k 11 N. de publicación: ES k 21 Número de solicitud: k 51 Int. Cl. 4 : C07C 149/247

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ESPA ˜NA k 51_{Int. Cl.}4_:

_{C07C 149/247}

A61K 31/195

k 12

_{PATENTE DE INVENCION}

_A6

k

22_{Fecha de presentaci´}_{on: 24.01.89} k

73 _{Titular/es: Santen Pharmaceutical Co., Ltd.} 9-19, Shimoshinjo 3-chome Higashiyodogawa-Ku Osaka-shi, Osaka, JP k 30_{Prioridad: 25.01.88 JP 14189/88} k

45_{Fecha de anuncio de la concesi´}_{on: 16.04.90} k

72 _{Inventor/es: Morita, Takakazu;} Iso, Tadashi; Mita, Shiro y Kawashima, Yoichi

k

45_{Fecha de publicaci´}_{on del folleto de patente:} 16.04.90

k

74 _{Agente: Ungr´ıa Goiburu, Bernardo}

k

54_{T´ıtulo: Procedimiento para preparar derivados de ciste´ına.}

k

57_Resumen:

Procedimiento para preparar derivados de ciste´ına. Comprende hacer reaccionar (II) con (III) o un derivado activo del mismo, o hacer reaccionar (II) con (IV), para producir (I). En dichas f´ormulas R1

y R2_{son alquilo inferior; R}3_{y R}4_{son iguales o}

di-ferentes y representan hidrógeno, alquilo inferior, alcano´ılo inferior, fenil (sustitu´ıdo) alquilo inferior, fenil (sustitu´ıdo) carbonilo, furoilo o tenoilo; R5= hidroxi, alcoxi inferior, amino o alquilamino infe-rior; A = alquileno inferior lineal o ramificado; m = 0 ó 1; n = 1 ó 2; λ = grado de polimerización correspondiente a un peso molecular de 200-1500 a condición de que cuando m = 0, n = 1 y R5 ₌

OH, al menos uno de R3_{y R}4_{es fenil (sustitu´ıdo)}

alquilo inferior, fenil (sustitu´ıdo) carbonilo, furo´ılo o tenos´ılo; y cuando n = 2, R4 _{6= alquilo inferior.}

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 DESCRIPCION

Esta invenci´on se refiere a un procedimiento para preparar derivados de ciste´ına de f´ormula I y sus sales, R1 | R2_{—C — CONHCHCOR}5 | | (A)mSR3 (CH2)nSR4 (I) donde: R1 _{es alquilo inferior;} R2 es alquilo inferior;

R3 _{y R}4 _{pueden ser iguales o diferentes y representan hidr´}_{ogeno, alquilo inferior, alcano´ılo inferior,}

fenil (sustituido)alquilo inferior, fenil(sustituido)carbonilo, furo´ılo o teno´ılo; R5 es hidroxi, alcoxi inferior, amino o alquilamino inferior;

A es alquileno inferior lineal o ramificado; m es 0 ´o 1;

n es 1 ´o 2;

con la condici´on de que:

cuando n es 2, R4 no sea alquilo inferior, por lo menos uno de R3 y R4 sea fenil(sustituido)alquilo inferior, fenil (sustituido)carbonilo, furo´ılo o teno´ılo; y

cuando n es 2, R4 _{no sea alquilo inferior.}

Los mismos conceptos se aplicar´an m´as adelante.

A continuación, se explican con más detalle los términos que se acaban de definir.

El t´ermino “alquilo inferior” representa alquilo inferior C1−6, lineal o ramificado, por ejemplo, metilo,

etilo, propilo, isopropilo y hexilo.

El t´ermino “alcano´ılo inferior” representa alcano´ılo inferior C1−6, lineal o ramificado, por ejemplo,

acetilo, propionilo, pivalo´ılo y hexano´ılo.

La palabra “sustituido” en los términos fenil(sustituido) alquilo inferior y fenil(sustituido)carbonilo quiere indicar que el núcleo de fenilo puede estar sustituido con alquilo inferior, alcoxi inferior o halógeno. Se han hecho varios estudios sobre derivados de ciste´ına y han sido dados a conocer en las patentes estadounidenses 4.305.958, 4.241.086, 4.255.446, etc.

