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UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
SISTEMA DE POSTGRADO UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
PROGRAMA DE MAESTRÍA EN CLÍNICA Y CIRUGÍA CANINA
TESIS COMO REQUISITO PREVIO PARA LA OBTENCIÓN DEL TITULO DE MAGISTER EN CLÍNICA Y CIRUGÍA CANINA
“EVALUACIÓN DEL PROPÓLEO (gr. própolis) COMO ANTIBIOTICO EN OTITIS EXTERNA EN (Canis familiaris) EN LA CLÍNICA VETERINARIA + KOTA, CANTÓN LATACUNGA”
Dra. NANCY MARGOTH CUEVA SALAZAR
GUAYAQUIL, ECUADOR
2014
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SISTEMA DE POSTGRADUADOS UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
CERTIFICACIÓN
Yo, Dr. Rafael Alarcón Carló, M.Sc docente de la Universidad Agraria del Ecuador, en mi calidad de Director CERTIFICO QUE: He revisado la Tesis de Investigación titulada: “EVALUACIÓN DEL PROPÓLEO (gr. própolis) COMO ANTIBIOTICO EN OTITIS EXTERNA EN (Canis familiaris) EN LA CLÍNICA VETERINARIA + KOTA, CANTÓN LATACUNGA”, La misma que ha sido elaborada y presentada por la maestrante: Dra. NANCY MARGOTH CUEVA SALAZAR; La cual cumple con los requisitos técnicos y legales exigidos por la Universidad Agraria del Ecuador, para este tipo de estudios.
Atentamente,
---
Dr. Rafael Alarcón Carló, M.Sc
Guayaquil, 11 de Agosto de 2014
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UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
SISTEMA DE POSTGRADO UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
TEMA:
“EVALUACIÓN DEL PROPÓLEO (gr. própolis) COMO ANTIBIOTICO EN OTITIS EXTERNA EN (Canis familiaris)EN LA CLÍNICA VETERINARIA
+
KOTA, CANTÓN LATACUNGA”AUTOR:
Dra. NANCY MARGOTH CUEVA SALAZAR
TESIS DE INVESTIGACIÓN
APROBADA Y PRESENTADA AL CONSEJO DE POSTGRADO COMO REQUISITO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE:
MAGISTER SCIENTIAE EN CLÍNICA Y CIRUGÍA CANINA
TRIBUNAL DE SUSTENTACIÓN
Dra. Gloria Cabrera Suárez, M.Sc PRESIDENTE
Dra. Gloria Mieles Soriano, M. Sc Dr. Rafael Alarcón Carló, M.Sc EXAMINADOR PRINCIPAL EXAMINADOR PRINCIPAL
Dra. María Emén Delgado, M.Sc EXAMINADOR SUPLENTE
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AGRADECIMIENTO
A Dios por bendecirme cada instante de mi vida, por hacer realidad este sueño anhelado. A la UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR por darme la oportunidad de crecer profesionalmente. A mi director de tesis, Dr. Rafael Alarcón por su dedicación, quien con sus conocimientos, su experiencia, su paciencia y su motivación ha logrado en mí que pueda culminar este proceso con éxito. A mis amigos Mercedes, Jorge y Janet por haber compartido alegrías y tristezas durante este proceso, a todas las personas que durante mi preparación académica aportaron en mi formación, son muchas las personas que han formado parte de este sueño a las que agradezco su amistad, consejos, apoyo, ánimo y compañía en los buenos y malos momentos, todos están en mis recuerdos y en mi corazón, quiero darles las gracias por todo lo que me han brindado.
La Autora.
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DEDICATORIA
A quienes siempre creyeron en mí, mis amados padres, Néstor y Mercedes
Quienes son los cimientos de mi formación personal y profesional.
A mi esposo Pablo por su apoyo incondicional.
A mi hermana Belén por ser mi fuente de superación y ejemplo de persistencia y de lucha.
A mis sobrinos, por alegrar el día a día de mi vida, para ellos este trabajo y que sea modelo de trabajo y de perseverancia.
Cueva Salazar Nancy Margoth..
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RESPONSABILIDAD
Yo: NANCY MARGOTH CUEVA SALAZAR, Estudiante de postgrado, declaro haber realizado a cabalidad el tema: “EVALUACIÓN DEL PROPÓLEO (gr. própolis)COMO ANTIBIOTICO EN OTITIS EXTERNA EN (Canis familiaris) EN LA CLÍNICA VETERINARIA
+
KOTA, CANTÓN LATACUNGA”. Documento que es de mi autoría, cumpliendo los requisitos técnicos y legales exigidos por la Universidad Agraria del Ecuador, para este tipo de estudios.Atentamente,
--- Dra. NANCY MARGOTH CUEVA SALAZAR
C.I. 0501616353
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RESUMEN
La Otitis en perros es la inflamación del oído, este trabajo se enfocó en la investigación de Otitis Externa causada por bacterias, los caninos de orejas largas y péndulas son más propensos a padecer esta secuela de la otitis en perros.
Para confirmar que existe una Otitis en perros fue necesario realizar una revisión otoscopica del interior del oído del perro y toma de muestras de las secreciones para analizarlas y realizar un cultivo y un antibiograma para determinar la bacteria causante de la otitis, los Tratamientos para la otitis en perros generalmente
requieren la aplicación de antibióticos durante un período no menor a 15 días, y si la otitis ya se ha curado es necesario repetir el tratamiento por más tiempo.
La presente investigación se realiza como alternativa terapéutica con el uso de la tintura de propóleo, fue realizada en la Ciudad de Latacunga en la clínica
Veterinaria +KOTA, se trabajó con 40 perros domésticos de diferente raza que presenten síntomas de otitis externa. Una vez diagnosticada la otitis externa se procedió a tomar una muestra del área afectada para su posterior cultivo
microbiológico para identificar los agentes causales. Luego de esto se instauro cuatro tratamientos divididos en cuatro grupos de 10 pacientes cada uno. El primero con 1cc (oral) de tintura de propóleo, el segundo con 0.5cc (tópico) de tintura de propóleo, el tercero con 1.5cc (1cc oral, 0.5 topico) de tintura de propóleo, y un cuarto tratamiento como a base de cefalexina otica, los cuales fueron aplicados cada 12 horas por 21 días.
El resultado de las muestras antes de los tratamientos fueron: T1 Staphilococcus sp. 60% seguido de Staphilococcus aureus y Staphilococcus saprofiticus con el 20% cada uno T2 Staphilococcus saprofiticus con el 50% es la que se presenta con mayor frecuencia, a continuación Staphilococcus sp. en un 30%, seguido por Staphilococcus aureus 20 %. T3 Staphilococcus sp, Staphilococcus saprofiticus y Streptococo Spp 20%, seguido de un 10% de Echerichia coli y Proteus sp.
Bacterias en asociación Streptococo Spp + Staphylococo Aureus y Staphylococo
viii Aureus + Staphylococo Epidermidis en 10% y T4 Streptococo Spp 30%,
seguidos de Staphilococcus aureus 20% y Staphilococcus sp, Staphilococcus saprofiticus, Staphylococo Epidermidis con 10% cada uno, bacterias en asociación Streptococo Spp + Staphylococo Aureus, determina el 20%.
A los 21 días de los tratamientos con la tintura de propóleo en T1 se observa eliminación 100% de todas las bacterias, T2 eliminación de bacterias, con excepción de Staphilococcus saprofiticus en donde existe una disminución de colonias pero persiste. T3 eliminación de bacterias, con excepción de
Staphilococcus sp en donde existe una disminución de colonias, evidenciándose presencia, en bacterias por asociación, eliminación total de bacterias, T4
eliminación de bacterias, con excepción de Streptococo Spp en donde existe una persitencia bacteriana al igual que en asociación de bacterias.
