UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
DETERMINACIÓN DE RANGO DE REFERENCIA DE BIOQUÍMICA SANGUINEA A NIVEL LOCAL EN PERROS
TESIS DE GRADO
Trabajo de titulación presentado como requisito previo a la obtención del título de
MÉDICO VETERINARIO Y ZOOTECNISTA
AUTORA
ROSERO PASMAY MELANNI NICOLE
TUTOR
MVZ. CARRILLO CEDEÑO CESAR ALEJANDRO. Msc
GUAYAQUIL – ECUADOR
2022
PORTADA
UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
APROBACIÓN DEL TUTOR
Yo, CARRILLO CEDEÑO CESAR ALEJANDRO, docente de la Universidad Agraria del Ecuador, en mi calidad de Tutor, certifico que el presente trabajo de titulación:
DETERMINACIÓN DE RANGO DE REFERENCIA DE BIOQUÍMICA SANGUINEA A NIVEL LOCAL EN PERROS, realizado por la estudiante ROSERO PASMAY MELANNI NICOLE; con cédula de identidad N° 0956294391 de la carrera MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA , Unidad Académica Guayaquil, ha sido orientado y revisado durante su ejecución; y cumple con los requisitos técnicos exigidos por la Universidad Agraria del Ecuador; por lo tanto se aprueba la presentación del mismo.
Atentamente,
__________________________
Dr. Cesar Carrillo Cedeño, M.Sc.
Guayaquil, 20 de octubre del 2021
UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
CARRERA DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
APROBACIÓN DEL TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN
Los abajo firmantes, docentes designados por el H. Consejo Directivo como miembros del Tribunal de Sustentación, aprobamos la defensa del trabajo de titulación:
“DETERMINACIÓN DE RANGO DE REFERENCIA DE BIOQUIMICA SANGUINEA A NIVEL LOCAL EN PERROS, realizado por la estudiante ROSERO PASMAY MELANNI NICOLE, el mismo que cumple con los requisitos exigidos por la Universidad Agraria del Ecuador.
Atentamente,
DRA. MIELES SORIANO GLORIA, M.Sc.
PRESIDENTE
DRA. PIÑA PAUCAR ANA, M.Sc. MVZ. CHACÓN MARIELLA M.Sc.
EXAMINADOR PRINCIPAL EXAMINADOR PRINCIPAL
MVZ. CARRILLO CEDEÑO CESAR, M.Sc.
EXAMINADOR SUPLENTE
Guayaquil, 25 de enero del 2022
Dedicatoria
A Dios por permitirme llegar a este momento de mi vida, mis padres Norma Alicia Pasmay Salazar y José Reinaldo Rosero por ser mis pilares fundamentales dentro de mi carrera y mi vida.
Mis hermanos, por confiar en mí y estar presentes hasta esta etapa de mi carrera.
A mis amados sobrinos por brindarle alegría a mi vida y motivarme a ser mejor persona.
Mis mejores amigos, compañeros y docentes que durante mi vida universitaria, me ayudaron y enseñaron.
A todos ustedes tengo la satisfacción de dedicarles mi trabajo.
Agradecimiento
Primero doy gracias a Dios y a mis padres por su ayuda para poder culminar este proyecto.
A la institución que me abrió sus puertas para poder escoger la carrera que hoy estoy culminando.
A mi tutor Dr. Cesar Carrillo que con sus conocimientos supo guiarme durante todo el proceso de mi tesis.
Parte de este proceso también doy gracias a mi novio Daniel Játiva por siempre tener la predisposición para ayudarme y aconsejarme de la mejor manera y por abrirme las puertas de su consultorio y a su personal médico por brindarme su ayuda en la recolección de muestras.
Y por último agradezco al Dr. Ernesto Olaya por permitirme analizar las muestras en su laboratorio Diagnovet
A cada uno de ustedes les quedo eternamente agradecida.
Autorización de Autoría Intelectual
Yo Melanni Nicole Rosero Pasmay, en calidad de autora del proyecto realizado, sobre
“DETERMINACIÓN DE RANGO DE REFERENCIA DE BIOQUÍMICA SANGUINEA A NIVEL LOCAL EN PERROS” para optar el título de Médico Veterinario y Zootecnista, por la presente autorizo a la UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que me pertenecen o parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de investigación.
Los derechos que como autora me correspondan, con excepción de la presente autorización, seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8; 19 y demás pertinentes de la Ley de Propiedad Intelectual y su Reglamento.
Guayaquil, enero 31 de 2021
ROSERO PASMAY MELANNI NICOLE C.I. 0956294391
índice general
PORTADA ... 1
APROBACIÓN DEL TUTOR ... 2
APROBACIÓN DEL TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN ... 3
Dedicatoria ... 4
Agradecimiento ... 5
Autorización de Autoría Intelectual ... 6
índice general ... 7
1 Introducción ... 12
1.1 Antecedentes del problema ... 12
1.2 Planteamiento y formulación del problema ... 13
1.2.1 Planteamiento del problema ... 13
1.2.2 Formulación del problema ... 13
1.3 Justificación de la investigación ... 13
1.4 Delimitación de la investigación ... 14
1.5 Objetivo general ... 14
1.6 Objetivos Específicos ... 14
2 Marco Teórico... 16
2.1 Estado del arte ... 16
2.2 Bases teóricas ... 17
2.2.1 Definición ... 17
2.2.2 Valores de referencia ... 17
2.2.3 Nutrientes, Metabolitos y Enzimas ... 18
2.2.4 Espectrofotometría. ... 23
2.2.5 Recolección y almacenamiento de las muestras. ... 23
2.2.6 Interferencia con la muestra y la bioquímica clínica. ... 24
2.3 Marco legal ... 26
2.3.1 Unidades del sistema internacional ... 26
3 Materiales y métodos ... 27
3.1 Enfoque de la investigación ... 27
3.1.1 Tipo de investigación ... 27
3.1.2 Diseño de investigación ... 27
3.2 Metodología ... 27
3.2.1 Variables ... 27
3.2.2 Población y muestra ... 28
3.2.3 Recolección de datos ... 30
3.2.4 Análisis estadístico ... 31
4 Resultados ... 33
4.1 Obtención de valores bioquímicos indicadores de función hepática y renal clasificados por edad. ... 33
4.2 Comparación de los valores bioquímicos obtenidos con los valores de fuentes de referencia existentes. ... 34
4.3 Elaboración de una tabla de valores bioquímicos sanguíneos para
que sean utilizados en la clínica veterinaria de pequeñas especies. ... 35
5 Discusión. ... 43
6 Conclusiones ... 45
7 Recomendaciones... 46
8 Bibliografía ... 47
9 Anexos ... 49
Anexo 1. Información Complementaria ... 49
Resumen
Los rangos referenciales son utilizados para establecer un límite entre lo normal y lo patológico, para evaluar el pronóstico de un paciente y valorar la eficacia de los tratamientos aplicados; sin embargo, el uso de estos puede estar limitado cuando los valores referenciales aplicados provienen de bibliografía extranjera, los cuales han sido obtenidos de animales que se desarrollaban en condiciones climáticas y ambientales diferentes a las nuestras. El objetivo de este estudio es establecer valores referenciales para bioquímica sanguínea de perros atendidos en las diferentes veterinarias de la ciudad de Guayaquil. Se recolectaron 300 muestras de perros clínicamente sanos, que a su vez se dividieron en 3 grupos de diferentes edades 100 individuos de (6 meses – 1 año), (2 años -3 años), (4 años en adelante), y los analitos que fueron estudiados son los que se utilizan en la clínica diaria (Urea, Creatinina, AST, ALT, Fosfatasa Alcalina, Proteínas totales y Albumina). Los valores obtenidos fueron comparados con fuentes bibliográficas extrajeras, de los cuales, los caninos menores a 1 año presentaron un notable incremento en la enzima Fosfatasa Alcalina y Proteínas Totales, los cuales se evidenciaron con valores superiores en comparación con los obtenidos para adultos.