Se sabe que los derivados de ciste´ına tienen diversas actividades farmacológicas, por ejemplo, supresión de enfermedades hepáticas y antirreumatismo. Sin embargo, son muy pocos los estudios que hablan de las repercusiones que tiene la incorporación de un grupo alquileno en la cadena lateral de los derivados de ciste´ına, la expansión de la longitud del alquileno de la cadena lateral o el intercambio de los radi-cales, sobre su eficacia farmacológica. A la vista de esta situación, los autores de la presente invención decidieron estudiar los derivados de ciste´ına en mayor profundidad.

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

cadena lateral de los derivados de ciste´ına y de expansionar la longitud del grupo alquileno de la cadena lateral.

Según los resultados de los estudios farmacológicos, que se describen más adelante en el apartado de ensayos farmacológicos, los solicitantes han encontrado que los compuestos de esta invención tienen un excelente efecto supresor de las enfermedades hepáticas y un excelente efecto inmunomodulador.

Los compuestos de fórmula I se pueden preparar por métodos similares a los descritos en las patentes estadounidenses 4.305.958 y 4.255.446 o en la publicación de patente japonesa 12.119/1984.

A continuación se presenta los métodos t´ıpicos. Método de s´ıntesis (A):

El compuesto de fórmula (I) se puede preparar sometiendo a reacción el derivado de aminoácido de fórmula (II) con el derivado de ácido carbox´ılico de fórmula (III) o un derivado activo del mismo.

NH2CHCOR5 | (CH2)nSR4 (II) + R1 | R2_{—C — COOH} | (A)mSR3 (III) −→ R1 | R2 _{—C — CONHCHCOR}5 | | (A)mSR3 (CH2)nSR4 (I)

El derivado activo es un derivado reactivo de ácido carbox´ılico, por ejemplo, el cloruro de ácido, anh´ıdrido de ácido y anh´ıdrido de ácido mixto. El derivado activo del compuesto (III) se puede convertir en el compuesto de fórmula (I) por el método habitual, por ejemplo, el método de Schotten- Baumann, que se utiliza generalmente para condensar un derivado de amina con un derivado de ácido carbox´ılico.

El ´acido carbox´ılico se puede convertir directamente en el compuesto de f´ormula (I) utilizando un agente condensante tal com N,N’-diciclohexilcarbodiimida (DCC).

No es necesario especificar las condiciones de reacción, es decir, temperatura o tiempo de reacción. Método de s´ıntesis (B):

El compuesto de fórmula (I) se puede preparar por reacción de un derivado de aminoácido de fórmula (II) con un politioéster de fórmula (IV)

NH2CHCOR5 | (CH2)nSR4 (II) + H ——       R1 | S - C - CO — | R2       ` — OH −→ (I) (IV)

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 R1 | agente condensante HS –C – COOH −→ (IV) | R2 (V)

No es necesario especificar las condiciones de condensación del compuesto de fórmula (II) con el com-puesto de fórmula (IV) pero, normalmente, la reacción se lleva a cabo en presencia de una base tal como carbonato de sodio o carbonato de potasio.

En relaci´on con los m´etodos (A) y (B) anteriores:

1. Cuando R3 _{y/o R}4 _{son hidr´}_{ogeno, si es necesario se pueden convertir en otros grupos distintos}

de hidrógeno después de la reacción mencionada antes. La conversión se puede efectuar siguiendo cualquier método conocido que se utilice para introducir un grupo protector, etc., en un grupo tiol. 2. Cuando R5 _{es hidroxi, si es necesario se puede convertir en un grupo ´}_{ester o amido despu´}_{es de la}

reacción mencionada antes. La conversión se puede efectuar siguiendo un método convencional que sirva para convertir un grupo carbo´ılico en un grupo éster o amido.

3. Cuando el grupo definido en R3_{, R}4 _´_{o R}5 _{se utiliza como grupo protector, si es necesario se puede}

eliminar después de la reacción mencionada antes. La eliminación se puede efectuar por un método conocido.

El compuesto de fórmula (I) se puede convertir es sales farmaceúticamente aceptables de bases orgánicas o inorgánicas. Algunos ejemplos de sales son sal de sodio, sal de potasio, sal de calcio, sal de magnesio, sal de amonio, sal de dietilamina y sal de trietanolamina.