El resultado de las muestras hemáticas antes de los tratamientos fueron: T1 se obtuvo un media de 10765 WBC y en el día 21 de la investigación, se evidencio una media de 9000, T2 se obtuvo un media de 13114 WBC y en el día 21 de la investigación, se evidencio una media de 11581; T3 se obtuvo un media de 16280 WBC y en el día 21 de la investigación, se evidencio una media de 10869 WBC; T4 se obtuvo un media de 18260 WBC y en el día 21 de la investigación, se evidencio una media de 11165WBC.
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SUMMARY
Otitis in dogs is inflammation of the ear, this work focused on the investigation of External Otitis caused by bacteria, canines and long pendulous ears are more prone to this sequel of otitis in dogs.
To confirm that there is an otitis in dogs was necessary to conduct a review of the internal otoscopic dog ear and sampling of secretions for analysis and perform a culture and sensitivity testing to determine the bacteria causing otitis, Treatments for otitis in dogs generally require the use of antibiotics for no less than 15 days period, and if the otitis is already cured is necessary to repeat the treatment longer.
This research was performed as a therapeutic alternative to the use of the tincture of propolis, was conducted in the city of Latacunga in Veterinary + KOTA clinic, worked with 40 different race of domestic dogs showing symptoms of otitis externa. Once diagnosed otitis externa proceeded to take a sample of affected for subsequent microbiological culture to identify the causative agents area. After this four treatments divided into four groups of 10 patients each instill it. The first with 1cc (oral) of tincture of propolis, the second with 0.5cc (topical) propolis tincture, third with 1.5cc (1cc oral, topical 0.5) propolis tincture, and a fourth treatment and base otic cephalexin, which were applied every 12 hours for 21 days.
The result of the samples before treatments were: T1 Staphylococcus sp. 60%
followed by Staphylococcus aureus and Staphylococcus saprofiticus with 20%
each Staphylococcus saprofiticus T2 with 50% is the one that occurs most frequently, then Staphylococcus sp. 30%, followed by 20% of Staphylococcus aureus. T3 Staphylococcus sp, Staphylococcus and Streptococcus Spp saprofiticus 20% followed by 10% of Escherichia coli and Proteus sp. Bacteria in association Staphylococcus aureus Streptococcus Spp + + Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis in 10% and 30% T4 Streptococcus spp, followed by Staphylococcus aureus and Staphylococcus sp 20%, saprofiticus
x Staphylococcus, Staphylococcus epidermidis with 10% each, Streptococcus spp bacteria in association + Staphylococcus aureus 20% determined.
At 21 days of treatment with propolis tincture observed T1 100% removal of all bacteria, T2 removing bacteria, Staphylococcus saprofiticus except where there is a decrease in colony but persists. T3 removing bacteria, Staphylococcus sp except where there is a decrease of colonies, demonstrating the presence, in association bacteria, total elimination of bacteria, T4 removing bacteria, with Streptococcus spp except where there is a bacterial persistency as in association with bacteria.
The results of the blood samples before treatments were: T1 half of 10765 and WBC was obtained on day 21 of the investigation, an average of 9000 was evident, T2 half of 13114 WBC was obtained and on day 21 research, an average of 11581 was evident; 16280 T3 half of WBC was obtained and on day 21 of the investigation, an average of 10869 WBC was evident; T4 half of 18260 and WBC was obtained on day 21 of the investigation, an average of 11165WBC was evident.
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INDICE
I. INTRODUCCIÒN ... 1
1.1. IMPORTANCIA O CARACTERIZACIÓN DEL TEMA ... 2
1.2. PLANTEAMIENTO DE LA SITUACIÓN PROBLÉMICA... 3
1.3. JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DEL ESTUDIO ... 4
1.4. DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA ... 5
1.5. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ... 5
1.6. OBJETIVOS ... 5
1.6.1. General ... 5
1.6.2. Específicos ... 5
1.7. HIPÓTESIS ... 6
1.8. APORTE TEÓRICO ... 6
1.9. APLICACIÓN PRÁCTICA ... 6
II. CAPITULO 1 ... 7
MARCO TEORICO ... 7
2.1. ESTADO DEL ARTE ... 7
2.2. ORIGEN DEL PERRO DOMESTICO ... 7
2.3. LA PIEL ... 7
2.4. CERUMEN ... 9
2.5. ETIOPATOGENIA ... 9
2.6. MANIFESTACIONES CLÍNICAS ... 11
2.7. SIGNOS CLÍNICOS. ... 11
2.8. DIAGNOSTICO. ... 11
2.9. TRATAMIENTO PARA OTITIS POR INFECCIONES BACTERIANAS ... 12
2.11. EL PROPÓLEO ... 13
2.11.1. Composición ... 13
2.11.2. Propiedades ... 14
2.11.2.1. Antimicrobiano ... 14
2.11.3. La tintura de propóleo ... 14
2.12. LOS LEUCOCITOS EN MAMÍFEROS DOMÉSTICOS ... 16
2.12.1. Generalidades... 16
2.12.2. Propiedades biológicas ... 17
III. CAPITULO 2 ...19
ASPECTOS METODOLOGICOS...19
xii
3.1 METODOS ... 19
3.1.1. MODALIDAD Y TIPO DE INVESTIGACIÓN ... 19
3.1.2. MÉTODOS ... 19
3.1.3. VARIABLES ... 20
3.1.4. ESTADÍSTICA DESCRIPTIVA ... 20
CUADRO 2: ADEVA, DISEÑO ESTADISTICO COMPLETAMENTE AL AZAR ... 21
3.1.5. POBLACIÓN Y MUESTRA ... 21
3.1.6. TÉCNICAS ... 22
3.1.7. MATERIALES Y EQUIPOS ... 23
3.1.8. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ... 24
IV RESULTADOS ...25
4.1. CANINOS TRATADOS SEGÚN EL SEXO... 25
4.2. CANINOS TRATADOS SEGÚN EDAD... 26
4.3. PORCENTAJE DE BACTERIAS EN TRATAMIENTOS ... 27
4.4. TIPO DE BACTERIAS ENCONTRADAS EN TRATAMIENTO 1 ... 28
4.5. TIPO DE BACTERIAS ENCONTRADAS EN TRATAMIENTO 2 ... 29
4.6. TIPO DE BACTERIAS ENCONTRADAS EN TRATAMIENTO 3 ... 30
4.7. TIPO DE BACTERIAS POR ASOCIACIÓN ENCONTRADAS EN TRATAMIENTO 3 ... 31
4.8. TIPO DE BACTERIAS ENCONTRADAS EN TRATAMIENTO 4 ... 32
4.9. TIPO DE BACTERIAS POR ASOCIACION ENCONTRADAS EN TRATAMIENTO 4 ... 33
4.10. UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS EN TRATAMIENTO 1 ... 34
4.11. UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS EN TRATAMIENTO 2 ... 35
4.12. UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS EN TRATAMIENTO 3 ... 36
4.13. UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS EN TRATAMIENTO 4 ... 37
4.14. RECUENTO UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS DIA 0 ... 38
4.15. RECUENTO UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS DIA 21 ... 38
4.16. RECUENTO LEUCOCITARIO EN TRATAMIENTO 1 ... 40
4.17. RECUENTO LEUCOCITARIO EN TRATAMIENTO 2 ... 41
4.18. RECUENTO LEUCOCITARIO EN TRATAMIENTO 3 ... 42
4.19. RECUENTO LEUCOCITARIO EN TRATAMIENTO 4 ... 43
4.20. RESUMEN RECUENTO LEUCOCITARIO POR TRATAMIENTOS ... 44
4.21. RECUENTO LEUCOCITARIO DIA 0 ... 45
4. 22. RECUENTO LEUCOCITARIO DIA 7 ... 45
xiii
4. 23. RECUENTO LEUCOCITARIO DIA 14 ... 47
4. 24. RECUENTO LEUCOCITARIO DIA 21 ... 48
V. DISCUSIÓN ...50
VI. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ...52
6.1. CONCLUSIONES ... 52
6.2. RECOMENDACIONES ... 53
VII. BIBLIOGRAFÍA ...54
ANEXOS ...58
ANEXO Nº 1 ... 59
ANEXO 2 ... 60
IDENTIFICACION DE MUESTRAS PARA LABORATORIO ... 60
ANEXO 3 ... 61
ANEXO 4 ... 63
ANEXO 5 ... 64
ANEXO 6 ... 66
1 I. INTRODUCCIÒN
Las patologías del oído son muy frecuentes en la clínica diaria. Cuando un perro sacude o se rasca sus orejas con demasiada frecuencia, se da por seguro que tendrá una afección auricular, en algunos animales debido al traumatismo continuado se produce un acumulo de sangre en el pabellón auricular.
