Elaborado por: Revisado por: Aprobado por: Orlando Lucas Director UCCIRT 31/08/ /09/ /09/2021

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OFICINA DE CENTROS DE DIAGNÓSTICO Y PRODUCCIÓN

Unidad del Centro de Control de Insumos y Residuos Tóxicos MET-UCCIRT/Res-33 MÉTODO DE ENSAYO: DETERMINACIÓN DE RESIDUOS DE

ANTIHELMÍNTICOS (BENZIMIDAZOLES Y AVERMECTINAS) EN TEJIDO ANIMAL Y LECHE BOVINA POR CROMATOGRAFÍA

LIQUIDA ACOPLADA A ESPECTROMETRÍA DE MASA EN TANDEM (LC-MS/MS).

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Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

Fernando Carrasco S.

Especialista UCCIRT

Orlando Lucas Director UCCIRT

Cesar de la Cruz Director OCDP

FIRMA

FECHA

31/08/2021 06/09/2021 06/09/2021

Dealí Salazar Especialista UCCIRT

FIRMA

FECHA

31/08/2021

TABLA DE CONTENIDO:

Introducción 1. Objetivo

2. Campo de aplicación 3. Referencias

4. Definiciones 5. Metodología 6. Antecedentes 7. Anexos

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INTRODUCCIÓN

Los antihelmínticos son usados como tratamiento terapéutico para controlar las infecciones ocasionadas por helmintos, sin embargo, en las últimas décadas se ha visto incrementado su uso debido a la amplia disponibilidad de antihelmínticos. Esto ha llevado a una preocupación por el uso innecesario de antihelmínticos administrados a los animales, conduciendo a un aumento del riesgo de residuos presentes en los alimentos. La comisión del CODEX Alimentarius ha fijado los LMRs para los antihelmínticos tanto benzimidazoles como avermectinas y son las referencias tomadas para el presente método.

1. OBJETIVO

El objetivo de este método es cuantificar simultáneamente los residuos de Antihelmínticos (Benzimidazoles y Avermectinas) en tejido animal por Cromatografía Liquida acoplada a Espectrometría de Masa en Tándem (LC-MS/MS)

2. CAMPO DE APLICACIÓN

Este método de ensayo incluye la determinación de Benzimidazoles y Avermectinas en tejido animal.

3. REFERENCIAS

Analytica Chimica Acta 637 (2009) 196–207. “New method for the analysis of flukicide and other anthelmintic residues in bovine milk and liver using liquid chromatography–tandem mass spectrometry”.

4. DEFINICIONES

4.1 Límite Máximo de Residuos (LMR)

Nivel máximo de un producto químico cuya presencia está permitida en un alimento, expresado generalmente en microgramos de producto químico por kilogramo del alimento (µg/ kg).

5. METODOLOGÍA

5.1. Principio del método

Este método se basa en el método QuEChERS que incluye la extracción de una porción representativa de la muestra con solvente (acetonitrilo) en presencia de sales (MgSO4 y NaCl) para inducir la separación de fases (solvente del agua). Tras la agitación y centrifugación se toma un alícuota de la fase orgánica para someterla a una limpieza adicional (clean up) en fase dispersiva con una mezcla de sulfato de

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magnesio y C18. Finalmente, una alícuota del sobrenadante se transfiere al sistema de LC-MS/MS para la separación cromatográfica y la detección de analitos por espectrometría de masas en tándem (MS / MS).

5.2. Precauciones de seguridad

5.2.1 Es obligatorio el uso de mandil o guardapolvo, guantes de nitrilo, anteojos de protección y máscara para vapores de solventes orgánicos durante la ejecución del ensayo.

5.3. Precauciones Analíticas

5.3.1 Es muy importante la limpieza del material utilizado en este procedimiento para evitar contaminación de las muestras. Todo material es descontaminado de acuerdo al instructivo ITR-UCCIRT/Lab-07. Finalmente se enjuaga con acetonitrilo la fiolas y viales usadas para los estándares.