Los compuestos de esta invenci´on presentan estereo-isomer´ıa debido a la existencia de uno o m´as ´

atomos de carbono asimétricos y todos los isómeros están incluidos en esta invención.

Para analizar la eficacia de un compuesto sobre un trastorno hepático, suele utilizarse un modelo de enfermedad hepática causado por la administración de CCl4 a una rata.

Los valores de GOT (transaminasa glutámico oxalacética) y GPT (transaminasa glutámico pirúvica) se utilizan como indicación del graso de enfermedad hepática. Si el valor, que será más alto de lo normal en caso de existir algún trastorno hepático, desciende al administrar un compuesto, se considera que dicho compuesto es eficaz sobre el trastorno hepático.

Al realizar este experimento, cuyos datos detallados se dan en el ensayo farmacológico, utilizando los compuestos de esta invención, se observó que la actividad de transaminasas séricas en el grupo tratado con el compuesto de la invención era significativamente más bajo que en el grupo no tratado. Este expe-rimento prueba que el compuesto de la invención tiene efecto supresor sobre enfermedades hepáticas.

Según observaciones recientes, parece ser que la inmunidad está muy relacionada con el mecanismo del desarrollo y con la cronicidad de las enfermedades de h´ıgado. A fin de examinar la influencia del compuesto de esta invención sobre el sistema inmune, se examinó la respuesta inmune contra glóbulos ro-jos de oveja en ratones. Este protocolo se utiliza normalmente para examinar el efecto inmunomodulador. Este método experimental tiene como fin examinar la eficacia sobre el sistema inmune, según au-mente o disminya el número de células hemol´ıticas, formadoras de placas, de las células de bazo del ratón. Como se indica en el ensayo farmacológico, el compuesto de esta invención presenta un excelente efecto inmunosupresor.

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Para ello, hicieron un ensayo comparativo sobre el efecto inmunosupresor del compuesto de esta in-venci´on y de un compuesto conocido representado por la f´ormula (VI).

CH3 | CH3 — C — CONHCHCOOH | | SH CH2SH (VI)

Como se indica en el ensayo farmacológico, el compuesto de esta invención es más activo que el com-puesto descrito en la mencionada patente estadounidense.

Como resultado, se llegó a la conclusión de que el compuesto de esta invención deb´ıa ser un nuevo tipo de fármaco para tratar enfermedades hepáticas ya que reduc´ıa el valor GOT y GPT en suero y suprim´ıa la inmunidad.

Más todav´ıa, el compuesto de esta invención se puede utilizar como fármaco para tratar enfermedades inmunes, tales como la artritis reumatoide.

Los compuestos de esta invención se pueden administrar por v´ıa oral o parenteral. Ejemplos de formas de dosificación son tabletas, cápsulas, polvos, gránulos, supositorios, inyectables, colirios y dispositivos percutáneos.

La dosis se ajusta dependiendo de los s´ıntomas, la forma de dosificaci´on, etc., pero la dosis diaria normal es de 1 a 5000 mg en una sola dosis o en dosis fraccionadas.

A continuaci´on se dan ejemplos de la preparaci´on de los compuestos y formulaciones.

Ejemplo 1

N-(2-Mercapto-2-metilpropionil)-DL-homociste´ına (Compuesto n◦ 1)

A una solución agitada de ácido 2-mercapto-2-metil-propiónico (40,4 g) en acetato de etilo (200 ml), se agrega gota a gota N,N’-diciclohexilcarbodiimida (69,3 g) disuelta en acetato de etilo (200 ml), en-friando con hielo. Una vez terminada la adición, la mezcla de reacción se agita durante 1 hora a la temperatura ambiente y se filtra. El filtrado se concentra a vac´ıo. Al residuo, se agregan 400 ml de N,N-dimetilformamida (DMF) para hacer una solución del politioéster en DMF.