La inflamación del oído u otitis, es una situación muy común, se dice que en general el 20% de los perros lo padecen, la otitis externa es la más frecuente de todas, y en este caso sólo se inflama la parte más externa del oído, las causas primarias de otitis son las alergias, los parásitos, cuerpos extraños, exceso de pelo en el canal, malformaciones anatómicas o trastornos hormonales.
Posteriormente actúan otras causas que perpetúan las otitis, como las infecciones con levaduras (Mallasezias) o bacterias que son habitantes normales de los oídos de los perros. Sin embargo en determinadas situaciones el oído se vuelve un lugar extraordinariamente ideal para su multiplicación y ese exceso produce la infección. Las bacterias más habituales son Staphilococus y Pseudomona auroginosa.
En la mayoría de casos el diagnóstico se realiza mediante la valoración de los signos clínicos - mirar el oído con un otoscopio - realizar una citología de las secreciones. En casos crónicos se pueden realizar otras pruebas
complementarias como raspados, cultivos, biopsias o radiografías.
La terapéutica farmacológica para la otitis debe ser constante si no se realiza vuelven a reaparecer, los tratamientos son largos, normalmente de 21 a 30 días, y aún más. Estos pueden ser tópicos (gotas dentro del oído) u orales
dependiendo del caso, si no responden al tratamiento convencional, en ciertas ocasiones hay que recurrir a intervenciones quirúrgicas, por ejemplo, abrir el conducto vertical (llamada técnica de Zepp) o la ablación (eliminación) de todo el conducto auditivo.
Con las resoluciones quirúrgicas se busca mejorar la calidad de vida del perro. Muchas veces se obtiene la curación completa y, en otros casos, mejora la
2 ventilación y la limpieza del oído. Las técnicas más agresivas se utilizan en los casos que existen un estrechamiento del canal o incluso una calcificación del mismo.
El uso del Propóleo (gr. própolis)tiene como propósito conocer sus propiedades curativas contra la otitis externa en caninos, ya que la otitis es un problema desencadenante a otros tipos de otitis como la media e interna que puede comprometer el aparato auditivo del perro, por esa razón la presente investigación es de suma importancia para el tratamiento de esta enfermedad.
1.1. IMPORTANCIA O CARACTERIZACIÓN DEL TEMA
La anatomía del oído facilita la acumulación de humedad debido a que es como un tubo que no recibe ni el sol ni aire, además de que, en el caso de que entre un cuerpo extraño como basura o espigas, es difícil que salgan por su
propia cuenta. Los perros con orejas caídas como los Cocker, Basset Hound, etc., son los más susceptibles a esta enfermedad, porque aunado a los problemas arriba descritos, al tener una puerta que mantiene cerrado el canal auditivo se exacerba el problema de otitis.
Todos los perros en su canal auditivo presentan microorganismos que viven ahí normalmente, pero al aumentar la humedad en las orejas y con la
temperatura corporal, se acelera el crecimiento de dichos microorganismos, promoviendo una sobrepoblación que sin duda provoca malestar.
Otros factores predisponentes de la otitis en perros están provocados por los humanos, cuando utilizan hisopos o les meten objetos para tratar de
limpiarlos, o bien en los casos en que las mascotas se bañan o se meten a nadar a lagos o ríos y no se les protege los oídos con algodón.
Además de los factores predisponentes, las causas que provoquen otitis en perros pueden ser tan diversas como: parásitos, bacterias, hongos, levaduras, problemas hormonales, alergias, cuerpos extraños, sobre crecimiento del pelo en
3 el oído, etc., por lo que para lograr una recuperación total se deben atacar las causas iniciales.
1.2. PLANTEAMIENTO DE LA SITUACIÓN PROBLÉMICA
Los problemas auriculares son relativamente corrientes y frecuentes en perros domésticos, la otitis está siendo observada detenidamente, ya que es un problema común en muchas razas, a pesar que el cuerpo de un perro es capaz de luchar por si mismo contra enfermedades de menor importancia, las
ocurrencias frecuentes de inflamaciones del oído son muestras seguras de la disfunción del sistema inmune representando hasta una cuarta parte de las consultas dermatológicas caninas, en el caso de que la otitis sea muy intensa, puede instaurarse una antibioterapia sistémica,
Un primer problema con el uso de los antibióticos es la aparición de reacciones adversas entre leves a severas, posteriormente se ha sumado la aparición cada vez más frecuente de bacterias resistentes y multirresistentes a uno o a varios antibióticos. Los microorganismos manifiestan tal multitud de
resistencias a los antibióticos que resulta relativamente frecuente el hecho de que, ante un primer tratamiento con estas sustancias, haya que modificarlo porque el fármaco ha perdido eficacia, según datos de estudios publicados en los últimos años. Ante la situación creada, ¿tenemos alternativas? El principal problema es la inducción de los cambios en los microorganismos, modificación que les impide ser sensibles a los antimicrobianos y, en consecuencia, les permite crecer en
presencia de los antibióticos y provocar infecciones más o menos importantes en los animales. Para evitar el uso indiscriminado debe existir una consciencia del problema y han de evaluarse otros productos que puedan incrementar la inmunidad y facilitar el autocontrol del proceso.
La solución es, por tanto, compleja, ya que si se administra antibióticos de forma generalizada, el problema de la resistencia a estas sustancias es inminente, por tanto se busca al propóleo (gr. própolis)como alternativa terapéutica para
4 subir la actividad inmune en perros domésticos que ayudará a mejorar esta
enfermedad.
1.3. JUSTIFICACIÓN E IMPORTANCIA DEL ESTUDIO
Desde la aparición de los antibióticos, que han sido y son una importante arma para el tratamiento de muchas enfermedades infecciosas, algunas de las cuales causaban gran mortalidad, el uso de los antibióticos permitió disminuir en forma importante y notable la morbimortalidad de muchos pacientes.
La presente investigación se realizó con la finalidad de utilizar el propóleo como un antibiótico natural en perros domésticos en condiciones similares, administrado en dosis para un tratamiento eficaz y aumentar la actividad inmune, además de controlar la infección bacteriana, ya que el alto costo de los
tratamientos es la principal preocupación de los dueños de los perros domésticos.
El poder antibiótico del propóleo es importante ya que representa un
tratamiento de bajo ingreso económico para los dueños de los pacientes con baja inmunidad y presencia de infecciones óticas, de igual manera se busca incentivar la investigación de nuevos tratamientos para beneficio de los propietarios de perros domésticos. Al mismo tiempo se busca mejorar la calidad de vida de muestras mascotas, no solo con la alimentación adecuada sino también protegerlos de enfermedades que podrían ser mortales.
También cabe mencionar que su principal importancia como alternativa terapéutica se basa en sus propiedades inmunoestimulantes, aumentando la resistencia del organismo frente a las infecciones. Además pretende promover tratamientos con elementos naturales, disminuir costos al mismo tiempo que se realiza un tratamiento efectivo para los pacientes, así como impulsar las
investigaciones en la rama de clínica de pequeñas especies en especial de perros domésticos.
5 1.4. DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA
La presente investigación se desarrollará en la clínica Veterinaria
+
KOTA de la ciudad de Latacunga:Ubicación Política.
Provincia. Cotopaxi.