Palabras Clave: Bioquímica sanguínea, edades, enzimas, perros, valores referenciales.
Abstract
The reference ranges are used to establish a limit between normal and pathological, to evaluate the prognosis of a patient and to assess the efficacy of the treatments applied; however, the use of these can be limited when the reference values applied come from different bibliographies, which have been obtained from animals that developed in climatic and environmental conditions different from our country. The objective of this study is to establish reference values for blood biochemistry in dogs treated at different veterinary clinics in the city of Guayaquil. 300 samples were collected from clinically healthy dogs, which were divided into 3 groups of 100 individuals (6 months - 1 year), (2 years - 3 years), (4 years and older), and the analytes that were studied are those used in daily clinical practice. The values obtained were compared with bibliographic sources from other countries, and it was found that canines under 1 year of age presented a notable increase in ALP and TP, which were evidenced with higher values compared with the values obtained for adults.
Key Words: Blood biochemistry, ages, enzymes, dogs, reference values.
1 Introducción 1.1 Antecedentes del problema
La determinación e interpretación de los componentes químicos en la sangre son las bases de la bioquímica clínica (Díaz, Ceroni da Silva, 2006). Un perfil bioquímico sanguíneo se debe realizar de manera rutinaria para detectar el estado de salud y/o enfermedades de manera oportuna (Katayev y col., 2010).
El valor de referencia, también conocido como ‘Límite de decisión médica’, según lo definido por Ceriotti (2007); es un intervalo que se aplica a la población atendida por el laboratorio. Los valores de referencia son esenciales para la interpretación de los resultados, que por si solos es de poco valor si no se acompaña con la historia clínica para un diagnóstico más certero (Katayev y col., 2010).
Muy pocos laboratorios realizan sus propios estudios de valores de referencia, por ende, se basan es estudios realizados por otras décadas atrás, cuando los métodos y la población eran distintos a la actualidad. Hasta ahora, la mayoría de los valores de referencia son los obtenidos en perros adultos, por esta razón no siempre pueden usarse en animales jóvenes (Sako y col., 2011).
Ciertos factores influyen en los valores clínicamente normales y provocar variaciones significativas en los valores de referencia, tales como: factores individuales (raza, edad y sexo), factores ambientales y sociales (Rautenbach y Joubert, 1988). Debido a la influencia del ambiente sobre los valores de los componentes sanguíneos, es importante obtener valores regionales y no utilizar los obtenidos en otros países (Castellanos y col., 2009).
1.2 Planteamiento y formulación del problema
1.2.1 Planteamiento del problema
La base que los Médicos Veterinarios utilizan para la valoración clínica de sus pacientes en la ciudad de Guayaquil, son los valores internacionales. Es conveniente obtener rangos referenciales propios y aplicables a cada región de nuestro país; si se considera que los valores internacionales son de países con características geográficas y climáticas diferentes, donde incluso los perros difieren genética y nutricionalmente.
El perfil bioquímico básico, incluye grupos de parámetros que refleja disfunción o daño en uno o varios sistemas orgánicos (Juste & Carretón, 2015).
El presente estudio pretendió establecer valores de referencia en química sanguíneo de caninos clínicamente sanos en la ciudad de Guayaquil para que de esta manera sirva como referencia, de acorde a la edad del paciente, a los laboratorios y Médicos de veterinarios
1.2.2 Formulación del problema
¿Los laboratorios Médicos Veterinarios, de la ciudad de Guayaquil, toman de referencia la literatura internacional de los parámetros bioquímicos en la especie canina?
1.3 Justificación de la investigación
El anàlisis bioquimico es uno de los mètodos de diagnostico basicos en la clìnica veterinaria, siendo un apoyo innegable para la detecciòn de entidades patologicas.
Las pruebas de laboratorio correctamente realizasas permiten al especialista analizar, localizar y tratar la enfermedad sospechada. Sin embargo, en muchas ocasiones el uso de estas pruebas resulta limitada al no contar con los valores referenciales propios de la zona.
Incluso las caracteristicas de los pacientes caninos del Guayaquil son diferentes a a otras zonas del Ecuador, o de otros paìses, en aspectos tales como: estado nutricional, edad, sexo, raza y estado sanitario, la recolecciòn de muestra y la tècncia quìmica utilizada, diferencias fisiologicas (estado de excitaciòn, actividad muscular, temperatura y altura)
1.4 Delimitación de la investigación
Espacio: Veterinarias de la ciudad de Guayaquil (Hospetal, Cruz del sur, CIV)
Tiempo: El periodo de tiempo que se tomó para realizar esta investigación fue de dos meses.
Población: el trabajo de titulación va dirigido tanto al laboratorio como al
médico veterinario, para así proporcionarle rangos referenciales apropiados a la edad del paciente.
1.5 Objetivo general
Determinar el rango de referencia de bioquímica sérica en caninos de distintos grupos etarios empleando el fotómetro automatizado humastar600
1.6
Objetivos Específicos Obtener valores bioquímicos indicadores de función hepática y renal clasificados por edad.
Comparar los valores bioquímicos obtenidos con los valores de fuentes de referencia existentes.
Elaborar una tabla de valores bioquímicos sanguíneos para que sean utilizados en la clínica veterinaria de pequeñas especies.
Hipótesis
Gran parte de los Médicos Veterinarios de la ciudad de Guayaquil, se basan en los cuadros referenciales de química sanguínea encontrados en las literaturas internacionales desconociendo las características geográficas, climáticas, nutricionales y genéticas en que fueron tomados esos valores dificultando la interpretación del estado clínico autentico del paciente.
2 Marco Teórico 2.1 Estado del arte
Los valores de referencia o valores normales son necesarios para juzgar si el resultado de una prueba es normal o presenta anormalidades. Los límites de referencia deben tener intervalos de confianza cercanos a los valores superiores e inferiores, pero no suele ocurrir en los laboratorios. Las fuentes de valores de referencia son por lo general subóptimas, es necesario en categorizar para establecer valores de referencia, considerando los siguientes aspectos: especie, raza, edad, sexo, entre otros (Willard & Tyedten, 2004).
Para la interpretación de manera adecuada los resultados de las pruebas de laboratorio se necesitan patrones de comparación, estos patrones corresponden a valores de pacientes sanos permitiendo así detectar condiciones patológicas. Esta terminología ya no sé por la dificultad de definir científicamente la condición de ‘normal’
para una prueba, además de existir un porcentaje de individuos enfermos con valores normales y sanos con valores anormales.