5.3.2Se debe utilizar reactivos de grado analítico que cumplan con las normas internacionales de calidad (ACS, ISO).

5.4. Equipos y materiales

5.4.1 Equipos

 Centrífuga refrigerada, Sigma. Modelo 4K 15C.

 Vortex Mixer, Barnstead Thermolyne. Modelo 37600

 Vortex Mixer. Multi Rex. Heidolph.

 Balanza analítica AND 0, 1 mg. sensitivity.

 Bomba de vacio.

 Sistema de Cromatografía: LC–MS/MS - Waters Alliance 2695 acoplado con un Espectrómetro de Masas en Tandem: Modelo Quatro Premier XE

ó Sistema de Cromatografía: UPLC–MS/MS – Waters/ ACQUITY I-CLASS PLUS

acoplado con un Espectrómetro de Masas en Tandem: Modelo XEVO TQ-XS.

 Micropipeta monocanal con volumen variable de 2-20 µl.

 Columna LC: C18 (150 mm × 3.0 mm de diámetro, 3.5 µm )

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5.4.2 Materiales:

 Tubos para centrífuga de polipropileno (15 y 50 ml).

 Gradilla para tubos de 15 y 50 ml.

 Viales de 2 ml autosampler HPLC.

 Viales de 12 y 22ml con tapa rosca con septa de PTFE.

 Racks para viales de 50ml, 15-22ml y 2ml

 Tubos para microcentrífuga de1.5 ml.

 Gradilla para tubos de Eppendorf.

 Balón aforado de 10 ml y 1000ml.

 Equipo de filtración.

 Filtro de membrana para filtración Nylon o PTFE (0.45 µl, 47mm).

 Filtro de jeringa PTFE de 0.45 µm de diámetro.

 Jeringas de 1 ml.

 Tips de 2-200 µl, 50-1000 µl y 100-5000 µl.

 Dispensador de solvente de 1-10ml.

 Parafilm.

 Papel aluminio.

5.5. Reactivos y solventes

Verificar la vigencia del reactivo y solvente requerido en el método para la preparación de soluciones y mezclas de sales.

Todas las soluciones deberán de ser almacenados en recipientes de vidrio y a una temperatura adecuada, provistas de etiquetas donde indique la composición, fecha de preparación y expiración, así como también las iniciales del responsable (para el caso de Fase móvil). En el caso de la preparación de las mezclas de sales, se deberá rotular la composición de la misma.

5.5.1 Reactivos y productos químicos:

 Acetonitrilo grado HPLC.

 Metanol grado HPLC.

 Agua grado HPLC.

 Acido fórmico, grado analítico.

 Formiato de amonio.

 Octadecilsilano absorbente (C18).

 Sulfato de magnesio anhidro.

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5.5.2 Estándares

Código Estándar Ubicación Medio de

dilución 238 Albendazol Desecador.2-Veterinarios DMF 374 Albendazol

sulfóxido Congeladora.For-3.Cont.1 DMF :MeOH (4:6)

375 Albendazol

sulfona Ref. M.Vet. Cont.1 DMF

386 Triclabendazol Desecador 1-Veterinarios MeCN 379 Triclabendazol

sulfóxido Ref. M.Vet. Cont.1 DMF

376 Triclabendazol

sulfona Ref. M.Vet. Cont.1 MeCN

181 Tiabendazol Desecador 2-MV/RT MeOH

442 Mebendazol Desecador 2-MV/RT DMS

421 Praziquantel Ref. M.Vet. Cont.1 EtOH

438 Levamisol

Clorhidrato Desecador 2-MV/RT H2O: MeOH

(1:1) 46 Abamectina Congeladora For-3

MV / RT Cont.1

MeCN 412 Emamectina Congeladora For-3

MV / RT Cont.1

MeOH

239 Ivermectina Ref. MV/RT Cont.1 MeOH

508 Doramectina Congeladora For-3 MV / RT Cont.1

MeOH

201 Trifenilfosfato Desecador 2-MV/RT MeCN

387 Fenbendazol Desecador 2-MV/RT MeOH :HCl

10:1 (0.1M)

