Efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L “granada” sobre la viabilidad de Staphylococcus aureus “in vitro”

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. AC IÓ. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. ESCUELA PROFESIONALDE DE ESCUELAACADÉMICO ACADÉMICO PROFESIONAL MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA PARASITOLOGÍA MICROBIOLOGÍA Y. N. FACULTAD FACULTAD DE DE CIENCIAS CIENCIAS BIOLOGICAS BIOLOGICAS. Efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico. DE. de L. “granada” “granada” sobre sobre la la dehojas hojasde dePunica Punica granatum granatum L.. EM. AS. viabilidad dedeStaphylococcus vitro”. viabilidad Staphylococcusaureus aureus“in in vitro TESIS. TÉSIS. SI ST. PARA OBTENER EL TITULO DE PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIOLOGO - MICROBIOLOGO. DE. BIÓLOGO – MICROBIÓLOGO. ASESORA:Dra. Dra.ICELA ICELARODRIGUEZ RODRIGUEZ HARO ASESORA: HARO. DI. RE. CC. IO. N. AUTOR:Br. Br.CÁRDENAS CARDENASAGUILAR AGUILARCÉSAR CESAR EDUARDO AUTOR: EDUARDO. TRUJILLO – PERÚ TRUJILLO – PERÚ 2013 2013 i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO AUTORIDADES. AC IÓ. N. Dr. Orlando Velásquez Benites. UN IC. RECTOR. Y. CO. VICERRECTORA ACADÉMICA. M. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. IC. A. Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori. IN FO. RM. ÁT. VICERRECTORA ADMINISTRATIVA. Dr. Santiago Alberto Uceda Ducleos. AS. DE. SECRETARIO GENERAL. EM. Dr. Hermes Mario Escalante Añorga. Dr. César Augusto Jara Campos. N. DE. SI ST. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Ms. C. Bertha Soriano Bernilla. DI. RE. CC. IO. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. DEDICATORIA. Y. A mis padres y familia:. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. por el camino de la responsabilidad y el trabajo.. IC. A. Que siempre me brindan su apoyo, y cuyos consejos siempre me han llevado. DI. RE. CC. IO. N. “Haga lo que puede, con lo que tenga, donde esté”; Theodore Roosevelt.. iii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. A la Dra. Icela Marissa Rodríguez Haro, Profesora Asociado del Departamento. AC IÓ. N. Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, quien ha sido un gran apoyo durante. UN IC. la realización de este trabajo, no solo con sus conocimientos profesionales, sino también. CO. M. con sus consejos, los que me han hecho reflexionar para ser una mejor persona.. Y. A mis amigos, y a las personas que influyeron para la realización de este trabajo,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. pues con sus aspiraciones y experiencias fueron motivación para lograr este objetivo.. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AC IÓ. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO:. En Cumplimiento con lo dispuesto en el Reglamento General para el otorgamiento del. UN IC. Título Profesional de la UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO, me permito. CO. M. someter a vuestra consideración la TESIS TITULADA:. Y. Efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L.. RM. ÁT. IC. A. “granada” sobre la viabilidad de Staphylococcus aureus in vitro. IN FO. Propongo el presente trabajo a vuestro criterio y consideración para que con serenidad y. AS. DE. justicia que Ustedes poseen, sea evaluado y se emita el dictamen correspondiente.. Br. César Eduardo Cárdenas Aguilar. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. Trujillo, Octubre del 2 013. v. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. Carlos Nomberto Rodríguez. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. PRESIDENTE. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. DE. Dra. Icela Marissa Rodríguez Haro. M. S. c. Nelly Vásquez Valles VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIA. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe, asesor de la tesis “Efecto de la concentración del. extracto. AC IÓ. N. hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. “granada” sobre la viabilidad de. UN IC. Staphylococcus aureus in vitro”.. M. CERTIFICA. CO. Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su respectivo proyecto y. A. Y. con las orientaciones pertinentes al tesista.. ÁT. IC. Tal informe, ha sido redactado bajo mi asesoramiento acogiendo mis observaciones y. RM. sugerencias alcanzadas, por lo que autorizo al Bachiller César Eduardo Cárdenas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. Aguilar para continuar con los trámites correspondientes.. Dra. Icela Rodríguez Haro Profesor Asociado del Departamento de Microbiología y Parasitología – CC. BB. Universidad Nacional de Trujillo. vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MIEMBROS DEL JURADO. Los suscritos, miembros del jurado, declaran que la presente tesis ha sido ejecutada en. AC IÓ. N. concordancia con las normas de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y. A. Y. CO. M. UN IC. Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo.. ÁT. IC. Dr. Carlos Nomberto Rodríguez. EM. AS. DE. IN FO. RM. PRESIDENTE. SECRETARIA. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. Dra. Icela Marissa Rodríguez Haro. M. S. c. Nelly Vásquez Valles VOCAL. viii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. “granada” sobre la viabilidad de Staphylococcus aureus in vitro. N. RESUMEN. AC IÓ. El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo determinar el efecto de la. UN IC. concentración del extracto hidroalcohólico de las hojas de Punica granatum L. “granada” sobre la viabilidad de Staphylococcus aureus coagulasa positivo y. CO. M. Staphylococcus aureus ATCC 25923, in vitro. Las hojas de este arbusto fueron. Y. recolectadas en el Distrito de Chao, Provincia de Virú, Departamento de La Libertad,. IC. A. Perú; fueron puestas a macerar en alcohol etílico al 70% y luego concentradas mediante. ÁT. la eliminación del solvente a rotavapor para poder obtener un residuo que constituyó el. RM. extracto hidroalcohólico, a partir del cual se prepararon las concentraciones a evaluar de. IN FO. 50; 100; 200 y 400 mg/mL. La determinación del efecto antimicrobiano se realizó. DE. mediante el método de difusión en placa de Kirby Bauer. Se hicieron pocillos de 6 mm. AS. de diámetro en cada placa y luego se agregó 30 uL de cada extracto, incluyendo un. EM. control positivo (Vancomicina, 50 mg/mL) y un control negativo (agua destilada. SI ST. estéril); finalmente se incubo a 37 °C durante 24 horas.. DE. El extracto hidroalcohólico de las hojas de Punica granatum L. “granada”, a las. IO. N. concentraciones de 50; 100; 200 y 400 mg/mL, presentó actividad inhibitoria sobre los. CC. cultivos de Staphylococcus aureus coagulasa positivo y Staphylococcus aureus ATCC. RE. 25923; y a la concentración de 200 mg/mL, el extracto hidroalcohólico presentó su. DI. mayor actividad inhibitoria. Palabras clave: Extracto hidroalcohólico, Staphylococcus aureus, Punica granatum L., Viabilidad, Kirby Bauer. ix. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Effect of the concentration of the hydroalcoholic extract of Punica granatum L. "Grenade" leaves on the viability of Staphylococcus aureus in vitro. N. ABSTRACT. AC IÓ. The present research aimed to determine the effect of the concentration of the. UN IC. hydroalcoholic extract of the Punica granatum L. "Grenade" leaves on the viability of Staphylococcus aureus coagulase positive and Staphylococcus aureus ATCC 25923, in. CO. M. vitro. The leaves of this shrub were collected in Chao District, Viru Province, La. Y. Libertad Department, Peru; they were put to macerate in 70% ethyl alcohol and then. IC. A. concentrated by removing the solvent in a rotary evaporator to give a residue which. ÁT. constituted the hydroalcoholic extract, from which there were prepared to evaluate the. RM. concentrations of 50, 100, 200 and 400 mg / mL. Antimicrobial effect determination. IN FO. was made using the Kirby Bauer diffusion method. There were made 6 mm diameter. DE. little holes in each plate and then were added 30 uL of each sample, including a positive. AS. control (vancomycin, 50 mg / mL) and a negative control (sterile water), and finally. EM. incubated at 37 ° C for 24 hours.. SI ST. The hydroalcoholic extract of Punica granatum L. "Grenade" leaves to concentrations. DE. of 50, 100, 200 and 400 mg / mL, it showed inhibitory activity on cultures of. IO. N. Staphylococcus aureus coagulase positive and Staphylococcus aureus ATCC 25923;. CC. and the concentration of 200 mg / mL, the hydroalcoholic extract presented his greatest. DI. RE. inhibitory activity. Keywords: alcoholic extract, Staphylococcus aureus, Punica granatum L., Viability, Kirby Bauer.. x. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE Pag. ii. DEDICATORIA…………………………………………………………………. iii. AC IÓ. N. AUTORIDADES……………………………………………………………….... iv. PRESENTACION……………………………………………………………….. v. MIEMBROS DEL JURADO……………………………………………………. vi. M. UN IC. AGRADECIMIENTOS………………………………………………………….. vii. APROBACION………………………………………………………………….. viii. A. Y. CO. ASESOR…………………………………………………………………………. ÁT. IC. RESUMEN……………………………………………………………………….. x 01. II. MATERIAL Y MÉTODOS…………………………………………………... 08. III. RESULTADOS………………………………………………………………. 13. IV. DISCUSIÓN…………………………………………………………………. 17. EM. AS. DE. I. INTRODUCCIÓN……………………………………………………………... IN FO. RM. ABSTRACT…………………………………………………………………….... ix. SI ST. V. CONCLUSIONES……………………………………………………………. 23 24. VII. ANEXOS……………………………………………………………………. 29. DI. RE. CC. IO. N. DE. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………. xi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCION.. El uso de las plantas como medicamento. ha sido siempre desde tiempos. AC IÓ. N. antiguos el principal recurso terapéutico. Con la aparición de la industria farmacéutica y los avances de la farmacología, las plantas pasaron a ser sólo la fuente de principios. UN IC. activos de medicamentos de síntesis, para más tarde ser desplazadas por éstos; ahora hay una “vuelta a la naturaleza” con el consiguiente aumento de consumo de productos. Y. CO. M. a base de plantas medicinales. 1, 2. IC. A. Si bien es cierto que la medicina moderna ha desarrollado en la mayor parte del. RM. ÁT. mundo, grandes sectores de la población de países en desarrollo aun dependen de los. IN FO. conocimientos de la medicina tradicional, es así como las plantas con propiedades medicinales y los medicamentos herbarios se usan muchas veces para atención primaria,. DE. y en los últimos decenios, el interés científico en las terapias naturales ha aumentado. AS. enormemente en los países industrializados, hallándose hoy en día en expansión el uso. SI ST. EM. de la medicina natural. 3, 4, 5. DE. Una planta medicinal es cualquier planta que en uno o más de sus órganos. N. contiene sustancias que pueden ser utilizadas con finalidad terapéutica o que son. DI. RE. CC. IO. precursores para la semisíntesis químico-farmacéutica. 6. Las enfermedades ocasionadas por diversas cepas patógenos bacterianas, es una. de las causas que está creando la necesidad de buscar nuevas alternativas de tratamiento con una tendencia de volver a las costumbres ancestrales del uso de plantas, debido a 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las múltiples ventajas que aporta tanto en el aspecto medicinal como económico, sobre todo si se tiene en cuenta que la capacidad adquisitiva de la población es baja y el costo de los medicamentos es alto; es así que esta alternativa de tratamiento constituye la. AC IÓ. N. forma más barata y segura; y además posee la ventaja de presentar poco o ningún efecto secundario; al respecto, la Organización Mundial de la Salud estima que más de la. UN IC. mitad de los 4 000 millones de habitantes de la tierra, confía en la medicina tradicional. M. para resolver sus principales necesidades de salud y se puede decir que gran parte de las. CO. terapias tradicionales entrañan el uso de extractos de plantas o de sus metabolitos. Y. secundarios que ayudará a determinar la utilidad en la industria farmacéutica en. IC. A. beneficio de la salud; además la aparición de cepas resistentes a los fármacos. RM. ÁT. tradicionales han dado origen a una corriente competitiva por la fabricación de nuevos. DE. aquejan a la población mundial. 7, 8. IN FO. fitofármacos que sean eficaces en el tratamiento de numerosas enfermedades que. AS. Punica granatum L. (granada) es una planta medicinal cuyo fruto posee. EM. propiedades terapéuticas; el granado es conocido desde muy antiguo, su cultivo se ha. SI ST. realizado tradicionalmente en la zona de Oriente próximo, extendiéndose por el resto de. DE. Asia y el Mediterráneo, actualmente, ya está extendido por los cinco continentes.. N. Pertenece a la familia Punicaceae, que sólo posee el género Punica, de este género las. CC. IO. dos especies más conocidas son: P. granatum L., que es cultivado por sus frutos y P.. RE. nana L., que es un granado enano, de uso ornamental y frutos no comestibles, en. DI. ocasiones esta especie es considerada una variedad de P. granatum, denominándose como P. granatum var. nana L.. 9, 10. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El uso medicinal de la granada viene documentado en los textos médicos más antiguos, incluyendo el Papiro de Ebers (1550 antes de Cristo), el texto De Materia Medica de Dioscórides (año 65) y la Historia Natural de Plinio el Viejo (año 77); dentro. AC IÓ. N. de los usos de la granada se menciona que la corteza de la raíz era utilizada por los médicos de la antigüedad como antihelmíntico, y las semillas eran consideradas. UN IC. calmantes para la inflamación de membranas mucosas, también poseen una ligera 11. CO. M. acción diurética y eran recomendadas para las infecciones del tracto urinario.. Y. Muchos de los componentes de la granada se han identificado y estudiado por. IC. A. sus potenciales propiedades promotoras de la salud, como son: punicalagina,. RM. ÁT. antocianidinas, catequinas, ácido elágico, antocianos, ácidos grasos, taninos,. IN FO. elagitaninos y otros constituyentes como el potasio, la vitamina C y los fitosteroles.. DE. 9, 11, 12, 13. AS. Cada una de las partes de la granada ha demostrado poseer propiedades. EM. promotoras de la salud: las flores contienen elevadas cantidades de polifenoles y. SI ST. antioxidantes; la corteza de la raíz, hojas y frutos son ricos en elagitaninos y. DE. galotaninos; y las semillas, el aceite de semillas y la médula contienen punicalagina. La. N. granada también se ha utilizado por sus propiedades antimicrobianas durante cientos de. CC. IO. años; investigaciones realizadas han confirmado su actividad frente a varios tipos de. RE. microorganismos patógenos, incluyendo el virus de la inmunodeficiencia humana. DI. (VIH); las investigaciones han evaluado la interacción entre el extracto del fruto de la granada y 5 antibióticos frente a 30 cepas diferentes de bacterias resistentes a los antibióticos obteniéndose que dicho extracto contribuye con los antibióticos a eliminar 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las bacterias más eficazmente ya que la granada incrementa la actividad de todos los antibióticos evaluados, extendiendo con ello el tiempo de eficacia de los mismos. 11. AC IÓ. N. Los Staphylococcus aureus, son células esféricas Gram positivas agrupadas en racimos irregulares, son metabólicamente activas, crecen fácilmente en muchos tipos de. UN IC. medios de cultivo, son fermentadores de carbohidratos y crecen sobre medios. M. artificiales formando colonias grandes de borde entero, de superficie lisa y la mayoría. CO. de ellas presentan un pigmento que va desde el amarillo crema hasta el naranja; son. Y. coagulasa positivo, lo que lo diferencia de las otras especies, es catalasa positivo y. IC. A. fermenta el manitol. Es un patógeno importante para los seres humanos debido a que. RM. ÁT. hemolisan la sangre, coagulan el plasma, y producen una variedad de enzimas y toxinas. IN FO. extracelulares; además, pueden presentar problemas terapéuticos difíciles debido a que. DE. desarrollan rápidamente resistencia a muchos agentes antimicrobianos. 14, 15. AS. Staphylococcus aureus es la principal especie patógena de su género, y es causa. EM. común de infecciones diversas, tanto de origen comunitario como hospitalario; la. SI ST. variabilidad de S. aureus, la rápida respuesta adaptativa frente a cambios del medio, y. DE. su continua adquisición de determinantes de resistencia antibiótica, han hecho de éste. N. un residente habitual del hábitat hospitalario, donde origina problemas de. CC. IO. multirresistencia; aunque el término resistencia a meticilina incluye resistencia a. RE. derivados ß-lactámicos, las cepas de S. aureus resistentes a la meticilina (SARM). DI. presentan, en general, resistencia múltiple a varios antibióticos, como: cloranfenicol, tetraciclinas, macrólidos, lincosaminas, aminoglucósidos e, incluso, quinolonas, describiéndose cada vez con mayor frecuencia brotes SARM sensibles sólo a los 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. glucopéptidos.. 16, 17. Esta tendencia que muestran las cepas SARM, de acumular. resistencia adicional, da como resultado el incremento de los problemas terapéuticos. AC IÓ. N. con la reducción de las opciones terapéuticas contra esta bacteria. 7. Las opciones terapéuticas para pacientes con infecciones SARM al ser limitadas,. UN IC. la opción primaria es terapia con Vancomicina intravenosa, ya que otros. M. antimicrobianos, incluyendo las fluoroquinolonas y cefalosporinas de tercera. CO. generación, son inefectivas contra SARM; la emergencia de S. aureus con resistencia. Y. intermedia a glicopéptidos y SARM heterorresistente sugiere que la resistencia. IC. A. completa a glicopéptidos puede desarrollarse rápidamente y limitar la utilidad de 18. IN FO. RM. ÁT. Vancomicina, lo cual subraya la necesidad de nuevos antibióticos.. Las cepas patógenas resistentes han surgido principalmente en los hospitales a. DE. consecuencia de varios factores como son el amplio uso de antibióticos, las dosis. AS. utilizadas, el tiempo de tratamiento, y la eliminación de la mitad de la droga que no se. EM. alcanza a metabolizar en su totalidad, otros elementos que influyen son las altas. SI ST. posibilidades de transmisión o contagio y el estado inmunocomprometido de los. IO. N. DE. pacientes que los hace susceptibles a infecciones con patógenos oportunistas. 7. CC. En algunas investigaciones con extractos de vegetales se demuestra que: El. RE. extracto hidroalcohólico, de la hoja y corteza de Myrciaria dubia “camu camu” presentó. DI. actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus 8. En otro trabajo similar los extractos etanólicos de Bidens pilosa y Lantana cámara presentaron una buena actividad antibacteriana sobre Staphylococcus aureus. 30. . Duman y Col., en una. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. investigación con extractos del fruto de seis variedades genotípicas de. Punica. granatum L., demostraron que estos presentan una buena acción inhibitoria sobre los cultivos de Bacillus megaterium, Pseudomona aeruginosa, Staphylococcus aureus,. 