Efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli en el crecimiento vegetal de Moringa oleifera

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. IC AS. UNIDAD DE INVESTIGACIÓN. EN CI. AS. BI O. LO. G. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. DE. CI. Efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli en el crecimiento vegetal de Moringa oleifera. CA. TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE. IO. TE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. BI. BL. AUTOR: Br. VANESSA ELIZABETH AMARANTO SÁNCHEZ Br. KARLA ORNELLA ARTEAGA BOCANEGRA ASESOR: Dra. BERTHA S. SORIANO BERNILLA TRUJILLO – PERU. 2017 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. G. IC AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. EN CI. AS. BI O. RECTOR. Dr. Rubén Vera Véliz. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas VICE-RECTOR DE INVESTIGACION. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. VICE-RECTOR ACADÉMICO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. EN CI. AS. DECANO. BI O. Dr. Freddy Roger Mejia Coico. Dr. William Elmer Zelada Estraver. TE. CA. DE. CI. SECRETARIO. Dra. Bertha Soledad Soriano Bernilla. BI. BL. IO. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. PRESENTACIÓN. Señores miembros del jurado. G. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el régimen de Grados y Títulos de. LO. la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, ponemos a. BI O. vuestra consideración y elevado criterio el presente informe de tesis titulado: Efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli en el crecimiento. AS. vegetal de Moringa oleífera.. CA. DE. CI. Trujillo, octubre del año 2017. EN CI. Con el cual pretendemos obtener el título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. ________________________. TE. _________________________. Br. Karla Ornella Arteaga Bocanegra. BI. BL. IO. Br. Vanessa Elizabeth Amaranto Sánchez. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE LA ASESORA. IC AS. La que suscribe, profesora asesora de la presente tesis “Efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli en el crecimiento vegetal de Moringa oleifera”. G. para optar por el título profesional de Biólogo-Microbiólogo.. LO. Certifica que ha sido desarrollada en conformidad con los objetivos propuestos y que el. BI O. informe ha sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias alcanzadas. Por lo tanto, autorizo a la (as) Br. Vanessa Elizabeth Amaranto Sánchez y Br. Karla Ornella. DE. CI. EN CI. AS. Arteaga Bocanegra, a continuar con los trámites correspondientes.. Dra. Bertha S. Soriano Bernilla ASESORA. BI. BL. IO. TE. CA. ____________________________. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC AS. MIEMBROS DEL JURADO. ____________________________. BI O. Ms.C. Juan Hector Wilson Krugg. EN CI. AS. PRESIDENTE. ____________________________. CI. Dra. Bertha Soledad Soriano Bernilla. ____________________________ Ms.C. Edgar David Zavaleta Verde MIEMBRO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. DEDICATORIA. A DIOS por darnos cada día, un motivo más para salir adelante, por protegernos y guiarnos. LO. G. por el camino correcto, y por permitir culminar con éxito este trabajo.. BI O. A mis padres Ángel y Aracelli, por su confianza, amor, consejos, paciencia, apoyo incondicional, por ser mi mayor motivación y orgullo para lograr cada una de mis metas y. EN CI. AS. ser mejor persona. Les estaré eternamente agradecida.. A mis padres Daniel y Flor, por su apoyo, consejos, comprensión, amor, ayuda en los momentos difíciles, y por ayudarme con los recursos necesarios para estudiar. Me han dado. DE. CI. todo lo que soy como persona, valores, principios y coraje para conseguir mis objetivos.. CA. A nuestros familiares y amigos, por su paciencia, por sus consejos y por estar siempre. BI. BL. IO. TE. presentes brindándonos su apoyo incondicional a lo largo de toda la carrera universitaria.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. AGRADECIMIENTOS. A nuestra alma mater, La Universidad Nacional de Trujillo, entidad donde nos formamos. G. mediante las buenas costumbres y los diferentes conocimientos de nuestros maestros de. BI O. LO. la Facultad de Ciencias Biológicas.. Nuestro más profundo agradecimiento a nuestra asesora, Dra. Bertha S. Soriano Bernilla. AS. por brindarnos sus conocimientos, su dedicación y apoyo constante en la elaboración de. EN CI. esta tesis, siempre estaremos agradecidas hacia su persona.. A los profesores Ms.C. Edgar David Zavaleta Verde y Ms.C. Juan Hector Wilson Krugg, por. DE. CI. el apoyo brindado para la elaboración de esta investigación.. CA. A todas las personas que de una u otra forma hicieron posible la culminación de esta tesis; en especial agradecimiento a John Acedo, Silvia Castillo, quienes con su ayuda. TE. desinteresada, nos brindaron información relevante, próxima, pero muy cercana a la. BI. BL. IO. realidad de nuestras necesidades.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR. BI O. LO. G. IC AS. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado Examinador, declaran que el presente Informe de Tesis titulado: Efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli en el crecimiento vegetal de Moringa oleífera ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. ____________________________. AS. Ms.C. Juan Hector Wilson Krugg. CI. EN CI. PRESIDENTE. DE. ____________________________. Dra. Bertha Soledad Soriano Bernilla. BI. BL. IO. TE. CA. SECRETARIO. ____________________________ Ms.C. Edgar David Zavaleta Verde MIEMBRO. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. IC AS. En la presente investigación se determinó el efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli en el crecimiento de plantas de Moringa oleifera. A.. G. chroococcum se reactivó en medio Base Agar 77, así como R. etli en medio ELMA. Se. LO. utilizó un total de 40 semillas de M. oleifera de Moche-Trujillo, incluyendo un proceso de. BI O. desinfección y germinación en algodón humedecido. Las suspensiones bacterianas se prepararon a la concentración de 1,2 x 10 9 UFC / mL., que se inocularon a cada semilla pregerminada. Las semillas se sembraron por tratamiento: A. chroococcum (1 ml), R. etli (1 ml). AS. y A. chroococcum - R. etli (0,5 mL. - 0,5 mL.); además se añadió agua estéril destilada (1. EN CI. ml) al control. El efecto de la coinoculación se evaluó a los 10, 15 y 20 días, tomando en cuenta cuatro variables agronómicas como la longitud del tallo y la raíz, el número de hojas y el peso seco total. Los datos fueron sometidos a un análisis estadístico de varianza. CI. (ANOVA) para determinar una diferencia significativa entre los tratamientos. Se observó. DE. que A. chroococcum produjo mayor longitud de tallo y número de hojas mientras que con la coinoculación de ambas bacterias se observó una mayor longitud de raíz y peso seco,. CA. en comparación con los otros tratamientos; probablemente debido a la producción de. TE. fitohormonas, sideróforos, deaminasa de ACC (1-aminociclopropano-1-carboxilato) y solubilización de fosfatos; aun así no se encontraron diferencias significativas entre dichos. IO. tratamientos, por lo que se concluyó que A. chroococcum y R. etli a 1,2 x 109 UFC / mL. no. BI. BL. tuvieron un efecto significativo en las plántulas de M. oleifera.. PALABRAS CLAVES: Coinoculación, Azotobacter chroococcum. Rhizobium etli, Moringa oleifera.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas. iii. LO BI O. Del Asesor Miembros del Jurado. AS. Dedicatoria. EN CI. Agradecimiento. iv. v vi vii viii ix. Resumen. x. CI. Miembros del Jurado Dictaminador. Introducción. xi. DE. Índice. 1 10. Resultados. 16. Discusión. 21. Conclusiones. 27. Referencias Bibliográficas. 28. Anexos. 37. IO. TE. CA. Material y Método. BL BI. ii. G. Presentación. IC AS. ÍNDICE. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN. IC AS. Las plantas arbóreas y arbustivas tienen un papel preponderante por su elevado valor nutritivo y naturaleza multipropósito. Existen muchas especies con buenas. G. propiedades forrajeras, entre las cuales se destacan las leguminosas por excelencia. LO. (Simón, 1998). No obstante, existen otras leñosas perennes con gran potencial que no han sido empleadas de manera extensiva y su uso ha estado limitado a sistemas. BI O. de alimentación específicos y aislados. Dentro de ese numeroso grupo se pueden citar al nacedero o naranjillo (Trichantera gigantea), la moringa (Moringa oleifera), el. AS. árbol del nim (Azadirachta indica), las especies de Ficus y Tethonia, la morera. EN CI. (Morus alba), el Chicasquil, Chaya o lechosa de jardín (Cnidoscolus sp.) y el guácimo (Guazuma ulmifolia), principalmente por su gran versatilidad, rápido crecimiento y recuperación después del corte, además de presentar considerables. DE. CI. producciones de biomasa en el período seco (García et al., 2006).. CA. Moringa es el único género de la familia Moringaceae, el cual comprende 13 especies, las cuales son árboles de climas tropicales y subtropicales, que abarcan. TE. una gama muy diversa de hábitos o formas de crecimiento, desde hierbas y arbustos. IO. hasta árboles grandes; éstos se caracterizan por tener hojas pinnadas grandes, en. BL. donde cada hoja está dividida en muchos folíolos dispuestos sobre un armazón. BI. llamado raquis, sus frutos forman una cápsula larga y leñosa que cuando alcanza la madurez se abre lentamente en 3 valvas que se separan la una de la otra por su longitud quedando pegadas sólo en la base del fruto, y sus semillas con 3 alas longitudinales; además la combinación de hojas pinnadas, frutos trivalvados y. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. semillas con 3 alas hace que sea muy fácil reconocer el género Moringa, la especie. IC AS. más popular es la Moringa oleifera (Bonal et al., 2012; Olson & Fahey, 2011).. G. Moringa oleifera es un árbol nativo de las estribaciones meridionales del Himalaya. LO. y en la actualidad se cultiva prácticamente en todas las regiones tropicales, subtropicales y semiáridas del mundo, como Bangladesh, Afganistán, Pakistán, Sri. BI O. Lanka, el Sureste asiático, Asia occidental, la Península Arábiga, África del Oeste, Madagascar, el sur de la Florida, las islas del Caribe, América del Sur, desde México. AS. a Perú, Paraguay y Brasil (Liñán, 2010). Desde hace milenios, prácticamente todas. EN CI. las partes de M. oleifera han sido utilizadas por el hombre, ya que son apreciadas por su valor nutritivo y pueden ser usadas tanto en la alimentación humana como en. DE. CI. la animal (Fuglie, 2001).. Los usos de M. oleifera son muy variados, desde medicinales hasta industriales. Por. CA. ejemplo, sus semillas, las cuales germinan a los 10 días después de la siembra, son empleadas en la alimentación, la medicina, el tratamiento de aguas y como. TE. fertilizantes, (Fahey, 2005; Foidl et al., 1998). La corteza del tronco es útil en la. IO. adsorción de metales pesados, así como para la fabricación de cuerdas y alfombras. BL. (Reddy et al., 2011; Ramachandran et al., 1980). Además, las cascarillas de las. BI. semillas sirven de materia prima para la producción de carbón activado y de intercambiadores aniónicos; y su aceite se usa en la industria de perfumería y de cosméticos, como lubricante en la producción de biodiesel (Rashid et al., 2008).. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las hojas son excepcionalmente ricas en vitaminas y diferentes aminoácidos, por lo que se recomiendan para tratar problemas de mal nutrición en niños. También se. IC AS. emplean como forraje, biopesticida y para la producción de biogás, para lo cual según estudios se utilizan hojas frescas de tamaño promedio y coloración verde. LO. G. uniforme a intervalos de 45 días (Del Toro et al., 2011).. BI O. La agricultura moderna utiliza plantas con potenciales productivos cada vez mayores, demandando una elevada nutrición nitrogenada, la cual puede ser muy. AS. superior al aporte de N del suelo. Por lo tanto, en la mayoría de los cultivos es. EN CI. necesario suplementar con fertilizantes nitrogenados, ya que M. oleifera puede crecer en condiciones de escasez de agua, pero su cultivo intensivo, con irrigación y fertilización, aumenta los rendimientos de biomasa hasta superar las 100. CI. toneladas por hectárea (Fahey, 2005), se recomienda la aplicación de fuentes. CA. planta.. DE. nitrogenadas para favorecer la formación de la proteína, que es el potencial de esta. TE. En India han demostrado que una aplicación de 7.5 Kg. de estiércol más 0.37 Kg.. IO. de sulfato de amonio por árbol permite triplicar el rendimiento de vainas (CONCYT,. BL. 2008). Esto conlleva un considerable incremento en los costos de producción y una. BI. alta contaminación ambiental. Afortunadamente, existe otra vía de aporte de nitrógeno al sistema, llamada fijación biológica de nitrógeno (FBN), siendo la denominada fijación simbiótica de nitrógeno (FSN) altamente deseable. A través de esta vía es posible obtener un importante suministro de nitrógeno para determinadas. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. especies vegetales, las que, en simbiosis con bacterias fijadoras de nitrógeno, principalmente del género Rhizobium (rizobios), obtienen este elemento con un. IC AS. costo reducido (Terry et al., 2005).. G. Los rizobios son bacterias Gram-negativas, que no forman esporas, son bacilos. LO. aerobios que miden 0.5-0.1x1.2-3.0 µm. son flagelados (1-6 flagelos) que pueden. BI O. ser peritricales o subpolares; las colonias generalmente son blancas o color beige, circulares, convexas, semi translúcidas u opacas y mucilaginosas, que miden de 2-. AS. 4 mm de diámetro a los 3-5 días de incubación en Agar Extracto de Levadura Manitol. EN CI. Rojo de Congo (ELMARC) (Espinola, 2010).. CI. La inoculación con cepas específicas de Rhizobium permite proteger a las plantas contra microorganismos patógenos generando resistencia sistémica para su mejor. DE. crecimiento (Ravelo, 2000), además de maximizar la fijación de nitrógeno e. CA. incrementar la producción de biomasa aprovechable (Panzieri et al., 2000). La conjunción de todos los mecanismos de acción ha dado como resultado la. TE. promoción evidente del crecimiento en plantas, un incremento en la emergencia, el. IO. vigor y el peso de plántulas, un mayor desarrollo en sistemas radiculares y un. BL. incremento hasta de 30% en la producción de cultivos de interés comercial, tales. BI. como papa, rábano, tomate, trigo y soja (Jiménez et al., 2001). La capacidad promotora del crecimiento vegetal de Rhizobium ha sido estudiada por varias décadas, sin embargo, en los últimos años este estudio ha sido intensificado por que la agricultura sustentable demanda mejorar la eficiencia de la fijación de nitrógeno a través del uso de bacterias competitivas capaces de extender la ventaja 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de la simbiosis a otros cultivos no leguminosas (Santillana et al., 2005). Por otro lado, las bacterias de vida libre, que habitan la rizosfera pueden estimular el. IC AS. crecimiento de las plantas a través de diferentes procesos, como la síntesis de reguladores del crecimiento vegetal, la fijación biológica de nitrógeno, la. G. solubilización de nutrientes, la producción de sideróforos y el control de. LO. fitopatógenos del suelo (Torriente, 2010). Los microorganismos más estudiados pertenecen a los géneros Azotobacter, Stenotrophomonas, Azospirillum, Klebsiella,. AS. BI O. Beijerinckia, Pseudomonas y Bacillus, entre otros (Bruinsma, 2003).. EN CI. Las bacterias del género Azotobacter muestran la doble función de fijar el nitrógeno atmosférico y producir sustancias estimuladoras del crecimiento vegetal. Azotobacter coloniza las raíces de las plantas produciendo, fitohormonas como. CI. giberelinas (inducen a la germinación de las semillas y controlan el crecimiento. DE. vegetal), citocininas (fomentan y favorecen el crecimiento de las yemas laterales), auxinas (sustancias promotoras del crecimiento vegetal), esto trae como. CA. consecuencia un aumento en la captación de nutrientes (Cervantes, 2009; Lara et. IO. TE. al., 2007; Bonilla et al., 2000).. BL. Se calcula que estas bacterias pueden fijar 40 kg de N/ha, lo que equivale a 200 kg. BI. de sulfato de amonio, aunque parte de este es lixiviado por el agua de lluvia y pasa al subsuelo (Primavesi, 1984). En la antigua Unión Soviética (URSS) se obtuvieron buenos resultados, con incrementos de los rendimientos en hortalizas y en la India en trigo, arroz, cebolla, tomate y col al emplear dichas bacterias; el efecto. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. estimulador de estos microorganismos se ha estudiado en Cuba, en el Instituto de Investigaciones Fundamentales en Agricultura Tropical (INIFAT), donde se han. IC AS. alcanzado resultados satisfactorios en tomate, cebolla y ajo, con incrementos en la. LO. G. germinación, el rendimiento y el desarrollo de los frutos (Martinez et al., 1988).. Así mismo Azotobacter es capaz de transformar las formas insolubles del fósforo en. BI O. formas solubles, a través de reacciones enzimáticas, haciendo al fósforo disponible para las necesidades de las plantas; la inoculación de semillas o suelos con. AS. bacterias capaces de solubilizar fosfato, mejora entonces la absorción del fosfato. EN CI. del suelo, así como el aplicado de manera artificial, dando como resultado el aumento del rendimiento de los cultivos; por ello, muchos autores atribuyen la solubilización de fosfato inorgánico insoluble por los microorganismos, a la. CI. producción de ácidos orgánicos y ácidos quelantes de azúcares, la producción de. DE. estos ácidos orgánicos resulta en la acidificación de la célula microbiana y el medio que la rodea, en donde el ácido glucónico y el ácido 2- quetoglucónico son los. CA. agentes más producidos por bacterias con habilidad para solubilizar fosfato. IO. TE. (Gallegos y Angélica, 2009).. BL. El hierro (Fe) es un elemento esencial para prácticamente todos los seres vivos en. BI. los que es necesario para importantes funciones celulares como síntesis de ADN, respiración y destoxificación de radicales libres. En la naturaleza se encuentra fundamentalmente en la forma Fe3+ formando parte de sales e hidróxidos de muy. baja solubilidad, formas químicas que imposibilitan su uso por algunos seres vivos.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La disponibilidad de este elemento es fundamental en el éxito o fracaso de microorganismos patógenos o simbióticos para invadir un organismo o para. IC AS. colonizar un ambiente determinado, es precisamente a través de la síntesis de sideróforos de Azotobacter presente en el suelo influye de manera positiva en el. G. crecimiento de las plantas; existen numerosas referencias que describen el uso de. LO. esta bacteria asociada con plantas para estimular su crecimiento y como agentes mejoradores del suelo y de la sanidad vegetal; y los ensayos en las pruebas de. BI O. producción de sideróforos en Azotobacter. A. vinelandii y A. salinestris, producen. EN CI. unirse al Fe (Aguado et al., 2002).. AS. compuestos como la azotobactina y la azotochelina, los cuales ejercen la función de. Se ha determinado en investigaciones previas, que el efecto favorable sobre el. CI. crecimiento de las diversas plantas, por parte de Azotobacter se encuentra entre 108. DE. – 1010 UFC/mL de agua, como en un estudio donde se demostró que A. chroococcum en una concentración de 3,2 x 1010 UFC genera una ligera tendencia. CA. a ser mayor con respecto a la altura de las plántulas de dos leguminosas cuando fueron inoculadas; frente a la inoculación en dos gramíneas donde la diferencia entre. TE. el tratamiento inoculado y el no inoculado fue menor (Constantino et al., 2011). En. IO. otros estudios, utilizaron las concentraciones de Azotobacter referente a los tres. BL. primeros tubos del nefelómetro de Mac Farland (3x10 8 UFC/mL, 4x108 UFC/mL y. BI. 9x108 UFC/Ml) evaluando mediciones de las variables longitud promedio de la planta. (cm), peso seco de la parte aérea (g), peso seco de la raíz (g) y peso seco promedio de la planta (g) en tomate, determinándose que a mayor concentración de inóculo hubo un crecimiento mayor en las variables ya mencionadas (Tang, 1995).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Debido a sus implicaciones agronómicas, las interacciones ecológicas entre los. IC AS. rizobios y otras bacterias del suelo han sido de especial interés en los últimos años. Respecto a una interacción positiva entre las especies de Rhizobium y bacterias. G. diazotróficas del suelo, como Azotobacter y Azospririllum; en previas investigaciones. LO. se han reportado aumento de la nodulación y crecimiento óptimo de una amplia. BI O. variedad de forrajes (Dardanelli et al., 2008; Del Gallo y Fabbr, 1990).. AS. A. chroococcum ha sido ampliamente reportado por promover el crecimiento vegetal. EN CI. en condiciones edáficas de estrés por sequía, especies de este género se encuentran ampliamente distribuidos en suelos destinados a la agricultura, predominante en regiones tropicales, y se pueden encontrar fácilmente en. CI. asociación con cereales y en la rizosfera de leguminosas (Gharib et al., 2009; Kole. DE. et al., 1988; Martínez-Toledo et al., 1988). Por su capacidad para formar estructuras de resistencia en condiciones de sequía y de mejorar significativamente el desarrollo. CA. vegetal, A. chroococcum ha sido ampliamente estudiada, entre otros cultivos, en. TE. algodón, sorgo, maíz, fríjol, tomate, ají y lechuga, disminuyendo costos y aplicación de fertilizantes de síntesis química hasta en un 50% (Bonilla et al., 2000; Bonilla et. BI. BL. IO. al., 2002; Bonilla y Morales., 2007).. En otros estudios evaluaron la respuesta a la inoculación de este microorganismo en especies leguminosas arbóreas, donde se obtuvo una disminución del tiempo de germinación y aumento de altura y producción de masa seca (Bonilla y Morales, 