Para tener mayor precisión se emplean los términos ‘intervalo de referencia’ (IR), límite de referencia (LR) en la mayoría de los textos de laboratorio. El IR corresponde a los valores establecidos mediante una prueba de la cual los resultados del 95% de la población de referencia al ser definida por una metodología definida. El LR son los valores menores e IR son los valores mayores (Cerón, 2013).
Los animales sanos suelen tener aumentos y/o reducciones transitorias en los resultados de la prueba fuera del rango normal debido a factores como el ambiente, estado emocional, dietas u otros factores; un pequeño porcentaje de animales tienen valores superiores a los de la población general. Los pacientes clínicamente sanos pueden tener enfermedades ocultas que alteren los resultados de las pruebas de
laboratorio; los erros en la toma de muestra, manejo y procedimientos de laboratorio afectan y pueden dar resultados falsos en animales sanos. Para desarrollar intervalos de referencia útiles, uno debe decidir que la población a evaluar, la muestra y los métodos que van a emplearse (Meyer & Harvey, 2007).
2.2 Bases teóricas
2.2.1
DefiniciónLa bioquímica sanguínea representa una herramienta clínica importante en las investigaciones que conducen al diagnóstico, proceso y el pronóstico de las enfermedades de animales domésticos. Existen en la actualidad un gran número de determinaciones bioquímicas, enzimas catalizadores aceleran las reacciones bioquímicas intracelulares o por el estímulo de la síntesis de proteínas que activan la liberación de enzimas a la circulación (Alvarado, et. All., 2015)
2.2.2 Valores de referencia
‘’Los valores de referencia son necesarios para determinar si un resultado de una prueba es normal o no. Un resultado de laboratorio carece de significado si se desconoce las causas y circunstancias del paciente’’ (Pedrozo, et. All., 2010).
Los valores que son anormales se definen clínicamente como aquellos que no están dentro de los límites del rango de referencia. Este rango de referencia se obtiene mediante el muestreo de una población representativa, descartando estadísticamente los valores extremos, los resultantes limites son equivalente a la salud. ‘’El laboratorio clínico complementa el examen clínico del paciente, los resultados proporcionan información objetiva para el diagnóstico diferencial, formular el pronóstico y evaluar tratamiento’’ (Pedrozo, et. All., 2010).
2.2.3 Nutrientes, Metabolitos y Enzimas 2.2.3.1 Urea
La urea es sintetizada en el hígado, como consecuencia de la degradación de aminoácidos que provienen de las proteínas tisulares o de la dieta. La urea se elimina gran parte por el riñón y se elimina por el intestino transformada en amonio. Mediante los glomérulos, la urea es filtrada y se reabsorbe aproximadamente en la mitad de los túbulos renales, la cantidad reabsorbida depende de la hidratación y a la cantidad de orina del animal.
Un leve incremento de la urea no quiere decir que podría tratarse una insuficiencia renal. Los niveles aumentados de urea y otras proteínas nitrogenadas en sangre se denominan ‘’azotemia’’. La presencia de niveles elevados de elementos tóxicos en la sangre se denomina uremia.
Causas del aumento de los niveles sanguíneos de urea: azotemia prerrenal por deshidratación, hemorragia, insuficiencia cardiaca congestiva, disminución de la perfusión renal; azotemia renal por isquemia prolongada, nefrotoxinas (AINEs, aminoglucósidos, pigmentos hemáticos, infecciones por leptospira, glomerulonefropatìa congénita, hipercalcemia y enfermedad inmunomediada;
azotemia postrenal por retención de orina, obstrucción de vías urinarias (tumores, cálculos, coágulos, tapones mucosos). Las causas de niveles bajos de urea sean por insuficiencia hepática, proteínas bajas en la dieta y puentes portosistémicos (López &
Mesa, 2015).
2.2.3.2 Creatinina
La creatinina está localizada en los tejidos musculares, la cual guarda energía en forma de fosfocreatina, en momentos de desgaste muscular u otras afecciones relacionadas se fabrica menos creatinina, sin embargo, el ejercicio prolongado fuerte
aumenta los niveles de creatinina. La creatinina es expulsa por vía renal y no se reabsorbe, los niveles altos son indicativos de que los riñones no están funcionando bien.
Las causas de aumento de los niveles sanguíneos de creatina son hiperazotemia:
prerrenal por deshidratación, hipoperfusión renal, proteína alta en dieta, gastroenterrogia y por catabolismo; cuando es a nivel renal se por afectación de su funcionalidad; postrenal cuando hay obstrucción parcial o total de las vías urinarias y por uroperitoneo (Núñez, Bouda, 2007). Por otro lado, cuando hay una disminución de la masa muscular, hay bajos niveles sanguíneos de creatinina (Ettinger & Feldman, 2007).
2.2.3.3 Proteínas Totales
La albumina y todas las demás proteínas, con excepción de las inmunoglobulinas, se sintetizan en el hígado, incluyendo el fibrinógeno y las alfa globulinas. Las inmunoglobulinas (IgG, IgM, IgA e IgE) se producen en el tejido linfoide a partir de células plasmáticas y de los linfocitos B, en respuesta de la estimulación antigénica (Bush, 1999).
La fracción globulìnica comprende lo siguiente: ᾳ - globulinas, como la haptoglobulina que se une a la hemoglobina libre, la transcortina que se liga al cortisol, y la ᾳ - lipoproteína que transporta lípidos; β – globulinas, que incluye la transferrina que se liga al hierro, β1 – lipoproteína que transporta lípidos. La concentración de β – globulinas se incrementa cuando hay una estimulación antigénica con procesos neoplásicas. Y- globulinas, que son la mayoría de las inmunoglobulinas, y aumenta cuando hay estimulación antigénica, especialmente en infecciones crónicas y en desordenes autoinmunes.
Las proteínas totales se aumentan por las siguientes causas:
hemoconcentración por anemia, deshidratación (vómitos, diarreas), poliuria, ascitis, fiebre, sudoración profusa (Núñez, Bouda, 2007); inflamaciones agudas debido al aumento de fibrinógeno y en inflamaciones crónicas por el aumento de síntesis de globulinas (hipergammaglobulinemia); neoplasias como plasmocitoma o mieloma múltiple y linfosarcoma, cuando el valor de proteínas es igual o mayor a 100 g/L. La fracción responsable de la elevación suele ser la gamma.
Las causas de disminución en los niveles de proteínas totales: disminución de síntesis de proteínas totales por insuficiencia hepática, dietas con déficit de proteínas, mala digestión por insuficiencia exocrina pancreática o por enteropatía, e insuficiencia cardiaca congestiva; perdida de proteínas por glomerulonefropatìa, por diarreas, quemaduras, hemorragias, secuestro a espacios terceros; los animales recién nacidos poseen concentraciones de proteínas más bajas que los animales adultos, el consumo de calostro provoca una elevación temporal; y la sobrehidratación causa hemodilución (Núñez & Bouda, 2007).
2.2.3.4 Albumina
La albumina plasmática representa dos tercios de las proteínas de la circulación y la mitad de la albumina total del organismo, es sintetizada por el hepatocito, y su vida media es de aproximadamente veinte días. El 80% de la presión oncótica del plasma se atribuye a la albumina, que es la responsable de los movimientos acuosos entre el medio intravascular y el medio intersticial. La segunda función de la albumina plasmática es garantizar el transporte de diversas sustancias, entre las que se encuentra: bilirrubina, ácidos grados, fármacos (fenilbutazona, fenitoína y otros) y hormonas (Núñez & Bouda, 2007).