34. AC IÓ. luteus.. N. Corynebacterium xerosis, Escherichia coli, Enterococcus faecalis y Micrococcus Estos reportes impulsan a continuar con la búsqueda de nuevas alternativas. M. UN IC. terapéuticas, con una gran probabilidad de hallar nuevas fuentes de antimicrobianos.. CO. La flora peruana constituye una de las mayores reservas de recursos. Y. fitoterapéuticos, numerosas especies han sido estudiadas, obteniéndose de ellas. IC. A. importantes compuestos biológicamente activos que han contribuido a aliviar las. RM. ÁT. dolencias de la humanidad; la vinculación de la medicina tradicional con la medicina. IN FO. científica a través de la investigación etnobotánica, el estudio de los principios activos y la validación de la actividad terapéutica de las plantas, permitirá disponer de recursos. AS. 19. DE. SI ST. JUSTIFICACION.. EM. la población.. DE. regionales naturales para el tratamiento de las enfermedades que afectan comúnmente a. N. Por lo expuesto anteriormente. La presente tesis tuvo por finalidad investigar el. CC. IO. efecto de las diferentes concentraciones del extracto hidroalcohólico de las hojas de. RE. Punica granatum L. (granada), un arbusto muy difundido en nuestra región, sobre la. DI. viabilidad de Staphylococcus aureus, para su uso tanto en la medicina como en el campo farmacéutico y microbiológico, brindando así una alternativa natural al tratamiento de diversas enfermedades causadas por la infección con este germen. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBJETIVOS.. 1. Determinar el efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de. AC IÓ. N. Punica granatum L. “granada” sobre la viabilidad de Staphylococcus aureus “in vitro”.. UN IC. 2. Determinar cuál de las concentraciones de 50, 100, 200 y 400 mg/mL del extracto. M. hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. “granada” tiene mayor efecto sobre. CO. la viabilidad de Staphylococcus aureus “in vitro”.. Y. 3. Determinar si el extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. “granada”. IC. A. presenta mayor efecto sobre Staphylococcus aureus coagulasa positivo o sobre. RM. ÁT. Staphylococcus aureus ATCC 25923, mediante el cálculo del efecto inhibitorio. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. relativo.. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIAL Y MÉTODO. 1.. Material de estudio. Hojas de Punica granatum L. (granada) recolectadas en el. Distrito de Chao,. AC IÓ. N. ubicado a 130 m.s.n.m. (08°32' 03" Latitud sur, 78°40' 33" Latitud oeste), Provincia de Virú, Departamento de la Libertad – Perú.. UN IC. Cultivos de Staphylococcus aureus ATCC 25923 y Staphylococcus aureus. M. coagulasa positivo, proporcionados por el laboratorio de Bacteriología del. Procedimiento.. RM. 2.. ÁT. IC. A. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.. Y. CO. Departamento de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias. IN FO. 2.1 Recolección y transporte de muestra. Las hojas de P. granatum L.. 20. fueron recolectadas. y transportadas al. DE. Laboratorio de Bacteriología en bolsas de papel e inmediatamente fueron. EM. AS. desramificadas y procesadas para evitar su deterioro.. SI ST. 2.2 Tratamiento y obtención del extracto hidroalcohólico. Las hojas fueron lavadas con agua corriente y luego enjuagadas con agua. DE. destilada, a continuación fueron puestas a secar en una estufa a 40 °C por 72. DI. RE. CC. IO. N. horas; luego fueron pulverizadas en molino hasta obtener un polvo fino, a partir del cual se pesó 90 g y se maceraron en 500 mL de alcohol etílico al 70% Alc. Vol. durante 6 días en oscuridad. Al término de este tiempo se reflujo por dos horas y se filtró en caliente y se concentró a sequedad en rotavapor obteniéndose un residuo que constituyó el extracto hidroalcohólico base (al 18% p/v).. 21, 22, 23. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3 Preparación de las concentraciones del extracto. A partir del extracto hidroalcohólico base obtenido se prepararon las concentraciones a evaluar, usándose para ello agua destilada estéril y bajo. AC IÓ. N. condiciones de asepsia. Las concentraciones preparadas fueron 50; 100; 200 y. UN IC. 400 mg/mL respectivamente.. M. 2.4 Activación de los cultivos y Pruebas de pureza.. CO. Los cultivos de S. aureus ATCC 25923 y S. aureus coagulasa positivo,. ÁT. 14. para su reactivación, y se incubaron. RM. a 37 °C por 20 – 24 horas.. 24. IC. Caldo Infusión Cerebro Corazón (BHI). A. Y. proporcionados por el laboratorio de Bacteriología, se sembraron en medio. IN FO. Crecimiento en Agar Manitol Salado.. 24. y se incubaron a 37 °C por 20 – 24 horas, luego de lo. AS. Agar Manitol Salado. DE. A partir de los cultivos reactivados en caldo BHI se realizaron siembras en. EM. cual se obtuvo el crecimiento de colonias amarillas y de bordes regulares. Se. SI ST. tomaron colonias aisladas y se sembró en Agar nutritivo inclinado. 24. DE. Prueba de la coagulasa.. DI. RE. CC. IO. N. Los cultivos de S. aureus obtenidos fueron sometidos a la prueba de la coagulasa, para lo cual en tubos de ensayo estériles se agregó 0.5 mL de plasma de conejo y luego se hizo una suspensión con los cultivos jóvenes de cada bacteria y se llevó a incubación a 37 °C. Se hizo un control del cultivo cada media hora durante las cuatro primeras horas.. 25. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Bajo las condiciones mencionadas se obtuvo la formación de un coagulo a las 4 horas de incubación de cada suspensión evaluada.. N. Tinción de Gram.. AC IÓ. A los cultivos evaluados se les tiño según la técnica de Gram, observándose. 14. M. característica (racimos).. UN IC. células coloreadas de color azul oscuro o violeta con su respectiva agrupación. CO. 2.5 Preparación y estandarización del inóculo bacteriano.. A. Y. Se tomaron muestras de S. aureus ATCC 25923 y de S. aureus coagulasa. ÁT. IC. positivo y se hizo una suspensión de cada germen en tubos de ensayo con 10. RM. mL de solución salina fisiológica estéril, respectivamente. Luego se. 26. DE. 108 ufc/mL).. IN FO. estandarizó cada inóculo con el tubo 0.5 del nefelómetro de Mac Farland (1.5 x. AS. 2.6 Evaluación del efecto de la concentración del extracto hidroalcohólico de. EM. hojas de Punica granatum L. “granada” sobre la viabilidad de. SI ST. Staphylococcus aureus “in vitro”. 27. . Se. DE. La evaluación se realizó mediante el método de difusión de Kirby-Bauer. N. sembró cada inóculo estandarizado de S. aureus en placas con Agar Müller. DI. RE. CC. IO. Hinton. 24. , dentro de los 15 minutos de haber sido ajustado la turbidez, por la. técnica de siembra en placa vertida. Posteriormente se hicieron pocillos de 6 mm de diámetro en cada placa, y a cada pocillo se agregó 30 uL de cada concentración preparada (50; 100; 200 y 400 mg/mL) del extracto hidroalcohólico. Se incluyó un control positivo (Vancomicina. 28. ) y un control. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. negativo (agua destilada estéril); finalmente las placas se incubaron a 37 °C por 24 horas. Cada concentración fue evaluada por triplicado. 26,. 29. 