A una mezcla de DL-homociste´ına (37,9 g), carbonato de potasio (77,4 g), agua (400 ml) y DMF (100 ml), se agrega la solución del politioéster y la mezcla de reacción se agita durante la noche a la temperatura ambiente. Se agrega agua (2 litros) a la mezcla de reacción y se lava con acetato de etilo. La capa acuosa se acidula con ácido clorh´ıdrico 6 N y se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en una columna de gel de s´ılice y se recristaliza en éter isoprop´ılico para dar 39,8 g (59,9%) del compuesto del t´ıtulo.

p.f. 102-104◦C (´eter isoprop´ılico)

IR (KBr, cm−1): 3405, 3335, 2536, 1714, 1599, 1524, 1412, 1296, 1270, 1254, 1213, 1186, 658.

Ejemplo 2

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (Compuesto n◦ 2)

Se prepara una solución del politioéster en DMF utilizando ácido 3-mercaptopiválico (40,3 g) y N,N’-diciclohexilcarbodiimida (61,9 g) siguiendo un método similar al del Ejemplo 1.

La solución del poliéster se agrega a una mezcla de hidrocloruro de L-ciste´ına monohidratado (52,7 g), carbonato de potasio (124 g), agua (400 ml) y DMF (100 ml). La mezcla se agita durante la noche a la temperatura ambiente y después se trata de la misma manera que en el Ejemplo 1, obteniendo 47,2 g (66,3 %) del compuesto del t´ıtulo.

p.f. 83,5-85,5◦C (´eter isoprop´ılico)

IR (KBr, cm−1): 3352, 2596, 1728, 1630, 1528, 1424, 1403, 1296, 1204, 870, 593. Rotaci´on ´optica [α]25_D -3,3◦ (c=1, 0, metanol), y

[α]25_D +57,8◦ (c=1, 0, cloroformo).

El compuesto siguiente se prepara siguiendo un m´etodo similar al descrito en el Ejemplo 2.

N-[(2-Etil-2-mercaptometil)butiril]-L-ciste´ına (compuesto n◦ 3) IR (KBr, cm−1): 3350, 1726, 1628, 1526.

Ejemplo 3

S-Bencil-N-(3-benciltio-2,2-dimetilpropionil)-L-ciste´ına (Compuesto n◦ 4)

A una solución agitada de S-bencil-L-ciste´ına (11,5 g) en una solución de hidróxido de sodio 2 N (68 ml), se agrega gota a gota cloruro de 3-benciltio-2,2-dimetilpropionilo (14,6 g) disuelto en éter (10 ml), enfriando con hielo. Una vez terminada la adición, la mezcla de reacción se agita durante 20 minutos enfriando con hielo y 2 horas a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se acidula con HCl 6 N y se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice para dar 19,4 g (85,1%) del compuesto del t´ıtulo.

IR (pel´ıcula, cm−1) 3344, 1731, 1620, 1514, 1495, 1236, 1199, 700. Rotaci´on ´optica [α]25

D -31,5◦(c=1, 1, metanol)

El compuesto siguiente se prepara siguiendo un m´etodo similar al descrito en el Ejemplo 3.

S-Bencil-N-(3-benciltio-2,2-dimetilpropionil)-D-ciste´ına (Compuesto n◦ 5) IR (pel´ıcula, cm−1): 3344, 1729, 1620, 1513, 1495, 1236, 1200, 699. Rotaci´on ´optica [α]25_D + 33,0◦ (c=1, 0, metanol).

Ejemplo 4

N-(2,2-Dimetil-3-mercaptopropionil)-L-ciste´ına (Compuesto n◦ 2)

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5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

orgánica se lava con una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice y se recristaliza con una mezcla de acetato de etilo y ciclohexano, con lo que se obtienen 7,1 g (69,6%) del compuesto del t´ıtulo. Los datos f´ısicos son idénticos a los del compuesto obtenido en el Ejemplo 2.

El compuesto siguiente se prepara siguiendo un m´etodo similar al del Ejemplo 4.