Cantón. Latacunga.
Parroquia. Juan Montalvo
Barrio. San Sebastián
Condiciones climáticas
Temperatura Máxima mensual: 28.0 ºC
Temperatura Mínima mensual: 3.7 ºC
Temperatura Media mensual: 15.2 ºC
Precipitación Total mensual: 22.8 mm.
Humedad: 82%
1.5. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿La utilización terapéutica del propóleo por vía oral y tópica en caninos domésticos es efectiva para la otitis externa?
1.6. OBJETIVOS
1.6.1. General
Evaluar al propóleo (gr. própolis)como antibiótico en otitis externa en
(Canis familiaris) en la clínica veterinaria “
+
KOTA” cantón Latacunga.1.6.2. Específicos
Establecer el tipo de bacterias causantes de la Otitis externa.
6
Determinar el poder del propóleo como antibiótico natural en perros domésticos con otitis externa.
Determinar el recuento de leucocitos durante el tratamiento con propóleo.
1.7. HIPÓTESIS
El uso del propóleo (gr. própolis)como antibiótico es eficaz para la otitis externa en (Canis familiaris).
1.8. APORTE TEÓRICO
Mediante la técnica que se detalla en el desarrollo de ésta investigación se intenta resolver el problema de la resistencia de las bacterias a los antibióticos que en la actualidad es uno de los grandes desafíos, se podrá usar el propóleo como alternativa terapéutica, puesto que no tienen efectos a largo plazo a diferencia de muchas medicinas que dejan sustancias en el cuerpo que pueden dañar los
órganos, no son agresivos con el cuerpo, al ser naturales, son fáciles de asimilar y eliminar.
1.9. APLICACIÓN PRÁCTICA
Determinada la patología que sea susceptible de tratar a infecciones con la
utilización del propóleo, se busca alternativas terapéuticas con medicina natural y tradicional, demostrando de manera teórica y experimental los beneficios de su uso, pretendiendo evitar la resistencia bacteriana y sus consecuentes secuelas médicas en los animales y dar solución a todos los casos que reciben es
prioridad, en busca de buenas y mejores prácticas de laboratorio y clínica.
7
II. CAPITULO 1
MARCO TEORICO
2.1. ESTADO DEL ARTE
Investigadores de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la Universidad Nacional del Nordeste (UNNE) de Argentina determinaron la actividad
antimicrobiana de extractos de propóleos para su uso en tratamiento de la otitis canina, una enfermedad común en perros. De animales enfermos, se aislaron Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y la levadura Malassezia pachydermatis, sobre las cuales se estudió si el propóleo generaba inhibición a su desarrollo, los ensayos demostraron una potente actividad
antibacteriana del propóleo de Tunuyán, Mendoza, pues todas las bacterias y las levaduras aisladas de los caninos han sido sensibles a la actividad del mismo.
“Los resultados permiten concluir que este producto natural podría utilizarse como antibióticos de uso local en otitis canina” (Lozina 2009)
2.2. ORIGEN DEL PERRO DOMESTICO
El perro procede probablemente del lobo (canis lupus). Esta hipótesis está basada en estudios sobre la morfología, el comportamiento y la genética de
ambas especies, por ejemplo, el ADN mitocondrial del perro es idéntico al del lobo en un 99.8% de su secuencia. Por el contrario, y a título comparativo, la similitud entre el ADN mitocondrial del lobo y su pariente salvaje más cercano el coyote (canis latrans) es solamente del 96%. Igualmente, el perro y el lobo muestran un comportamiento muy similar y varios estudios han puesto de manifiesto que ambas especies comparten la mayoría de sus pautas de conducta. (Padilla 2003) De hecho, el parecido entre el perro y el lobo es tan marcado que en 1993 se propuso que el perro debería considerarse una subespecie del lobo y, por lo tanto, su nombre científico debería ser Canis lupus Familiaris. A pesar de ello, lo cierto es que la mayoría de autores siguen usando el nombre científico original, es decir, Canis Familiares. (Alcina 1999)
2.3. LA PIEL
La Dermatología Veterinaria es una ciencia practicada dentro de la Patología Médica. Existen referencias que desde el año 200 a.c., cuando ya se recomendaba la aplicación de aceite de oliva y vino tinto en la terapéutica de la
8 sarna en borregas, en la actualidad se está recurriendo a terapéuticas alternativas para la mayoría de las enfermedades de tipo dermatológico. (Contreras 2008)
La piel en el perro es una barrera natural que recubre su cuerpo, y que protege al animal contra las enfermedades, recubre el cuerpo del can, y le
protege de las infecciones y gérmenes del mundo exterior, la piel es un órgano de pocos milímetros de grosor entre uno y cinco milímetros. A pesar de que la mayor parte de la piel del perro carece de glándulas sudoríparas (a diferencia de la humana) sí contiene las bacterias, que le defienden de las enfermedades. (San Martin 2013)
Un perro sano mantiene el equilibrio entre las diferentes especies de bacterias que habitan en su piel. El problema surge cuando este mecanismo de defensa no funciona o se produce una inestabilidad entre las diferentes especies.
Si la barrera natural de bacterias se desequilibra o unas bacterias ganan en número a otras, es sencillo que se produzca una infección de forma muy rápida, cuando esto ocurre, la piel del perro enferma, el can queda desprotegido del ataque de las distintas enfermedades y, en especial, permanece vulnerable a las infecciones de piel. El desarrollo de lesiones cutáneas depende de factores locales y sistémicos, constituyendo un gran porcentaje de los casos en la clínica de pequeños animales. El grosor de la piel varía según la especie y según el sitio del cuerpo donde esté ubicada. (Medleau 2007)
La piel que recubre el conducto auditivo es una " extensión " y se continúa al pabellón auricular, en su lado externo presenta iguales características que la piel normal del canino y en su lado interno la piel que recubre la superficie cóncava del pabellón auricular, guarda una conexión estrecha con el cartílago auricular subyacente. En el oído, el conducto auditivo está recubierto por piel que contiene glándulas sebáceas, ceruminosas y folículos pilosos. (Gotthelf 2001)
El Oído, es el órgano encargado de percibir el sonido y mantener el equilibrio. Éste se encuentra compuesto por oído externo, oído medio y oído interno. Las otitis, se puede presentar como otitis externa, media e interna. Las otitis externas son producto de una inflamación y/o infección del conducto auditivo externo lo que produce dolor en el animal y trae consecuencias secundarias por lo mismo. (Machicote, Dermatologia felina y canina 2011)
La otitis es una enfermedad de etiología multifactorial que afecta a los caninos, y representa entre 5 a 20% de la práctica veterinaria diaria. Esta patología se encuentra asociada mayormente a infecciones causadas por bacterias y levaduras, que muchas veces no responden a los tratamientos con antibióticos. (TAIBO 2003). La estructura anatómica de la oreja del perro predispone la presentación de esta patología, ya que la forma del cartílago auricular crea un ambiente oscuro y de poca ventilación que favorece la
proliferación de bacterias. Asimismo, la edad y la raza son factores asociados a los cuadros de otitis. (Sanchez CH., Calle E. y Falcon P. 2011)
9 La otitis puede ser externa, media e interna, La otitis externa es la más importante y se presenta usualmente asociada a la otitis media (Helton y Werner, 2006). Esta última puede originarse, como en el caso de la otitis externa, por una infección respiratoria o por vía sanguínea (Taibo, 2003; Oliveira et al., 2005). La otitis interna se presenta como una extensión de la otitis media y afecta las funciones vestibular y coclear del oído (Taibo, 2003). . (Craig 2007)
El diagnóstico de las otitis es de tipo clínico (Carlotti, 1991; Taibo, 2003), y en algunos casos se apoya en un examen citológico (Chávez, 1994; Alpaca, 1995), mientras que para casos crónicos están indicadas las pruebas de
laboratorio como el cultivo y la prueba de susceptibilidad bacteriana (R. Chavez 1994)
2.4. CERUMEN
En condiciones normales el cerumen y descamación del estrato corneo debe de salir por el conducto auditivo externo vertical (CAEV) mediante migración epidérmica (auto limpieza). La formación del cerumen se debe a secreciones viscosas que emiten hacia el conducto auditivo (CA) glándulas sebáceas y
secreciones con menor viscosidad de glándulas sudoríparas. Se han determinado dos tipos de cerumen, uno húmedo y otro seco. El que es más abundante en composición del cerumen en general es el de tipo húmedo y se caracteriza físicamente por ser además claro y pegajoso. Por el contrario el cerumen seco físicamente es oscuro, seco y quebradizo. (H. Tapia 2012)
Se consideran 3 funciones importantes:
• Limpieza: La salida del cerumen se lleva a cabo mediante ayuda del movimiento de la mandíbula. Durante este movimiento libera al CA de polvo y materia solida atrapada por el cerumen.