439 Metronidazol Desecador 2-MV/RT MeCN

377 Albendazol 2-amino sulfona

Ref. MV/RT Cont.1 MeOH

378 5-hidroxitiabendazol Desecador 2-MV/RT MeOH

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5.5.3 Preparación de Fase Móvil:

Las soluciones preparadas deben ser filtradas a través de membrana de PTFE 0.45 µm, almacenar refrigeradas.

a) Fase móvil A ( Formiato de Amonio 12.5mM acuoso)

Pesar 0.7882gr de Formiato de Amonio y diluirlo en un litro de agua b) Fase móvil B ( Formiato de Amonio 12.5mM en MeCN: MeOH)

Pesar 0.7882gr de Formiato de Amonio para un litro de MeCN: MeOH 50:50, v/v.

5.5.4 Soluciones de Estándares:

a) Trifenilfosfato (TPP): Estándar interno, para modo positivo como negativo.

a.1) Pesar aproximadamente 20mg de TPP en un fiola de 10mL, diluir hasta Completar el volumen con MeCN (2000ng/ µl).

a.2) Tomar 50µl de la solución a.1 y diluir en una fiola de10mL con MeCN (10ng/

µl) Almacenar todas las soluciones a -18° C.

b) Soluciones de Estándares Stock de 2000 µg/mL

Pesar aproximadamente 20mg de cada estándar, teniendo en cuenta su pureza y diluirlas con los solventes correspondientes en fiolas de 10 mL.. Almacenar todas las soluciones patrón a -18° C.

c) Solución Mix2 – Curva/Fort de 100 ng/µL (Benzimidazoles)

Preparar una solución de 100 ng/µL, tomando 500µl de la solución stock de de 2000 ng/µl de Mebendazol, albendazol, albendazol sulfona, albendazol sulfóxido, tiabendazol, praziquantel, fenbendazol, metronidazol, tiabendazol 2-amino sulfona, 5-hidroxitiabendazol, y diluirlas en una fiola de 10mL con MeCN. Almacenar a -18° C.

d) Solución Mix3 – Curva/Fort de 100 ng/µL (Benzimidazoles)

Preparar una solución de 100 ng/µL, tomando 500µl de la solución stock de de 2000 ng/µl de triclabendazol, triclabendazol sulfona, triclabendazol sulfóxido, y diluirlas en una fiola de 10mL con MeCN. Almacenar a -18° C.

e) Solución de trabajo Sol - St3 (Benzimidazoles)

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Tomar una alícuota de 200ul de Solución Mix2 – Curva/Fort de (100 ng/µL), y una alícuota de 300uL, Solución Mix3 – Curva/Fort de (100 ng/µL) y llevar a una fiola de 10mL y enrasar con MeCN.

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Preparación de curva de Calibración (Antihelmínticos)

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f) Solución Mix1-Curva de 40 ng/µL (Avermectinas)

Preparar una solución de 40 ng/µL, tomando 200µl de la solución stock de de 2000 ng/µl de abamectina, ivermectina, emamectina y levamisol y diluirlas en una fiola de 10mL con MeCN. Almacenar a -18° C.