N-(2,2-Dimetil-3-mercaptopropionil)-D-ciste´ına (Compuesto n◦ 6) p.f. 83,5-85,0◦C (acetato de etilo-ciclohexano) IR (KBr, cm−1): 3352, 2595, 1725, 1624, 1522, 1421, 1401, 1295, 1201, 867, 590. Rotaci´on ´optica [α]25 D -57,1◦ (c=1, 0, cloroformo). Ejemplo 5

Sal de diciclohexilamina de N - [2,2 - dimetil - 3 - (metiltio)propionil] - S - metil - L - ciste´ına (Compuesto n◦ 7)

Se disuelve N - (2,2 - dimetil - 3 - mercaptopropionil) - L - ciste´ına (23,7 g) en una solución de carbonato de potasio (41,5 g) en agua (150 ml) enfriando con hielo. A esta solución, se agrega yoduro de metilo (36,9 g). Una vez terminada la adición, la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos enfriando con hielo y durante 1 hora a la temperatura ambiente. A la mezcla de reacción, se agrega una solución de yodo 1N (15 ml) y la solución se lava con acetato de etilo. La capa acuosa se acidula con ácido clorh´ıdrico 6N y se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con una solución de hidrógeno sulfuro de sodio y con una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice. Se agrega diciclohexilamina al producto oleoso para dar cristales, que se recristalizan en una mezcla de acetato de etilo/hexano (29,0 g, 65,0% del compuesto del t´ıtulo). p.f. 98-99,0◦(acetato de etilo-hexano)

IR (KBr cm−1): 3380, 2912, 2848, 1635, 1561, 1498, 1409, 1392, 587. Rotaci´on ´optica [α]25

D + 18,6◦(c=1,0, metanol).

Ejemplo 6

Sal de diciclohexilamina de N - [2,2 - dimetil - 3 - (metiltio)propionil] - L - ciste´ına (Compuesto n◦ 8)

Se disuelve hidrocloruro de L - ciste´ına monohidratado (15,6 g) en una solución de carbonato de potasio (46,8 g) en agua (150 ml). A esta solución, se agrega gota a gota cloruro de 2,2 dimetil 3 -(metiltio)propionilo (15,6 g). Después de la adición, la mezcla de reacción se agita durante 1 hora a la temperatura ambiente y se lava con acetato de etilo. La capa acuosa se acidula con ácido clorh´ıdrico 6N y, a continuación, se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con una solución de cloruro de sodio saturada, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice. Se agrega diciclohexilamina al producto oleoso para dar cristales. Los cristales se recristalizan en una mezcla de acetato de etilo y hexano, obteniendo 28,5 g (70,1%) del compuesto del t´ıtulo.

p.f. 122,0-123, 5◦C (acetato de etilo-hexano)

IR (KBr, cm−1): 3404, 2920, 2852, 1629, 1560, 1483, 1412, 1383 Rotaci´on ´optica:[α]25

D + 35,0◦ (c=1,1, metanol).

Ejemplo 7

(8)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (Compuesto n◦ 9)

A una mezcla agitada de S - metil - L - ciste´ına (6,5 g) disuelta en una solución acuosa de carbonato de potasio 1,6M (50 ml) y acetona (50 ml), se agrega gota a gota cloruro de 2,2 - dimetil - 3 - (benzoil-tio)propionilo (p.e. 138-145◦/1,0 mmHg, 12,3 g), enfriando con hielo. Al cabo de 10 minutos, la mezcla de reacción se agita durante 2 horas a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se acidula con ´

acido clorh´ıdrico 2N y se extrae con acetato de etilo. La capa org´anica se lava con agua, se seca sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice para dar 12,4 g (72%) del compuesto del t´ıtulo.

como sal de diciclohexilamina:

p.f. 101-102◦C (acetato de etilo - hexano) IR (KBr, cm−1): 3372, 2912, 2852, 1632 Rotaci´on ´optica [α]25

D + 11,8◦ (c=1,0, metanol)

Ejemplo 8

N - (2,2 - Dimetil - 3 - mercaptopropionil) - S - metil - L - ciste´ına (Compuesto n◦ 10)

A una soluci´on agitada de N - [2,2 - dimetil - 3 - (benzoil - tio)propionil] - S - metil - L - ciste´ına (10,0 g) en metanol (20 ml), se agrega auga amoniacal al 28% (40 ml) y la mezcla se agita durante 2 horas a la temperatura ambiente. La mezcla de reacci´on se lava con acetato de etilo, se acidula con ´

acido clorh´ıdrico 6ñ y se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice para dar 5,8 g (82%) del compuesto del t´ıtulo.