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2007). Los efectos positivos de la inoculación combinada con Rhizobium Azotobacter y otras rizobacterias estimuladoras del crecimiento han demostrado que. IC AS. aumentan significativamente el número, mayor fijación de nitrógeno, aumento del contenido de macronutrientes y micronutrientes, en comparación con la inoculación. G. individual de Rhizobium sp. (Rodelas et al., 2000; Yahalom et al., 1987, p.510-514).. LO. El agente potenciador de estos beneficios ha sido correlacionado con la influencia positiva de la bacteria promotora de crecimiento no simbióticas, ya que se verifican. BI O. aumentos significativos en factores de rendimiento como la acumulación de masa seca y el contenido de nitrógeno en grano (Burns et al., 1981; Rodelas et al., 2000;. EN CI. AS. Sarig et al., 1986).. La importancia de esta investigación radica en la necesidad de generar nuevos. CI. conocimientos para el mejoramiento del crecimiento y productividad de Moringa. DE. oleifera mediante la coinoculación de bacterias diazotróficas Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli, debido a que no se han realizado trabajos de. CA. investigación donde se utilicen dichas bacterias en esta planta. Además de utilizarlas. TE. como biofertilizantes que puedan reemplazar a fertilizantes químicos que generan daños en el ambiente y con ello reducir su impacto. Es así que el objetivo del trabajo. IO. fue determinar el efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y. BL. Rhizobium etli sobre el crecimiento vegetal de M. oleifera, mediante la evaluación. BI. de la longitud de tallo y raíz, número de hojas y peso seco total, donde se espera que la coinoculación de dichas bacterias a la concentración de 1,2x10 9 UFC/mL, ejerza un efecto benéfico.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. MATERIAL Y MÉTODO. Población. G. 1.1.. IC AS. 1. Material :. BI O. cultivos de Rhizobium etli.. LO. Todos los cultivos de Azotobacter chroococcum y todos los. Muestra. EN CI. 1.2.. AS. Todas las Semillas de Moringa oleífera de Moche, Trujillo.. Un cultivo de Azotobacter chroococcum y un cultivo de etli. proporcionado. por. el. Laboratorio. de. CI. Rhizobium. Microbiología Ambiental, Departamento de Microbiología y. DE. Parasitología.. TE. CA. Cuarenta semillas de Moringa oleífera de Moche, Trujillo.. Unidad de Muestra. BI. BL. IO. 1.3.. 1,2x109 UFC/mL de Azotobacter chroococcum 1,2x109 UFC/mL de Rhizobium etli. Una semilla germinada de Moringa oleifera.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2. Método: Diseño de investigación : Experimental: Diseño Clásico. IC AS. 2.1.. Control: Sin inocular. A1. LO. G. A. 1,2x109 UFC/mL de Azotobacter chroococcum. BI O. B. 1,2x109 UFC/mL de Rhizobium etli. AS. C. 1,2x109 UFC/mL de Azotobacter chroococcum - Rhizobium etli. C1 D1. CI. EN CI. D. B1. DE. A= semillas germinadas de Moringa oleifera no inoculadas (Control). B= semillas germinadas de Moringa oleifera inoculadas con 1,2x109 UFC/mL. CA. Azotobacter chroococcum C= semillas germinadas de Moringa oleifera inoculadas con 1,2x109 UFC/mL. TE. Rhizobium etli.. Azotobacter chroococcum – Rhizobium etli respectivamente.. BI. BL. IO. D= semillas germinadas de Moringa oleifera coinoculadas con 1,2x109 UFC/mL. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.. Metodología de recolección de datos. IC AS. 2.2.1. Obtención y reactivación del microorganismo Se utilizó un cultivo de Azotobacter chroococcum proporcionado por el Laboratorio de Microbiología Ambiental de la Universidad Nacional de Trujillo,. LO. G. el cual fue reactivado en medio Agar base 77 (ANEXO 1, 2 y 3).. BI O. Se utilizó un cultivo de Rhizobium etli proporcionado por el Laboratorio de Microbiología Ambiental de la Universidad Nacional de Trujillo, el cual se. EN CI. AS. reactivó en medio ELMA (ANEXO 4).. 2.2.2. Tratamiento del suelo. CI. Se utilizó suelo procedente de la facultad de Ciencias Económicas de la Universidad Nacional de Trujillo, el cual fue tamizado y posteriormente. DE. sometido a un análisis microbiológico: recuento microbiano, presencia de. CA. Azotobacter sp. y rizobios; y análisis químico: pH, NPK, materia orgánica. IO. TE. (ANEXO 5 y 6).. BI. BL. 2.2.3. Desinfección y germinación de las semillas de Moringa oleifera Las semillas obtenidas se lavaron con agua corriente y diez veces con agua destilada estéril. Luego se desinfectó por inmersión en etanol al 70% durante tres minutos y se lavó cinco veces consecutivas con agua destilada estéril. Seguidamente se agregó hipoclorito de sodio al 2.25% por un minuto y se 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. lavó diez veces consecutivas con agua destilada estéril. Dichas semillas fueron colocadas en placas Petri con papel toalla humedecido para su. G. IC AS. posterior germinación (Dobbelaere et al., 2003) (ANEXO 7).. LO. 2.2.4. Preparación del inóculo bacteriano. BI O. A partir del cultivo puro de Azotobacter chroococcum reactivado, se realizó la preparación del inóculo. En condiciones de esterilidad se hizo. AS. suspensiones en tubos de ensayo conteniendo 10 mL de agua destilada estéril hasta obtener una concentración final de acuerdo al tubo N° 4 del. EN CI. Nefelómetro de Mac Farland (1,2 x 10 9 UFC/mL) (Jiménez et al., 2001). Así mismo se preparó el inóculo de Rhizobium etli, el cual se obtuvo a partir de. DE. CI. la reactivación de un cultivo de dicha bacteria en medio ELMA (ANEXO 8).. CA. 2.2.5. Crecimiento de las plántulas de Moringa oleifera El suelo se colocó en bolsas de cultivo 19x22cm de 500g de capacidad, en. de manera equidistante. Para dicha inoculación, se realizó cuatro tratamientos (A, B, C y D), según:. BI. BL. IO. TE. cada bolsa se introdujo dos semillas germinadas, previamente inoculadas,. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Inóculo (mL) Agua. Azotobacter. Rhizobium. IC AS. Tratamientos*. Destilada chroococcum 1. B. -. C. -. D. -. -. -. LO. G. A. etli. AS. BI O. 1. -. -. 1. 0,5. 0,5. EN CI. *cada tratamiento con 5 repeticiones. CI. Las condiciones para el crecimiento de M. oleifera fue: 12h de luz y 12h de. DE. oscuridad; a 24 ± 2 °C, riego interdiario.. CA. Se determinó el efecto sobre el crecimiento de las plántulas evaluando las siguientes variables agronómicas (Reyes et al., 2008; Santillana y Arellano,. TE. 2005):. BI. BL. IO. o. o. Longitud del tallo de las plántulas evaluadas en 10, 15 y 20 días, la longitud se midió de la base del tallo hasta el ápice.. Número de hojas de las plántulas evaluadas en 10, 15 y 20 días después de la germinación, se contó la cantidad de hojas que brotaron (ANEXO 9,10 y 12). 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. o. Longitud de las raíces evaluadas a los 20 días, se extrajo las plántulas y luego se lavaron las raíces con agua corriente; posteriormente se. Peso seco total de las plántulas evaluado a los 20 días, las plántulas se. G. o. IC AS. depositaron sobre una superficie para medir su longitud (ANEXO 12 y 13).. LO. evaluaron después de la deshidratación en estufa a 60°C durante 72 h y. Procedimiento y análisis estadístico. AS. 2.3.. BI O. posteriormente se pesaron en una balanza de precisión (ANEXO 14).. EN CI. Se realizó un ANOVA de los datos obtenidos de la medición de la longitud del tallo, longitud de las raíces, número de hojas y peso seco, teniendo en. CI. cuenta cada repetición, con el fin de determinar las diferencias significativas. BI. BL. IO. TE. CA. DE. entre cada tratamiento (ANEXO 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29 y 31).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. IC AS. III.. La Figura 1 muestra la altura promedio de plántulas de Moringa oleifera a los 10, 15 y 20 días post inoculación bacteriana de Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli,. G. donde se aprecia un incremento en las plántulas inoculadas con Azotobacter. LO. chroococcum y un incremento mínimo en los demás tratamientos, en relación al. BI O. control.. AS. La Figura 2 muestra el promedio de la longitud radicular de plántulas de M. oleifera. EN CI. a los 20 días post inoculación bacteriana de Azotobacter chroococcum y R. etli, donde se observa un incremento en las plántulas inoculadas con ambas bacterias. DE. CI. en relación al control.. La Figura 3 muestra el promedio del número de hojas de plántulas de M. oleifera a. CA. los 10, 15 y 20 días post inoculación bacteriana de Azotobacter chroococcum y R. etli, apreciándose un incremento en las plántulas inoculadas con Azotobacter. TE. chroococcum y un incremento mínimo en los demás tratamientos, en relación al. BI. BL. IO. control.. La Figura 4 muestra el promedio de peso seco total de plántulas de M. oleifera a los 20 días post inoculación bacteriana de Azotobacter chroococcum y R. etli, apreciándose un incremento en las plántulas inoculadas con ambas bacterias en relación al control. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI O. 20.0. Control. AS. 15.0. Azotobacter chroococcum Rhizobium etli. EN CI. 10.0. 5.0. 0.0. 15. A. chroococcum + R. etli. 20. DE. 10. CI. Longitud promedio de tallo (cm) de las plantas de M. oleifera. 25.0. CA. Tiempo (días). Figura 1. Longitud promedio de tallo de plántulas de Moringa oleifera a los 10, 15 y 20. TE. días post inoculación con Azotobacter chroococcum y/o Rhizobium etli.. BI. BL. IO. (p>0.05). 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) LO. 9.0. BI O. 8.0 7.0. AS. 6.0 5.0. EN CI. 4.0 3.0 2.0 1.0. Control Azotobacter chroococcum Rhizobium etli A. chroococcum + R.etli. CI. Longitud promedio de la raíz (cm) de las plantas de M. oleifera. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 0.0. DE. 20. CA. Tiempo (días). Figura 2. Longitud promedio de las raíces de plántulas de M. oleifera a los 20 días. BI. BL. IO. TE. post inoculación con A. chroococcum y/o R. etli. (p>0.05). 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO BI O. 25. 20. AS. 15. 5. 0. DE. 10. 15. Control Azotobacter chroococcum Rhizobium etli. EN CI. 10. CI. N° de hojas promedio de las plantas de M. oleifera. 30. A. chroococcum + R. etli. 20. Tiempo (días). CA. Figura 3. Número de hojas promedio de plántulas de M. oleifera a los 10, 15 y 20. BI. BL. IO. TE. días post inoculación con A. chroococcum y/o R. etli. (p>0.05). 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) BI O. 0.09. AS. 0.08 0.07. EN CI. 0.06 0.05 0.04 0.03. Control Azotobacter chroococcum Rhizobium etli A. chroococcum + R. etli. CI. 0.02 0.01 0. DE. Peso seco total (g) de las plantas de M. oleifera. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 20. CA. Tiempo (días). TE. Figura 4. Peso seco total promedio de plántulas de M. oleifera a los 20 días post. BI. BL. IO. inoculación bacteriana de A. chroococcum y R. etli. (p>0.05). 