La deshidratación causa elevación de globulinas y de proteínas totales en especial la albumina. Por otro lado, las causas de disminución de la albumina son:
insuficiencia hepática, atrofia, fibrosis, cirrosis, derivación porto sistemática, pérdida renal, amiloidosis, glomerulonefritis, glomeruloesclerosis, asimilación inadecuada, malabsorción, enteropatía con pérdida de proteína, enfermedades cutáneas exudativas, vasculitis, quemaduras, abrasiones, neonatos, hemorragia externa, desnutrición por parásitos, por procesos compensatorios por derrames crónicos, hiperglobulinemias, mieloma múltiple (Ettinger & Feldman, 2007).
2.2.3.5 ALT – alanina aminotransferasa
La alanina aminotransferasa (ALT) es una enzima citosólica de los hepatocitos y también muscular, que aumenta cuando hay daño de la membrana reversible del hepatocito o con necrosis hepatocelular que puede darse por: hipoxia, lipidosis hepática, hepatitis, traumatismo y toxicidad. Es importante destacar que los aumentos de ALT no implican una pérdida de la función hepatocelular (Garner &
Obrin, 2015).
Debido a que la ALT existe en menor grado en las células musculares, el daño severo del músculo esquelético debido a traumatismo o afecciones musculares heredades también puede provocar aumentos de ALT. Mientras que la disminución de masa hepática puede causar disminución de la ALT.
2.2.3.6 Aspartato aminotransferasa (AST).
El aspartato aminotransferasa es una enzima que está presente en el citosol y las mitocondrias de muchos tejidos, principalmente en los hepatocitos y las células musculares, y también se encuentra en glóbulos rojos. AST, tiene una vida media más corta en perros (< 24 horas), puede ser un mejor indicador del daño activo de los hepatocitos (Garner & Obrin, 2015).
Puede haber un aumento de AST sérica con lesión hepatocelular o muscular, también cuando hay hemolisis. Debido a que la AST se libera cundo hay daño en las membranas celulares, es una enzima de fuga, si bien se aumenta cuando hay daño hepatocelular, pero no significa que la función hepática este alterada. La actividad de la AST se ve disminuida por el uso de cefalosporinas caninas (Ettinger
& Feldman, 2007).
.
2.2.3.7 Fosfatasa Alcalina (FAS)
La fosfatasa alcalina (ALP), es una enzima de inducción presente en las membranas celulares. Esta enzima se sintetiza en varios tejidos u órganos, como:
hígado, huesos, riñones, intestinos, páncreas y placenta. En animales domésticos, se producen dos isoenzimas ALP a partir del estímulo de dos genes diferentes; se denominan isoenzima intestinal o isoenzima tisular inespecífica (Glade, et. All., 2012).
La mayor parte de la actividad normal de ALP se da en el hígado. En perros, la vida de media de la ALP intestinal y placentaria es de aproximadamente 6 minutos;
mientras que en gatos es de aproximadamente 2 minutos. Por lo tanto, es poco probable que estas isoenzimas causen un aumento de la actividad sérica de ALP (Glade, et. All., 2012).
Las causas del incremento de esta enzima se dan por: neoplasias hepáticas (colestasis); mayor actividad osteoblástica que se en animales jóvenes por estar en la etapa de crecimiento; inducción por fármacos, principalmente en perros, como:
corticosteroides (exógenos o endógenos) y anticonvulsivos (fenobarbital, fenitoína, primidona) (Glade, et. All., 2012).
2.2.4 Espectrofotometría.
La espectrofotometría es un método para medir la cantidad de luz que absorbe una sustancia química cuando un haz de luz pasa a través de la solución de muestra. El principio básico es que cada compuesto absorbe o trasmite luz en un cierto rango de longitud de onda. Esta medida puede usarse para medir la cantidad de una sustancia química conocida, ‘es además un método útil de análisis cuantitativo en diversos campos como la química, la física, bioquímica y la ingeniería química’ (Vo, 2020).
El espectrofotómetro es un instrumento que mide la cantidad de fotones (la intensidad de luz) absorbidos después de pasar a través de la solución de muestra.
Dependiendo del rango de longitud de onda de la fuente de luz, se puede clasificar en dos tipos diferentes: espectrofotómetro UV-visible que utiliza luz sobre el rango de 185 – 400nm ultravioleta y rango visible del espectro de la radiación electromagnética de 400-700 nm; y el espectrofotómetro de infrarrojos que utiliza 700 a 1500 mm del espectro de radiación electromagnética (Vo, 2020).
2.2.5 Recolección y almacenamiento de las muestras.
La lipemia interfiere con las pruebas químicas, por lo cual los animales deben estar en ayunas durante 12 horas antes de recolectar las muestras. Para muestras de suero, la sangre debe introducirse en un tubo con tapa roja y deben mantenerse a temperatura ambiente durante 20 a 30 minutos para permitir la formación y retracción completa del coagulo, la formación incompleta de coágulos puede hacer que el suero se gelifique debido a la formación de fibrina latente. El coagulo debe separase del vidrio pasando suavemente un aplicador por las paredes del tubo (‘’rimming’’) (Bildfell, 2019).
Después, las muestras deben centrifugarse a alta velocidad (100º g: 2200 rpm) durante 10 minutos, la centrifugación hará que se aloje una capa de gel de silicona entre las células empaquetadas y el suero. La manipulación brusca de la muestra o la separación incompleta de los eritrocitos del suero pueden promover la hemolisis, interfiriendo de esta manera los resultados de ciertas pruebas.
La capa de gel debe inspeccionarse para garantizar la integridad de la barrera y se recomienda volver a centrifugar si hay grietas en esta capa, el suero deberá extraerse y transferirse a un tubo limpio para minimizar los artefactos como la disminución de los niveles de glucosa. El suero debe refrigerarse o congelarse hasta que se analice. Los retrasos en el análisis pueden afectar negativamente a los resultados de varios analitos.
.
2.2.6 Interferencia con la muestra y la bioquímica clínica.
Las interferencias que pueden afectar las muestras sanguíneas son: lípidos, hemoglobina libre y bilirrubina, globulinas y restos de fármacos. Al mismo tiempo, que ciertas interferencias se consideran también variables preanalíticas, algunos lípidos, hemoglobinas y fármacos son controlables hasta cierto punto y pueden minimizarse mediante la recolección de muestras y manejo (Wong, 2020).
2.2.6.1 Lipemia.
La lipemia es generalmente un artefacto post-prandial. De hecho, la lipemia en pacientes que han ayunado indica la presencia de una enfermedad subyacente, por ejemplo: diabetes mellitus o pancreatitis (Wong, 2020). La lipemia interfiere con las pruebas por los siguientes mecanismos:
2.2.6.2 Hemólisis.
La hemólisis se da por, técnica de venopunción deficiente, lipemia, congelación de muestras de sangre completa, separación tardía de suero de las células, presentación tardía de la muestra y ciertos anticoagulantes (fluoruro-oxalato). Los glóbulos rojos son más frágiles en muestras con lipemia, incluso si se almacena o se manipula correctamente. Sin embargo, la hemólisis puede ocurrir in vivo cuando hay hemólisis intravascular con ciertos tipos de anemia hemolíticas, por ejemplo:
infección por Babesia spp o cualquier lesión oxidante.