• Lubricación: Mantiene al CA de sin resequedad y prurito
• Antibacteriano y antimicótico: Debido al alto contenido de ácidos grasos saturados, presencia de lisosomas y pH bajo, el cerumen tiene una capacidad muy alta para evitar el crecimiento de bacterias y hongos.
(H. R. Tapia 2012)
2.5. ETIOPATOGENIA
Para entender las enfermedades del oído externo es útil recordar que se trata de una estructura dermoepidermica en forma de “L” con folículos y
glándulas apocrinas ceruminosas y sebáceas. Las alteraciones de esta estructura anatómica producen un desequilibrio en el microambiente que puede servir de detonante para la inflamación y consiguiente infección. (Machicote, Enfermedades del oido externo en perros y gatos 2011)
10 Es una patología con etiología multifactorial originada por factores
desencadenantes y mantenida por factores perpetuantes. A su vez, se han descrito todo un conjunto de factores predisponentes que proporcionan las
condiciones necesarias para la proliferación microbiana. En numerosas ocasiones la otitis externa aparece como un síntoma más de un proceso dermatológico (alérgico, seborreico, etc.). Los factores desencadenantes son los responsables del inicio de la inflamación del conducto auditivo externo. En perros se citan como más frecuentes las alergias, seguidas de lejos de los cuerpos extraños
y Otodectes cynotis. (Saridomichelakis 2007)
Los factores perpetuantes son los que agravan la otitis externa impidiendo su resolución. En los casos crónicos suele haber más de un factor, de manera que su identificación es necesaria para el correcto reconocimiento de la otitis externa, en el caso de presentarse por bacterias, tanto grampositivas como gramnegativas, se perpetúan en el conducto auditivo externo complicando e impidiendo la curación. Las más frecuentes, en perros, son Staphylococcus pseudintermedius (36-70%) y Pseudomonas aeruginosa (3-18%) y, en menor medida, por debajo del 10% cada una, Streptococcus spp, Proteus spp y E. coli.
(Hariharan 2006)
Agentes bacterianos son considerados patógenos importantes que causan la otitis externa en perros. Es esencial llevar a cabo un cultivo bacteriano y
antibiograma en el caso de la otitis externa, en particular para los casos crónicos o recurrentes. Se obtuvieron de la parte terminal de los conductos auditivos verticales, muestras con hisopos estériles de secreciones para cultivo bacteriano y se aislaron, Staphylococcus intermedius. Otras bacterias aisladas fueron:
Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Escherichia coli, Pasteurella canis, y otras seis especies de Staphylococcus coagulasa negativo. (Malayeri 2010)
Las complicaciones derivadas de la cronicidad también pueden ser
factores perpetuantes de un cuadro de otitis. Algunas de estas alteraciones, como la hiperplasia, hiperqueratosis y estenosis del conducto, calcificaciones del
cartílago, etc., pueden perpetuar una otitis aun cuando se haya identificado y tratado la causa primaria y se haya identificado y tratado los agentes infecciosos que están complicando el cuadro. (R. Chavez 1994)
Los factores predisponentes son los que colocan al paciente en riesgo de padecer la enfermedad, aunque por sí solos no sean la causa del proceso inflamatorio.
Cualquier anormalidad anatómica que asiente sobre las orejas y origine cambios importantes en el microclima del conducto auditivo externo, predispone al padecimiento de otitis externas. Así, las otitis externas son más frecuentes en animales con orejas grandes y caídas, siendo más frecuente en razas como el cocker o el spaniel bretón, debido a una escasa ventilación y al cúmulo de secreciones en la parte más externa del conducto auditivo. . (Rejas 2010)
La otitis externa es mucho más frecuente en animales que presentan conductos auditivos largos y estrechos, y en los que contienen gran cantidad de
11 pelos. El incremento de la humedad en el conducto auditivo externo, en la mayor parte de los casos por entrada de agua al conducto después de baños, facilita la aparición de otitis. El arrancado incorrecto de los pelos del conducto y la limpieza del mismo mediante la introducción de bastoncillos que empujan las secreciones hacia el interior, pueden provocar la irritación suficiente para predisponer al padecimiento de otitis. Aunque la otitis externa es más frecuente en zonas con climas cálidos, no se ha demostrado una predisposición estacional. (Scott 2002)
2.6. MANIFESTACIONES CLÍNICAS
Los principales signos clínicos en el inicio de la enfermedad suelen ser eritema y un aumento de cerumen auricular (Craig, 2000, Gotthelf, 2000).
Cuando la enfermedad progresa, se complica con infecciones bacterianas o levaduriformes secundarias, haciendo que el exudado aumente, cambia de color, se torna húmedo y adquiere mal olor; lo que se denomina otitis supurativa.
Además, pueden presentarse traumas causado directamente por el paciente al encontrarse adolorido. (Craig 2007)
Cuando el problema se agrava, el color rojizo e hinchazón en la oreja pueden hacerse más evidentes, el animal tiende a sacudir o agitar la cabeza, o también la pueden llevar de costado. En general, el dolor intenso de las orejas produce cambios en el comportamiento como depresión o irritabilidad. (Kirk 1997)
2.7. SIGNOS CLÍNICOS.
Se distinguen dos formas de otitis externas: la otitis eritematosa –
ceruminosa (OEC) y las otitis supurativas (OS). La OEC son las más frecuentes, se caracterizan por eritema y por la producción excesiva de cerumen con un olor desagradable. (Grant 2001)
La OS se caracteriza por la producción de pus abundante y nauseabunda.
Ambos tipos de otitis pueden cursar con evidente prurito auricular que origina reacciones de rascado o movimientos de la cabeza. Se puede observar dolor intenso, más a menudo en el caso de la OS. Dicho dolor puede ocasionar una respuesta de agresión por parte del perro. (R. S. Chavez 2006)
2.8. DIAGNOSTICO.
En general, el diagnostico de una otitis externa es sencilla, realizándose en base a la historia y examen físico.