2.7 Lectura de los resultados.. AC IÓ. N. Al término de las 24 horas de incubación se procedió a medir los diámetros de las zonas de inhibición completa (incluyendo el diámetro del disco). Se realizó. UN IC. manteniendo iluminada la parte posterior de la placa petri sobre un fondo. M. negro, con la precaución de observar la placa siguiendo una vertical directa. CO. para evitar una lectura errónea de las marcas de la regla por efecto de. Y. paralelismo. Se tomó como punto final el área que no muestra un crecimiento. ÁT. 26, 27. RM. expresaron en milímetros (mm).. IC. A. obvio visible; se tomaron tres medidas por cada halo de inhibición y se. IN FO. Dichos resultados sirvieron para calcular el efecto inhibitorio relativo del. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. extracto hidroalcohólico, el cual se obtuvo mediante la siguiente relación: 30. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3.. Análisis estadístico. Se aplicó análisis de varianza (ANOVA) a los datos de los halos obtenidos para determinar si hay alguna diferencia significativa entre las concentraciones del. AC IÓ. N. extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada”, lo que ayudará a determinar si éstos influyen en los diámetros de los halos formados por los cultivos. UN IC. de S. aureus ATCC 25923 y S. aureus coagulasa positivo. Además se utilizó el Test. M. de Duncan para identificar las diferencias significativas entre las medias de los 31, 32. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. halos obtenidos frente a cada concentración evaluada del extracto.. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III. RESULTADOS. En la Fig. 01 se presenta el promedio de los diámetros de los halos de inhibición, expresado en milímetros, formados por acción de las concentraciones de 50; 100; 200 y. AC IÓ. N. 400 mg/mL del extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. sobre el crecimiento de S. aureus coagulasa positivo, a las 24 horas de incubación, mediante el. UN IC. método de difusión en placa de Kirby Bauer; se observa que a medida que aumenta la. M. concentración del extracto también aumenta la inhibición radial, siendo a la. CO. concentración de 200 mg/mL a la cual se obtuvo la mayor media (33.92 mm) para. A. Y. luego mostrar una disminución a 33.78 mm, correspondiente a la concentración de 400. ÁT. IC. mg/mL.. RM. En la Fig. 02 se presenta el promedio de los diámetros de los halos de inhibición,. IN FO. expresado en milímetros, formados por acción de las concentraciones de 50; 100; 200 y. DE. 400 mg/mL del extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. sobre el. AS. crecimiento de S. aureus ATCC 25923, a las 24 horas de incubación, mediante el. EM. método de difusión en placa de Kirby Bauer; se observa que a medida que aumenta la. SI ST. concentración del extracto también aumenta la inhibición radial, siendo a la. DE. concentración de 200 mg/mL a la cual se obtuvo la mayor media (30.56 mm) para luego. N. mostrar una disminución a 30.06 mm, correspondiente a la concentración de 400. CC. IO. mg/mL.. RE. En la Fig. 03 se compara el efecto inhibitorio relativo de las concentraciones de 50;. DI. 100; 200 y 400 mg/mL del extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. sobre el crecimiento de los cultivos de S. aureus coagulasa positivo y de S. aureus ATCC 25923, a las 24 horas de incubación, mediante el método de difusión en placa de Kirby 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Bauer. Se observa que el extracto hidroalcohólico presentó mayor efecto inhibitorio. 30. sobre S. aureus coagulasa positivo, sobre el cual mostro hasta un 105.65% de inhibición. M. UN IC. Staphylococcus aureus coagulasa positivo. AC IÓ. N. (con respecto al control positivo, Vancomicina a 50 mg/mL.).. CO. 40. Y. IC. 32.10. ÁT. 28.11. A. 30.50. 33.78. IN FO. RM. 30. AS. DE. 20. EM. 10. 50.00. 100.00. 200.00. 400.00. Concentracion del Extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. (mg/mL). Control positivo. CC. IO. N. DE. 0. SI ST. Halo de Inhibición (mm). 33.92. RE. *control positivo: Vancomicina, 50 mg/mL.. DI. Fig. 01. Promedios de los diámetros de los halos de inhibición formados por S. aureus coagulasa positivo frente a cada concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada”. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. Staphylococcus aureus ATCC 25923. M. 30.06. 30.56. CO. 28.08. 30. UN IC. 30.56. IC. A. Y. 25.56. IN FO. RM. ÁT. 20. DE. 10. AS. Halo de Inhibición (mm). 40. EM. 0. 100.00. 200.00. SI ST. 50.00. 400.00. DE. Concentracion del Extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. (mg/mL). Control positivo. N. *control positivo: Vancomicina, 50 mg/mL.. ATCC 25923 frente a cada concentración del extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada”.. DI. RE. CC. IO. Fig. 02. Promedios de los diámetros de los halos de inhibición formados por S. aureus. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IO. N. *valor referencial: la media obtenida por el control positivo, respectivamente.. DI. RE. CC. Fig. 03. Comparación del efecto inhibitorio del extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada”, a las concentraciones evaluadas, sobre los cultivos de S. aureus coagulasa positivos y S. aureus ATCC 25923.. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV. DISCUSION Las concentraciones evaluadas, así como las diluciones realizadas para la prueba de concentración mínima bactericida que se reporta en anexos 13, fueron preparadas. AC IÓ. N. usando el mismo material extraíble, el cual se obtuvo a una concentración de 18 % p/v (extracto hidroalcohólico base) según el procedimiento descrito dentro de MATERIAL. UN IC. y MÉTODO. El extracto hidroalcohólico base fue conservado en refrigeración y. CO. M. mantenido en oscuridad hasta el momento en que se usaba para realizar cada ensayo.. Y. El antibiótico Vancomicina, usado como control positivo, fue conservado en. IC. A. refrigeración hasta el momento de su uso, para lo cual se realizó la resuspensión del. ÁT. liofilizado con agua destilada estéril hasta una concentración de 50 mg/mL. Esto estuvo. RM. detallado en las indicaciones del producto, en el cual también sugieren conservar a una. IN FO. temperatura inferior a 15 °C luego de ser resuspendido para mantener su estabilidad por. DE. 30 días. La inhibición radial de S. aureus por acción del control positivo sirvió para. AS. calcular la media de su efecto y así tener un valor referencial para determinar el efecto. EM. inhibitorio relativo 30 del extracto, a las concentraciones evaluadas, sobre el crecimiento. SI ST. de S. aureus coagulasa positivo y S. aureus ATCC25923.. DE. En Anexos 05 se muestran las medidas de los halos de inhibición de S. aureus. IO. N. coagulasa positivo por efecto de las concentraciones evaluadas del extracto. CC. hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada”. En resultados, Fig. 01, se. RE. muestran las medias de la inhibición radial frente a cada concentración del extracto, y se. DI. puede observar que a medida que aumenta la concentración de 50 a 100; 200 y 400 mg/mL también aumenta el diámetro del halo de inhibición, siendo a la concentración. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de 200 mg/mL a la cual se obtuvo el mayor halo (33.92 mm), para luego disminuir a 33.78 mm, a la concentración de 400 mg/mL. Al someter los datos obtenidos a un análisis estadístico de varianza (ANOVA), Anexos. AC IÓ. N. 07, se obtuvo que hay una diferencia significativa (α = 0.05) entre las medias de la inhibición radial por acción de las concentraciones de 50; 100; 200 y 400 mg/mL del. UN IC. extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada” sobre el crecimiento de. M. S. aureus coagulasa positivo; sin embargo, fue necesario usar la prueba Post Hoc o Post. CO. Anova (Prueba de Duncan) para poder analizar la significancia de las medias,. A. Y. obteniéndose que las concentraciones de 50 y 100 mg/mL, que formaron halos de 28.11. ÁT. IC. y 30.50 mm, respectivamente, no presentan diferencia significativa, por lo cual. RM. presentan el mismo efecto; a la vez, las concentraciones de 200 y 400 mg/mL, que. IN FO. formaron halos de 33.92 y 33.78 mm, respectivamente, tampoco presentaron diferencia significativa, por lo cual, también presentan la misma inhibición radial. Finalmente, se. DE. obtuvo que hay diferencia significativa entre los grupos homogéneos señalados, Anexos. EM. AS. 08, y son las concentraciones de 200 y 400 mg/mL las que ejercen el mayor efecto.. SI ST. También se pudo observar que a partir de la concentración de 200 mg/mL hay una disminución en la inhibición radial, posiblemente a esta concentración se obtuvo el. N. DE. efecto máximo del extracto para luego declinar, Anexos 06.. CC. IO. En Anexos 09, se muestran las medidas de los halos de inhibición formados por efecto. RE. de las concentraciones evaluadas del extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum. DI. L. “granada” sobre S. aureus ATCC 25923. En resultados, Fig. 02, se puede observar que a medida que aumenta la concentración del extracto de 50 a 100; 200 y 400 mg/mL también aumenta la inhibición radial, siendo a la concentración de 200 mg/mL a la. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. cual se obtuvo el mayor halo (30.56 mm), para luego disminuir a 30.06 mm a la concentración 400 mg/mL. Al realizar el análisis estadístico de varianza de los datos (ANOVA), Anexos 11, se. AC IÓ. N. obtuvo que hay una diferencia significativa (α = 0.05) entre las medias de los halos formados por efecto de las concentraciones de 50; 100; 200 y 400 mg/mL del extracto. UN IC. hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada” sobre el crecimiento S. aureus. M. ATCC 25923; sin embargo, fue necesario usar la prueba Post Hoc o Post Anova (Prueba. CO. de Duncan) para poder analizar la significancia de las medias; se obtuvo que la. Y. formaron halos de 30.56 y 30.06 mm. A. concentración de 200 y 400 mg/mL, que. ÁT. IC. respectivamente, no presentan diferencia significativa entre si, por lo cual ejercen la. RM. misma acción inhibitoria; sin embargo, se determinó que éstas concentraciones. IN FO. homogéneas sí difieren significativamente de las concentraciones de 50 y 100 mg/mL. (Con medias de 25.56 y 28.08 mm, respectivamente), y éstas a su vez difieren. DE. significativamente entre si. Por lo tanto, es a la concentración de 200 y 400 mg/mL a la. EM. AS. cual se obtuvo el mayor efecto, Anexos 12; también se pudo observar que a partir de la. SI ST. concentración de 200 mg/mL hay una disminución en la inhibición radial, posiblemente a esta concentración nuevamente se obtuvo el efecto máximo del extracto para luego. N. DE. declinar, Anexos 10.. CC. IO. En Anexos 13, se muestra el efecto inhibitorio relativo de cada concentración evaluada. RE. del extracto sobre los cultivos de S. aureus coagulasa positivo y S. aureus ATCC 25923,. DI. lo que fue calculado relacionando las medias de los diámetros de la inhibición radial frente a cada concentración evaluada del extracto con respecto a la media de la inhibición radial por acción del control positivo. 30. . Estos datos permitieron comparar el. efecto de las concentraciones evaluadas del extracto sobre cada cultivo de 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Staphylococcus aureus evaluado, resultados Fig. 03, observándose que hay un mayor efecto del extracto sobre S. aureus coagulasa positivo; pero de manera general el extracto presentó un efecto mayor al 80 % sobre los cultivos evaluados. En algunos. AC IÓ. N. casos se observa un efecto superior al 100%, por encima del efecto del control positivo, es decir, un efecto mayor al control positivo, pero hay que considerar que este se usó a. UN IC. una concentración de 50 mg/mL.. M. Todos estos resultados demuestran que las concentraciones evaluadas del extracto. CO. hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada” presentan. un alto efecto. A. Y. inhibidor sobre la viabilidad de los cultivos de S. aureus coagulasa positivo y S. aureus. ÁT. IC. ATCC 25923, in vitro.. RM. El extracto hidroalcohólico preparado a base de hojas de Punica granatum L., presentó. IN FO. un alto efecto sobre los cultivos de S. aureus evaluados, dando evidencia de un. DE. potencial antimicrobiano de gran utilidad que puede ser usado como una alternativa. AS. contra este germen que ha mostrado una variada resistencia a los antibióticos clásicos.. EM. Sin embrago, aun son pocos los reportes acerca del uso de las hojas de este árbol con. SI ST. aplicaciones antimicrobianas, ya que es al fruto al que se le ha dado mayores atributos. DE. medicinales, pero es de mucha utilidad dar a conocer las propiedades antimicrobianas. IO. N. de las hojas por ser una materia prima disponible durante todo el año.. CC. Hay reportes en el que se le atribuye otras propiedades medicinales a las hojas de la. RE. granada, algunas de ellas son sus propiedades anti inflamatorias y anti cancerígenas, en. DI. Brasil se usan tanto las hojas como las semillas como fuente de agentes Fitoterapéuticos 34, 35. . Algunos autores han hecho referencia a los principales constituyentes químicos de. las hojas de la granada, algunos de los cuales son propios de este árbol: flavonoides, 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. taninos (elagitaninos, galotaninos, punicalina), un tanino elágico (punicafolina), granatinas A y B, corilagina; y glucosidos flavonoides, incluidos la luteolina y apigenina. 