Cuando el paciente este anémico y tiene hemoglobinuria, es probable que exista hemólisis intravascular in vivo, es decir, una anemia hemolítica patológica.
2.2.6.3 Ictericia.
La bilirrubina surge de sus propiedades espectrales y su capacidad para reaccionar químicamente con otros reactivos, lo que resulta en valores de analito disminuidos. Esto afecta particularmente a las concentraciones de creatinina y proteína, los cuales disminuyen cuando >15 o > 10 mg/dL de Bilirrubina total respectivamente (Wong, 2020).
2.3 Marco legal
2.3.1 Unidades del sistema internacional
Sistema Internacional de Unidades (SI), estas siglas fueron adoptadas por la undécima Conferencia General de Pesas y Medidas (CGPM) en 1960 para que fuera conocido intencionalmente (INEN, 2013). La definición de las unidades SI, se establece mediante un conjunto de siete constantes definitorias, entre las que se incluye le mol para indicar la cantidad de sustancias en términos de moléculas.
Las concentraciones de todas las sustancias bioquímicas, incluyendo los electrolitos, expresan en molar por litros, ya sea en sus submúltiplos milimoles por litros (mmol/L) o micromoles por litro (µmol/L).
Sin embargo, existen excepciones importantes: la concentración de sustancias de peso molecular variables que no se pueden determinar con precisión o que no se pueden definir universalmente, se expresan en unidades gravimétricas, es decir, en términos de masa por litro, se incluyen: proteínas totales, albumina, globulinas y hemoglobina (g/L), ácido fólico (µg/L) y la vitamina B12 (ng/L). Actualmente la actividad enzimática se expresa en términos de unidades internacionales por litro (u/L).
3 Materiales y métodos 3.1 Enfoque de la investigación
3.1.1 Tipo de investigación
Esta investigación fue de tipo observacional descriptiva. El modo de este proyecto fue tanto de campo y de laboratorio, porque se determinó rangos referenciales mediante la observación de pacientes clínicamente sanos.
3.1.2 Diseño de investigación
La investigación fue de tipo no experimental.
3.2 Metodología
3.2.1 Variables
3.2.1.1 Variables Independientes
Edad
Peso
3.2.1.2 Variables dependientes
Valor de Urea
Creatinina
AST
ALT
Fosfatasa alcalina
Proteínas Totales
Albumina
Globulinas
3.2.2 Población y muestra
De acuerdo con La Federación Internacional de Química Clínica (IFCC), dice que la cantidad de muestras para obtener rangos referenciales son 120 individuos, para esta investigación se procedió a tomar 300 muestras sanguíneas a caninos de distintas edades, sin reparo de razas y sexo. Se realizó las determinaciones de los distintos metabolitos y enzimas ya descritos en el capítulo 2.
Se estableció 3 veterinarias de la ciudad de Guayaquil, se dividieron en 3 grupos de 100 individuos de (6 meses - 1 año), (2 - 3 años) y (4 años en adelante). Una vez obtenido estos valores se procedió a organizarlos por edad y de manera ascendente, para posteriormente aplicar la fórmula de porcentajes, para determinar el límite inferior y el límite superior.
HOJA DE REGISTRO
EDAD UREA CREAT AST ALT PROT ALB FAS OBSERVACIONES
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
3.2.3 Recolección de datos 3.2.3.1 Recursos
Materiales para la toma de muestras:
325 tubos descartables con aditivos
325 jeringas aguja 21 G
Alcohol
Algodón
Torniquete
Pluma
Hoja de registros
Materiales de Laboratorio:
Pipetas de vidrio de distintas capacidades.
Pipetas automáticas de distintas capacidades
Papel toalla
Cubetas de 1cm para espectrofotometría
Tubos de vidrio
Equipos de laboratorio:
Centrífuga de tubos
Espectrofotómetro
Baño maría Reactivos:
Reactivos para determinación de Urea
Reactivos para determinación de Creatinina
Reactivos para determinación de Transaminasas
Reactivos para determinación de Proteínas totales y Albúmina
Reactivos para determinación de Fosfatasa alcalina
3.2.3.2 Métodos y técnicas
Se realizó mediante la punción de la vena radial, cefálica o la vena safena lateral con agujas 21 G para obtener sangre fresca y depositarla en los distintos tubos, los cuales se rotularon y se anotaron los datos en la hoja de registro. Una vez obtenida la muestra se esperó hasta la formación del coágulo y se puso en refrigeración hasta su procesamiento.
Luego estos tubos debidamente rotulados se llevaron al laboratorio DIAGNOVET, donde reposaron en el baño María a 37 ° C por 20 minutos.
Una vez transcurrido este tiempo los tubos de suero se llevaron a la centrifuga a 3500 RPM por 5 minutos donde se separó el coágulo del suero, posteriormente el suero fue transferido a otro tubo para realizar las distintas determinaciones.
Se procedió a realizar la determinación de Urea, creatinina, GOT/AST, GPT/ALT, Proteínas totales y Albumina, Fosfatasa alcalina.
3.2.4 Análisis estadístico
Los instrumentos de medición fueron los de bioquímica. La sistematización se realizó a través de una hoja de cálculo y se creó una base de datos. Una vez creada se calculó medidas de frecuencia absoluta y relativa.
VETERINARIAS DONDE FUERON TOMADAS LAS MUESTRAS SANGUINEAS
HOSPETAL CRUZ DEL SUR
CIV
EDAD
6meses a 1 año 34 33 33
1 año a 3 años 33 34 33
3 años en adelante
33 33 34
SUB TOTAL 100 100 100
TOTAL 300
4 Resultados
4.1 Obtención de valores bioquímicos indicadores de función hepática y renal clasificados por edad.
Tabla 1.- Rangos referenciales de bioquímica sérica en perros atendidos en consultorios veterinarios de la ciudad de Guayaquil.
BIOQUIMICA MÉTODO UNIDADES
S. I
VALORES
UREA ENZIMÁTICO
COLORIMÉTRICO
mmol/L 2,5 – 9,5
*(6,2) CREATININA CINÉTICO
COLORIMÉTRICO T.F.
µmol/L 40,7 – 133
*(81)
AST COLORIMÉTRICO U/L 18 – 69
*(40,3)
ALT COLORIMÉTRICO U/L 18 – 195
*(44) FOSFATASA
ALCALINA
COLORIMÉTRICO U/L 21 – 172
*(59) PROTEINAS
TOTALES
COLORIMÉTRICO g/L 50 – 108
*(71,3)
ALBUMINA COLORIMÉTRICO g/L 21,2 – 46
*(31,4) Rosero, 2021.
Los resultados fueron comparados con rangos referenciales para caninos reportados por la bibliografía internacional. Estos valores se muestran en la tabla 2.
4.2 Comparación de los valores bioquímicos obtenidos con los valores de fuentes de referencia existentes.
Tabla 2.- Rangos referenciales para caninos reportados por la bibliografía internacional.