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. IC AS. En la actualidad, una de las alternativas en la búsqueda de la agricultura sostenible son las rizobacterias promotoras de crecimiento vegetal (PGPR).. G. Dentro de este grupo se encuentran las bacterias pertenecientes a los géneros. LO. Rhizobium y Azotobacter consideradas de importancia agrícola por su acción al producir fitohormonas como las auxinas, citocininas, giberelinas y la enzima 1-. BI O. aminociclopropano-1-ácido carboxílico (ACC)-deaminasa, sustancias que favorecen el desarrollo del sistema radicular y el crecimiento de las plantas. AS. (Dobbelaere et al., 2003). Es así que en esta investigación, se puede observar. EN CI. que en los resultados obtenidos tanto en la inoculación combinada de A. chroococcum y R. etli y por separado influyen de manera positiva con respecto al control (ANEXO 15), aunque estadísticamente no se encontraron diferencias. DE. CI. significativas entre uno u otro tratamiento a la concentración 1,2 x 109 UFC /mL.. CA. Con respecto a A. chroococcum se observa que produce mayor longitud de tallo (Fig. 1) y mayor número de hojas (Fig. 3) a los 10, 15 y 20 días en las plántulas. TE. de M. oleifera frente al control, a Rhizobium etli, y la coinoculación de ambas. IO. bacterias. Esto se debería a que A. chroococcum es capaz de sintetizar. BI. BL. sustancias estimuladoras del crecimiento en plantas, entre ellas vitaminas y hormonas vegetales, como el AIA en mayor cantidad, principal auxina, la cual tiene como papel importante promover la elongación de tallos, hojas, ramificación de raíces, dominancia apical, y la abscisión de hojas (Vanegas et al., 2015). Además al ser un microorganismo de vida libre presenta una alta tasa. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de respiración que permite proteger el nitrógeno y fijarlo permitiendo una mayor. IC AS. efectividad (Sylvia et al., 2005).. Por otro lado, se aprecia que el efecto de la coinoculación de A. chroococcum y. G. R. etli se expresa con mayor claridad en el incremento de la longitud radicular. LO. (Fig. 2) frente al control y a cada bacteria por separado. Esto posiblemente se. BI O. deba a un sinergismo entre el hospedante y dichas bacterias, lo que permitió la fijación biológica del N2 y su absorción por la planta, el cual probablemente junto. AS. con las fitohormonas que excretan las raíces, tiene acción fisiológica por un aumento de la división celular al alargar la raíz, promover la formación de pelos. EN CI. radicales; en consecuencia, la resistencia al estrés osmótico por aumento de clorofila, K, Ca, azúcares solubles y contenido de proteínas que emiten todas las. CI. plantas (Luna et al., 2013; Reyes et al., 2008).También podría deberse a la producción de la deaminasa de ACC (1-aminociclopropano-1-Carboxilato),. DE. compuesto que se encarga de la degradación del precursor del etileno y de esta. CA. forma reducir el nivel de etileno en las raíces de la planta, mejorando así la. TE. nutrición de las plantas, favoreciendo el desarrollo radicular (Valdez et al., 2016).. BI. BL. IO. Otras posibilidades a tener en cuenta, que pueden favorecer el crecimiento de estas plántulas de M. Oleifera por Azotobacter y Rhizobium, serían los ácidos orgánicos producidos y así solubilizar los fosfatos que se encuentran en el suelo, incrementando la disponibilidad de micronutrientes en la rizosfera; como, la producción de sideróforos, que tienen alta afinidad por el hierro, secuestrando a este elemento, convirtiéndolo en factor limitante para grupo de microorganismos 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. patógenos, también producen sustancias que inducen la resistencia sistémica en algunas plantas, jugando asi un papel importante para el control biológico de. IC AS. algunas enfermedades en plantas (Barreto et al., 2007; Ravelo, 2000; Valdez et. G. al., 2016).. LO. En cuanto al peso seco total de las plántulas se observa un incremento en la. BI O. coinoculación de A. chroococcum y R. etli (Fig. 4) en relación al control y cada bacteria sola, esto se debería a que dichas bacterias producen fitohormonas que. AS. promueven el crecimiento además de la colonización endófita que realiza, permitiendo que se capte mayor cantidad de nutrientes favoreciendo así el. EN CI. incremento de la materia seca, incluso algunos investigadores concluyeron que el género Azotobacter es un fijador de nitrógeno de vida libre que promueve el. CI. crecimiento de raíces lo que conlleva a un aumento en la concentración de esta. DE. variable (Rodelas et al., 2000; Dobereiner, 1995).. CA. En otros estudios se reportó que M. oleifera crece en un rango de pH de suelo. TE. entre 4,5 – 8, prefiere suelos neutros o ligeramente ácidos y sus requisitos de nutrientes por hectárea por año son 1,8 kg calcio; 0,5 kg cobre; 1,4 kg magnesio;. BI. BL. IO. 380 kg fósforo; 0,6 kg boro; 280 kg nitrógeno y 0,3 kg zinc; así también, en su hábitat natural, tolera temperaturas a la sombra mínimas y máximas oscilando desde entre -1 a 3 °C hasta entre 38 a 48 °C durante los meses más fríos y los más calientes, respectivamente; además su mejor crecimiento ocurre en suelos. tipo franco arenoso, ya que estos suelos tienen por lo general un buen drenaje y a menudo poca materia orgánica (Bonilla y Morales, 2007; Troup, 1921; 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Villareal et al., 2014), datos concordantes con el suelo agrícola utilizado en la siembra de las plántulas de M. oleifera que tenía variaciones de pH (6.5 a 8.5),. IC AS. porcentaje de nitrógeno (0.2 %), la cantidad de fosforo (7-14 ppm), potasio (300600 ppm) y porcentaje de materia orgánica (2-4 %) (ANEXO 6), y a temperatura. G. ambiente 24±2 °C, condiciones donde crece normalmente esta planta. Con. LO. respecto