35, 36, 37. AC IÓ. N. Elfalleh W. y Col. reportan el efecto antioxidante de un extracto acuoso de hojas de granada y a la vez identifican los fitoconstituyentes del extracto: alcaloides, flavonoides,. UN IC. saponinas y taninos. 38. M. Wang R. y Col. informan de una manera más detallada los constituyentes bioactivos de. CO. las hojas de la granada, y a la vez indican que un extracto de granada exhibe un efecto. Y. inhibidor significativo sobre bacterias patógenas comunes, especialmente sobre. IC. A. bacterias gram positivas. 39. RM. ÁT. Akpinar - Bayizit A. y Col. informan que las hojas de granada contienen taninos únicos,. IN FO. tales como: punicalina y punicafolina, y que también contienen glucósidos de apigenina; en un trabajo en el que se investigaba las propiedades anticancerígenas de la. DE. granada. 40. 27. (CMB). EM. AS. Adicionalmente se realizó la prueba de concentración mínima bactericida. SI ST. por el método de macrodilución en tubo, reportado en Anexos 17, para lo cual se realizaron siete diluciones seriadas del extracto hidroalcohólico, incluidos un control. DE. positivo y un control negativo, iniciándose con la menor concentración evaluada en el. IO. N. método de difusión en placa (50 mg/mL); se realizaron diluciones al medio: 50.00;. CC. 25.00; 12.50; 6.25; 3.13; 1.56 y 0.78 mg/mL contra los cultivos de S. aureus coagulasa. RE. positivo y S. aureus ATCC 25923; dicho ensayo se realizó por duplicado y se usó el. DI. medio Agar nutritivo. 24. para evidenciar la viabilidad de los cultivos. Se obtuvo que la. concentración de 25.00 mg/mL es la concentración mínima bactericida para ambos cultivos evaluados. 26, 29, 33 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Este ensayo refuerza los resultados obtenidos por el método de difusión en placa, indicando que las concentraciones mayores e iguales a 25 mg/mL, el extracto hidroalcohólico de hojas de P. granatum L. “granada” presenta acción bactericida sobre. AC IÓ. N. los cultivos de S. aureus coagulasa positivo y S. aureus ATCC 25923. Los reportes presentados demuestran que las hojas de la granada presentan. UN IC. fitoconstituyentes que pueden ser de gran utilidad terapéutica, esto, sumado a los. M. resultados obtenidos en este trabajo ponen en evidencia las propiedades inhibitorias de. CO. un extracto hidroalcohólico preparado con las hojas de P. granatum L. sobre los. A. Y. cultivos de S. aureus evaluados. Sin embargo, aún falta probar su acción sobre otras. ÁT. IC. bacterias de interés clínico, así como también sobre otros agentes patógenos tales como. RM. hongos, virus y otros parásitos, lo que tal vez permita que su uso no sólo sea en el. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. campo clínico, sino también en la industria de los alimentos.. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V. CONCLUSIONES Todas las concentraciones evaluadas del extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. “granada” presentaron efecto inhibidor sobre la viabilidad de los cultivos. AC IÓ. N. de Staphylococcus aureus coagulasa positivo y Staphylococcus aureus ATCC 25923,. UN IC. in vitro.. El extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. “granada” presento su. CO. M. mayor efecto inhibidor a la concentración de 200 mg/mL, tanto sobre Staphylococcus. A. Y. aureus coagulasa positivo como sobre Staphylococcus aureus ATCC 25923, in vitro.. ÁT. IC. El extracto hidroalcohólico de hojas de Punica granatum L. “granada” presentó mayor. RM. efecto inhibitorio sobre la viabilidad de Staphylococcus aureus coagulasa positivo, in. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. vitro.. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFIAS 1.. López L. Aspectos legales de la fitoterapia. Rev. Offarm. España. 2003; 22 (7): 8083.. N. Baulies R. y Torres C. Actualización en fitoterapia y plantas medicinales. Rev.. AC IÓ. 2.. FMC – Formación Médica Continuada en Atención Primaria. España. 2012; 19(3):. Hernández R. Fitoterapia. Bases científicas y legales para su aplicación. Rev.. M. 3.. UN IC. 149-60.. Y. Lozoya X. y Cañigueral S. Sobre la Fitoterapia. Rev. Redalyc. Chile. 2006; 5(4):. A. 4.. CO. Redalyc. Chile. 2005; 4(4): 71-74.. ÁT. Zambrana A. Beneficios de la fitoterapia. Rev. Cubana Plant. Med. Cuba. 2005;. RM. 5.. IC. 67.. 6.. IN FO. 10(2). Cañigueral S. y Col. Plantas Medicinales y Fitoterapia: ¿Indicadores de. DE. Dependencia o Factores de Desarrollo? Lat. Am. J. Pharm. España. 2003; 22 (3):. Concepción G. Actividad antibacteriana de extractos vegetales en cepas. SI ST. 7.. EM. AS. 265-278. ISSN 0326-2383.. hospitalarias de Staphylococcus aureus con resistencia múltiple. (Tesis Doctoral).. N. Mori del Águila T. y Col. Efecto antimicrobiano de Myrciaria dubia “camu camu”. IO. 8.. DE. Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro. México. 2006.. RE. CC. y Cyperus luzulae “piripiri” sobre microorganismos patógenos. Universidad. DI. 9.. Nacional de La Amazonia Peruana. PERU. 2010 Mira Q. El Granado - I Jornadas nacionales sobre el granado: Producción, economía, industrialización, alimentación y salud. Rev. SPE.3 – Especialistas en Servicios Profesionales. España. 2010 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10. Sánchez Lamar, A. y Col. Extracto de frutos enteros de Punica granatum L. como agente protector del daño inducido por el peróxido de hidrógeno. Rev. Cubana. AC IÓ. N. Plant. Med. Cuba 2005; 10 (2). 11. Jeremy Appleton. Granada. Woodland Publishing. Estados Unidos. 2007.. UN IC. 12. Chéchile T. Utilidad del zumo de granada en oncologia, urologia y andrologia.. M. Instituto Médico Tecnológico. España. 2010.. CO. 13. Chéchile T. Utilidad de la granada en los pacientes urológicos. Instituto de. Y. Enfermedades Prostáticas. España.. IC. A. 14. Brooks, G. F., Butel, J. S., Morse, S. A. Microbiología médica de Jawetz, Melnick. RM. ÁT. y Adelberg. 24 a. ed. Estados Unidos: The McGraw – Hill; 2007.. IN FO. 15. Sacsaquispe C. y Col. Manual de procedimientos bacteriológicos en infecciones intrahospitalarias. Ministerio de Salud del Perú - Instituto Nacional de Salud. Perú.. DE. 2001; (Serie de Normas Técnicas, No 28).. AS. 16. Garcia A. y Col. Sensibilidad a antimicrobianos de cepas de Staphylococcus aureus. EM. resistente a meticilina procedentes de pacientes ambulatorios. Rev. Esp. Quimioter.. J. y Sánchez R. Infección por Staphylococcus aureus resistente a. DE. 17. Camarena. SI ST. España. 