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5.5.5 Soluciones de Fortificación :

a) Solución de fortificación Avermectinas:

Tomar volúmenes indicados del Std 5 (2ng/uL)

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b) Solución de fortificación Antihelmínticos:

Tomar 1mL Mix2 – Curva/Fort de 100 ng/µL y 2mL Mix3 – Curva/Fort de 100 ng/µL y llevar a una fiola de 10mL (Mix-Fort Total)

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Estándar

LMR CEE LMR CODEX

Matriz de Referencia (ng/g) Matriz de

Referencia (ng/g)

Mebendazol Músculo; Ovinos,

Caprinos, équidos 60 ---

---

Abamectina (Avermectina B1a) Musculo; Ovinos 20

Bovinos Hígado 100

Riñón 50

Grasa 100

Ivermectina

(22, 23-Dihydro-avermectinaB1a)

Musculo; Cérvidos, incluyendo

Reno;

20

Cerdo(hígado) oveja (hígado Vacuno (leche))

15 15 10

Doramectin

Todas las especies mamíferas productoras de

alimentos

Musculo 40

Vaca (musculo)

Cerdo(musculo) 10

5

Grasa 150

Hígado 100

Riñón

60

Levamisol Musculo; Bovinos,

ovinos, porcinos, aves

10

Músculo; vacuno,

cerdo, ave 10

Albendazol

(Suma de albendazol, sulfóxido de albendazol, sulfona de albendazol y sulfona 2- animo de albendazol, expresado como albendazol)

Musculo; porcino, pollo 100

*Músculo No especifíca

matriz 100

Albendazol Sulfoxide (Suma de albendazol, sulfóxido de albendazol, sulfona de albendazol y sulfona 2- animo de albendazol, expresado como albendazol)

Musculo; porcino, pollo 100 --- ---

Albendazol Sulfona (Suma de albendazol, sulfóxido de albendazol, sulfona de albendazol y sulfona 2- animo de albendazol, expresado como albendazol)

Musculo; porcino, pollo

100 --- ---

Tiabendazol (Suma del tiabendazol y 5-hidroxy thiabendazol)

Musculo; Caprinos 100

*Músculo;

Vacuno, Cerdo,

Oveja, Cabra 100

Emamectina

(Emamectina B1a) Musculo; Pescado 100 --- ---

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Esta versión está vigente, en tanto esté publicada en la Intranet. En caso de imprimir este documento con fines Praziquantel Ovinos y

Équidos

No se exige LMR

--- 100

Triclabendazole Sulfona ---

---

--- ---

Triclabendazole Sulfoxide

--- ---

Triclabendazole

(Suma de residuo extraíbles que por oxidación se convierten en ketotriclabendazol)

Todos los rumiantes

Musculo 225

Vacuno

(Músculo) 250

Grasa 100

Hígado 250 Oveja (Músculo)

Riñón 150 200

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5.6. Procedimiento

5.6.1 Preparación de muestra.

a) Todas las muestras deben estar previamente homogenizadas y/o molidas.

b) En un tubo de polipropileno de 50 mL, pesar 10 g para, muestras, fortificados y blancos matriz, para el blanco reactivo medir 10 mL de agua ultra pura.

c) A los tubos (muestra, blanco reactivo y recuperaciones) adicionar 100µl de TPP (10ng/ µl).

d) Fortificación de muestras para los controles positivos:

Fortificar a los niveles definidos en esquema de fortificación (Solución De Fort.

Antihelmínticos y avermectinas) e) Vortizar por 3 minutos.

f) Adicionar 10mL de MeCN para la extracción, vortizar por un minuto y luego adicionar 5gr de una mezcla de sales de MgSO4: NaCl (4:1, w/w).

g) Agitar inmediatamente por 3 minuto evitando la formación de grumos que se forman durante la hidratación MgSO4 y centrifugar a 4000 rpm por 5 minutos.

h) Transferir 3 ml del sobrenadante de muestras, fortificados y blanco reactivo a un vial de vidrio que contiene 300 mg de MgSO4 y 100 mg de C18 .

i) Mezclar en el Vortex por 3 minuto y luego centrifugar a 2000rpm por 3 minutos.

j) Tomar una alícuota de 1000µl del sobrenadante y llevar a tubos de microcentrífuga, (para las muestras, recuperaciones, blanco matriz y blanco reactivo) Vortizar por 1 minuto.