BIOQUIMICA UNIDADES S. I
INVESTIGACIÓN ACTUAL
ISLAND FIELDER COBAS
UREA mmol/L 2,5 – 9,5 2.8 – 9.8 2.9 – 10 1,5 – 4,33 CREATININA µmol/L 40,7 – 133 54-122 44 – 150 53 – 123
AST U/L 18 – 69 18-55 10 – 15 18 – 56
ALT U/L 18 – 195 13- 69 13 – 109 17 – 95
FOSFATASA ALCALINA
U/L 21 – 172 18 - 113 1 – 114 7 – 115
PROTEINAS TOTALES
g/L 50 – 108 56 - 71 54 – 75 55 – 72
ALBUMINA g/L 21,2 – 46 30 -36 23 – 31 32 – 41
Se realizó la división de distintos grupos etarios, los cuales fueron establecidos en caninos de 6 meses a 1 año, 1 año a 3 años y caninos de 4 años en adelante. Estos grupos mostraron notables diferencias en determinadas bioquímicas, lo cual se expone en la tabla 3.
4.3 Elaboración de una tabla de valores bioquímicos sanguíneos para que sean utilizados en la clínica veterinaria de pequeñas especies.
PRESENTE INVESTIGACIÓN VS. BIBLIOGRAFÍAS EXTRANJERA UREA.
De acuerdo con la urea la presente investigación dio como resultado que el valor mínimo fue de 2,5 mmol/L, mientras que Fielder expresa un valor mínimo de 2,9 mmol/L; Island 2,8 mmol/L; Cobas 1,5 mmol/L, lo cual muestra diferencias de -0,4; - 0,3; y 1. Estos resultados se encuentran expresados en mmol/L de acuerdo con el Sistema Internacional. Demostrando así que el valor mínimo obtenido por la presente investigación si existe una leve diferencia con cada autor.
El valor máximo fue de 9,5 mmol/L, mientras que los valores presentados por las fuentes internacionales fueron, Fielder 10 mmol/L; Island 9,8 mmol/L; Cobas 4,33 mmol/L, estos valores expresan una diferencia de -0,5; -0,3; 5,17. Estos resultados se encuentran expresados en mmol/L de acuerdo con el Sistema Internacional.
Evidenciando así que el valor mínimo de la presente investigación existe una leve diferencia con unos autores, exceptuando a Cobas que si existió una diferencia representativa.
CREATININA
El valor mínimo para este estudio fue 40,7 µmol/L, mientras que Fielder 44 µmol/L;
Island 54 µmol/L; Cobas 53 µmol/L, estos valores expresan una diferencia de -3,3; - 13,3; -12,3. Estos resultados se encuentran expresados en µmol/L. de acuerdo con el Sistema Internacional. Demostrando así que el valor mínimo de la investigación realizada está por debajo de los valores mostrado por las fuentes internacionales.
El valor máximo fue de 133 µmol/L, en cuanto a los valores mostrados por los demás autores fueron 150 µmol/L para Fielder; 122 µmol/L para Island y 123 µmol/L para Cobas, todos estos valores muestran una diferencia de -17; 11; 10. Estos valores se encuentran expresados en µmol/L, de acuerdo con el Sistema Internacional.
Demostrando así que el valor máximo de la investigación realizada está por encima de las fuentes internacionales, exceptuando a Fielder que su valor máximo obtenido fue mayor a la presente investigación.
AST
El valor mínimo de este analito fue de 18 U/L, mientras que los valores mínimos demostrados por las fuentes internacionales fueron de Fielder 10 U/L; Island 18 U/L;
Cobas 18 U/L. Estos valores mostraron una diferencia de 8 para Fielder y los demás autores no mostraron diferencia porque obtuvieron los mismos valores que la presente investigación.
El valor máximo de esta investigación fue de 69 U/L, mientras que las fuentes internacionales fueron Fielder 15 U/L; Island 55 U/L; Cobas 56 U/L. estos valores mostraron una diferencia de 54; 14;13. Detallando que el valor máximo de este analito está por encima de los valores obtenidos de las fuentes internacionales.
ALT
El valor mínimo de esta investigación fue de 18 U/L, mientras que las fuentes internacionales dieron como resultado Fielder 13 U/L; Island 13 U/L y Cobas 17 U/L.
Mostrando así una diferencia de 5; 5; 1. La presente investigación demostró que el valor mínimo obtenido está por encima de los resultados de las fuentes internacionales.
El valor máximo de este analito fue de 195 U/L, en cuanto a los expuestos por las fuentes internaciones fueron Fielder 109 U/L; Island 69 U/L; Cobas 95 U/L. Mostrando así una diferencia de 86; 126; 100. Demostrando que el valor máximo de la presente investigación está muy por encima de los expresados en las fuentes internacionales
FOSFATASA ALCALINA
El valor mínimo de este analito fue de 21 U/L, mientras que los valores mínimos mostrados por las fuentes internacionales fueron: Fielder 1 U/L; Island 18 U/L; Cobas 7 U/L. Los cuales exhiben una diferencia de 20; 3; 14. Demostrando así que el valor mínimo obtenido en la presente investigación está por encima de los valores mostrados en las fuentes internacionales.
El valor máximo para la presente investigación fue de 172 U/L, en cuanto a los valores expuestos por las fuentes internacionales fueron: Fielder 114 U/L; Island 113 U/L; Cobas 115 U/L. presentando una diferencia de 58; 59; 57. Mostrando así que el valor mínimo de este analito está muy por encima de los valores obtenidos de las fuentes internacionales.
PROTEINAS TOTALES
El valor mínimo que presentó esta investigación fue de 50 g/L, mientras que los valores mínimos mostrados en las fuentes extranjeras fueron: Fielder 54 g/L; Island 56 g/L; Cobas 55 g/L. presentando una diferencia de -4; -6; -5. Estos resultados se encuentran expresados en g/L, de acuerdo con el Sistema Internacional. Demostrando así que el valor mínimo obtenido en la presente investigación se encuentra por debajo de los valores expresados por las fuentes extranjeras.
El valor máximo de este analito fue 108 g/L, en cuanto a los valores mínimos expresados en las fuentes internacionales fueron: Fielder 75 g/L; Island 71 g/L; Cobas 72 g/L. Estos valores presentaron una diferencia de 33; 37; 36. Estos resultados se encuentran expresados en g/L, de acuerdo con el Sistema Internacional. Detallando que el valor máximo de esta investigación está por encima de los resultados obtenidos por las fuentes extranjeras.
ALBUMINA
El valor mínimo de esta investigación fue de 21,2 g/L, mientras que los expresados en las fuentes internacionales fueron de: Fielder 23 g/L; Island 30 g/L; Cobas 32 g/L.
Los cuales muestran diferencias de -1,8; -8,8; -10,8. Estos resultados se encuentran expresados en g/L, de acuerdo con el Sistema Internacional. Mostrando así que el valor mínimo de la presente investigación está por debajo de los valores obtenidos de las fuentes internacionales.
El valor máximo de esta investigación fue de 46 g/L, en cuanto a los expuestos por las fuentes extranjeras son: Fielder 31 g/L; Island 36 g/L; Cobas 41 g/L, los cuales presentan una diferencia de 15; 10; 5. Estos resultados se encuentran expresados en g/L, de acuerdo con el Sistema Internacional. Demostrando que el valor máximo de este analito está por encima de los expresados en las fuentes internacionales.
