONES. IC. Realizar estudios en campo, acerca del efecto inhibitorio del. M UN. Difenoconazol más Azoxystrobin sobre la germinación y crecimiento de Stemphylium vesicarium, pues los datos obtenidos en condiciones de. CO. laboratorio podrían no ser similares en campo debido a la presencia de. A. Y. variables no manejables como la, composición del suelo, degradabilidad del. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. fungicida, flora microbiana presente en campo.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. Referencias Bibliográficas. IC. 1. Tenorio R, Terrazas E, Alvarez MT, Vila JL, Mollinedo P.. Andina:. alternativas. M UN. Concentrados de Saponina de Chenopodium Quinoa y de Caiphora como. biocontroladores. hongos. Y. CO. fitopatógenos, 2010; 27: 33-40.. de. ÁT. IC. A. 2. Agrios G. Fitopatología. 3er ed.: Ed. Limusa, México; 1998. RM. 3. Romero F. Manejo Integrado de Plagas: las Bases, los Conceptos, su. FO. Mercantilización. 1 a ed. México 2004. Universidad Autónoma. DE. IN. Chapingo. Instituto de Fitosanidad, Montecillo.. EM AS. 4. Urrutia Anaya I, Pacheco Aguilar JR, Aislamiento e identificación de Pythium sp, un fitopatógeno de interés agrícola en el estado de. DE. SI. ST. Queretaro: 1-4.. DI. RE. CC. IO. N. 5. Ibarra JE, Del Rincón MCC, Galindo E, Patiño M, Serrano L,García R, Carrillo JA, Pereyra Alférez B, Alcázar Pizaña A, Luna Olvera H, Galán Wong L, Pardo L, Muñoz-Garay C, Gómez I, Soberón M, Bravo A, Los microorganismos en el control biológico de insectos y fitopatógenos. 2006; 48(2): 133-120.. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 6. Isai Quevedo D. Evaluación de fungicidas sistémicos y de contacto en el control de la Monialisis (Moniliophthora roreri) del cacao. AC I. M UN. IC. enseñanza de ciencias agrícolas, Colegio de Posgraduados.. Ó. N. (Theobroma cacao). [Tesis de Maestria]. México: Institución de. 7. SENASA, Fungicida Amistar Top, Syngenta Crop protection S.A. Y. CO. sucursal Perú.. IC. A. 8. Borga E. Evaluación in vitro de fungicidas para el control de. ÁT. Monilinia spp. aislada de duraznos (Prunos persica) de diferentes. DE. IN. FO. Francisco de Quito; 2011.. RM. localidades de la sierra del Ecuador. [Tesis], Universidad San. 9. Forbes GA, Escobar X.C, Ayala C.C, Revelo J, Ordoñez, M. E, Fry. EM AS. B. A, Doucett K, Fry W. E, Population genetic structure of. ST. Phytophthora infestans in Ecuador. Phytopathology, 1997; 87: 375-. DE. SI. 380.. and morphological description of two new species of Stemphylium from China and France. The Mycological Society of America 2010; 102(3): 708–717.. DI. RE. CC. IO. N. 10. Yong Wang, Yun Geng, Yun-Fei Pei, Xiu-Guo Zhang, Molecular. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 11. Nayive Pino BHV, Ethnobotany of Four Black Communities of the Municipality of Quibdo, Choco – Colombia, Lyonia, 2004 7 (2): 61-. Ó. N. 69.. AC I. 12. Cedeño L, Carrero C, Quintero k, Pino H, Espinoza W, Stemphylium. M UN. IC. vesicarium causante de quema foliar en ajo y cebolla en Mérida,. CO. Venezuela, 2003; 28 (3): 174-177.. Y. 13. Singh P, Bugiani R, Cavanni P, Nakajima H, Kodama M, Otani H,. IC. A. Kohmoto K, Purification and Biological Characterization of Host-. ÁT. Specific SV-Toxins from Stemphylium vesicarium Causing Brown. FO. RM. Spot of European Pear 1999; 89(10): 947-953.. DE. IN. 14. S.S. Jakhar, J.C. Duran, L.S. Surag, Studies on conidial germination and factors affecting disease development of Stemphylium blight of. ST. EM AS. onion, 1996; 49 (4): 362-365.. AM, Melero-Varab JM,. SI. 15. Basallote-Urebaa MJ, Prados-Ligeroa. DE. Aetiology of leaf spot of garlic and onion caused by Stemphylium. DI. RE. CC. IO. N. vesicarium in Spain, Phytopathology, 1999; 48: 139–145.. 16. Arzanlou M, Khodaei S, Babai-Ahari A, Helianthus annuus as a natural host for Stemphylium vesicarium in Iran, Australasian Plant Pathology Society Inc, 2012; (7): 167–170.. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(45) ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ANEXOS. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Saboraud suplementado con CaCO3. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. Anexo 1. Colonia de Stemphylium vesicarium en agar. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Anexo 2. Presentación comercial del fungicida sistémico Amistar ® Top. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. espárrago.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Anexo 3. Lesión causada en tallo por Stemphylium vesicarium en. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49) ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. IN. FO. RM. A. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. germinado. DE. Anexo 4: conidio de Stemphylium vesicarium A) germinado B) no. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(50) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 5: Usos y dosis Difenoconazol más Azoxystrobin en. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. diferentes hongos fitopatógenos en campo. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Y. CO. M UN. IC. 14 días de evaluación en condiciones de laboratorio.. Ó. concentración del Difenoconazol más Azoxystrobin durante. N. Anexo 6: Crecimiento radial de Stemphylium vesicarium a 0 ppm de. A. Radio de la colonia en (cm). ÁT. IC. ensayo. Día Día Día 12 13 14. FO. RM. Día Día Día Día Día Día Día Día Día 3 4 5 6 7 8 9 10 11 0,4. 0,6 0,85 1,04 1,06 1,24 1,61 1,9 2,16 2,39 2,45 2,82. 2. 0,28 0,55 0,81 1,46 1,65 1,84 2,08 2,34 2,51 2,56 2,81 2,9. 3. 0,41 0,77 1,13 1,55 1,66 1,98 2,06 2,25 2,45 2,86 3,06 3,1. EM AS. DE. IN. 1. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Promedio 0,36 0,64 0,93 1,35 1,46 1,69 1,92 2,16 2,37 2,60 2,77 2,94. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..