a las bacterias diazotroficas, en investigaciones previas se encontró que estas fueron aisladas en un suelo con características fisicoquímicas como. BI O. el pH que osciló entre 5.76-7.45 coincidiendo con el pH encontrado ya que de. EN CI. su desarrollo (Frioni, 1999).. AS. manera general las bacterias prefieren pH neutros a ligeramente alcalinos para. En investigaciones realizadas con M. oleifera se tiene en cuenta la aplicación de. CI. fertilizantes N, P, K, que presentan una mayor capacidad de retención de humedad y de crecimiento de las plántulas (Villareal et al., 2014), lo cual genera. DE. un impacto ambiental negativo. A manera de reducir dicho impacto se ha optado. CA. por utilizar biofertilizantes como Azotobacter y Rhizobium conjuntamente comprobándose su efecto benéfico en plantas como Sacharum officinarum. TE. “caña de azúcar” a la concentración 6x108nUFC/mL (Castro, 2013),. IO. Lycopersicum esculentum “tomate” a la concentración 9x108 UFC/mL (Ruiz,. chroococcum – R. etli a la concentración de 1,2 x 109 UFC/mL.. BI. BL. 2014). Es así que en esta investigación se aplicó la coinoculación de A.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Por todo lo expuesto podemos decir que Azotobacter chroococcum y Rhizobium etli a la concentración de 1,2 x 109 UFC/mL, no tiene un efecto notable (ANEXO. IC AS. 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29 y 31) sobre las plántulas de M. oleifera al no demostrarse estadísticamente una diferencia significativa con respecto a los. G. tratamientos en la evaluación de las variables agronómicas. Esto podría deberse. LO. quizás a la concentración bacteriana empleada, cantidad de inóculo, tiempo de evaluación, cantidad y tipo de suelo, humedad, periodo de luz y oscuridad, entre. BI O. otras. Además, cabe resaltar que según estudios esta planta crece a poca altitud en suelos con drenaje excesivo, por lo que las bacterias podrían haber. AS. descendido y no ejercer su efecto. Por otro lado, la supervivencia de. EN CI. rizobacterias promotoras de crecimiento vegetal (PGPR) depende de contenidos de materia orgánica, fracción arcillosa, el tipo de suelo, el balance de agua, profundidad de las raíces, ya que se ha comprobado que a mayor profundidad. CI. de estas se encuentra mayor número de bacterias promotoras de crecimiento. CA. DE. vegetal. (Frioni, 1999; Luna et al., 2013).. En otra investigación realizada, se evaluó las variables de longitud de tallo,. TE. numero de raíz, peso seco aéreo, peso seco radicular, longitud de hoja para. IO. determinar el efecto de la coinoculación de Azotobacter chroococcum y. BI. BL. Rhizobium etli a la concentración de 6x108 UFC/mL. sobre Sacharum officinarum “caña de azúcar”, basado en un control (agua destilada) y tres tratamientos: A. chroococcum, R. etli y ambas bacterias de manera conjunta, y con respecto a la longitud de tallo, el efecto de la coinoculación de A. chroococcum y R. etli asi como la inoculación de A. chroococcum, medidos a los 25 y 40 días tuvieron el mismo efecto; de igual manera para la longitud de raíz entre el control y los 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. demás tratamientos, medido a los 40 días (Castro, 2013), por lo cual en la experimentación con M. oleifera posiblemente se deba realizar una medición. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. BI O. LO. G. IC AS. mayor de 20 días.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIÓN. IC AS. V.. Se determinó que la coinoculación de Azotobacter chroococcum y Rhizobium. G. etli no presentó estadísticamente diferencias en relación con los tratamientos,. LO. donde se aplicó agua destilada estéril (control) y cada bacteria por separado, a. BI O. la concentración de 1,2x109 UFC/mL., mostrando el mismo efecto benéfico al evaluar las variables agronómicas como la longitud de tallo y raíz, número de. AS. hojas y peso seco total de las plántulas de Moringa oleifera a los 10, 15 y 20. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. días post inoculadas.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. IC AS. Aguado, G., Moreno, B, Jiménez, B., García, E. & Preciado, R. (2002). Impacto de los sideróforos microbianos y fitosidéforos en la asimilación de hierro por las. LO. G. plantas: una síntesis. Revista fitotecnia mexicana, 35(1): 9-21.. Barreto, D., Valero, N., Muñoz, A. & Peralta, A. (2007). Efecto de. BI O. microorganismos rizosfericos sobre germinación y crecimiento temprano de. AS. Anacardium excelsum, zonas áridas, 11(1); 240-250.. Bonal Ruiz, R., Rivera Odio, R.M., & Bolívar Carrión, M.E. (2012). Moringa Recuperado. en. EN CI. oleifera: una opción saludable para el bienestar. MEDISAN, 16(10), 1596-1599. 01. de. septiembre. de. 2017,. de. http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S10293019201200100014. CI. &Ing=es&tlng=es.. DE. Bonilla, R. & Morales, G. (2007). Monibac biofertilizante con base en cepas nativas de Azobacter sp. para incrementar la productividad y sostenibilidad del. TE. CA. algodonero Colombia, Innovación y Cambio Tecnológico – Corpoica. 4: 30 – 34.. IO. Bonilla, R., Murillo, J., Gnecco, M., Valero, L., Aaron, M. & Orozco G. (2002). Incorporación de abonos verdes. En: Colombia Innovación y Cambio Tecnológico – Corpoica. Productos Editoriales y Audiovisuales-Produmedios, 2: 53 – 59.. BI. BL. Mejoramiento y conservación de suelos algodoneros: Técnicas de labranza e. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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