12 El CAE inflamado, estenótico o ulcerado es muy doloroso, dificultando la exploración aún bajo anestesia, por lo tanto se deberá iniciar un tratamiento para reducir la inflamación y a los 4-7 días se realiza la otoscopia, es fundamental realizar una otoscopia de ambos oídos comenzando por el supuestamente sano en el caso de sospechar una afección unilateral. Mediante la otoscopia se detecta el grado de estenosis del canal auricular y se intenta ver el estado de la
membrana timpánica, en caso de existir exudado es imprescindible recoger una muestra para realizar un estudio citológico determinado procesos inflamatorios, neoplasias y microorganismos como cocos, bacilos, levaduras. (Brejov 2013)
La presencia de numerosas bacterias con ausencia de células inflamatorias solo indica la existencia de crecimiento bacteriano pero no infección activa. Los cocos normales son estafilococos o estreptococos, mientras que los bacilos suelen ser pseudomonas aeruginosas o proteus spp, y las levaduras Malassezia pachydermatis. (Alvarez 2003)
2.9. TRATAMIENTO PARA OTITIS POR INFECCIONES BACTERIANAS
El tratamiento de una otitis externa incluye varios aspectos. El primero consiste en la limpieza del canal auricular en la primera consulta, que es fundamental ya que facilita la eliminación de detritus, exudados, pequeños
cuerpos extraños, etc. La eliminación de los detritus y exudados mejora la terapia, ya que permite que los fármacos tópicos no sean inactivados, y facilita el contacto de los principios activos con la mucosa, además de disminuir la presencia de sustancias que favorecen la inflamación y modificar el ambiente que favorece el crecimiento de los gérmenes. A su vez, tras la limpieza es posible mejorar la inspección de la mucosa ótica. (Marcos 2010)
La solución de lavado recomendada en la primera consulta es la solución salina fisiológica. En el caso de una infección por Pseudomonas aeruginosa se recomienda realizar los lavados con ácido acético al 2%, 4 veces al día,
la composición del otológico también depende de las características del exudado y los gérmenes perpetuantes, si el proceso es seco, escamoso y costroso es preferible un otológico oleoso, mientras que en otitis húmedas se prefieren los preparados acuosos. (Alvarez 2003)
La presencia de corticoides en el otológico reduce el dolor, el edema y la producción de exudados, permitiendo la llegada de otros principios activos y facilitando la ventilación y el drenaje del conducto auditivo externo. (Fidalgo 2003)
Si la citología muestra bacterias Gram negativas, deberá realizarse un cultivo y un antibiograma. La mejor manera de realizar los cultivos es de 5 a 7 días después de haber interrumpido la terapia antibiótica. Se debe sospechar fuertemente de Pseudomonas u otras bacterias Gram negativas cuando estos microorganismos prevalecen en la citología. La terapia antibiótica sistémica está indicada cuando el tratamiento tópico no sea completamente efectivo y cuando haya ruptura del tímpano. Una vez más, se pueden utilizar empíricamente los
13 antibióticos sistémicos seleccionados con base en los resultados de la citología, del cultivo y del antibiograma. (Rosenkrantz 2006)
Las infecciones bacterianas agudas se pueden tratar empíricamente con antibióticos de primera línea que contengan productos como neomicina o gentamicina, los cuales suelen trabajar razonablemente bien. En ocaiones se prefiere tratar con neomicina, tiabendazole, dexametasona (Merck), gentamicina, betametasona (Shering) ó gentamicina, betametasona, clotrimazole, (Shering) como primera elección. Si persisten las bacterias aun con estos antibióticos, se deberá sospechar de resistencia. (Sumano 2006)
2.11. EL PROPÓLEO
El propóleo (gr. própolis)es una sustancia resinosa utilizada por las abejas para cubrir y proteger la colmena. Las abejas obtienen esta sustancia a partir de las yemas y cortezas de algunos árboles. El propóleo es rico en bioflavonoides y aceites esenciales, además de contener oligoelementos, vitaminas y aminoácidos.
Gracias a la acción antibiótica del propóleo, que protege de la actividad de virus y bacterias, la colmena es uno de los lugares más estériles conocidos en la
naturaleza. (Mendizabal 2005)
Las abejas utilizan el propóleo como masilla, cemento o bálsamo, para soldar panales entre sí, y las paredes, para cerrar las fisuras y las ranuras de la colmena, y así impedir el ingreso de objetos extraños, para recubrir las superficies extrañas formando una capa inhibidora y antiséptica que impide que se forme dentro de ella cualquier tipo de infección y que esta se propague. (Pozo 2004)
2.11.1. Composición
En cuanto a su composición, en todos los propóleos encontraremos: Cera, siempre mezclada a los mismos (20 a 30%). Resinas y bálsamos aromáticos (40 a 50%). Polen (4 a 5%). Mezclas mecánicas (tierra, cenizas, etc, 10 a 30%), parece ser agregado por las abejas para dar mayor consistencia al producto.
(Malaspina 2009)
Es muy variable, dependiendo de la flora y el clima de cada lugar. Pese a ser el producto más usado y más investigado de la colmena, aún no se ha
concluido su estudio científico, iniciado recién en la década del 60 en Europa del este. Ya se le han detectado más de 250 elementos constitutivos y unos 50
principios biológicamente activos, lo que explica su gran cantidad de propiedades.
Tiene resinas, bálsamos, aceites esenciales, minerales (más de 20
oligoelementos), vitaminas, aminoácidos (7 de los 8 esenciales) y más de 50 grupos de flavonoides. (Lugo 2009)
14 2.11.2. Propiedades
Científicamente se le han demostrado 20 propiedades del peopoleo: es antibacteriano, antimicótico, anticolesterolémico, antiparasitario, antiinflamatorio, antioxidante, antitóxico, antialérgico, analgésico, anestésico, antituberculoso, antiviral, citostático, desodorante, epitelizante, estimulante de la inmunogenesis, fitoinhibidor, hemostático, hipotensor y termoestabilizador. Fundamentalmente es un magnífico biorregulador, rehaciendo la capacidad de defensa, funcionamiento y adaptación del organismo. Los oligoelementos justifican muchas virtudes del propóleo, pues -participando en procesos metabólicos, fermentativos y
vitamínicos, contribuyen a la curación de estados anémicos, previenen la arteriosclerosis e incrementan la capacidad inmunológica del organismo.
(Bradbear 2005)
Por su parte los flavonoides con más de 40 acciones farmacológicas son la base de su versatilidad terapéutica. Sus cualidades antioxidantes además de reducir el efecto de los radicales libres son responsables de la acción antiviral, al inhibir el desarrollo de virus patógenos. Además de su amplio efecto
antibacteriano, el propóleo estimula la reacción inmunológica del organismo, complementando ambas funciones sin producir alteraciones de la flora bacteriana, cosa que ocurre con los antibióticos de síntesis. Otra virtud del propóleo es su capacidad de transportarse indistintamente a través de la sangre y la linfa, a todo el organismo. (Delgado 2008)
2.11.2.1. Antimicrobiano
El própolis (gr. própolis)es activo frente a numerosos microorganismos como Bacillus larvae, B. subtilis, Bacilo de Koch, Staphylococcous aureus, Streptomyces sobrinus, S. mutans, S. cricetus, Escherichia coli, Salmonella, Shigella, Giardia lambia, Bacteroides nodosos, Klebsiella pneumoniae, incluso alguno (Streptococcus piogenes) resistente a los antibióticos. Según su
procedencia y temporada de recolección, su espectro de actividad antimicrobiana es más o menos extenso. En general, el própolis es más activo frente a los cocos gram-positivos. Sin embargo, las concentraciones mínimas inhibitorias frente a muchas bacterias es del orden de 2 a 3 mg/ml por lo que el própolis sólo es eficaz localmente, como por ejemplo en enjuages o colutorios bucales. Así, tanto los extractos etanólicos como los acuosos son activos en la periodontitis bacteriana.
(Farre 2004)
2.11.3. La tintura de propóleo
La tintura de propóleo se elabora a partir del propóleo natural, esta sustancia es extraída por las abejas de los árboles tomando de ellos sustancias bactericidas, antimicóticas y antivirales las cuales son mezcladas y utilizadas para desinfectar la colmena. (Manrique 2000)
15 2.11.3.1 Propiedades de la tintura de propóleo
Tanto la tintura de propóleo como las distintas presentaciones de esta sustancia natural poseen propiedades inmunoestimulantes, antivirales, antibióticas, antimicóticas, antialérgicas, calmantes, antiinflamatorias y cicatrizantes. (Crea 1993)
2.11.3.2 Formulación y preparación de la tintura de propóleo
La tintura se prepara mezclando propóleo natural con alcohol etílico de 70 grados, las proporciones dependerán del uso que se requiera para cada dolencia y pueden variar desde un 5% a un 30%. Una vez mezclado el propóleo con la cantidad de alcohol elegida se almacena resguardado de la luz por un período aproximado de 10 días, agitando la preparación un par de veces al día. Pasado el período de maceración ya tenemos la tintura de propóleo presentando todas sus propiedades, se procede a filtrarla y se conserva en envases de vidrio oscuro que impidan el paso de la luz posteriormente se guarda a temperatura ambiente.