Tabla 3.- Rango referenciales para bioquímica sérica de acuerdo con su edad de perros atendidos en consultorios de la ciudad de Guayaquil.
BIOQUIMICA UNIDADES S. I
6 MESES - 1 AÑO (N=100)
2 AÑOS – 3 AÑOS (N=100)
4 AÑOS EN ADELANTE
(N=100)
UREA mmol/L 2,50 – 8,5
(5,5)
2,8 – 8,9 (6,3)
3,2- 9,5 (6,7) CREATININA µmol/L 41,3 – 123
(78,8)
40,7 – 133 (80,4)
43,4 – 128,2 (83)
AST U/L 21 – 69
(41,7)
20 – 69 (40,6)
18 – 69 (38,7)
ALT U/L 19 – 72
(41,5)
21 – 181 (45)
18 – 195 (44,3) FOSFATASA
ALCALINA
U/L 29 – 116
(71,7)
21- 129 (49,9)
21 – 172 (54,3) PROTEINAS
TOTALES
g/L 56 – 92
(70)
53,2 – 94 (71,3)
50 – 108 (72,6) ALBUMINA g/L 21,2 – 44, 4
(31,4)
22 – 44,7 (31,8)
22,6 – 46 (31)
COMPARACIÓN DE LOS DISTINTOS GRUPOS ETARIOS UREA
Al comparar los datos obtenidos en el presente estudio, observamos que los valores obtenidos como mínimos para los caninos que van desde 6 meses hasta 1 año es de 2,5 mmol/L, caninos de 2 años a 3 años 2,8 mmol/L y caninos de 4 años en adelante tuvieron un valor de 3,2 mmol/L.
De esta misma manera los valores máximos obtenidos fueron, caninos de 6 meses a 1 año 8,5 mmol/L, caninos de 2 años a 3 años obtuvieron un valor de 8,9 mmol/L y por últimos los caninos de 4 años en adelante obtuvieron un valor de 9,5 mmol/L, con los que podemos llegar a concluir que los valores sanguíneos de este analito va aumentando de acuerdo con la edad.
CREATININA
Los datos obtenidos en este estudio determinaron que el valor mínimo en caninos de 6 meses a 1 años fue de 41,3 µmol/L, caninos de 2 años a 3 años 40,7 µmol/L y los caninos de 4 años fue de 43,4 µmol/L.
En cuanto lo referente al valor máximo para caninos de 6 meses a 1 año es de 123 µmol/L, caninos de 2 años a 3 años 133 µmol/L y los caninos de 4 en adelante fue de 128,2 µmol/L, con lo que podemos llegar a concluir que dicho analito va incrementando considerablemente con la edad.
AST
Los caninos que van desde los 6 meses a 1 año presentan los valores mínimos de 21 U/L, los de 2 años a 3 años 20 U/L y los que van desde los 4 años en adelante su valor es de 18 U/L.
Los valores máximos obtenidos son de 69 U/L en caninos de 6 meses a 1 año, 69 U/L en caninos de 2 años a 3 años y 69 U/L en caninos que van de 4 años en adelante.
Llegando a la conclusión que este analito va disminuyendo notablemente con la edad en su valor mínimo y se mantiene contante en su valor máximo.
ALT
Los caninos que van desde los 6 meses a 1 año exponen un valor mínimo de 19 U/L, los de 2 años a 3 años de 21 U/L y los de 4 años en adelante exponen un valor de 18 U/L.
Su valor máximo de los caninos de 6 meses a 1 año es de 72 U/L, los 2 años a 3 años es de 181 U/L y los de 4 años en adelante presentan un valor de 195 U/L.
presentándose así que este analito va aumentando en su valor máximo de acuerdo con la edad.
FOSFATASA ALCALINA
El valor mínimo obtenido para los diferentes grupos etarios fue de: caninos de 6 meses a 1 años es de 29 U/L, de 2 a 3 años fue de 21 U/L y los de 4 años en adelante presento un valor de 21 U/L.
El valor máximo para caninos de 6 meses a 1 año es de 116 U/L, caninos de 2 a 3 años de 129 U/L y los de 4 años en adelante fueron de 172 U/L. Resultados que muestran una diferencia significativa en los valores obtenidos en cachorros, los cuales expresan resultados superiores a los presentados por adultos y gerentes.
PROTEINAS TOTALES
Al comparar los datos obtenidos con la presente investigación podemos determinar que el valor mínimo en caninos de 6 meses a 1 año fue de 56 g/L, los caninos de 2 años a 3 años es de 53,2 g/L y los de 4 años en adelante fue 50 g/L.
Así mismo en lo referente al valor máximo en caninos de 6 meses a 1 año fue de 108 g/L, los de 2 años a 3 años es 94 g/L y los de 4 años en adelante obtuvieron un resultado de 108 g/L, con lo que podemos concluir que los valores sanguíneos para este analito se van incrementando considerablemente con la edad, ya que los valores para caninos jóvenes son notablemente menores que los obtenidos para caninos adultos y gerontes.
ALBUMINA
Los caninos de 6 meses a 1 año presentan un valor mínimo de 21,2 g/L, los de 2 a 3 años es de 22 g/L y los de 4 años en adelante presentan valores de 22,6 g/L.
Así mismo los valores máximos obtenidos fueron en caninos de 6 meses a 1 año de 44,4 g/L, de 2 a 3 años de 44,7 g/L y los de 4 años en adelante presentaron valores de 46 g/L, con lo que podemos concluir que los valores de este analito van incrementando gradualmente con la edad.
5 Discusión.
Urea
En la presente investigación, el valor mínimo de urea fue de 2.5 mmol/L, por otro lado, el Laboratorio Diagnovet indica un valor mínimo de 3.9 mmol/L, siendo una diferencia de -1.4 mmol/L por debajo de los valores evidenciados por las fuentes locales. El valor máximo para el fue de 9,5 mmol/L, mientras que para Diagnovet fue de 10,5 mmol/L, con una diferencia de -1, demostrando que el valor máximo de los resultados de la investigación esta por debajo de la fuente local.
Creatinina
El valor mínimo fue de 40,7 µmol/L, mientras el Lab. Diagnovet presenta un valor de 35,5 µmol/L, el cual exhibe una diferencia de diferencias de 5,2 mayor al compararlo con el Lab. Diagnovet.
El valor máximo fue de 133µmol/L, mientras que los valores expuestos por las fuentes locales fueron de: 132,6 µmol/L. Valores que exponen diferencias ligeras de 0,4.
Aspartato transferasa
El valor mínimo fue de 18 u/L, el valor mínimo del laboratorio local Diagnovet fue de 6 u/L, presentando una diferencia de 12 por encima de la fuente local. El valor máximo fue de 69 u/L, mientras que el laboratorio fue de 22 u/L, con una diferencia de 47 por encima de la fuente local.
Alanina Transferasa
El valor mínimo fue de 18 u/L, el valor mínimo de Diagnovet fue de 7 u/L, con una diferencia de 11 mayor a la fuente local. El valor máximo fue de 195 u/L, y el de Diagnovet fue de 22 u/L, con una diferencia significativa de 173, demostrando que el valor mínimo presentado por la investigación esta por encima de la fuente local.