k) Para la Curva de Calibración tomar volúmenes definido en el diagrama de flujo (Solución de fortificación Antihelmínticos y avermectinas) , y volatilizar en un sistema evaporador con flujo de nitrógeno

l) Luego reconstituir cada vial con 1mL de blanco matriz

m) Filtrar y transferir a viales del autosampler, inyectar 20 µl en el sistema LC/MS-MS

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5.6.2 Condiciones del Cromatógrafo Liquido (HPLC):

Columna Cromatográfica

X Terra®MS C18 3.5µm, 3 x 150 mm Fase móvil Fase móvil A: Fase móvil B ( 2 :98) Condición de flujo : Gradiente (*)

Flujo 0.3 ml/min Injection volumen 20 uL

Temperature de columna

25°C Temperatura del

autosampler

15°C

Fase móvil A: Formiato de Amonio 12.5mM acuoso.

Fase móvil B: Formiato de Amonio 12.5mM en MeCN: MeOH(50:50, v/v).

Condición de Gradiente (*)

Time (min) C D Flow(mL/min) Curve

0 2 98 0.20 1

2 100 0 0.20 6

5 100 0 0.20 6

14.00 50 50 0.20 6

15 2 98 0.20 6

18 2 98 0.20 1

Secuencia de inyección:

1- Bco. solventes 2- Bco. de matriz

3- Estándar nivel 1 ng/mL 4- Estándar nivel 2 ng/mL 5- Estándar nivel 3 ng/mL 6- Estándar nivel 4 ng/mL 7- Estándar nivel 5 ng/mL

8- Controles positivos o Recuperaciones.

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Revisión:

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5.6.3 Condiciones del Cromatógrafo Liquido (UPLC):

Columna Cromatográfica

ACQUITY UPLC : C-18 — 100 x 2.1 mm id, 1.7µm

Injection volumen

5 uL

Temperature de

columna

40°C

Temperatura del

autosampler

5°C

Fase móvil A: 0.1% Ácido fórmico acuoso.

Fase móvil B: MeOH

Condición de Gradiente (*) Time

(min)

A B Flow(mL/min) Curve

0 90 10 0.40 1

4 80 20 0.40 6

5 50 50 0.40 6

7 1 99 0.40 6

10 1 99 0.40 6

11 90 10 0.40 6

13 90 10 0.40 6

Secuencia de inyección:

9- Bco. solventes 10- Bco. de matriz

11- Estándar nivel 1 ng/mL 12- Estándar nivel 2 ng/mL 13- Estándar nivel 3 ng/mL 14- Estándar nivel 4 ng/mL 15- Estándar nivel 5 ng/mL

16- Controles positivos o Recuperaciones.

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5.6.4 Condiciones del Espectrómetro de Masa en Tandem (MS/MS):

Polaridad: ESI positivo

Voltaje del Capilar (kV): 3.0

Voltaje de Cono (V): 20

Extractor (V): 3

Lentes RF 1 (V): 0.3

Temperatura de la fuente (ºC): 120 Temperatura de desolvatación (ºC): 350 Flujo del gas de desolvatación (L/h): 650 Flujo del gas de cono (L/h):

Resolución LM 1: 15.00

Resolución HM 1: 15.00

Energía del ión 1(eV): 0.5

Entrada: 1

Colisión: 2

Salida: 50

Resolución LM2: 15.00

Resolución HM2: 15.00

Energía del ión 2 (eV): 1

Presión de Gas en la Celda Pirani (mbar):

Modo de Ionización ESI Positive [M+H ^]+

Temperatura de la Fuente (°C) 120 Temperatura de Solvatación (°C) 350

Cono gas(L/Hr): 50

Desolvatación del gas (L/Hr) 800

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Tabla 2. Condiciones MRM

# Analito

MS/MS Transition 1ª cuantificación

2ª confirmación

Cono de Voltage (V)