(Bradbear 2005)
Una vez obtenido el propóleo en bruto, lo revisamos para eliminar aquellas partículas no deseadas, como son polvo, astillas de la colmena o partes de abejas (trozos de alas, patas, aguijones, etc.), para reducirlo a un tamaño adecuado que nos permita utilizarlo óptimamente. (Crea 1993)
Materiales: Alcohol etílico, entre 70º y 96º y Propóleo, para que se
disuelva con más facilidad, debe estar troceado lo más fino posible (en polvo sería lo ideal). La mejor forma de manipularlo es congelándolo previamente, ya que se vuelve muy frágil y puede golpearse o molerse hasta convertirlo en trozos
pequeños. Pesar el propóleo, y por cada parte de este, añadir cinco de alcohol (por ejemplo: 20 grs de propóleo + 100 grs de alcohol). (Delgado 2008)
Colocar el alcohol y el propóleo en un envase con cierre hermético, guardarlo en un lugar protegido de la luz, y durante un período de 10 a 15 días agitarlo entre tres y cuatro veces diarias, para que el propóleo se vaya
disolviendo. Filtrar la mezcla. La tintura debe guardarse en un envase de color ámbar, en un lugar protegido de la luz solar y a temperatura ambiente. Después de una o dos semanas, se puede volver a filtrar para retirar los residuos que se han decantado. (Manrique 2000)
Cabe recalcar que la tintura de propóleo puede procesarse de varias maneras dependiendo de la necesidad de los pacientes.
2.11.3.3. Obtención del Extracto Blando de Propóleos
Para preparar soluciones que contengan una cantidad de propóleos conocida, debemos obtener la materia prima pura que se denomina extracto blando de propóleos, consiste en evaporar el alcohol que tiene la tintura, mediante
16 destilación al vacio o a baño María, a una temperatura inferior a 50°C., cuando la tintura toma una consistencia parecida a la miel y sobrenada un líquido
blanquecino sobre el mismo, es señal de que el proceso concluyó. Para evaporar más el alcohol se puede revolver una o dos veces el extracto antes de dar por finalizado. Hay que retirar el líquido sobrenadante y guardarlo en heladera para usarlo oportunamente, es el agua que quedó de la evaporación del alcohol, tiene las mismas propiedades terapéuticas que el extracto. Se puede utilizar para hacer soluciones óticas. La goma que queda es el extracto blando lo podemos retirar con cuidado, conservar en un frasco oscuro y con cierre hermético en un lugar fresco. (Diaz 2001)
2.12. LOS LEUCOCITOS EN MAMÍFEROS DOMÉSTICOS 2.12.1. Generalidades
Los leucocitos son células sanguíneas verdaderas, puesto que tienen núcleo, al contrario de lo que sucede con los hematíes o las plaquetas. Son las unidades móviles del sistema de protección (o sistema inmune). A los leucocitos también se les conoce como células blancas o glóbulos blancos; son células que circulan en la sangre, aunque su número es muy inferior al de los eritrocitos;
presentan núcleo en todas las especies donde se han descrito. Sus funciones se relacionan con las de defensa del organismo ante las agresiones de diversos agentes biológicos y otros. Los leucocitos se originan en la médula de los huesos. Circulan en la sangre pero deben salir de ella para trasladarse a los tejidos donde sean requeridos; en estos, incluso mueren para liquidar a los agentes agresores; su vida media, una vez liberados a la circulación, varía en límites tan amplios como horas a 600 días y más. Para cada especie se señalan recuentos totales normales. (Cuadro 1) (Banks 1986)
El número de leucocitos puede variar aun en animales aparentemente sanos; esas concentraciones pueden aumentar en forma normal en algunos estadios fisiológicos denominados "leucocitosis fisiológica"; dicha concentración se observa luego de la ingestión de alimentos, del ejercicio, así como por efecto del estrés, particularmente en animales no acostumbrados, previamente, a la toma de la muestra sanguínea. (Schalm 1981)
También se observan variaciones fisiológicas según la edad, la raza, la lactación, la gestación e incluso según la ubicación geográfica de explotación de los animales; por supuesto, la principal fuente de variación la constituye la alteración del estado de salud. (Swenson 1999)
La distribución de los diversos tipos de leucocitos ayuda a orientar un diagnóstico en cuanto al posible origen de la leucocitosis, frecuentemente en base a estos resultados, se indica un tratamiento temprano antes de que las pruebas
complementarias (las cuales suelen durar muchas horas o días) arrojen el resultado específico de la patología.
Los leucocitos se encargan de llevar a cabo la fagocitosis(absorción y digestión de elementos ajenos al organismo como: bacterias, cuerpos extraños, tejidos,
17 etc.). Las formas jóvenes de leucocitos se presentan cuando existe un importante estímulo medular para su producción. Una alta presencia de estos indica que existe una actividad intensa de las defensas en contra de una infección de origen bacteriano. (Rhea 2010)
2.12.2. Propiedades biológicas
Las propiedades biológicas que le permiten ejercer su función son las siguientes:
1) diapédesis, por medio de la cual los leucocitos atraviesan las paredes de los capilares sin afectarse en su integridad celular.
2) Los movimientos ameboideos, propiedad que le permiten desplazarse entre los tejidos para llegar al lugar del cuerpo donde son requeridos.
3) Quimiotactismo, en razón del cual pueden identificar exactamente el lugar del cuerpo donde se ha producido la agresión al tejido.
4) Fagocitosis, propiedad en virtud de la cual las células blancas, luego de ubicar y fijar al agente agresor, lo engullen y lo digieren, muriendo en esta acción pero logrando su objetivo de neutralizar o eliminar al microorganismo.
5) Producción de anticuerpos, por ello elaboran sustancias denominadas anticuerpos que son capaces de adherirse al agente biológico agresor y ocasionar daño irreparable al mismo. (Dukes 1981)
Los leucocitos cumplen su acción en forma directa (inmunidad celular) o a través de sustancias específicas como los anticuerpos (inmunidad humoral).
(Tizard 1977)
Tipos de leucocitos Se han identificado varios tipos de células que incluso tienen funciones diferentes. Se las clasifica en:
1) granulocitos, entre las que se señalan tres clases denominadas:
a) neutrófilos, b) eosinófilos y c) basófilos.
2) agranulocitos, se encuentran los denominados: a) linfocitos, y b) monocitos.
Estos varios tipos se encuentran en distinta proporción y cantidades, y son la base de elaboración del denominado "recuento leucocitario diferencial" o"
fórmula leucocitaria", la cual es utilizada para establecer el estado fisiológico normal y otros estados de salud. (Tabla 1). (Gurtler 1976)
Los animales tienen diferentes recuentos leucocitarios diferenciales; esto es muy importantes para definir su estado fisiológico normal y orientarse en la definición o diagnóstico ante cualquier variación sospechosa de alteración. Los animales monogástricos como el caballo, perro, cerdo e incluso el hombre exhiben una fórmula leucocitaria de tipo neutrófilo, esto es, dichas células acumulan el mayor porcentaje (superior al 55%), en tanto que, los rumiantes
18 como las ovejas, cabras y vacas tienen fórmulas de tipo linfocitario, esto es, los linfocitos representan más del 50% del recuento leucocitario (ver la Tabla 1).
Estas características son de naturaleza genética. ) (Banks 1986)
19
III. CAPITULO 2
ASPECTOS METODOLOGICOS 3.1 METODOS
3.1.1. MODALIDAD Y TIPO DE INVESTIGACIÓN
Investigación Exploratoria
Se aplicó un Diseño Experimental basado en estadística descriptiva de ensayo clínico.