Como sal de diciclohexilamina: p.f. 97-99◦C (acetato de etilo-hexano) IR (KBr, cm−1): 3364, 2916, 2852, 1559 Rotaci´on ´optica [α]25_D + 9,5◦(c=1,05, metanol) Ejemplo 9

N - (2 - Mercapto - 2 - metilpropionil) - S - tritil - L - ciste´ına (Compuesto n◦ 11)

A una solución agitada de N - (2 - mercapto - 2 - metilpropionil) - L - ciste´ına (11,2 g) en dimtilfor-mamida (50 ml), se agrega lentamente cloruro de tritilo (16,7 g). La mezcla de reacción se agita durante 2 horas a la temperatura ambiente, se vierte en agua y se extrae con acetato de etilo. La capa orgánica se lava con agua y con una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice para dar 14,2 g (60%) del compuesto del t´ıtulo.

IR (pel´ıcula, cm−1): 3356, 2976, 1735

Rotaci´on ´optica [α]25_D + 19,1◦ (c=1,52, metanol) Ejemplo 10

(9)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

A una solución agitada de N - (2 - mercapto - 2 - metilpropionil) - L - ciste´ına (2,0 g) en etanol (10 ml), se agrega una solución de hidróxido de sodio 4N (7,7 ml) y cloruro de parametoxibencilo (3,0 ml), gota a gota, enfriando con hielo y en atmósfera de nitrógeno. Una vez terminada la adición, la mezcla de reacción se agita durante 1 hora enfriando con hielo y 2 horas a la temperatura ambiente. La mezcla de reacción se concentra a vac´ıo, se acidula con ácido clorh´ıdrico 2N y se extrae con éter. La capa orgánica se lava con una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo para dar cristales. Los cristales se recristalizan en éter, con lo que se obtienen 2,8 g (67%) del compuesto del t´ıtulo.

p.f. 112-113◦C (´eter)

IR (KBr, cm−1): 2948, 2924, 1748, 1622, 1609, 1507, 1230 , 1165, 1028, 833 Rotaci´on ´optica [α]25

D -22,8◦ (c=0,95, metanol).

Ejemplo 11

Ester met´ılico de S - p - metoxibencil - N - (2 - p - metoxibenciltio - 2 - metilpropionil) - L - ciste´ına (Compuesto n◦13)

A una solución agitada de S - p - metoxibencil - n - (2 - p - metoxibenciltio - 2 - metilpropionil) - L - ciste´ına (3,0 g) en dimetilformamida (20 ml), se agrega hidruro de sodio (0,3 g) en atmósfera de nitrógeno a temperatura ambiente y la mezcla se agita durante 1 hora. Se agrega yoduro de metilo (0,5 ml) a la mezcla. La mezcla de reacción se agita durante 4 horas a temperatura ambiente. Se agrega agua (300 ml) a la mezcla de reacción y se extrae con éter. La capa orgánica se lava con una solución satu-rada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice para dar 2,8 g (90%) del compuesto del t´ıtulo.

IR (pel´ıcula, cm−1: 1742, 1665, 1610, 1512, 1301, 1244, 1175, 1031, 832. Rotaci´on ´optica [α]25_D -31,9◦ (c=0,77, metanol)

Ejemplo 12

S-p-Metoxibencil-N-(2-p-metoxibenciltio-2-metilpropionil)-L-ciste´ınamida (Compuesto n◦ 14)

Se disuelve el ´ester met´ılico de S-p-metoxibencil-N-(2-p-metoxibenciltio-2-metilpropionil)-L-ciste´ına (2,4 g) en metanol (50 ml) saturado con gas amoniaco. La mezcla de reacci´on se guarda durante 2 d´ıas a temperatura ambiente y se concentra a vac´ıo para dar cristales. Los cristales se recristalizan con metanol, con lo que se obtienen 1,5 g (65%) del compuesto del t´ıtulo.

p.f. 116-117◦C (metanol) IR (KBr, cm−1): 1691, 1621, 1617, 1607, 1502, 1402, 1232, 1174, 1029. Rotaci´on ´optica [α]25 D -1,6◦(c=0,74, metanol) Ejemplo 13 N-(2-Mercapto-2-metilpropionil)-L-ciste´ınamida (Compuesto n◦ 15)