Energía de colisión

(eV)

Dwell

Time (seg) Tr (minutos)

1 Trifenilfosfato 327.2 > 152.1 40 40 0.05 11.32

2 Triclabendazol 359.1 > 344.159(1) 359.1 > 274.286(2)

50 50

36 26

0.20

0.20 11.66

3 Triclabendazol sulfóxido

375.1 > 357.139(1) 375.1 > 242.277(2)

50 50

18 42

0.10

0.10 9.74

4 Triclabendazol sulfona

391.1 > 242.277(1) 391.1 > 277.277(2)

40 30

45 45

0.10

0.10 10.86

5 5-Hidroxi-tiabendazol 218.5 > 190.869(1) 218.5 > 147.776(2)

38 38

25 31

0.05

0.05 8.67

6 Praziquantel

313.4 > 203.34(1) 313.4 > 83.159(2)

35 35

15 28

0.05

0.05 10.55

7 Mebendazol

296.2 > 264.018(1) 296.2 > 104.692(2)

35 35

22 45

0.2

0.2 9.88

8 Levamisol 205.3 > 90.761(1)

205.4 > 177.977(2)

38 38

22 30

0.10

0.10 9.07

9 Ivermectina 892.4 > 569.173(1) 892.4 > 551.190(2)

20 20

14 25

0.20

0.20 12.97

10 Emamectina 886.4 > 157.893(1)

886.4 > 125.891(2)

50 50

38 40

0.10

0.10 12.18

11 Albendazol 266.3 > 234.340(1)

266.3 > 191.213(2)

35 35

19 32

0.10

0.20 9.0

12 Albendazol sulfona 298.3 > 159.085(1) 298.3 > 266.346(2)

40 40

19 29

0.30

0.10 9.21

13 Albendazol sulfóxido 282.3 > 159.159(1) 282.3 > 208.234(2)

30 30

42 25

0.80

1.00 8.94

14 Abamectina 894.9 > 751.091(1)

894.9 > 327.096(2)

20 20

25 38

0.40

1.20 13.84

15 Tiabendazol 202.3 >175.218(1) 38 25 0.20 9.47

(20)

Revisión:

04

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202.3 >131.159(2) 38 32 0.20

16 Metronidazol 172.2 >127.733(1) 172.2 > 81.697(2)

28 28

14 23

0.10

0.10 8.32

17 Fenbendazol 300.1 > 268.0(1) 300.1 > 158.9(2)

37 37

22 33

0.10

0.10 10.68

18 Albendazol-2-amino sulfona 240.3 > 132.896(1) 240.3 > 197.999(2)

35 35

50 30

0.10

0.10 8.74

(1) Transición principal MRM utilizada para la cuantificación (2) Transición secundaria MRM utilizada para la confirmación.

5.6.5 Condiciones del Espectrómetro de Masa en Tandem (MS/MS):

EQUIPO: MS/MS Modelo: XEVO TQ-XS

Polaridad: ESI positivo

Voltaje del Capilar (kV): 0.50 Voltaje de Cono (V): variable Temperatura de la fuente (ºC): 150 Temperatura de desolvatación (ºC): 600 Flujo del gas de desolvatación (L/h): 1000 Flujo del gas de cono (L/h): 150

Resolución LM 1: 2.59

Resolución HM 1: 15.15

Energía del ión 1(eV): 0.4

Entrada: 1

Colisión: 4

Salida: 1

Resolución LM2: 2.69

Resolución HM2: 14.49

Modo de Ionización ESI Positive [M+H

^]+

Temperatura de la Fuente (°C) 150 Temperatura de Solvatación (°C) 600

Cono gas(L/Hr): 150

Desolvatación del gas (L/Hr) 1000

(21)

Revisión:

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Tabla 2. Condiciones MRM

# Analito

MS/MS Transition 1ª cuantificación

2ª confirmación

Cono de Voltage

(V)