3.1.2. MÉTODOS
Bibliográfico – Documental
El presente trabajo se inició con una investigación bibliográfica y documental al revisar, libros, tesis, documentos y páginas de internet relacionados con otitis externa y propóleo, para sustentar en base autores y actores.
Método Estadístico descriptivo de ensayo clínico
Los Ensayos Clínicos son estudios de cohortes en los que el investigador manipula la variable predictora (la intervención, variable independiente) y observa el efecto sobre un desenlace. La principal ventaja de un ensayo (experimento) frente a un estudio observacional es la fuerza de la inferencia de causalidad que ofrece, siendo utilizado para evaluar la eficacia o efectividad de programas de tratamiento. Es el mejor diseño para controlar la influencia de variables de confusión. (Stephen 2008)
20 3.1.3. VARIABLES
OPERACIONALIZACIÓN DE LAS VARIABLES
VARIABLE INDEPENDIENTE
VARIABLE DEPENDIENTE
INDICADORES
Propóleo
Leucocitos
Bacterias
OTITIS
Cultivos
microbiológicos.
Número
Tipo
Fuente: Directa
Elaborado por: Nancy Cueva
3.1.4. ESTADÍSTICA DESCRIPTIVA
El análisis de varianza por rangos de Friedman es una técnica no paramétrica que equivale al ADEVA de un Diseño Completamente al Azar. Para la prueba de hipótesis se apoya en la prueba de “Chi cuadrada”, con grados de libertad = t – 1 y el nivel de significación predefinido por el investigador.
La fórmula para calcular el estadístico de Friedman es la siguiente:
Donde:
Xr2
= Estadístico de Friedman r = Número de repeticiones t = Número de tratamientos
R2 = Suma de los rangos elevados al cuadrado
12
Xr2= R2 - 3 r (t + 1) rt (t + 1)
12
Xr2= R2 - 3 r (t + 1) rt (t + 1)
21 CUADRO 2: ADEVA, DISEÑO ESTADISTICO COMPLETAMENTE AL AZAR
FV GL
Tratamiento 3
Error 36
Total 39
Fuente: Directa Elaborado por: Nancy Cueva
CUADRO 3: DISTRIBUCION DE TRATAMIENTOS
Tratamientos Número de animales Dosis de propóleo
T1 ORAL 10 1 cc
T2 TOPICA 10 0,5 cc
T3 ORAL Y TOPICA 10 1cc; 0,5cc
T4 TESTIGO 10 Cefalexina 25mg/kg
Fuente: Directa Elaborado por: Nancy Cueva
3.1.5. POBLACIÓN Y MUESTRA POBLACIÓN
El universo está constituido por la población canina que comprenden a 40 perros con otitis bacteriana que ingresaron a la Clínica Veterinaria
+
KOTA, según el registro de pacientes.MUESTRA
Se utilizó a todos los perros que clínicamente presentan otitis bacteriana externa.
22 3.1.6. TÉCNICAS
El estudio se realizó en pacientes atendidos en la Clínica Veterinaria + KOTA, los que presentaron cuadros de Otitis externa. Se estimó a 40 pacientes caninos sin distinción de sexo ni edad.
A cada paciente enfermo se le identifico según una ficha clínica;
antecedentes generales, nombre, raza, sexo, tipo de oreja y fecha.
Antecedentes de anamnesis como: sacude y frota sus orejas, inclinación de la cabeza, dolor auricular y tipo de secreción en casos que se presente.
Se realizó el examen clínico, con el objeto de verificar la presencia de otitis externa; inspección directa del conducto auditivo externo, examen con otoscopio y obtención de muestra
En los casos positivos a otitis, se tomó una muestra de escamas de piel del área afectada (conducto auditivo externo) con isopo estéril, los mismos que fueron depositadas en tubos previamente rotulados, se realizó un cultivo bacteriano al día 0 y día 21 para determinar la carga bacteriana, a todos pacientes de los tratamientos.
Se realizaron hemogramas para conteo leucocitario, uno al inicio del ensayo (día 0), y cada siete días hasta completar los veintiún días, a todos los grupos tratamiento. Para la recolección de sangre se tomó de la vena cefálica donde se extrajo 5 ml de sangre con un tubo que contuvo una solución anticoagulante de EDTA (Vacutainner tapa lila), se mezcló el tubo por inversión de 5 a 7 veces hasta homogenizar la sangre, y se envió al laboratorio la muestra refrigerada.
Para la valoración de la acción bactericida del propóleo, se realizaron pruebas de sensibilidad antibiótica (antibiograma) para Staphylococcus, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus spp, Proteus spp y E. coli.
Todas las muestras fueron procesadas en el Laboratorio Clínico “San Francisco” de la ciudad de Ambato, donde se realizaron dichos exámenes para su análisis. Anexo 2.
Una vez identificados los pacientes con otitis externa bacteriana, se les distribuyo aleatoriamente a los tratamientos de la siguiente manera:
23
Para el tratamiento 1 se utilizaron 10 perros a los que se le administraron 1.0 cc de tintura de propóleo vía oral cada 12 horas por veintiún días (ocho de la mañana, 8 de la noche),
Para el tratamiento 2 se utilizaron 10 perros a los que se le administraron una dosis de 0.5 cc en el conducto auditivo externo (vía tópica) cada 12 horas (ocho de la mañana, 8 de la noche) por veintiún días.
Para el tratamiento 3 se utilizaron a 10 perros a los que se les administraron propóleo a dosis de 1.0cc vía oral y 0.5 cc por vía tópica (ocho de la mañana, 8 de la noche) por 21 días.
Para el tratamiento 3 del grupo testigo de 10 perros domésticos, fueron tratados con cefalexina, vía oral a una dosis de 25mg/kg y se administró cada 8 horas por 21 días.
A todos los pacientes se les realizó una limpieza previa del pabellón auricular con una torunda de algodón antes de la aplicación de las dosis en estudio.
Se realizó un lavado ótico con solución salina a dos pacientes que luego ingresaron al ensayo, sin diferenciación de tratamientos.
3.1.7. MATERIALES Y EQUIPOS
Para la ejecución de la presente investigación se elaboró la tintura madre de propóleo al 20%, para lo cual se utilizó los siguientes materiales e insumos.
Materia prima.
Propóleo (Gr. própolis) 20 g.
Agua destilada.
Alcohol potable 100ml. al 70%
Frasco de vidrio ámbar Pasos a seguir.
24 Se ralla los 20g. de propóleo, se agrega agua destilada por un par de horas para que las impurezas queden flotando (a este procedimiento se denomina, limpiar al propóleo). Para obtener el alcohol al 70%, se tomó 73 ml de alcohol potable al 96% y se le añade 26 ml de agua destilada, así se obtiene alcohol al 70%.
El propóleo ya lavado y secado se colocó en un frasco y se añadió 100ml de alcohol al 70%, sellamos el frasco. Esta mezcla debe estar a temperatura ambiente por 10 días o por dos semanas, todos los días agitarla al cabo de dos semanas filtrar.
Para la solución ótica se preparó el extracto blando de propóleos que consistió en evaporar el alcohol que tiene la tintura, mediante baño María, a una temperatura inferior a 50°C., el agua que quedó de la evaporación del alcohol y que tiene las mismas propiedades terapéuticas que el extracto se utilizó para los tratamientos.
3.1.8. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
ACTIVIDAD
MESES
Dic. Ene. Feb. Mar. Abr. May. Jun. Jul Ags 2013 2014 2014 2014 2014 2014 2014 2014 2014
Propuesta del tema. X
Elaboración del Anteproyecto. X
Corrección anteproyecto. X
Defensa anteproyecto. X
Obtención de materiales. X
Recolección de las muestras. X X X
Designación de director de tesis X
Aplicación del ensayo. X X X
Observación de resultados. X X X
Procesamiento de datos. X X X
Revisión bibliográfica. X X X X X X X X
Entrega de anillados. X
Defensa de tesis. X