(10)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 p.f. 124-125◦C (acetato de etilo-hexano) IR (KBr, cm−1): 2540, 1659, 1653, 1633, 1530, 1126, 634 Rotaci´on ´optica [α]25 D + 0,3◦(c=0,60, metanol) Ejemplo 14

Ester met´ılico de N-(2-mercapto-2-metilpropionil)-L-ciste´ına (Compuesto n◦ 16)

A una solución de N-(2-mercapto-2-metilpropionil)-L-ciste´ına (1,0 g) en éter (3 ml), se agrega gota a gota diazometano disuelto en éter (12 ml), enfriando con hielo. Una vez terminada la adición, se agrega ácido acético a la mezcla de reacción. La mezcla de reacción se lava con una solución saturada de hidrógenocarbonato de sodio y una solución saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio anhidro y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice, con lo que se obtiene 1,0 g (94%) del compuesto del t´ıtulo.

IR (pel´ıcula, cm−1): 2540, 1739, 1656, 1502, 1437, 1347, 1212, 1177 Rotaci´on ´optica [α]25_D -18,2◦(c=0,88, metanol).

Ejemplo 15

N-(2-mercapto-2-metilpropionil)-L-ciste´ın-N,N-dimetilamida (Compuesto n◦ 17)

A una solución agitada de N-(2-mercapto-2-metilpropionil)-L-ciste´ına (1,0 g) en cloruro de metileno (4 ml), se agrega gota a gota diciclohexilcarbodiimida (0,5 g) disuelta en cloruro de metileno (4 ml). Una vez terminada la adición, la mezcla de reacción se agita durante 30 minutos enfriando con hielo y durante 1 hora a la temperatura ambiente. A la mezcla, enfriada con hielo, se agrega gota a gota hidrocloruro de dimetilamina (0,2 g) y trietilamina (0,4 ml) disuelta en una mezcla de cloruro de metileno (2 ml) y metanol (1 ml). La mezcla de reacción se agita durante 15 minutos enfriando con hielo y 3 horas a la temperatura ambiente. A la mezcla de reacción, se agrega acetato de etilo y se filtra. La capa orgánica se lava con agua y se concentra a vac´ıo. El residuo oleoso se purifica por cromatograf´ıa en columna sobre gel de s´ılice para dar 0,6 g (50%) del compuesto del t´ıtulo.

IR (pel´ıcula, cm−1): 2540, 1633, 1497, 1464, 1400, 1135. Rotaci´on ´optica [α]25_D -1,8◦ (c=0,17, metanol)

(11)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 2) C´apsula Compuesto n◦ 2 5 mg Estearato de magnesio 3 mg Lactosa 142 mg 150 mg

Cambiando las proporciones de compuesto n◦ 2 y lactosa, se preparan cápsulas que contienen 10 mg, 30 mg, 50 mg o 100 mg del compuesto n◦ 2. 3) Gránulos Compuesto n◦ 2 50 mg Lactosa 54 mg Celulosa microcristalina 20 mg Polivinilpirrolidona K-30 5 mg Estearato de magnesio 1 mg 130 mg Ensayo farmacológico

Por norma general, se utiliza el modelo de enfermedad hep´atica inducida por CCl4 en la rata para

examinar la eficacia de un f´armaco para tratar enfermedades hep´aticas.

Se ha examinado la eficacia de los compuestos de la presente invención sobre enfermedades hepáticas utilizando este modelo de la rata. Más aún, se ha examinado el efecto inmunomodulador de los compues-tos de esta invención utilizando la inmunorrespuesta contra glóbulos rojos de oveja en el ratón, que, por norma general, es el método utilizado para examinar la eficacia sobre el sistema inmune.

1) Efecto sobre la enfermedad hep´atica inducida por CCl4

El compuesto de ensayo se suspende en soluci´on de goma de tragacanto y se administra oralmente a ratas machos Wistar (5 ratas por grupo) a una dosis de 300 mg/kg.

Al cabo de 30 minutos, se administra intraperitonealmente una dosis de 0,25 ml/kg de CCl4, un

inductor de enfermedades hep´aticas.

Se miden los niveles de GOT (transaminasa glutámico oxalacética) y GPT (transaminasa glutámico pirúvica) 24 horas después de la administración de CCl4. Al grupo de control, se administra una solución

de goma de tragacanto al 0,5 %. Los resultados del experimento con el compuesto n◦ 2, un compuesto t´ıpico de esta invenci´on, se muestra en la Tabla 1.