Energía de colisión

(eV)

Dwell Time (seg)

Tr (minutos)

1 Trifenilfosfato 327.2 > 152.1 40 40 0.05 7.14

2 Triclabendazol 359.1 > 344.159(1) 359.1 > 274.286(2)

50 50

36 26

0.20

0.20 7.13

3 Triclabendazol sulfóxido

375.1 > 357.139(1) 375.1 > 242.277(2)

50 50

18 42

0.10

0.10 7.16

4 Triclabendazol sulfona

391.1 > 242.277(1) 391.1 > 277.277(2)

40 30

45 45

0.10

0.10 7.31

5 5-Hidroxi-tiabendazol 218.5 > 190.869(1) 218.5 > 147.776(2)

38 38

25 31

0.05

0.05 3.35

6 Praziquantel

313.4 > 203.34(1) 313.4 > 83.159(2)

35 35

15 28

0.05

0.05 6.78

7 Mebendazol

296.2 > 264.018(1) 296.2 > 104.692(2)

35 35

22 45

0.2

0.2 9.88

8 Levamisol 205.3 > 90.761(1) 205.4 > 177.977(2)

38 38

22 30

0.10

0.10 2.82 9 Ivermectina 892.4 > 569.173(1)

892.4 > 551.190(2)

20 20

14 25

0.20

0.20 7.86 10 Emamectina 886.4 > 157.893(1)

886.4 > 125.891(2)

50 50

38 40

0.10

0.10 8.53 11 Albendazol 266.3 > 234.340(1)

266.3 > 191.213(2)

35 35

19 32

0.10

0.20 6.69 12 Albendazol sulfona 298.3 > 159.085(1)

298.3 > 266.346(2)

40 40

19 29

0.30

0.10 5.77

(22)

Revisión:

04

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13 Albendazol sulfóxido 282.3 > 159.159(1) 282.3 > 208.234(2)

30 30

42 25

0.80

1.00 5.65 14 Abamectina 894.9 > 751.091(1)

894.9 > 327.096(2)

20 20

25 38

0.40

1.20 7.67 15 Tiabendazol 202.3 >175.218(1)

202.3 >131.159(2)

38 38

25 32

0.20

0.20 4.26 16 Metronidazol 172.2 >127.733(1)

172.2 > 81.697(2)

28 28

14 23

0.10

0.10 1.61 17 Fenbendazol 300.1 > 268.0(1)

300.1 > 158.9(2)

37 37

22 33

0.10

0.10 6.92 18 Albendazol-2-amino

sulfona

240.3 > 132.896(1) 240.3 > 197.999(2)

35 35

50 30

0.10

0.10 3.35

(1) Transición principal MRM utilizada para la cuantificación (2) Transición secundaria MRM utilizada para la confirmación.

5.7. Cálculo y expresión de resultados

5.7.1 Cuantificación del resultado

La cuantificación de los resultados se realiza interpolando las áreas de las muestras analizadas en la curva de calibración utilizando el método del estándar interno.

El método cuantitativo MS/MS es el MRM (Monitoreo de Reacción Múltiple). El procesamiento de datos de las muestras, blancos, y estándares se realiza con el software MassLynx 4.1 con la aplicación Quan Lynx 4.1.

La concentración del antibiótico en la muestra se calcula de la siguiente ecuación:

Donde:

Ci = concentración derivada de la curva de calibración en ug/ml.

Vd1 = volumen de la solución de extracción (ml)

Vd2 = volumen de la solución de extracción tomado para la limpieza por la columna (ml)

Vf = volumen final de extracto (ml).

Wm = Peso de muestra (g)

6. ANTECEDENTES

   

Vd2xWm Vd1xVf ng/ml

Ci ug/Kg

C 

(23)

Revisión:

04

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No aplica 7. ANEXOS

No aplica