2011; 24(2): 91-95.. N. meticilina. Rev. SEIMC – Sociedad Española de Enfermedades Infecciosas y. CC. IO. Microbiología Clínica. España. 1998.. DI. RE. 18. Mamani E. y Col. Perfil de sensibilidad y resistencia de Staphylococcus aureus. Experiencia en el Hospital Nacional Hipólito Unanue. Anales de la Facultad de Medicina. Perú. 2006; 67(2).. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 19. Mejía K. y Rengifo E. Plantas Medicinales de Uso Popular en la Amazonía Peruana. Agencia Española de Cooperación Internacional. Perú. 2000. 20. Herbarium Truxillense. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional De. 21. Arroyo J. y Col.. AC IÓ. N. Trujillo. Hut: N° 02-2013. Actividad antihipertensiva y antioxidante del extracto. UN IC. hidroalcohólico atomizado de Maíz morado (Zea mays L.) en ratas. Rev. Perú Med.. M. Exp. Salud Pública. Perú. 2008; 25(2): 195-199.. CO. 22. Moreno L. y Paz A. Efecto vasodilatador mediado por óxido nítrico del extracto. Y. hidroalcohólico de Zea mays L. (maíz morado) en anillos aórticos de rata. Rev.. IC. A. Perú Med. Exp. Salud Pública. Perú. 2010; 27(4): 527-531.. RM. ÁT. 23. Tasayco Y. Actividad hipoglucemiante del extracto hidroalcohólico de las hojas de. IN FO. Smallanthus sonchifolius (yacón) en ratas con diabetes tipo 1 y 2. (Tesis de Maestría). Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Perú. 2007.. DE. 24. Manual Básico de Microbiología - Cultimed. 4°ed. Panreac – Quimica S. A.. AS. España. 2003.. EM. 25. MacFaddin J. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de. SI ST. importancia clínica. 3° ed. Edit. Medica panamericana. Argentina. 2003.. DE. 26. Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos para la prueba de. N. sensibilidad antimicrobiana por el método de disco difusión. Ministerio de Salud. CC. IO. del Perú - Instituto Nacional de Salud. Perú 2002; (Serie de Normas Técnicas, No. RE. 30).. DI. 27. Cavalieri J. y Col. Manual de pruebas de susceptibilidad antimicrobiana. Library of Congress Cataloging in Publication Data. Estados Unidos 2005; ISBN 1-55581347-X 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 28. Mensa J. y Col. Guía de tratamiento de la infección producida por Staphylococcus aureus resistente a meticilina. Rev. Esp. Quimioter. España. 2008; 21(4): 234-258. 29. Anlis G. Malbrán.. Manual de procedimientos para la determinación de la. AC IÓ. N. sensibilidad a los antimicrobianos en bacterias aisladas de humanos. Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas, Ministerio de Salud. Argentina 2001.. UN IC. 30. Cruz-Carrillo, A., Rodríguez N., Rodríguez, C. E. Evaluación in vitro del efecto. M. antibacteriano de los extractos de Bidens pilosa, Lantana camara, Schinus molle y. CO. Silybum marianum. Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgación Científica.. Y. Colombia 2010; 13 (2): 117-124.. IC. A. 31. Córdova Zamora M. Estadística aplicada. 1° ed. Edit. Moshera. Perú. 2008.. IN FO. Pontificia Comillas. España. 2011.. RM. ÁT. 32. Morales V. Análisis de varianza para varias muestras independientes. Universidad. 33. Horna Q. y Col. Concentración mínima inhibitoria y concentración mínima. DE. bactericida de ciprofloxacina en bacterias uropatógenas aisladas en el Instituto. AS. Nacional de Enfermedades Neoplásicas. Rev. Med. Hered. Peru. 2005; 16 (1): 39-. EM. 45.. SI ST. 34. Duman A. y Col. Antimicrobial Activity of Six Pomegranate (Punica granatum L.). DE. Varieties and Their Relation to Some of Their Pomological and Phytonutrient. N. Characteristics. Rev. Molecules. Turkey. 2009; 14: 1808-1817. ISSN 1420-3049.. CC. IO. 35. Jurenka J. Therapeutic Applications of Pomegranate (Punica granatum L.): A. RE. Review. Alternative Medicine Review. Estados Unidos. 2008; 13(2): 128-144.. DI. 36. Miguel M. y Col.. Pomegranate (Punica granatum L.): A medicinal plant with. myriad biological properties - A short review. Journal of Medicinal Plants Research. Portugal. 2010; 4(25): 2836-2847. ISSN 1996-0875. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 37. Peña N. Actividad antiviral de un extracto liofilizado del fruto de Punica granatum L. frente al virus de la Influenza. (Tesis Doctoral). Instituto de Medicina Tropical Pedro Kourí. Cuba. 2007.. AC IÓ. N. 38. Elfalleh W. y Col. Total phenolic contents and antioxidant activities of pomegranate peel, seed, leaf and flower. Journal of Medicinal Plants Research.. UN IC. Túnez. 2012; 6: 4724-4730. ISSN 1996-0875. M. 39. Rufeng W. y Col. Pomegranate: Constituents, Bioactivities, and Pharmacokinetics.. CO. Fuit, Vegetable and Cereal Science and Biotechnology. China. 2010; 4 (2): 77-87.. Y. 40. Akpinar-Bayizit A. y Col. The Therapeutic Potential of Pomegranate and Its. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Products for Prevention of Cancer. Intech. Turkey. 2012.. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. VII. ANEXOS. 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 01. Muestras de ramas de Punica granatum L. (granada) recolectadas en el. Fig. 01: Punica granatum L. (granada). DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Distrito de Chao, Provincia de Virú, Departamento de la Libertad – Perú.. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Anexo 02. Crecimiento de Staphylococcus aureus en Agar manitol salado. (fig. 2 y 3). DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. Fig. 02: S. aureus coagulasa positivo. Fig. 03: S. aureus ATCC 25923. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Anexo 03. Prueba de la coagulasa, a las 4 horas de incubación.. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. Fig. 04: Suspensión de S. aureus coagulasa positivo (tubo superior) y de S. aureus ATCC 25923 (tubo inferior) en plasma de conejo. Inicio de la prueba.. DI. RE. CC. IO. N. DE. Fig. 05: Suspensión de S. aureus coagulasa positivo (tubo superior) y de S. aureus ATCC 25923 (tubo inferior) en plasma de conejo. Final de la prueba.. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Anexo 04. Coloración Gram de las cepas (observación de la pureza de los cultivos).. Fig. 06: S. aureus Coagulasa positivo. Fig. 08: Cultivos puros de S. aureus coagulasa positivo y S. aureus ATCC 25923. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. Fig. 07: S. aureus ATCC 25923. 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..