Fosfatasa alcalina
El valor mínimo de la FA fue de 21 u/L, mientras que para Diagnovet fue de 51 u/L, con una diferencia de -30 vs la fuente local. El valor máximo fue de 172 u/L mientras que el valor máximo de Diagnovet fue de 223 u/L, con una diferencia de -51 vs la fuente local.
Proteínas totales
El valor mínimo de los resultados obtenidos fue de 50 g/L, y el valor mínimo del laboratorio de Diagnovet fue de 49 g/L, presentando una diferencia de 1 por encima de la fuente local. El valor máximo fue de 108 g/l, y para Diagnovet fue de 80 g/L, demostrando que los resultados de la investigación se encuentran por encima del obtenido del laboratorio local.
Albumina
El valor mínimo de este analito fue de 21,2 g/L, y los valores de Diagnovet es de 22g/L, presentando así una diferencia de -0.8, siendo los resultados de la investigación ligeramente menor (-0,8) a los de la fuente local. El valor máximo fue de 46 g/L, mientras que el valor máximo del laboratorio fue de 38 g/L, valores que exponen una diferencia de 8 por encima de la fuente local.
6 Conclusiones
Los valores obtenidos de los diferentes analitos vs los valores de las fuentes locales, laboratorio Diagnovet, manifestaron leves variaciones confirmando la teoría que los rangos referenciales no son universales, sino que varían dependiendo de la zona, clima y población testeada.
Los valores analizados de Fosfatasa alcalina (FA), proteínas totales y albuminas, están influenciados de acuerdo con la edad del canino, por lo cual es indispensables especificar valores de cachorros y adultos.
Los valores referenciales para bioquímica sanguínea obtenido en este estudio no presentan cambios significativos en función del sexo del animal.
7 Recomendaciones
Se recomienda reemplazar los rangos referenciales de fuentes internacionales por valores propios de la localidad, obtenidos mediante estudios zonales. Se deberá determinar los rangos referenciales de proteínas totales, albumina y fosfatasa alcalina, debido a que estos analitos están influenciados por la edad de los caninos.
Se sugiere realizar estudios para determinar los valores referenciales en la bioquímica sanguínea en caninos de las demás regiones del país, de esta manera se podrá recopilar información para estandarizar los rangos de referencia para Ecuador.
8 Bibliografía
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9
Anexo
sAnexo 1. Información Complementaria
UREA/BUN – COLOR (Biosystems) Preparación de reactivo de trabajo (RA):
Disolver el contenido del vial Reactivo A2 en una botella de Reactivo A1. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Equipo adicional:
Espectrofotometría para leer a 600 nm Baño María ajustable a 37 °C
Cronometro
Cubetas de 1cm de paso de luz
Pipetas de volumen variable para reactivos y muestras.
Procedimiento:
1. Atemperar los reactivos a temperatura ambiente
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada 3. Pipetear en tubos de ensayos
4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C 5.
5. Pipetea
6. Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C
7. Leer las absorbancias (A) de las muestras y el patrón, frente al blanco.
DETERMINACION DE CREATININA. BIOSYSTEMS Preparación del reactivo de trabajo (RT):
Mezclar 1 volumen de Reactivo 1 (R1) + 1 volumen de reactivo 2 (R2) Equipo adicional:
1. Espectrofotómetro para leer a 500 nm 2. Baño María ajustable a 37°C
3. Cronometro
4. Cubetas de 1 cm de paso de luz
5. Pipetas de volumen variable para reactivos y muestras
Procedimiento:
1. Preincubar el reactivo de trabajo, muestras y patrón a la temperatura de reacción (37°C)
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada
3. Pipetear en una cubeta: 1 ml de reactivo de trabajo (RT) y 100 ul de muestra o patrón.
4. Mezclar con suavidad. Insertar la cubeta en el compartimiento del instrumento y poner el cronometro en marcha
5. Anotar la absorbancia a 500 nm a los 30 segundos (A1), y a los 90 segundos (A2) de la adición de la muestra o patrón.
TRANSAMINASAS 200. WIENER
(Método colorimétrico para la determinación de la actividad de transaminasas GOT/GPT)
Preparación de diluyente para enzimas:
Completar a un litro con agua destilada Equipo adicional:
1. Espectrofotómetro para leer a 505nm 2. Baño María ajustable a 37°C
3. Cronometro
4. Cubetas de 1cm de paso de luz
5. Pipetas de volumen variable para reactivos y muestras
Procedimiento:
En dos tubos colocar:
Sustrato (GOT o GPT): Colocar en baño de agua a 37°C unos minutos
Agua destilada: Mezclar por agitación suavemente e incubar 30 minutos y agregar
Reactivo 2,4 – DNFH: Mezclar. Dejar 10 minutos a 37 °C. Luego agregar
Diluyente para enzimas: Mezclar por inversión y retirar del baño. Después de 2 minutos leer la absorbancia en 505 nm llevando el aparato a cero frente a agua destilada corregir las lecturas, restando al desconocido el valor del blanco.
PROTEÍNA TOTAL (Biuret).
ALBÚMINA (Verde de Bromocresol) Equipo adicional:
1. Espectrofotómetro para leer a 540nm 2. Baño María ajustable a 37°C
3. Cronometro
4. Cubetas de 1 cm de paso de luz
5. Pipetas de volumen variable para reactivos y muestras
Procedimiento: Determinación de Proteínas Totales
En tres tubos de ensayo marcados colocar: Agua destilada, Suero Patrón, Muestra, Reactivo A.
Mezclar y dejar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente. Leer en espectrofotómetro a 545 nm llevando a cero con el blanco de reactivo.
Procedimiento: Determinación de Albumina
En tres tubos de ensayo marcados colocar: Suero Patrón, Muestra, Reactivo A.
Mezclar y dejar los tubos 1 minuto a temperatura ambiente. Leer en espectrofotómetro a 630 nm llevando a cero con el blanco de reactivo.
FOSFATASA ALCALINA Optimizada – WIENER Preparación de Sustrato:
Transferir el contenido del frasco NaFF volcándolo directamente en el frasco de Buffer y mezclarlo hasta disolución completa. Anotar en rotulo fecha de preparación.
Preparación de Reactivo de color:
Disolver el contenido del envase en 500 ml de agua destilada. Rotular y colocar fecha de preparación.
Equipo adicional:
1. Espectrofotómetro para leer a 520nm 2. Baño María ajustable a 37°C
3. Cronometro
4. Cubetas de 1 cm de paso de luz
5. Pipetas de volumen variable para reactivos y muestras
Procedimiento: Determinación Fosfatasa alcalina En tres tubos de ensayo marcados colocar:
Sustrato: Preincubar en Baño de agua a 37°C unos minutos, luego agregar
Suero, Estándar: Mezclar e Incubar exactamente 10 minutos y agregar
Reactivo de color: Mezclar de inmediato cada tubo. Retirar los tubos del baño y leer en espectrofotómetro a 520 nm, llevando el aparato a cero de absorbancia con agua destilada
Anexos 2.-RECOLECCIÓN DE MUESTRAS
Anexos 3.- SEPARACIÓN DE SUEROS
Anexos 4.-REACTIVOS Y PROCESAMIENTO DE MUESTRAS
