DEL PSA SERICO

Existen en la actualidad 5 “Kits” comercializados para determinar la concentración del PSA sanguíneo.

a) Tarndem-R PSA Assay: Consiste en un análisis inmunoradiométrico (IRMA) que utiliza dos anticuerpos monoclona/es murinos para dos epítopes separados de la molécula del PSA. El diluyente que se suele utilizar habitualmente es suero femenino. Fue el primer “kit” aprobado por la FDA y se refleja en la literatura como el más utilizado en los Estados Unidos7, Myrtle y cols.

~ definieron el rango de referencia para el PSA usando este método. Estos autores demostraron que el 100 % de los varones sanos menores de 40 años y el 97 % de los que tenían más de esta edad presentaban valores de PSA inferiores o iguales a 4 ngr/ml. Ercole y cols.93 estudiaron ¡ .154

pacientes sin enfermedad tumoral, 352 de los cuales presentaban HBP; 91 % de ellos presentaban valores de PSA inferiores a 4 ngr/ml y en 8 % de ellos el PSA oscilaba de 4 a 10.

Los valores normales en mujeres es de O a 0,2 ngr/ml.67. El coeficiente de variación intraensayo es del 1,6 al 4,9 % y el intraensayo del 2,8 al 6,8 %.

Una desventaja de este “Kit” es el hecho de que altas dosis de PSA pueden dar niveles de laboratorio anormalmente bajos. Esta circunstancia conocida con el nombre de “efecto rebote de alta dosis” es raro y solo aparece con niveles de PSA superiores a 5.000-10.000 ngr/ml.

b) Pms Check PSA A ssay. Consiste en un estudio radioinmunométrico policlonal basada en una inhibición proteica competitiva. Un total de 157 varones~ sanos de 21 a 76 años fueron estudiados por Stamey y cols. 246 para establecer sus rangos de referencia . Usando el valor medio más das desviaciones standard el nivel máximo para una determinación normal se considera es de 2,5 ngr/ml.

MATERIAL Y METODOS

c) Tandem-E PSA assay: Consiste en una determinación inmunoenzimática monoclonal que usa los dos mismos anticuerpos monoclonales que el Tandem R PSA Assay. Sin embargo, en vez de utilizar un anticuerpo marcado radioactivamente se utiliza una enzima para medir la concentración del PSA’93. Utilizando un analizador fotónico de Hybritech o cualquier espectro-fotómetro se pueden calcular los valores del PSA de una manera muy similar a la determinación con RIN Tandem-E = 0,977 Tandem-R -0,231 (r=0,977). Utilizando un analizador automático se pueden procesar de forma semiautomática hasta un total de 60 muestras. La gran ventaja de este método es que el personal de laboratorio no se ve obligado a manejar material radioactivo, ni se generan residuos de este tipo. Las características son similares a las del Tandem R-PSA assay siendo los valores de normalidad de O a 4 ngr/ml. Los coeficientes de variación intraensayo varían de 3,3 a 4,8 % e interensayo de 4,4 a 4,8 %. La concentración mínima detectable es de 0,3 ngr/ml. No se

ha observado ningún tipo de reactividad cruzada o interferencia con la Fosfatasa ácida prostática u otro tipo de sustancias.

d) IRMA PSA A ssay. Es una determinación inmunométrica monoclonal que utiliza dos

anticuerpos. La concentración mínima detectable es de 0,12 ngr/ml.

e) Enzímoinmunoanábsís de micmparticu¡as (MEJA). Utiliza anticuerpos monoclonales de ratón

que forman un “sandwich” con el antígeno reactiNo a ambos. El anticuerpo unido a la micropartícula captura al antígeno y en la fase líquida se detecta mediante una reacción que se mide fluorometricamente. El nivel mínimo de detección desciende hasta 0,003 ngr/ml lo cual le da un gran valor para detectar recidivas tras la realización de la prostatectomía radical 268

MATERIAL Y METODÓS

4.2: METODOLOGIA EMPLEADA PARA CUANTIFICACION EL PSA

Tras la primera visita y pasado un tiempo no inferior a tres semanas se realizó una extracción sanguínea para determinar los valores sérico del PSA. Todo este proceso fue realizado por el Servicio de Bioquímica de nuestro Hospital. No se exigió ningún tipo de preparación especial del

paciente. Se obtuvo un tubo completo de sangre por venopunción siguiendo las normas habituales de asepsia y normopraxis médica. Tras coagularse la sangre, el tubo de extracción se introduce en

una centrífuga durante 15 minutos obteniéndose posteriormente el suero. Si la muestra iba a ser analizada en la próximas 24 horas se mantenía conservada a una temperatura de 2-8 0C. En el caso de que la determinación fuera a realizarse posteriormente se congelaban las muestras de suero con nitrógeno líquido a una temperatura inferior a -20 0C.