Tabla 1

Compuesto de ensayo GOT GPT

Control 18693 10026

Compuesto n◦ 2 13605 6558

(12)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60

2) Efecto sobre la respuesta inmune contra gl´obulos rojos de oveja en el rat´on.

Siguiendo el m´etodo de Iso (Int. J. Inmunotherapy, 1, 93 (1985)), se administraron 5× 108_gl´_obulos

ro-jos de oveja intraperitonealmente a razones hembras BALB/c (3 a 5 ratones por grupo) y se inmunizaron. Después de la inmunización, se administró el compuesto de ensayo suspendido en una solución de metilcelulosa al 1%, continuamente durante 4 d´ıas.

Al cabo de ese tiempo, los ratones fueron sacrificados y se deteminó el número de células de bazo hemol´ıticas que formaban placas.

Se calculó la dosis supresora del 50% en base al recuento de células. Para poder establecer una comparación, se efectuó el mismo ensayo utilizando el compuesto conocido de fórmula (VI) descrito en la patente estadounidense 4.305.958. Los resultados se dan en la Tabla 2.

Tabla 2

Compuesto de ensayo Dosis supresora del 50%

Compuesto n◦ 2 19,1 mg/kg

Compuesto conocido 90,6 mg/kg

Como se muestra en la tabla 2, el compuesto de esta invenci´on tiene un excelente efecto inmunosu-presor y su efecto es m´as potente que el del compuesto conocido.

Ensayo de toxicidad Toxicidad Aguda

El compuesto n◦ 2 se suspende en solución de metilcelulosa al 0,5% a una concentración del 20%. La solución se administró oralmente a ratones ddY (machos, 5 semanas de edad, 6 ratones por grupo) a una dosis de 2000 mg/kg.

Resultado

(13)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 REIVINDICACIONES

1. Procedimiento para preparar derivados de ciste´ına de f´ormula (I) y sus sales: R1 | R2 —C — CONHCHCOR5 | | (A)mSR3 (CH2)nSR4 (I) donde R1 es alquino inferior;

R2_{es alquilo inferior;}

R3 _{y R}4 _{son iguales o diferentes y representan hidr´}_{ogeno, alquilo inferior, alcano´ılo inferior, fenil}

(sus-titu´ıdo) alquilo inferior, fenil (sus(sus-titu´ıdo) carbonilo, furo´ılo o teno´ılo; R5_{es hidroxi, alcoxi inferior, amino o alquilamino inferior;}

A es alquileno inferior lineal o ramificado; m es 0 ´o 1;

n es 1 ´o 2;

λ es el grado de polimerizaci´on que corresponde a un peso molecular de 200-1500; con la condici´on de que cuando m es 0, n es 1 y R5es hidroxi, por lo menos uno de R3y R4debe ser fenil (sustituido) carbonilo, furo´ılo o teno´ılo; y

cuando n es 2, R4 no debe ser alquilo inferior;

cuyo procedimiento est´a caracterizado porque comprende: (a) hacer reaccionar un compuesto de f´ormula (II):

NH2CHCOR5

|

(CH2)nSR4

(II)

donde n,R4_{y R}5_{son los definidos anteriormente, con un compuesto de f´}_{ormula (III) o un derivado activo}

del mismo: R1 | R2 _{—C — COOH} | (A)mSR3 (III) donde R1_{, R}2_{, R}3_{, A y m son los definidos anteriormente;}

(14)

5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 H ——       R1 | S - C - CO — | R2       ` — OH −→ (I) (IV) donde R1_{, R}2 _{y λ son los definidos anteriormente;}

(b) si es necesarior cuando R3_{y/o R}4_{del compuesto de f´}_{ormula (I) obtenido son hidr´}_{ogeno, convertirlos}

en otros grupos distintos de hidr´ogeno;

(c) si es necesario, cuando R5del compuesto de f´ormula (I) obtenido es hidroxi, convertirlo en otro grupo distinto de hidroxi; y (d) si es necesario, cuando R3_{, R}4 _´_{o R}5 _{se utiliza como grupo protector, eliminar}

dicho grupo protector.