El método de análisisha sido un análisis inmunoenzimático comercial (Tandem-E PSA). El principio del análisis es el mismo que para el Tandem-R excepto que es marcado con fosfatasa alcalina en vez de con 1125, Los reactivos son enviados en dos “set” diferentes: por un lado anticuerpos anti-PSA conjugados con Fosfatasa alcalina, y por el otro anticuerpos anti-PSA cubiertos por “bolas”. En el procedimiento existen dos fases:

a) Una fase sólida: Las muestras conteniendo PSA reaccionan:

-Con unas “bolas” de plástico cubiertas con anticuerpo monoclonal sobre un lugar de la molécula del PSA.

-Con una enzima (Fosfatasa alcalina) marcada co~ anticuerpo monoclonal contra un antigeno diferente situado en la misma molécula de PSA. Se constituye de esta manera una fase sólida PSA/anticuerpo 131

b)Una fase líquida: Las “bolitas” son lavadas para eliminar el anticuerpo marcado no ligado y después se incuba con el enzima substrato en forma líquida (fosfatasa p-nitrofenil). La cantidad

MATERIAL Y METODÓS

de substrato removido es determinado colorimetricamente por la medida de la absorción de la reacción apagada a 405 nm. y 450 nm. Para ello se utilizó el analizador Hybrítech Photon. Se construye de esta forma una curva mediante seis calibraciones (0-100 microgr/LJ. La absorción colorimétrica es proporcional a la concentración de PSA en la muestra “test” de O a 100 ngr/ml. El cálculo de las concentraciones de la muestra se basó en los “test” de PSA calibradores, control y diluyentes cero.

Este método tiene el inconveniente del efecto de atrapamiento. Una concentración entre 100 a 5.000 ngr/ml darácomo resultado una concentración de PSA mayor de 100 ngr¡ml. Si las muestras analizadas fueran mayores a 100 ngr/ml, sería necesario la dilución de las mismas, las cuales suelen ser de 1:10, 1:20; o 11100.

Los resultados normales fueron comunicados por carta personalizada. En caso de anomalía en el TR o en PSA se les enviaba una carta explicativa, así como una citación para realizarse una ecografia transrectal con biopsia prostática.

5: ECOGRAFIA TRANSRECI?AL DE LA PROSTATA

5.1: METODOLOGíA

La próstata puede ser visaualizada por vía transabdominal a través de la vejiga llena. Aparte

de una grosera evaluación del tamaño prostático, poca ipformación accesoria puede ser objetivada por esta vía. La vía transperineal ofrece unamejor visualización de la glándula pero en la mayoría de los estudios se usa el acceso transrecíal por ser e] más idóneo.

La tecnología utilizada para la realización de la ECOTR se ha mejorado notablemente desde la primeras descripciones realizadas en 1955 por Wild y Reíd285 y las posteriores descripciones

MATERIAL Y METÓDOS

de Watanabe y co1s75, Actualmente la mayoría de las sondas transrectales tienen menos de 2 cm. de diámetro y son multiplano, por lo que se pueden obtener secuencialmente planos longitudinales

y transversales sin modificar la posición del transductor. La sonda utilizada en este estudio es de tipo multiplanar, de 7,5 Mhz, dotada de canal guía para la realización de biopsias y no requiere

el uso de balón de agua para una adecuada visualización de la próstata.

Antes de comenzar la exploración la sonda debe ser preparada para conseguir una máximo rendimiento diagnóstico, así como para producir la mínima cantidad de molestias al paciente. La

sonda se cubre con un preservativo lubrificado y en el caso de requerir canal de biopsia se coloca un segundo preservativo sobre ésta.

El paciente se coloca en posición de decúbito supino izquierdo y previamente a cualquier exploración se realiza un TR en orden a provocar lubrificación y dilatación del esfinter anal que facilita la posterior penetración de la sonda y a detectar posibles anomalías palpables que orientarán a una más cuidadosa visualización de esas zonas sospechosas. La imagen de la próstata visualizada en el monitor está invertida verticalmente, por lo que la próstata se visualiza de la misma manera que si observáramos una Tomografla Axial Computerizada: El lado derecho de la

próstata se visualiza al lado izquierdo de la pantalla y su margen posterior se orienta hacia la base del monitor. Esta orientación puede ser modificada en ciertos ecógrafos tales como el usado para nuestro trabajo.